CN111773250A - 血小板胶上清、其制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了血小板胶上清、其制备方法及用途。该血小板胶上清，成分包括富血小板血浆和葡萄糖酸钙。将全血采集于血袋中，三次离心法制备富血小板血浆，加入葡萄糖酸钙后形成血小板胶，再次离心后获取血小板胶上清。该血小板胶上清在制备治疗斑秃药物中的用途。
Description
技术领域
本发明涉及血小板胶上清、其制备方法及用途。
背景技术
血小板胶(platelet gel，PG)的制备始于20世纪90年代初，当富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)与钙及凝血酶混合时，快速生产一种粘性的凝固物即为血小板胶。制备过程中因血小板中a颗粒被激活可释放出的大量生长因子、细胞因子及趋化因子，显著促进细胞的增殖和迁移，有利于组织的再生、修复创面等。生长因子主要包括血小板源性生长因子、血管内皮细胞生长因子、转化生长因子β、表皮生长因子和类胰岛素生长因子1。
斑秃是一种局限性的脱发，局部皮肤正常，发病机制尚不明确，一般认为与遗传和环境激发因素相关的自身免疫性疾病。目前用于治疗的药物效果并不理想。研究发现生长因子可调控皮肤表皮细胞对毛囊细胞分裂增殖的影响，PRP中含有的生长因子能够改善毛囊周围的血液循环，激发局部组织细胞的活力，加速毛囊组织的修复。
目前国内外文献报道PRP用于治疗斑秃的制备方法为套管制备，每次采集30ml-50ml抗凝全血制备。其缺点在于：1、制备成本高；2、每次治疗前均需进行全血炒采集、PRP制备；3、制备过程中对血小板浓度掌握不好；4、残留红细胞较多；5、制备过程存在细菌污染可能；6、经钙剂激活的PRP中含有纤维蛋白，可能造成注射部位局部红肿、疼痛。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供血小板胶上清。
本发明的另一目的是提供所述血小板胶上清的制备方法。
本发明的最后一目的是提供所述血小板胶上清在制备治疗斑秃药物中的用途。
技术方案：本发明提供一种血小板胶上清，成分包括富血小板血浆和葡萄糖酸钙。
一种血小板胶上清的制备方法，将全血采集于血袋中，三次离心法制备富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)，加入葡萄糖酸钙后形成血小板胶(platelet gel，PG)，再次离心后获取血小板胶上清。
进一步地，所述三次离心法制备富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)的方法如下：
S1：采集全血至四联采血袋的主袋中，所述四联采血袋包括顺序连接的主袋、第一转移袋、第二转移袋、第三转移袋，各袋之间通过设有夹紧装置的管道连通，第三转移袋内含红细胞保存液；
S2：将四联采血袋置于离心机中对全血进行第一次离心，分离出上层血浆至第一转移袋中，同时，将第三转移袋内的红细胞保存液转移至主袋中并热合切断分离主袋，使主袋处于单袋状态；
S3：将第一转移袋及其余转移袋进行同时第二次离心，将上层血浆分离至第二转移袋中，红细胞沉积在第一转移袋中，热合切断分离第一转移袋；
S4：将第二转移袋和第三转移袋同时进行第三次离心，血小板沉积于第二转移袋中，分离上层贫血小板血浆至第三转移袋中，同时分离切断第三转移袋；
S5：第三转移袋与主袋通过无菌接驳设备连接，将贫血小板血浆转移至主袋中，与红细胞混合，热合切断分离主袋；
S6：混匀第二转移袋内预留的贫血小板血浆与血小板沉淀；
S7：将第二转移袋与多联血袋通过无菌接驳设备连接，进行分装，即可。
进一步地，所述多联血袋包括顺次连通的第一分装袋、多个结构相同的中间分装袋和第二分装袋。
进一步地，所述第一分装袋包括第一袋体，第一袋体顶部一侧设置第一封闭采血管，另一侧设置带有胶塞的第一加药管，两者之间设置混合管，混合管分别与设有第一夹紧组件的第一连接管道的一端和第一进血管道的开口端连通，结合处外部设置第一密封固定装置，第一进血管道另一端封闭；
所述中间分装袋包括第二袋体，第二袋体顶部一侧设置第二封闭采血管，另一侧设置带有胶塞的第二加药管，两者之间设置混合管，混合管分别与第一连接管道的另一端和设有第二夹紧组件的第二连接管道的一端连通，结合处外部设置第二密封固定装置；
所述第二分装袋包括第三袋体，第三袋体顶部一侧设置第三封闭采血管，另一侧设置带有胶塞的第三加药管，两者之间连通第二连接管道的另一端。
以上分装袋及血袋等优选一次性耗材。
一种血小板胶上清在制备治疗斑秃药物中的用途。
本发明旨在探讨更安全、有效、副作用小、经济、无需反复采血的PRP制品及用于斑秃使用效果。本发明采集一次血液制备PRP后进行分装，冻存于-80℃冰箱，每次使用前，37℃水浴待用。本发明按照多次实验得到的离心方案，结合采集前全血血小板计数进行制备，可使血小板浓度控制在800-1000×109/L之间。相比较套管法的二次离心制备PRP，本发明血袋法三次离心减少了红细胞残留。血袋法过程中使用耗材可采用一次性，无需进行套装法中的开盖制备步骤，使得制备过程全程无菌。
有益效果：本发明制备PRP无需反复采血，红细胞及血浆可以回输；血小板浓度可控制在800-1000×109/L之间；残留红细胞少，注射的过程中减少色素沉着；制备过程全程无菌。
附图说明
图1为本发明四联采血袋的结构示意图；
图2为本发明多联血袋的结构示意图；
图3为本发明斑秃用药效果对比图。
具体实施方式
实施例1：
三次离心法制备富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)的方法如下：
S1：采集全血至四联采血袋的主袋4(300m1)中，，22℃保存，所述四联采血袋包括顺序连接的主袋4、第一转移袋1、第二转移袋2、第三转移袋3，各袋之间通过设有夹紧装置的管道连通，第三转移袋3内含红细胞保存液；
S2：将四联采血袋置于离心机中对全血进行第一次离心，温度22℃，时间10min，上升速率9，下降速率7，离心力478g，分离出上层血浆至第一转移袋1中，同时，将第三转移袋3内的红细胞保存液转移至主袋4中并热合切断分离主袋4，使主袋4处于单袋状态；
S3：将第一转移袋1及其余转移袋进行同时第二次离心，温度22℃，时间10min，离心力120g，将上层血浆分离至第二转移袋2中，红细胞沉积在第一转移袋1中，热合切断分离第一转移袋1；
S4：将第二转移袋2和第三转移袋3同时进行第三次离心，温度22℃，时间10min，离心力747g，血小板沉积于第二转移袋2中，根据全血血小板计数，PRP要求血小板计数在800-1000×109/L，通过计算得出第二转移袋2中留取血浆体积，分离上层贫血小板血浆至第三转移袋3中，同时分离切断第三转移袋3；
S5：第三转移袋3与主袋4通过无菌接驳设备连接，将贫血小板血浆转移至主袋4中，与红细胞混合，热合切断分离主袋4；
S6：混匀第二转移袋2内预留的贫血小板血浆与血小板沉淀；
S7：将第二转移袋2与多联血袋通过无菌接驳设备连接，进行分装，-80℃冻存，即可。
其中，多联血袋包括顺次连通的第一分装袋6、多个结构相同的中间分装袋7和第二分装袋8。所述第一分装袋6包括第一袋体61，第一袋体61顶部一侧设置第一封闭采血管65，另一侧设置带有胶塞的第一加药管66，两者之间设置混合管5，混合管5分别与设有第一夹紧组件64的第一连接管道9的一端和第一进血管道62的开口端连通，结合处外部设置第一密封固定装置63，第一进血管道62另一端封闭；
所述中间分装袋7包括第二袋体71，第二袋体71顶部一侧设置第二封闭采血管75，另一侧设置带有胶塞的第二加药管76，两者之间设置混合管5，混合管5分别与第一连接管道9的另一端和设有第二夹紧组件74的第二连接管道10的一端连通，结合处外部设置第二密封固定装置73；
所述第二分装袋8包括第三袋体81，第三袋体81顶部一侧设置第三封闭采血管85，另一侧设置带有胶塞的第三加药管86，两者之间连通第二连接管道10的另一端。
分装袋材质均为塑料，分装方法为：
先夹闭第一夹紧组件64、第二夹紧组件74；
原始血袋内留所需体积PRP，其余PRP均第一分装袋6中；
打开第一夹紧组件64，第一分装袋6留所需体积PRP，其余均倒入第中间分装袋7中，关闭第一夹紧组件64；
打开第二夹紧组件74，中间分装袋7中留所需体积PRP，其余均倒入第二分装袋8中，关闭第二夹紧组件74；
每个分装袋中PRP分装完毕后，用热合机切断两者之间的连接管，连接管断开并封闭，使得每一个分装袋均为单袋保存。
上述中间分装袋7的个数可根据实际需要进行增加，相互之间均由设有夹紧组件的管道连通。上述夹紧组件各夹紧组件可选用夹子等具有开合、夹紧功能的装置。
实施例2：制备成PG
(1)将实施例1中分装后的PRP在37℃水浴中充分融化；
(2)每袋按照PRP与10％葡萄糖酸钙4∶1的比例，在无菌环境下将10％葡萄糖酸钙通过各个加药管注射进PRP袋内(现有技术中10％葡萄糖酸钙与PRP比例使用的是10％氯化钙以及10％葡萄糖酸钙，按照常规的1∶10配比，且不加凝血酶是无法短时间(1小时)内形成PG的，而1∶4的比例，可以在20min内成胶，伸直可以更短时间成胶，因此，1∶4的比例最佳)。
(3)将上述混合物于37℃水浴中待凝胶形成。
实施例3：制备血小板胶上清
(1)将实施例2制成的PG连同血袋置于大容量离心机内，温度22℃，时间10min，离心力4500g，析出上清即为血小板胶上清，待用；
实施例4：效果测试
无菌注射器抽取实施例3血袋中的血小板胶上清，于斑秃部位局部消毒后无菌环境下行皮下点状注射，每点0.1ml，距离0.5cm，每月治疗一次，3次为一疗程。
Claims (6)
1.一种血小板胶上清，其特征在于：成分包括富血小板血浆和葡萄糖酸钙。
2.一种血小板胶上清的制备方法，其特征在于：将全血采集于血袋中，三次离心法制备富血小板血浆，加入葡萄糖酸钙后形成血小板胶，再次离心后获取血小板胶上清。
3.根据权利要求2所述的血小板胶上清的制备方法，其特征在于：所述三次离心法制备富血小板血浆的方法如下：
S1：采集全血至四联采血袋的主袋(4)中，所述四联采血袋包括顺序连接的主袋(4)、第一转移袋(1)、第二转移袋(2)、第三转移袋(3)，各袋之间通过设有夹紧装置的管道连通，第三转移袋(3)内含红细胞保存液；
S2：将四联采血袋置于离心机中对全血进行第一次离心，分离出上层血浆至第一转移袋(1)中，同时，将第三转移袋(3)内的红细胞保存液转移至主袋(4)中并热合切断分离主袋(4)，使主袋(4)处于单袋状态；
S3：将第一转移袋(1)及其余转移袋进行同时第二次离心，将上层血浆分离至第二转移袋(2)中，红细胞沉积在第一转移袋(1)中，热合切断分离第一转移袋(1)；
S4：将第二转移袋(2)和第三转移袋(3)同时进行第三次离心，血小板沉积于第二转移袋(2)中，分离上层贫血小板血浆至第三转移袋(3)中，同时分离切断第三转移袋(3)；
S5：第三转移袋(3)与主袋(4)通过无菌接驳设备连接，将贫血小板血浆转移至主袋(4)中，与红细胞混合，热合切断分离主袋(4)；
S6：混匀第二转移袋(2)内预留的贫血小板血浆与血小板沉淀；
S7：将第二转移袋(2)与多联血袋通过无菌接驳设备连接，进行分装，即可。
4.根据权利要求3所述的血小板胶上清的制备方法，其特征在于：所述多联血袋包括顺次连通的第一分装袋(6)、多个结构相同的中间分装袋(7)和第二分装袋(8)。
5.根据权利要求4所述的血小板胶上清的制备方法，其特征在于：
所述第一分装袋(6)包括第一袋体(61)，第一袋体(61)顶部一侧设置第一封闭采血管(65)，另一侧设置带有胶塞的第一加药管(66)，两者之间设置混合管(5)，混合管(5)分别与设有第一夹紧组件(64)的第一连接管道(9)的一端和第一进血管道(62)的开口端连通，结合处外部设置第一密封固定装置(63)，第一进血管道(62)另一端封闭；
所述中间分装袋(7)包括第二袋体(71)，第二袋体(71)顶部一侧设置第二封闭采血管(75)，另一侧设置带有胶塞的第二加药管(76)，两者之间设置混合管(5)，混合管(5)分别与第一连接管道(9)的另一端和设有第二夹紧组件(74)的第二连接管道(10)的一端连通，结合处外部设置第二密封固定装置(73)；
所述第二分装袋(8)包括第三袋体(81)，第三袋体(81)顶部一侧设置第三封闭采血管(85)，另一侧设置带有胶塞的第三加药管(86)，两者之间连通第二连接管道(10)的另一端。
6.一种血小板胶上清在制备治疗斑秃药物中的用途。
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