CN108291918A - 作为对象的细胞外容量状态的标志物的MR-proADM - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于确定对象的细胞外容量状态的方法。所述方法包括在从对象获得的样品中确定标志物肾上腺髓质素原(proADM)或其片段、优选为MR‑proADM的水平。此外，在所述proADM或其片段的水平的基础上确定体液平衡，并且其中所述体液平衡决定所述细胞外容量状态。此外，在所述proADM或其片段的水平的基础上确定盐平衡，并且其中所述盐平衡决定所述细胞外容量状态和盐潴留。此外，本发明涉及一种用于对象中的病症或医学病状的体外诊断、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的所述细胞外容量状态和盐潴留。此外，本发明涉及一种用于执行本文中提供的方法的试剂盒和/或诊断装置。

Description

作为对象的细胞外容量状态的标志物的MR-proADM
本发明涉及对象、特别是处于健康监护下、最特别是处于重症监护下的患者的细胞外容量状态的确定。所述方法包括在从对象获得的样品中确定肾上腺髓质素原(proADM)或其片段、特别是中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平。此外，在MR-proADM水平的基础上可以确定体液平衡和/或盐平衡，其进而指示了所述对象的细胞外容量状态。
背景技术
准确的血液容量难以评估。血球容量可以通过确定血红蛋白浓度(在本文中也被称为“Hb”)水平来估算(Jacob，2012)。细胞外容量可以在对象体重的基础上估算，例如身体的60％由水构成，即对于70Kg的患者来说42L，细胞外容量占身体水的40％，即对于70Kg的患者来说17L；参见图1。在临床实践中，在许多急性和不太急性的重症监护情形中，在收集关于血管内压力和/或心输出量测量值的变化的动态信息的基础上，每日若干次地估算“有效的”血液容量，以指导并控制患者的处方。这种估算一贯被用作涉及容量扩充剂的量和儿茶酚胺或输血用途的基础治疗决定的基础。每天，估计有40％的处于重症监护中的患者在评估后被提供容量扩充剂(Finfer，2011)。在避免正体液平衡的同时获得适合的血液容量，在急性炎症例如创伤性应激或脓毒症(sepsis)患者的日常护理中是两难的困境。这种挑战在重症监护和麻醉学文献中是非常普遍的(Rivers等，2001；Chappel等，2008；Sakr等，2005；Bagshaw等，2008；Payen等，2008；Murphy等，2009；Boyd等，2011；Kelm等，2015；以及Acheampong等，2015)。治疗推荐意见指向较高心输出量的急性控制的必要性，以确保足够的氧被递送到器官。主要由盐和水构成的流体冲击(fluid challenge)，是为容量扩充提出的主要工具(Cecconi等，2009)。
用与水相伴的盐增加血液容量引起细胞外容量的增加，特别是当利尿作用被休克降低时。此外，在急性炎症的情形中，毛细血管通透性可能极度提高，恶化了流体累积的风险(Chappell等，2009；Jacob等，2009；以及Ostrowski等，2015)。已经认识到，超负荷的容量扩充可以激起器官功能障碍例如急性肺损伤、腹腔间隔室综合征或肾功能障碍(Sakr等，2005；Bagshaw等，2008；Sakr等，2012；以及Besen等，2015)。此外，研究还报道了由水-钠超负荷造成的死亡率提高(Boyd等，2011；Kelm等，2015；以及Acheampong等，2015)。体重增加3至4kg的累积正体液平衡或由水增加3至4升引起的27至36g盐，被认为是死亡率和发病率提高的阈值(Lobo等，2002；Brandstrup等，2003；以及Bjerregaard等，2005)。因此，这种评估的准确性非常重要。用于防止或校正这些现象的分析方法聚焦于以关于血管内压力和/或心输出量测量值的变化的动态信息的收集为基础的“有效的”血液容量。尽管这种策略已被证明在休克的前几个小时中有效，但它不能防止过度的血浆扩充(Hilton，2011)。
输血处方也由血管内容量决定。输血阈值通常被认为是根据血红蛋白(Hb)水平或血细胞比容，后者根据定义是红细胞容量与总血容量之比。在各种不同的重症监护背景中进行的大量临床试验承认，对于7至11g/dL之间的Hb浓度来说，不精确性使得难以准确评估循环的红细胞容量(Takanishi，2008；Dorbout Mees，2011；Jacob，2012)。事实上，尽管广泛的重症监护患者群体的临床试验显示输血是无效的并且使用7-8g/dL的阈值来限制处方的方针是有益的，但在定向群体上进行的其他临床试验显示低的Hb对预后不利(Naidech，2007；Kellert，2011)。此外，由于不够准确并且没有考虑到临床个体情况，这些任意的阈值是有争议的(Klein，2015)。
获得总血容量的直接且精确的测量并从它推导出血球和血浆容量，是可能的。然而，这种检查很少进行，因为它成本高、耗时且工作量大。因此，这种方法仅仅应用于特定疾病(例如真性红细胞增多)。最可靠的测量通过用铬-51标记患者的红细胞来进行(Gore，2005)。尽管这种检查被接受作为用于测量血管内容量的黄金标准，但不可能每天重复它(Gore，2005)。通过用碘-125标记白蛋白来测量白蛋白分布容量，可以确定体内的白蛋白分布。这种蛋白比红细胞对毛细血管通透性损伤敏感得多。正如对铬-51方法所观察到的，所述碘-125方法不能每天重复，因此它仅仅应用于特定疾病。此外，当需要患者容量状态的即时信息时，例如在重症监护室患者的情况下，这种测量是不适合的。
在许多重症监护室中，护士通过每日体重或每日计算输入和输出的液体，系统性地测量体液平衡。然而，在每日实践中，护士不能投入必需的时间来收集所需信息。此外，这种方法不精密，并且此外从未将盐平衡评估这种指示细胞外容量变化的参数考虑在内。
在健康监护、特别是重症监护中，为了改进组织供氧的监测并以不太粗略的方式平衡治疗，对改进对象的细胞外容量状态的评估方法存在着基本需求。此外，评估细胞外容量状态的改进的方法是至关重要的，这是因为正的每日体液和盐平衡可以引起水肿，并且在具有急性肾损伤(Payen，2008)、急性呼吸窘迫综合征(Jozwiak，2013)、外伤(Elofson，2015)、蛛网膜下出血(Kissoon，2015)或脓毒症(Acheampong，2015)的危重病患者中，正的每日体液平衡随时间的持续与较高的死亡率相关。
因此，本发明要解决的技术难题是提供手段和方法以提供评估对象的细胞外容量状态的快速且可靠的方式。
所述技术难题通过提供在下文中给出并在权利要求书中表征的实施方式得以解决。
发明内容
本发明涉及一种用于确定对象的细胞外容量状态的方法，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定肾上腺髓质素原(proADM)或其片段、优选为中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平。
此外，本发明涉及一种用于确定对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态的方法，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定肾上腺髓质素原(proADM)或其片段、优选为中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平。
本发明解决了上面鉴定到的技术难题，因为正如下文中和随附的实施例中所记录的，出人意料地发现，在对象的肾上腺髓质素原(proADM)或其片段、优选为中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平与细胞外容量状态之间，存在着惊人强烈的统计学关系。
在随附的实施例中记录了临床研究的结果。这项临床研究证实了在所有试验的生物标志物包括皮质醇、儿茶酚胺、肾素、血管紧张肽II、醛甾酮系统(RAAS)、由CT-pro-AVP(在本文中也被称为“和肽素(copeptin)”)所反映的血管升压素、由内皮素原所反映的内皮素和由心房利钠肽原(MR-ProANP)所反映的利钠肽、红细胞生成素(EPO)和由例如MR-pro-ADM所反映的肾上腺髓质素原中，MR-proADM与对象的细胞外容量状态具有出人意料地强烈的统计学关系(参见例如图2，表6)。本文记录了这种关系不依赖于所述患者在入院后第2天、第5天和第7天的临床情况类型，例如，患有动脉瘤(例如动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH))、多发性创伤(例如没有头部外伤的严重创伤(PT))、脑损伤或头部损伤(例如严重脑外伤(SBT))的患者或手术后患者例如手术后腹膜炎伴有休克的患者(P)；参见例如图3。
因此，在本文中显示，proADM或其片段、优选为MR-proADM，是对象的细胞外容量状态的良好替代物(surrogate)。
随附的实施例显示，MR-proADM的水平高或提高，与危重患者入院后第一周期间细胞外容量中盐和/或水的增加强烈相关(参见例如图2和实施例1)，并且几乎所有的对象都具有正体液平衡和/或盐平衡，即细胞外容量的增加。所述细胞外容量的增加被报告为所述对象的盐平衡改变和水平衡改变。在随附的实施例中进一步显示，所述正体液平衡和/或盐平衡不与例如总血容量或血浆容量相关；参见例如实施例1。
为了提高血浆容量，医师可以向患者进行输液(例如晶体液)。无差别的流体操作(例如通过攻击性流体疗法)可以增加流体向细胞外容量迁移例如进入间质空间，其进而可以引起例如间质水肿。随附的实施例证实了有效容量是灌注组织的动脉血容量。
正如本文中所示，MR-proADM与体液平衡和/或盐平衡具有显著关系(例如实施例1至4，图2)。具体来说，本文证实了MR-proADM的高水平指示了容量过载。例如，MR-proADM的高水平，例如至少1到至少1.5nmol/l的MR-proADM，指示了体液过载。此外，MR-proADM的高水平和例如至少27g到至少36g的Na+和/或至少3L到至少4L水的增加，是医师立即采取适当行动的警报信号。过量的盐和/或体液平衡被当作是危重患者中发病和死亡的风险因子(Acheampong等，2015)。因此，本发明的方法，包括MR-proADM水平(或proADM或proADM的另一种片段的水平)的测量，对于快速、方便且可靠地确定对象的体液平衡、盐平衡、血球容量状态和细胞外容量，以及对于确定对象是否具有危急的健康状态，具有高的医疗潜力。
此外，随附的实施例记录了，其他协变量例如另外的标志物和参数的评估，提高了所述单一标志物proADM(或其片段)、优选为MR-proADM的辨别力。例如，单独的MR-proADM对体液平衡具有AUC(“曲线下面积”)为0.82并且方差为35％的良好辨别力，对盐平衡具有AUC为0.79并且方差为42％的辨别力；参见例如实施例2。在MR-proADM之外包含其他标志物和其他参数例如性别、年龄、血清总蛋白、BMI、体重和Hb，进一步改进了体液平衡和钠平衡的预测，例如ROC曲线为92％(参见表13和14以及实施例4)。
在许多重症监护室中，护士通过每日体重或每日计算液体的输入和输出，系统性地测量体液平衡。这些方法是不精密的。例如，在随附的实施例中发现了体重与体液平衡之间的弱的关系(r2＝0.33，参见随附的实施例1)。正如下文中示出的，现有技术中描述的细胞外容量的常规标志物例如血浆蛋白或血红蛋白与盐和体液平衡具有弱的关系(例如，对于血浆蛋白和ΔNa+来说r2＝0.44，或者对于血浆蛋白和ΔH2O来说r2＝0.35；对于Hb和ΔNa+来说r2＝0.15，或者对于Hb和ΔH2O来说r2＝0.24；参见随附的实施例1)。在随附的实施例中，盐和体液平衡的测量需要许多生物样品，并且这种分析总是由两位医师进行和控制，使得这种程序的非常耗时间且工作量非常大。在本文中记录了，在本发明的方法中使用的proADM或其片段、优选为MR-proADM，提供了盐平衡和/或体液平衡以及因此细胞外容量状态的更加快速且更加准确的测量。因此，proADM或其片段、优选为MR-proADM，可以用作紧急替代物。在各种不同的紧急状况中，例如在休克后的前几天中，及时是至关重要的。在器官损坏例如急性肺损伤、腹腔间隔室综合征和肾机能不全后过载的延迟发现，可能具有严重且潜在致命的后果。在随附的实施例中，还令人吃惊地显示，在序贯性器官衰竭评分(SOFA评分)(Vincent等，1996)与盐和体液平衡之间存在显著关系。这种预测模型也记录了proADM或其片段、优选为MR-proADM，是有利的替代物和床边工具。
因此，本发明涉及一种用于对象中的病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法管理/控制和/或手术控制的方法，其中通过测量全血、血浆、血清或尿液中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，来确定所述对象的所述细胞外容量状态。所述对象的细胞外容量状态也可以反映所述对象的钠潴留。
本发明与常规方法相比，尤其具有下述优点：本发明的方法对于确定对象的细胞外容量状态来说快速、易于进行并且精密，提供了所述对象的细胞外容量状态和正体液平衡和/或正盐平衡的可靠预测。
本发明的方法的另一个优点在于体液平衡和盐平衡与SOFA评分相关。因此，本文中提供的方法提供了可靠且方便的方式来鉴定具有发生由正体液和/或盐平衡引起的水肿造成的器官功能障碍或器官衰竭的风险的危重对象。此外，本发明的方法允许确定血球容量状态。实施例3以及特别是表9记录了与单独基于Hb的血球容量的预测值相比，本发明的方法的改进的预测值。
此外，本文中提供的本发明的方法可以对具有正盐平衡的患者进行分层，并因此可以对具有钠潴留的患者进行分层，所述钠潴留可能是高血压、肾或心衰竭和肺水肿的风险因子。这些患者可能需要将盐动员(salt mobilization)从间质定向到血管内系统的不同治疗。
在随附的实施例中令人吃惊地显示，MR-proADM与对象的细胞外容量状态具有显著的统计学关系。因此，本发明涉及一种用于确定对象的细胞外容量状态的方法，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定标志物proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平。
在某些情况下，本发明涉及所述标志物中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的用途，其用于确定对象的细胞外容量状态。
肾上腺髓质素(ADM)这种肽作为包含52个氨基酸的低血压肽被发现，其已从人类嗜铬细胞瘤(phenochromocytomeby)分离(Kitamura等，1993)。肾上腺髓质素(ADM)被编码为包含185个氨基酸的前体肽(“肾上腺髓质素原前体”或“pre-proADM”)，在本文中在SEQIDNO：1中给出。ADM包含pre-proADM氨基酸序列的95-146位，并且是其拼接产物。
“肾上腺髓质素原”(“Pro-ADM”)是指没有信号序列(1至21位氨基酸)的pre-proADM，即pre-proADM的22至285位氨基酸残基。“中段肾上腺髓质素原”(“MR-proADM”)是指pre-proADM的42-95位氨基酸。MR-proADM的氨基酸序列在SEQ ID NO：2中给出。在本文中也设想了pre-proADM或MR-proADM的肽及其片段可用于本文中描述的方法，例如对象的细胞外容量状态的预测。例如，肽及其片段可以包含pre-proADM的22-41位氨基酸(PAMP肽)或pre-proADM的95-146位氨基酸(成熟的肾上腺髓质素)。proADM的C-端片段(preproADM的153至185位氨基酸)被称为肾上腺升压素。proADM肽或MR-proADM的片段包含例如5或更多个氨基酸。因此，所述proADM的片段可以例如选自MR-proADM、PAMP、肾上腺升压素和成熟的肾上腺髓质素，在本文中优选地，所述片段是MR-proADM。
在本文中还设想了确定与SEQ ID NO：2中所示的序列具有至少75％的序列同一性，例如75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的MR-proADM多肽的水平，其中较高的序列同一性值是优选的。根据本发明，在两个或更多个氨基酸序列的情形中，术语“序列同一性”、“同源性”或“百分同源性”或“一致的”或“百分同一性”或“同一性百分率”是指两个或更多个序列或子序列在被比较并对齐以获得最大对应性时，在比较的窗口内(优选地在全长内)或在指定的区域内是相同的或具有规定的相同氨基酸的百分率，正如使用本领域中已知的序列比较算法或通过手动比对和目测检查所测量的。具有例如70％至90％或更高的序列同一性的序列，可以被认为是基本上一致的。这种定义也适用于试验序列的互补序列。优选地，所描述的同一性存在于长度为至少约15至约20个氨基酸的区域内，更优选地长度为至少约25至约45个氨基酸的区域内，最优选地在全长范围内。本领域技术人员知道如何使用本领域中已知的算法例如基于CLUSTALW计算机程序(Thompson Nucl.Acids Res.2(1994),4673-4680)或FASTDB(BrutlagComp.App.Biosci.6(1990),237-245)的算法来确定序列之间的百分同一性。
当在本文中使用时，术语“标志物肾上腺髓质素原(MR-proADM)或其片段的水平”是指在从对象获得的样品中标志物肾上腺髓质素原或其片段的分子实体的量。换句话说，在所述样品中确定所述标志物的浓度。因此，术语“标志物中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平”是指在从对象获得的样品中标志物中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)的分子实体的量。换句话说，在所述样品中确定所述标志物的浓度。如上所述，在本文中还设想了可以检测并定量肾上腺髓质素原(proADM)的片段、优选为MR-proADM。此外，也可以检测并定量MR-proADM的片段。适合于确定proADM或其片段(优选为R-proADM)的水平的方法在下文中详细描述。可以使用采取各种不同格式的免疫测定法，例如夹心、酶联免疫吸附测定法、发光免疫测定法、快速测试格式、适合于即时检测的测定法和均相测定法例如Kryptor系统(BRAHMS/Thermo Fisher Scientific)。此外，可以使用质谱方法来检测并定量proADM或其片段，优选为MR-proADM或其片段。专业技术人员了解适合于确定/定量本文中描述的标志物的测定法。
本发明涉及一种用于确定对象的细胞外容量状态的方法。当在本文中使用时，所述细胞外容量是对象的身体水的一部分。对象的身体水占体重的多达约55-75％。对象的身体水本质上由对象的“细胞外容量”和“细胞内容量”构成；参见图1。当在本文中使用时，“细胞内容量”是指胞液或细胞内流体(ICF)或细胞质基质，其是存在于细胞内部的液体。通常，所述细胞内容量约为身体水的60％。根据Guyton(Guyton Arthur C.，(1991),p.275)，身体含有40L体液的对象具有25L的细胞内容量。当在本文中使用时，“细胞外容量”本质上由“总血容量”和“间质容量”构成。通常，细胞外容量约为身体水的40％。因此，含有约40L体液的对象具有约15L的细胞外容量(Guyton ArthurC.，(1991),p.275)。当在本文中使用时，“间质容量”、“间质液”或“组织液”是浸泡并包围多细胞动物的组织细胞的溶液。通常，间质容量约为身体水的28％或细胞外容量的约70％。当在本文中使用时，“总血容量”或“血管内容量”本质上由“血浆容量”和“红细胞容量”构成。通常，总血容量约为身体水的12％，并且包含约50％的血浆(约细胞外容量的15％或身体水的6％)和包含约50％的血球容量(细胞外容量的约15％)。当在本文中使用时，“红细胞容量”也被称为“血球容量”。当在本文中使用时，“血浆容量”是指“血浆”的容量，所述血浆是血液的浅黄色液体组分，其通常将血细胞在全血中保持悬浮；这使血浆成为血细胞的细胞外基质。它占身体总血容量的约55％。它是细胞外流体(细胞外的所有体液)的血管内流体部分。它主要是水(高达95体积％)，并含有溶解的蛋白质(6–8％)(即血清白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原)、葡萄糖、凝血因子、电解质(Na+、Ca2+、Mg2+、HCO3 -、Cl-等)、激素和二氧化碳(血浆是排泄产物运输的主要介质)。血浆也充当人体的蛋白质储库。它在保持电解质处于平衡形式下的血管内渗透压效应中发挥关键作用，并保护身体免于感染和其他血液病症。当在本文中使用时，“红细胞容量”也被称为平均血球容量或平均细胞容量(MCV)，其是红血球(或红细胞)的平均容量的度量。
在随附的实施例中记录了每天计算盐平衡和/或体液平衡以估算细胞外容量的变化；参见随附的实施例1。正如在随附的实施例中证实的，每天对盐和水(含量)进行前一天的完整输入-输出评估，以便确定所述对象的体液平衡和盐平衡。其中显示，如有必要，所述对象的钠和/或水的损失可以通过确定例如利尿、回肠造口术和心室引流来测量。钠(Na+)的损失可以从液体测量，并且可以从盐贡献来推导；然而，测量盐平衡特别困难。也计算输入的水(例如当天的肠内营养或晶体液或胶体输注的总量)与失水的差值。感觉不到的损失作为体温的函数来估算。在随附的实施例，每天计算“钠”或“Na+”的增加或损失(在本文中也被称为“ΔNa+”、“Δ钠”或“钠平衡”)以及水或H2O的增加或损失(在本文中也被称为“ΔH2O”或“体液平衡”)并分别加到前一天的结果中，作为累积的“体液平衡”或“盐平衡”。
在随附的实施例中，令人吃惊地证实对象的样品例如血浆样品中MR-proADM的水平与所述体液平衡和/或盐平衡具有统计学关系(图2)。因此，本发明涉及一种用于确定对象的体液平衡、盐平衡和细胞外容量状态的方法，其中所述方法包括确定从所述对象获得的样品中的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中在所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定所述体液平衡和/或盐平衡，并且其中所述体液平衡和/或盐平衡确定/鉴定/反映了对象的细胞外容量状态。已发现，高的MR-proADM水平与高的体液平衡(体液的显著增加)或高的盐平衡(盐的显著增加)相关；参见例如图2。因此，所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平可用于预测所述对象的盐平衡和体液平衡。换句话说，proADM或其片段、优选为MR-proADM可用作所述体液平衡和/或盐平衡的直接替代物。因此，术语“在(MR-)proADM的水平的基础上”意味着所述(MR-)proADM的水平鉴定/预测/确定所述对象的体液平衡和/或盐平衡。
在随附的实施例中，计算所述盐平衡和/或体液平衡以估算所述细胞外容量的变化或变动。已知体液平衡和/或盐平衡与细胞外容量相关(Charra等，2004)。因此，所述体液平衡和/或盐平衡确定所述细胞外容量状态的变化。细胞外容量状态是指细胞外容量中的体液(图1)。对象的细胞外容量约为所述对象的身体水的40％。对象的细胞外容量状态与对象的体液平衡和/或盐平衡相关。因此，所述体液平衡或盐平衡的变动代表了所述细胞外容量的变动。因此，所述对象的体液平衡和/或盐平衡的变动允许估算/确定所述对象的细胞外容量状态。换句话说，proADM或其片段、优选为MR-proADM是所述对象的体液平衡和/或盐平衡的直接替代物，因此它指示了所述对象的细胞外容量状态。当在本文中使用时，“体液平衡”是指对象的“水变动”、“水变化”、“Δ水”或“ΔH2O”。换句话说，所述“体液平衡”是对象的“体液”或“水”的输入与输出之间的差。在本发明的优选情况下，所述体液平衡是对象的体液/水的输入与输出之间的差。在甚至更优选的情况下，所述体液平衡是累积体液平衡，反映了在所述对象住院期间体液/水的输入与输出之间的差。当在本文中使用时，术语“住院期间”或“每次住院”意味着所述患者处于危重健康形势下的时间段。因此，当在本文中使用时，所述对象的住院可以意味着所述对象进入ICU直至危重形势和/或症状缓解为止的时间段。或者，该术语是指所述患者已积累例如4L的正体液平衡或例如36g的正盐平衡的时间段。换句话说，所述时间段就此而言意味着所述对象已积累例如4L体液或36g盐的增加的时间段。在随附的实施例中，每天计算所述体液平衡和盐平衡。因此，所述体液平衡是对象在第一天(每天)内的体液/水的输入与输出之间的差。在优选情况下，所述体液平衡是累积体液平衡，其是对象在前两天内、甚至更优选地在前五天内、最优选地在第一周内的体液/水的输入与输出之间的差，即对象在7天后的体液/水的输入与输出之差。在本文中理解，对象的水的获得/增加是指由于体液/水的输出小于水的获得，对象具有与较早时间点(例如一天之前)相比更多的水。在本文中理解，对象的水的损失/减少是指对象具有与较早时间点(例如一天之前)相比更少的水。在本文中理解，对象的水没有变化或没有显著变化是指对象具有与较早的水含量(例如一天之前)相比一致或相近的水含量。在优选情况下，在几个时间点例如在进入健康监护室、特别是进入重症监护室后第0天(“D0”)、第2天(“D2”)、第5天(“D5”)和/或第7天(“D7”)确定MR-proADM。在本文中理解，所述标志物和/或参数的水平可以在任何时间并以任何时间间隔确定，例如每小时或每天(例如在入院D0时，然后在对象进入ICU后第1天(D1)、第2天(D2)、第3天(D3)、第4天(D4)、第5天(D5)、第6天(D6)和/或第7天(D7)时等)或其组合。
在随附的实施例中显示，MR-proADM的水平与对象的体液平衡相关；参见图2。在本文中理解，高的proADM或其片段、优选为MR-proADM水平指示了对象体液的获得/增加。当在本文中使用时，具有“正体液平衡”的对象是指体液获得高于体液损失的对象。因此，所述对象具有体液/水输入和输出的不平衡。因此，具有正体液平衡的对象在身体中积累水/体液。因此，所述对象体重增加。换句话说，具有水含量增加或水获得的对象具有正体液平衡。例如，用输液治疗的对象可以具有体液/水向血管外的体液迁移。这种体液可以向对象的细胞外容量例如间质容量迁移。例如已显示，复苏患者在3天后超过10L的细胞外容量过载被捕获在体内，并且需要3周来排泄(Chappell等，“术周体液管理的合理方法”(A rationalapproach to perioperative fluid management)，Anesthesiology；2008,109:723-40)。解剖学损失被认为是在病理学量下的生理现象，即间质空间内的病理性体液积累(Chappell，同上)。在具有完整的血管屏障的情况下从血管向间质空间迁移的生理流体，可以被认为仅含有少量蛋白质，并且主要是小分子。当这种迁移通过淋巴系统定量管理时，生理迁移不引起水肿例如间质水肿。然而，压倒淋巴系统，例如通过过量施加输注液例如晶体液，可以引起水肿。还存在非解剖学第三空间损失，其代表了在功能和解剖学上与间质容量分开的体液区室。向该第三空间的损失可以是由例如正常情况下不含或含有很少体液的空间中的手术程序或外伤引起的体液积累。例如，第三空间损失可以朝向腹膜腔、肠和创伤组织。
在本发明的某些情况下，体重增加3至4kg的正体液平衡(在住院期间，例如在第一天内，优选地在前两天内，甚至更优选地在前五天内，最优选地在第一周内)被认为是死亡率和发病率增加的阈值。因此，在本发明的某些情况下，体液增加至少3L、优选地至少4L，被认为是危急的。细胞外容量中的体液增加至少3L、优选地至少4L，被认为是危急的。被认为是危急的体液增加量也依赖于患者的特征例如对象的性别、年龄或体重。例如，成年女性的身体水比成年男性的身体水低5至10％。因此，在本文中理解，具有较低体重的患者(例如女性)可以更敏感地对体液和/或盐增加做出反应。此外，体液在体液区室中的分布取决于对象的年龄，例如，它从新生儿的75％降低到成年人的55％。因此，较低的体液增加例如3L或更少的体液，在女性或老年对象中可能已经具有严重后果。另一方面，具有较高体重的对象(例如男性)可能对体液和/或盐的增加不与所述轻的对象同样敏感。因此，在这些对象中死亡率可以降低。
在另一种情况下，至少4L的正体液平衡被认为是危急的。换句话说，至少4L的正体液平衡表明所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。具体来说，在随附的实施例中记录了高的水增加例如至少4L水是警报信号，并指示了危急细胞外容量状态以及因此危重对象。内皮损伤和/或盐潴留可以造成体液平衡的增加。
当在本文中使用时，具有“负体液平衡”的对象是指体液损失高于体液获得的对象。因此，所述对象失去水或体液并因此体重减轻。换句话说，具有水含量降低或水损失的对象具有负体液平衡。当在本文中使用时，具有一致或相近的水含量的对象是指具有“一致或相近的体液平衡”的对象。这种对象具有平衡的体液管理，并且因此所述体液平衡处于平衡或正常状态。换句话说，体液/水输入与体液/水输出一致或相近。换句话说，所述对象具有正常的体液平衡。
在本发明的情形中，对象的体液/水平衡可以例如通过静脉内疗法包括例如容量扩充剂来增加。在特别优选的情况下，对象的水增加是指对象具有与在较早时间点确定的水/体液相比更多的水/体液，其中具有更多的水/体液的所述对象是指具有正体液平衡的对象。在随附的实施例中显示，高的MR-proADM水平例如至少1nmol/l，指示了水的增加即正体液平衡以及因此增加的细胞外容量状态，其中所述细胞外容量状态被认为是危急的。换句话说，至少4L的正体液平衡表明所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。
本发明涉及本文中提供的方法，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定盐平衡，并且其中所述盐平衡确定/鉴定所述细胞外容量状态。当在本文中使用时，所述“盐平衡”或“钠平衡”是指“钠的变动”、“钠的变化”、“Δ钠”或“ΔNa+”。所述“盐平衡”是对象的“盐”或“钠”的输入与输出之间的差。在本发明的优选情况下，所述盐平衡是对象的体液/水的输入与输出之间的差。在甚至更优选的情况下，所述盐平衡是累积盐平衡，反映了在所述对象在住院期间盐/钠的输入与输出之间的差。在某些情况下，所述盐平衡是在第一天内每天对象的盐/钠的输入与输出之间的差。在优选情况下，所述盐平衡是在前两天内、甚至更优选地前五天内、最优选地前一周内对象的盐/钠的输入与输出之间的差，即7天后的差。在随附的实施例中，令人吃惊地证实所述盐平衡与对象的样品例如血清样品中MR-proADM的水平具有统计学关系(图2B)。在随附的实施例中进一步显示，对象的体液平衡与所述盐平衡统计学相关；参见实施例1。在本文中理解，对象的盐例如钠的获得/增加是指对象具有更高的盐例如钠的量/含量。当在本文中使用时，具有更高的盐量/含量的对象是指具有正盐平衡的对象。因此，具有“正盐平衡”的对象在本文中意味着具有比对象的盐损失更高的盐获得的所述对象。因此，所述对象具有盐/钠的输入和输出的不平衡。因此，具有正盐平衡的所述对象在体内积累盐/钠，例如盐潴留。换句话说，具有盐/钠的量/含量增加或钠/盐的获得的对象具有正钠平衡。当在本文中使用时，“钠潴留”或“盐潴留”可以指示肾或心衰竭。盐潴留可以引起体液/水潴留以及血液容量增加、血压升高和炎性。不受理论限制，炎症可以引起盐潴留。由于MR-proADM与盐和/或体液平衡具有强烈的统计学关系，因此MR-proADM(或proADM或其另一种片段)可用作炎症(或由炎症引起的血管损坏和通透性)的预后标志物。
当在本文中使用时，具有“负盐平衡”的对象是指其中盐的损失例如钠高于盐获得的对象。因此，所述对象失去盐或体液并因此体重降低。换句话说，具有盐含量的降低或盐损失的对象具有负盐平衡。当在本文中使用时，具有一致或相近的盐含量的对象被称为具有“一致或相近的盐平衡”的对象。这种对象具有平衡的盐管理，并且因此盐平衡处于平衡或正常状况下。换句话说，盐/钠的输入与盐/钠的输出一致或相近。换句话说，所述对象具有正常的盐平衡。
在一种情况下，正盐平衡意味着所述对象具有与较早时间点相比更高的盐含量以及因此增加的细胞外容量状态。在随附的实施例中显示，高的MR-proADM水平例如超过1nmol/l，指示盐的获得、正盐平衡以及因此增加的细胞外容量状态，其中所述增加的细胞外容量状态被认为是危急的。具体来说，在随附的实施例中记录了高的盐例如至少27g、优选地至少36g的钠获得是警报信号，并指示了危重患者。因此，在本发明的某些情况下，至少约27到至少约36g的盐获得被认为是危急的。在本发明的优选情况下，至少36g的正盐平衡被认为是危急的。换句话说，至少27g或优选地至少36g的正盐平衡指示了所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。
在本发明的某些情况下，本文中提供的方法确定了对象的血球容量状态。具体来说，本文中提供的方法允许确定对象的血球容量是否低于20ml/kg。低于20ml/kg的血球容量或优选地低于15ml/kg的血球容量，指示危急血球容量状态。在某些情况下，低于20ml/kg的对象血球容量指示了具有危急细胞外容量状态的对象，其中所述危急细胞外容量状态指示了所述对象的危急健康状况。因此，低于20ml/kg的血球容量表明所述对象具有正体液平衡，其中所述所述正体液平衡指示危急细胞外容量状态。
本文中提供的方法确定了对象的血球容量状态，其中所述方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，所述样品中血红蛋白的水平，所述对象的体重指数，所述对象的性别，所述对象的年龄，所述样品中血清总蛋白的水平，以及任选地所述对象的体重。
在随附的实施例中，记录了在所述统计分析中包含其他标志物或参数提高了proADM或其片段、优选为MR-proADM的预测力；参见例如实施例1至4。所述统计学分析令人吃惊地发现了与对象的细胞外容量状态具有显著关系的包括MR-proADM的共识模型(consensusmodel)。当在本文中使用时，共识模型包括超过一种标志物和参数，并且在所述共识模型的基础上可以确定对象的体液平衡和/或盐平衡和/或细胞外容量状态。换句话说，在某些情况下，本发明涉及一种方法，其中确定一组(或多组)标志物和参数。因此，在本发明的情形中可以确定其他参数和/或标志物。换句话说，符合本发明的方法可以与其他标志物、参数和/或方法相组合进行。这意味着符合本发明的测量方法可以特别有利地作为多参数诊断来进行。由此，另外地确定优选地选自血管扩张剂的至少一种其他标志物。
在本发明的某些情况下，本文中提供的方法包括确定至少一种其他标志物的水平，所述其他标志物选自血红蛋白、血清总蛋白、肾素、心房利钠肽原(proANP)、C-端精氨酸-血管升压素原(CT-proAVP)蛋白、红细胞生成素、血管紧张肽II、醛甾酮、皮质醇、肾上腺素(adrenaline)、肾上腺素(epinephrine)、儿茶酚胺和内皮素原-1(pro-ET-1)。
在某些情况下，本发明涉及一种其他标志物的用途，所述其他标志物选自血红蛋白、血清总蛋白、肾素、心房利钠肽原(proANP)、C-端精氨酸-血管升压素原(CT-proAVP)蛋白、红细胞生成素、血管紧张肽II、醛甾酮、皮质醇、肾上腺素(adrenaline)、肾上腺素(epinephrine)、儿茶酚胺和内皮素原-1(pro-ET-1)。
在某些优选情况下，本文中提供的方法还包括确定标志物“血红蛋白(hemoglobin或heamoglobin)”的水平。“血红蛋白”或“Hb”是脊椎动物的红细胞中含铁的运输氧的金属蛋白。Hb浓度可以在常规血液化验的背景下测量，通常作为全血计数的一部分。正常的Hb浓度是：对于男性：13.8至18.0g/dL(138至180g/L，或8.56至11.17mmol/L)；对于女性：12.1至15.1g/dL(121至151g/L，或7.51至9.37mmol/L)；对于儿童：11至16g/dL(111至160g/L，或6.83至9.93mmol/L)；或对于妊娠女性：11至14g/dL 9.5至15(妊娠期间的通常值)(110至140g/L，或6.83至8.69mmol/L)。在本发明的情形中，低血红蛋白意味着个体的血红蛋白水平低于对于他们的年龄和性别来说正常值的下限(参见上述值的正常范围)。例如，19岁的男性如果检测到的血液值低于13.6g/dl，则具有低的血红蛋白水平。在本发明的情形中，高血红蛋白水平意味着测量到的血红蛋白水平高于对于所述个体的年龄和性别来说正常值的上限(参见上述正常值)。例如，检测到的血红蛋白水平高于18.2g/dl的19岁男性，具有高的血红蛋白水平。
当在本文中使用时，“血清总蛋白”是指血液中的蛋白质的总量。在优选情况下，所述血清总蛋白是指血清或血浆中的蛋白质的总量。所述“血清总蛋白”在常规化验中测量，并在ICU和其他医疗服务中使用。血清或血浆中的两种主要蛋白质组分是白蛋白和球蛋白。球蛋白由被称为α、β和γ型的不同蛋白质组成。用于血清总蛋白的试验报告总蛋白、白蛋白和球蛋白的分开的值。血清总蛋白可以例如通过双缩脲试剂或通过折光测定法确定。低蛋白血症由肝衰竭、营养不良造成的合成不足或由肾亏损引起。血清蛋白质浓度的升高有两种主要原因：脱水，其中体内存在较少的水，以及血液容量减少。最通常过量产生的蛋白质是免疫球蛋白，在感染中和血液肿瘤中其水平可以升高。血清总蛋白的正常范围为约60至约80g/l。
当在本文中使用时，“肾素”或“血管紧张素原酶”是一种参与身体的肾素-血管紧张肽醛甾酮系统(RAAS)的酶，所述系统介导细胞外容量(即血浆、淋巴和间质液容量)和动脉血管收缩。因此，它调控身体的平均动脉血压。肾素的水平优选地在对象的血浆或血清中测量。
当在本文中使用时，“心房利钠肽原”或“proANP”是指包含128个氨基酸的激素原。当在本文中使用时，包含128个氨基酸的激素原(proANP)的C-端区段的包含28个氨基酸(99-126)的肽被称为真正的激素ANP。在ANP从其激素原proANP释放后，等摩尔的由98个氨基酸构成的proANP的剩余的较大部分肽、即N-端proANP(NT-proANP；proANP(1-98))被释放到循环中。由于NT-proANP具有明显更高的半衰期和稳定性，NT-proANP可以作为实验室参数用于诊断、跟踪和疗法控制；参见例如Lothar Thomas主编，Labor und Diagnose，第5次扩充版，第2章第2.14节，Kardiale Diagnostik，第116-118页和WO 2008/135571。proANP的水平优选地在对象的血浆或血清中测量。
当在本文中使用时，内皮素-1源自于被称为内皮素原-1的较大的前体分子。内皮素原-1可以被蛋白水解加工成所描述的各种不同片段(EP 2 108 958A1；“内皮素-1前体在体内的蛋白水解加工模式”(Proteolytic processing pattern of the endothelin-1precursor in vivo.Peptides)，2005Dec；26(12):2482-6)。这些片段在血液循环中经历蛋白水解降解，取决于片段的类型以及循环中存在的蛋白酶的类型和浓度/活性，所述降解可以快速或缓慢地发生。因此，根据本发明，可以测量这些至少12个氨基酸的片段、优选地至少20个氨基酸、更优选地至少30个氨基酸的片段中任一者的水平。优选地，可以测量C-端pro-ET-1(CT-proET-1)或其片段。内皮素-1的水平优选地在对象的血浆或血清中测量。
当在本文中使用时，“血管升压素”是指“AVP”。血管升压素是强有力的血管收缩剂。已检查了其激素原的测定作为尿崩症(diabetes insipidus)病例的预后和诊断因子。血管升压素或抗利尿激素(ADH)是调控身体水和水平衡的关键之一。它的分泌部分与应激相关，引起动脉压升高和水被吸收，带来低钠血症发作的风险。然而，ADH是不稳定的。此外，它的浓度依赖于它与血小板的结合，因此是不稳定的。所述激素原的C-端部分“CT-proAVP”是ADH的更稳定的前体，并且它的血浆浓度反映出ADH分泌(Struck，2005；Morgenthaler，2007)。当在本文中使用时，所述激素原的C-端部分被称为“CT-proAVP”或“和肽素”。在脓毒性休克或出血后的血浆水平的提高与血液摩尔渗透压浓度和死亡率相关(Morgenthaler，2007)。CT-proAVP的水平优选地在对象的血浆或血清中测量。
通过血管紧张素转化酶(ACE)、主要通过肺中的ACE(但是也存在于内皮细胞和肾上皮细胞中)，血管紧张肽I通过除去两个C-端残基被转变成血管紧张肽II。血管紧张肽II起到内分泌、自分泌/旁分泌和胞内分泌激素的作用。血管紧张肽II的水平优选地在对象的血浆或血清中测量。
在某些情况下，本文中提供的方法还包括确定所述对象的选自下列的至少一个参数：体重指数、体重、年龄、性别、IGS II、乳酸盐(lactate)、钠摄入、液体摄入和患者组。在某些优选情况下，本文中提供的方法还包括确定所述对象的选自体重指数、体重、年龄和性别的至少一个参数。
当在本文中使用时，体重指数(BMI)是源自于所述对象的质量(重量)和高度的值。BMI被定义为所述对象的身体质量即体重除以所述对象的身高的平方，并且通用地以kg/m2为单位表示，得自于千克为单位的体重和米为单位的身高。BMI也可以使用表或图(参比值)确定，所述表或图使用用于不同BMI类别的轮廓线或颜色显示了BMI随质量和身高的变化，并且可以使用两种不同的测量单位。BMI是对个体中的组织物质(肌肉、脂肪和骨骼)的量进行定量，然后根据该值将所述个体分类为体重过轻、正常体重、超重或肥胖的一种尝试。通常接受的BMI范围是体重过轻：低于18.5，正常体重：18.5至25，超重：25至30，肥胖：高于30。在本发明的某些情况下，所述BMI在第0天，例如患者入院时确定。
当在本文中使用时，“体重”是指对象的以kg为单位的质量(参见BMI)。在本发明的某些情况下，体重在第0天，例如患者入院时确定。在本发明的情形中，正常体重在理论上可以根据Devin公式或Hamwi方法来计算。根据Hamwi方法，男性的理想体重为48kg加上超过1.5m后每2.54cm 2.7kg。对于女性来说，它是45kg加上超过1.5m后每2.54cm 2.3kg。低于或高于这些正常值的值增加成为危急对象的风险。
当在本文中使用时，“年龄”是指个体已生活的以年为单位的时间长度。在优选情况下，所述参数在所述方法中通过添加年龄的平方和立方即年龄2和年龄3来加权。
当在本文中使用时，“IGS II”(其是“Indice de Gravité Simplifié”的缩写)或“SAPS II”(其是“简化急性生理评分II”的缩写)涉及一种用于对疾病或病症的严重性进行分类的系统(参见Le Gall JR等，“基于欧洲/北美洲多中心研究的新的简化急性生理评分(SAPS II)”(A new Simplified Acute Physiology Score(SAPS II)based on aEuropean/North American multicenter study)，JAMA.1993；270(24):2957-63)。所述“IGS II评分”由12个生理变量和3个疾病相关变量组成。点评分从12种常规生理测量值、关于以前健康状况的信息和在进入ICU时获得的一些信息来计算。所述IGS II可以在任何时间、优选地在第2天确定。“最坏的”测量值被定义为与最高的点数相关的测量。SAPS II评分在0至163点的范围内。所述分类系统包括下述参数：年龄，心率，收缩压，体温，格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Scale)，机械通气(mechanical ventilation)或CPAP，PaO2，FiO2，尿输出量，血液尿素氮，钠，钾，碳酸氢盐，胆红素，白细胞，慢性病和入院类型。在死亡率与总SAPS II评分之间存在反曲关系。对象的死亡率在SAPSII评分为29点时为10％，所述死亡率在SAPSII评分为40点时为25％，所述死亡率在SAPSII评分为52点时为50％，所述死亡率在SAPSII评分为64点时为75％，所述死亡率在SAPSII评分为77点时为90％(Le Gall，同上)。
当在本文中使用时，“液体摄入”是指对象在给定时间内例如24小时内的流体摄入。例如，患者或对象的流体摄入可以是输液或流体复苏。优选地，所述液体摄入在第0天时，换句话说，在患者入院之时或之后确定。
当在本文中使用时，对象的“性别”是指所述对象的生物性别，其中所述对象是男性或女性。
当在本文中使用时，“钠摄入”是指生物体从外部来源例如营养物(食物和液体)或输液接收的盐、优选为钠例如氯化钠的总量。优选地，所述钠摄入在第0天时，换句话说，在患者入院之时或之后确定。
当在本文中使用时，“乳酸盐”或“最大乳酸盐”是指在血液中测量到的最高乳酸盐浓度。通常，所述乳酸盐浓度每日或甚至更频繁地评估。血液中的乳酸盐浓度可以通过乳酸氧化酶分光光度法来确定。
当在本文中使用时，“总血容量”、“TBV”或“TV”可以利用用铬51(Cr51)标记的红细胞来测量。总血容量可以在任何时间测量，特别是在第1天至第3天之间，例如在第3天；和/或在第6天至第10天之间，例如在第10天。在本文中设想了将患者自己的血液用铬51(Cr51)放射性标记，并选择被放射性标记的红细胞。然后将已知量的放射性标记的红细胞重新注入到全血循环中。例如，可以在两个时间点例如在10和30分钟时在动脉导管中进行两次取样。为了推导出以mL或mL/kg为单位的总血容量(TBV)，测量两个样品的放射活性并确定患者的体重(Gore等，2005)。血细胞比容数和测量到的总血容量确定了以mL或mL/kg为单位的红细胞容量(RBCV)和以mL或mL/kg为单位的血浆容量(PV)。正常值(±20％)对于TBV来说为约72±14mL/kg，对于RBCV来说为约32±6mL/kg，对于PV来说为约40±8mL/kg(Gore等，2005)。
所述“血浆容量”或“PV”可以利用碘-125来测量(PVI125)。所述血浆容量可以在任何时间例如在第7天测量。在随附的实施例中，PVI125在第7天测量。向所述患者注射确定量的用碘125(I125)放射性标记的白蛋白，并在几个时间点例如注射后10min、30分钟和2小时收集样品(Fairbanks等，1996)。通过I125测量的PV的正常值为约45±10mL/kg(Gore等，2005)。一般来说，通过I125-白蛋白测量的血浆容量略微大于通过Cr51–红细胞测量的血浆容量，这是由于白蛋白的分布容量比红细胞的分布容量更大(Gore等，2005)。
当在本文中使用时，“患者组”或“组”意味着将所述患者按照他们的疾病模式或医疗状况进行分组。当在随附的实施例中使用时，所述对象被分成4组，即严重脑外伤(SBT)、动脉瘤蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)和手术后腹膜炎伴有休克(P)。
在某些情况下，所述方法确定对象的细胞外容量状态，其中所述方法包括确定选自proADM或其片段、优选为MR-proADM、性别、血红蛋白、血清总蛋白、IGS II评分、流体摄入和钠摄入的至少一种标志物和/或参数。在随附的实施例中，证实了随机森林分析可用于选择产生最低误差的标志物和参数的组合。在本文中令人吃惊地显示，用于预测对象的细胞外容量状态的最佳模型是通过使用MR-proADM水平与对象的体重指数、体重、年龄(年龄2和年龄3)和性别、血红蛋白和血清总蛋白的组合来获得的。因此，在本发明的最优选情况下，本文中提供的方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、体重、年龄、性别、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平。正如在随附的实施例4中证实的，标志物例如MR-proADM、血清总蛋白和血红蛋白具有良好的预测力，例如对于体液平衡来说AUC为0.94；参见例如表13和14。向所述标志物添加所述对象的参数例如体重指数、体重、年龄和性别，将体液平衡的AUC提高到例如0.95。所述对象的单独的参数例如体重指数、体重、年龄和性别具有对于体液平衡来说例如0.88的AUC。因此，在本发明的某些情况下，本文中提供的方法包括确定所述对象的体重指数、体重、年龄和性别。在本发明的优选情况下，本文中提供的方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平。在本发明的最优选情况下，本文中提供的方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、体重、年龄、性别、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平。
正如在随附的实施例中、具体来说在实施例3和4中记录的，可以使用标志物与参数的不同组合来确定对象的细胞外容量状态。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法确定对象的体液平衡，其中所述方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、体重、年龄、性别、所述样品中血红蛋白的水平、所述样品中血清总蛋白的水平、所述对象的IGS II评分和流体摄入。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法确定对象的盐平衡，其中所述方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、体重、年龄、性别、所述样品中血红蛋白的水平、所述样品中血清总蛋白的水平、所述样品中钠摄入的水平、所述对象的IGS II评分和流体摄入。正如在随附的实施例3中示出的，不存在参数IGS II和液体摄入对统计分析具有少量影响，仅仅失去2至3％的r2，并且对AUC没有影响；参见例如表6。因此，在本发明的某些其他情况下，本文中提供的方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、体重、年龄、性别、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平。
在本发明的某些情况下，所述方法包括确定所述对象的至少一种其他标志物和/或参数，所述其他标志物和/或参数选自所述样品中的proANP水平、总血容量水平、所述样品中的血细胞比容水平、红细胞容量水平、血浆容量水平、总尿液容量水平、所述样品中的血管紧张肽II水平、所述对象的患者组、所述样品中的皮质醇水平、血液中的内皮干细胞数目、所述样品中的儿茶酚胺水平、所述对象的全血离子图、所述对象的尿液离子图、所述对象的血液摩尔渗透压浓度、所述对象的尿液摩尔渗透压浓度、所述对象的血糖、所述样品中的内皮素原-1(pro-ET-1)水平、所述样品中的CT-proAVP水平、所述样品中的醛甾酮水平、所述样品中的乳酸盐水平、所述对象的急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)、所述对象的世界神经外科学会联盟(World Federation of Neurosurgical Societies，WFNS)评级和所述对象的格拉斯哥昏迷量表(GCS)。
在随附的实施例中记录了在所述对象的序贯性器官衰竭评分(SOFA评分)与体液平衡和/或盐平衡之间存在显著的统计学关系；参见实施例1和3和图4。MR-proADM与体液平衡和/或盐平衡相关。因此，在某些情况下，在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定所述序贯性器官衰竭评分(SOFA评分)。换句话说，proADM或其片段、优选为MR-proADM被用作SOFA评分的替代标志物。
在本发明的某些其他情况下，在体液平衡和/或盐平衡的基础上确定所述序贯性器官衰竭评估评分(SOFA评分)。在随附的实施例中显示，包含其他参数例如年龄、BMI和性别提高了确定SOFA评分的预测力；参见图5。因此，在某些情况下，本文中提供的方法在体液平衡和/或盐平衡的基础上确定所述SOFA评分，其中所述方法还包括确定由年龄、体重指数和性别构成的至少一种参数。
此外，本发明涉及一种方法，其中所述方法包括：
(a)确定对象的样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，并且
(b1)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与对应于至少一个参比对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平的参比数据进行比较；或者
(b2)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与对应于从前期分析获得的同一对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平的数据进行比较；
(c)在所述比较步骤(b)的基础上鉴定所述对象的体液平衡和/或盐平衡；以及
(d)在步骤(c)的基础上鉴定血球容量状态和/或细胞外容量状态。
换句话说，本发明涉及本文中提供的方法，其中所述方法包括：
(a)确定对象的样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，并且
(b1)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与至少一个参比对象或参比对象群体的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较；或者
(b2)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与从前期分析获得的同一对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较；
(c)在所述比较步骤(b)的基础上鉴定所述对象的体液平衡和/或盐平衡；以及
(d)鉴定血球容量状态和/或细胞外容量状态。
此外，本发明涉及一种体外方法，其中所述方法包括：
(a)确定样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平和对象的至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的水平，并且
(b1)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及至少一种其他标志物和/或参数的水平与对应于至少一个参比对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及所述至少一种其他标志物和/或参数的水平的参比数据进行比较；或者
(b2)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及至少一种其他标志物和/或参数的水平与对应于从前期分析获得的同一对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及所述至少一种其他标志物和/或参数的水平的数据进行比较；并且
(c)在所述比较步骤(b1)或(b2)的基础上鉴定所述对象的体液平衡和/或盐平衡；并且
(d)在步骤(c)的基础上鉴定血球容量状态和/或细胞外容量状态。
本发明还涉及一种体外方法，其中所述方法包括：
(a)确定对象的样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、所述对象的体重、所述对象的年龄、所述对象的性别、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平；并且
(b1)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平、所述体重指数、所述体重、所述年龄、所述性别、所述血红蛋白水平和所述血清总蛋白水平与对应于至少一个参比对象的所述标志物的所述水平和所述参数的参比数据进行比较；或者
(b2)将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平、所述体重指数、所述体重、所述血红蛋白水平和所述血清总蛋白水平与对应于从前期分析获得的同一对象的所述标志物的所述水平和所述参数的数据进行比较；
(c)在所述比较步骤(b1)或(b2)的基础上鉴定所述对象的体液平衡和/或盐平衡；并且
(d)在步骤(c)的基础上鉴定血球容量状态和/或细胞外容量状态。
在本发明的某些情况下，术语“将所述proADM或其片段的水平与参比数据进行比较”或“将所述proADM或其片段的水平与对应于至少一个参比对象的所述proADM或其所述片段的水平的参比数据进行比较”，意味着如本文中所述确定proADM或其所述片段的水平，并将所述proADM或其所述片段的水平与在至少一个参比对象中确定的proADM或其所述片段的水平进行比较。相应地，术语“将所述MR-proADM的水平与参比数据进行比较”或“将所述MR-proADM的水平与对应于至少一个参比对象的所述MR-proADM水平的参比数据进行比较”，意味着如本文中所述确定MR-proADM的水平，并将所述MR-proADM的水平与在至少一个参比对象中确定的MR-proADM的水平进行比较。在这些情况下，所述参比数据对应于在这些参比对象中确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平。换句话说，将所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与至少一个参比对象或参比对象群体的proADM或其片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较。所述参比水平在本文中通常被称为参比数据。所述参比数据可以含有对应于例如其他标志物和/或参数的更多的水平/值。在本发明的优选情况下，术语“将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及至少一种其他标志物和/或参数的水平与对应于至少一个参比对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及所述至少一种其他标志物和/或参数的水平的参比数据进行比较”，意味着确定proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平并确定至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的至少一个水平，并将proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与至少一个参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的相应水平进行比较，并且将至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的水平与至少一个参比对象的所述至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的相应水平进行比较。在某些情况下，所述参比数据对应于在所述参比对象中确定的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及至少一种其他标志物和/或参数的水平。将所述待测试的对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及至少一种其他标志物和/或参数的水平与这些参比对象的所述参比数据进行比较。
在本发明的另一种情况下，所述参比数据对应于在所述参比对象中确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白水平和血清总蛋白水平。将待测试的对象的所述proADM或其片段、优选为MR-proADM水平、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白水平和血清总蛋白水平与这些参比对象的参比数据进行比较。
在本发明的某些情况下，参比对象可以是健康对象，例如具有正常的细胞外容量状态的对象。在本发明的另一种情况下，参比对象可以是患有疾病或病症的对象。健康的或患有疾病/病症的参比对象的群体基本上分别由健康对象或患有疾病或病症的对象构成。参比对象的群体是包含1至200或更多个参比对象的对象群体。
具体来说，所述健康对象不患有水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、头部损伤、神经功能缺损、多发性创伤性损伤、手术后、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍和/或与体液平衡紊乱相关的疾病。具体来说，所述健康对象不患有动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤并且不是手术后患者。
具体来说，所述患有疾病或病症的参比对象或参比对象群体患有已知与危急细胞外容量状态和/或危急血球容量状态相关的疾病或病症，例如水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、头部损伤、神经功能缺损、多发性创伤性损伤、手术后、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍和/或与体液平衡紊乱相关的疾病。具体来说，所述患有疾病或病症的参比对象或参比对象群体患有动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤，或者其中所述参比对象是患有例如腹膜炎伴有休克的手术后对象。
如果来自于所述参比对象的标志物和/或参数情况含有来自于所述至少一个参比对象的标志物和/或参数情况的特征性特点，则所述待试验的对象可以被相应地诊断为是健康的，例如具有平衡的体液和/或盐平衡，或处于发生或具有正体液平衡和/或盐平衡的风险，和/或处于或具有危急细胞外容量状态和/或危急血球容量状态的风险。
在本发明的某些情况下，所述方法涉及确定对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态，其中所述方法包括：
确定所述对象的样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，并且
将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与至少一个参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较，其中每个参比对象都是健康的；
在所述比较步骤的基础上鉴定所述对象的细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡；其中
所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比升高，指示了所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态；
所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比一致或相近，指示了所述对象具有一致或相近的体液平衡和/或一致或相近的盐平衡，其中所述一致的体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态；和/或
所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比降低，指示了所述对象具有负体液平衡和/或负盐平衡。
在本发明的这些情况下，所述参比对象是健康对象(参见上文)，例如具有正常的细胞外容量状态的对象。所述健康对象具有正常的体液平衡和/或盐平衡。健康对象通常具有约0.4至1nmol/L的MR-proADM水平(Angeletti S等，“脓毒症诊断中的降钙素原和中段肾上腺髓质素原的试验组合”(Procalcitonin and mid-regional pro-adrenomedullintest combination in sepsis diagnosis)，Clin Chem Lab Med.2013May；51(5):1059-67；Christ-Crain M等，“在脓毒症中作为预后标志物的中段肾上腺髓质素原：观察性研究”(Mid-regional pro-adrenomedullin as a prognostic marker in sepsis:anobservational study)，Crit Care.2005；9(6):R816-24；或Suzuki Y等，“用于确定中段肾上腺髓质素原的酶免疫测定法的开发和临床应用”(Development and clinicalapplication of an enzyme immunoassay for the determination of midregionalproadrenomedullin)，J Pept Sci.2013Jan；19(1):59-63)。在一个实施方式中，所述至少一个健康参比对象具有约0.5nmol/L的proADM或其片段水平，优选为MR-proADM水平。在另一个实施方式中，所述至少一个健康参比对象具有约0.75nmol/L的proADM或其片段水平，优选为MR-proADM水平。在另一个实施方式中，所述至少一个健康参比对象具有约1.0nmol/L的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平。正如在随附的实施例中证实的，患有例如动脉瘤、多发性创伤或手术后病症的对象显示出1.0nmol/L或更高的水平。换句话说，患有疾病或病症的对象显示出高的proADM或其片段、优选为MR-proADM水平。这个阈值也被统计分析例如ROC所揭示；参见图4和下文。在本发明的某些情况下，当proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与所述健康对象的参比水平相比提高时，所述待测试的对象被认为具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态。当在本文中使用时，“所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比提高”或“更高的”水平，意味着所述对象的水平与所述健康参比对象或所述健康参比对象的所述群体的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平相比，更高至少15％，优选地至少20％，更优选地至少25％，或甚至更优选地至少30％。在某些情况下，所述“升高”或“更高”的水平意味着所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少0.5nmol/L，例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L或至少1.0nmol/L。
在某些情况下，将所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与所述健康对象的参比水平进行比较，其中通过将所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平进行比较来鉴定细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡，其中提高的水平例如至少1nmol/L，指示了所述对象具有正体液平衡和/或正盐平衡，和/或其中所述正体液平衡和/或正盐平衡表明所述对象具有危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态。
在本发明的某些情况下，本文中提供的方法包括将所述MR-proADM的水平与所述健康对象的参比水平进行比较，并且其中所述对象的MR-proADM水平与健康对象的参比数据相比一致或相近，表明所述对象具有一致或相近的体液平衡和/或一致或相近的盐平衡，其中所述一致或相近的体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态。当在本文中使用时，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比相近”，意味着所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与健康参比对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相比+/-10％，优选地+/-5％，更优选地+/-2％或最优选地相同或一致。在示例性实施方式中，所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平约为0.5nmol/L至1.0nmol/L，其中如果所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM水平为约0.5nmol/L至约1.0nmol/L的话，则所述对象具有一致或相近的所述水平。对于含有约40L体液的对象来说，正常的细胞外容量为例如约15L(Guyton Arthur C.，(1991),p.275)。正如本文中所定义的，具有正常的细胞外容量状态的对象可以具有一致或相近的体液和/或盐平衡，因此，所述对象的流体和/或盐的输入和输出处于平衡之中，即一致或相近。正常的血球容量状态可以是例如高于20ml/kg的血球容量状态。
当在本文中使用时，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比降低”，意味着所述对象的水平与健康参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平相比低15％、优选地20％、更优选地25％或甚至更优选地30％。在优选情况下，所述“降低”或“较低”的水平意味着所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平低于1.0nmol/L，例如低于0.75nmol/L或低于0.5nmol/L。换句话说，所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平低于1.0nmol/L例如低于0.75nmol/L或低于约0.5nmol/L的话，则所述对象具有降低的所述水平。在这些情况下，所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比数据相比降低，表明所述对象具有负体液平衡和/或负盐平衡。
这种方法的灵敏度和特异性不仅仅取决于所述试验的分析质量，它还取决于构成异常或正常结果的定义。对于患有和没有疾病/病状的对象来说，proADM或其片段的水平、优选地MR-proADM的水平的分布可能交叠。在这些条件下，试验不能以100％的准确性绝对地将正常与疾病区分开。专业技术人员将会意识到下述事实，即对象的状况本身或所述对象的至少一个其他标志物和/或参数可以帮助解释所述数据，并且这种其他信息允许在交叠的区域中的更可靠的预后。因此，将至少一种其他标志物和/或参数的水平与至少一个健康对象的参比数据进行比较，其中所述至少一种其他标志物和/或参数的值/水平与所述参比数据的所述至少一种其他标志物和/或参数的相应水平相比相近或一致，指示了所述对象具有正体液和/或盐平衡的风险降低，和/或其中所述至少一种其他标志物和/或参数的值/水平与所述参比数据的所述至少一种其他标志物和/或参数的相应水平相比更高或更低，指示了具有正体液和/或盐平衡的风险提高，并且其中所述正体液和/或盐平衡指示危急细胞外容量。在所述参比对象是至少一个健康对象的情况下，所述至少一种其他标志物和/或参数的所述相近或一致的值/水平是正常的值/水平，即所述标志物和参数的值或水平在正常范围内。标志物和参数的正常的值/水平一般对于专业技术人员来说是已知的。某些标志物和参数的正常的值/水平在上文中描述。在本发明的最优选情况下，所述参比数据对应于或含有在所述参比对象中确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白水平和血清总蛋白水平。将待测试的对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白水平和血清总蛋白水平与这些参比对象的参比数据进行比较。
当在本文中使用时，“相近或一致的”水平/值意味着所述水平/值与相应的水平/值相比+/-10％、优选地+/-5％、更优选地+/-2％或最优选地相同或一致。当在本文中使用时，“更低”或“降低”或“更高”或“提高”的水平/值，意味着所述水平/值与相应的水平/值相比分别高或低15％、优选地20％、更优选地25％或最优选地30％。
在本发明的示例性实施方式中，所述方法涉及确定对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态，其中所述方法包括：
确定所述对象的样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，并且
将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与至少一个参比对象或参比对象群体的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较，其中所述参比对象是患有已知与危急细胞外容量状态和/或危急血球容量状态相关的疾病或病症的对象，或者其中所述参比对象是患有腹膜炎伴有休克的手术后对象；并且
在所述比较步骤的基础上鉴定所述对象的细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡；其中
与所述参比水平相比所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近、水平一致或水平提高，表明所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态；和/或
与所述参比数据相比所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平降低，表明所述对象具有正常的体液平衡、正常的盐平衡、正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态。
在本发明的某些优选情况下，所述参比对象是患有已知与危急细胞外容量状态和/或危急血球容量状态相关的疾病或病症的对象。这些疾病或病症包括例如动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤或其中所述参比对象是患有腹膜炎伴有休克的手术后对象的情况。因此，设想了所述疾病或病症涉及其中体液平衡、盐平衡、体液、细胞外容量和/或细胞内容量是危急的状况。因此，在示例性实施方式中，所述参比对象患有动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤和/或是患有疾病或病症例如腹膜炎伴有休克的手术后对象。在另一个实施方式中，所述参比对象是患有选自下列的疾病或病症的对象：动脉瘤(ANE)、创伤性脑损伤(TC)、多发性创伤(POLY)、消化系统手术(CD)、严重脑外伤(SBT)、动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)和手术后腹膜炎伴有休克(P)。将待测试的对象的MR-proADM水平与这些参比对象的参比数据进行比较。在随附的实施例中显示，通过对患有疾病或病症的对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的ROC曲线进行作图用于预测体液平衡和盐平衡，可以鉴定到预测危急细胞外容量状态的proADM或其片段、优选为MR-proADM的阈值；参见实施例1和图4。在其中显示，高的MR-proADM水平例如至少约1.0到至少约1.5nmol/L，指示了水/体液和/或钠/盐的获得。因此，在优选情况下，将所确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与患有疾病或病症的参比对象的参比水平进行比较，所述疾病或病症已知与危急细胞外容量状态相关，例如动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤，或者其中所述参比对象是患有腹膜炎伴有休克的手术后对象，其中高或升高的水平例如至少1nmol/l，确定了所述对象具有正体液平衡和/或盐平衡。换句话说，确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与患有所述疾病或病症的参比对象的参比水平相比相近或一致或甚至升高，指示了所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态。当在本文中使用时，“与所述参比水平相比所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近或水平一致”，意味着与患有所述疾病和/或病症的至少一个参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相比，所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为+/-10％、优选地+/-5％、更优选地+/-2％或甚至更优选地相同或一致。当在本文中使用时，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比升高”，意味着所述对象的水平与患有所述疾病或病症的所述参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相比高至少15％、优选地至少20％、更优选地至少25％或甚至更优选地至少30％。换句话说，“与所述参比水平相比所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近或水平一致或水平升高”，意味着与患有所述疾病和/或病症的至少一个参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相比，所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为+/-10％、优选地+/-5％、更优选地+/-2％或甚至更优选地相同或一致；或者与患有所述疾病和/或病症的所述参比对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相比更高至少15％、优选地至少20％、更优选地至少25％或甚至更优选地至少30％。在一种情况下，当所述参比对象是患有所述疾病或病症的对象时，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近或水平一致或水平升高”意味着所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为约0.5nmol/L或至少0.5nmol/L。在另一种情况下，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近或一致或水平升高”意味着所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为约0.75nmol/L或至少0.75nmol/L。在另一种情况下，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平相近或一致或水平升高”意味着所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为约1nmol/L或至少1nmol/L或甚至约1.5nmol/L或至少1.5nmol/L。换句话说，所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平在0.5nmol/L至1.5nmol/L的范围内，例如0.5nmol/L、0.75nmol/L或1.0nmol/L，其中如果所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平为约或至少0.5nmol/L至约或至少1.5nmol/L的话，则所述对象具有相近或一致的所述水平。
当在所述对象中确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与患有所述疾病和/或病症的对象相比降低或更低时，所述待测试的对象不具有正体液和/或盐平衡，而是具有正常的体液和/或盐平衡，即一致或相近的体液平衡和/或盐平衡。因此，所述体液和/或盐平衡处于平衡中。因此，这个对象具有正常的体液平衡、正常的盐平衡、正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态。这种降低或更低的水平也可能表明所述对象具有负盐平衡和/或体液平衡。当在本文中使用时，术语“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平降低”，意味着在所述待测试的对象中确定的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平，具有与患有所述疾病或病症的参比对象的水平相比低至少15％、优选地至少20％、更优选地至少25％或甚至更优选地至少30％的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平。在优选情况下，“所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的降低的水平”或“较低的”水平意味着所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平低于1.0nmol/L，例如低于1.0nmol/L、低于0.75nmol/L或低于0.5nmol/L。换句话说，所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平在0.5nmol/L至1.0nmol/L的范围内，其中如果所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平低于1.0nmol/L例如低于1.0nmol/L、低于0.75nmol/L或低于0.5nmol/L的话，则所述对象具有降低的所述水平。
在交叠的区域中，确定对象的其他状况可以辅助预后。因此，将至少一种其他标志物和/或参数的水平与患有疾病或病症的至少一个对象的参比数据进行比较，其中所述至少一种其他标志物和/或参数的值/水平相近或一致增加了具有正体液和/或盐平衡的风险，并且其中所述至少一种其他标志物和/或参数的更高或更低的水平/值，降低了所述对象具有正体液和/或盐平衡的风险，并且其中所述正体液和/或盐平衡指示了危急细胞外容量。
正如在随附的实施例中所示，标志物和参数的组合被选择成产生最低误差。这种选择或重要性分析使用标准的统计分析例如随机森林分析来进行。正如在随附的实施例中所示，对象的标志物和参数proADM或其片段、优选为MR-proADM、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白和血清总蛋白，产生了遭受正体液和/或盐平衡的危急患者的非常可靠的预测。因此，在本发明的优选情况下，患者结果、即对象的体液平衡和/或盐平衡的预测，使用标准的统计分析例如随机森林来进行。在这些情况下，所述标志物和参数在公式中实施，所述公式可以被整合在软件程序中。因此，在某些实施方式中，本发明涉及适合于利用本文中提供的方法确定对象的体液平衡、盐平衡、细胞外容量和/或血球容量的软件程序。因此，在所述对象的样品中确定proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平并将其输入到所述软件中。在其他实施方式中，确定所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、体重指数、体重、年龄、性别、血红蛋白水平和血清总蛋白水平，并将其输入到所述软件中。在其他实施方式中，所述软件在proADM或其片段、优选为MR-proADM和/或其他参数和标志物的水平的基础上自动计算/确定p-危急值，并确定对象是否具有危急体液平衡、危急盐平衡、危急细胞外容量和/或危急血球容量。换句话说，所述软件提供了所述对象是否是危急对象的预后。这种软件可以通过图形用户界面使用。所述界面背后的公式使用在开放的科学软件R中执行的标准统计方法例如随机森林分析方法并基于患者数据自动产生。因此，所述统计分析将所述标志物和参数的水平与参比数据进行比较，并预测所述对象的体液平衡和/或盐平衡以及因此细胞外容量状态。在ICU中，医师可以使用所述界面输入标志物和/或参数以获得体液平衡和盐平衡的估算，其可用于鉴定具有正体液平衡和/或盐平衡的对象。在体液平衡或盐平衡对于体液平衡来说超过4l并且对于盐平衡来说超过36g的情况下，所述患者处于危急期中(p-危急值>60％)。所述预测的结果可以在所述图形用户界面中例如通过交通灯系统来图示。例如，分别超过4L或36g的体液平衡和盐平衡的值用红色突出显示，因为它们指示危急患者。如果所述患者具有分别低于4L或36g的体液平衡或盐平衡，则所述患者或值用绿色突出显示(患者具有低于30％的p-危急值)。在这些情况下，本文中提供的方法可以：用于治疗指导，例如如果p-危急值超过60％，则重新考虑体液管理；用于正体液和盐平衡的诊断，以通知临床医生这位患者具有体液过载，即使是对于未接受静脉内流体复苏的患者；或者在所述患者具有p-危急值>90％，所述患者具有高的SOFA评分、低的RBCV以及因此甚至更加不良的预后的情况下，用于患者预后(图6)。在30％至40％之间，所述患者具有中等的p-危急值，其用黄色突出显示。
在本发明的某些情况下，所述方法涉及确定对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态，其中所述方法包括：
在从所述对象获得的样品中确定标志物proADM或其片段的水平，优选为MR-proADM的水平；
将所述proADM或其所述片段的水平、优选为MR-proADM的水平，与从前期分析获得的同一对象的proADM或其所述片段的水平、优选为MR-proADM的水平进行比较；并且
在所述比较步骤的基础上鉴定所述对象的细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡，其中
至少1nmol/L的水平指示了所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态。
在本发明的某些情况下，术语“将所述proADM或其所述片段的水平、优选为MR-proADM的水平，与从前期分析获得的同一对象的proADM或其所述片段的水平、优选为MR-proADM的水平进行比较”，意味着如本文中所述确定所述proADM或其所述片段的水平、优选为MR-proADM的水平，并且将该proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与在前期分析时从同一对象获得的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的一个或多个水平进行比较。优选地，在几个时间点确定所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平，即可以从前期分析获得proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的超过一个水平。使用这些在不同时间点确定的水平可以计算一串级数(series)。这个级数显示出趋势，其可用于确定例如所述对象的细胞外容量状态和/或血球容量状态。换句话说，所述MR-proADM水平的趋势预测了细胞外容量状态。例如，在几个先前时间点已确定了例如MR-proADM的水平/值的一系列测量值的情况下，专业技术人员可以计算趋势，其可用于解释proADM或其片段、优选为MR-proADM和/或所述其他标志物和/或参数的发展。例如，正趋势，即所述值增加或比以前测量的水平更高，可以预测所述对象具有正体液平衡和/或盐平衡。在某些情况下，如果从所述同一对象的前期分析获得的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平显示出正趋势，并且从同一对象的前期分析获得的proADM或其片段、优选为MR-proADM的至少一个水平在至少0.5nmol/L到至少1.5nmol/L的范围内，例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L、至少1nmol/L或至少1.5nmol/L，则指示所述对象具有正体液平衡和/或正盐平衡，其中正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量状态和/或危急血球容量状态，其中所述对象的健康状态变差。同样地，在某些情况下，如果从所述同一对象的前期分析获得的proADM或其片段的水平、优选为MR-proADM水平显示出负趋势，并且从所述同一对象的前期分析获得的proADM或其片段、优选为MR-proADM的至少一个水平为例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L或至少1nmol/L，则指示所述对象具有正体液平衡和/或正盐平衡，其中正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量状态或危急血球容量状态，其中所述健康状态缓解。在随附的实施例中，所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平随着治疗时间降低。不受理论限制，所述proADM或其片段、优选为MR-proADM浓度的降低可能是由内皮损伤缓解造成的。
在某些情况下，使用某些固定阈值来确定所述对象的细胞外容量状态。在一个实施方式中，当所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平高于0.5nmol/l时，确定所述患者具有正体液平衡和/或盐平衡，其中所述正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量。在另一个实施方式中，当所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平高于0.75nmol/l时，确定所述对象具有正体液平衡和/或盐平衡，其中所述正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量。在另一个实施方式中，当所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平高于1.0nmol/l时，确定所述患者具有正体液平衡和/或盐平衡，其中所述正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量。在另一个实施方式中，当所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平高于1.5nmol/l时，确定所述患者具有正体液平衡和/或盐平衡，其中所述正体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有危急细胞外容量。
在本发明的某些情况下，术语“将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及所述至少一种其他标志物和/或参数的水平与对应于从前期分析获得的同一对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平以及所述至少一种其他标志物和/或参数的水平的数据进行比较”，意味着确定所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平并确定至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的至少一个其他水平，并将所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与在较早的分析时确定的所述同一对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的相应水平进行比较，并且将所述至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的水平与在较早的分析时确定的所述同一对象的所述至少一种其他标志物和/或至少一种其他参数的相应水平进行比较。可以将从前期分析获得的所述至少一种其他标志物和/或参数的多个水平进行自身比较，以便在多变量的基础上预测趋势。或者，可以将所述其他标志物和/或参数与正常的数据例如健康参比对象的数据进行比较。在所述其他标志物和/或参数高于或低于所述正常水平的情况下，正体液平衡和/或盐平衡的风险升高，即所述对象更容易受危急细胞外容量状态影响。
在本发明的某些情况下，将所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、体重指数、体重、血红蛋白水平和血清总蛋白水平与在较早的分析时确定的所述同一对象的相应水平进行比较。换句话说，在不同时间点确定所述标志物和参数的水平，并且所述水平的趋势预测了细胞外容量状态。
当在本文中使用时，“前期分析”意味着在住院期间的几个时间点例如第0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天等确定标志物水平。所述标志物和/或参数的确定也可以按小时进行，例如第一次测量可以在患者入院时进行，然后可以例如每小时、每2小时或每5小时重复所述测量。将确定的标志物例如proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平和任选地所述参数的水平与在较早时间点确定的所述标志物或参数的一个水平/值或从两个或更多个时间点计算的水平/值的平均值进行比较。所述标志物水平的变化指示了所述对象的细胞外容量状态。
如随附的实施例1和图4中所示，通过对用于预测重症监护患者例如患有动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)、严重脑外伤(SBT)或手术后腹膜炎伴有休克(P)的患者的体液平衡和盐平衡的MR-proADM ROC曲线进行作图，鉴定了用于预测危急患者的MR-proADM的阈值，例如至少1nmol/l。在本文中证实了proADM或其片段、优选为MR-proADM的高的或升高的水平，例如高于1nmol/l，指示了所述对象具有体液过载，即正体液平衡。因此，在本发明的优选情况下，本文中提供的方法包括确定对象中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平升高，表明所述对象具有正体液平衡和/或正盐平衡。
在随附的实施例中显示，proADM或其片段、优选为MR-proADM的高的水平例如至少约1.0到至少约1.5nmol/L，指示了所述对象的水/体液和/或钠的获得，即正体液平衡和/或正盐平衡，例如分别为至少约3L至4L或约27g至36g钠/盐。因此，在本发明的实施方式中，所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的升高的或高的水平是至少0.5nmol/L或至少0.6nmol/L或至少0.7nmol/L或至少0.75nmol/L或至少0.8nmol/L或至少0.9nmol/L或至少1.1nmol/L或至少1.2nmol/L或至少1.3nmol/L或至少1.4nmol/L或至少1.5nmol/L或至少1.0nmol/L。
在随附的实施例中，不同患者组即患有动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)、严重脑外伤(SBT)的患者或手术后腹膜炎伴有休克患者(P)都显示出升高的或高的MR-proADM水平。具体来说，患有手术后腹膜炎伴有休克(P)的患者在第0天、第2天和第7天表现出特别高的MR-proADM值；参见图3。因此，在本文中设想了proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平可以随着患者组而变，并且某些病症例如手术后可以引起甚至更高的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其适合于鉴定危急容量状态、正体液和/或盐平衡。因此，在本文中设想了为了预测患有特定疾病的患者的体液平衡和盐平衡将proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平在ROC中作图(参见下文)，可以产生比1nmol/L更高或更低的阈值。例如，在手术后对象中至少1.5nmol/L的proADM或其片段、优选为MR-proADM水平，指示了正体液平衡和/或正盐平衡。一般来说，至少1.0nmol/L的升高的值指示了具有正体液和/或盐平衡的对象。在本发明的优选情况下，如果在对象中确定的proADM或其片段、优选为MR-proADM的浓度为至少1nmol/L(浓度[MR-proADM]≥1.0nmol/L)的话，则所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平被认为是升高的。换句话说，对象中proADM或其片段、优选为MR-proADM的浓度超过1nmol/L，指示了正体液平衡(例如至少4L)或水的获得。或者，对象中proADM或其片段、优选为MR-proADM的浓度超过1.0nmol/L，指示了正盐平衡(例如至少36g)或盐的获得或危急细胞外容量状态。
在本发明的优选情况下，本文中提供的方法确定对象的细胞外容量，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定所述标志物proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中在所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定体液平衡，并且其中所述体液平衡确定细胞外容量状态，其中所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的升高的水平表明所述对象具有正体液平衡，其中所述MR-proADM的升高的水平为至少1nmol/L，其中所述水平指示所述正体液平衡为至少约4L，并且其中所述正体液平衡表明所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。
在优选情况下，本文中提供的方法确定对象的细胞外容量，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定所述标志物proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中在所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定盐平衡，并且其中所述盐平衡确定细胞外容量状态，其中所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的升高的水平表明所述对象具有正盐平衡，其中所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的升高的水平为至少1nmol/L，其中所述水平指示所述正盐平衡为至少约36g，并且其中所述正盐平衡表明所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。
当在本文中使用时，在本发明的意义中“样品”可以是所述对象的任何液体，例如血浆、淋巴、尿液、脑脊液、血液、唾液、血清或粪便和所述对象的任何生物组织。
优选地，在本发明的情形中，所述样品是血液样品，更优选为血清样品，最优选为血浆样品。
在本发明的优选情况下，proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平在所述样品中确定，其中所述样品是血液或血浆样品。在最优选情况下，在血浆样品中确定所述标志物。
在本文中设想了所述样品可以是组织，例如肺组织、腹水、皮肤、心、肾、消化道或下肢水肿、上皮组织、结缔组织例如骨骼或血液、肌肉组织例如内脏或平滑肌和骨骼肌、神经组织、骨髓、软骨、皮肤、粘膜或毛发。所述样品从所述患者收集/获得或按照本发明经历诊断。在适合情况下，正如例如在固体样品的情况下，所述样品在用于本发明之前可以需要被溶解、均化或用溶剂萃取，以便获得液体样品。在优选情况下，所述样品是液体样品，例如溶液或悬液。液体样品在用于本发明之前可以经历一种或多种预处理。这些预处理包括但不限于稀释、过滤、离心、浓缩、沉降、沉淀或透析。预处理也可以包括向所述溶液添加化学或生物化学物质，例如酸、碱、缓冲剂、盐、溶剂、反应性染料、去污剂、乳化剂或螯合剂。在优选情况下，所述样品是血液、血浆、血清或尿液。在最优选情况下，所述样品是血浆。
在本发明的情形中，“血浆”是在离心后获得的含有抗凝剂的血液的事实上无细胞的上清液。示例性的抗凝剂包括钙离子结合化合物例如EDTA或柠檬酸盐和凝血酶抑制剂例如肝素盐或水蛭素。无细胞血浆可以通过将添加抗凝剂的血液(例如添加柠檬酸盐、EDTA或肝素的血液)例如以2000至3000g离心至少15分钟来获得。
在本发明的情形中，“血清”是在允许血液凝结后收集的全血的液体级分。当将凝集的血液(凝结的血液)离心时，血清可以作为上清液获得。
所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平和/或其他标志物的水平可以通过免疫测定法来确定。当在本文中使用时，“测定法”或诊断测定法可以是诊断学领域中使用的任何类型。优选的检测方法包括采取各种不同格式的免疫测定法例如放射免疫测定法、化学发光和荧光免疫测定法、酶联免疫测定法(ELISA)、基于Luminex的珠子阵列、蛋白微阵列测定法、适合于即时试验的测定法和快速化验格式例如免疫层析条试验。这样的测定法可以基于待检测的被分析物与一种或多种捕获探针以一定亲和性的结合。当在本文中使用时，免疫测定法是通过使用抗体或免疫球蛋白测量溶液中大分子/多肽的存在或浓度的生物化学试验。根据本发明，所述抗体可以是单克隆以及多克隆抗体。因此，至少一种抗体是单克隆或多克隆抗体。符合本发明的方法是特别优选的，其中横跨pre-proADM的42-95位氨基酸或SEQ ID NO：2中给出的氨基酸的中段部分肽被用于确定样品中的MR-proADM或其部分肽。在某些情况下，所述标志物的水平通过高效液相色谱(HPLC)来确定。在某些情况下，所述HPLC可以与免疫测定法偶联。
在本发明的某些情况下，proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段和/或其他标志物或其片段使用夹心免疫测定法来确定。在这种夹心免疫测定法中，将两种抗体应用于例如样品中的一种标志物例如proADM或其片段、优选为MR-proADM。具体来说，如果proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段通过使用两种抗体来确定，所述两种抗体特异性结合到proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段的不同的部分序列，将是优选的。
在符合本发明的体外方法的优选情况下，所述抗体之一被标记，并且第二者被结合到或可以选择性结合到固相。
在所述测定法的特别优选的情况下，所述抗体之一被标记，而另一者被结合到固相或可以选择性结合到固相。在优选实施方式中，所述方法作为非均相夹心免疫测定法来执行，其中所述抗体之一被固定化在任意选择的固相上，例如包被的试管(例如聚苯乙烯试管；包被管；CT)或例如由聚苯乙烯构成的微量滴定板的壁，或固定化到粒子例如磁性粒子，其中所述另一种抗体具有类似于可检测标记物或能够选择性附连到标记物的基团，并且所述基团用于检测形成的夹心结构。使用适合的固相的时间上延迟的或随后的固定化，也是可能的。
此外，符合本发明的方法可以体现为均相方法，其中由所述一种或多种抗体与待检测的标志物例如proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段形成的夹心复合物保持悬浮在液相中。在这种情况下，优选地，当使用两种抗体时，两种抗体都用检测系统的部分标记，这导致当两种抗体被整合在单一夹心物中时产生信号或触发信号。这些技术将具体体现为荧光增强或荧光淬灭检测方法。一种特别优选的情况涉及使用应该被成对使用的检测试剂，例如在US 4 882 733 A、EP-B1 0 180 492或EP-B1 0 539 477和其中引用的现有技术中所描述的检测试剂。通过这种方式，在反应混合物中只有在单一免疫复合物中包含两种标记组分的反应产物被直接检测的测量，变得可能。例如，这些技术在商品名(时间分辨扩增穴合物发射)或下提供，执行上面引用的申请的教导。因此，在特别优选的情况下，使用诊断装置来执行本文中提供的方法。例如，确定本文中提供的方法的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平和/或任何其他标志物的水平。在特别优选情况下，所述诊断装置是
本发明还涉及使用试剂盒确定从测试对象获得的样品中的细胞外容量状态，所述试剂盒包含用于确定至少一种标志物的检测试剂，所述标志物选自proADM或其片段、优选为MR-proADM、血红蛋白、血清总蛋白、肾素、心房利钠肽原(proANP)、C-端精氨酸-血管升压素原(CT-proAVP)蛋白、红细胞生成素、血管紧张肽II、醛甾酮、皮质醇、肾上腺素(adrenaline)、肾上腺素(epinephrine)、儿茶酚胺和内皮素原-1(pro-ET-1)或其片段，并且包含用于执行本文中提供的方法的辅助物质。在某些情况下，本发明涉及使用试剂盒确定从测试对象获得的样品中的细胞外容量状态，所述试剂盒包含用于确定proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段的水平的检测试剂，并包含用于执行本文中提供的方法的辅助物质。在优选情况下，本发明涉及使用试剂盒确定从测试对象获得的样品中的细胞外容量状态，所述试剂盒包含用于确定标志物proADM或其片段、优选为MR-proADM、血红蛋白和血清总蛋白的检测试剂，并包含用于执行本文中提供的方法的辅助物质。
在某些情况下，所述用于确定proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段的水平的检测试剂包含抗体，其中所述抗体之一被标记，并且另一种抗体被结合到固相或可以被选择性结合到固相。
在某些情况下，所述用于确定至少一种标志物的水平的检测试剂包含抗体，其中所述抗体之一被标记，并且另一种抗体被结合到固相或可以被选择性结合到固相。
原则上，可以使用可用于所述类型的测定法的所有标记技术，例如使用放射性同位素、酶、荧光、化学发光或生物发光标记物和可直接光学检测的颜色标记物例如金原子和染料粒子的标记，它们尤其被用于即时(POC)或快速测试。在非均相夹心免疫测定法的情况下，两种抗体可以表现出符合本文中在均相测定法的背景中描述的类型的检测系统的部分。
在优选情况下，所述第一和第二抗体两者被分散在液体反应介质中，其中作为基于荧光或化学发光淬灭或增强的标记系统的一部分的第一标记组分被结合到所述第一抗体，并且其中该标记系统的第二标记组分被结合到所述第二抗体，使得在两种抗体结合到待检测的标志物例如proADM或其片段、优选为MR-proADM或其片段或所述其他标志物或其片段之后，产生可检测的信号，其能够检测在所述测量溶液中形成的夹心复合物。这种可替选方案的一种情况包含标记系统例如稀土穴合物(cryptate)或螯合物与荧光或化学发光染料的组合。在特别优选的情况下，所述标记系统包含稀土穴合物与尤其是花青素类型的荧光或化学发光染料的组合。在另一个优选情况下，所述检测使用竞争性免疫测定法来进行。在优选情况下，使用放射免疫测定法。在本文中还设想了标志物的水平可以例如通过质谱方法或通过可以偶联到免疫测定法的高效液相色谱(HPLC)方法或基于质谱测定的方法来确定。专业技术人员理解，可以使用任何可用的测定法，只要可以可靠地确定所述标志物的水平即可。
本发明的一个目的是提供一种用于对象和/或患者中病症或医学病状的诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的体外方法，其特别是为急诊室(ED)或重症监护室(ICU)中的医学从业人员提供可靠信息。
因此，本发明涉及用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡。
在一个实施方式中，本发明涉及用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上，确定所述对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态。
在其他实施方式中，本发明涉及用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定体液平衡和/或盐平衡，并且其中所述体液平衡和/或盐平衡确定细胞外容量状态。
在其他实施方式中，本发明涉及用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、血红蛋白水平、血清总蛋白水平、对象的体重、对象的年龄、对象的性别的基础上确定体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态。
当在本文中使用时，在本发明的情形中“诊断”是指对象中疾病或临床病状的识别和(早期)检测，并且也可以包含差异诊断。在某些实施方式中，疾病或临床病状的严重性的评估，可以被术语“诊断”涵盖。
当在本文中使用时，“预后”是指预测对象患有特定疾病或临床病状的结果或特定风险。这可以包括所述对象的恢复机会或不利结果的机会的估算。
在本发明的情形中，术语“疗法控制”是指所述患者的治疗性治疗的监测和/或调整。“监测”是指保持对已经诊断的疾病、病症、并发症或风险的追踪，以例如分析所述疾病的进展或特定治疗对疾病或病症进展的影响。
在本发明中，术语“风险评估”和“风险分层”是指将对象根据他们的进一步预后分组成不同的风险组。风险评估也涉及为使用预防性和/或治疗性措施而分层。当在本文中使用时，术语“手术控制”涉及对象的手术前控制、手术中控制和/或手术后控制。具体来说，它在本文中意味着控制体液平衡、盐平衡、血球容量状态和/或细胞外容量状态。因此，在这些对象中监测并控制体液和/或盐。
在某些情况下，所述病症或医学病状可以是水过载、水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、严重头部损伤、神经功能缺损、严重多发性创伤性损伤、手术后、心危、肾损伤、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍、与体液平衡紊乱相关的疾病。
正如在随附的实施例中所示，发现了对象的MR-proADM与体液和/或盐平衡之间的显著统计关系。所述体液和/或盐平衡指示了对象和/或患者的细胞外容量。正如在随附的实施例中证实的，在几种临床形势的患者中发现了这种强烈关系，例如具有严重脑外伤(SBT)、动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)和手术后腹膜炎伴有休克(P)的患者(例如实施例1)。因此，在某些情况下，本发明涉及一种用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中所述对象具有脑或头部损伤、多发性创伤性损伤或动脉瘤，或者是手术后。在其他情况下，本发明涉及一种用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中所述对象具有严重脑外伤(SBT)、动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)和手术后腹膜炎伴有休克(P)。在其他情况下，本发明涉及一种用于对象中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中所述对象具有动脉瘤后破裂或严重头部损伤。在某些情况下，所述对象没有神经功能缺损。在某些情况下，所述对象具有严重多发性创伤性损伤或者是手术后。
本文中提供的方法可用于对象或患者的体液管理。当在本文中使用时，术语“体液管理”意味着对象或患者的体液状态的监测和控制和例如通过静脉内液体给药来给药液体。因此，在某些情况下，本发明涉及一种用于对象的体液管理的方法，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的所述细胞外容量状态。在某些情况下，本发明涉及一种用于对象的体液管理的方法，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上，通过本文中提供的方法确定所述对象的细胞外容量状态。
在某些情况下，本发明涉及将本文中提供的方法用于对象的体液管理，其中在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上和/或其中在所述对象的体液和/或盐平衡的基础上，控制对象的病症或医学病状的疗法。
在某些情况下，本发明涉及使用本文中提供的方法预测对象的死亡风险和患者结果，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的细胞外容量状态。在某些情况下，本发明涉及一种用作医师和临床医生的预警系统以立即采取适合的疗法行动的方法，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的所述细胞外容量状态。
在某些情况下，本发明涉及使用本文中提供的方法预测对象的器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍的功能降低或风险，其中通过本文中提供的方法确定所述对象的所述细胞外容量状态。
在某些情况下，本发明涉及将本文中提供的方法用于患有病症或医学病状的对象的治疗，所述病症或医学病状选自水过载、水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、严重头部损伤、神经功能缺损、严重多发性创伤性损伤、手术后、心危、肾损伤、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍、与体液平衡紊乱相关的疾病。术语“治疗”、“疗法”等在本文中用于一般地指获得所需的药理和/或生理效果。所述效果就完全或部分阻止疾病/医学病状/病症或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病/医学病状/病症和/或归因于所述疾病/医学病状/病症的不利效应而言可以是治疗性的。当在本文中使用时，术语“治疗”覆盖对象中疾病/医学病状/病症的任何治疗，并包括：(a)在可能易受所述疾病/医学病状/病症影响的对象中阻止和/或减轻所述疾病/医学病状/病症；(b)抑制所述疾病/医学病状/病症，即停止其发展；或(c)消除所述疾病/医学病状/病症，即引起所述疾病/医学病状/病症消退。例如，本文中提供的方法可用于控制复苏患者的疗法/治疗。因此，例如，本文中提供的方法可用于控制对象的体液管理。本文中提供的方法也可用于控制静脉内液体给药以便平衡对象中的体液平衡和/或盐平衡以避免与死亡率提高相关的正体液平衡(Acheampong等，2015)。在某些情况下，本文中提供的方法也可用于评估和控制对象的体液管理，以避免体液以病理量向间质空间迁移和/或过度容量扩充。被认为是危急的过度容量扩充是例如在1天内、2天内、3天内、4天内、5天内和/或优选地在7天内超过4L。
在本发明的某些情况下，本文中提供的方法包括：
(a1)将所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与对应于至少一个参比对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平的参比数据进行比较；或
(a2)将所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平与对应于从前期分析获得的所述同一对象的所述proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平的数据进行比较；
(b)在所述比较步骤(a)的基础上鉴定所述对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态，其中所述对象的体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态被用于预测对象的死亡风险和患者结果，和/或被用于所述对象的体液管理的评估和控制。
在对象和/或患者中病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的情形中，如果proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少0.5nmol/L例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L或至少1nmol/L，并且所述对象具有至少4.0L的体液平衡增加(通过住院治疗增加4L水)，则所述对象具有被认为是危急的正体液平衡(升高的体液平衡，即水含量的增加)。换句话说，在危急对象中，所述正体液平衡为至少4L，即在具有危急健康状况的对象中水的增加为至少4L。
在优选情况下，所述方法包括确定样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少0.5nmol/L，例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L或至少1nmol/L，其中所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平表明所述对象具有正体液平衡，其中所述正体液平衡为至少4L，并且其中所述正体液平衡表明所述对象具有危急健康状况。换句话说，所述正体液平衡表明所述对象具有危急细胞外容量状态。
在某些情况下，如果proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少0.5nmol/L例如至少0.5nmol/L、至少0.75nmol/L或至少1nmol/L，并且所述对象具有至少36g的盐平衡增加(增加36g钠或盐)，则所述对象具有被认为是危急的正盐平衡。在最优选的情况下，钠的增加为至少36.0g，并且其中所述变化表明所述对象具有被认为是危急的正体液平衡和/或盐平衡。换句话说，所述正盐平衡和/或体液平衡表明所述对象具有被认为是危急的细胞外容量状态。换句话说，在危急对象中，所述正盐平衡(盐平衡增加，即盐量的增加)为至少36g，即在危急对象中盐的增加为至少36g。
在其他情况下，所述方法包括确定样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少1nmol/L，其中所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平表明所述对象具有正盐平衡，其中所述正盐平衡为至少36g，并且其中所述正盐平衡表明所述对象具有危急健康状况。
在本文中理解，其他标志物和/或参数，即除了proADM或其片段、优选为MR-proADM之外，改进了所述体液和/或盐平衡的预测。因此，在某些情况下，所述方法包括确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平、所述对象的体重指数、所述对象的体重、所述对象的年龄、所述对象的性别、所述样品中血红蛋白的水平和所述样品中血清总蛋白的水平，其中在所述标志物和所述参数的基础上确定体液平衡和/或盐平衡，其中至少36g的盐平衡和/或4L的体液平衡表明所述对象具有危急健康状况。在优选情况下，至少36g的盐平衡和4L的体液平衡表明所述对象具有危急健康状况。
当在本文中使用时，“危急状态”、“危急健康状态”、“危重病患者”或“危急对象”意味着所述对象或患者处于危及生命的形势下，因为所述细胞外容量状态被认为是危急的。正如上面描述的，具有正体液平衡和/或盐平衡的对象具有升高的死亡率。例如，如果对象具有例如由过量静脉内输液引起的体液或盐的过载，则他可以被认为具有危急健康状态。因此，危急对象具有危急正体液平衡(例如至少4L)、危急正盐平衡(例如至少36g)和/或危急血球容量状态(低于20ml/kg)。在某些情况下，如果对象具有低的血球容量状态，例如低于约20ml/kg或优选地低于约15ml/kg，则他可以被认为具有危急健康状态。在某些情况下，危急血球容量状态是低于约15ml/kg的血球容量。
本文中确定的标志物和/或参数的水平是对于医师而言立即采取适当行动的警报信号。当在本文中使用时，“危急细胞外容量状态”是指升高的或高的细胞外容量。在本发明的优选情况下，所述升高的细胞外容量为至少3L、优选地至少4L，其中所述升高的细胞外容量鉴定了具有危急健康状态的对象。在本文中设想了提高对象的死亡率的体液的增加或盐的增加，也依赖于对象的特征例如体重、年龄或性别等。例如，在体重高的男性对象中确定的4L的正体液平衡与小孩中的正体液平衡相比具有不同的影响。因此，在本文中设想了指示危急对象的体液增加和/或盐增加，即分别为4L或36g，依赖于对象的特征并且取决于对象的特征可以分别高于或低于4L或36g。
在随附的实施例中记录了在联合预测物、即将体液平衡和盐平衡合并，与危重病患者的确定之间存在强烈的统计学关系。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法确定危重病患者，其中水的增加为至少4L并且盐的增加为至少36g。因此，在优选情况下，所述方法包括确定样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中所述对象的proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平为至少1nmol/L，其中所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平表明所述对象具有正盐平衡和正体液平衡，其中所述正盐平衡为至少36g并且所述正体液平衡为至少4L，并且其中所述正盐平衡和所述正体液平衡表明所述对象具有危急细胞外容量状态。
随附的实施例证实了在序贯性器官衰竭评分(SOFA评分)与盐平衡和/或体液平衡之间存在强烈的关系；参见实施例1和3。因此，在优选情况下，在体液平衡和/或盐平衡的基础上确定序贯性器官衰竭评估评分(SOFA评分)。在其他优选情况下，在体液平衡和/或盐平衡的基础上确定序贯性器官衰竭评估评分(SOFA评分)，其中所述体液平衡和/或盐平衡在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定。因此，本文中提供的方法确定所述样品中proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平，其中在所述proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定所述SOFA评分。
在某些情况下，高于14的SOFA评分指示了非常严重的健康状态，表明所述对象的危急健康状态。0至6之间的SOFA评分指示不太严重的健康状态，7至14的SOFA评分指示严重的健康状态。在某些情况下，proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平升高指示所述对象的SOFA评分，其中高于14的SOFA评分表明所述对象具有危急健康状态。
在随附的实施例中显示，包含其他参数例如年龄、BMI和性别提高了确定SOFA评分的预测力；参见图5。因此，在某些情况下，本文中提供的方法还包括确定由年龄、体重指数和性别构成的至少一个参数。
在本文中设想了所述序贯性器官衰竭评估评分(SOFA评分)为至少15，并且其中所述评分指示所述对象具有被认为是危急的正体液平衡和/或盐平衡。
当在本文中使用时，“序贯性器官衰竭评估评分”或“SOFA评分”是一种用于在重症监护室(ICU)停留期间追踪患者状态的评分。SOFA评分是确定个体的器官功能或衰竭速率的程度的评分系统。所述评分是基于6个不同评分，每个评分各自对应于呼吸、心血管、肝、凝血、肾和神经系统。平均值和最高SOFA评分两者都是结果的预测物。在ICU中的前24至48小时期间SOFA评分的提高，预测至少50％直至95％的死亡率。低于9的评分给出33％的预测死亡率，而高于14则可能接近或高于95％。下面的评分表仅仅描述了给出点数的条件(Vincent JL等，“描述器官功能障碍/衰竭的SOFA(脓毒症相关器官衰竭评估)评分”(TheSOFA(Sepsis-related Organ Failure Assessment)score to describe organdysfunction/failure)，Intensive Care Med.1996；22:707-710)。在生理参数不匹配任一行的情况下，给出零点。在生理参数匹配超过一行的情况下，选取具有最大点数的行。它有助于医生、护士和患者的健康监护团队的其他成员估算由脓毒症引起的发病和死亡的风险。
表1和2：SOFA评分表-评分方案
器官 0 1 2 3 4
呼吸 20％ 27％ 32％ 46％ 64％
心血管 22％ 32％ 55％ 55％ 55％
凝血 35％ 35％ 35％ 64％ 64％
中枢神经系统 26％ 35％ 46％ 56％ 70％
肝 32％ 34％ 50％ 53％ 56％
肾 25％ 40％ 46％ 56％ 64％
在随附的实施例1和4中显示，所述体液平衡和盐平衡的组合可以高效地(AUC>0.92)预测对象是否面临危急状况，例如具有正体液平衡和/或正盐平衡。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法在对象的体液平衡和钠平衡的基础上鉴定具有危急健康状态的所述对象。
随附的实施例还证实，所述体液平衡与盐平衡的组合可以高效预测对象的水肿风险，即体液和盐平衡的组合检测可以鉴定具有发生水肿的风险的危重病患者。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法在所述体液平衡和钠平衡的基础上鉴定具有危急水肿风险的对象。因此，在本发明的某些情况下，本文中提供的方法被用于控制具有危急水肿风险的对象的疗法，其中所述水肿风险在体液平衡和钠平衡的基础上确定。在本发明的某些情况下，本文中提供的方法被用于控制具有危急水肿风险的对象的疗法，其中所述水肿风险在体液平衡和钠平衡的基础上鉴定，其中所述体液平衡和/或盐平衡在proADM或其片段、优选为MR-proADM的水平的基础上确定。
正如本文中在蛋白质或肽的情形中提到的，术语“片段”是指可以源自于较大蛋白质或肽的较小蛋白质或肽，其因此包含所述较大蛋白质或肽的部分序列。所述片段可以通过从所述较大蛋白质或肽缺失一个或多个氨基酸而从所述较大蛋白质或肽衍生出来。
当在本文中使用时，术语例如“标志物”、“替代物”、“预后标志物”、“因子”或“生物标志物”或“生物学标志物”可互换使用，并且是指可测量且可定量的生物学标志物(例如特定酶浓度或其片段，特定激素浓度或其片段，或生物物质或其片段的存在)，其充当健康和生理相关的评估例如疾病/病症/临床病状风险的指标。此外，生物标志物被定义为被客观测量和评估作为正常生理过程、病理过程或对治疗性干预的药理响应的指示物的特征。生物标志物可以在生物样品上测量(例如血液、血浆、尿液或组织试验)。
当在本文中使用时，参数是可以有助于定义特定系统的特征、特点或可测量的因子。参数对于健康和生理相关的评估例如疾病/病症/临床病状风险来说是重要要素。此外，参数被定义为被客观测量和评估作为正常生物学过程、病理过程或对治疗性干预的药理响应的指示物的特征。示例性的参数可以选自体重指数、体重、年龄、性别、IGS II、液体摄入、急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)、世界神经外科学会联盟(WFNS)评级、格拉斯哥昏迷量表(GCS)和序贯性器官衰竭评估评分(SOFA评分)。
出于本发明的目的，“对象”(或“患者”)可以是脊椎动物。在本发明的情形中，术语“对象”包括人类和动物、特别是哺乳动物和其他生物体两者。因此，本文中提供的方法适用于人类和动物对象两者。因此，所述对象可以是动物例如小鼠、大鼠、仓鼠、兔、豚鼠、白鼬、猫、狗、鸡、绵羊、牛类物种、马、骆驼或灵长动物。优选地，所述对象是哺乳动物。最优选地，所述对象是人类。在本发明的意义中，从细胞、组织、器官、生物体等收集的任何样品都可以是待诊断的患者的样品。正如在随附的实施例中所示，可以预测患有各种不同病症或疾病的对象的细胞外容量状态。因此，本文中提供的方法可用于任何对象，其是健康的对象或患有任何疾病或病症的对象。在优选情况下，所述对象患有疾病或病症，其中所述疾病或病症选自水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、头部损伤、神经功能缺损、多发性创伤性损伤、手术后、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍、与体液平衡紊乱相关的疾病。在本发明的更优选情况下，所述对象患有脑损伤、动脉瘤、头部损伤和/或多发性创伤性损伤，和/或其中所述对象是手术后的。在最优选情况下，所述对象患有严重脑外伤(SBT)、动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)、手术后腹膜炎伴有休克(P)和/或消化道腹膜炎手术后。
当在本文中使用时，术语“多发性创伤性损伤”、“多发性创伤”或“多发伤”在本发明的情形中涵盖了在身体的至少两个区域中具有两个或更多个严重损伤的病状，或在一个身体区域中具有多处损伤、即两个或更多个严重损伤的病状。多发伤可能伴有外伤性休克和/或出血性低血压并严重危及一种或多种生命机能。两个或更多个损伤中的至少一个损伤或所有损伤的总和危及具有多发伤的受伤对象的生命。外伤是由来自于外部来源的物理伤害引起的对生物体的损伤或损害。重型创伤是可能潜在地引起严重的长期后果如慢性疼痛的损伤。
当在本文中使用时，脑损伤是大脑的损伤，例如创伤性脑损伤。当外力创伤性伤害大脑时，发生脑损伤。头部损伤通常是指脑损伤，但是是更广义的范畴，因为它可以涉及对大脑之外的结构例如头皮和颅骨的损伤。动脉瘤(aneurysm或aneurism)是在血管壁中的局域性、充血的气球状凸起。动脉瘤可以发生在任何血管中，实例包括脑中的韦利斯氏环(circle of Willis)的动脉瘤、影响胸主动脉的主动脉瘤和腹部主动脉瘤。动脉瘤也可以发生在心脏本身中。
当在本文中使用时，手术后对象是经历手术的对象。更优选地，所述手术后对象是经历大手术的对象。大手术可以是在腹腔、盆腔、颅腔或胸腔的内含物中或其上的任何手术，或者在给定位置、患者状况、执行的难度水平或时间长度的情况下对生命或者器官或组织的功能构成危险的任何手术。大手术通常需要全身麻醉、不同长度的住院期(通常一周)，并且可以由二级保健医院中的董事会认证的外科医生或由三级保健医院中的外科专科医师进行。更优选地，手术后对象是消化道手术后的对象。更优选地，所述手术后对象是经历大手术并患有危及生命的疾病或病症的对象。这种疾病或病症可能由手术本身引起。最优选地，所述手术后对象是患有腹膜炎伴有休克的对象。
当在本文中使用时，对象的标志物例如proADM或其片段、优选为MR-proADM和/或参数的水平与细胞外容量状态例如细胞外容量、血液容量或病症/疾病/临床病状之间的统计学关系，利用本文中随附的实施例中示出的统计方法来评估。正如在随附的实施例中证实的，使用随机森林分析(Breiman，2001和2002；以及Boulesteix等，(2012))、重要性分析、正向选择、线性回归、留一法、“R2”或“r2”(决定系数)、AUC(曲线下面积)和存活分析。可以使用现有技术中可以获得的任何相应且适合的算法和软件包来计算所述参数/值之间的统计学关系。
当在本文中使用时，术语“包含”和“包括”或其语法变化形式被视为指定了所陈述的特点、整数、步骤或组分，但是不排除添加一个或多个另外的特点、整数、步骤、组分或其组。该术语涵盖了术语“由……构成”和“基本上由……构成”。
因此，术语“包含”/“包括”/“具有”意味着可以/可能存在任何其他组分(或同样地特点、整数、步骤等)。
术语“由……构成”意味着不存在其他组分(或同样地特点、整数、步骤等)。
术语“基本上由……构成”或其语法变化形式当在本文中使用时，被视为指定了所陈述的特点、整数、步骤或组分，但是不排除添加一个或多个另外的特点、整数、步骤、组分或其组，前提是所述另外的特点、整数、步骤、组分或其组不实质性改变所要求保护的组合物、装置或方法的基本和新颖特征。
因此，术语“基本上由……构成”意味着可以存在特定的其他组分(或同样地特点、整数、步骤等)，即不实质性影响所述组合物、装置或方法的本质特征的那些。换句话说，术语“基本上由……构成”(其在本文中可以与术语“实质上包含”互换使用)允许在所述组合物、装置和方法中，除了所述强制性组分(或同样地特点、整数、步骤等)之外还存在其他组分，只要所述装置或方法的基本特征不受其他组分的存在的实质性影响即可。
术语“方法”是指用于实现给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于化学、生物和生物物理技术领域的从业人员已知的或可以从已知的方式、手段、技术和程序容易地开发出的的那些方式、手段、技术和程序。
术语“约”优选是指所述指定数值的±10％，更优选是指所述指定数值的±5％，特别是指所指定的准确数值。
当在本文中使用时，术语“约”是指所述指定数值的±10％，尤其是指所述指定数值的±5％。不论何时使用术语“约”，也包括对所指定的准确数值的具体指称。如果术语“约”与以整数定量的参数例如给定核酸中的核苷酸数目相结合使用，则对应于所述指定数值的±10％或±5％的数目应该被四舍五入到最近的整数。例如，表述“约25个氨基酸”是指23至28个氨基酸的范围，特别是24至26个氨基酸的范围，并且优选地是指25个氨基酸的特定值。
除非另有陈述，否则重组基因技术的已确立的方法如Sambrook，Russell，《分子克隆实验指南》(Molecular Cloning,A Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory,N.Y.(2001)中所述来使用，所述文献通过引用以整体并入本文。
诊断和/或预后试验的灵敏度和特异性不仅依赖于所述试验的分析“质量”，它们也依赖于构成异常结果的定义。在实践中，受试者操作特征曲线(ROC曲线)通常通过将变量的值对其在“正常”(即不具有产前病症或病状的表观健康的个体)和“患病”群体中的相对频率进行作图来计算。对于任何特定标志物(如MR-proADM)来说，具有和不具有疾病/病状的对象的标志物水平的分布可能交叠。在这种条件下，试验不能以100％的准确度将正常与疾病绝对区分开，并且交叠的区域可能指示所述试验不能将正常与疾病区分开的地方。选择一个阈值，低于所述阈值时试验被认为是异常的并且高于所述阈值时试验被认为是正常的，或者低于或高于所述阈值时试验指示特定状况。所述ROC曲线下的面积是所述感知的测量允许正确鉴定状况的概率的度量。即使在试验结果不必定给出准确数字的情况下也可以使用ROC曲线。只要人们可以对结果排序，人们就可以产生ROC曲线。例如，对“疾病”样品的试验结果可能按照程度排序(例如1＝低，2＝正常，3＝高)。可以将这种排序关联到“正常”群体中的结果，并产生ROC曲线。这些方法在本领域中是公知的；参见例如Hanley等，1982.Radiology 143:29-36。优选地，阈值被选择成提供大于约0.5、更优选地大于约0.7、更加优选地大于约0.8、甚至更优选地大于约0.85、最优选地大于约0.9的ROC曲线面积。在这种情形中，术语“约”是指给定测量值的+/-5％。
ROC曲线的水平轴表示(1-特异性)，其随着假阳性率而提高。所述曲线的竖直轴表示灵敏度，其随着真阳性率而提高。因此，对于所选的特定截止值而言，可以确定(1-特异性)的值，并且可以获得相应的灵敏度。ROC曲线下的面积是测量到的标志物水平允许正确鉴定疾病或病状的概率的度量。因此，所述ROC曲线下面积可用于确定所述试验的有效性。
在其他实施方式中，阳性似然比、阴性似然比、机会比或危险比被用作试验预测风险或诊断病症或病状(“患病组”)的能力的度量。在阳性似然比的情况下，1的值表明在“患病”和“对照”组两者中的对象之间阳性结果的可能性相等；大于1的值表明在患病组中阳性结果的可能性更大；小于1的值表明在对照组中阳性结果的可能性更大。在阴性似然比的情况下，1的值表明在“患病”和“对照”组两者中的对象之间阴性结果的可能性相等；大于1的值表明在试验组中阴性结果的可能性更大；小于1的值表明在对照组中阴性结果的可能性更大。
在机会比的情况下，1的值表明在“患病”和“对照”组两者中的对象之间阳性结果的可能性相等；大于1的值表明在患病组中阳性结果的可能性更大；小于1的值表明在对照组中阳性结果的可能性更大。
在危险比的情况下，1的值表明在“患病”和“对照”组两者中终点(例如死亡)的相对风险相等；大于1的值表明在患病组中所述风险更大；小于1的值表明在对照组中所述风险更大。
专业技术人员将会理解，将诊断或预后指示物与未来临床结果的诊断或预后风险相关联，是一种统计学分析。例如，低于X的标志物水平可能传递下述信号，即患者与水平大于或等于X的患者相比更可能遭受不利结果，正如通过统计显著性水平所确定的。另外，标志物浓度与基线水平相比的变化可能反映患者预后，并且标志物水平的变化程度可能与不利事件的严重性相关。统计学显著性通常通过比较两个或更多个群体并确定置信区间和/或p值来确定；参见例如Dowdy和Wearden，《用于研究的统计学》(Statistics forResearch)，John Wiley&Sons，New York，1983。本发明的优选置信区间为90％、95％、97.5％、98％、99％、99.5％、99.9％和99.99％，而优选的p值为0.1、0.05、0.025、0.02、0.01、0.005、0.001和0.0001。
通过参考下面的非限制性附图和实施例，对本发明进行进一步描述。
附图说明
图1.身体水的分布，其中所述身体水可以被分为细胞外容量(椭圆中的部分)和细胞内容量(对应于约57％)。细胞外容量自身可以被进一步分成血液容量即血球容量(对应于约6％)和血浆(对应于约6％)和间质容量(对应于约27％)。
图2.MR-proADM(对数标度)与体液平衡(ΔH2O)(A)和盐平衡(ΔNa)(B)的Deming回归。
图3.患有动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)、严重脑外伤(SBT)的重症监护室患者或手术后腹膜炎伴有休克(P)的患者在第2天(A)、第5天(B)和第7天(C)时以nmol/L为单位的MR-proADM浓度的盒须图。显示了第2天、第5天和第7天以nmol/L为单位的MR-proADM的平均浓度(D)。
图4.用于预测患有动脉瘤性蛛网膜下出血、没有头部外伤的严重创伤、严重脑外伤或手术后腹膜炎伴有休克的重症监护室患者中的体液平衡(ΔH2O)(A)和盐平衡(ΔNa)(B)的MR-proADM的ROC图。
图5.预测的SOFA(留一法)。通过增加的SOFA将患者分组。实心黑线给出了真实的SOFA值。x-轴上是患者id(患者通过增加的SOFA值开始分组)，预测的SOFA在y-轴上。所述实心黑线给出了所有患者的(增加的)真实SOFA值。蓝色圆圈给出了预测的SOFA。
图6.为201位患者预测的ΔH2O、ΔNa和P-危急值。126位“正常”患者(没有水肿的患者)用空心圆圈表示，75位“危急”患者(具有水肿的患者)用实心圆圈表示。
图7.血球容量参比模型的随机森林变量重要性。
序列
SEQ ID NO：1：pre-pro-ADM的氨基酸序列：
SEQ ID NO：2：MR-pro-ADM(pre-pro-ADM的AS 45-92)的氨基酸序列：
ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMK GASRSPEDSS PDAARIRV
所述实施例通过检测MR-proADM来进行。然而，正如上文中概述的，本发明也可以通过检测proADM或其另一种肽片段来进行。
下面的非限制性实施例说明了本发明。
实施例1：危重患者中的正体液平衡、血液容量和MR pro-ADM方法
患者和程序
这项前瞻性7天观察性研究从2012年3月至2014年9月，在法国Bicêtre大学医院的麻醉学和重症监护科的30张床位中进行。Bicêtre医院的学术评论委员会在2011年12月批准了这项研究，所有患者或他们的亲属签署了知情同意书。
研究了4种类型的患者：具有严重脑外伤(SBT)、动脉瘤性蛛网膜下出血(SAH)、没有头部外伤的严重创伤(PT)和手术后腹膜炎伴有休克(P)的患者。患者如果在D2(D2)需要永久性机械通气，则被包含。SBT被定义为格拉斯哥昏迷评分小于9(GCS<9)的脑外伤。SAH在WFNS量表中的评分为4或5时被包含(Brisman等，2006)。PT在ISS评分为25或更高时被包含。P在腹部手术后具有休克征兆并具有血液动力学并发症(低血压，低心输出量)或乳酸盐>4mmol/L并且在进入重症监护室时开出儿茶酚胺处方时被包含。
排除标准是年龄<18岁、妊娠和慢性心机能不全(NYHA II或IV)。
收集一般和人口统计数据：年龄，性别，用于BMI的体重和身高，IGS II，ISS，入院日期，离开重症监护之前的格拉斯哥结果评分(GOS)。序贯性器官衰竭评估(SOFA)评分在到达时(D0)、D2、D5和D7测量(Vincent等，1996)。
每天，注意每位患者的平均动脉压(MAP)和如果使用的话去甲肾上腺素的剂量。测量生物学参数：血红蛋白浓度[Hb]和血浆蛋白，血浆和尿液的Na+、K+、Cl-、尿素、肌酸酐的浓度和摩尔渗透压浓度。在早晨从总共24小时的利尿获得的生物学尿液结果被用于计算Na+、K+、尿素的前一天的尿液损失之和和肌酸酐的清除。在第2天(D2)、第5天(D5)和第7天(D7)测量体重和体温。
回波描记术迹象、在通气患者中流体响应性的迹象和心脏充盈的重复测量的组合，指导每日的液体给药(Feissel等，2004；Feissel等，2001；Monnet等，2013；以及Gore等，2005)。此外，还通过多个变量包括心率、动脉压、血液乳酸盐水平和心输出量来确定提供的静脉内流体的量。
细胞外容量的评估
每天，计算盐和体液平衡以估算细胞外空间的变化。每天早晨，对盐和水进行前一天的完整输入-输出评估。记录准确的盐和水贡献。测量所有损失：利尿，回肠造口术和如果需要的话心室引流。钠(Na+)的损失从液体测量并从盐贡献扣除。也计算输入的水(肠内营养和晶体液或胶体输液的当天总和)与损失的水之差。不敏感损失作为体温的函数来估算。每天计算Na+(ΔNa+)和水(ΔH2O)的获得或损失并加到前一天的结果中，作为累积体液平衡。肌酸酐的清除也每天计算。每位患者的所有计算由一位医生进行并由第二位医生验证(BV、PEL和HF)。
血液容量测量
在D2和D7测量带有用铬51(Cr51)标记的红细胞的总血容量。出于实践原因，D2不总是精确地是患者入院后的第二天，而是从第1天至第3天的某个时间。第7天是第6天至第10天的某个时间。
在实验室中，将10mL患者自己的血液用铬51(Cr51)放射性标记，并通过仔细地除去所有血浆放射活性小心地选择放射活性标记的红细胞。然后，将已知量的放射活性红细胞重新注入到总血液循环中，并在10和30分钟时在动脉中进行两次取样。所述两个样品的放射活性的测量允许推导出以mL为单位或者如果使用患者的体重的话以mL/Kg为单位的总血容量(TBV)(Gore等，2005)。然后，血细胞比容数和测量到的总血容量定义了红细胞容量(RBCV)(mL或mL/Kg)和以mL或mL/Kg为单位的血浆容量(PV)。正常的值(±20％)对于TBV来说是72±14mL/Kg，对于RBCV来说是32±6mL/Kg，对于PV来说是40±8mL/Kg(Gore等，2005)。在D7时，使用注射到患者的已知的少量的用碘125(I125)放射性标记的白蛋白直接测量血浆容量(PVI125)，并在10、30分钟和2小时收集样品(Fairbanks等，1996)。使用I125测量的PV的正常的值为45±10mL/Kg(Gore等，2005)。通常，使用I125-白蛋白获得的血浆容量略微大于从使用Cr51–红细胞的测量获得的血浆容量，这是因为白蛋白比红细胞的分布容量更大(Gore等，2005)。
当在D2和D7进行血液容量测量时，使用经胸回波描记测量，用两种指示物来评估应激容量：下腔静脉的变动(ΔIVC)和E/E’(Vincent等，1996；以及Feissel等，2004)。
生物标志物分析
对于每位患者来说，在D2、D5和D7研究血浆生物标志物。D2和D7是血液容量测量日。D5样品总是准确地在D7之前2天获取。作为生物标志物，测量肾上腺髓质素原(MR pro-ADM)、Pro-ANP、肾素、血管紧张肽II、醛甾酮、皮质醇、肾上腺素、CT-精氨酸血管升压素原(和肽素)和内皮素原，它们潜在地干扰细胞外或血浆容量，并降低(MR pro-ADM和Pro-ANP)或提高动脉压。测量红细胞生成素(EPO)随RBCV变化的能力。使用的标准和技术呈现在表3中。
表3.用于所研究的所有血浆生物标志物的方法、单位以及下限和上限正常值。
参数 方法 单位 灵敏度 下限 上限
Pro-ADM Kryptor+ nmol/l 0,25 0,39
Pro-ANP Kryptor+ pmol/l 4,5 85,2
肾素 免疫发光 pg/ml 1 3 16
血管紧张肽II 层析+放射免疫 pmol/l 2 19 38
醛甾酮 放射免疫 pg/ml 10 42 201
皮质醇 免疫发光 ng/dl 1 9 22
肾上腺素 HPLC pg/ml 20 80
去甲肾上腺素 HPLC pg/ml 20 450
和肽素 Kryptor+ pmol/l 0,5 1,1 16,4
内皮素原 Kryptor+ pmol/l 1 44,3±10,6
EPO ELISA mUI/ml 1,2 6,4 63,8
统计分析
效力分析：使用已发表的在相似患者中脑利钠肽(BNP)和红细胞生成素(EPO)浓度的值的范围，计算所需的患者数目(Dorhout Mees等，2011)。考虑80％的效力和组之间50％的期望差。
数据分布的正态性使用分位比较(qq)图和Shapiro检验来检查。当数据是对数正态分布时，在转换的数据上进行统计比较。数据被报告为平均值±标准偏差(SD)或中值(25th至75th百分位数)或计数和频率(百分数)。
取决于数据的正态性，使用线性或Spearman回归来研究相关性。此外，由于大多数数据被测量时具有误差，因此使用带有等方差的Deming回归来计算回归曲线的斜率。
组内和组间比较使用ANOVA(重复测量的阶乘)或非参数(Kruskal-Wallis或Friedman)检验，随后是Tukey或Mann-Whitney/Wilcoxon检验，后者通过Bonferroni校正来校正用于多重比较。
构建了受试者操作曲线(ROC)以计算所述生物标志物预测体液和钠平衡的性能。最佳灵敏度/特异性截止值使用非加权Youden指数来计算。
最后，将使用带有和不带15％的“灰区”排除的四象限图的协调分析用于比较标志物以及体液和钠平衡的变动(Perrino等，1998)。
分析使用R(用于统计计算的R基础(The R Foundation for StatisticalComputing),Vienna University of Technology,Vienna Austria，http://www.r-project.org/2015年6月20日访问)来进行。统计学显著性被设定在P<0.05。
发现了在体液平衡和血液容量与生物标志物之间的独立联系。使用生物标志物和其他显著参数建立数学预测工具，以便使用“合理的”协变量选择来确定危重患者中临床上可利用的体液状态预测物。SOFA评分、作为多水平有序变量的患者状况的严重性评分，被当作另外的响应变量。
对于体液平衡(ΔNa+和ΔH2O)来说，建立联合预测物以鉴定具有ΔNa+>36g和ΔH2O>4L两者的危重患者。为此目的，我们首先联合考虑(ΔNa+和ΔH2O)的留一法残差，发现其分布是具有协方差矩阵的高斯型(居中)。因此，可以为每对(ΔNa+和ΔH2O)的预测值获得危急概率(P危急)，其使用mvtnorm软件包(Genz等，2009；以及Genz等，2014)容易地计算。
结果
在进入ICU后前7天期间，对分布在SBT(n＝21)、HSA(n＝20)、PT(n＝20)和P(n＝6)之间的67位患者进行研究。在每种临床形势下研究的患者的一般人口统计数据和数目示出在表4中。在D0、D2、D5和D7的SOFA评分呈现在表5中。
表4一般和人口统计数据。除了格拉斯哥结果量表(GOS)被呈现为中值之外，其他数据被呈现为平均值±标准偏差(M±SD)。
总计(n＝67) SBT(n＝21) SAH(n＝20) PT(n＝20) P(n＝6)
年龄(岁) 46±19 38±16 53±14 39±18 69±16
体重(kg) 75±18 73±14 53±14 84±22 71±9
身高(cm) 172±10 178±9 169±9 173±11 161±8
IGS II 43±13 49±9 42±12 37±11 54±10
性别W/M 24/43 18/3 11/9 6/14 4/2
住院时长(天) 27±22 34±3 27±16 22±13 21±6
GOS 4(2) 4(1) 4(1) 5(1) NP
表5.每个临床组在D0、D2、D5和D7的SOFA评分。SBT：严重脑外伤，SAH：蛛网膜下出血，PT：多发伤，P：腹膜炎
对所有患者进行研究。对于每种临床形势来说，细胞外容量的增加被报告为D2和D7时盐的变化(ΔNa+)和水的变化(ΔH2O)。几乎所有患者都在D2(对于ΔNa+来说64/67或对于ΔH2O来说63/67)并且大多数在D7(对于ΔNa+来说42/67或对于ΔH2O来说41/67)显示出正体液平衡，即细胞外容量的增加。在所有疾病中在D2和D7观察到含水苏打的正平衡，与SHT和SAH相比，PT和P的盐增加更高。例如在D2，PT和P显示出70±32g和77±28g的盐的累积增加，而STB和SAH显示出43±24g和28±24g。ΔNa+与ΔH2O相关，显示出留存的水紧密结合到留存的盐(r2＝0.67；p<.0001)。作为细胞外空间的已知指示物，蛋白质的血浆浓度和体重变动与ΔNa+和ΔH2O相关，但那些关系微弱(对于血浆蛋白和ΔNa+来说r2＝0.44，对于血浆蛋白和ΔH2O来说r2＝0.35，并且对于体重和ΔH2O来说r2＝0.33)。作为血浆蛋白，[Hb]与ΔNa+(r2＝0.15)和ΔH20(r2＝0.24)具有微弱的关系。
在D2在62位患者中并且在D7在63位患者中研究了使用Cr51测量的容量(总血容量(TBV)、红细胞容量(RBCV)和血浆容量(PV))。在大多数患者中观察到TBV的减小。在D2仅仅21位并且在D7仅仅25位患者在正常的20％范围内。在D2时46位患者(74％)并且在D7时42位患者(66％)存在低血容量，其中TBV低于正常值的20％。除了D2时的1位和D7时的2位患者之外，在所有患者中发现了低的RBCV。这些具有正常RBCV的患者都被输液。即使在非出血性状况(SBT或SAH)下，RBCV的减小也可以是显著的，其中在D2时在25位患者(40％)中并且在D7时在21位患者(33％)中缺少正常RBCV的50％或更少。在TBV或RBCV与体液平衡即ΔNa或ΔH2O之间不存在统计关系。
PV的分布在正常范围内。在PV与体液平衡即ΔNa或ΔH2O之间不存在关系，并且我们还发现在D2或D7之间，在PV变化与ΔH2O变化之间没有关系。PV的变化与蛋白质的血浆浓度变化无关。血红蛋白浓度与RBCV微弱相关(r2＝0.33)并且与VP无关(r2＝0.026)。
在D7，通过I125测量了58位患者的PV(PVI125)。在两种PV(PV Cr51与PVI125)之间存在统计学显著的关系。Deming回归发现斜率为0.852(CI 95％0.610-1.08)并且截距为780mL(CI 95％103-1485mL)(置信区间在本文中被称为CI)，有利于PVI125，并且r2＝0.752。
在血液容量与下腔静脉的变动(ΔIVC)或E/E’之间没有发现关系。
生物标志物
所有生物标志物的详细动力学提供在附录I中。它们中的大多数在D2升高，随后在D5和D7统计学上降低(和肽素、血管紧张肽II、肾素)；有些仅仅在D7统计学上降低(MR pro-ADM、EPO)。其他生物标志物在所考虑的3天期间不变(皮质醇、醛甾酮、Pro-ANP、内皮素原)。由于在患者中作为治疗使用的外部输注造成的偏差，血浆去甲肾上腺素不切合本研究。
在所试验的所有生物标志物中，我们发现只有两种生物标志物即肾素和MR pro-ADM与ΔNa+和/或ΔH2O具有统计关系(表6)。MRpro-ADM与ΔNa+和/或ΔH2O之间的关系似乎非常强，并且完全不依赖于临床形势的类型。
表6.生物标志物的血浆浓度与体液平衡测量之间的关系的概率(p)，正如通过为混合目的而建模所给出的。
生物标志物 ΔH2O ΔNa+
肾素 0.048 0.0001
MR-proADM <0.0001 <0.0001
然后，将对于ΔH2O来说4L和/或对于ΔNa+来说36g(4升的9‰给出36g盐)作为用于正体液平衡的阈值(Bjerregaard等，2005)。ROC曲线允许我们使用非均衡Youden指数找出用于MR-proADM的表明灵敏度/特异性的最佳折中的最佳阈值(图4)。
由于发现MR-proADM可以预测盐平衡和体液平衡(ΔNa+和ΔH2O)的可接受的概率，因此使用MR-proADM和其他简单的协变量建立了用于ΔNa+和/或ΔH2O的预测评分。对于ΔNa+和/或ΔH2O来说，从较强的参数到最弱的参数，用于预测的最佳模型需要MR-proADM、D0时的BMI、D0时的D0、年龄、性别、[Hb]、IGS和D0时的流体摄入。从所述模型移除MR-proADM降低了预测力。两个模型可以独立地解释大约70％的方差并具有良好辨别力，AUC对于ΔNa+来说为88％，对于ΔH2O来说为92％。此外，在这两个模型中不存在IGS和D0时的流体摄入具有非常有限的后果，仅仅损失2-3％的r2并且对AUC没有影响。
如果如前文在统计学段落中所述建立联合预测物以确定具有ΔNa+>36g和ΔH2O>4L两者的危重患者，则性能被显著提高。这种联合预测物的辨别力高，AUC＝0.9987(95％CI[0.9964-1])。例如，在P-危急值上使用0.4的阈值，获得0.988的灵敏度和0.949的特异性。此外，这种体液平衡预测物与患者的SOFA评分有显著关系。
此外，测试了生物标志物并测量血液容量。有趣的是，在所有生物标志物中，与体液平衡的情况相同，同样的两种生物标志物即肾素和MR pro-ADM与血液容量具有统计关系。然而，如果在生物标志物值的对数上通过用于混合目的的回归对血液容量再次进行分析，则所述标志物的预测特性变弱，ROC曲线具有低的AUC(对于肾素来说：AUC TBV＝0.5798并且AUC PV＝0.6159，对于MR pro-ADM来说：AUC TBV＝0.5967并且AUC PV＝0.6277)。此外，并且尽管概率高(p＝0.0002)，但不能为RBCV建立ROC曲线并测量AUC，这是因为所述值过于非特征性并且低。在那些形势下，没有试验阈值和预测模型。
讨论
本研究显示，已知作为内皮通透性的指示物(Christ-Crain等，2005；和Koyama等，2013)的简单生物标志物MR-proADM，是危重患者入院后第一周期间细胞外容量中的盐和水增加的良好替代物。此外，在D2和D7的盐平衡或体液平衡的增加与直接血液容量测量值之间没有发现关系。
现在已清楚，过量的盐或体液平衡可以被当作危重患者中发病和死亡的风险因子(Boyd等，2011；Kelm等，2015；Acheampong等，2015；和Malarian等，2014)。这种情况是频繁出现的，这是因为使心输出量有效率的目标建议进行体液扩充以达到疗效(Cecconi等，2011；和Vincent等，2011)。通常在侵袭后的第一天中的高炎性状况下(在脓毒症、外伤或脑动脉瘤中)，许多患者由于过度的毛细血管通透性而处于在细胞外容量中积累盐和水的高风险中，体液增加，尿减少，并且难以维持血浆容量中的盐。患者对流体复苏的响应不同。因此，需要清晰且快速的替代标志物以更好地将患者分层并鉴定在间质中具有正盐平衡的患者以便进行个性化治疗：选择灌注更多液体还是用儿茶酚胺或利尿剂调整。这种标志物还应该独立于重症监护室入院资格的类型。
倘若MR-proADM看起来是盐和体液平衡的特别好的指示物，它不能仅仅是毛细血管通透性的指示物。Na+平衡不仅仅受肾脏控制(Titze等，2014)。Na+的间质清除似乎由免疫细胞介导，特别是巨噬细胞通过间质淋巴毛细管系统控制Na+消除(Titze等，2014)。在炎症状态下，巨噬细胞对稳态免疫细胞控制的丧失，这涉及它们清除Na+的能力的衰竭，可以阐明间质中Na+的积累(Jantsch等，2014)。有趣的是，肾上腺髓质素肽已知在淋巴通道组织中特别是在器官发生中发挥作用(Kahn等，2008)。
间质中的总量过量不仅仅是由炎症和Na+清除的减少造成的。它可能由于下述生理原因而恶化，例如由高的平均动脉压(MAP)或高的输注率激起的高静水压(Bark等，2013)或由心输出量过大引起的血液拉伸力升高。高的MR-proADM(超过1nmol/l)表明钠过载，并且例如超过36g Na+和4L水的增加可以作为医师立即采取适当行动的警报信号。
在许多重症监护室中，护士通过每日测量体重或每日计算液体的输入和输出，系统性地测量体液平衡。这些方法并不精确。例如，在我们的观察研究中，在体重与体液平衡之间发现弱的关系(r2＝0.33)。细胞外容量的常用标志物如血浆蛋白或[Hb]与盐和体液平衡具有弱的关系(r2＝0.35，和r2＝0.24)。在本研究中，盐和体液平衡的测量需要许多生物样品，并且总是由两位医生进行和控制。在每天的实践中，护士不能投入收集所需信息所必需的时间。MR-proADM似乎提供了盐平衡和细胞外状况的更加准确的度量，并且也可以用作紧急情况后的紧急替代物。在某些紧急形势下，在休克后的前几天，及时可能是至关重要的。在现实生活中，过载的存在通常在器官损伤(急性肺损伤、腹腔间隔室综合征、肾机能不全)后才被太晚发现。SOFA评分与盐和体液平衡预测模型之间的关系加强了MR-proADM可以作为令人感兴趣的床边工具这一见解。
没有发现用于估算总血容量(TBV)、血浆容量(PV)或红细胞容量(RBCV)的标志物。发现肾素和MR-proADM是显著的，但不足以建立有价值的预测模型。甚至ΔNa+或ΔH2O也不是血液容量的预测物。
本研究的另一个有趣结果是证实了在PV与体液平衡之间不存在关系。这是特别出人意料的，因为容量扩充是流体灌注的主要原因。然而，PV是在D2和D7时大多数患者处于正常范围内的唯一容量。在体液平衡与PV之间不存在相关性加强了Na和水被捕获在间质容量中的假设。在日常实践中，更好地控制该血浆容量将是有用的，但是我们没有检测到与生物标志物或蛋白质或[Hb]或与使用回波描记术测量的应激容量相关的征兆的联系。为了研究这一问题，必须进行使用生物标志物或其他要素的组合的其他研究。
在D7时在PV的两种测量方式(Cr51和I125)之间发现的相关性强化了在本文中鉴定到的结果。白蛋白可以具有比红细胞更大的分布容量，特别是如果在病理形势下毛细血管通透性增加的时候。在D7，所述差异相当强(780mL)，表明毛细血管通透性未被完全修复。也在D2时讨论这种比较可以是有趣的。不幸的是，由于与用于测量生物标志物的某些方法相互作用，在D2时不能进行使用I125的测量(表1)。
低RBCV、贫血相当常见，并且解释了低TBV的结果。RBCV难以评估，并且需要CR51方法和放射活性装置管理。它的评估仅仅在罕见病例例如Waquez病中进行。在日常实践中，[Hb]阈值试验(<7-8g/dl)被用于确定对输血的需求。由于[Hb]是PV与RBCV之间的比率，因此[Hb]是用于RBCV的不良替代物(Takanishi等，2008)。患者可能具有11g/dL的[Hb]和仅仅50％的正常RBCV。缺少50％的正常红细胞可以对患者健康具有重要影响。一些研究表明，RBC的总量可以是认知康复的预后标志物(Naidech等，2007)。然而，RBC输注不仅仅是损失细胞的替换。在目前的研究中，EPO不依赖于RBCV水平，表明EPO不是RBCV的良好替代物，并且EPO刺激不仅由RBC的数量而且由RBC的质量解释。
本研究中描述的临床形势反应了我们机构的日常实践。严重外伤、脑损伤和神经系统状况常见，脓毒性休克比较少见。然而，作为协变量的组没有介入体液平衡或血液容量的预测，表明容量病症相当独立于所述疾病。为了确认目前的结果，需要其他研究。
休克后的过载是存活的重要且重视不足的因素。正盐平衡实际上被记录为重要的预后标志物。血液容量不自动与容量扩充有关。MR-proADM是在危重患者中在急性炎性情形后的第一周中评估盐和体液平衡的令人感兴趣的替代物。建议暂停频繁的过量容量扩充。
实施例2：通过MR-proADM预测体液平衡和/或盐平衡
1.简介
本研究的目的是回答下述问题：
·可以使用生物标志物和/或其他协变量来预测Na和H2O的变动吗？
·可以使用生物标志物和/或其他协变量来预测容量响应吗？
为此目的，使用数据挖掘技术和模型选择评估了提供的生物标志物和协变量的预测性能。
2.材料和方法
请注意，下面的材料和方法部分描述了在仅仅充当示例性实施方式的实施例2至4中使用的材料和方法。
2.材料和方法2.1数据
下面是本报告中使用的变量和数据集的描述。观察到3.5％的缺失数据率(对于最大乳酸盐来说54％)，这个值是低的。结果，缺失数据实际上不是本研究中的重要问题。因此，我们决定使用相应的列平均值推定所有缺失数据。
响应变量
考虑了总共2个目标响应变量：
·ΔH2O(D2、D5、D7)：水(H2O)的变动，以升(L)为单位表示。变动≥4.0L被认为是危急的。
·ΔNa(D2、D5、D7)：钠(Na)的变动，以克(g)为单位表示。变动≥36.0g被认为是危急的。
·VT(D2、D7)：总容量，以mL/kg为单位表示。总容量≤60mL/kg被认为是危急的(72的经典阈值已被降低以增加对照的数目)。
·VP(D2、D7)：血浆容量，以mL/kg为单位表示。≤40mL/kg的血浆容量被认为是危急的。
·VG(D2、D7)：血球容量，以mL/kg为单位表示。≤15mL/kg的血球容量被认为是危急的(32的经典阈值已被降低以增加对照的数目)。
·SOFA(D2、D5、D7)：序贯性器官衰竭评估评分。多水平有序响应：所述评分随着患者状况的严重性而增长。注意4个高于15的SOFA评分被设定到15，以便避免仅有一个观察的SOFA评分。
NB：对于D7来说，舍弃了使用碘代替CR51的第二个容量测量值。
协变量
·患者协变量(8)：年龄，性别，体重.D0，Bmi.D0(体重指数)，IGS.II(IGS II评分)，GOS(格拉斯哥结果量表)，液体.D0(D0时的液体摄入)，Na.D0(D0时的钠摄入)
·每日协变量(5)：max.temp(最高体温)，max.lactate(乳酸盐)，min.PAM(中动脉压最小值)，FC(心率)，max.cathe(儿茶酚胺)
·生物标志物协变量(11)：Hb，Prot.D0(第0天的血清总蛋白)，Prot(血清总蛋白)，Angio(血管紧张肽II)，肾素，Aldo(醛甾酮)，Pro.ANP，Adre(肾上腺素)，Pro.Endo(内皮素原-1)，CT.proAVP，MR.proADM，皮质醇，Nor(去甲肾上腺素)，EPO(都在对数标尺上，log1p变换)。
NB：bmi使用下述公式从身高和体重计算：bmi.J0＝体重.J0/(身高.J0/100)2。协变量身高.D0已被舍弃，以避免与体重.D0和bmi.D0冗余。
2.2统计方法
所有统计计算使用R软件(Rmanual)3.0.2版进行。
随机森林
随机森林(Breiman，2001；Breiman，2002)被用于使用协变量来预测响应变量。方法由从自举数据重复建立决策树构成。为每次运行建立总共50,000棵树(对于留一法程序来说500)。这是一种强有力的数据挖掘方法，已知能够甚至捕获非线性效应。在生物医学背景中对随机森林的良好介绍，参见Boulesteix，2012。
重要性
将了将协变量按照降低的重要性排序，进行了灵敏度分析。对于每个协变量，使用或不使用所研究的协变量进行随机森林预测，并测量它的不存在在预测质量方面的后果。
正向选择和反向选择
由于所述协变量之间的高相关性结构，通过简单地使用k最重要变量来选择最佳模型将不一定产生最准确的预测。为了克服这个问题，经典方法(Diaz，2006；Nguyen，2013)是使用随机森林进行反向选择程序。
在正向选择的情况下，想法是从空模型开始进行灵敏度分析(每个变量一个RF)，添加提供目标判据的最低改进的变量(在这里使用R2，参见下面的描述)，并从所述扩充的模型重新开始。由于随机森林的高度随机的本质，来自于正向选择程序的结果从一次重复到另一次重复可以不同。因此，使用高的树数目(树＝50,000)系统性地进行总共5次重复，并选择在重复之间显得稳定的共识模型。
在反向选择的情况下，想法是从完全模型开始进行灵敏度分析(每个变量一个RF)，移除提供目标判据的最低改进的变量(在这里使用R2(也被称为r2)，参见下面的描述)，并从所述缩减的模型重新开始。由于随机森林的高度随机的本质，来自于反向选择程序的结果从一次重复到另一次重复可以不同。因此，使用高的树数目(树＝50,000)系统性地进行总共5次重复，并选择在重复之间显得稳定的共识模型。
线性回归
也对所选模型进行经典的线性回归。研究所述线性系数也提供了用于理解所述协变量对响应变量的个体影响的简单方式。
留一法
由于数据不应该被分成训练和测试数据集，因此使用被称为“留一法”的经典交叉验证技术以避免过度拟合。使用这种方法，我们重复地省略一条数据，使用缩减的数据集训练我们的模型(线性回归或随机森林)，然后使用得到的模型预测搁置的条目的值。
R2
根据平方相关R2(或r2)测量所述响应变量与预测的响应之间的相关性。在线性模型的情形中，它精确对应于解释的方差的比例。R2总是在0至100％之间，越高越好。
AUC
分类性能根据ROC曲线下面积(AUC)来测量。通常优选地使用这种经典判据，因为它同时考虑到了所有可能的阈值并且甚至不需要控制H0误差率。AUC总是在0至100％之间。50％左右的AUC对应于纯噪音，低于70％的AUC被认为是弱的，70％至80％之间的AUC被认为是正确的，80％至90％之间良好，高于90％出色。在这里，AUC估算使用pROC R软件包(robin2011proc)来进行。
存活分析
使用标准的存活分析：Cox模型(Andersen和Gill，1982，Therneau，2000)，Kaplan-Meier非参数危险评价(Kaplan和Meier，1958)，以及用于存活曲线之间的显著性的对数秩差检验(Harrington和Fleming，1982)。对于随机森林来说，使用软件包randomForestSRC(Ishwaran和Kogalur，2007；Ishwaran等，2008；Ishwaran和Kogalur，2015)。
3.结果和讨论
3.1体液平衡
MR.proADM显示出用于预测ΔH2O的良好性能。MR.proADM本身获得良好的分类能力(图2A)，响应变量的方差为35％。
进行用于ΔH2O的选择程序。重要性分析指向下述患者和每日协变量的重要性：bmi.D0，体重.D0，年龄，性别，BMI，总蛋白，Hb，D0液体摄入(液体.D0)，患者组(组)。生物标志物MR.proADM获得最高的重要性。其他生物标志物似乎发挥作用：Pro.Endo，CT.proAVP，EPO，血清总蛋白和Hb。
3.2盐平衡
与对ΔH2O所观察的相同，MR.proADM具有良好的分类能力r2为0.42(图2B)。
进行的重要性分析指向与对ΔH2O所观察的相同的标志物/参数，区别在于D0时的钠摄入(Na.D0)代替了D0时的液体摄入D0(液体.D0)。
4.结论
清楚地证实了MR-proADM对预测ΔH2O和ΔNa的关键作用。然而，MR-proADM与其他标志物和/或参数的组合可能改进体液和/或盐平衡的预测。
实施例3：通过包含其他参数改进预测
本研究的目的是使用协变量(其他标志物或参数)(参见表7)的选择来建立可临床利用的预测物。
表7.所使用的标志物和参数
1.1体液平衡和钠平衡
用于预测ΔH2O的参比模型：
ΔH2O～MR.proADM+bmi.D0+体重.D0+年龄+性别+Hb+Prot+IGS.II+液体.D0
其中由于在临床背景下获得它们的实际困难，IGS.II和液体.D0两者是任选的。
表8：ΔH2O和ΔNa模型的概述
正如可以在表8中看到的(响应“H2O”)，这个模型解释了大约70％的方差并具有非常好的辨别力，AUC为92％(95％CI的下边界约为89％)。IGS.II和/或液体.D0的不存在具有非常有限的后果，仅仅损失2-3％的r2，并且对AUC完全没有影响。
也将这个模型与从患者体重和Prot建立的预测物进行比较。由于在D5时体重不可用，因此将这个时间点完全去除，由此产生较小的数据集。结果呈现在表8中(响应“H2O(-D5)”)。从体重和Prot建立的预测物仅仅获得80％的AUC。请注意，从我们的参比模型(AUC为90％)的下降是显著的。此外，当只考虑体重(AUC＝71％)或Prot(AUC＝63％)时这种损失甚至更加剧烈，进一步证实了这两种协变量的有限利益。人们还应该注意，使用这些模型时r2非常有限，特别是当仅仅使用线性回归时。
钠平衡
用于预测ΔNa的参比模型：
ΔNa～MR.proADM+bmi.D0+体重.D0+年龄+性别+Hb+Prot+Na.D0+IGS.II+液体.D0
正如对ΔH2O所观察到的，IGS.II和液体.D0两者是任选的。
在表8中可以看到(响应“Na”)，这个模型解释了大约70％的方差并具有良好的辨别力，AUC为88％(95％CI的下边界约为84％)。正如对ΔH2O所观察到的，IGS.II和/或液体.D0的不存在具有非常有限的后果。同样地，正如对ΔH2O所观察到的，体重和Prot对预测所述响应变量来说具有有限的利益，两者都具有低的R2(～20％)和AUC(～63-75％)。
建立联合预测物
在这一部分中，开发了“危急”患者、即具有ΔH2O>4L和ΔNa>36g两者的患者的预测物。为此目的，联合考虑了(ΔH2O，ΔNa)的留一法残差，发现其分布是具有下述协方差矩阵的高斯型(居中)：
因此，可以计算每对(x，y)预测值(ΔH2O，ΔNa)成为危急的概率为：
这个概率通过mvtnorm R软件包(Genz和Bretz，2009；Genz等，2014)容易地计算。
二维P危急(p-危急(p-critical))函数的图像表示允许仅仅使用ΔH2O和ΔNa预测值来区分非危急和危急患者。注意，这种联合预测物的辨别力高，AUC＝0.92(也参见实施例4)。
2.2容量响应
总容量和血浆容量
令人吃惊地发现，ΔH2O和ΔNa对于VT和VP来说是亚最适预测物(表9)。事实上，它们解释了至多7％的方差，并且在辨别力方面仅仅勉强胜过随机分类物(最佳AUC＝64％)。这清楚地证实了下述临床想法，即用盐水“装填患者”不引发预期的血浆响应。
表9：容量响应模型的概述
血球容量
对于血球容量(VG)来说，观察到与ΔH2O和ΔNa的相关性。可以建立预测(参比)模型：
VG～MR.proADM+Hb+bmi.D0+性别+年龄+Prot
正如可以在表9中看到的，这个模型解释了45％的方差(这个数字是低的)，然而提供了82％的AUC(95％CI下边界为75％)。这与排他地使用Hb的简单模型相比明显改进，后者获得仅仅30％的r2(使用线性模型而不是随机森林)和70％的AUC(95％CI下边界为60％)。这个结果是有趣的，因为它强调Hb作为用于血球容量响应这一当前临床标准的单一生物标志物的限制。
在表9中可以看到，所述不含MR-proADM的“参比”模型实现了相近的性能，r2为48％并且AUC为84％。包含MR-proADM的参比模型鉴定具有低的(<20或15)VG或RBCV的患者。
当考虑最佳VG模型的留一法残差时，我们清楚地观察到这些残差按照高斯居中分布来分布，标准偏差为3.2-3.3。尽管事实上大部分观察到的方差不能用这种模型来解释，但人们已经可以使用它们来检测危急患者：具有VG<20mL/kg的患者。事实上，如果x是预测的VG，我们得到：
图7示出了P危急函数。这种决策函数可以提供Hb的有效替代物，用于以可靠的方式检测危急患者。
2.3SOFA
在图5中，示出了使用由专家选择的模型和留一法程序预测的SOFA值。相关性非常高，尽管预测精度并不大。事实上，在表10中，准确预测(差＝0)仅仅具有19％的准确度，但在预测与准确SOFA之间允许更大差的情况下，这个数字急剧提高。对于4的差来说，获得82％的SOFA。
SOFA～ΔH2O+ΔNa+年龄+bmi.D0+性别
表10：SOFA预测精度
注意，我们还试图将SOFA重新分组成三类，但没有显著改进(33％误差率)。
2.4水肿持续时间
我们可以在表11中看到可用数据。
表11：水肿持续时间数据。总共21个观察到的终点(不再水肿)，31个审查过的持续时间。
表12：水肿持续时间的Cox模型。显著的协变量用星号标记。
Cox模型
通过将比例危险模型拟合在这些数据(表12)上开始分析。在所试验的协变量中，只有年龄和SOFA是显著的。特别是，MR.proADM没有显得发挥关键作用。我们通过仅仅用年龄和SOFA拟合Cox模型，建立了调整过的水肿持续时间，其中的参比对于年龄来说是41.5(中值)，对于SOFA来说是9(中值)。
Kaplan-Meier估算
使用在D2以低值(MR.proADM<1.5)和高值(MR.proADM>1.5)进行的分层，对存活曲线的Kaplan-Meier估算进行分析。两条曲线之间的差异明显不显著，这证实了表12的结果。注意当使用未调整的水肿持续时间时，观察到两条曲线之间的显著差异(p＝0.01)(数据未示出)，但当对年龄和SOFA进行调整时，这个结果消失。
随机森林
在同样的(未调整的)数据上进行随机森林分析。所述程序获得41％的总体误差率，这是高的(该误差率的准确本质不清楚)。根据变量重要性，确认了年龄的关键作用，但SOFA和MR.proADM两者似乎对这个非线性框架的结果具有微弱影响。使用留一法技术，在协变量(年龄、SOFA和MR.proADM)的基础上使用随机森林为每位患者预测存活曲线。两个数据集之间的差异主要是由下述事实造成的，即在D2具有高MR-proADM的患者大部分在研究结束时没有治愈。然而，一旦包括年龄和SOFA的影响后，在D2具有较低MR-proADM的患者没有明显朝向治愈的趋势。
3.结论
对于血球容量来说，MR.proADM具有合理的关联。此外，我们的研究指出了当前生物标志物(Hb)的限制，并且提出了可能对临床医生将来监测具有危急VG的患者有用的的新的模型。
本研究的更加有趣的成就是水肿的预测物，其组合了ΔH2O和ΔNa预测以非常高效地(AUC>0.99)检测具有危急水肿风险的患者，仅仅使用容易获得的临床协变量(bmi.D0，体重.D0，年龄，性别和任选地IGS.II和液体.D0)和三个生物标志物：MR.proADM，Hb和Prot。
实施例4：进一步改进预测
模型
为了简化本文中提供的模型，将IGS.II、液体.J0和Na.J0从原始模型中移除，以便得到用于预测ΔH2O和ΔNa两者的单一简单模型(在下面称为“模型2”)。在模型中包含年龄2＝年龄2和年龄3＝年龄3进一步提高了预测力。这是似乎具有显著效果的唯一添加的变换的协变量。实施例3中呈现的用于预测体液平衡和盐平衡、即包括参数IGS.II、液体.J0和Na.J0的模型被称为“模型1”.
·“模型2：～bmi.J0+体重.J0+年龄+年龄2+年龄3+性别+MR.proADM+Hb+Prot
·“不含生物标志物”：～bmi.J0+体重.J0+年龄+年龄2+年龄3+性别
·“仅生物标志物”：～MR.proADM+Hb+Prot
NB：请注意，MR.proADM、Hb和Prot是指原始测量值的log1p变换。
对于这些模型中的每一者来说，我们可以使用留一法或使用完整的数据集进行预测。不出所料，与前一种情况相比，在后一种情况中性能总是更高。对于鲁棒(robust)和可能可复制的结果，人们应该优选留一法估算，出于更乐观的观点，以及为了与非常粗糙的方法(例如直接使用MR.proADM来辨别普通和危急患者)进行比较，人们应该使用完整数据集估算。
AUC结果
表13：留一法框架中的AUC
表14：使用所有可用数据的AUC
与实施例3中呈现的模型1相比，本文中提供的仅仅使用简单协变量和选定生物标志物的模型2实现相似或甚至更好的性能。在所有情况下，P危急似乎高效地组合了ΔH2O和ΔNa预测，与两种方法中的最佳者相比略微改进。当考虑不含任何生物标志物的模型时，存在显著的性能下降。然而，人们应该注意到，这个模型仍然指出了高水肿风险患者。当考虑仅生物标志物时，性能与最佳模型相比相近，但它仍然差一些。
出于比较的目的，单独的MR.proADM区分普通和危急患者的性能实现AUC＝0.845[0.791-0.898]，为了统一，必须将它与表14的AUC(对于最佳模型来说0.990)相比。因此，其他标志物和/或参数的组合提供了预测力的甚至进一步的改进。
关于最佳模型的详情
比较了使用三种不同方法获得的ROC，即1)仅仅使用预测的ΔH2O；2)仅仅使用预测的ΔNa；3)将两种预测合并成P危急。如果ΔH2O比其他两者低效得多(这与表13和表14一致)，则ΔNa和P危急的ROC非常相近。然而，由于高特异性(例如特异性>0.95)，P危急优于ΔNa。这可以通过考虑特异性∈[1.00,0.95]的(调整的)部分AUC来强调。获得了对于ΔH2O来说0.781的值，对于ΔNa来说0.882的值，对于P危急来说0.948的值。这些结果表明，当需要高特异性时，P危急甚至比ΔNa(和ΔH2O)更加可靠。
表15：对于P危急的各种不同阈值水平来说，最佳模型(所有数据)的假阳性(FP)、假阴性(FN)、灵敏度(Sen)和特异性(Spe)。
在表15中，概述了使用具有各种不同阈值的P危急的预测性能。取决于假阳性和假阴性的代价，这将允许选择阈值以获得所述两种同时发生的风险之间的最佳折中。
分析了包含在本研究中的201位患者的预测的ΔH2O和预测的ΔNa(图6)。两种预测是高度相关的这与观察到的ΔH2O和ΔNa相一致。P危急的表现证实了高风险区几乎专有地被“危急”患者代表，并且低风险区几乎专有地被“普通”患者代表。
P危急、SOFA与VG之间的相关性
在这一部分中，我们将新的P危急评分与SOFA和VG(血球容量)进行比较。
在表16和17中，我们可以看到在SOFA与P危急之间存在良好的相关性。
从现在开始，我们聚焦于两个特定目标组：“低风险”组，其收集了具有P危急<0:1的总共86位患者(在201位中)，以及“高风险”组，其收集了P危急>0:9的55位患者。
表16：SOFA按P危急组的重新分配。
表17：SOFA按P危急组的分布
证实了SOFA在“高风险”组中比在“低风险”组中明显更高。相反，在“高风险”组中VG明显更低。
最后，使用P危急来区分具有VG<15的患者(91个病例)和具有VG≥15的患者(43个对照)。获得0:76的AUROC(95％CI为[0.67–0.85])。注意，由于我们在数据集中只有134个VG测量值，所以所述CI相当大。
结论
本文中提供的仅使用生物标志物(MR.proADM、Hb、Prot)和简单协变量(bmi、体重、年龄、性别)的模型在留一法框架中获得了0.926的最大AUC，并在使用所有数据时获得0.990的AUC。这种性能是出色的。就临床应用而言，图6中提供的图可以为临床医生提供有用的信息。
本文中引用的所有参考文献通过引用完全并入本文。现在已完全描述了本发明，本领域技术人员将会理解，本发明可以在条件、参数等的宽广且等效的范围内实践，而不影响本发明或其任何实施方式的精神或范围。
Rivers E,Nguyen B,Havstad S,Ressler J,Muzzin A,Knoblich B,Peterson E,Tomlanovich M.“早期目标导向疗法合作组：严重脓毒症和脓毒性休克治疗中的早期目标导向疗法”(Early Goal-Directed Therapy Collaborative Group:Early goal-directedtherapy in the treatment of severe sepsis and septic shock)，N Engl J Med2001,345:1368-1377。
Chappell D,Jacob M,Klaus Hofmann-Kiefer K,Conze P,Rehm M.“术周体液管理的合理方法”(A Rational Approach to Perioperative Fluid Management)，Anesthesiology 2008；109:723–40。
Sakr Y,Vincent JL,Reinhart K,Groeneveld J,Michalopoulos A,Sprung CL,Artigas A,Ranieri VM，“在急性病患调查员中脓毒症的发生：高潮流气量和正体液平衡与急性肺损伤中的糟糕结果相关”(Sepsis Occurence in Acutely Ill PatientsInvestigators.High tidal volume and positive fluid balance are associatedwith worse outcome in acute lung injury)，Chest.2005；128(5):3098-108。
Bagshaw SM,Brophy PD,Cruz D,Ronco C.“体液平衡作为生物标志物：体液过载对具有急性肾损伤的危重患者中的结果的影响”(Fluid balance as a biomarker:impactof fluid overload on outcome in critically ill patients with acute kidneyinjury)，Crit Care.2008；12(4):169。
Payen D,de Pont AC,Sakr Y,Spies C,Reinhart K,Vincent JL，“在急性病患(SOAP)调查员中脓毒症的发生：正体液平衡与具有急性肾衰竭的患者中的糟糕结果相关”(Sepsis Occurrence in Acutely Ill Patients(SOAP)Investigators:A positivefluid balance is associated with a worse outcome in patients with acute renalfailure)，Crit Care.2008；12(3):R74。
Murphy CV,Schramm GE,Doherty JA,Reichley RM,Gajic O,Afessa B,MicekST,Kollef MH，“在脓毒性休克继发的急性肺损伤中体液管理的重要性”(The importanceof fluid management in acute lung injury secondary to septic shock)，Chest.2009；136(1):102-9。
Boyd JH,Forbes J,Nakada TA,Walley KR,Russell JA，“脓毒性休克中的流体复苏：正体液平衡和高中央静脉压与升高的死亡率相关”(Fluid resuscitation in septicshock:a positive fluid balance and elevated central venous pressure areassociated with increased mortality)，Crit Care Med.2011；39(2):259-65。
Kelm DJ,Perrin JT,Cartin-Ceba R,Gajic O,Schenck L,Kennedy CC，“在用早期目标导向疗法治疗的具有严重脓毒症和脓毒性休克的患者中体液过载与对体液相关的医学干预的紧急需求的增加和医院死亡相关”(Fluid overload in patients withsevere sepsis and septic shock treated with early goal-directed therapy isassociated with increased acute need for fluid-related medical interventionsand hospital death)，Shock.2015；43(1):68-73。
Acheampong A,Vincent JL，“在具有脓毒症的患者中正体液平衡是独立的预后因子”(A positive fluid balance is an independent prognostic factor in patientswith sepsis)，Crit Care.2015；19(1):251。
Cecconi M,Parsons AK,Rhodes A，“流体冲击是什么？”(What is a fluidchallenge？)，Cur Opin Crit Care 2011 17:290-295。
Chappell D,Westphal M,Jacob M，“在危急病中多糖包被对微循环氧分布的影响”(The impact of the glycocalyx on microcirculatory oxygen distribution incritical illness)，Curr Opin Anaesthesiol.2009；22(2):155-62。综述。
Jacob M,Chappell D,Hollmann MW，“血管外科中术周流体操纵的当前情况”(Current aspects of perioperative fluid handling in vascular surgery)，CurrOpin Anaesthesiol.2009；22(1):100-8。综述。
Ostrowski SR,Haase N,Müller RB, MH,Pott FC,Perner A,JohanssonPI，“在具有严重脓毒症的患者中内皮损伤的生物标志物与低凝血能力之间的关联：前瞻性研究”(Association between biomarkers of endothelial injury andhypocoagulability in patients with severe sepsis:a prospective study)，CritCare.2015Apr 24；19:191。
Sakr Y,Lobo SM,Moreno RP,Gerlach H,Ranieri VM,Michalopoulos A,VincentJL，“SOAP调查员：重症监护室中器官衰竭的模式和早期演变以及它们与结果的关系”(SOAPInvestigators.Patterns and early evolution of organ failure in the intensivecare unit and their relation to outcome)，Crit Care.2012；16(6):R222。
Besen BA,Gobatto AL,Melro LM,Maciel AT,Park M，“危重患者中的流体和电解质过载：概述”(Fluid and electrolyte overload in critically ill patients:Anoverview)，World J Crit Care Med.2015；4(2):116-29。
Lobo DN,Bostock KA,Neal KR,Perkins AC,Rowlands BJ,Allison SP，“盐和水平衡对选择性结肠切除术后胃肠功能的恢复的影响：随机受控试验”(Effect of salt andwater balance on recovery of gastrointestinal function after elective colonicresection:a randomised controlled trial)，Lancet.2002；359(9320):1812-8。
Brandstrup B,H,Beier-Holgersen R,E等，丹麦术周流体疗法研究组(Danish Study Group on Perioperative Fluid Therapy)。“静脉内流体限制对术后并发症的影响：两种术周流体方案的比较：随机评估者不知情的多中心试验”(Effectsof intravenous fluid restriction on postoperative complications:comparison oftwo peri-operative fluid regimens:a randomized assessor-blinded multicentertrial)，Ann Surg 2003,238:641-648。
Bjerregaard LS,Hansen KL,Ravn J,Nilsson JC，“在高风险胸外科手术中使用临床参数指导流体疗法：回顾性观察性研究”(Using clinicalparameters to guide fluid therapy in high-risk thoracic surgery.Aretrospective,observational study)。Walsh SR,Walsh CJ，“在术后患者中与静脉内流体相关的发病率”(Intravenous fluid-associated morbidity in postoperativepatients)，Ann R Coll Surg Engl.2005；87(2):126-30。
de Kruif MD,Lemaire LC,Giebelen IA,Struck J,Morgenthaler NG,Papassotiriou J,Elliott PJ,van der Poll T，“在人类内毒素血症中皮质甾类对新型生物标志物的释放的影响”(The influence of corticosteroids on the release ofnovel biomarkers in human endotoxemia)，Intensive Care Med.2008；34(3):518-22。
Schweda F，“肾素-血管紧张肽-醛甾酮系统上的盐反馈”(Salt feedback on therenin-angiotensin-aldosterone system)，Pflugers Arch.2015；467(3):565-76。
Farag E；Maheshwari K,Morgan J,Sakr E,Wael A,Doyle DJ，“肾素-血管紧张肽在心血管内稳态中的作用的更新”(An Update of the Role of Renin Angiotensin inCardiovascular Homeostasis)，Anesth Analg.2015；120(2):275-292。
Struck J,Morgenthaler NG,Bergmann A，“和肽素这种源自于血管升压素前体的稳定的肽在脓毒症患者的血清中升高”(Copeptin,a stable peptide derived from thevasopressin precursor,is elevated in serum of sepsis patients)，Peptides 26(2005)2500–2504。
Morgenthaler NG,Müller B,Struck J,Bergmann A,Redl H Christ-Crain M，“在出血性和脓毒性休克中和肽素这种精氨酸血管升压素前体的稳定的肽升高”(Copeptin,a stable peptide of the arginine vasopressin precursor is elevatedin hemorrhagic and septic shock)，2007.28:219-226。
Zweifel C,Katan M,Schuetz P等，“在具有急性脑内出血的患者中和肽素与死亡和结果相关”(Copeptin is associated with mortality and outcome in patientswith acure intracerebral hemorrhage)，BMC Neurol.2010；10:34。
Urwyler SA,Schuetz P,Fluri F等，“和肽素的预后价值：具有急性中风的患者的一年结果”(Pronostic value of copeptin.One-year outcome patienty with acutestroke)，Stroke 41:1564-1567,2010。
Kohan DE,Rossi NF,Inscho E,Pollock DM，“内皮素对血压和盐体内平衡的调控”(Regulation of blood pressure and salt homeostasis by endothelin)，PhysiolRev 91:1-77,2011。
Breymann C,Rohling R,Huch A,Huch R，“术中内源红细胞生成素水平和健康人类中血管内血液容量的变化”(Intraoperative endogenous erythropoietin levels andchanges in intravascular blood volume in healthy humans)，Ann Hematol 2000；79:183–186。
Christ-Crain M.,Morgenthaler NG,Struck J,Harbarth S,Bergmann A,MüllerB，“中段肾上腺髓质素原在脓毒症中作为预后标志物：观察性研究”(Mid-regional pro-adrenomedullin as a prognostic marker in sepsis:an observational study)CritCare 2005；9:R816-R824。
Koyama T,Ochoa-Callejero L,Sakurai T等，“血管内皮肾上腺髓质素-RAMP2系统对于血管完整性和器官内稳态来说是必需的”(Vascular endothelialadrenomedullin-RAMP2system is essential for vascular integrity and organhomeostasis)，Circulation.2013 127(7):842-53。
Brisman JL,Song JK,Newell DW，“脑动脉瘤”(Cerebral aneurysms)，N Engl JMed.2006；355(9):928-39。
Vincent JL,Moreno R,Takala J,Willatts S,De Bruining H,Reinhart CK,Suter PM,Thijs LG，“描述器官功能障碍/衰竭的SOFA，与脓毒症相关的器官衰竭评估评分。”(The SOFA Sepsis-related Organ Failure Assessment.score todescribe organ dysfunction/failure.)代表欧洲重症监护医学学会的脓毒症相关问题工作组。(On behalf of the Working Group on Sepsis-Related Problems of theEuropean Society of Intensive Care Medicine)，Intensive Care Med 1996,22:707-710。
Feissel M,Michard F,Faller JP,Teboul JL，“下腔静脉直径的呼吸变动作为流体疗法的指导”(The respiratory variation in inferior vena cava diameter as aguide to fluid therapy)，Intensive Care Med.2004；30(9):1834-7。
Feissel M,Michard F,Mangin I,Ruyer O,Faller JP,Teboul JL，“主动脉血液流速的呼吸变化作为具有脓毒性休克的通气患者中流体响应性的指示物”(Respiratorychanges in aortic blood velocity as an indicator of fluid responsiveness inventilated patients with septic shock)，Chest.2001；119(3):867-73。
Monnet X,Teboul JL，“机械通气期间的容量响应性的评估：最新进展”(Assessment of volume responsiveness during mechanical ventilation:recentadvances)，Crit Care.2013；17(2):217。
Gore CJ,Hopkins WG,Burge CM，“血液容量参数的测量误差：荟萃分析”(Errorsof measurement for blood volume parameters:a méta-analysis)，J Appl Physiol2005；99:1745-1758。
Fairbanks VF,Klee GG,Wiseman GA,Hoyer JD,Tefferi A,Petitt RM,Silverstein MN，“血液容量和红细胞质量的测量：51Cr和125I方法的重新检查”(Measurement of blood volume and red cell mass:re-examination of 51Cr and125I methods)，Blood Cells Mol Dis.1996；22(2):169-86。
Dorhout Mees SM,Hoff RG,Rinkel GJE,Algra A,van den Bergh WM，“动脉瘤性蛛网膜下出血后的脑利尿钠肽浓度：与低血容量和低钠血症的关系”(Brain natuireticpeptide concentrations after aneuvrismal subarachnoid hemorrhage:relationshipwith hypovolemia and hyponatremia)，Neurocrit care,2011。
Perrino AC Jr,Harris SN,Luther MA，“使用多平面经食管超声心动图的心输出量的术中确定：与热稀释法的比较”(Intraoperative determination of cardiac outputusing multiplane transesophageal echocardiography:a comparison tothermodilution)，Anesthesiology 1998；89:350–7。
Genz A,Bretz F，《多变量正态和t概率的计算：统计学讲义》(Computation ofMultivariate Normal and t Probabilities.Lecture Notes in Statistics)，Springer-Verlag,Heidelberg,2009.ISBN 978-3-642-01688-2。
Genz A,Bretz F,Miwa T,Mi X等，“mvtnorm：多变量正态和t分布2014”(mvtnorm:Multivariate Normal and t Distributions,2014)，URL http://CRAN.R-project.org/package＝mvtnorm.R软件包1.0-2版。
Malbrain ML,Marik PE,Witters I,Cordemans C,Kirkpatrick AW,Roberts DJ,Van Regenmortel N，“危重病或受伤患者中的体液过载、去复苏和结果：系统评述和对临床实践的建议”(Fluid overload,de-resuscitation,and outcomes in critically ill orinjured patients:a systematic review with suggestions for clinical practice)，Anaesthesiol Intensive Ther.2014；46(5):361-80。
Vincent JL,Rhodes A,Perel A,Martin G,Rocca G,Vallet B等，“血液动力学监测更新：16的共识”(Update on hemodynamic monitoring:a consensus of 16)，CriticalCare 2011,15:229(2011年8月18日)。
Titze J，“钠平衡不仅仅是肾的事”(Sodium balance is not just a renalaffair)，Curr Opin Nephrol Hypertens.2014；23(2):101-5。
Jantsch J,Binger KJ,Müller DN,Titze J，“内稳态免疫功能中的巨噬细胞”(Macrophages in homeostatic immune function)，Front Physiol.2014May 5；5:146。
Kahn ML，“血液比淋巴更稠”(Blood is thicker than lymph)，J ClinInvest.2008；118(1):23-6。
Bark BP,Persson J,“在脓毒症大鼠中5％白蛋白、6％HES 130/0.4、4％明胶和0.9％NaCl的输注率对血浆扩充效果的重要性”(Importance of the infusionrate for the plasma expanding effect of 5％albumin,6％HES 130/0.4,4％gelatin,and 0.9％NaCl in the septic rat)，Crit Care Med.2013；41(3):857-66。
Takanishi DM,Yu M,Lurie F,Biuk-Aghai E,Yamauchi H,Ho HC,Chapital AD，“危急病手术患者中的外周血血细胞比容：真实红细胞容量的不精确的替代物”(Peripheral blood hematocrit in critically ill surgical patients:an imprecisesurrogate of true red blood cell volume)，Anesth Analg.2008；106(6):1808-12。
Naidech AM,Jovanovic B,Wartenberg KE,Parra A,Ostapkovich N,ConnollyES,Mayer SA,Commichau C，“较高的血红蛋白与蛛网膜下出血后的结果改善相关”(Higherhemoglobin is associated with improved outcome after subarachnoidhemorrhage)，Crit Care Med.2007；35(10):2383-9。
K.Kitamura等，“编码人类肾上腺髓质素原的cDNA的克隆和表征”(Cloning AndCharacterization of cDNA Encoding a Precursor for Human Adrenomedullin)，Biochem.Biophys.Res.Commun.194:720-725(1993)。
Per Kragh Andersen和Richard D Gill，“用于计数方法的Cox回归模型：大型样品研究”(Cox’s regression model for counting processes:a large sample study)，The annals of statistics,pages 1100–1120,1982。
Anne-Laure Boulesteix,Silke Janitza,Jochen Kruppa和Inke R“随机森林方法的概述和实用指南，重点在于计算生物学和生物信息学”(Overview of randomforest methodology and practical guidance with emphasis on computationalbiology and bioinformatics)，Wiley Interdisciplinary Reviews:Data Mining andKnowledge Discovery,2(6):493–507,2012。
Leo Breiman，“随机森林”(Random forests)，Machine learning,45(1):5–32,2001。
Leo Breiman，“设置、使用和理解随机森林的手册v3.1”(Manual on setting up,using,and understanding random forests v3.1)，Statistics Department Universityof California Berkeley,CA,USA,2002。
Ramón Díaz-Uriarte和Sara Alvarez De Andres，“使用随机森林的基因选择和微阵列数据分类”(Gene selection and classification of microarray data usingrandom forest)，BMC bioinformatics,7(1):3,2006。
David P Harrington和Thomas R Fleming，“用于审查过的存活数据的一类秩检验程序”(A class of rank test procedures for censored survival data)，Biometrika,69(3):553–566,1982。
H.Ishwaran和U.B.Kogalur，“用于r的随机存活森林”(Random survival forestsfor r)，R News,7(2):25–31，2007年10月。URL http://CRAN.R-project.org/doc/Rnews/。
H.Ishwaran和U.B.Kogalur.，“用于存活、回归和分类的随机森林(RF-SRC)2015”(Random Forests for Survival,Regression and Classification(RF-SRC),2015)，URLhttp://cran.r-project.org/web/packages/randomForestSRC/。R软件包1.6.1版。
H.Ishwaran,U.B.Kogalur,E.H.Blackstone和M.S.Lauer，“随机存活森林”(Random survival forests)，Ann.Appl.Statist.,2(3):841–860,2008。URL http://arXiv.org/abs/0811.1645v1。
Edward L Kaplan和Paul Meier，“来自于不完全观察的非参数估算”(Nonparametric estimation from incomplete observations)，Journal of theAmerican statistical association,53(282):457–481,1958。
Cuong Nguyen,Yong Wang和Ha Nam Nguyen，“用于乳腺癌诊断和预后的与特点选择相组合的随机森林分类器”(Random forest classifier combined with featureselection for breast cancer diagnosis and prognostic)，Journal of BiomedicalScience and Engineering,6(5):31887,2013。
R Core Team，“R：用于统计计算的语言和环境”(R:A Language and Environmentfor Statistical Computing)，R Foundation for Statistical Computing,Vienna,Austria,2013。URL http://www.R-project.org/。
Xavier Robin,Natacha Turck,Alexandre Hainard,Natalia Tiberti,Frédérique Lisacek,Jean-Charles Sanchez和Markus Müller，“pROC：用于分析和比较ROC曲线的R和S+的开源软件包”(pROC:an open-source package for R and S+to analyze andcompare ROC curves)，BMC bioinformatics,12(1):77,2011。
Terry M Therneau，《对存活数据建模：扩展Cox模型》(Modeling survival data:extending the Cox model)，Springer,2000。
Jacob M,Annaheim S,Boutellier U,Hinske C,Rehm M,Breymann C,Krafft A，“血细胞比容对估算红细胞容量无效：男性志愿者中的前瞻性研究”(Haematocrit isinvalid for estimating red cell volume:a prospective study in malevolunteers)，Blood Transfus.2012Oct；10(4):471-9。doi:10.2450/2012.0111-11.Epub2012May 4。
SAFE研究调查员,Finfer S,McEvoy S,Bellomo R,McArthur C,Myburgh J,Norton R，“与盐水相比白蛋白对具有严重脓毒症的患者的器官功能和死亡的影响”(Impact of albumin compared to saline on organ function and mortality ofpatients with severe sepsis)，Intensive Care Med.2011Jan；37(1):86-96。doi:10.1007/s00134-010-2039-6.Epub 2010Oct 6。
Jozwiak M,Silva S,Persichini R,Anguel N,Osman D,Richard C,Teboul JL,Monnet X，“在具有急性呼吸窘迫综合征的患者中血管外肺水是独立的预后因子”(Extravascular lung water is an independent prognostic factor in patientswith acute respiratory distress syndrome)，Crit Care Med.2013Feb；41(2):472-80.doi:10.1097/CCM.0b013e31826ab377。
Elofson KA,Eiferman DA,Porter K,Murphy CV，“晚期体液平衡在危急病手术和外伤群体中对临床结果的影响”(Impact of late fluid balance on clinical outcomesin the critically ill surgical and trauma population)，J Crit Care.2015Jul 16。pii:S0883-9441(15)00376-7。doi:10.1016/j.jcrc.2015.07.009.[Epub ahead ofprint]PMID:26341457。
Kissoon NR,Mandrekar JN,Fugate JE,Lanzino G,Wijdicks EF,RabinsteinAA，“正体液平衡与蛛网膜下出血中的不良结果相关”(Positive Fluid Balance IsAssociated With Poor Outcomes in Subarachnoid Hemorrhage)，J StrokeCerebrovasc Dis.2015Oct；24(10):2245-51。doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.027.Epub 2015Aug 13。
Vincent JL,Moreno R,Takala J,Willatts S,De Bruining H,Reinhart CK,Suter PM,Thijs LG，“描述器官功能障碍/衰竭的SOFA(与脓毒症相关的器官衰竭评估)评分”(The SOFA(Sepsis-related Organ Failure Assessment)score todescribe organ dysfunction/failure.)，代表欧洲重症监护医学学会的脓毒症相关问题工作组(On behalf of the Working Group on Sepsis-Related Problems of theEuropean Society of Intensive Care Medicine)，Intensive Care Med.1996Jul；22(7):707-10。
Klein HG,Flegel WA,Natanson C，“红细胞输注：精确还是不精确医学”(RedBlood Cell Transfusion:Precision vs Imprecision Medicine)，JAMA.2015Oct 20；314(15):1557-8。doi:10.1001/jama.2015.10890。
序列表
<110> B.R.A.H.M.S 有限公司
<120> 作为对象的细胞外容量状态的标志物的MR-proADM
<130> Y1910 PCT BLN
<150> EP 15 19 6754.4
<151> 2015-11-27
<160> 2
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 185
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> pre-pro-ADM的氨基酸序列
<400> 1
Met Lys Leu Val Ser Val Ala Leu Met Tyr Leu Gly Ser Leu Ala Phe
1 5 10 15
Leu Gly Ala Asp Thr Ala Arg Leu Asp Val Ala Ser Glu Phe Arg Lys
20 25 30
Lys Trp Asn Lys Trp Ala Leu Ser Arg Gly Lys Arg Glu Leu Arg Met
35 40 45
Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys Ala Gly Pro Ala
50 55 60
Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala Ser Arg Ser Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val Lys Arg Tyr Arg
85 90 95
Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys Arg Phe
100 105 110
Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln Phe Thr
115 120 125
Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln
130 135 140
Gly Tyr Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser Leu Pro Glu Ala Gly Pro Gly
145 150 155 160
Arg Thr Leu Val Ser Ser Lys Pro Gln Ala His Gly Ala Pro Ala Pro
165 170 175
Pro Ser Gly Ser Ala Pro His Phe Leu
180 185
<210> 2
<211> 48
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> MR-pro-ADM的氨基酸序列（pre-pro-ADM的45-92位氨基酸残基）
<400> 2
Glu Leu Arg Met Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ala Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala
20 25 30
Ser Arg Ser Pro Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val
35 40 45

Claims (15)

1.一种用于确定对象的细胞外容量状态、体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态的方法，其中所述方法包括在从所述对象获得的样品中确定肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，优选地，所述片段是MR-proADM。
2.权利要求1的方法，其中所述方法包括：
(a1)将proADM或其片段、优选为MR-proADM的所述水平与至少一个参比对象或参比对象群体的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的参比水平进行比较；或者
(a2)将proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的所述水平与从前期分析获得的同一对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平进行比较；并且
(b)在步骤(a1)或(a2)中的比较的基础上分别鉴定所述对象的细胞外容量状态、血球容量状态、体液平衡和/或盐平衡。
3.权利要求2的方法，其中所述参比对象是健康对象。
4.权利要求3的方法，其中
(i)所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比升高，表明所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态；
(ii)所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比一致或相近，表明所述对象具有一致或相近的体液平衡和/或一致或相近的盐平衡；其中所述一致的体液平衡和/或盐平衡表明所述对象具有正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态；和/或
(iii)所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比降低，表明所述对象具有负体液平衡和/或负盐平衡。
5.权利要求2的方法，其中所述参比对象是患有已知与危急细胞外容量状态相关的疾病或病症例如动脉瘤、多发性创伤、脑损伤和/或头部损伤的对象，或者其中所述参比对象是患有腹膜炎伴有休克的手术后对象。
6.权利要求5的方法，其中
(i)所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比相近、一致或升高，表明所述对象具有正体液平衡、正盐平衡、危急血球容量状态和/或危急细胞外容量状态；和/或
(ii)所述对象的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平与所述参比水平相比降低，表明所述对象具有正常的体液平衡、正常的盐平衡、正常的细胞外容量状态和/或正常的血球容量状态。
7.前述权利要求任一项的方法，其中所述样品中1nmol/L或更高的proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平，指示了危急细胞外容量状态、危急血球容量状态、正盐平衡和/或正盐平衡。
8.前述权利要求任一项的方法，其中所述方法还包括
(i)确定血红蛋白的水平和/或血清总蛋白的水平；
(ii)确定所述对象的选自体重指数、体重、年龄和性别的至少一个参数；和/或
(iii)确定所述对象的选自下列的至少一种标志物和/或参数：所述样品中的proANP水平、总血容量水平、所述样品中的血细胞比容水平、红细胞容量水平、血浆容量水平、总尿液容量水平、所述样品中的血管紧张肽II水平、所述对象的患者组、所述样品中的皮质醇水平、血液中的内皮干细胞数目、所述样品中的儿茶酚胺水平、所述对象的全血离子图、所述对象的尿液离子图、所述对象的血液摩尔渗透压浓度、所述对象的尿液摩尔渗透压浓度、血糖、所述样品中的内皮素原-1(pro-ET-1)水平、所述样品中的CT-proAVP水平、所述样品中的醛甾酮水平、所述样品中的乳酸盐水平、所述对象的急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)、所述对象的世界神经外科学会联盟(WFNS)评级和所述对象的格拉斯哥昏迷量表(GCS)；或
(iv)确定所述对象的体重指数、所述对象的体重、所述对象的年龄、所述对象的性别、所述样品中的血红蛋白水平和所述样品中的血清总蛋白水平。
9.前述权利要求任一项的方法，其中所述对象患有脑损伤、动脉瘤、头部损伤、多发性创伤性损伤，和/或其中所述对象是手术后的。
10.前述权利要求任一项的方法，其中所述样品是血液、血浆、血清或尿液。
11.前述权利要求任一项的方法，其中proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的所述水平通过免疫测定法来确定，其中所述测定法在均相或非均相中进行。
12.用于对象中的病症或医学病状的体外诊断、预后、风险评估、风险分层、疗法控制和/或手术控制的方法，其中所述对象的细胞外容量状态通过前述权利要求任一项的方法来确定，
任选地其中所述病症或医学病状选自水肿、脑损伤、动脉瘤后破裂、头部损伤、神经功能缺损、多发性创伤性损伤、手术后、器官衰竭、淋巴流活动失调、肾功能障碍、心功能障碍、与体液平衡紊乱相关的疾病。
13.一种试剂盒的用途，其用于确定对象的细胞外容量状态、体液平衡、盐平衡和/或血球容量状态，其中所述试剂盒包含用于确定所述对象的样品中proADM或其所述片段、优选为MR-proADM的水平的一种或多种检测试剂，任选地其中所述检测试剂包含抗体，其中所述抗体之一被标记，并且另一种抗体被结合到固相或能够被选择性结合到固相。
14.权利要求13的用途，其中存在分散于液体反应混合物中的第一抗体和第二抗体，并且其中作为基于荧光或化学发光消光或扩增的标记系统的一部分的第一标记组分被结合到所述第一抗体，并且所述标记系统的第二标记组分被结合到所述第二抗体，使得在两种抗体结合到proADM或其所述片段、优选为MR-proADM之后，产生允许在测量溶液中检测所得到的夹心复合物的可测量信号，任选地其中所述标记系统包含与荧光或化学发光染料、特别是花青素类型的染料相组合的稀土穴合物或螯合物。
15.前述权利要求任一项的方法，其中所述proADM的片段选自MR-proADM、PAMP、肾上腺升压素和成熟的肾上腺髓质素，优选地所述片段是MR-proADM。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113056675A (zh) * 2018-08-08 2021-06-29 B.R.A.H.M.S有限公司 用于对具有感染性疾病症状的患者的需要住院的医学状况的风险进行预后的pro-ADM

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019018545A1 (en) 2017-07-18 2019-01-24 The Research Foundation For The State University Of New York BIOMARKERS OF INTRACRANIAL ANEVISM
EP3438668A1 (en) 2017-08-04 2019-02-06 B.R.A.H.M.S GmbH Diagnosis and risk stratification of fungal infections
JP7291688B2 (ja) * 2017-09-13 2023-06-15 ベー．エル．アー．ハー．エム．エス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 重篤患者における腎置換療法のための指標としてのアドレノメズリン前駆体
CA3075440A1 (en) * 2017-09-13 2019-03-21 B.R.A.H.M.S Gmbh Pro-adm as a therapy monitoring marker for critcally ill patients
EP3502691A1 (en) * 2017-12-20 2019-06-26 B.R.A.H.M.S GmbH Proadrenomedullin as indicator for renal replacement therapy in critically ill patients
ES2909399T3 (es) 2017-09-13 2022-05-06 Brahms Gmbh Proadrenomedulina como marcador de niveles anormales de plaquetas
EP3729083A1 (en) * 2017-12-20 2020-10-28 B.R.A.H.M.S GmbH Antibiotic therapy guidance based on pro-adm
EP3578989A1 (en) * 2018-06-06 2019-12-11 B.R.A.H.M.S GmbH Pro-adm for prognosis of trauma-related complications in polytrauma patients
WO2020017013A1 (ja) * 2018-07-19 2020-01-23 Ｐｏｓｈ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ株式会社 検出装置、シートベルト、及び運転手監視システム
US10971255B2 (en) * 2018-09-14 2021-04-06 Zasti Inc. Multimodal learning framework for analysis of clinical trials
US11101043B2 (en) 2018-09-24 2021-08-24 Zasti Inc. Hybrid analysis framework for prediction of outcomes in clinical trials
US20230184786A1 (en) * 2020-03-20 2023-06-15 FORSYTH DENTAL INFIRMARY FOR CHILDREN, d/b/a THE FORSYTH INSTITUTE Methods of Detecting and Treating Immune Responses Associated with Viral Infection
KR102544219B1 (ko) * 2021-08-17 2023-06-14 한림대학교 산학협력단 코펩틴의 농도를 이용한 외상성 뇌 손상의 진단 방법
CN114612799B (zh) * 2022-03-11 2022-09-16 应急管理部国家自然灾害防治研究院 基于滑坡/非滑坡面积比的空间自适应正负样本生成方法及系统

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004004638A2 (en) * 2002-07-02 2004-01-15 Galileo Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for reduction of inflammatory symptoms and/or biomarkers in female subjects
CN1984668A (zh) * 2004-05-14 2007-06-20 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 作为涉及盐和/或体液稳态的疾病的治疗剂和诊断剂的尿鸟苷蛋白原及合成的类似物或自其衍生的蛋白酶解产物
CN101025414A (zh) * 2006-02-21 2007-08-29 郑州市精科分析仪器有限公司 一种激光血球计数仪
CN101825627A (zh) * 2009-03-02 2010-09-08 江苏迈迪基因生物科技有限公司 心力衰竭的生物标志物的联合并行检测方法及诊断试剂盒
CN102203621A (zh) * 2008-10-22 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于初次慢性肾脏疾病的发展的预后生物标志物
CN102203608A (zh) * 2008-10-31 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于与代谢综合征、心血管疾病和/或胰岛素抗性相关的病症的诊断、预后、监测和治疗追踪的体外方法
CN102317790A (zh) * 2008-11-11 2012-01-11 B.R.A.H.M.S有限公司 通过测定adm和bnp的水平在患有心力衰竭的患者中进行预后和风险评估
CN103119446A (zh) * 2010-06-18 2013-05-22 B.R.A.H.M.S有限公司 预测癌症发生的生物标志物
WO2013072514A1 (en) * 2011-11-16 2013-05-23 Adrenomed Ag Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for regulating the fluid balance in a patient having a chronic or acute disease
CN104067130A (zh) * 2011-11-16 2014-09-24 斯弗因高泰克有限公司 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法
CN104144948A (zh) * 2011-11-16 2014-11-12 艾德里诺医药公司 用于治疗的抗肾上腺髓质素(ADM)抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig骨架
CN104198735A (zh) * 2006-11-08 2014-12-10 布拉姆斯有限公司 使用MR-proADM的糖尿病诊断和风险分级
US20150192595A1 (en) * 2006-11-09 2015-07-09 Brahms Gmbh Methods of diagnosis and risk stratification of adverse events in post myocardial infarction patients using pro-adrenomedullin
CN105102985A (zh) * 2013-03-20 2015-11-25 斯弗因高泰克有限公司 用于指导血压下降疗法的肾上腺髓质素

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2570703B1 (fr) 1984-09-26 1988-07-08 Commissariat Energie Atomique Complexes macropolycycliques de terres rares et application a titre de marqueurs fluorescents
US4882733A (en) 1987-03-13 1989-11-21 Ford Aerospace Corporation Method and apparatus for combining encoding and modulation
FR2664699B1 (fr) 1990-07-13 1995-08-18 Cis Bio Int Procede d'amplification du signal d'emission d'un compose luminescent.
DE10316583A1 (de) * 2003-04-10 2004-10-28 B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft Bestimmung eines midregionalen Proadrenomedullin-Teilpeptids in biologischen Flüssigkeiten zu diagnostischen Zwecken, sowie Immunoassays für die Durchführung einer solchen Bestimmung
DE102006034142A1 (de) * 2006-07-24 2008-01-31 B.R.A.H.M.S. Aktiengesellschaft Verfahren zur Steuerung der Therapie von Patienten mit Herzinsuffizienz anhand der vitro Bestimmung von Schwellenwerten von vasoaktiven Peptiden
DE102007022367A1 (de) 2007-05-07 2008-11-20 B.R.A.H.M.S Ag Verfahren zur Bestimmung von aminoterminalen pro-ANP bei übergewichtigen Patienten
EP2108958A1 (en) 2008-04-09 2009-10-14 B.R.A.H.M.S. Aktiengesellschaft Pro-Endothelin-1 for the prediction of impaired peak oxygen consumption
WO2010128071A1 (en) * 2009-05-05 2010-11-11 Brahms Ag Vasoactive hormone-based stratification of patients suffering from diseases related to endothelial function/dysfunction

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004004638A2 (en) * 2002-07-02 2004-01-15 Galileo Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for reduction of inflammatory symptoms and/or biomarkers in female subjects
CN1984668A (zh) * 2004-05-14 2007-06-20 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 作为涉及盐和/或体液稳态的疾病的治疗剂和诊断剂的尿鸟苷蛋白原及合成的类似物或自其衍生的蛋白酶解产物
CN101025414A (zh) * 2006-02-21 2007-08-29 郑州市精科分析仪器有限公司 一种激光血球计数仪
CN104198735A (zh) * 2006-11-08 2014-12-10 布拉姆斯有限公司 使用MR-proADM的糖尿病诊断和风险分级
US20150192595A1 (en) * 2006-11-09 2015-07-09 Brahms Gmbh Methods of diagnosis and risk stratification of adverse events in post myocardial infarction patients using pro-adrenomedullin
CN102203621A (zh) * 2008-10-22 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于初次慢性肾脏疾病的发展的预后生物标志物
CN102203608A (zh) * 2008-10-31 2011-09-28 B.R.A.H.M.S有限公司 用于与代谢综合征、心血管疾病和/或胰岛素抗性相关的病症的诊断、预后、监测和治疗追踪的体外方法
CN102317790A (zh) * 2008-11-11 2012-01-11 B.R.A.H.M.S有限公司 通过测定adm和bnp的水平在患有心力衰竭的患者中进行预后和风险评估
CN101825627A (zh) * 2009-03-02 2010-09-08 江苏迈迪基因生物科技有限公司 心力衰竭的生物标志物的联合并行检测方法及诊断试剂盒
CN103119446A (zh) * 2010-06-18 2013-05-22 B.R.A.H.M.S有限公司 预测癌症发生的生物标志物
CN104067130A (zh) * 2011-11-16 2014-09-24 斯弗因高泰克有限公司 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法
CN104144948A (zh) * 2011-11-16 2014-11-12 艾德里诺医药公司 用于治疗的抗肾上腺髓质素(ADM)抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig骨架
WO2013072514A1 (en) * 2011-11-16 2013-05-23 Adrenomed Ag Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for regulating the fluid balance in a patient having a chronic or acute disease
CN105102985A (zh) * 2013-03-20 2015-11-25 斯弗因高泰克有限公司 用于指导血压下降疗法的肾上腺髓质素

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MEGHAN M. TAYLOR等: "Adrenomedullin and the integrative physiology of fluid and electrolyte balance", 《MICROSCOPY RESEARCH AND TECHNIQUE》 *
MEGHAN M. TAYLOR等: "Ribozyme compromise of adrenomedullin mRNA reveals a physiological role in the regulation of water intake", 《AM J PHYSIOL REGULATORY INTEGRATIVE COMP PHYSIOL》 *
MIRJAM CHRIST-CRAIN等: "Mid-regional pro-adrenomedullin as a prognostic marker in sepsis an observational study", 《CRITICAL CARE》 *
SOHAIL Q. KHAN等: "Prognostic Value of Midregional Pro-Adrenomedullin in Patients With Acute Myocardial Infarction", 《JOURNAL OF THE AMERICAN COLLEGE OF CARDIOLOGY》 *
余海等: "脑血管疾病急性期血浆ProAdM 153-185含量变化及其意义", 《中风与神经疾病杂志》 *
徐胜男等: "心力衰竭标志物中段肾上腺髓质素原测定的意义及应用前景", 《国际检验医学杂志》 *
苏加林等: "肾上腺髓质素前体不同肽段的心血管效应", 《基础医学与临床》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113056675A (zh) * 2018-08-08 2021-06-29 B.R.A.H.M.S有限公司 用于对具有感染性疾病症状的患者的需要住院的医学状况的风险进行预后的pro-ADM

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