CN108290947A

CN108290947A - 组合治疗及其用途和方法

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Publication number: CN108290947A
Application number: CN201680057421.5A
Authority: CN
Inventors: A.胡斯; D.考夫曼; E.皮涅罗; H.斯特鲁姆佩尔; N.雅纳曼德拉
Original assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd; Schering Corp
Current assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd; Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2015-08-04
Filing date: 2016-08-03
Publication date: 2018-07-17
Also published as: AU2016303550A1; BR112018002436A2; EP3331916A1; RU2018107693A; WO2017021910A1; US20190023791A1; KR20180036996A; JP2018522044A; CA2994635A1; AU2016303550B2

Abstract

本发明提供在有需要的人中治疗癌症的方法，包括向人给药：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；和治疗有效量的结合至人PD‑1的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

Description

组合治疗及其用途和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年8月4日提交的美国申请序列号62/200,779和2015年8月13日提交的美国申请序列号62/204,555的优先权。优先权申请的公开视为本申请公开的一部分(且在此引入作为参考)。

序列表

本申请包含序列表，其以ASCII格式电子提交且以其整体在此引入作为参考。所述ASCII拷贝，在2016年7月29日创建，命名为PU65945PCT_SL.txt且大小为110,170字节。

技术领域

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法，以及涉及用于这种治疗的组合。特别是，本发明涉及抗OX40抗原结合蛋白(ABP)(包括人OX40的单克隆抗体)和一种或多种抗PD-1ABP(包括人PD-1的单克隆抗体)的组合。

背景技术

对过度增殖疾病包括癌症的有效治疗一直是肿瘤学领域的目标。一般而言，癌症由控制细胞分裂、分化和细胞凋亡的正常过程中的失调而产生，且其特征为恶性细胞的增殖，其具有无限生长、局部扩张和全身转移的潜力。正常过程的失调包括信号转导途径的异常，以及对与不同于正常细胞中所发现的那些的因子的反应。

免疫疗法为治疗过度增生疾病的方法之一。科学家和临床医生在各种类型的癌症免疫疗法的开发上已遇到的主要障碍为打破对自身抗原(癌症)的耐受性，以产生强大的抗肿瘤反应，使肿瘤消退。与靶标为肿瘤的小分子与大分子药剂的传统开发不同，癌症免疫疗法靶向免疫系统的细胞，其具有产生效应细胞记忆池的潜力，以诱发更持久的效应并使复发最小化。

OX40为涉及免疫系统的多种过程的共刺激分子。结合至OX40受体并调节OX40信号传递的抗原结合蛋白与抗体是本领域已知的，并已公开作为用于如癌症的免疫疗法。

PD-1配体PD-L1和PD-L2与T细胞上发现的PD-1受体的结合抑制了T细胞增殖和细胞因子的产生。PD-1配体的上调发生在一些肿瘤中，并且通过该途径的信号传导可有助于抑制活性T细胞对肿瘤的免疫监视。结合PD-1受体并阻断其与PD-L1和PD-L2相互作用的抗原结合蛋白和抗体可以释放对PD-1途径介导的免疫应答包括抗肿瘤免疫应答的抑制。

增强抗肿瘤的T细胞功能和诱导T细胞增殖是治疗癌症的一种强有力的新方法。目前市场上有三种免疫肿瘤学抗体(例如免疫调节剂)。认为抗CTLA-4(/伊匹单抗)在T细胞启动时可以增强免疫反应，并且认为抗PD-1抗体(/纳武单抗和/派姆单抗)在局部肿瘤微环境中起作用，其通过在已经被引发和激活的肿瘤特异性T细胞中释放抑制性检查点。

尽管最近在癌症治疗上已有许多进展，但仍需要更有效和/或增强的治疗患有癌症的个体的疗法。本发明的涉及组合疗法以增强抗肿瘤免疫性的组合与方法可解决此需求。

发明内容

本发明提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，包括给药治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO.7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO.9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，和派姆单抗，或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体。本发明还提供了药物组合物和试剂盒，其包含结合至人OX40的单克隆抗体和派姆单抗。

本发明进一步提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，包括给药治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，该单克隆抗体包含VH(可变重链)区和VL(可变轻链)区，该VH(可变重链)区包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL(可变轻链)区包括与SEQ IDNO:10的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；以及给药派姆单抗，或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体。本发明还提供药物组合物和试剂盒，其包含结合至人OX40的单克隆抗体和派姆单抗。

本发明还提供在有需要的人中治疗癌症的方法，包括给药治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，该单克隆抗体包含VH(可变重链)区和VL(可变轻链)区，该VH(可变重链)区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL(可变轻链)区包括与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；以及给药派姆单抗，或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体。本发明还提供药物组合物和试剂盒，其包含结合至人OX40的单克隆抗体和派姆单抗。

本发明还提供在患有癌症的人中减小肿瘤大小的方法，包括向所述人给药治疗有效量的抗体106-222和治疗有效量的派姆单抗。

在一些方面，本发明提供在有需要的人中治疗癌症的方法，包括向人给药:

治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；和

治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一些实施方案中，结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ IDNO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述癌症为实体瘤。在一些实施方案中，所述癌症选自：黑素瘤、肺癌、肾癌、乳腺癌、头颈癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌和胃癌。

在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和所述结合至人PD-1的单克隆抗体同时给药。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体和所述结合至人PD-1的单克隆抗体以任何顺序相继给药。

在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和/或结合至人PD-1的单克隆抗体静脉内给药。

在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和/或结合至人PD-1的单克隆抗体瘤内给药。

在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体以约0.1mg/kg至约10mg/kg的剂量给药。

在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体以选自以下的频率给药：每天一次，每周一次，每两周一次(Q2W)，和每三周一次(Q3W)。

在一些实施方案中，所述结合至人PD-1的单克隆抗体以约200mg的剂量给药。

在一些实施方案中，所述结合至人PD-1的单克隆抗体以每三周一次给药。

在一些方面，本发明提供在患有癌症的人中减小肿瘤大小的方法，包括向所述人给药：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；和治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述人根据RECIST 1.1版本显示完全反应或部分反应。

在一些实施方案中，在静脉内给药结合至人OX40的单克隆抗体结束后的至少1小时且不超过2小时开始将所述结合至人PD-1的单克隆抗体静脉内给药至人。

在一些方面，本发明提供药物组合物或试剂盒，其包含

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些方面，本发明提供组合试剂盒，其包含本发明所述的药物组合物或试剂盒以及一种或多种药学可接受的载体。

在一些方面，本发明提供本发明所述的药物组合物或试剂盒在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在一些方面，本发明提供用于治疗癌症的试剂盒，其包含:

治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；和

用于治疗癌症的说明书。

在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体和所述结合至人PD-1的单克隆抗体各自单独与一种或多种药学可接受的载体一起配制。

在一些方面，本发明提供：

治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，其用于(例如，同时或相继用于)在有需要的人中治疗癌症。

在一些实施方案中，所述结合至人PD-1的单克隆抗体每三周一次给药。

在一些方面，本发明提供：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；和治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，其用于(例如，同时或相继用于)在患有癌症的人中减少肿瘤大小。

在一些实施方案中，在静脉内给药结合至人OX40的单克隆抗体结束后的至少1小时且不超过2小时开始将所述结合至人PD-1的单克隆抗体静脉内给药于人。

在一些方面，本发明提供以下在制备用于在有需要的人中治疗癌症的药物中的用途(例如，同时或相继使用)：

在一些方面，本发明提供以下在制备用于在患有癌症的人中减少肿瘤大小的药物中的用途(例如，同时或相继使用)：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；和治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，。

附图简述

图1-12显示本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP的序列，例如CDR和VH和VL序列。

图13a和b是一对线图，显示OX86单药疗法导致非临床小鼠模型中存活率的统计学显著增加；(a)测试的所有剂量水平和(b)5μg(微克)剂量。

图14是显示CT26同基因型小鼠肿瘤模型中的OX86和抗PD1的线图：组合疗法vs.单药疗法。

图15是显示研究设计的示意图。

图16是显示同时施用PD-1拮抗剂和OX40激动剂的抗肿瘤作用的一系列的四个图。在携带MC38肿瘤的小鼠中，组合治疗优于任何使用单独药物的单药疗法。CR(完全反应)；PR(部分反应)。实验细节在实施例2中描述。

发明详述

组合物和组合

免疫系统功能的改善是癌症免疫治疗的一个目标。尽管不受理论束缚，但是认为为了激活免疫系统并且有效地引起肿瘤消退或消除，在免疫系统的各个部分之间以及在肿瘤床必须存在有效的交流(cross-talk)。杀肿瘤作用取决于一个或多个步骤，例如，未成熟树突细胞摄取抗原和在引流淋巴结中通过成熟树突细胞经由MHC I和II分别向初始CD8(细胞毒性)和CD4(辅助)淋巴细胞呈递加工的抗原(在引流淋巴结)。初始T细胞表达与抗原呈递细胞(APC)如树突细胞上的B7家族的共刺激分子结合的分子，如CTLA-4和CD28。为了在免疫监视过程中保持T细胞受检测，APC上的B7优先结合T淋巴细胞上的抑制性分子CTLA-4。然而，当T细胞受体(TCR)与I类或II类MHC受体通过APC上的同源肽呈递而接合时，共刺激分子与CTLA-4脱离，并且反而与较低亲和力的刺激性分子CD28结合，导致T细胞活化和增殖。这种扩大的被诱导的T淋巴细胞群体保留了在其接近远处肿瘤部位时保留了对呈递给它们的抗原的记忆。在遇到携带同源抗原的肿瘤细胞时，它们通过细胞溶解介质如粒酶B和穿孔素消除肿瘤。这种显然简单化的事件顺序高度依赖于几种细胞因子、共刺激分子和检查点调节剂来激活和分化这些被诱导的T淋巴细胞成为可以消除肿瘤的细胞记忆池。

因此，一种新兴的免疫治疗策略为靶向T细胞共刺激分子，如OX40。OX40(例如人OX40(hOX40)或hOX40R)为肿瘤坏死因子受体家族的成员，其尤其在活化的CD4与CD8 T细胞中表达。其功能之一为这些细胞的分化与长期存活。OX40的配体(OX40L)由经活化的抗原呈递细胞表达。不希望被理论束缚，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP调节OX40且促进T细胞的生长和/或分化并增加长期记忆T-细胞群体，例如以与OX40L重叠的机理，其通过“接合”OX40。因此，在本发明的组合的ABP、或其方法或用途的一个实施方案中，结合并接合OX40。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP调节OX40。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的ABP通过模拟OX40L调节OX40。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP为激动剂抗体。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP调节OX40且引起T细胞增殖。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP调节OX40且改善、扩大、加强或增加CD4 T细胞的增殖。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，改善、扩大、加强或增加CD8 T细胞的增殖。在进一步的实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP改善、扩大、加强或增加CD4和CD8 T细胞的增殖。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP增强T细胞功能，例如CD4或CD8 T细胞的功能，或CD4和CD8T细胞二者的功能。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，增强效应T细胞功能。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP改善、扩大、加强或增加CD8T细胞的长期存活。在其它实施方案中，前述效应的任一者皆在肿瘤微环境下发生。

不被理论所束缚，同样重要的是在肿瘤位点处通过T调节细胞(Treg)以及肿瘤本身产生的媒介物(如转化生长因子(TGF-B)与白介素-10(IL-10))阻断潜在的强免疫抑制反应。不被理论所束缚，癌症的重要免疫致病机制可涉及Treg，其发现于肿瘤床与发炎位置。一般而言，Treg细胞天然发生于循环系统，并即使是在警觉状态、在遇到并消除外部病原体后也可帮助免疫系统回复静默。它们帮助维持对自体抗原的耐受性，且具有天然抑制性功能。它们表型表征为CD4+、CD25+、FOXP3+细胞。不被理论所束缚，但为了破坏耐受性以有效治疗某些癌症，治疗的一种模式为优先在肿瘤位点消除Treg。与具有较差免疫原性的肿瘤相比较，靶向并消除Treg在免疫原性的肿瘤上能更成功地导致抗肿瘤反应。许多肿瘤会分泌细胞因子，如TGF-B，其可通过导致前体CD4+25+细胞获得FOXP3+表型与Treg那样的功能而阻碍免疫应答。

本发明所用的“调节”，例如在关于受体或其他靶标时，是指改变该受体的任何天然或已有的功能，例如其是指影响天然或人造配体与该受体或靶标的结合；其包括启动任何部分或全部的构象变化或通过受体或靶标进行信号传递，还包括防止该受体或靶标与其天然或人造配体的部分或完全结合。在膜结合受体或靶标的情况下还包括，与其自然或未改变的状态相比，受体或靶标与膜内其他蛋白或分子作用方式改变，或在膜隔室内的任何定位(或与其他分子共定位)的改变。因此，调节子为调节靶标或受体的化合物或配体或分子。“调节”包括激动(agonizing)如信号传递，以及拮抗或阻断在未改变或未调节状态时发生的信号传递或与配体或化合物或分子的相互作用。因此，调节子可为激动剂或拮抗剂。此外，本领域技术人员应了解到并非所有调节子皆对一种靶标或受体具有绝对选择性，但仍被视为该靶标或受体的调节子；例如，调节子也可接合至多个靶点。

如本发明所用术语“激动剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共同信号传递受体接触时引起以下一项或多项：(1)刺激或激活受体，(2)增强、增加或促进、诱导或延长受体的活性、功能或存在(3)模拟与该靶标或受体作用的天然配体或分子的一种或多种功能，并包括引发经由该受体的一个或多个信号传递事件、模拟天然配体的一种或多种功能、启动一个或多个在已知经由该受体的功能或信号传递中可见的部分或完全构象变化，和/或(4)增强、增加、促进或诱导受体的表达。激动剂活性可通过本领域已知的各种测定进行体外测量，例如但不限于，测量细胞信号传递、细胞增殖、免疫细胞活化标记物、细胞因子产生。激动剂活性也可以通过测量替代终点的各种测定来进行体内测量，例如但不限于测量T细胞增殖或细胞因子生成。

如本发明所用术语“拮抗剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共同信号传递受体接触时引起以下一项或多项：(1)通过其天然配体减弱、阻断或灭活受体和/或阻断受体的活化，(2)减少、降低或缩短受体的活性、功能或存在和/或(3)减少、降低、废除受体的表达。拮抗剂活性可以通过本领域已知的各种测定来测量，例如但不限于，测量细胞信号传递、细胞增殖、免疫细胞活化标记物、细胞因子产生的增加或减少。拮抗剂活性也可以通过测量替代终点的各种测定来进行体内测量，例如但不限于测量T细胞增殖或细胞因子产生。

因此，在一个实施方案中，激动剂抗OX40ABP抑制Treg细胞对其它T细胞的抑制作用，例如在肿瘤环境中。

越来越多的证据表明肿瘤中Treg与T效应细胞的比例与抗肿瘤反应相关。因此，在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的OX40ABP(抗OX40ABP)调节OX40，以扩增T效应子(effector)数目与功能，并抑制Treg功能。

增强、扩增、增进、增加或者改变OX40的抗肿瘤作用为本发明的组合或其方法或用途的目标。本发明描述了本发明的组合或其方法或用途的抗OX40ABP与另一化合物例如本发明所述的PD-1调节子(例如抗PD-1ABP)的组合。

因此，如本发明所用术语“本发明的组合”是指包含抗OX40ABP(适当地为激动剂抗OX40ABP)和抗PD-1ABP(适当地为拮抗剂抗PD-1ABP)的组合，如本发明所述，其各自可分开或同时给药。

本发明所用的术语"癌症"、"新生物"与"肿瘤"可互相交换使用，且可为单一或复数形式，是指已经过导致异常或无调控的生长或过度增殖的恶性转化或细胞变化的细胞。此种变化或恶性转化通常会使此类细胞对宿主有机体有致病性，因此也预期包括会或可能会变成致病性且需要或可受益于干预的前期癌变或癌前细胞。原发性癌细胞(即，从恶性转化部位附近取得的细胞)可通过已确认的技术例如组织学检查而与非癌细胞区分。本发明所用的癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，也包括衍生自癌细胞祖先(ancestor)的任何细胞。这包括转移性癌细胞、体外培养物和衍生自癌细胞的细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，"临床上可检测"的肿瘤为在肿瘤块的基础上可检测的那些；例如通过如CAT扫描、MR成像、X-射线、超声或触诊的操作，和/或因为由病患取得的样本中一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测的肿瘤。换言之，本发明的术语包括细胞、新生物、癌症和任何阶段的肿瘤，包括临床所指的癌前期、肿瘤、原位生长、以及晚期转移性生长。肿瘤可为血液肿瘤，例如血细胞肿瘤等，即为液体肿瘤。基于此类肿瘤的临床病症的具体实例包括白血病如慢性髓细胞性白血病或急性髓细胞性白血病；骨髓瘤如多发性骨髓瘤；淋巴瘤等。

如本发明所述，术语“药剂”是指在组织、系统、动物、哺乳动物、人类或其他受试者中产生期望的作用的物质。因此，术语“抗肿瘤剂”是指在组织、系统、动物、哺乳动物、人或其他受试者中产生抗肿瘤作用的物质。术语“药剂”可为单一化合物或二种或多种化合物的组合或组合物。

如本发明所使用的，术语“治疗”及其相关表述表示治疗性治疗。当涉及具体的病症时，治疗表示：(1)改善该病症或该病症的一个或多个生物学表现，(2)干扰(a)引起或造成该病症的生物学级联中的一个或多个点，或(b)该病症的一个或多个生物学表现，(3)减轻与该病症相关的一种或多种症状、作用或副作用或与该病症或其治疗相关的一种或多种症状、作用或副作用，或者(4)减缓该病症的进展，或者减缓该病症的一个或多个生物学表现，和/或(5)通过消除或减少所述病症的一种或多种生物表现至检测不到的水平达一定时间(认为是所述表现的缓解状态的时间段且在该缓解期间没有额外治疗)来治愈所述病症或所述病症的一种或多种生物表现。本领域技术人员将理解被认为是特定疾病或病症缓解的持续时间。预防性治疗也因此被考虑。本领域技术人员将理解“预防”不是绝对术语。在医学上，“预防”应理解为是指预防性施用药物以显著降低病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延迟此类病症或其生物表现的发生。例如，当受试者被认为具有发生癌症的高风险时，如当受试者具有强癌症家族史或当受试者接触致癌物时，预防性治疗是合适的。

如本发明所述，“预防”是指预防性给药以显著降低病症或其生物学表现的可能性或严重性，或者以延缓这种病症或其生物学表现的发作。本领域技术人员将理解“预防”不是绝对术语。例如，当受试者被认为处于患癌症的高风险时，例如当受试者具有强癌症家族史时或者当受试者已经暴露于致癌物质时，预防性治疗是合适的。

如本发明所使用的，术语“有效量”表示引发例如研究者或临床医师所追求的组织、系统、动物或人的生物学或药学反应的药物或药剂的量。此外，术语“治疗有效量”表示，与没有接受该量的相应受试者相比，引起疾病、病症或副作用的改进治疗、治愈、预防或减轻的量，或者使疾病或病症的进展速率降低的量。该术语还包括在其范围内有效地增强正常生理功能的量。

给药治疗有效量的本发明的组合(或治疗有效量的组合的各组分)相对于单个的组分化合物是有利的，因为与单独给药治疗有效量的的组分化合物相比，该组合将会提供一个或多个下列改进的性质：i)与活性最大的单个药物(agent)相比有更高的抗癌作用，ii)协同的或高度协同的抗癌活性，iii)提供增强的抗癌活性和减少的副作用的给药方案，iv)毒性作用减少，v)治疗窗口增加，或者vi)组分化合物中的一个或两者的生物利用度增加。

本发明进一步提供药物组合物，其包括一种或多种本发明的组分，以及一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明的组合可包含两种药物组合物，一种包含本发明的抗OX40ABP，适当地为激动剂抗OX40ABP，且另一种包含抗PD-1ABP，适当地为拮抗剂抗PD-1ABP，每一种皆具有相同或不同的载体、稀释剂或赋形剂。该载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中其他组分相容，能够形成药用制剂，以及对其接受者无害。

本发明组合物的组分以及包含这些组分的药物组合物，可以任何顺序以及不同途径给药；所述组分和包含这些的药物组合物可同时给药。

依据本发明的另一方面，提供一种制备药物组合物的方法，包括使本发明组合的组分与一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

本发明组分可以任一适当途径给药。就某些组分而言，适当的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服和舌下)、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。应理解优选途径可随着例如该组合的受试者的病症和所治疗的癌症而变化。还应理解各个药物可以通过相同或不同的途径给药，各组分可以一起配制或位于独立的药物组合物中。

在一个实施方案中，本发明组合中的一种或多种组分静脉内给药。在另一实施方案中，本发明组合中的一种或多种组分瘤内给药。在另一实施方案中，本发明组合中的一种或多种组分全身性给药，如静脉内，以及本发明组合中的一种或多种组分其它瘤内给药。在另一实施方案中，本发明组合中的所有组分全身性给药，如静脉内。在另一实施方案中，本发明组合中的所有组分瘤内给药。在该实施方案的任一者中，如在此段中，本发明的各组分以一种或多种药物组合物方式给药。

结合OX40的抗原结合蛋白

“抗原结合蛋白(ABP)”是指结合至抗原的蛋白，包括抗体或功能类似于抗体的工程化的分子。此替代抗体形式包括三链抗体、四链抗体、微型抗体和微抗体。也包括另一种支架，其中本发明任一分子的一个或多个CDR可被排列到适当的非免疫球蛋白支架或骨架上，如亲和体(affibody)、SpA支架、LDL受体A类结构域、avimer(参见如美国专利申请公开号2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301)或EGF结构域。ABP还包括此抗体或其他分子的抗原结合片段。此外，本发明的组合、或其方法或用途的ABP可包含全长抗体形式的VH区、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位(biparatopic)分子或其等效物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)(当与适当轻链配对时)。ABP可包括抗体，其为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；或IgM；IgA、IgE或IgD或其经修饰的变体。可相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定结构域可为κ或λ恒定结构域。ABP也可为WO86/01533中所描述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区以及非免疫球蛋白区。

因此，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP或蛋白质结合至OX40，且在优选的实施方案中，具有以下一种或多种功能：调节通过OX40的信号传递、调节OX40功能、激动OX40信号传递、刺激OX40功能，或共刺激OX40信号传递。本领域技术人员应容易了解到，有多种已知试验可建立此类功能。

本发明所用的术语“抗体”是指具有抗原结合结构域、以及任选地具有免疫球蛋白-样结构域或其片段的分子，并包括单克隆(如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE，及其经修饰的变体)、重组、多克隆、嵌合、人源化、双互补位(biparatopic)、双特异性与异缀合(heteroconjugate)抗体，或封闭构象的多特异性抗体。“抗体”包括异种的、同种异体的、同源的，或它们的其它修饰形式。抗体可为经分离或经纯化的。抗体也可为重组的，即以重组方式制造；例如，与参考抗体具有90％同一性的抗体可通过使用本领域已知的重组分子生物学技术使特定残基突变而产生。因此，本发明抗体可包含本发明的组合、或其方法或用途的重链可变区与轻链可变区，其可为天然抗体结构的形式，或为全长重组抗体、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位分子或其等效物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)的形式(当与适当轻链配对时)。该抗体可为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其经修饰的变体。可相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定结构域可为κ或λ恒定结构域。抗体也可为WO86/01533中所描述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区，以及非免疫球蛋白区。

本领域技术人员将认识到本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP结合OX40的表位；类似地，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP结合PD-1的表位。ABP的表位为ABP所结合的其抗原的区域。如果两种ABP各自竞争性地抑制(阻断)另一种与抗原的结合，则这两种ABP结合至相同或重叠的表位。即，于竞争性结合测试中测得，与缺乏竞争抗体的对照相比，1x、5x、10x、20x或100x过量的一种抗体抑制另一种的结合达至少50％、但优选75％、90％或甚至99％(参见例如，Junghans等人,Cancer Res.50:1495，1990)。此外，如果抗原中基本上所有降低或消除与一种抗体的结合的氨基酸突变也会降低或消除与另一种抗体的结合，则两种抗体具有相同的表位。此外，相同的表位可包括“重叠的表位”，例如，如果一些降低或消除与一种抗体的结合的氨基酸突变也会降低或消除与另一种的结合。

结合强度对于本发明的组合、或其方法或用途的ABP的给药和施用是重要的。在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体以高亲和力结合至其靶点(例如OX40或PD-1)。例如，当以Biacore测量时，所述抗体以1-1000nM或500nM或更少的亲和力、或200nM或更少的亲和力、或100nM或更少的亲和力、或50nM或更少的亲和力、或500pM或更少的亲和力、或400pM或更少的亲和力、或300pM或更少的亲和力结合至OX40，优选人OX40。在另一方面，当以BIACORE测量时，所述抗体以约50nM至约200nM或约50nM至约150nM的亲和力结合至OX40，优选人OX40。在本发明一个方面，所述抗体以少于100nM的亲和力结合至OX40，优选人OX40。

在另一实施方案中，结合通过BIACORE测量。亲和力为一种分子例如本发明的组合、或其方法或用途的抗体，与另一种分子例如其靶抗原，在单一结合位点的结合强度。抗体与其靶点的结合亲和力可通过平衡法(例如，酶联免疫吸收剂测试(ELISA)或放射免疫测定法(RIA))、或动力学(例如，BIACORE分析)测定。例如，本领域已知的BIACORE方法可用于测量结合亲和力。

亲合力是两种分子在多个位点上彼此结合的强度的总和，例如考虑到相互作用的效价。

在一个方面，本发明的组合、或其方法或用途的ABP与OX40(优选人OX40)相互作用的平衡解离常数(KD)为100nM或更少，10nM或更少，2nM或更少或1nM或更少。或者，KD可为5至10nM之间；或1至2nM。KD可为1pM至500pM；或500pM至1nM。技术人员将认识到KD数值越小，结合越强。KD的倒数(即1/KD)是单位为M^-1的平衡缔合常数(KA)。技术人员将认识到，KA数值越大，结合越强。

解离速率常数(kd)或“解离速率”描述了一方面为ABP且另一方面为OX40(优选人OX40)的复合物的稳定性，即，每秒衰减的复合物分数。例如，0.01s^-1的kd相当于每秒衰减1％的复合物。在一个实施方案中，解离速率常数(kd)为1x10^-3s^-1以下、1x10^-4s^-1以下、1x10^-5s^-1以下或1x10^-6s^-1以下。kd可为1x10^-5s^-1至1x10^-4s^-1；或1x10^-4s^-1至1x10^-3s^-1。

本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP或抗体与参考抗体在例如结合OX40、OX40的表位或OX40的片段方面的竞争可以通过竞争性ELISA、FMAT或BIAcore测定。在一方面，通过BIAcore进行竞争测定。这种竞争有几个可能的原因：两种蛋白质可结合至相同或重叠的表位；可存在对结合的立体位阻；或第一种蛋白的结合可以诱导抗原中的构象变化，其阻止或减少了第二种蛋白的结合。

本发明使用的“结合片段”是指本发明的组合、或其方法或用途的ABP的部分或片段，其包括抗原结合位点且能够结合本发明定义的OX40，例如但不限于能够结合至亲本或全长抗体的相同表位。

本发明的组合、或其方法或用途的ABP的功能性片段在本发明的考虑之内。

因此，“结合片段”和“功能性片段”可为缺乏完整抗体的Fc片段的Fab和F(ab')2片段，其更快速地从循环中清除，且可具有比完整抗体更少的非特异性组织结合(Wahl等人，J.Nuc.Med.24:316-325(1983))。还包括Fv片段(Hochman等人，Biochemistry 12:1130-1135(1973)；Sharon等人，Biochemistry 15:1591-1594(1976))。这些不同片段使用常规技术如蛋白酶裂解或化学裂解制备(参见，例如，Rousseaux，等人，Meth.Enzymol.，121:663-69(1986))。

本发明所用的“功能性片段”是指本发明的组合、或其方法或用途的ABP的部分或片段，其包括抗原结合位点且能够与亲本ABP或抗体结合相同的靶标，例如但不限于，结合相同的表位，并且还保留本发明描述的或本领域已知的一种或多种调节或其他功能。

由于本发明的ABP可以包含可为天然抗体的结构的形式的本发明的组合、或其方法或用途的重链可变区和轻链可变区，所以功能性片段是保留了结合或如本发明所述的全长ABP或抗体的一种或多种功能的片段。因此，本发明的组合、或其方法或用途的ABP的结合片段可包含VL或VH区、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位分子的片段或其等同物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)(当与适当的轻链配对时)。

本发明所用的术语“CDR”是指抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链CDR和三个轻链CDR(或CDR区)。

本领域技术人员应了解到，CDR序列有各种编号约定；Chothia(Chothia等人，(1989)Nature 342：877-883)、Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,4th Ed.,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))、AbM(University of Bath)与Contact(University College London)。可确定使用Kabat、Chothia、AbM与contact法的至少二者所得的最小重叠区，以提供“最小结合单位”。最小结合单位可为CDR的次部分。抗体的结构与蛋白质折叠是指其他被视为CDR序列的部分的残基，且可由技术人员所理解。应注意到，某些CDR定义会随着所使用的各个公开而不同。

除非另有所述和/或没有特定指出的序列，本发明提及的“CDR”、“CDRL1”(或“LCCDR1”)、“CDRL2”(或“LC CDR2”)、“CDRL3”(或“LC CDR3”)、“CDRH1”(或“HC CDR1”)、“CDRH2”(或“HC CDR2”)、“CDRH3”(或“HC CDR3”)是指依据任何已知约定编号的氨基酸序列；此外，CDR是指可变轻链的“CDR1”、“CDR2”与“CDR3”，以及可变重链的“CDR1”、“CDR2”与“CDR3”。在一些实施方案中，编号约定为Kabat约定。

本发明所用的术语“CDR变体”是指已通过至少1个(例如1、2或3个)氨基酸的取代、缺失或添加而修饰的CDR，其中包含CDR变体的修饰的抗原结合蛋白基本上维持抗原结合蛋白在修饰前的生理特性。应了解到，可被修饰的各CDR可单独修饰或与另一CDR组合修饰。在一方面，该修饰为取代，尤其是保守取代，如表1所示。

表1

侧链	成员
		疏水	Met，Ala，Val，Leu，Ile
中性亲水的	Cys，Ser，Thr
		酸性	Asp，Glu
碱性	Asn，Gln，His，Lys，Arg
		影响链取向的残基	Gly，Pro
芳族	Trp，Tyr，Phe

例如，在变体CDR中，最小结合单位的氨基酸残基可以保持相同，但是包含作为Kabat或Chothia定义的一部分的CDR的侧翼残基可以被保守性氨基酸残基所替换。

包含如上所述的修饰的CDR或最小结合单位的此类抗原结合蛋白在本发明中可被称为“功能性CDR变体”或“功能性结合单位变体”。

该抗体可来自任何物种，或经修饰而适于给药至交叉物种。例如，来自小鼠抗体的CDR可被人源化以给药至人体。在任一实施方案中，该抗原结合蛋白任选为人源化抗体。

“人源化抗体”是指具有衍生自非人供体免疫球蛋白的CDR的工程化抗体类型，该分子的其它免疫球蛋白衍生部分衍生自一种(或多种)人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支撑残基以保持结合亲和力(参见例如，Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA,86:10029-10032(1989),Hodgson等人，Bio/Technology,9:421(1991))。根据与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性，可以由常规数据库中选择合适的人受体抗体，例如数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库。特征在于与供体抗体的框架区同源性(基于氨基酸)的人抗体可适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区以用于插入供体CDR。可以类似的方式选择能够提供轻链恒定区或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，受体抗体的重链和轻链不需要来源于相同的受体抗体。现有技术描述了生产这种人源化抗体的几种方法-例如参见EP-A-0239400和EP-A-054951。

在另一实施方案中，所述人源化抗体具有人抗体恒定区，其为IgG。在另一实施方案中，所述IgG为上述任一个文献或专利公开中公开的序列。

对于核苷酸和氨基酸序列，术语“相同”或“同一性”表示当两个核酸或两个氨基酸序列在最佳对齐并与合适的插入或缺失比较时的同一性程度。

两个序列之间的百分比同一性是，考虑到为了两个序列的最佳对齐而需要引入的缺口的数量以及各缺口的长度，由序列共享的相同位点的数量的函数(即，％同一性＝相同位点的数量/位点的总数乘以100)。如下所述，可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定。

查询核酸序列和主题核酸序列之间的同一性百分比为“同一性”值，以百分比表示，其是在进行了成对BLASTN比对后，当主题核酸序列与查询核酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTN算法计算得到的。查询核酸序列和主题核酸序列之间的这种成对BLASTN比对是通过使用BLASTN算法的默认设置(可获自National Center for BiotechnologyInstitute网站)进行的，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询核酸序列可以由在本发明的一个或多个权利要求中定义的核酸序列来描述。

查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的同一性百分比为“同一性”值，以百分比表示，其是在进行了成对BLASTP比对后，当主题氨基酸序列与查询氨基酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTP算法计算得到的。查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的这种成对BLASTP比对是通过使用BLASTP算法的默认设置(可获自National Center forBiotechnology Institute网站)进行的，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询氨基酸序列可以由在本发明的一个或多个权利要求中定义的氨基酸序列来描述。

在本发明的组合、或其方法或用途的任一实施方案中，所述ABP可与所示或参考的序列具有99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、或90％、或85％、或80％、或75％、或70％同一性的任何一个或所有CDR、VH、VL、HC、LC，例如，本发明公开的SEQ ID NO定义的序列。

本发明中提供了结合人OX40受体的ABP和抗体(即抗OX40ABP和抗人OX40受体(hOX40R)抗体，在本发明中有时称为“抗OX40ABP或抗OX40抗体”和/或它们的其它变体)。这些抗体在治疗或预防其病理涉及OX40信号传递的急性或慢性疾病或病症中是有用的。在一方面，描述了结合至人OX40R且有效作为癌症治疗或疾病治疗(例如与另一化合物如抗PD-1ABP，适当地为拮抗剂抗PD1ABP组合)的抗原结合蛋白或分离的人抗体或该蛋白质或抗体的功能性片段。本发明公开的任何抗原结合蛋白或抗体可用作药物。任何一种或多种抗原结合蛋白或抗体可用于该方法或组合物中以治疗癌症，例如，本发明公开的那些癌症。

如本发明所述的分离的抗体与OX40结合，并且可以与从以下基因编码的OX40结合：NCBI登录号NP_003317，Genpept登录号P23510或与其具有90％同源性或90％同一性的基因。本发明提供的分离的抗体可进一步结合至具有以下GenBank登记号：AAB39944、CAE11757或AAI05071之一的OX40受体。

结合和/或调节OX40受体的抗原结合蛋白和抗体是本领域已知的。本发明的组合、或其方法或用途的示例性抗OX40ABP公开于，例如国际公开号WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日、国际申请日2012年2月9日，和WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日、国际申请日2011年8月23日，其各自以其整体在此引入作为参考(若与任何定义相冲突，以本申请为主)。

在一个实施方案中，所述OX-40抗原结合蛋白为WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的一种。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的CDR。在另一实施方案中所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的VH、VL或这两者，或与公开的VH或VL序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的VH或VL。

在另一实施方案中，所述OX-40抗原结合蛋白为WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中公开的一种。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的CDR。在另一实施方案中所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的VH、VL或这两者，或与公开的VH或VL序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的VH或VL。

图1-12显示本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP的序列，例如ABP的CDR和VH和VL序列。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP包含本发明的附图所示的CDR或VH或VL序列中的一个或多个，或与其具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的序列。图1包括SEQID NO:108的残基1-30、36-49、67-98和121-131的内容。X61012作为SEQ ID NO:108公开。图2包括SEQ ID NO:109的残基1-23、35-49、57-88和102-111的内容。AJ388641作为SEQ IDNO:109公开。图3包括SEQ ID NO:110的氨基酸序列的内容。图4包括SEQ ID NO:111的氨基酸序列的内容。图5包括SEQ ID NO:112的残基17-46、52-65、83-114和126-136的内容。Z14189作为SEQ ID NO:112公开。图6包括SEQ ID NO:113的残基21-43、55-69、77-108和118-127的内容。M29469作为SEQ ID NO:113公开。图7的蛋白质以SEQ ID NO:114公开。图8的蛋白质以SEQ ID NO:115公开。

图1显示106-222、人源化106-222(Hu106)和人受体X61012(GenBank登录号)VH序列的氨基酸序列的比对。氨基酸残基以单字母代码显示。序列上方的数字表示根据Kabat等人(Sequences of Proteins of Immunological Interests，Fifth edition，NIHPublication No.91-3242，U.S.Department of Health and Human Services，1991)的位置。序列表中也提供了与本发明要求保护的相同的序列，并且位置编号可以不同。在图1中，由Kabat等人(1991)定义的CDR序列在106-222VH中加下划线。图中省略了X61012VH中的CDR残基。在GenBank数据库中搜索与106-222VH框架同源的人VH序列，并且选择人X61012cDNA(X61012VH)编码的VH序列作为人源化的受体。首先将106-222VH的CDR序列转移至X61012VH的对应位置。接下来，在106-222可变区的三维模型暗示与CDR存在显著接触的框架位置处，用小鼠106-222VH的氨基酸残基取代相应的人残基。这些取代在位置46和94进行(在Hu106VH中加下划线)。另外，在相应V区亚组中被认为是非典型的人框架残基被最典型的残基取代以降低潜在的免疫原性。该取代在位置105进行(在Hu106VH中加双下划线)。

图2显示106-222、人源化106-222(Hu106)和人受体AJ388641(GenBank登录号)VL序列的氨基酸序列的比对。氨基酸残基以单字母代码显示。序列上方的数字表示根据Kabat等人(1991)的位置。序列表中也提供了与本发明要求保护的相同的序列，尽管位置编号可能不同。由Kabat等人定义的CDR序列在106-222VH中加下划线。图中省略了AJ388641VL中的CDR残基。在GenBank数据库中搜索与106-222VL框架同源的人VL序列，并且选择由人AJ388641cDNA(AJ388641VL)编码的VL序列作为人源化的受体。将106-222VL的CDR序列转移至AJ388641VL的相应位置。人源化形式中没有进行框架取代。

图3显示了侧翼具有SpeI和HindIII位点(下划线)的Hu106VH基因的核苷酸序列，其与推导(deduce)的氨基酸序列一起显示。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VH的N端氨基酸残基(Q)是双下划线的。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，序列表中的位置编号可以不同。内含子序列以斜体表示。

图4显示了侧翼具有NheI和EcoRI位点(下划线)的Hu106-222VL基因的核苷酸序列，其与推导的氨基酸序列一起显示。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VL的N端氨基酸残基(Q)是双下划线的。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。内含子序列以斜体表示。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，但序列表中的位置编号可以不同。

图5显示119-122、人源化119-122(Hu119)和人受体Z14189(GenBank登录号)VH序列的氨基酸序列的比对。氨基酸残基以单字母代码显示。序列上方的数字表示根据Kabat等人(Sequences of Proteins of Immunological Interests，Fifth edition，NIHPublication No.91-3242，U.S.Department of Health and Human Services，1991)的位置。由Kabat等人(1991)定义的CDR序列在119-122VH中加下划线。图中省略了Z14189VH中的CDR残基。在GenBank数据库中搜索与119-122VH框架同源的人VH序列，并且选择人Z14189cDNA(Z14189VH)编码的VH序列作为人源化的受体。首先将119-122VH的CDR序列转移至Z14189VH的对应位置。接下来，在119-122可变区的三维模型暗示与CDR存在显著接触的框架位置处，用小鼠119-122VH的氨基酸残基取代相应的人残基。这些取代在位置26、27、28、30和47进行(在Hu119VH中加下划线)，如图中所示。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，但序列表中的位置编号可以不同。

图6显示119-122、人源化119-122(Hu119)和人受体M29469(GenBank登录号)VL序列的氨基酸序列的比对。氨基酸残基以单字母代码显示。序列上方的数字表示根据Kabat等人(1991)的位置。由Kabat等人(1)定义的CDR序列在119-122VL中加下划线。序列中省略了M29469VL中的CDR残基。在GenBank数据库中搜索与119-122VL框架同源的人VL序列，并且选择人M29469cDNA(M29469VL)编码的VL序列作为人源化的受体。将119-122VL的CDR序列转移至M29469VL的对应位置。在人源化形式中不需要框架取代。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，但序列表中的位置编号可以不同。

图7显示了侧翼具有SpeI和HindIII位点(下划线)的Hu119VH基因的核苷酸序列，其与推导的氨基酸序列一起显示。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VH的N端氨基酸残基(E)是双下划线的。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。内含子序列以斜体表示。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，但序列表中的位置编号可以不同。

图8显示了侧翼具有NheI和EcoRI位点(下划线)的Hu119VL基因的核苷酸序列，其与推导的氨基酸序列一起显示。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VL的N端氨基酸残基(E)是双下划线的。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。内含子序列以斜体表示。序列表中也提供了与本发明要求保护的序列相同的序列，但序列表中的位置编号可以不同。

图9显示了小鼠119-43-1VH cDNA的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VH的N端氨基酸残基(E)用双下划线表示。根据Kabat等人(Sequences of Proteins of Immunological Interests，Fifthedition，NIH Publication No.91-3242，U.S.Department of Health and HumanServices，1991)的定义的CDR序列有下划线。

图10显示了小鼠119-43-1VL cDNA的核苷酸序列，显示了推导的氨基酸序列。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VL的N端氨基酸残基(D)用双下划线表示。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。

图11显示了侧翼具有SpeI和HindIII位点(下划线)的设计的119-43-1VH基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VH的N端氨基酸残基(E)用双下划线表示。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。内含子序列以斜体表示。

图12显示了侧翼具有NheI和EcoRI位点(下划线)的设计的119-43-1VL基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列。氨基酸残基以单字母代码显示。信号肽序列以斜体表示。成熟VL的N端氨基酸残基(D)用双下划线表示。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列有下划线。内含子序列以斜体表示。

在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含106-222抗体的CDR，例如具有如SEQ ID NO 1、2和3的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和例如分别具有如SEQ ID NO 7、8和9的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的ABP，包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日所公开的106-222、Hu106或Hu106-222抗体的CDR。如本发明所述，抗体106-222为结合至人OX40的人源化单克隆抗体，如WO2012/027328公开和本发明所述，包含分别具有如SEQ ID NO 1、2和3的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3和例如分别具有SEQ ID NO 7、8和9的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3的抗体，以及包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL的抗体。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP包含本发明图6-7所示的106-222抗体的VH和VL区，例如具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的ABP，包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH，和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的Hu106-222抗体或106-222抗体或Hu106抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，为106-222、Hu106-222或Hu106，例如WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的ABP，包含与该段落中的序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含119-122抗体的CDR，例如分别具有SEQ ID NO 13、14和15的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含具有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的VH，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的ABP为119-222或Hu119或Hu119-222抗体，例如WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的。在另一实施方案中，所述ABP包括与该段落中的序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP包含119-43-1抗体的VH区之一和VL区之一。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP为119-43-1或119-43-1嵌合体。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，如WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中所公开。在其它实施方案中，该段描述的抗OX40ABP的任一种是人源化的。在其它实施方案中，该段描述的ABP的任一种被设计为制备人源化抗体。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含与该段落中的序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案、其它实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的任何抗OX40ABP的任何小鼠或嵌合序列被设计为制备人源化抗体。

在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO.7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO.9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含：(a)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.15的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ IDNO.19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO.21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含：包含SEQID NO:1或13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:2或14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；和/或包含SEQ ID NO:3或15的氨基酸序列的重链可变区CDR3，或与其具有90％同一性的重链可变区CDR。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含：包含SEQID NO:7或19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:8或20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和/或包含SEQ ID NO:9或21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，或与其具有90％同一性的重链可变区。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含：包含SEQID NO:10、11、22或23的氨基酸序列的轻链可变区(“VL”)，或与SEQ ID NO:10、11、22或23的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含重链可变区(“VH”)，该重链可变区包括SEQ ID NO:4、5、16和17的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4、5、16和17的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含SEQ ID NO:5的可变重序列和SEQ ID NO:11的可变轻序列，或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP包含SEQ ID NO:17的可变重序列和SEQ ID NO:23的可变轻序列或与其具有90％同一性的序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含SEQ IDNO:12或24的核酸序列或与SEQ ID NO:12或24的核苷酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的核酸序列编码的可变轻链。在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，包含SEQID NO:6或18的核酸序列或与SEQ ID NO：6或18的核苷酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的核酸序列编码的可变重链。

本发明还提供单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含可变轻链，该可变轻链包含SEQ ID NO：10或22的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：10或22的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。还提供包含可变重链的单克隆抗体，该可变重链包含SEQ ID NO：4或16的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：4或16的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

本发明还提供单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含可变轻链，该可变轻链包含SEQ ID NO：11或23的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：11或23的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。还提供包含可变重链的单克隆抗体，该可变重链包含SEQ ID NO：5或17的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：5或17的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

本发明的组合或其方法或用途的另一实施方案包括如以下序列表所公开的CDR、VH区和VL区以及抗体和对其编码的核酸。

抗体106-222的重链：

QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWWRQAPGQGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYYDYVSYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO：48)

抗体106-222的轻链：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：49)

抗体106-222的重链可变区：

QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYYDYVSYYAMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：5)

抗体106-222的轻链可变区：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：11)

抗体106-222的CDR序列：

HC CDR1：Asp Tyr Ser Met His(SEQ ID NO：1)

HC CDR2：Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp PheLys Gly(SEQ ID NO：2)

HC CDR3：Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr(SEQ IDNO：3)

LC CDR1：Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala(SEQ ID NO：7)

LC CDR2：Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr(SEQ ID NO：8)

LC CDR3：Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr(SEQ ID NO：9)

OX40抗体序列表

SEQ ID NO:39-43为用于PCR扩增和Ch119-43-1重链和轻链cDNA的测序的寡核苷酸序列。

SEQ ID NO:44提供pCh119-43-1中γ-1重链的编码区的核苷酸序列，以及推导的氨基酸序列(SEQ ID NO:45)。氨基酸残基以单字母代码显示。

SEQ ID NO:46提供pCh119-43-1中κ轻链的编码区核苷酸序列，以及推导的氨基酸序列(SEQ ID NO:47)。氨基酸残基以单字母代码显示。

PD-1抗原结合蛋白

本发明的组合、及其方法和用途包含结合PD-1的抗PD-1抗原结合蛋白，如阻断与PD-1配体如PD-L1或PD-L2的结合的拮抗剂分子(如抗体)。

在一个方面，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP与PD-1(优选人PD-1)相互作用的平衡解离常数(KD)为100nM或更少、10nM或更少、2nM或更少或1nM或更少。或者，KD可为5至10nM之间；或1至2nM。KD可为1pM至500pM；或500pM至1nM。技术人员将会认识到KD数值越小，结合越强。KD的倒数(即1/KD)是单位为M^-1的平衡缔合常数(KA)。技术人员将会认识到，KA数值越大，结合越强。

解离速率常数(kd)或“解离速率”描述了一方面为ABP且另一方面为PD-1(优选人PD-1)的复合物的稳定性，即，每秒分解的复合物分数。例如，0.01s^-1的kd相当于每秒分解1％的复合物。在一个实施方案中，解离速率常数(kd)为1x10^-3s^-1以下、1x10^-4s^-1以下、1x10^-5s^-1以下或1x10^-6s^-1以下。kd可为1x10^-5s^-1至1x10^-4s^-1；或1x10^-4s^-1至1x10^-3s^-1。

本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP与参考抗体在例如结合PD-1、PD-1的表位或PD-1的片段方面的竞争可以通过竞争性ELISA、FMAT或Biacore测定。在一方面，通过Biacore进行竞争测定。这种竞争有几个可能的原因：两种蛋白质可结合相同或重叠的表位；可存在对结合的立体位阻；或第一种蛋白的结合可以诱导抗原中的构象变化，其阻止或减少了第二种蛋白的结合。

本发明使用的“结合片段”是指本发明的组合、或其方法或用途的ABP的部分或片段，其包括抗原结合位点且能够结合本发明定义的PD-1，例如但不限于能够结合至亲本或全长抗体的相同表位。

本发明提供了结合人PD-1受体的ABP(即抗PD-1ABP，在本发明中有时称为“抗PD-1ABP”或“抗PD-1抗体”和/或它们的其他变体)。这些抗体可用于治疗或预防其病理涉及PD-1信号传递的急性或慢性疾病或病症。在一个方面，描述了与人PD-1结合并且作为癌症治疗或抗疾病治疗有效的抗原结合蛋白或者这种蛋白或抗体的分离的人抗体或功能性片段，例如与另一种化合物如抗OX40ABP、合适的是激动剂抗OX40ABP的组合。本发明公开的任何抗原结合蛋白或抗体可以用作药物。任何一种或多种抗原结合蛋白或抗体可以用于治疗癌症的方法或组合物中，例如，在此公开的那些。

如本发明所述的分离的抗体与人PD-1结合，并且可以与由基因Pdcd1或与其具有90％同源性或90％同一性的基因或cDNA序列编码的人PD-1结合。完整的hPD-1mRNA序列可以在GenBank登录号U64863下找到。人PD-1的蛋白质序列可以在GenBank登录号AAC51773处找到。

结合和/或调节PD-1的抗原结合蛋白和抗体在本领域已知。本发明的组合、或其方法或用途的示例性抗PD-1ABP公开于例如美国专利号8,354,509；8,900,587；8008,449，其各自以其整体在此引入作为参考(若与任何定义相冲突，以本申请为主)。PD-1抗体和使用其治疗疾病的方法描述于美国专利号US 7,595,048；US 8,168,179；US 8,728,474；US 7,722,868；US 8,008,449；US 7,488,802；US 7,521,051；US 8,088,905；US 8,168,757；US8,354,509；和US公开号US20110171220；US20110171215；和US20110271358。CTLA-4和PD-1抗体的组合描述于美国专利No.9,084,776。

在另一实施方案、其它实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的任何抗PD-1ABP的任何小鼠或嵌合序列，被设计为制备人源化抗体。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含派姆单抗(permolizumab)的CDR或VH或VL或HC(重链)或LC(轻链)序列中的一种或多种(例如全部)，或与其具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的序列。

派姆单抗的HC和LC的CDR在以下提供。在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含：(a)派姆单抗的重链可变区CDR1；(b)派姆单抗的重链可变区CDR2；(c)派姆单抗的重链可变区CDR3；(d)派姆单抗的轻链可变区CDR1；(e)派姆单抗的轻链可变区CDR2；和(f)派姆单抗的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1，包含：派姆单抗的重链可变区CDR1；派姆单抗的重链可变区CDR2和/或派姆单抗的重链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1包含：派姆单抗的轻链可变区CDR1；派姆单抗的轻链可变区CDR2和/或派姆单抗的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含：派姆单抗的轻链可变区(“VL”)，或与派姆单抗的VL的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含派姆单抗的重链可变区(“VH”)，或与派姆单抗的VH的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含：派姆单抗的轻链可变区(“VL”)，或与派姆单抗的VL的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列，且本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含派姆单抗的重链可变区(“VH”)，或与派姆单抗的VH的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含：派姆单抗的轻链(“LC”)，或与派姆单抗的LC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含派姆单抗的重链(“HC”)，或与派姆单抗的HC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含：派姆单抗的轻链(“LC”)，或与派姆单抗的LC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列，且本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含派姆单抗的重链(“HC”)，或与派姆单抗的HC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

本发明的组合、或其方法或用途的另一实施方案，包括如以下序列表所公开的CDR、VH区和VL区以及抗体和对其编码的核酸。

抗OX40ABP(例如，激动剂ABP，例如抗hOX40ABP，例如抗体)，例如，本发明所述的抗体，可与抗PD-1(例如人PD-1)的ABP(例如，拮抗剂ABP，例如拮抗剂抗体)组合使用。例如，抗OX40抗体可与派姆单抗组合使用。

在开发过程中，派姆单抗被称为MK3475和兰利珠单抗(lambrolizumab)。派姆单抗为人程序化死亡受体-1(PD-1)阻断抗体，被指示用于治疗患有不可切除或转移性黑素瘤以及在伊匹单抗和BRAF抑制剂(如果为BRAFV600突变阳性的)的治疗后具有疾病进展的患者。派姆单抗的推荐剂量为2mg/kg，作为静脉内输注30分钟，每3周一次直至疾病进展或不可接受的毒性。

派姆单抗为人源化单克隆抗体，其阻断PD-1与其配体PD-L1和PD-L2之间的相互作用。派姆单抗为IgG4κ免疫球蛋白，分子量约为149kDa。

注射用派姆单抗为一次性小瓶中的无菌、无防腐剂的白色至灰白色的冻干粉末。将各小瓶重构且稀释以用于静脉内输注。每2mL重构溶液含有50mg派姆单抗，并且配制在L-组氨酸(3.1mg)、聚山梨酯-80(0.4mg)、蔗糖(140mg)中。可含有盐酸/氢氧化钠以调整pH至5.5。

派姆单抗注射液是一种无菌、无防腐剂、透明至略带乳白色、无色至微黄色的溶液，需要稀释后才能静脉输注。每个小瓶含有4毫升溶液中的100毫克派姆单抗。每1mL溶液含有25mg派姆单抗，且配制在：L-组氨酸(1.55mg)、聚山梨酯80(0.2mg)、蔗糖(70mg)和注射用水USP中。

PD-1配体PD-L1和PD-L2与T细胞上发现的PD-1受体的结合抑制了T细胞增殖和细胞因子的产生。PD-1配体的上调发生在一些肿瘤中，并且通过该途径的信号传递可有助于抑制活性T细胞对肿瘤的免疫监视。派姆单抗是一种单克隆抗体，其与PD-1受体结合并阻断其与PD-L1和PD-L2的相互作用，释放PD-1途径介导的免疫应答抑制，包括抗肿瘤免疫应答。在同基因型小鼠肿瘤模型中，阻断PD-1活性导致肿瘤生长减少。

派姆单抗描述于，例如美国专利号8,354,509和8,900,587。

批准的产品为用于注射的派姆单抗用于静脉内输注活性组分派姆单抗，可作为50mg冻干粉在一次性小瓶中获得以用于重构。派姆单抗已被批准用于治疗患有不可切除或转移性黑素瘤以及在伊匹单抗和BRAF抑制剂(如果为BRAF V600突变阳性的)的治疗后具有疾病进展的患者。派姆单抗是一种人源化单克隆抗体，其阻断PD-1及其配体PD-L1和PD-L2之间的相互作用。派姆单抗是一种近似分子量为149kDa的IgG4κ免疫球蛋白。派姆单抗的氨基酸序列如下所示，并且使用美国专利8,354,509中第15栏的表中提供的相同的单字母氨基酸代码命名法进行阐述：

派姆单抗的重链:

派姆单抗的轻链：

派姆单抗的重链可变区：

派姆单抗的轻链可变区：

派姆单抗的CDR序列：

HC CDR1：Asn Tyr Tyr Met Tyr(SEQ ID NO：54)

HC CDR2：Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys PheLys Asn(SEQ ID NO：55)

HC CDR3：Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr(SEQ ID NO：56)

LC CDR1：Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His(SEQ ID NO：57)

LC CDR2：Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser(SEQ ID NO：58)

LC CDR3：Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr(SEQ ID NO：59)

美国专利8,354,509的序列表

作为另一实例，抗OX40抗体可与纳武单抗组合使用。纳武单抗为程序性死亡受体-1(PD-1)阻断抗体，被指示用于治疗患有以下疾病的患者：

-不可切除或转移性黑素瘤且在伊匹单抗和BRAF抑制剂(如果为BRAF V600突变阳性的)治疗后具有疾病进展。该适应症基于肿瘤的反应率和反应的持久性在加速批准的基础上获得批准。此适应症的持续批准可取决于验证试验中临床受益的验证和说明。

-转移性鳞状非小细胞肺癌，在基于铂的化疗之中或之后存在进展。

纳武单抗的推荐剂量为3mg/kg，以静脉内输注给药60分钟，每2周一次直到疾病进展或不可接受的毒性。

PD-1配体PD-L1和PD-L2与T细胞上发现的PD-1受体的结合抑制了T细胞增殖和细胞因子的产生。PD-1配体的上调发生在一些肿瘤中，并且通过该途径的信号传递可有助于抑制活性T细胞对肿瘤的免疫监视。

纳武单抗是人免疫球蛋白G4(IgG4)单克隆抗体，其与PD-1受体结合并阻断其与PD-L1和PD-L2的相互作用，释放PD-1途径介导的免疫应答抑制，包括抗肿瘤免疫反应。在同基因型小鼠肿瘤模型中，阻断PD-1活性导致肿瘤生长减少。

美国专利号8,008,449示例了7种抗PD-1HuMAb：17D8、2D3、4H1、5C4(在此也称为纳武单抗或BMS-936558)、4A1 1、7D3和5F4。也参见美国专利号8,779,105。这些抗体的任一种，或其CDR(或与这些氨基酸序列任一种具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列)，可用于本发明所述的组合物和方法。

纳武单抗的重链：

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO：98)

纳武单抗的轻链：

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：99)

纳武单抗的重链可变区：

纳武单抗的轻链可变区：

纳武单抗的CDR序列：

HC CDR1：Asn Ser Gly Met His(SEQ ID NO：102)

HC CDR2：Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser ValLys Gly(SEQ ID NO：103)

HC CDR3：Asn Asp Asp Tyr(SEQ ID NO：104)

LC CDR1：Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala(SEQ ID NO：105)

LC CDR2：Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr(SEQ ID NO：106)

LC CDR3：Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr(SEQ ID NO：107)

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1 ABP，包含纳武单抗的CDR或VH或VL或HC(重链)或LC(轻链)序列或与其具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的序列的一个或多个(例如全部)。

本发明提供纳武单抗的HC和LC CDR。在一个实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含：(a)纳武单抗的重链可变区CDR1；(b)纳武单抗的重链可变区CDR2；(c)纳武单抗的重链可变区CDR3；(d)纳武单抗的轻链可变区CDR1；(e)纳武单抗的轻链可变区CDR2；和(f)纳武单抗的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1包含：纳武单抗的重链可变区CDR1；纳武单抗的重链可变区CDR2和/或纳武单抗的重链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1包含：纳武单抗的轻链可变区CDR1；纳武单抗的轻链可变区CDR2和/或纳武单抗的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1 ABP，包含：纳武单抗的轻链可变区(“VL”)，或与纳武单抗的VL的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1 ABP包含纳武单抗的重链可变区(“VH”)，或与纳武单抗的VH的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含：纳武单抗的轻链可变区(“VL”)，或与纳武单抗的VL的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列，且本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含纳武单抗的重链可变区(“VH”)，或与纳武单抗的VH的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，包含：纳武单抗的轻链(“LC”)，或与纳武单抗的LC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含纳武单抗的重链(“HC”)，或与纳武单抗的HC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含：纳武单抗的轻链(“LC”)，或与纳武单抗的LC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列，且本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP包含纳武单抗的重链(“HC”)，或与纳武单抗的HC的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％)序列同一性的氨基酸序列。

本发明的组合、或其方法或用途的另一实施方案包括如以下序列表所公开的CDR、VH区和VL区、HC和LC、以及抗体和对其编码的核酸。

抗OX40ABP(例如，激动剂ABP，例如抗hOX40ABP，例如抗体)，例如，本发明所述的抗体，可与抗PD-1(例如人PD-1)的ABP(例如，拮抗剂ABP，例如拮抗剂抗体)组合使用。例如，抗OX40抗体可与纳武单抗组合使用。

因此，在一个实施方案中，提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，包括给药：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；以及派姆单抗，或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体。在一个实施方案中，结合至OX40的单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

在一方面，所述癌症为实体瘤。在一方面，所述癌症选自：黑素瘤、肺癌、肾癌、乳腺癌、头颈癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌，胃癌。在另一方面，所述癌症选自：NSCLC、头颈部鳞状上皮细胞癌(SCCHN)、肾细胞癌(RCC)、黑素瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(STS)、三阴性乳腺癌(TNBC)、和显示微卫星不稳定性的结肠直肠癌(MSI CRC)。

在一个实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体为抗体106-222。在一个实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和派姆单抗同时给药。在一个实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和派姆单抗以任何顺序相继给药。在一个实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体和/或派姆单抗静脉内给药。适当地，所述结合至OX40的单克隆抗体和/或派姆单抗瘤内给药。

在一个实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体以约0.1mg/kg至约10mg/kg的剂量给药。所述结合至OX40的单克隆抗体可以选自以下的频率给药：每天一次，每周一次，每两周一次(Q2W)和每三周一次(Q3W)。适当地，结合至OX40的抗体每三周给药一次。在一方面，派姆单抗以200mg Q3W的剂量给药。

在一个实施方案中提供了药物组合物，其包含：治疗有效量的结合至OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；以及派姆单抗，或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体。适当地，结合至OX40的单克隆抗体包含可变重链和可变轻链，该可变重链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，该可变轻链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。适当地，所述药物组合物包含派姆单抗。

作为本发明的一部分还提供组合试剂盒，其包含本发明的药物组合物以及一种或多种药学可接受的载体。

本发明还提供本发明的药物组合物或试剂盒在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在一个实施方案中，本发明提供在患有癌症的人中减小肿瘤大小的方法，包括向所述人给药治疗有效量的抗体106-222和治疗有效量的派姆单抗。在一方面，所述人根据RECIST 1.1版本显示完全反应或部分反应.

在本发明提供的方法的一些实施方案中(例如，治疗人的癌症和/或减小肿瘤大小的方法)，所述结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)(例如，其治疗有效量)被首先给药于人，且派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)(例如，其治疗有效量)被其次给药。在一些实施方案中，所述结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)被静脉内给药(例如，静脉内输注)。在一些实施方案中，派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)被静脉内给药。在一些实施方案中，派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)在给药结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)结束之后至少1小时且不超过2小时开始向受试者给药。在一些实施方案中，派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)在输注(例如，静脉内输注)该结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)结束之后至少1小时且不超过2小时开始向人静脉内给药。在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体以约0.003mg/kg至约10mg/kg(例如，0.1mg/kg至约10mg/kg)(例如，Q3W)的剂量给药。在一些实施方案中，派姆单抗以200mg的剂量给药(例如，Q3W)。

在本发明提供的方法的一些实施方案中(例如，治疗人的癌症和/或减小肿瘤大小的方法)，所述结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)(例如，其治疗有效量)被首先静脉内给药(例如，通过静脉内输注)(至人)，且派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)(例如，其治疗有效量)被其次静脉内给药(至人)，其中派姆单抗(或与其具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的抗体)在输注(例如，静脉内输注)该结合至人OX40的单克隆抗体(例如，结合至人OX40的单克隆抗体，其包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ IDNO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列)(例如，抗体106-222)结束之后至少1小时且不超过2小时开始向人静脉内给药。在一些实施方案中，所述结合至OX40的单克隆抗体以约0.003mg/kg至约10mg/kg(例如，0.1mg/kg至约10mg/kg)(例如，Q3W)的剂量给药。在一些实施方案中，派姆单抗以200mg的剂量给药(例如，Q3W)。

治疗方法

认为本发明的组合在其中接合OX40(例如，激动性接合)和/或PD-1(例如，拮抗性接合)有益的疾病中具有实用性。

本发明因此还提供了本发明的组合，其用于治疗，特别是治疗其中接合OX40(例如，激动性接合)和/或PD-1(例如，拮抗性接合)有益的疾病，特别是癌症。

本发明的另一方面提供治疗其中接合OX40(例如，激动性接合)和/或PD-1(例如，拮抗性接合)的疾病的方法，包括给药本发明的组合。

本发明另一方面提供本发明的组合在制备用于治疗接合OX40(例如，激动性接合)和/或PD-1(例如，拮抗性接合)有益的疾病中的用途。在优选的实施方案中所述疾病为癌症。

适合用本发明的组合治疗的癌症的实例包括但不限于头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和前列腺癌的原发性和转移性形式。适当地所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜细胞瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞T细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、AML、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞T细胞性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核母细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非-霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、膀胱上皮癌、肺癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。

此外，可治疗的癌症的实例包括Barret腺癌；胆道癌；乳腺癌；子宫颈癌；胆管癌；中枢神经系统肿瘤，包括原发性CNS肿瘤如胶质母细胞瘤，星形细胞瘤(例如，多形性胶质母细胞瘤)和室管膜瘤，和继发性CNS肿瘤(即，起源于中枢神经系统外部的肿瘤转移至中枢神经系统)；结肠直肠癌，包括大肠结肠癌；胃癌；头颈癌，包括头与颈的鳞状细胞癌；血液癌症，包括白血病和淋巴瘤如急性成淋巴细胞性白血病，急性骨髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征，慢性骨髓性白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，巨核细胞白血病，多发性骨髓瘤和红白血病；肝细胞癌；肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)；卵巢癌；子宫内膜癌；胰腺癌；垂体腺瘤；前列腺癌；肾癌；肉瘤；皮肤癌(包括黑素瘤)；和甲状腺癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：脑癌(神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和甲状腺癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：NSCLC(非小细胞肺癌)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、肾细胞癌(RCC)、黑素瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(STS)、三阴性乳腺癌(TNBC)、和显示微卫星不稳定性的结肠直肠癌(MSI CRC)。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：黑素瘤，例如转移性黑素瘤。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：鳞状非小细胞肺癌，例如转移性鳞状非小细胞肺癌.

适当地，本发明涉及治疗哺乳动物包括人的癌前期综合征或减轻其严重性的方法，其中所述癌前期综合征选自：宫颈上皮内瘤变、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(前黑素体)、前列腺上皮内(导管内)瘤(PIN)、导管原位癌(DCIS)、结肠息肉和严重的肝炎或肝硬化。

本发明的组合可单独使用，或与一种或多种其它治疗剂组合使用。因此本发明在另一方面提供包含本发明的组合与其它一种或多种治疗剂的进一步的组合、包含该组合的组合物和药物以及该进一步的组合、组合物和药物在治疗、特别是治疗对接合OX40(例如OX40的激动)和/或PD-1(例如PD-1的拮抗)敏感的疾病中的用途。

在实施方案中，本发明的组合可与癌症的其它治疗方法一起使用。尤其是，在抗肿瘤治疗中，与其他化疗、激素、抗体试剂以及手术和/或放射治疗(除了以上提到的)的治疗组合皆可考虑。因此，本发明的组合疗法包括给药本发明的组合、或其方法或用途的抗OX40ABP，和/或本发明的组合、或其方法或用途的抗PD-1ABP，以及任选使用其他治疗剂，包括其它抗肿瘤剂。此类试剂的组合可共同给药或分开给药，以及当分开给药时，这可同时发生或以任何顺序相继给药，时间上可接近和远隔。在一个实施方案中，该药物组合包含抗OX40ABP，适当地为激动剂抗OX40ABP；和抗PD-1ABP，适当地为拮抗剂抗PD1ABP；以及任选至少一种其它抗肿瘤剂。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为手术和/或放射治疗。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为至少一种其它抗肿瘤剂。

对所治疗的易受影响的肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可在该组合中使用。有用的典型抗肿瘤剂包括但不限于，抗微管试剂如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配合物；烷基化剂如氮芥、氧氮磷环类(oxazaphosphorine)、烷基磺酸盐、亚硝基脲、和三氮烯；抗生素试剂如蒽环类抗生素、放线菌素和博来霉素；拓扑异构酶II抑制剂如表鬼臼毒素；抗代谢物如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸血管发生抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡试剂；和细胞周期信号传递抑制剂。

抗微管或抗有丝分裂药物：抗微管或抗有丝分裂药物为时相特异性药物，其在肿瘤细胞周期中的M期或有丝分裂期具有针对肿瘤细胞微管的活性。抗微管药物的实例包括但不限于二萜类和长春花生物碱。

源自天然的来源的二萜类是时相特异性抗癌药物，其作用于细胞周期的G₂/M期。认为二萜类通过与微管的β-微管蛋白亚单元结合而使之稳定。然后该蛋白的分解受到抑制，继而有丝分裂停止，进而细胞死亡。二萜类的实例包括但不限于紫杉醇及其类似物多西紫杉醇。

紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯，是一种天然的二萜产物，分离自太平洋红豆杉(Taxus brevifolia)且市售商品名为可注射溶液其为萜类的紫杉烷家族的成员。紫杉醇在美国已经批准用于治疗顽固性卵巢癌(Markman等人，YaleJournal of Biology and Medicine，64:583，1991；McGuire等人，Ann.lntem，Med.，111:273,1989)和治疗乳腺癌(Holmes等人，J.Nat.Cancer Inst.，83:1797，1991)的临床应用。其为治疗皮肤肿瘤(Einzig等人，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，20:46)和头颈癌(Forastire等人，Sem.Oncol.，20:56，1990)的潜在候选药。所述化合物也显示了对于多囊肾病(Woo等人，Nature，368:750.1994)、肺癌和疟疾的治疗潜力。用紫杉醇治疗患者导致骨髓抑制(Multiple cell lineages，Ignoff,R.J.等人，Cancer Chemotherapy Pocket Guide，1998)，这与高于阈浓度(50nM)的给药持续时间有关(Kearns,C.M.等人.，Seminars inOncology，3(6)p.16-23，(1995))。

多西紫杉醇，5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮-N-叔丁酯13-(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸酯4-乙酸酯2-苯甲酸酯三水合物；其市售商品为可注射溶液多西紫杉醇用于治疗乳腺癌。多西紫杉醇是紫杉醇的半合成衍生物，其使用天然前体10-去乙酰基-浆果赤霉素III(提取自欧洲紫杉的针叶)制备。

长春花生物碱是时相特异性抗肿瘤药物，源自蔓长春花植物。长春花生物碱通过特异性结合于微管蛋白作用于细胞周期的M期(有丝分裂)。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。有丝分裂被认为终止于分裂中期，然后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括但不限于长春碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春碱，硫酸长春碱，市售商品为可注射溶液尽管其可用作多种实体瘤的二线治疗，其主要用于治疗睾丸癌和多种淋巴瘤包括霍奇金病；和淋巴细胞和组织细胞淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱剂量限制性副作用。

长春新碱，22-氧代长春碱硫酸盐，市售商品为为可注射溶液长春新碱用于治疗急性白血病且还用于治疗霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤的治疗方案。脱发和神经作用是长春新碱最常见的副作用，且会发生较低程度的骨髓抑制和胃肠道粘膜炎作用。

长春瑞滨，3’,4’-二去氢-4’-去氧-C’-去甲长春碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸盐(1:2)(盐)]，市售商品为酒石酸长春瑞滨可注射溶液是半合成的长春花生物碱。长春瑞滨作为单一药物或与其他化疗药物例如顺铂组合，用于治疗多种实体瘤，特别是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素性顽固性前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的剂量限制性副作用。

铂配合物：铂配合物为非时相特异性抗癌药物，其与DNA相互作用。铂配合物进入肿瘤细胞，进行水合并与DNA形成链内和链间交联，对肿瘤引起不利的生物作用。铂配合物的实例包括但不限于奥沙利铂、顺铂和卡铂。

顺铂，顺-二氨二氯合铂，市售商品为可注射溶液顺铂主要用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌和晚期膀胱癌。

卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸(2-)-O,O’]合铂，市售商品为可注射溶液卡铂主要用于晚期卵巢癌的一线和二线治疗。

烷基化剂：烷基化剂为非时相特异性抗癌药物和强亲电试剂。通常，烷基化剂通过经由DNA分子的亲核部分与DNA烷基化形成共价键，所述亲核部分例如磷酸基、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基。所述烷基化扰乱了核酸功能，导致细胞死亡。烷基化剂的实例包括但不限于氮芥例如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥；烷基磺酸酯例如白消安；亚硝基脲例如卡莫司汀；和三氮烯例如达卡巴嗪。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-氧氮磷杂环己烯2-氧化物一水合物，其市售商品为可注射溶液或片剂环磷酰胺作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，其市售商品为可注射溶液或片剂美法仑用于多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮瘤的姑息治疗。骨髓抑制是美法仑最常见的剂量限制性副作用。

苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，市售商品为片剂。苯丁酸氮芥用于姑息治疗慢性淋巴性白血病和恶性淋巴瘤，例如淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金病。

白消安，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，市售商品为片剂。白消安用于姑息治疗慢性骨髓性白血病。

卡莫司汀，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，市售商品为冻干产品的单一药瓶。卡莫司汀作为单一药物或与其他药物组合用于姑息治疗脑瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。

达卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，市售商品为产品的单一药瓶。达卡巴嗪用于治疗转移性恶性黑素瘤且与其他药物组合用于霍奇金病的二线治疗。

抗生素性抗肿瘤药：抗生素性抗肿瘤药为非时相特异性药物，其结合或嵌入DNA。通常，所述作用形成稳定的DNA复合物或导致链断裂，其扰乱了核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素性抗肿瘤药物的实例包括但不限于放线菌素例如放线菌素D，蒽环类(anthrocyclins)例如柔红霉素和多柔比星；和博来霉素。

放线菌素D，也被称为Actinomycin D，市售商品为可注射形式的放线菌素D用于治疗维尔姆斯肿瘤和横纹肌肉瘤。

柔红霉素，(8S-顺式)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-萘并萘醌盐酸盐，市售商品为可注射形式的脂质体或可注射形式的柔红霉素用于在治疗急性非淋巴细胞白血病和与晚期HIV相关的卡波西氏肉瘤进行缓解诱导。

多柔比星，(8S，10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-8-乙醇酰基,7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12萘并萘醌盐酸盐，其市售商品为可注射形式的或ADRIAMYCIN 多柔比星主要用于治疗急性成淋巴细胞白血病和急性成髓细胞白血病，但也是治疗一些实体瘤和淋巴瘤的有用组分。

博来霉素，分离自轮丝链霉菌株的细胞毒性糖肽抗生素混合物，市售商品为博来霉素作为单一药物或与其他药物组合用于姑息治疗鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌。

拓扑异构酶II抑制剂：拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼毒素类。

表鬼臼毒素类是时相特异性抗肿瘤药物，源自盾叶表鬼臼植物。表鬼臼毒素类通常在细胞周期的S和G₂期通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物引起DNA链断裂而影响细胞。DNA链断裂累积，随后细胞死亡。表鬼臼毒素类的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，其市售商品为可注射溶液或胶囊且通常称为VP-16。依托泊苷作为单一药物或与其他化疗药物组合治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

替尼泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，其市售商品为可注射溶液且通常称为VM-26。替尼泊苷作为单一药物或与其他化疗药物组合治疗儿童急性白血病。

抗代谢抗肿瘤药物：抗代谢抗肿瘤药物是时相特异性抗肿瘤药物，其通过抑制DNA合成或通过抑制嘌呤或嘧啶碱基合成并因此限制DNA合成而作用于细胞周期的S期(DNA合成期)。因此，S期停止，细胞死亡。抗代谢抗肿瘤药物的实例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨喋呤、阿糖胞苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，市售商品为氟尿嘧啶。给药5-氟尿嘧啶使得抑制胸苷酸合成，并且既可混入RNA也可混入DNA。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。其他氟嘧啶类似物包括5-氟去氧尿苷(氟尿苷)和5-氟去氧尿苷单磷酸盐。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-D-呋喃阿拉伯糖基-2(1H)-嘧啶酮，市售商品为CYTOSAR-且通常称为Ara-C。认为阿糖胞苷在S期通过抑制DNA链延长而显示出细胞时相特异性，这种作用是通过在正在生长的DNA链的末端结合阿糖胞苷而产生的。阿糖胞苷作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗急性白血病。其他胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2’,2’-二氟去氧胞苷(吉西他滨)。

巯嘌呤，1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，市售商品为巯嘌呤在S期通过抑制DNA合成而显示出细胞时相特异性，其机理尚不明确。巯嘌呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗急性白血病。一种可用的巯嘌呤类似物为硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤，2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，市售商品为硫鸟嘌呤在S期通过抑制DNA合成而表现出细胞时相特异性，其机理尚不明确。硫鸟嘌呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗急性白血病。其他嘌呤类似物包括喷司他丁、赤藓羟基壬基腺嘌呤、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨，2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，市售商品为吉西他滨在S期表现出细胞时相特异性，并通过阻断细胞从G1期进入S期。吉西他滨与顺铂组合用于治疗局部晚期非小细胞肺癌，以及单独治疗局部晚期胰腺癌。

甲氨喋呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，市售商品为甲氨喋呤钠。甲氨喋呤在S期通过抑制DNA合成、修复和/或复制而表现出细胞时相效果，这种作用通过抑制二氢叶酸还原酶(其为嘌呤核苷和胸苷酸的合成所需的物质)而实现。甲氨喋呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗绒毛膜癌、脑膜白血病、非霍奇金淋巴瘤和乳腺癌、头颈癌、卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂：喜树碱类，包括喜树碱和可用作拓扑异构酶I抑制剂或在这一方面进行研发的喜树碱衍生物。喜树碱的细胞毒活性被认为与其拓扑异构酶I抑制活性有关。喜树碱的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康和下述7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙基二氧基-20-喜树碱的多种光学形式。

盐酸伊立替康，(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，市售商品为可注射溶液伊立替康是一种喜树碱衍生物，其与其活性代谢物SN-38一起结合至拓扑异构酶I-DNA复合物。认为细胞毒性的发生是拓扑异构酶I:DNA:伊立替康或SN-38的三元复合物与复制酶的相互作用所导致的不可修复的双链断裂的结果。伊立替康用于治疗结肠或直肠的转移性癌症。

盐酸托泊替康，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一盐酸盐，市售商品为可注射溶液托泊替康是一种喜树碱衍生物，其结合至拓扑异构酶I-DNA复合物，防止由于DNA分子的链扭转造成的由拓扑异构酶I引起的单链断裂的重新连接。托泊替康用于转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。

激素和激素类似物：激素和激素类似物是治疗癌症有用的化合物，所述癌症的生长和/或生长减少与激素有关。用于癌症治疗的激素和激素类似物的实例包括但不限于：肾上腺皮质类固醇类，例如泼尼松和泼尼松龙，其用于治疗恶性淋巴瘤和儿童急性白血病；氨鲁米特和其他芳香酶抑制剂例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦，其用于治疗肾上腺皮质瘤和激素依赖性含雌激素受体的乳腺癌；孕激素，例如醋酸甲地孕酮，用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌；雌激素、雄激素和抗雄激素例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙孕酮和5α-还原酶例如非那雄胺和度他雄胺，用于治疗前列腺瘤和良性前列腺肥大；抗雌激素例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene，以及选择性雌激素受体调节剂(SERMS)，如美国专利5,681,835、5,877,219和6,207,716所公开，用于治疗激素依赖性乳腺癌和其他易感性癌症；和促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物(其刺激促黄体生成激素(LH)和/或促卵泡激素(FSH)的释放)，用于治疗前列腺瘤，例如LHRH激动剂和拮抗剂，例如醋酸戈舍瑞林和亮丙立德。

信号转导途径抑制剂：信号转导途径抑制剂是阻断或抑制激发细胞内变化的化学过程的那些抑制剂。如本发明所用，该变化是细胞增殖或分化。用于本发明的信号转导抑制剂包括以下的抑制剂：受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、SH2/SH3域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3激酶、肌醇信号传递和Ras癌基因。

几种蛋白酪氨酸激酶在多种参与细胞生长调节的蛋白中催化特定酪氨酰残基的磷酸化。所述蛋白酪氨酸激酶可一般地分为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是具有细胞外配体结合域、跨膜域和酪氨酸激酶域的跨膜蛋白。受体酪氨酸激酶参与细胞生长的调节且通常被称为生长因子受体。许多这些激酶的不适当的或不受控制的活化，即异常的激酶生长因子受体活性，例如通过过表达或突变引起的活化，已显示会导致不受控制的细胞生长。因此，所述激酶的异常活性与恶性组织的生长相关。因此，对所述激酶的抑制可提供癌症治疗方法。生长因子受体包括，例如，表皮生长因子受体(EGFr)、来自血小板的生长因子受体(PDGFr)、erbB2、erbB4、ret、血管内皮生长因子受体(VEGFr)、免疫球蛋白样和表皮生长因子标识域的酪氨酸激酶(TIE-2)、胰岛素生长因子-I(IGFI)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、BTK、ckit、cmet、纤维母细胞生长因子(FGF)受体、Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)、ephrin(eph)受体和RET原癌基因。几种生长受体抑制剂正在研发之中，且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。抑制生长因子受体功能的生长因子受体和药物公开于例如以下文献中：Kath,John C.,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6):803-818；Shawver等DDT Vol 2,No.2February1997；和Lofts,F.J.等,“Growth factor receptors as targets”,New MolecularTargets for Cancer Chemotherapy,ed.Workman,Paul and Kerr,David,CRC press1994,London。

不是生长因子受体激酶的酪氨酸激酶被称为非受体酪氨酸激酶。用于本发明的非受体酪氨酸激酶(其为抗癌药物的靶点或潜在靶点)，包括cSrc、Lck、Fyn、Yes、Jak、cAbl、FAK(粘着斑激酶)、布鲁顿氏酪氨酸激酶和Bcr-Abl。抑制非受体酪氨酸激酶功能的非受体激酶和药物公开于以下文献中：Sinh,S.和Corey,S.J.,(1999),Journal ofHematotherapy and Stem Cell Research,8(5):465–80；和Bolen,J.B.,Brugge,J.S.,(1997)Annual review of Immunology,15:371-404。

SH2/SH3域阻断剂为在多种酶或衔接蛋白(包括PI3-K p85亚单位、Src家族激酶、衔接分子(Shc、Crk、Nck、Grb2)和Ras-GAP)中扰乱SH2或SH3域结合的药物。SH2/SH3域作为抗癌药物的靶点公开于以下文献中：Smithgall,T.E.(1995),Journal ofPharmacological and Toxicological Methods.34(3)125-32。

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)、促分裂素或细胞外调节激酶(MEK)和细胞外调节激酶(ERK)的阻断剂；和蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKC阻断剂(α，β，γ，ε，μ，λ，ι，ζ)、IkB激酶家族(IKKa，IKKb)、PKB家族激酶、akt激酶家族成员和TGFβ受体激酶。所述丝氨酸/苏氨酸激酶及其抑制剂公开于以下文献中：Yamamoto,T.,Taya,S.,Kaibuchi,K.,(1999),Journal of Biochemistry.126(5)799-803；Brodt,P,Samani,A.,和Navab,R.(2000),Biochemical Pharmacology,60.1101-1107；Massague,J.,Weis-Garcia,F.(1996)Cancer Surveys.27:41-64；Philip,P.A.和Harris,A.L.(1995),Cancer Treatment and Research.78:3-27,Lackey,K.等人Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters,(10),2000,223-226；U.S.专利6,268,391；和Martinez-Iacaci,L.等人,Int.J.Cancer(2000),88(1),44-52。

磷脂酰肌醇-3激酶家族成员的抑制剂包括PI3-激酶阻断剂，ATM、DNA-PK和Ku也可用于本发明中。所述激酶公开于以下文献中：Abraham,R.T.(1996),Current Opinion inImmunology.8(3)412-8；Canman,C.E.,Lim,D.S.(1998),Oncogene 17(25)3301-3308；Jackson,S.P.(1997),International Journal of Biochemistry and Cell Biology.29(7):935-8；和Zhong,H.等,Cancer Res,(2000)60(6),1541-1545。

本发明中有用的还有肌醇信号传递抑制剂，例如磷酸脂酶C阻断剂和肌醇类似物。所述信号抑制剂公开于以下文献中：Powis，G.和Kozikowski A.，(1994)New MolecularTargets for Cancer Chemotherapy ed.，Paul Workman和David Kerr，CRC press 1994，London。

另一类信号转导途径抑制剂是Ras癌基因抑制剂。所述抑制剂包括法呢基转移酶、香叶基-香叶基转移酶和CAAX蛋白酶抑制剂、以及反义寡核苷酸、核酶和免疫疗法。所述抑制剂已显示在含野生型突变体ras的细胞中阻断ras活化，因而作为抗增殖药物。Ras癌基因抑制公开于以下文献中：Scharovsky,O.G.,Rozados,V.R.,Gervasoni,S.I.Matar,P.(2000),Journal of Biomedical Science.7(4)292-8；Ashby,M.N.(1998),CurrentOpinion in Lipidology.9(2)99–102；和BioChim.Biophys.Acta,(19899)1423(3):19-30。

如上所述，对受体激酶配体结合的抗体拮抗剂也可用作信号转导抑制剂。这类信号转导途径抑制剂包括将人源化抗体用于受体酪氨酸激酶的细胞外配体结合域。例如Imclone C225EGFR特异性抗体(参见Green,M.C.等,Monoclonal Antibody Therapy forSolid Tumors,Cancer Treat.Rev.,(2000),26(4),269-286)；erbB2抗体(参见Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor TyrosineKinases,Breast Cancer Res.,2000,2(3),176-183)；和2CB VEGFR2特异性抗体(参见Brekken,R.A.等,Selective Inhibition of VEGFR2Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice,Cancer Res.(2000)60,5117-5124)。

抗血管生成药物：抗血管生成药物，包括非受体MEK血管生成抑制剂,也是有用的。抗血管生成药物例如抑制血管内皮生长因子作用的那些药物(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]和通过其他机理作用的化合物(例如利诺胺，整联蛋白αvβ3功能抑制剂、内皮抑素和血管抑素)；

免疫治疗药物：用于免疫治疗方案的药物也可与式(I)化合物组合。免疫治疗方法，包括例如离体和体内增加患者癌细胞的免疫原性的方法(例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染)、减少T细胞的无反应性的方法，使用转染的免疫细胞(例如细胞因子转染的树突状细胞)的方法、使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法、和使用抗独特型抗体(antidiotypic antibodies)的方法。

促凋亡药物：用于促凋亡治疗方案的药物(例如，bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明的组合。

细胞周期信号传递抑制剂：细胞周期信号传递抑制剂抑制参与细胞周期控制的分子。被称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的蛋白激酶家族及其与称为细胞周期蛋白的蛋白家族的相互作用控制了整个真核细胞周期的进程。不同细胞周期蛋白/CDK复合物的配位活化和失活是整个细胞周期的正常进程所必需的。几种细胞周期信号传递抑制剂正在研发中。例如，细胞周期蛋白依赖性激酶的实例包括CDK2、CDK4和CDK6，以及其抑制剂例如公开于以下文献中：Rosania等,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(2):215-230。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP和PD-1调节子(例如抗PD-1ABP)和至少一种选自以下的抗肿瘤剂：抗微管药物、铂配合物、烷基化剂、抗生素药物、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂、免疫治疗药物、促凋亡药物和细胞周期信号传递抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP和PD-1调节子(例如抗PD-1ABP)和至少一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物为选自二萜类和长春花生物碱的抗微管药物。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为二萜类。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为长春花生物碱。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP和PD-1调节子(例如抗PD-1ABP)和至少一种抗肿瘤剂，其为铂配合物。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为紫杉醇、卡铂或长春瑞滨。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为卡铂。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为长春瑞滨。

在另一实施方案中，所述至少一种抗肿瘤剂为紫杉醇。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP和PD-1调节子(例如抗PD-1ABP)和至少一种抗肿瘤剂，其为信号转导途径抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为生长因子受体激酶VEGFR2、TIE2、PDGFR、BTK、erbB2、EGFr、IGFR-1、TrkA、TrkB、TrkC、或c-fms的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为丝氨酸/苏氨酸激酶rafk、akt或PKC-zeta的抑制剂.

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自激酶src家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为c-src抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为Ras癌基因抑制剂，其选自法尼基转移酶和香叶基香叶基转移酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自PI3K的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为EGFr/erbB2双重抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲烷磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(以下结构)。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，该抗肿瘤剂为细胞周期信号传递抑制剂。

在进一步的实施方案中，细胞周期信号传递抑制剂为CDK2、CDK4或CDK6的抑制剂.

在一个实施方案中本发明的方法和用途中哺乳动物的为人。

如所指示，治疗有效量的本发明的组合(抗OX40ABP和PD-1调节子(例如抗PD-1ABP))被给药于人。通常，本发明的给药试剂的治疗有效量将取决于多种因素，包括，例如，受试者的年龄和体重、需要治疗的精确病症、病情的严重程度、制剂的性质以及给药途径。最终，治疗有效量将由监护医生酌情决定。

以下实施例仅用于说明，并不意图以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1：

在具有选定的晚期实体肿瘤的受试者中的抗体106-222单独给药和与包括派姆单抗在内的抗癌药组合给药的开放标签剂量递增研究

通过用免疫治疗性检查点抑制剂抑制负向T细胞调节途径刺激抗肿瘤T细胞活性，在黑素瘤和非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗中已经非常成功。为开发免疫疗法抗癌药物提供有吸引力的靶点的另一种方法是调节共刺激途径以增强T细胞功能。OX40是主要在活化的CD4+和CD8+T细胞上表达的强效共刺激受体。已显示OX40激动剂在非临床模型中增加抗肿瘤免疫性并改善无瘤生存，并且目前正在I期临床试验中评估OX40激动剂单克隆抗体(mAb)。抗体106-222(本发明中描述为包含分别具有SEQ ID NO 1、2和3的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和例如分别具有SEQ ID NO 7、8和9的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3的抗体，以及包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH区和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL区的抗体)为人源化野生型免疫球蛋白G1(IgG1)抗OX40激动性mAb(抗人OX40激动性单克隆抗体)，并将在本研究的第1部分中作为单药治疗进行评估。抗体106-222例如还在WO2012/027328和本申请的附图中描述。

抗癌免疫应答是一个多步骤的过程，预期肿瘤可以利用冗余机制来阻断抗肿瘤应答；在这些情况下，会需要组合治疗。将OX40激动剂与程序性死亡受体-1(PD-1)抑制剂组合将靶向癌症-免疫周期中的两个不同步骤；预期OX40激动作用会增加T细胞的引发/活化，而PD-1的抑制阻断其与程序性死亡配体1(PD-L1)和程序性死亡配体2(PD-L2)的相互作用，释放PD-1途径介导的对免疫应答的抑制。基于非临床数据，与单药治疗相比，预期OX40激动剂和PD-1抑制剂的组合治疗具有协同抗肿瘤活性。抗体106-222与PD-1抑制剂派姆单抗的组合将在本研究的第2部分中进行评估。

目标/终点

该研究的主要目标是评估安全性和耐受性，并确定当向具有选择的晚期或复发性实体瘤的受试者以单药疗法(第1部分)或与派姆单抗组合(第2部分)以静脉内施用时施用时抗体106-222的最大耐受剂量(MTD)或最大施用剂量(MAD)。次要目标包括：评估抗肿瘤活性；当单独给药时对抗体106-222的药代动力学(PK)表征；表征抗体106-222和派姆单抗组合给药时的PK；评估血液和肿瘤微环境中的药效学活性；以及测定单独给药时抗体106-222的免疫原性或组合给药时抗体106-222和派姆单抗的免疫原性。

·安全性终点：不良事件(AE)，严重不良事件(SAE)，剂量限制性毒性(DLT)，不良事件导致的停药，剂量减少或延迟，以及安全性评估中的变化(例如实验室参数，生命体征和心脏参数)。

·抗肿瘤活性终点：客观反应率(ORR)和疾病控制率(DCR)(完全反应[CR]+部分反应[PR]+疾病稳定[SD]≥12周)，到达反应的时间，反应的持续时间，无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。除非另有说明，否则所有反应终点将通过实体瘤反应评估标准(RECIST)v1.1和irRECIST(免疫相关RECIST)进行评估。

·PK终点：血浆抗体106-222和血清派姆单抗浓度和PK参数，包括最大观察浓度(Cmax)，在给药间隔内的浓度-时间曲线下面积(AUC(0-τ))和最小观察浓度(Cmin)。

·药效学终点：通过抗体106-222评估淋巴细胞OX40受体的膜表达和占有率，以及外周T细胞的表型、数量和活化状态。通过免疫组织化学(IHC)评估肿瘤活检组织的肿瘤浸润性淋巴细胞和其他表达关键表型标记物的免疫细胞的数量。

·免疫原性终点：发展出可检测的抗药物抗体(ADA)的受试者的数量和百分比。

整体设计

这是首次人体的(FTIH)开放标签、非随机的多中心研究，其设计用于评估对具有选择的晚期或复发性实体瘤的受试者静脉内给药抗体106-222的安全性、耐受性、PK、药效学和初步临床活性。该研究分两部分进行，每部分由剂量递增阶段和随后的队列扩展(cohort expansion)阶段组成。第1部分将评估抗体106-222单药疗法，第2部分将评估抗体106-222与派姆单抗联用。首先将抗体106-222以逐渐递增剂量作为单药疗法进行评估。一旦确定了既可耐受又显示药效学活性的抗体106-222的剂量，则可开始第2部分的招募。在第2部分中，递增剂量的抗体106-222将与固定剂量的派姆单抗一起进行评估。从剂量递增到队列扩展和从单药疗法(第1部分)到与派姆单抗的组合疗法(第2部分)的研究过渡将在方案指导委员会(Protocol Steering Committee)的指导下进行。指导委员会章程介绍了指导委员会的职权、成员、角色和责任。在审查这项研究中新出现的数据并在指导委员会的指导下，该方案可能会随后进行修订，以包括其他抗癌药物与抗体106-222组合的研究。

治疗组和持续时间

该研究包括筛查期、治疗期和随访期。受试者将在开始治疗前约4周开始资格筛查。抗体106-222治疗的最长持续时间为48周；派姆单抗治疗的最长持续时间为2年。安全性评估的随访期将从最后一次服药之日起最少3个月。治疗后随访期包括每12周进行一次疾病评估，直至确诊疾病进展(PD)。在PD后，将每3个月接触一次受试者以评估生存状态。

在第1部分中，抗体106-222单药疗法的剂量递增将以每3周一次(Q3W)施用0.003mg/kg抗体106-222的起始剂量作为开始。在第2部分中，抗体106-222+派姆单抗组合治疗的剂量递增将以每3周一次给药固定剂量的200mg派姆单抗和起始剂量的抗体106-222作为开始，该抗体106-222的起始剂量比抗体106-222单药疗法的耐受剂量低两个剂量水平，其在研究的第1A部分也显示出药效学活性。允许剂量调整来解决耐受性和安全问题。

受试者的类型和数量

该研究将招募至多大约180名受试者，其肿瘤类型可包括NSCLC、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、肾细胞癌(RCC)、黑素瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(STS)、三阴性乳腺癌(TNBC)、和显示微卫星不稳定性的结肠直肠癌(MSI CRC)。

分析

在研究的剂量递增阶段期间，将在研究进行时检查安全性、PK和药效标记数据以确定随后的剂量水平。在每个给药队列(dosing cohort)后，可以使用持续重新评估方法(CRM)分析根据观察到的DLT推荐下一个剂量水平。

在每个扩展队列中，将持续不断地检查临床活性、安全性、PK和药效标记物数据，并且每个队列中的招募可能因不利或有利结果而缩减或扩大。肿瘤反应数据将被监测，并且如果没有足够的临床活性证据，肿瘤队列可被终止。无效停止规则是基于Lee&Liu[Lee，2008]的方法。CRM建议的剂量递增水平、无效停止规则和后验概率仅仅是指导原则，团队在决策时会考虑整体数据。

研究原理

通过用免疫治疗性检查点抑制剂抑制负向T细胞调节途径来刺激抗肿瘤T细胞活性在黑素瘤和NSCLC的治疗中已经非常成功。为开发免疫疗法抗癌药物提供有吸引力的靶点的另一种方法是调节共刺激途径以增强T细胞功能。OX40是主要在活化的CD4+和CD8+ T细胞上表达的有效共刺激受体。已显示OX40激动剂在非临床模型中增加抗肿瘤免疫性并改善无瘤生存，并且目前正在I期临床试验中评估OX40激动剂mAb。抗体106-222为人源化野生型IgG1抗OX40激动性mAb，并将在本研究的第1部分中作为单药治疗进行评估。

抗癌免疫应答是一个多步骤的过程，预期肿瘤可以利用冗余机制来阻断抗肿瘤应答；在这些情况下，会需要组合治疗。将OX40激动剂与PD-1抑制剂组合将靶向癌症-免疫周期中的两个不同步骤；预期OX40激动作用会增加T细胞的引发/活化，而PD-1的抑制阻断其与PD-L1和PD-L2的相互作用，释放PD-1途径-介导的对免疫应答的抑制。基于非临床数据，与单药治疗相比，预期与OX40激动剂和PD-1抑制剂的组合治疗具有协同抗肿瘤活性。抗体106-222与PD-1抑制剂派姆单抗的组合将在本研究的第2部分中进行评估。

该FTIH、开放标签、剂量递增研究将在具有选择的晚期或复发性实体瘤的受试者中评估抗体106-222作为单药疗法(第1部分)、与派姆单抗的组合(第2部分)、以及可能与其它疗法的组合的安全性、PK、药效学和初步临床活性。

简要背景

在过去的几年里，免疫疗法已经成为一种变革性的抗癌治疗策略。具体而言，用检查点抑制剂抑制负向T细胞调节途径非常成功，其首先用于治疗黑色素瘤，最近又扩展至其他适应症，包括NSCLC。伊匹单抗和派姆单抗是这些最初检查点抑制剂的实例，它们是分别阻断细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和PD-1途径的活性的mAb，从而因其负调控作用而释放T细胞启动和效应T细胞功能。

除了负调节效应T细胞功能的调节机制之外，共刺激途径也是有吸引力的调节靶标以开发抗癌剂。OX40(CD134)是跨膜受体的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族的成员，其在CD4+和CD8+ T细胞的抗原依赖性刺激以及与其同源配体(OX40L，在活化的抗原呈递细胞上表达)的相互作用之后被诱导，其通常在T细胞活化过程中起转导共刺激信号的作用。在血液和外周组织中，OX40表达被限于最近激活的CD4+和CD8+细胞的小亚群；然而，在肿瘤中，浸润性T淋巴细胞富集OX40阳性细胞，其中它通过直接和间接(例如细胞因子释放)机制起到增强T细胞活化、增殖和存活的作用[Betting，2009；Croft，2010]。除了其对效应T细胞的功能之外，OX40也在肿瘤浸润性调节性T细胞(Treg)上表达，其倾向于对免疫应答具有抑制作用。实际上，抗OX40抗体在动物肿瘤模型中的功效在一定程度上还取决于肿瘤微环境中肿瘤特异性Treg的消耗[Bulliard，2014；Marabelle，2013]。如已经针对抗CTLA4和抗GITR(糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因)抗体所显示的，该肿瘤内Treg消耗对于免疫检查点抗体的体内抗肿瘤活性是关键的并且由位于肿瘤微环境中的活化的FcγR阳性髓样细胞介导[Bulliard，2013；Selby，2013；Simpson，2013]。已显示OX40信号传递阻断了诱导的Treg的活性，其部分是通过阻断抑制性细胞因子白介素10(IL-10)的释放，从而进一步促进效应T细胞免疫应答[Ito，2006]。最后，OX40也可以在自然杀伤(NK)细胞上发现，其中它似乎刺激NK介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)[Liu，2008]。总之，这些潜在的作用机制使利用激动剂刺激OX40成为新型抗癌免疫疗法的有吸引力的靶标。

抗体106-222

背景

抗体106-222是人源化野生型IgG1抗OX40激动性mAb。抗体106-222显示了几种体外作用机制，包括促进效应CD4+ T细胞增殖、抑制产生IL-10的CD4+1型调节性(Tr1)细胞的诱导和阻断天然Treg(nTreg)的抑制功能、以及与FcR的结合，预期其通过在FcR阳性细胞上经由Fc结构域与抗体交联来增强OX40信号传导。重要的是，已经表明OX40活化给T细胞提供共刺激信号，这取决于T细胞受体(TCR)接合，这表明抗体106-222在所测试的模型中不是超级激动剂。

合适地，抗体106-222与食蟹猴OX40交叉反应以评估在该物种中的药理学、药效学、PK和毒理学。食蟹猴中的单次和重复剂量研究表明抗体106-222与OX40阳性细胞结合。抗体106-222不与啮齿动物OX40交叉反应；然而，鼠OX40的替代mAb(OX86)用于产生体内非临床证据，以证明在一系列同基因肿瘤模型中的单药疗效和与多种其他免疫治疗药物的组合协同作用。

抗体106-222的非临床药代动力学

已在小鼠中在单次腹膜内(IP)给药后、以及在食蟹猴中在单次和重复的静脉内(IV)给药后研究抗体106-222的非临床PK。

单剂量IP给药后雄性小鼠中抗体106-222的PK具有mAb典型的浓度曲线(非常缓慢的血浆清除率和稳定状态下的低分布体积)[Wang，2008]，表明抗体106-222主要局限于体循环。由于缺乏与鼠OX40的交叉反应性，在该物种中不能评估对目标的PK表达的影响。

在猴中观察到mAb典型的类似PK曲线。以2mg/kg在雄性食蟹猴(n＝3)中单次静脉内施用后，所有被抗体106-222处理的动物显示范围为31.8至39.9μg/mL的相似C_max值和类似的全身暴露(AUC_0-168)，直到第5天。在约7至14天在所有处理过的动物中观察到的清除率显著变化，这是典型的免疫原性应答；在ADA桥接测定中，所有动物都被证实对ADA呈阳性。

在食蟹猴中以10或100mg/kg/周重复剂量IV给药4周后，抗体106-222的平均AUC_0-168h和C_max值在第1周和第4周在两种剂量下在雄性和雌性之间相似。对抗体106-222的全身性暴露(由性别平均AUC_0-168h和C_max值定义)按剂量成比例增加(n＝3/组)。在两种剂量下，抗体106-222从第1周至第4周的性别平均化的AUC_0-168h和C_max值的增加范围为1.9至2.9倍。由于灵长类动物ADA的形成，在猴子中以10mg/kg/周在第四次给药后观察到血浆浓度降低的实例。

抗体106-222的非临床安全性

在食蟹猴中进行毒理学程序。根据OX40受体在组织中的表达、垂直同源的蛋白质序列同源性以及抗体106-222对CD4+ T细胞上人和猴OX40受体的类似的剂量依赖性结合，证明这些猴子是合适的物种。对正常人组织中OX40分布的IHC评估表明在许多组织中存在细胞或淋巴样细胞聚集体(被认为可能是T细胞的一个子集)中的阳性染色。这些结果总体上与评估微阵列基因表达数据库(Gene Logic，Ocimum Biosolutions，LLC，Houston，TX，USA)的结果一致。

在以高达100mg/kg/周的剂量每周静脉内给药4周后，抗体106-222在猴子中耐受性良好。

在给药≤10mg/kg/周的猴子中观察到ADA；发生率与剂量成反比。在PK/药效学研究中，所有猴子(n＝3)或三只中的两只猴子分别给药被2或10mg/kg/周，其显示早在给药(2mg/kg/周)后7天就有清除率的急剧增加，并且证实ADA阳性。在每周给药抗体106-222保持4周以及随后进行6周停药期(off-dose period)的猴子中，在给药10mg/kg/周的10只猴子中的两只检测到ADA，其中一只猴子(效价(titer)>10000)显示出在在第四次每周剂量后暴露量下降，另一只直到停药期都没有可检测到的ADA的猴子(效价＝1000)，没有表现出与减少暴露量的明确关联。由于仅在整个停药期间维持的动物中注意到ADA，所以在该研究中在该剂量下在终末尸体剖检动物中确定毒性的能力没有被ADA损害。在施用人源化蛋白质的动物中产生ADA通常不能预测人类ADA形成的潜力。

在带有4T1乳腺癌细胞的BALB/c小鼠的体内同基因型功效研究中，在给药≥20μgOX86(抗OX40受体的大鼠野生型IgG1mAb)的大多数小鼠中在每周两次给药的第3周(第5次给药)观察到与过敏反应一致的死亡率和临床观察结果。这种效应对于这种特定的模型来说似乎是独一无二的，因为使用以相当的剂量和持续时间给药同一批次的OX86的具有其他同基因细胞类型的BALB/c或C57BL/6小鼠进行的其他功效研究证明没有耐受性问题。其他人使用携带4T1肿瘤的小鼠(给药大鼠抗PD-1或仓鼠PD-L1[Mall，2014]或仅给药肿瘤[duPre，2007])已观察到类似的作用。迄今为止，在接受OX40激动剂mAb或批准的PD-1疗法的受试者中尚未报道过敏反应[Curti，2013；Prescribing Information，2014；Prescribing Information，2014]。因此，基于上述数据和文献研究结果，表明在给药OX86的携带4T1肿瘤的小鼠中观察到的过敏反应是特定于该模型的并且所提出的安全监测策略(ADA和急性超敏反应的实时监测，参见Dose and Safety ManagementGuidelines Section)充分解决了这种作用的潜在风险。

已经研究了抗体106-222诱导细胞因子释放的可能性。在人体外测定中，使用全血或分离的外周血单核细胞(PBMC)(先前有和没有抗CD3和抗CD28刺激)，没有观察到反应于可溶性或固定化抗体106-222的细胞因子的释放。然而，为了进一步探索细胞因子释放的可能性，将人PBMC以更高的(10X)细胞密度孵育，与固定的抗体106-222一起温育，并用次最高水平的固定化抗CD3(低10倍和低100倍)刺激以提供更敏感的测定条件。在这些测定中，与单独的抗CD3相比，观察到增加的细胞因子产生(IL-2，IFNγ，TNFα)。使用分离的人CD4+ T细胞以及固定的抗体106-222，先进行抗CD3和抗CD28刺激以上调OX40表达，并延长培养期(48-72小时相比24小时)，也观察到相似的细胞因子增加以及增殖。在长达4周给药时间的重复剂量猴研究中，在0.03至100mg/kg/周的剂量范围内，在第一次给药的4或24小时或第二次每周给药后的4小时，血浆细胞因子水平没有与抗体106-222相关的变化。虽然由于活化T细胞，预期给药抗体106-222的受试者中细胞因子释放水平低(作为药效学的一部分)，但这些体外试验可能无法完全预测其反应，并且计划进行密切的临床监测。

尚未用抗体106-222进行单剂量安全性药理学研究。在4周猴子毒理学研究的第3周进行心血管功能评估，其评估心率、心电图(ECG)波形评估和校正的QT间期(QTc)评估。对这些心血管测量结果没有与抗体106-222相关的影响，也没有该抗体的呼吸道或一般行为效应的任何临床观察。

无明显损害作用水平(NOAEL)被确定为100mg/kg/周，其为测试的最高剂量(第4周性别平均值AUC_0-168h：594mg.h/mL，范围548-634mg.h/mL；Cmax：4.88mg/mL，范围4.27至5.46mg/mL)。

抗体106-222的非临床活性和药效学

体外研究

抗体106-222在体外显示了几种作用机制，包括促进效应CD4+ T细胞增殖、抑制产生IL-10的CD4+Tr1细胞的诱导、和阻断nTreg的抑制功能，并与FcR结合，预期其通过在FcR阳性细胞上经由Fc结构域与抗体交联来增强OX40信号传递。

抗体106-222特异性结合来自食蟹猴(Kd408nM)和人(Kd 4.9nM)的重组OX40细胞外结构域，但不与相关的人受体DcR3和CD40结合。抗体106-222与活化的食蟹猴和人类的CD4+ T细胞结合，具有相似的EC₅₀值(分别为0.35和0.30μg/mL)。这些数据表明观察到的与重组OX40结合的亲和力差异并不真正反映与细胞表面OX40的结合。

许多抗TNFR家族抗体(包括抗OX40)似乎需要形成高密度抗体复合物和共刺激，该共刺激可在表达各种FcγR的组织中细胞:细胞相互作用期间于体内发生[White，2013]。在OX40抗体的情况下，这可以通过将抗体固定在塑料组织培养板的表面上并在该平板结合的抗体上孵育细胞而在体外模拟。重要的是，显示依赖于TCR接合(例如CD3连接)，OX40活化给T细胞提供共刺激信号，表明抗体106-222在不存在TCR信号下测试的体外系统中不是超激动剂。抗体106-222(固定的)刺激固定的抗CD3活化的食蟹猴CD4+T细胞的增殖，其具有0.72μg/mL的平均EC₅₀值(4.8nM)，而抗CD3诱导的活化的人CD4+ T细胞增殖所具有的平均EC₅₀值为0.19μg/mL(1.3nM)。

已显示OX40激动剂抗体降低人类Treg的抑制功能。使用维生素D3和地塞米松将纯化的人CD4+ T细胞分化为诱导的Treg，并与表达人CD32a(FcγRIIA)的L细胞(其可以通过FcγRIIA促进抗体交联)一起培养。在分化阶段期间在溶液中添加抗体106-222能够防止天然T细胞分化成IL-10⁺Tr1细胞。

如对于IgG1抗体所预期的，抗体106-222与食蟹猴和人FcRγ(以及人补体C1q)结合并且在报道测试系统中显示出较低但可测量水平的报道子FcγRIIIA接合。在ADCC测定中，通过抗体106-222处理观察到OX40+靶细胞系的一些细胞裂解。然而，在原代人PBMC测定中，抗体106-222通常不影响CD4+和CD8+ T细胞的存活力。PBMC ADCC数据的统计分析不支持抗体106-222对活力的强作用。在所有情况下，由抗体106-222导致的存活力降低小于对抗CD52或抗CD20阳性对照抗体所观察到的。总的来说，这些体外研究结果表明抗体106-222可具有在体内引起OX40+靶细胞的ADCC的能力，然而作用在供体之间不一致，并且这些体外测定可能不能充分反映体内免疫微环境。

体内研究

在单次IV给药(2mg/kg)抗体106-222的食蟹猴中，在第2天出现OX40+/CD4+ T细胞百分比的瞬时降低，到第7天恢复，表明抗体106-222似乎与外周血中的OX40+细胞结合，并且可能反映这些细胞的着边(margination)而不是消耗。在重复剂量IV研究中，对食蟹猴给药抗体106-222(10mg/kg/周)达4周。如在单剂量研究中所观察到的，与载体组相比，用抗体106-222处理的组中的外周血T细胞上的游离OX40百分比减少，其在研究的持续期间一直保持。这间接表明抗体106-222在给药后与OX40+细胞结合。OX40阳性细胞似乎没有被消耗，因为可以使用非竞争性抗OX40抗体检测到它们。在任一研究中，与未治疗组相比，治疗组的外周血、脾脏或淋巴结中未观察到T细胞活化标记物变化的明确证据。在治疗组和未治疗组的这些组织中也检测到OX40阳性细胞，表明细胞未在组织中被抗体106-222消耗。在这两项研究中都没有临床观察结果被认为与治疗相关。

使用鼠OX40的替代mAb(OX86)来在同系基因型肿瘤模型中产生单药疗法活性的体内非临床证据。在一系列实验中，携带CT26小鼠结肠癌肿瘤的雌性BALB/c小鼠(n＝10/组)每周两次以1至400μg/小鼠范围内的剂量IP给药磷酸盐-缓冲盐水中的OX86，达3周。与对照组相比，所有剂量均显示存活率显著增加(图13a和b)。假设抗OX86和抗体106-222之间具有相似的效力，预测已经在临床前显示功效的暴露可在人受试者中实现。

使用携带A20小鼠淋巴瘤细胞系肿瘤的BALB/c小鼠进行另外的体内实验，并且显示适度的肿瘤减少，而携带B16F10小鼠黑素瘤细胞系肿瘤的C57BL/6小鼠就所记录的肿瘤减少或存活而言没有显著效果。此外，由于人源化小鼠模型不可用，因此使用小鼠过继性细胞转移(ACT)模型MC38/gp100在体内评估抗体106-222。总体而言，ACT模型不鲁棒，产生高度可变的结果。

还使用抗体106-222组合抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体进行同系基因型肿瘤模型中的体内研究；下面简要描述抗PD-1组合研究。

派姆单抗

有关派姆单抗的详细背景信息，请参阅派姆单抗IB/批准的标签[Prescribing Information，2014；Merck Sharp&Dohme Corp，2014]。

PD-1作为治疗靶点

PD-1受体-配体相互作用是被肿瘤劫持以抑制免疫控制的主要途径[Pedoeem，2014]。在健康条件下在活化T细胞的细胞表面上表达的PD-1的正常功能是下调不需要的或过度的免疫应答，包括自身免疫反应。PD-1(由基因Pdcd1编码)是与CD28和CTLA-4相关的Ig超家族成员，其已经显示在与其配体(PD-L1和/或PD-L2)接合后负调节抗原受体信号传递。首先确定了单独的鼠PD-1[Zhang，2004]和与其配体的复合物[Lazar-Molnar，2008；Lin，2008]的结构，最近还基于NMR报道了人PD-1胞外区的结构及其与其配体相互作用的分析[Cheng，2013]。PD-1和家族成员是I型跨膜糖蛋白，其含有负责配体结合的Ig可变型(V型)结构域和负责信号传递分子结合的胞质尾区。PD-1的胞质尾区含有2个基于酪氨酸的信号基序、基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)和基于免疫受体酪氨酸的开关基序(ITSM)。在T细胞刺激后，PD-1将酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2募集到其胞质尾部的ITSM基序中，导致效应分子如CD3ζ、PKCθ和ZAP70的去磷酸化，其在CD3 T-细胞信号级联中涉及[Sheppard，2004]。PD-1下调T细胞应答的机制与CTLA-4相似但不同[Ott，2013]。已显示PD-1在活化的淋巴细胞上表达，包括外周CD4+和CD8+ T细胞、B细胞、Treg和NK细胞[Yao，2014]。在CD4-CD8-(双阴性)T细胞[Nishimura，1996]以及巨噬细胞[Huang，2009]和树突细胞[-Cruz，2010]的亚集的胸腺发育过程中也显示出表达。PD-1的配体(PD-L1和PD-L2)是组成性表达的或可以在多种细胞类型中诱导[Keir，2008]。PD-L1在多种非造血组织中以低水平表达，最显著的是在血管内皮上，而PD-L2蛋白仅在淋巴组织或慢性炎症环境中发现的抗原呈递细胞上被可检测地表达[Keir，2008]。两种配体都是I型跨膜受体，其在细胞外区域和短细胞质区域含有IgV样和IgC样结构域，而没有已知的信号基序。PD-1配体与PD-1的结合抑制了通过T细胞受体触发的T细胞活化。PD-L2被认为可以控制淋巴器官中的免疫T细胞活化，而PD-L1用于抑制外周组织中不必要的T细胞功能。虽然健康的器官表达很少(如果有的话)的PD-L1，但是多种癌症被证明表达丰富水平的这种T细胞抑制剂[Karim，2009，Taube，2012]，其通过在肿瘤特异性T细胞上与PD-1受体的相互作用，在肿瘤免疫逃逸中起关键作用[Sanmamed，2014]。因此，PD-1/PD-L1途径是癌症治疗干预的有吸引力的靶点[Topalian，2012]。

派姆单抗背景和临床试验

派姆单抗[KEYTRUDA(US)；以前称为兰利珠单抗、MK-3475和SCH9000475]是被设计以用于直接阻断PD-1与其配体PD-L1和PD-L2之间相互作用的IgG4/κ同种型的有效且高度选择性的人源化mAb。派姆单抗最近在美国获得批准，适用于治疗患有不可切除或转移性黑素瘤且在伊匹单抗以及BRAF抑制剂(如果为BRAF V600突变阳性)治疗后具有疾病进展的受试者[Prescribing Information，2014；Poole，2014]。这是第一个获得美国监管部门批准的抗PD-1疗法，目前正在欧盟进行监管审查。

正在对晚期黑色素瘤、NSCLC、头颈癌、尿路上皮癌、胃癌、TNBC、霍奇金淋巴瘤和许多其他晚期实体瘤适应症和恶性血液病进行持续的临床试验。有关研究详情，请参阅IB[Merck Sharp&Dohme Corp，2014]。

派姆单抗剂量选择的原理

目前正在开展一项开放标签的I期试验(KEYNOTE-001)，以评估单药派姆单抗的安全性和临床活性。该试验的剂量递增部分在具有晚期实体瘤的受试者中评估了三个剂量水平：1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg，每2周施用一次(Q2W)。所有三个剂量水平都耐受良好，没有观察到剂量限制性毒性。这首次在派姆单抗的人体研究中显示了在所有剂量水平(1mg/kg，3mg/kg和10mg/kg Q2W)下靶标接合的证据和肿瘤大小减小的客观证据。没有鉴定到MTD。

在KEYNOTE-001中，完成了接受剂量为2mg/kg和10mg/kg Q3W的派姆单抗的黑素瘤受试者的两项随机队列评估，也完成了10mg/kg Q3W和10mg/kg Q2W的一项随机队列评估。临床疗效和安全性数据表明，在这些剂量下，在功效反应或安全性方面缺乏临床上重要的差异。例如，在队列B2中，先前接受了伊匹单抗治疗的晚期黑素瘤受试者随机接受2mg/kg和10mg/kg Q3W的派姆单抗。2mg/kg组中ORR为26％(21/81)，10mg/kg组中为26％(20/76)[Robert，2014]。具有药物相关的AE、3-5级药物相关的AE、严重药物相关的AE、因AE引起的死亡或中止的受试者比例在各组之间相当或在10mg/kg组中更低。在队列B3中，晚期黑素瘤受试者(无论是否有先前的伊匹单抗治疗)被随机化以接受10mg/kg Q2W和10mg/kg Q3W的派姆单抗。10mg/kg Q2W组中ORR为30.9％(38/123)，10mg/kg Q3W组中为24.8％(30/121)。具有药物相关的AE、3-5级药物相关的AE、严重药物相关的AE、因AE引起的死亡或中止的受试者比例在各组之间相当

以Q2W和Q3W施用的派姆单抗的PK数据分析显示缓慢的全身清除、有限的分布体积和长的半衰期[Merck Sharp&Dohme Corp，2014]。药效学数据(IL-2释放测定)表明外周靶标接合是持久的(>21天)。这种早期的PK和药效学数据为测试Q3W给药方案提供了科学依据。由于Q3W给药对受试者更方便，将进一步研究Q3W给药。

根据以下在实体瘤中进一步探索2mg/kg和相当剂量的派姆单抗的基本原理：1)当在黑素瘤受试者中以2mg/kg或10mg/kg Q3W给药时，派姆单抗相似的功效和安全性；2)在2mg/kg Q3W至10mg/kg Q3W的剂量范围内，在功效和安全性方面派姆单抗的扁平的暴露-反应关系；3)肿瘤负荷或适应症对派姆单抗的分布行为没有作用(通过群体PK模型评估)；和4)假设派姆单抗靶标接合的动力学不会随肿瘤类型产生有意义的变化。

200mg Q3W的固定给药方案的选择是基于使用派姆单抗群体PK模型进行的模拟，表明每3周200mg的固定剂量提供的暴露量：1)与每3周2mg/kg剂量获得的结果最一致；2)将个体受试者暴露量维持在与最大功效反应相关的黑素瘤中建立的暴露范围内；以及3)将个体受试者暴露量维持在黑素瘤中建立的良好耐受和安全的暴露范围内。

固定剂量方案对于医师来说也将更简单和更方便，并减少给药错误的可能性。固定剂量方案将降低治疗设施物流链的复杂性并减少浪费。

OX40激动剂和PD-1抑制剂组合的原理

抗癌免疫应答是一个多步骤过程，包括抗原加工和呈递、T细胞启动和激活、肿瘤浸润以及随后被活化的效应T细胞破坏[Chen，2013]。这些步骤中的每一个都可以被负调控，这为恶性肿瘤提供了阻断抗癌免疫应答的冗余机制。在某些情况下，肿瘤将高度依赖于单一机制，在这些情况下，利用单一免疫调节疗法可实现显著的临床活性。然而，预计肿瘤通常会利用冗余机制来阻断抗肿瘤免疫应答。在这些情况下，将会需要组合治疗。最近描述的组合免疫疗法的益处的实例是通过伊匹单抗(抗CTLA-4)和纳武单抗(抗PD-1)的组合在患有转移性黑素瘤的受试者中产生的临床数据[Wolchok，2013]。

将OX40激动剂与抗PD-1药物组合的基本原理是基于这两种药物靶向癌症免疫周期中不同步骤的事实。类似于伊匹单抗/纳武单抗的组合，预期抗体106-222会增加抗肿瘤T细胞的引发/活化，而抗PD-1药物派姆单抗阻止在肿瘤中PD-1/PD-L1途径对效应T细胞的抑制作用。最近，Guo等人在鼠ID8卵巢癌模型中报道了PD-1阻断和OX40激动的组合的协同抗肿瘤活性。组合治疗的活性与CD4+和CD8+细胞的增加以及CD4+FoxP3+Treg和CD11b+Gr-1+髓样抑制细胞的减少有关[Guo，2014]。

使用鼠OX40的替代mAb(OX86)产生体内非临床证据，以证明在同系基因型肿瘤模型中与PD-1抑制剂的组合协同作用。在一系列实验中，对携带CT26小鼠结肠癌细胞系肿瘤的雌性BALB/c小鼠(n＝10/组)以1至400μg/小鼠每周两次IP给药OX86，并组合给药抗PD-1mAb(20或200μg/小鼠)达4周。与盐水和同种型对照相比，OX86和抗PD-1mAb单药疗法均降低肿瘤体积并提高存活率；然而，与单药疗法相比，OX86/抗PD-1的组合显著增加存活并且耐受性良好(图14)。对携带A20小鼠淋巴瘤细胞系肿瘤的雌性BALB/c小鼠报告了类似的组合效力和存活结果；然而，在携带B16F10小鼠黑素瘤细胞系肿瘤的雌性C57BL/6小鼠中没有报道协同作用或累加作用。

目标和终点

a.在最终确定MTD时，将考虑所有可用的安全性和耐受性数据。

b.除非另有说明，否则所有消退终点将通过实体肿瘤反应评估标准(RECIST)v1.1和irRECIST(免疫相关RECIST)评估；irRECIST将用于确定治疗决策。

RNA＝核糖核酸；DNA＝脱氧核糖核酸

b.除非另有说明，否则所有反应终点将通过RECIST v1.1和irRECIST评估；irRECIST将用于确定治疗决策。

RNA＝核糖核酸；DNA＝脱氧核糖核酸

研究设计

总体设计

这是FTIH、开放标签、非随机的多中心研究，其设计用于评估向具有选择的晚期或复发性实体瘤的受试者静脉内给药抗体106-222的安全性、耐受性、PK、药效学和初步临床活性。

该研究分两部分进行，每部分由剂量递增阶段和随后的队列扩展(cohortexpansion)阶段组成(参见图15)。第1部分将评估抗体106-222单药疗法，第2部分将评估抗体106-222与派姆单抗联用。如图15所示，首先将抗体106-222作为逐渐递增剂量的单药疗法进行评估。一旦确定了既可耐受又显示药效学活性的抗体106-222的剂量，则可开始第2部分的招募。在第2部分中，递增剂量的抗体106-222将首先与固定剂量的派姆单抗一起评估。每个部分还将包括扩展队列以用于最多三种不同的肿瘤类型。

该研究将招募大约180名受试者，其肿瘤类型可包括NSCLC、SCCHN、RCC、黑素瘤、膀胱癌、STS、TNBC和MSI CRC。在研究的剂量递增阶段，可以包括具有任何上述肿瘤类型的受试者；而在研究的队列扩展阶段，每个扩展队列将招募具有选自上述列表中的一种特定肿瘤类型的受试者。研究的每个部分最多可包含三个扩展队列。

受试者在基线后访视时的疾病状态和疾病进展的确定将由当地研究者根据放射学评估通过RECIST v1.1和irRECIST进行评估；由于疾病进展而停止治疗的决定将基于irRECIST；但是，主要终点分析将使用RECIST v1.1。扫描将被集中收集并存储，以便进行中央放射检查或审查。

将建立一个指导委员会来审查研究过程中的安全性、PK和其他临床数据，为研究结果提供客观解释，并为重要决策提供指导。指导委员会的职权范围将包括对研究从剂量递增到队列扩展以及从第1部分到第2部分的过渡的指导，选择扩增队列中包括的特定肿瘤类型，以及选择推荐的2期剂量(RP2D)；研究小组还将征求GSK Medical Governance对研究从一个部分转换到另一个部分的认可。在最终确定MTD和RP2D时，将考虑所有可用的安全性和耐受性数据。在审查这项研究中所出现的数据并在指导委员会的指导下，该方案可能会随后进行修订，以包括与抗体106-222组合的其他抗癌药物的研究。指导委员会章程介绍了指导委员会的职权、成员、角色和责任。指导委员会的主要决定将形成文件并向所有参与的主要调查员(PI)和机构审查委员会(IRB)/独立伦理委员会(IEC)报告。

剂量递增

对于前两个剂量水平(见表2)，计划了加速滴定设计，对这些剂量水平的每一个招募一名受试者。每名受试者必须完成4周的DLT评估期，并且在决定是否进入下一个剂量水平之前必须审查可用的安全性数据。如果受试者经历DLT，那么这将引发实施修改后的3+3设计，如表2所示。如果受试者由于DLT以外的原因而在4周DLT评估期结束前退出研究，受试者将被替换。

对于随后的剂量水平，如表2所示，将使用修改的3+3设计用于剂量递增。在第三剂量水平下治疗的前三名受试者将相隔1周开始治疗，以允许在开始下一名受试者的治疗开始之前评估每位受试者中的初始安全性数据。在做出是否需要在相同或下一个较高剂量水平上招募其他受试者的决定之前，需要对至少3名受试者评估治疗前4周内的可用安全性数据。因DLT以外的原因而在完成4周治疗前退出研究的受试者可被替换。在第三剂量水平队列完成后，随后的剂量水平可以最初招募至多4名受试者，并且受试者将间隔至少24小时开始治疗。

如果3名受试者中的1名(或4名受试者中的1名)在特定剂量水平下经历DLT，则将对该剂量水平招募额外的受试者，从而总共6名受试者在该剂量水平下接受治疗。如果6名受试者中的至少2名在特定剂量水平经历DLT，则可探索较低(或中等)剂量水平以更好地定义MTD。指导委员会可建议，如果存在以下情况，则可以将给定的剂量递增队列扩展到总共12名受试者：(i)基于在已经招募到队列中的6名受试者中观察到的安全性特征，需要给定毒性的频率的进一步评估，或(ii)需要药效学标记物的进一步评估以帮助进行剂量选择；在任一情况下，确认的DLT的发生率不得超过33％。剂量递增决定将以书面形式记录，并在每个站点和研究文件中保存副本。

表2：3+3剂量递增指导

a.指导委员会可建议，可以将给定的剂量递增队列扩展到总共12名受试者，条件是如果：(i)根据在队列中已经招募到的6名受试者中观察到的安全性特征，需要进一步评估给定毒性的频率；(ii)需要进一步评估药物动力学标记物以帮助进行剂量选择；在任一情况，确认的DLT的发生率不得等于或超过33％。

DLT＝剂量限制性毒性；MTD＝最大耐受剂量

第1A部分：单一治疗剂量递增

抗体106-222单药疗法的剂量递增将以Q3W施用的0.003mg/kg抗体106-222的起始剂量开始(参见剂量验证部分)。表3说明了对于每个剂量水平的增加可以选择的最大剂量。剂量的最大增加量是3.33倍或更少。如果暴露量明显高于预期，如果毒性过大，或者如果需要进一步评估药效学标记物以帮助进行剂量选择，则可以探索表3中的剂量水平之间的水平或每三周一次以外的时间表。

表3第1A部分剂量水平

剂量水平	抗体106-222(mg/kg)^a
		1	0.003
2	0.01
		3	0.03
4	0.1
		5	0.3
6	1.0
		7	3.0
8	10.0

a.如果暴露量显著高于预测值，如果毒性过大，或者如果需要进一步评估药效标记物以帮助进行剂量选择，则可以探索较低的剂量强度。这可以通过减少剂量或通过替代的给药时间表来实现。

第2A部分：组合剂量递增(抗体106-222+派姆单抗)

抗体106-222+派姆单抗组合治疗的剂量递增将开始于Q3W给药200mg固定剂量的派姆单抗和起始剂量的抗体106-222，该起始剂量比抗体106-222单药疗法的耐受剂量(其在该研究的第1A部分中也表现出药效学活性)低至少2个剂量水平。表4中描述了抗体106-222和派姆单抗的潜在组合的实例。在该实例中，单独d11mg/kg抗体106-222的剂量在研究的第1A部分中在至少3名受试者中是耐受的。

表4第2A部分剂量水平的实例

剂量水平	抗体106-222(mg/kg)	派姆单抗(mg)
			1	0.1	200
2	0.3	200
			3	1.0	200
4	3.0	200
			5	10.0	200

如果第2A部分的起始剂量队列中的组合剂量是不耐受的，则可以与200mg派姆单抗组合评估较低剂量的抗体106-222。在整个研究中，派姆单抗的剂量将保持固定在200mg。

如剂量递增部分中所述，剂量递增将继续，直到鉴定出组合方案的MTD。剂量递增决策将考虑所有可用数据，包括在受试者研究期间此前队列的安全性，其将由研究人员、GSK医疗监视员、药代动力学家和统计学家进行评估。后续队列的剂量递增决策和基本原理将以书面形式记录，并在每个站点和研究档案中保存副本。

任何队列可扩大超过剂量递增期间招募的3至6名受试者，最多可达12名，以便于收集额外的安全性、PK和药效学数据。在开始剂量扩展阶段之前，总共至多12名受试者可用被选择用于1B和2B部分的抗体106-222剂量治疗，以更好地表征在该剂量下的安全性、PK和药效学数据。

剂量限制性毒性

所有毒性将使用国家癌症研究所-不良事件的常见毒性标准(NCI-CTCAE)(4.0版)进行分级。

如果研究者认为AE在治疗的前4周(即28天)期间与研究治疗具有临床相关性并将其归因于(明确、很可能或可能)研究治疗，并且至少符合表5中列出的标准之一，则该AE被视为DLT。如果AE被认为与潜在疾病有关，那么它不是DLT。对于第2部分，已知派姆单抗发生≥3级的毒性且在2周内使用推荐的支持措施被控制住，这可不被视为剂量限制性。

表5剂量限制性毒性标准

a.剂量和安全管理指南部分中描述了针对毒性建议的管理指南，且可包括用于免疫相关毒性的全身性皮质类固醇；如果全身性皮质类固醇的使用延迟了第二剂研究治疗的施用，但该事件不符合非血液学毒性的DLT标准，则剂量延迟将不被认为是DLT。

DLT＝剂量限制性毒性；G-CSF＝粒细胞集落刺激因子；AST＝天冬氨酸转氨酶；ALT＝丙氨酸转氨酶；ULN＝正常上限；GSK＝葛兰素史克

如果受试者在治疗的最初4周内经历DLT，则受试者将停止接受研究治疗，除非研究者认为受试者继续研究的利益最佳(例如，在肿瘤消退、症状对应疾病改善的情况下，和/或如果DLT的类型在随后的周期中被视为可预防的，例如通过预先给药)。在相同或更低剂量的研究治疗继续之前，这些情况需要主办者批准。

在剂量和安全管理指南部分中提供了毒性管理指导，包括剂量修改算法，并且其是基于自伊匹单抗和PD-1抑制剂如派姆单抗开发以来的免疫相关不良事件(irAE)的管理经验。剂量和安全管理指南部分包括非血液学AE管理的一般指南、irAE管理的一般指南(免疫相关不良事件通用指南部分)、irAE识别和评估的一般原则(免疫相关不良事件识别和评估的一般原则部分)以及以下的具体指导：肝毒性(肝毒性管理部分)、胃肠道事件(胃肠道事件(腹泻或结肠炎)管理部分)、皮肤毒性(皮肤毒性管理部分)、内分泌事件(内分泌事件管理部分)、肺炎(肺炎管理部分)、血液学事件(血液事件管理部分)、葡萄膜炎/虹膜炎(葡萄膜炎/虹膜炎部分)、输液反应或严重细胞因子(输液反应或严重细胞因子释放综合征(sCRS)管理部分)和剂量延迟(剂量延迟部分)。

队列扩展

为了收集关于安全性、PK、药效学活性和临床活性的额外数据，可以选择1A和2A部分(剂量递增)中的任何剂量水平用于研究的1B和2B部分中的队列扩展。

每个扩展队列将包括具有单一肿瘤类型的受试者，并且将招募至多大约20名将以选定剂量水平治疗的受试者。在第1B部分和第2B部分中，最多招募三个扩展队列，每个队列一个适应症。肿瘤适应症的选择将部分分别基于在第1A部分和第2A部分中生成的数据。指导委员会将在选择所有3个队列的剂量水平适应症之前，审查可用的初步安全性、PK、药效学和临床活性数据。在确定扩展哪些剂量水平以及选择哪些肿瘤类型用于队列扩展时可以考虑的标准可以包括：

·靶点接合和药效学活性：观察的OX40受体占用率和药效学活性。药效学活性将通过评估全血中T细胞活化和增殖的标记物来确定。还将评估淋巴细胞的数量和活化状态的变化，并与个体反应以及肿瘤内的免疫细胞群体相关联(参见生物标记物/药效学标记部分)。

·耐受性：DLT的频率，特别感兴趣的AE(AESI)以及抗体106-222或组合药物的剂量修改的程度。

·临床活性：临床反应的证据，包括至少12周的SD和/或较小的反应。

在一个给定的扩展队列中招募了10名受试者之后，指导委员会可以建议该扩展队列持续增加，直到总共至多约20名受试者。虽然预计每个队列中额外的10名受试者将以与最初10名受试者相同的剂量水平进行治疗，但指导委员会可以建议根据出现的数据探索不同的剂量水平。

剂量水平的选择和选择用于队列扩展的肿瘤类型将以书面形式通知到现场。

受试者内的剂量递增

除了以下内容外，不会有受试者内剂量递增。在确定为第1B部分选择的剂量后，在1A部分中以较低剂量治疗的受试者可以考虑递增/滴定至第1B部分的剂量。对于这些受试者，是否进行剂量递增的决定将在研究者和GSK医疗监测者达成一致后基于个例进行。

研究的第2部分不会出现受试者内的剂量递增。

治疗组和持续时间

该研究包括筛查期、治疗期和随访期。受试者将在治疗开始前约4周开始筛查资格。抗体106-222治疗的最长时间为48周；派姆单抗治疗的最长时间为2年(表6)。安全性评估的随访期将为从最后一次给药之日起至少3个月。治疗后的随访期包括每12周进行一次疾病评估，直至记录PD。在PD后，将每3个月接触一次受试者以评估生存状态。

确认PR或CR的受试者将被随访以获得反应持续时间，并可以有资格在复发/进展时使用抗体106-222进行额外治疗。治疗研究者和主办者/医疗监测者将根据具体情况讨论和同意受试者是否接受额外治疗。

表6研究治疗

a.关于剂量水平参见表3。

b.在每个部分的剂量递增中显示可耐受的的一个或两个剂量水平。

c.关于剂量水平参见表4。

IV＝静脉内；Q3W＝每3周一次

受试者的类型和数量

剂量水平的数量和达到MTD的水平不能事先确定。将有足够数量的受试者参加研究以确定推荐的剂量以供进一步研究。据估计，这项由两部分组成的研究共计招募约180名受试者(第1A和2A部分约60名受试者[剂量递增]；第1B和2B部分约120名受试者[队列扩展])。

在第1A部分和第2A部分中，如果受试者在完成4周治疗之前由于DLT以外的原因过早停止治疗，可以由主办者与研究者协商后酌情考虑招募替代受试者。研究的第1B部分和第2B部分不会更换受试者。

设计验证

本研究评估抗体106-222作为单药疗法和与抗PD-1派姆单抗组合的安全性、耐受性、药效学效应和初步临床活性。单药疗法抗体106-222的安全性、耐受性和药效学将在修正的3+3剂量递增中进行评估，该剂量递增包括对前两个剂量水平加速的滴定设计。剂量递增之后是在限定的受试者群体中的扩展队列。在证明明确的药效学免疫激活后，可以开始探索抗体106-222与派姆单抗的组合，与持续的单药疗法探索并行。抗体106-222与200mg固定剂量的派姆单抗组合的剂量递增将开始于比已经证明在那个时间点是安全的抗体106-222的剂量低至少2个剂量水平的抗体106-222的剂量。

在剂量递增阶段，将招募具有会对抗OX40疗法有反应的选定实体肿瘤的受试者(例如，适应症先前报道对免疫疗法具有应答、预测的免疫原性和/或表达OX40)。在剂量递增中评估的肿瘤类型如下：NSCLC、SCCHN、RCC、黑素瘤、膀胱癌、STS、TNBC和MSI CRC。

几乎所有这些组织之前都显示出对抗CTLA-4和/或抗PD-1/PD-L1治疗的反应[Zamarin，2015]。此外，基因表达数据[TCGA，2014]表明所有这些肿瘤类型都有至少中等程度的OX40表达。

包含与派姆单抗的组合是基于在开发早期鉴定潜在的转化活性的偏好。尽管预期抗体106-222作为单药疗法具有有意义的临床活性，但可能在与其他药剂，特别是免疫疗法的组合中开发该分子的全部潜力。派姆单抗是抗体106-222的理想组合伙伴，因为它靶向癌症免疫周期的不同方面，具有主要为1或2级事件的毒性特征，且临床前数据强烈支持协同作用的潜力。

为了在抗体106-222/派姆单抗组合(第2部分)的招募开始之前有足够的安全性和药效动力学数据，指导委员会将审查包括安全性、药效学和疗效在内的现有临床数据。研究小组还将征求GSK医疗管理部门的意见，以启动研究的第2部分。在决定开启第2部分时，决定将被记录并报告给所有参与的PI和IRB/IEC。

剂量验证

第1部分：起始剂量

根据国际理事会统一人用药品注册技术要求(ICH)S9指导原则，基于最相关物种(食蟹猴)的最高非严重毒性剂量(HNSTD)的1/6计算起始剂量，产生约16mg/kg/周的起始剂量。通过确定最低预期生物效应水平(MABEL)，选择更保守起始剂量，0.003mg/kg的抗体106-222Q3W，作为该FTIH研究的安全起始剂量。通过食蟹猴PK、抗体106-222结合特征和小鼠中的OX86功效数据预测抗体106-222的预计人体暴露，以及对激动OX40途径的先前临床经验的考虑也被作为起始剂量选择的考虑因素。

预测的暴露：在若干食蟹猴研究中评估抗体106-222的PK，其中单次和重复剂量范围为0.03mg/kg至100mg/kg；抗体106-222暴露大致与剂量成比例。在所测试的剂量水平中，PK曲线没有显示靶介导的处置的任何证据。这些结果表明，异速生长方法适用于预测人类PK；此外，预计抗体106-222的人PK与相同同种型的mAb的PK相似。假设70kg受试者的血浆体积为3L，预计0.003mg/kg剂量的Cmax为0.07μg/mL。

非临床安全性：在重复剂量毒理学研究中，在食蟹猴中以0.03至100mg/kg/周的剂量每周IV给药抗体106-222长达4周后的耐受性良好。在这些研究中，没有与测试物品相关的变化，包括与T细胞调节有关的变化。无论计算人体当量剂量(HED)的方法为何，NOAEL都被确定为100mg/kg/周，即所测试的最高剂量，远高于建议的临床起始剂量。

严重的细胞因子释放的潜力：遵循几条研究线以评估抗体106-222诱导过度细胞因子应答的可能性，如针对超级激动剂TGN1412所观察到的。体外和离体数据显示OX40仅在少部分T细胞上表达，即在血液和组织如淋巴结和脾脏中刚刚激活的效应T细胞和调节性T细胞。此外，通过TCR和CD28途径的刺激对于OX40激动作用的最佳T细胞活化是必需的。在体外探索了一系列条件以评估抗体106-222诱导细胞因子释放的潜力。在一些测定中，没有观察到细胞因子释放的证据；然而，在最敏感的测定条件下，使用固定的抗体106-222在预活化的CD4+ T细胞中，观察到细胞因子产生增加(IL-2、IFNγ和肿瘤坏死因子α[TNF-α])。在重复剂量猴子毒理学研究(0.03-100mg/kg的剂量)和CT26小鼠肿瘤模型中的体内细胞因子监测未显示过量的细胞因子释放。这些数据表明抗体106-222不是超级激动剂，并且对于严重的细胞因子释放综合征(sCRS)具有较低的潜能。

MABEL测定：MABEL评估是基于使用主要的人靶细胞的体外结合实验表征的受体占有率。使用受体占有率作为生物学活性的替代物是合适的，因为受体占有率提供靶细胞中抗体106-222信号传递的一般表征，并且因为抗体106-222的个体生物效应在其对受试者安全性的影响方面尚未被优先考虑。抗体106-222与其配体和靶细胞的结合在多个实验中表征，根据细胞活化和OX40表达的程度产生不同的结合系数。

血液中的OX40表达限于刚刚激活的CD4+和CD8+细胞的小亚群[Croft，2010]。在离体研究中，来自健康志愿者的人血或PBMC培养物中OX40+T细胞的频率在<1％的范围内。在肿瘤患者中，与肿瘤部位和引流淋巴结相比，在外周血中也观察到较低的OX40表达[Vetto，1997]。基于这些发现，显示较低但可定量水平的OX40结合的未受刺激的人全血结合测定被认为对外周血中OX40应答最具代表性，并被选择用于测定MABEL。显示抗体106-222以浓度依赖性方式与全血中的淋巴细胞结合，EC50值为1.45μg/mL(汇总来自4个供体的数据)。使用对首次0.003mg/kg剂量预测的0.07μg/mL的Cmax，基于与人全血中淋巴细胞的结合预测受体占有率为5％(在该实验中对应于10％受体占有率的MABEL剂量是0.007mg/kg)。注意，这里和以下的受体占有率计算假设游离和总的抗体106-222之间的差异可忽略不计，即受体占有率＝Cmax/(EC50+Cmax)。与假定特定靶标表达水平的方法相比，该方法产生更高的受体占有率和更保守的剂量估计值。

某些组织中的OX40表达可以高于在外周血中观察到的；例如，在脾和另外在肿瘤的微环境中。在正常食蟹猴中，抗体106-222耐受性良好，在淋巴组织(脾脏)中检测到2-30％的OX40+淋巴细胞频率。据报道，在癌症患者的肿瘤和引流淋巴结中，活化的CD4+/OX40+T-细胞的频率在肿瘤和引流淋巴结样品中高达30％，而外周血中为0％[Vetto，1997]。来自刺激的OX40结合实验的数据，其中细胞被激活并且OX40表达被高度上调，因此预期其在肿瘤和引流淋巴结组织中的抗体106-222的OX40应答更具代表性。对于刺激的PBMC，半极大值的结合通常达到0.1μg/mL至0.3μg/mL，并且类似地，抗体106-222与活化的人CD4+ T细胞结合，平均EC50值为0.19μg/mL。预计外周组织中的单克隆抗体浓度将显著低于血清中的时间匹配浓度[Tabrizi，2010；Shah，2013]。假设给定肿瘤组织的抗体生物分布系数为25％[Shah，2013]，预计峰浓度≤0.018μg/mL，导致受体占有率≤8％，其中对于刺激的PBMC或CD4+ T细胞测定使用0.2μg/mL的结合EC50。将0.2μg/mL的刺激的结合EC50应用于外周血中0.07μg/mL的Cmax，得到预测的受体占有率为26％。然而，这种预测不被认为是临床OX40反应的代表，因为刺激的测定具有比患者血液中预期的更大程度的细胞活化。

总之，预计0.003mg/kg的起始剂量导致血液(基于未受刺激的结合实验)和肿瘤组织和引流淋巴结(基于刺激的结合实验)中OX40受体的占有率小于10％，其通常被假设为免疫激动剂的受体接合的安全水平。

OX40激动作用的临床经验：MEDI6469的临床经验没有在给药单周期的0.1至2mg/kg抗体的受试者中显示细胞因子释放综合征(CRS)或其他严重毒性[Curti，2013]。MEDI6469在0.1、0.4和2mg/kg剂量水平的单周期中的功效没有显示出显著的剂量依赖性差异。在0.4mg/kg剂量水平下实现最大生物活性，其由对T细胞增殖的刺激所定义，该刺激通过反应MEDI6469给药的Ki-67表达变化而测量。使用0.048μg/mL的结合EC50(通过ELISA所测量)[Curti，2013]，MEDI6469的效力与抗体106-222相当(或更高)。使用与上述相同的方法预测Cmax和结合，0.1mg/kg MEDI6469的起始剂量与0.048μg/mL的结合常数[Curti，2013]导致在Cmax时在中心循环中预测的受体占有率为98％，进一步支持0.003mg/kg的抗体106-222的起始剂量。

临床益处的潜力：已经用抗OX86抗体(针对鼠OX40的替代mAb)评估了激动OX40途径的功效。在CT26小鼠结肠癌模型中，在最敏感的实验中在低至每只小鼠5μg的剂量下观察到强效功效(图13b)。假设抗OX86和抗体106-222之间具有相似的效力，则HED估计为0.015或0.027mg/kg，假定AUC驱动功效并且使用基于清除率的标度方法，其中全身清除率的异速增长指数(allometric scaling exponent)为0.67(体表面积归一化)或0.75(四分之一幂律(quarter power scaling))，且小鼠和人的体重分别为0.025kg和70kg。假定Cmax驱动效力并且使用基于分布体积的标度方法，HED估计为0.2mg/kg，假设分布体积的异速增长指数为1。因此预测起始剂量处于受试者的预测治疗剂量范围的较低端。

给药频率：在用MEDI6469作为关键生物标记物的临床研究中，T细胞上的Ki-67表达在首次给药后约14天显示最大刺激[Curti，2013]。到第一次给药后约28天(或在该周期的最后一次给药后23天)，Ki-67刺激下降。根据这些生物标记物动力学和期望的标准IgG1mAb PK(终末消除半衰期超过2周)，选择抗体106-222给药频率为Q3W。该给药频率还增加了受试者的给药方便性，其使用计划的组合伴侣派姆单抗，其每个标签也以Q3W给药。

总之，研究201212中建议的0.003mg/kg抗体106-222Q3W的起始剂量预计是安全且可以耐受的。在抗体106-222给药以及其他措施后，受试者将接受延长的临床观察，以监测并治疗所有受试者的任何可能过量的细胞因子释放。

第2部分：起始剂量

对于抗体106-222和派姆单抗，预计不会有影响组合的PK的药物-药物相互作用。作为检查点抑制剂而不是直接的免疫刺激剂，预计派姆单抗不会显著增加反应于抗体106-222的过量细胞因子释放的潜能，但是前提是不能排除特定的协同作用。在CT26小鼠功效实验中，在测试的所有剂量水平下，相对于OX86单一治疗组，在抗PD-1组合中没有观察到关于过度免疫刺激的指标的差异。与单药疗法相似，对于低至5μg/小鼠的OX86剂量(与200μg抗PD-1小鼠同系物组合)观察到强效的疗效，并且组合给药耐受性良好。

第2部分/组合剂量递增阶段的抗体106-222的起始剂量将比已经显示在单药疗法剂量递增期间耐受的剂量低至少2个剂量水平。这个决定是基于一个假设，即当添加派姆单抗时，10分之一剂量的抗体106-222应该提供足够的安全性余量。

派姆单抗的剂量将为200mg IV Q3W。

益处:风险评估

以下部分概述了本方案的风险评估和缓解策略。

在用抗体106-222在猴子中进行的毒理学研究中，未观察到不良作用。此外，在小鼠模型中使用抗体106-222和大鼠替代抗体的非临床数据并未显示CRS是一个重要问题(认识到了非临床模型的局限性)。

另一种激动性抗OX40抗体先前被施用于没有严重细胞因子释放迹象的受试者[Curti，2013]。MEDI6469(目前由Medimmune/AZ开发的小鼠IgG1单克隆抗体)对于0.1至2mg/kg的剂量(每周3次给药的单周期)具有很好的耐受性，其中短暂的淋巴细胞减少症和1/2级流感样症状为主要毒性。所提出的抗体106-222的起始剂量远低于使用MEDI6469的研究中给药的剂量。

另外，OX40在少部分T细胞上表达，主要是刚刚激活的效应T细胞和Treg。这大大限制了sCRS的潜力。OX40不是一种超级激动剂，需要通过TCR和CD28进行刺激才能获得最佳的T细胞活化。

由于抗体106-222的作用机制，在施用抗体106-222后，也可发生通常与其他免疫调节剂例如检查点抑制剂相关的毒性。但是，这些毒性在非临床模型中未见到。表7概述了本方案的风险评估和缓解策略。

风险评估

表7风险评估

总体益处:风险的结论

这是一项开放标签的剂量递增研究，并且该试剂的FTIH研究将在具有复发/顽固性实体肿瘤患者中进行，这些患者预计没有标准疗法可导致持续缓解。抗体106-222在体内具有非临床活性，然而不知道抗体106-222是否具有临床活性，因此对于可归因于抗体106-222的个体受试者的任何潜在有益效果是未知的。在这项研究中获得的数据可有助于识别更可能受益于抗体106-222或有副作用的个体。研究参与者可受益于研究期间进行的医学检查和筛查。

研究人群的选择和退出标准

不允许偏离纳入和排除标准，因为它们会损害研究的科学完整性、监管可接受性或受试者安全性。因此，遵守协议中规定的标准至关重要。

纳入标准

符合入选条件的受试者必须符合以下所有标准：

1.提供签署的书面知情同意书。

2.男性和女性受试者，年龄≥18岁(在获得同意时)。

3.局部晚期、复发或转移性实体恶性肿瘤的组织学记录，该肿瘤在通过适用于特定肿瘤类型的标准治疗后产生进展，或标准治疗已被证明对其无效、不可耐受或被认为不适宜。受试者不应该接受超过5种前沿的治疗晚期疾病的治疗方案，包括护理标准和研究治疗。其中癌症存在分子改变(对其来说，靶向治疗是护理标准)的受试者在招募前应该已经接受了卫生部门批准的针对其肿瘤类型的适当靶向治疗。

4.具有以下实体瘤的受试者符合筛查资格：NSCLC，SCCHN，RCC，黑素瘤，膀胱，STS，TNBC和MSI CRC。

5.从最初诊断到研究登记的任何时候获得的肿瘤组织的活组织检查。虽然在筛查期间获得的新鲜活检是首选，但如果获得新鲜活检不可行，则归档的肿瘤标本也是可以接受的。对于第1B部分和第2B部分，任何归档肿瘤样本都必须是在开始研究药物的3个月内获得的。

6.根据RECIST 1.1版可测量的疾病。无法通过影像学或照相评估而测量的可触及的损伤不能被作为是唯一可测量的损伤。

7.东部肿瘤协作组(ECOG)的表现状态(PS)为0-1。

8.预期寿命至少12周。

9.充分的器官功能(参见表8):

表8适当的器官功能的定义

ANC＝绝对嗜中性粒细胞计数；ALT＝丙氨酸转氨酶；CrCl＝肌酐肝清除率；TSH＝促甲状腺激素；ULN＝正常上限；WNL＝在正常限度内

a.估计的CrCl应该使用慢性肾脏病流行病学合作研究(CKD-EPI)公式计算。

b.如果在基线的TSH不在正常限度内，则受试者仍可以符合条件，如果总T3或游离T3和游离T4在正常限度内的话。

10.对于束支传导阻滞受试者，通过Fridericia公式(QTcF)<450毫秒或QTcF<480毫秒针对心率进行校正的QT间期。

QTcF是根据Fridericia公式、机器读数或手动过度读数(over-read)针对心率校正的QT间期。

11.在法国，只有属于社会保障类别或其受益人的受试者才有资格参加本研究。

12.女性受试者：如果她没有怀孕(如通过阴性血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)试验所证实的)、非哺乳期且符合以下至少一种情况，则有资格参与：

a.无生殖潜力，定义为：

·绝经前女性具有以下之一：

·记录的输卵管结扎；

·记录的宫腔镜输卵管阻塞程序，并随访确认双侧输卵管阻塞；

·子宫切除；

·记录的双侧卵巢切除术；

·绝经后，定义为12个月的自发性闭经[在可疑情况中血样同时具有与绝经期一致的促卵泡激素(FSH)和雌二醇水平(参考实验室参考范围以确定水平)]。使用激素替代疗法(HRT)并且其绝经状态存疑的女性则要求使用一种高效避孕方法，如果女性希望在研究期间继续使用其HRT的话。否则，他们必须停止HRT以在研究登记前确认绝经后状态。

b.具有生殖潜力，并同意在第一次给药研究药物前30天以及直到最后一次给药研究药物后120天并完成随访期间，遵守以下在具有生殖能力的女性(FRP)中避免妊娠的GSK改良的高效方法列表所列的选项要求之一。

在具有生殖能力的女性(FRP)中避免妊娠的GSK改良的高效方法列表

这份列表不适用于具有相同性伴侣的FRP(当这是他们的首选和平常的生活方式时)或者在长期和持续的基础上会且将会持续对阴茎阴道性交禁欲的受试者。

·如产品标签中所述，每年失败率低于1％的避孕皮下植入物；

·如产品标签中所述，每年失败率<1％的宫内避孕器或宫内节育器[Hatcher，2007]；

·口服避孕药，组合使用或单独使用孕激素[Hatcher，2007]；

·可注射孕激素[Hatcher，2007]；

·避孕阴道环[Hatcher，2007]；

·经皮避孕贴片[Hatcher，2007]；

·在女性受试者进入研究之前，男性伴侣绝育并记录无精症，并且该男性是该受试者的唯一伴侣[Hatcher，2007]。

这些允许的避孕方法只有在一致使用、正确使用并符合产品标签时才有效。调查员负责确保受试者了解如何正确使用这些避孕方法。

13.具有生育潜力的女性伴侣的男性受试者必须在第一次给药研究药物到最后一次给药研究药物后120天遵守的以下避孕要求。

a.输精管切除且记录为无精子症。

b.男用安全套加上伴侣使用下列避孕方法之一：

·正如产品标签中所述，每年失败率低于1％的避孕皮下植入物[Hatcher，2007]；

·如产品标签中所述，每年的失败率<1％的宫内节育器或宫内节育器[Hatcher，2007]；

·口服避孕药，组合使用或单独使用孕激素[Hatcher，2007]；可注射孕激素[Hatcher，2007]；

·避孕阴道环[Hatcher，2007]；

·经皮避孕贴片[Hatcher，2007]；

排除标准

如果符合以下任何标准，则该受试者将不符合纳入本研究的条件：

1.之前用下列药剂治疗(从先前治疗的最后一次给药到抗体106-222的第一次给药)：

·TNFR激动剂，包括OX40、CD27、CD137(4-1BB)、CD357(GITR)：在任何时候。

·检查点抑制剂，包括PD-1、PD-L1和CTLA-4抑制剂：8周内。

·其他抗癌治疗，包括化疗、靶向治疗和生物治疗：4周或药物的5个半衰期内，以较短者为准。如果存在至少有一个可通过RECIST 1.1版进行评估的未辐照的可测量损伤，则可允许先前的放射治疗。在开始研究药物之前需要至少两周的清除期用于向骨转移的四肢进行姑息性辐射，以及需要4周向胸、脑或内脏器官进行辐射。

·研究性治疗：如果受试者参与了临床试验并且接受了研究产品：30天或研究产品的5个半衰期内(以较短者为准)。在最后一次给药先前的研究药物和第一次给药研究药物之间必须经过至少14天。注意：如果药物是TNFR激动剂或检查点抑制剂，则以上排除优先。

2.在开始研究药物的4周内用核因子-κB配体(RANKL)抑制剂(例如狄诺塞麦(denosumab)))的受体激活剂进行预先治疗。

3.以前的同种异体或自体骨髓移植或其他实体器官移植。

4.以前治疗的毒性：

·对之前的免疫疗法具有≥3级毒性导致停止研究治疗的受试者不符合资格。

·与先前治疗相关的毒性尚未降低至≤1级的受试者(脱发或用替代疗法处理的内分泌失调除外)的受试者不符合资格。

5.正在研究的疾病以外的恶性肿瘤，以下为例外：

·受试者无疾病超过2年的任何其他恶性肿瘤，并且主要研究人员和GSK医学监测机构认为，这种恶性肿瘤不会影响此临床试验治疗对当前靶向的恶性肿瘤的影响的评估，则可以包含在这个临床试验中。

6.中枢神经系统(CNS)转移，但有以下例外：

·曾接受过此前CNS转移治疗的受试者无症状，且在第一次给药研究药物前无需使用类固醇或抗惊厥药物达2周。

注：无论临床稳定性如何，均排除有癌性脑膜炎的受试者。

7.在第一次给药研究药物之前2周内接受血液制品(包括血小板或红细胞)的输入或集落刺激因子(包括粒细胞集落刺激因子[G-CSF]、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子[GM-CSF]、重组促红细胞生成素)的给药。

8.在第一进行研究治疗前≤4周的大手术。在开始研究治疗之前，受试者也必须完全从任何手术(大手术或小手术)和/或其并发症中恢复。

9.在过去2年内需要全身性治疗(即使用疾病调节剂，皮质类固醇或免疫抑制药物)的活跃的自身免疫性疾病。替代疗法(如甲状腺素或肾上腺或垂体功能不全的生理性皮质类固醇替代疗法等)不被视为全身性治疗的形式。

10.需要在首次给药研究治疗前28天内使用全身性免疫抑制药物的并发症。如果受试者处于稳定剂量下，则用于治疗内分泌疾病的生理剂量的皮质类固醇或具有最小全身吸收的类固醇，包括局部、吸入或鼻内的皮质类固醇可以继续。

11.活动性感染，已知的人类免疫缺陷病毒感染，或乙型肝炎表面抗原或丙型肝炎的阳性测试。

12.当前活跃的肝脏或胆道疾病(基于每个研究者的评估，吉尔伯特综合征或无症状的胆结石、肝转移或其他稳定的慢性肝病除外)。

注：稳定的慢性肝脏疾病一般应定义为没有腹水、脑病、凝血障碍、低蛋白血症、食管或胃静脉曲张，持续性黄疸或肝硬化。

13.已知的毒品滥用或酗酒。

14.急性憩室炎、炎性肠病、腹膜内脓肿或胃肠梗阻的近期病史(过去6个月内)。

15.在4周内被给药任何活疫苗。

16.开始研究治疗4周内被过敏原脱敏治疗的最近病史。

17.对其他单克隆抗体严重超敏反应的病史。

18.心血管风险的历史或证据，包括以下任何一项：

·最近(过去6个月)有严重不受控制的心律失常或临床上显着的心电图异常的病史，包括二度(II型)或三度房室传导阻滞。

·招募前6个月内记录的心肌病、心肌梗塞、急性冠脉综合征(包括不稳定型心绞痛)、冠状动脉血管成形术、支架术或旁路移植术。

·根据纽约心脏协会功能分类系统(NYHA，1994)定义的充血性心力衰竭的记录(II、III或IV类)。

·近期(过去6个月内)有症状性心包炎病史。

19.特发性肺纤维化、肺炎、间质性肺病或机化性肺炎的病史，或活跃的非感染性肺炎的证据。注意：如果研究者和医学监督同意，与之前的放射治疗相关的肺部放疗后的变化和/或无症状的放射诱导的肺炎可以不需要治疗。

20.不受控的症状性腹水或胸腔积液的最近病史(6个月内)。

21.任何严重和/或不稳定的预先存在的医学、精神障碍或其他可能干扰受试者安全性、获得知情同意或遵守研究程序的状况。

22.是否有直接的家庭成员(例如，配偶，父母/法定监护人，兄弟姐妹或儿童)作为直接参与本试验的研究地点或发起主办者的成员，除非预先由IRB批准(由主席或指定人员)，针对特定受试者允许该标准的例外。

筛选失败

为了确保筛选失败受试者的透明报告，符合报告审查综合标准(CONSORT)发布要求以及对监管机构的查询作出回应，需要一套最低限度的筛选失败信息，包括人口统计、筛选失败详情、资格标准和任何SAE。

撤回/停止标准

受试者将在预定时间内接受研究治疗，除非早期发生以下情况之一：疾病进展(由irRECIST确定)，死亡或不可接受的毒性，包括满足肝化学终止标准部分定义的肝化学终止标准。此外，由于以下任何原因，研究治疗会永久停止：

·来自方案的偏差；

·受试者或代理人的请求(受试者或代理人的撤回同意)；

·调查员的判断；

·随访的受试者失联；

·研究结束或终止；

·输注延迟>49天的受试者(即错过2次给药+7天)应终止研究药物，除非治疗研究者和主办者/医疗监督员同意有强有力的证据支持继续治疗。

注：由于给定的治疗组合中的毒性而需要永久停止一种研究治疗的受试者必须永久停止该组合中的两种治疗(除非治疗研究者和主办者/医学监督员同意其余药物的继续治疗)并且必须记录停止的原因。应在停止研究药物决定后30天内进行治疗终止访视(TDV)。

·阻止进一步施用研究治疗的并发疾病；

·符合剂量和安全管理指南部分(安全管理指南)中描述的中止研究药物的标准；

·符合QTcF停止标准部分中描述的标准；

·符合临床恶化部分的停用规则中描述的标准。

研究治疗永久停止的主要原因必须记录在受试者的病历和电子病例报告表(eCRF)中。

所有永久停止研究治疗而无疾病进展的受试者将根据方案时间表跟踪疾病进展，直到；

·开始新的抗癌治疗；

·疾病进展；

·死亡。

具有CR的受试者需要在第一次成像显示CR后的至少4周通过成像来确认反应。对于根据RECIST 1.1被确认完全反应的受试者，可以考虑提前终止抗体106-222和/或派姆单抗，这些受试者已接受至少6个月的治疗并且在宣布初始CR的日期之后经历了至少两次治疗。

一旦受试者永久停止研究治疗，除重新启动或再挑战研究治疗部分以及以下情况中描述的情况外，受试者将不被允许再次接受治疗。在治疗研究者与主办方/医疗监督员进行讨论后，可以根据具体情况考虑对PR或CR最佳全面反应后产生进展的受试者进行再治疗。

所有永久停止研究治疗的受试者将从最后一次给药之日起至少随访6个月。安全性评估的随访期将从最后一次给药之日起至少3个月。治疗后的随访期包括每12周进行一次疾病评估，直至记录PD。在PD后，将每3个月接触一次受试者以评估生存状态。

如果受试者由于毒性自愿停止治疗，那么在eCRF中将“AE”记录为永久停止的主要原因。

所有停止研究治疗的受试者将在停药时间和研究后治疗随访时进行安全性评估，如时间和事件表中所述。

肝脏化学停止标准

已经设计了肝脏化学停止和增加监测标准以确保受试者安全并评估肝脏事件病因(符合食品和药品管理局(FDA)上市前临床肝脏安全指导)。http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformatio n/Guidances/UCM174090.pdf

如果符合以下任何标准，则必须停止研究治疗：

1.如果可以测试，应该进行血清胆红素分级。如果血清胆红素分级不能立即得到，则如果ALT≥3xULN且胆红素≥2xULN，停止该受试者的研究治疗。另外，如果血清胆红素分级测试不可用，则记录在试纸上存在可检测的尿胆红素，表明直接胆红素升高并提示肝损伤。

2.所有ALT≥3xULN和胆红素≥2xULN(>35％直接胆红素)或ALT≥3xULN和INR>1.5(如果测量了INR)的事件，可能表明严重肝损伤(可能的'Hy's定律')，其必须报告为SAE(不包括肝功能损伤或肝硬化的研究)；不需要INR测量，并且所述阈值不适用于接受抗凝剂的受试者。

3.新的或恶化的症状，其被认为与肝损伤有关(如疲劳、恶心、呕吐、右上腹疼痛或压痛或黄疸)或被认为与超敏反应有关(如发热、皮疹或嗜酸性粒细胞增多)。

有关肝毒性管理的其他指导，请参阅肝毒性管理部分。

研究治疗的重新开始或重新挑战

如果受试者符合肝脏化学终止标准，则不要对受试者重新开始/重新挑战研究治疗，除非：

·获得GSK医疗管理批准；

·如果需要，获得伦理和/或IRB批准；和

·受试者签署的重新开始/重新挑战治疗的独立同意书。

QTcF停止标准

·必须使用QTcF校正公式来确定每位受试者的研究资格和研究停止。一旦受试者登记后，此公式不得更改或替换。

·QTcF应基于在短暂(例如5-10分钟)记录期内获得的三次ECG的单个或平均QTcF值。

如果某名受试者符合下列标准之一，则必须停止。

·QTcF>500毫秒；

或

·从QTcF的基线改变>60毫秒。

对于有潜在束支传导阻滞的受试者，遵循下列停止标准：

伴随束支传导阻滞的基线QTcF	伴随束支传导阻滞的停止QTcF
		<450毫秒	≥500毫秒
450–480毫秒	≥530毫秒

QTcF＝通过Fridericia公式针对心率校正的QT间期

临床恶化的停止规则

越来越多的临床证据表明，对激活抗肿瘤免疫应答的药物的客观反应的出现可以遵循延迟数周或数月的动力学，并且可以首先是初始表观进展，其中出现新的病灶或一些扩大的病灶，而某些病变指数正在消退(“混合反应”)。因此，允许经历表观进展的受试者继续接受治疗是合理的，直到至少4周后在下一次成像评估中证实进展为止。这些考虑应该通过临床判断来平衡，该临床判断确定受试者是否临床恶化并且不可能从持续治疗中获得任何益处。

这种恶化将被评估为在临床事件之后发生的，其中研究者认为该临床事件可归因于疾病进展，在继续的研究治疗后不太可能逆转，因此表明该受试者未从研究治疗中受益并且不能通过加入支持性护理而处理(例如双膦酸盐和/或骨定向放射疗法、胸腔穿刺术或用于积液的穿刺术)。应该与主办者的医疗监视者讨论停止治疗的决定。研究者认为，可表明缺乏临床获益的事件的例子包括但不限于以下内容：

·ECOG PS从基线降低至少2分；

·由以下定义的骨骼相关事件：

·癌症牵连区域的病理性骨折；

·与癌相关的骨手术；和/或

·脊髓或神经根受压；

·发展新的CNS转移；

·即使在没有任何此类记录的临床事件的情况下，开始使用新抗肿瘤治疗都被认为对受试者有益的任何设定。

受试者和研究完成

如果受试者完成筛查评估、接受至少一次研究治疗的给药和TDV，或者在主办者决定结束研究时正在接受进行中的研究治疗，则该受试者将被认为已经完成研究。

对于第1部分(剂量递增阶段)和第2部分(扩展队列)，完成的受试者是由于退出/停止标准部分中列出的原因而中止了研究治疗并且完成了TDV或在接受研究治疗期间已经死亡的受试者。

研究结束被定义为最后一名受试者的最后一次访视。

研究治疗

研究性产品和其他研究治疗

在整个方案中使用术语“研究治疗”来描述按照方案设计由受试者接受的任何产品组合。因此研究治疗可以指各研究治疗或这些研究治疗的组合。

在研究者或指定人员的医学监督下，抗体106-222将在每个研究位点被静脉给药给受试者。当在研究的第2部分与派姆单抗组合给药时，首先给药抗体106-222。给药日期和时间将记录在源文件中并在eCRF中报告。

在研究的第2部分中，在研究者或指定人员的医学监督下，在抗体106-222输注结束后至少1小时且不超过2小时，将对受试者静脉内施用派姆单抗(表9)。给药日期和时间将记录在源文件中并在eCRF中报告。

对于由研究者或指定人员施用的药物，研究治疗的剂量和研究参与者身份将在给药时由给药该研究治疗的人员以外的研究位点工作人员的成员确认。研究治疗施用的具体时间(例如，首次施用的周时间；每次施用的天时间)应该考虑PK采样时间点和研究访视程序。仅出于管理原因(例如，在假日期间安排输液)，输注可以在计划治疗日期之前或之后至多72小时进行施用。

研究参考手册(SRM)包含用于计算抗体106-222剂量以及制备抗体106-222和派姆单抗输注液以及施用这些输注液的具体说明。

表9研究药品剂量/给药

a.如果发生输注反应，可延长输注。如果多名受试者经历临床显著的输注反应，则对于该研究药物的所有未来给药，可对所有受试者减慢输注速率。如果需要总体输注速率的变化，它将以书面形式传达给现场。

b.剂量水平1和2的给药将少于30分钟，请参阅SRM了解输注指示。

c.对于所有受试者/剂量，派姆单抗的剂型将为溶液或冻干粉末。这将在研究的组合阶段开始之前决定并传达。

Q3W＝每3周一次；GSK＝葛兰素史克

治疗分配

受试者将通过在研究期间保持一致的唯一受试者号码来识别。

完成所有必要的筛查评估后，合格的受试者将由调查员或授权的现场工作人员登记到GSK指定的注册和药物订购系统中。

受试者将按照他们完成筛查评估的顺序分配到研究治疗(即研究不是随机的)。

计划的剂量调整

剂量和安全管理指南

本部分提供了不同的安全管理指南，包括剂量修改算法，用于以下治疗的受试者：

·抗体106-222；

·派姆单抗。

请注意：如果研究者被指导永久停止研究治疗，则这些说明是强制性的，如撤出/停止标准部分所述。

表10列出了可用的剂量修改指南的概述。

所有AE按照NCI-CTCAE(4.0版)(http://ctep.cancer.gov)分级。所有剂量修改和剂量修改的原因必须在eCRF中记录。

表10未特别说明的药物相关非血液学不良事件的一般剂量修改和管理指南

a.如果按照方案给药多种研究药物，则指导可适用于一种或多种研究药物；与主办者/医疗监测者一起在个案基础上讨论管理。

免疫相关不良事件通用指南

irAE被定义为与研究治疗暴露相关的任何器官的临床显著AE，其病因不明，并且与免疫相关机制一致。应该特别注意那些可能暗示潜在irAEs的AE。首次给药后不久或最后一次治疗给药后数月可发生irAE。

尽早识别irAE并开始治疗对降低并发症的风险至关重要，因为大多数irAE可通过使用类固醇和其他免疫抑制剂来逆转[Pardoll，2012；Weber，2012]。如果怀疑有irAE，受试者应该尽快返回研究现场，而不是等待他/她的下一次预定访视。经历新的或恶化的irAE的受试者应该在研究现场进行更频繁地联系和/或评估。

如果怀疑有irAE，应该在诊断irAE之前进行彻底评估，以努力排除肿瘤、感染、代谢、毒素或其他病因。血清学、免疫学和组织学(活检)数据应被视为支持免疫相关毒性的诊断。在调查可能的irAE时，应该考虑与相应的医疗专家协商。

由于它们的快速再生速率，最常受irAE影响的器官包括皮肤和结肠。受影响较少的组织是肺、肝、垂体和甲状腺。轻度irAE通常会根据症状进行治疗，并且不需要延迟给药或停药。当全身类固醇无效时，较高等级和持续低等级irAE通常需要中断或停止全身性类固醇或其他免疫抑制剂(例如TNF阻断剂)的治疗和施用。

识别与评估免疫相关不良事件的一般原则

在进行研究治疗之前，研究人员将检查受试者的不良事件、伴随药物和临床评估结果，如生命体征、实验室结果、心电图、ECOG PS、体检结果、应答等，如时间和事件表所列，以监测新的或恶化的irAE并确保继续给药是适当的。

AESI被定义为潜在的免疫病因学事件。最近在用其他免疫调节疗法治疗后报道的这类事件包括≥2级结肠炎、葡萄膜炎、肝炎、肺炎、≥3级腹泻，内分泌紊乱和特异性皮肤毒性以及可能是免疫介导的其他事件，包括但不限于脱髓鞘性多发性神经病、重症肌无力样综合征、非感染性心肌炎或非感染性心包炎。

对于具有可能符合AESI标志或症状的受试者，强烈建议站点通过电子邮件和/或电话立即通知GSK医疗监控者。在研究者与主办者/医疗监控者进行讨论后，应记录对可能被确认为AESI的事件。即使没有明确证实其免疫病因的事件也可能符合AESI的要求。许多这些事件也可能有资格作为SAE。有关详细信息，请参阅SRM。

没有特别说明的临床显著毒性的通用指南

虽然为AESI提供了具体的指导，但可能会出现其他未特别说明的临床显著的与药物相关的毒性，并且需要对剂量进行修改。

研究者必须联系GSK医疗监测者，了解所有3级以上临床显著的非血液学药物相关毒性，其中根据剂量和安全管理指南部分中提供的指导原则，可能需要中断或永久停止研究治疗。否则，鼓励研究者根据需要联系GSK医疗监测者，以讨论任何需要在当前指南范围之外单独讨论的情况。

如果在最后一次输注后12周内毒性未达到0级至1级，应在与主办方协商后永久终止研究治疗。根据研究者和主办者的协议，实验室AE在12周后仍处于2级的受试者只有在无症状和控制的情况下才可在实验中继续治疗。

对于经历了由研究治疗再次激发的相同等级或更高级别的相同AE的复发的受试者，GSK医疗监测者和研究者之间应该进行协商，以确定受试者是否应该继续进行研究。经历由研究治疗再次激发的相同等级或更高级别的SAE的复发必须导致永久停止研究治疗。

肝毒性的管理

在治疗出现肝毒性的情况下，应研究潜在的影响因素，如伴随药物，病毒性肝炎和其他传染性病因、胆总管结石、肝转移和肌炎。已知为肝毒性、可引起肝功能障碍的伴随药物应该被停用或被替换为替代药物以允许恢复肝功能。如通常所知，在没有碱性磷酸酶升高或胆道损伤的情况下，AST或ALT>3xULN且伴随胆红素≥2.0xULN(>35％的直接胆红素)提示有明显的肝脏损伤。在eCRF的肝脏事件酒精摄入表中记录饮酒情况。即使临床体征和症状表明肝脏肿瘤病变进展，也必须充分评估肝功能障碍。必须获得影像学研究以记录恶性肿瘤的潜在进展。表11列出了突然出现的肝毒性的管理指南。

表11肝毒性的剂量修改和管理指南

b.如果可以检测，应该进行血清胆红素分级。如果血清胆红素分级不能立即获得，则如果ALT≥3xULN且胆红素≥2×ULN，停止该受试者的研究治疗。另外，如果血清胆红素分级测试不可用，则记录试纸上可检测的尿胆红素的存在，表明直接胆红素升高并提示肝损伤。

c.所有ALT≥3xULN且胆红素≥2xULN(>35％直接胆红素)或ALT≥3xULN且INR>1.5的事件(如果测量了INR，其结果可表明严重肝损伤(可能的'Hy's定律'))，必须报告为SAE(不包括肝功能损害或肝硬化的研究)；INR测量不是必需的，并且所述阈值不适用于接受抗凝剂的受试者。

d.新的或恶化的症状认为与肝损伤有关(如疲劳、恶心、呕吐、右上腹疼痛或压痛或黄疸)或被认为与超敏反应有关(如发热、皮疹或嗜酸性粒细胞增多)。

ALT＝丙氨酸转氨酶；ULN＝正常上限；AST＝天冬氨酸转氨酶；IV＝静脉内；LFT＝肝功能测试；INR＝国际标准化比值

肝脏事件后续评估

·病毒性肝炎血清学：甲型肝炎IgM抗体；乙型肝炎表面抗原和乙型肝炎核心抗体(IgM)；丙型肝炎病毒RNA；巨细胞病毒IgM抗体；Epstein-Barr病毒衣壳抗原IgM抗体(或者如果不可用，则获得异嗜性抗体或monospot测试)；戊型肝炎IgM抗体。

·定量乙型肝炎DNA和肝炎δ抗体：只有在进入研究时有潜在慢性乙型肝炎的患者中(由乙型肝炎表面抗原阳性确定)。如果不能进行肝炎δ抗体检测，则可用丁型肝炎RNA病毒的聚合酶链反应(当需要时)替代[Le Gal，2005]。

·用于PK分析的血液样本：在最后一次给药研究药物后28天内获得：在eCRF上记录在采集血样之前，采集PK血液样本的日期/时间和最后一次给药研究治疗的日期/时间。如果最后一次给药的日期或时间不清楚，则提供受试者的最佳近似值。如果最后一次给药的日期/时间不能估计，或在上述时间段内不能收集PK样品，则不要获得PK样品。

·血清肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脱氢酶(LDH)

·分离胆红素，如果总胆红素≥2×ULN

·通过差值获得全血计数以评估嗜酸粒细胞增多

·在AE报告表中记录肝损伤或超敏反应的临床症状的出现或恶化。

·在伴随药物报告表上记录伴随药物的使用，包括对乙酰氨基酚、草药疗法、其他非处方药。

·在肝脏事件酒精摄入量报告表中记录酒精使用情况。

·对于胆红素或INR标准：

·抗核抗体，抗平滑肌抗体，1型抗肝肾微粒体抗体和定量的总IgG(或γ球蛋白)。

·血清对乙酰氨基酚加合物高效液相色谱法(HPLC)测定(在前一周确定使用或可能使用对乙酰氨基酚的受试者中量化对乙酰氨基酚对肝损伤的潜在影响[James，2009])。

·肝脏成像(超声波、磁共振或计算机断层扫描)和/或肝活检以评估肝脏疾病；完成肝脏成像和/或肝活检eCRF表格。

胃肠道事件管理(腹泻或结肠炎)

症状/体征可包括但不限于：腹泻、便秘、腹痛、痉挛和/或腹胀、恶心和/或呕吐、粪便中的血液和/或粘液(伴有或不伴有发热)、直肠出血、与肠穿孔一致的腹膜征象和肠梗阻。

鉴别诊断：应进行所有尝试，以通过检查粪便白细胞、粪便培养物和艰难梭菌效价来排除其他原因，如转移性疾病、细菌或寄生虫感染、病毒性胃肠炎或炎症性肠病的首次表现。表12提供了胃肠道事件的剂量修改指南。

表12胃肠道事件的剂量修改和管理指南(腹泻或结肠炎)

a.如果按照方案给药多种研究药物，则该指导可适用于一种或多种研究药物；与主办者/医疗监测者一起在个案基础上讨论管理。

IV＝静脉内

皮肤毒性的管理

鉴别诊断：应进行所有尝试以排除其他原因，如转移性疾病、感染或过敏性皮炎。表13提供了皮肤毒性的剂量修改指南。

表13皮肤毒性的剂量修改和管理指南

IV＝静脉内

内分泌事件管理

症状/体征可包括但不限于：疲劳、虚弱、头痛、精神状态和/或行为改变、发烧、视力障碍、怕冷、腹痛、不寻常的排便习惯、食欲不振、恶心和/或呕吐和低血压。内分泌事件可包括以下AE项：肾上腺功能不全、甲亢、垂体炎、垂体机能减退、甲状腺功能减退症、甲状腺疾病和甲状腺炎。

表14列出了内分泌事件的剂量修改指南。

表14内分泌事件的剂量修改和管理指南

具有临床显著肾上腺功能不全的垂体炎和低血压、脱水和/或电解质异常(如低钠血症和高钾血症)构成肾上腺危象，必须视为医疗紧急情况。

IV＝静脉内

1.1.1.1.管理肺炎

迹象/症状可包括但不限于：呼吸困难、干咳、咯血、发烧、胸痛和/或紧迫感、呼吸音异常和疲劳。如果症状表明可出现新的或恶化的心脏异常，则应考虑进行其他检查和/或心脏病咨询。肺炎事件可包括以下AE项：肺炎、间质性肺病和急性间质性肺炎。

如果症状表明可出现新的或恶化的心脏异常，则应考虑进行其他检查和/或心脏病咨询。

鉴别诊断：应尽力排除其他原因，如转移性疾病、细菌或病毒感染。根据以下指南对疑似诊断为肺炎的受试者进行管理直至排除治疗相关的肺炎为止是非常重要的。可能需要同时治疗潜在的传染性病因和肺炎。用类固醇治疗疑似肺炎的管理不应因为抗生素的治疗试验而延迟。如果确定了替代诊断，则该受试者不需要如下的处理；然而无论病因如何，都应该报告AE。表15提供了肺炎的剂量修改指南。

表15肺炎的剂量修改和管理指南

IV＝静脉内

1.1.1.2.血液学事件的管理

表16提供了血液学事件的剂量修改指南。

表16血液学事件的剂量修改和管理指南

IV＝静脉内

葡萄膜炎/虹膜炎

应尽力排除其他原因，如转移性疾病、感染或其他眼部疾病(如青光眼或白内障)。然而，不管病因如何，都应该报告AE。表17提供了葡萄膜炎/虹膜炎的剂量修改指南。

表17葡萄膜炎/虹膜炎的剂量修改和管理指南

IV＝静脉内

输注反应或严重细胞因子释放综合征(sCRS)的管理

输注反应是与单克隆抗体给药相关的被良好记录的AE。输注反应通常在开始药物输注后30分钟至2小时内发生，尽管症状可能延迟到长达48小时。输注反应的发生率因mAb试剂而异，并且已知有多种机制导致与输注相关的反应，包括IgE依赖性过敏和非IgE依赖性类过敏性超敏反应。细胞因子释放综合征以及严重的细胞因子“风暴”已被确定为与输注反应相关的免疫系统激活的后遗症。

输注反应

输注反应可影响身体的任何器官系统。尽管有严重甚至致命的反应发生，但其中大多数严重程度轻微。总的来说，输注反应(包括细胞因子介导的和过敏性的)通常在药物输注期间或几小时内发生。偶尔，给药一到两天后也会发生反应。NCI-CTCAE(4.0版)用于对化疗期间的不良反应进行分级，其具有用于评分输注反应严重程度的量表，以及用于过敏反应和过敏的单独的分级量表。虽然使用这些单独的分级量表可以有效对输液反应的性质进行分类以用于研究目的，但它们对于临床护理不太有用，因为如果受试者正在患有过敏性输注反应或非过敏性输注反应，其可能不明显。

临床输注反应可伴有潮红、瘙痒、荨麻疹和/或血管性水肿、反复咳嗽、突然鼻塞、气短、胸闷、喘息、喉咙闭合或窒息的感觉、和/或语音质量改变、头昏、心动过速(或不太常见的心动过缓)、低血压、高血压和/或意识丧失、恶心、呕吐、腹部痉挛和/或腹泻、即将死亡的感觉、管状视、头晕和/或癫痫发作、严重的后背、胸部和骨盆疼痛。

细胞因子释放综合征

细胞因子相关毒性，也称为CRS，是一种非抗原特异性毒性，其由于强烈的免疫激活而发生。通常需要使用现代免疫治疗来调节临床益处的免疫激活的程度超过了在更自然环境中发生的免疫激活水平。随着基于免疫的治疗变得更加有效，CRS越来越被认可。

与CRS相关的症状和症状的严重程度差异很大，并且管理可能会因这些受试者的并发症而变得复杂。发烧是一个标志，并且CRS的许多特征与感染类似。受试者体温超过40℃并不罕见。

CRS的潜在危及生命的并发症包括心脏功能障碍、成人呼吸窘迫综合征、神经毒性、肾和/或肝衰竭以及弥散性血管内凝血。特别值得关注的是心脏功能障碍，其可以是快速发生和严重的，但通常是可逆的。

在接近其发生的临床环境中很难确定这种AE的确切病因，使得很难区分典型的输注反应和CRS。由于这些事件的临床表现具有广泛的共性，所以即时治疗不会因病因而有所变化。

为了更好地了解这些事件的潜在病因，应在任何等级的输注反应/CRS发生期间绘制血清类胰蛋白酶、C-反应蛋白(CRP)、铁蛋白和细胞因子谱。血清类胰蛋白酶、CRP和铁蛋白谱应在PI指定的当地实验室进行。血清细胞因子谱将在GSK指定的实验室进行。这些结果将帮助我们更好地理解(尽管是回顾性的)AE的病因学，如表18所示。

表18生物标记物组

CRP＝C-反应蛋白；CRS＝细胞因子释放综合征；IFN-γ＝干扰素γ；TNF-α＝肿瘤坏死因子α；IL＝白介素。

a.由PI指定的当地实验室进行

b.由GSK指定实验室进行

针对研究治疗过量的治疗

抗体106-222过量

过量被定义为给药剂量比预期剂量至少高50％。如果剂量过量，研究者应该：

·立即联系医疗监测者。

·密切监测受试者的AE/SAE和实验室异常达至少130天。

·如果医疗监测者要求(根据具体情况确定)，应在最后一次给药研究治疗之日起28天内获得血浆样本进行PK分析。

·在eCRF中记录过量剂量的量以及过量的持续时间。

关于剂量中断或修改的决定将由研究人员根据对受试者的临床评估通过与医疗监测者进行咨询而决定。

对于抗体106-222过量没有特定的解毒剂。如果怀疑药物过量，建议根据受试者的临床状态进行适当的支持性临床护理。

派姆单抗过量

过量使用派姆单抗将被定义为≥1000mg派姆单抗。没有关于治疗派姆单抗过量的具体信息。如果过量服用，应密切观察受试者的毒性迹象。如果有临床指征，应提供适当的支持性治疗。

研究结束后的治疗

研究者负责确保对于受试者医疗状况的研究后护理进行考虑。

对于在永久停止研究治疗后需要随访观察疾病进展和/或存活的受试者的随访评估，参考退出/停用标准部分和时间和事件表部分。

伴随药物和非药物疗法

在从第一次给药研究治疗开始直到研究结束(最终研究访视)，在开始任何新的药物之前，都要求受试者通知研究人员。在研究期间服用的任何伴随药物，包括非处方药物和草药产品都将被记录在eCRF中。最低要求是要记录药物名称、剂量和给药日期。此外，所有之前的抗癌治疗的完整列表将被记录在eCRF中。

关于伴随药物的问题应该直接提交给GSK医疗监视者进行澄清。

如果将来对允许/禁止药物列表进行了更改，GSK将提供正式文件并存储在研究文件中。任何此类更改将以信件的形式传达给调查站点。

时间和事件表

表19时间和事件表–单药疗法和组合治疗

访视缩写：Scrn＝筛选；TDV＝治疗中止访视；DFSFU＝无病生存随访；SFU＝生存随访；PD＝进行性疾病；AE＝不良事件；SAE＝严重不良事件；AESI＝特别感兴趣的不良事件；

ECOG PS＝东部肿瘤协作组的表现状态；ECG＝心电图；β-hCG＝β-人绒毛膜促性腺激素；CrCl＝肌酸酐清除率

a.访视窗口：除了筛选/基线和第1天访视，除非另有说明，否则以≤3周间隔进行的评估将有±3天的窗口，且以>3周的间隔进行的评估将有±1周的窗口。对于筛查/基线和第1天的访视，所有程序必须在第一次给药之前完成。

b.在首次给药的4周(28天)内进行的筛查评估或程序(除非另有说明，第一次给药研究治疗后3天内必须进行的血清妊娠试验除外)。

c.从第12周起的安全性评估频率如下(除非在表中另有说明)：

每个抗体106-222或派姆单抗给药日(给药前)：临床化学，血液学，尿分析，生命体征和体重；

每6周：甲状腺功能检查，ECOG PS评估，体检；

每12周：12导联心电图。

d.治疗中止访视应该在最后一次给药研究治疗起30天完成。这次访视的窗口是+10天。在最后一次给药研究治疗后至少30天收集所有AE和伴随药物。所有AESI和SAE以及与报告的AESI和SAE相关的任何伴随药物将在最后一次给药研究治疗后至少90天或直到新抗癌疗法开始时(以先发生者为准)收集。根据“收集不良事件和严重不良事件信息的时间和频率部分”中提供的指导，将报告90天窗口后发生的任何药物或研究相关的SAE。

e.如果研究治疗在没有PD的情况下永久停止，受试者将每12周返回一次以评估疾病，直至记录PD(根据irRECIST)、开始另一种抗癌治疗、或死亡(以先发生者为准)。这些访视被描述为无疾病生存随访(DFS FU)访视。

f.在记录疾病进展后(或开始另一种抗癌治疗后)，应每隔12周完成一次生存FU访视。应每12周(±2周)接触一次受试者直至发生死亡。

g.在时间和事件表中显示了以每3周的间隔给药抗体106-222和派姆单抗；然而，由于毒性，抗体106-222的给药可延迟。在组合用药期间，应首先给药抗体106-222，并且应在抗体106-222输注结束后至少1小时且不超过2小时给药派姆单抗。抗体106-222将最多给药48周。派姆单抗将最多给药2年。

h.筛选肿瘤成像必须在第一次给药的28天内获得。每12周(±1周)进行一次肿瘤成像，直至irRECIST证实疾病进展；如果怀疑PD但未确认，可获得额外扫描。免疫相关的

RECIST将被用于确定PD的治疗决定。如果受试者在之前的影像学评估中已经达到CR或PR，作为确认反应的一部分，应在4-6周内进行重复扫描以确认反应。在TDV时，只有最后的疾病评估没有显示PD时才需要肿瘤成像，并且在TDV前≥6周进行。在DFS FU访视期间(当受试者在记录疾病进展之前永久停止研究治疗时进行)时，每12周(±1周)获得一次肿瘤成像，直至PD、开始新的抗癌治疗、或死亡(以先发生者为准)。

i.应在筛查时(第一次给药前)和第6周(第三次给药研究治疗后，±1周)尝试新鲜的肿瘤活检物。一旦在剂量扩展阶段收集了多达10位受试者的可评估配对肿瘤活检组织，则可以放弃该要求。计划用于活检的肿瘤病变不得用作评估疾病的指标病变。尽管在筛查过程中获得新鲜活检物是首选，但如果不能获得新鲜活检物，最近的存档肿瘤标本是可以接受的。

j.进行性疾病组织样本：应在疾病进展时尝试任选的新鲜肿瘤活检物。

仅针对第1部分：在第1天，ECG测量将以一式三份的前剂量在输注之后的以下时间进行：EOI+30m、EOI+4h、EOI+24h，在第22天，ECG测量将以一式三份的前剂量进行，在第85天ECG测量将以一式三份的前剂量在输注之后的以下时间进行：EOI+30m。

表20时间和事件表–药代动力学、抗药物抗体和药效学(第1和2部分)

时间点定义：

X＝访视期间的任何时间

Pre＝在抗体106-222输注开始前60分钟内

EOI+30m＝在抗体106-222输注结束后的30分钟内

EOPI+30m＝在派姆单抗输注结束30分钟内

EOI+4h＝抗体106-222输注结束后4小时±10分钟内

EOI+24h＝抗体106-222输注结束后24小时±4小时

a.在收集样品之前必须获得任选药物遗传学研究的知情同意书。建议在受试者符合所有资格要求后尽早采集血样，并且可以在直到第1天前的28天完成。

b.如果基线/前剂量样品不可行，则在随后的访视中不需要PBMC的样品。

c.除了这些预定的免疫原性评估之外，对于那些经历过敏反应、严重超敏反应或与导致退出研究的研究药物给药相关的AE的受试者也将采用“事件驱动”测试。

d.第2天，仅在研究的剂量递增阶段期间需要PK样品。

e.剂量8和每4个给药周期。

D＝天；PBMC＝外周血单核细胞；EOI＝输注结束；

血液样本采集、处理、存储和运输程序在SRM中进行了描述。

筛选和关键基线评估

人口和基线评估

将获得以下人口统计参数：出生年份、性别、种族和民族。

医疗/药物/家族病史将被评估为与研究人群选择和撤回标准部分列出的纳入/排除标准相关。

作为受试者常规临床管理(例如、血液计数、ECG、扫描等)的一部分进行并且在签署知情同意之前获得的程序可以用于筛查或基线目的，只要该程序符合方案定义的标准并且已经在研究的时间范围内进行。

关键基准评估

筛查时将评估心血管病史/风险因素(详见eCRF)。

靶标和非靶标病变的基线记录

·所有基线病变评估必须在首次给药前28天内进行。

·短轴<10mm的淋巴结被认为是非病理性的，不应被记录或跟踪。

·短轴<15mm但≥10mm的病理性淋巴结被认为是不可测量的。

·短轴≥15mm的病理性淋巴结被认为是可测量的，可以被选择为靶标病变；然而，当其他合适的靶标病变可用时，不应将该淋巴结选作靶标病变。

·每个器官最多2个病变以及所有相关器官共5个病变的可测量病变，应被鉴定作为靶标病变，并在基线进行记录和测量。这些病变应根据其大小(具有最长直径的病变)和它们对准确重复测量(通过成像技术或临床)的适应性进行选择。

注：当其他合适的靶标病变可用时，不应将被认为代表囊性转移的囊性病变选择为靶标病变。

注：先前已经被辐射并且在辐射后未显示出进展的可测量病变不应被视为靶标病变。

·可通过计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)评估的溶骨性病变或混合型溶解-增生型(lytic-blastic)病变与可识别的软组织组分可被视为可测量的。骨扫描、氟脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描(FDG-PET)或X射线不被认为是测量骨病变的合适的成像技术。

·所有其他病变(或疾病部位)应被确定为非靶标，并且应该记录在基线。非靶标病变将按器官分组。这些病变的测量不是必需的，但是在随访期间应该注意每个病变的存在或不存在。

基线需要以下内容：相对于胸部、腹部和骨盆的CT扫描，受试者潜在疾病指示的其他区域，以及可触及病变的临床疾病评估。对于头颈癌患者，需要头部和颈部CT或MRI。在每次基线评估后，对这些扫描确定的疾病部位进行评估是必需的。

注意：虽然CT扫描是首选，但MRI可以用作基线疾病评估的替代方法，尤其是对于因对比剂过敏而被禁用CT扫描的受试者，前提是用于记录基线状态的方法始终在研究治疗期间使用以有助于直接比较。

每个方案都需要确认CR和PR。确认评估必须在初步达到反应标准后的4至6周内完成，并且可以在下次方案预订的评估时进行。如果在下一个方案预订的评估之前进行确认评估，则仍然需要下一个方案预订的评估(例如，评估必须发生在每个方案预订的时间点，而不管未预订的评估)。

功效

抗癌活性评价

·根据RECIST(1.1版)[Eisenhauer，2009]和irRECIST进行病变评估方法和定时、疾病、疾病进展和应答标准的评估，如下所述。irRECIST将用于确定治疗决策，并将用于抗癌活性的主要分析。

·疾病评估方式可包括影像学(如CT扫描、MRI、骨扫描、X线平片)和体检(对于可触及/浅表病变)。

·基线疾病评估将在第一次给药抗体106-222之前4周内完成，然后在其之后每12周进行一次，和在最终研究访视时进行。参见时间和事件表以了解抗癌活性的评估时间表。

·评估必须按日历时间表进行，不应受剂量中断/延误的影响。

·对于基线后评估，允许±7天的窗口以允许灵活安排。如果最后一次放射照相评估在受试者退出研究前超过12周，且尚未记录PD，则在退出研究时应该获得疾病评估。

·疾病反应(CR或PR)的受试者应在评估日期后4周进行确认性疾病评估，在此期间证实该反应。研究者可酌情进行更频繁的疾病评估。

·为确保基线与随后评估之间的可比性，评估反应时将使用相同的评估方法和相同的技术。

安全性

时间和事件表中列出了所有安全性评估的计划时间点。

不良事件和严重不良事件

研究者及其指定人员负责检测、记录和报告符合AE或SAE定义的事件。

收集不良事件和严重不良事件信息的时间段和频率

·在研究治疗开始时收集AE和SAE，直到在时间和事件表中指定的时间点进行的后续接触。

·在开始研究治疗之前但在获得知情同意后开始的医疗事件可记录在eCRF的医疗史/当前医疗状况部分。

·被评估为与研究参与相关的AESI和SAE(例如，方案规定的程序，侵入性检测或现有治疗的改变)或与GSK产品相关的任何AESI和SAE都将从受试者同意参加研究时记录直至最后一次给药研究药物后90天。如果在此期间开始使用另一种抗癌药物，则应记录AESI和SAE直到最后一次给药后30天或开始其他抗癌药物(以较晚者为准)。必须在24小时内通过电子媒体或纸张向主办者报告SAE。

·所有AESI和SAE将在24小时内记录并向GSK报告。

·研究者没有义务积极寻求以往研究受试者中的AE或SAE。但是，如果研究者在研究对象出院后的任何时间获悉任何SAE，包括死亡，并且他/她认为该事件可能与研究治疗或研究参与有关，则研究者必须及时通知GSK。

注：记录、评估和评价AE和SAE因果关系的方法，以及完成并向GSK传送SAE报告的程序。

每次ECG测试前，受试者应该休息约10分钟。受试者应该处于半卧位或仰卧位；所有随后的ECG测试都必须使用相同的体位。

对于本研究的第1部分，ECG测量将在指定的时间重复进行三次。所有其他测量可以作为单个ECG测量来进行。

在参与研究期间或在最后一次给药研究治疗后30天内被认为具有临床显著异常值的所有实验室测试应重复进行，直到数值恢复正常或基线。如果这些数值在研究者判断为合理的一段时间内没有恢复正常，应确定病因并通知主办者。

药代动力学

血样收集

将在时间和事件表部分(表20)中描述的时间点收集用于抗体106-222和派姆单抗的PK分析的血液样品。每次采集血样的实际日期和时间将记录在eCRF中。可以改变PK样品的时间和/或可以在额外的时间点获得PK样品以确保彻底的PK监测。SRM提供了关于PK血液样本收集、处理、储存和运输程序的详细信息。

将在表20中所示的时间从所有受试者收集用于分析血浆抗体106-222浓度的血液样品(1mL)的用于分析血清派姆单抗浓度的血液样品(3mL)。

SRM提供了处理、储存和运输程序。

血样分析

抗体106-222和派姆单抗的血浆或血清分析将在PTS-DMPK/Scinovo，GSK或MerckSharp&Dohme Corp的控制下进行，其细节将包括在SRM中。使用目前批准的生物分析方法，分别在血浆和血清样品中测定抗体106-222和派姆单抗的浓度。原始数据将存档在生物分析站点(详见SRM)。一旦分析了血浆或血清中的抗体106-222和派姆单抗，任何剩余血浆可用于分析其他化合物相关代谢物，并且在独立的PTS-DMPK/Scinovo、GSK或Merck Sharp&Dohme方案下报道结果。

生物标记物/药效学标记物

血液生物标记物

将采集血样并通过流式细胞术分析以评估抗体106-222与OX40受体的结合，以及其对淋巴细胞的药效学效应。OX40受体占有率将在抗体106-222的给药之前、治疗后以及选定的治疗间隔确定。通过流式细胞术在全血中同时评估T细胞、B细胞和NK细胞以及T细胞亚群的数量。T细胞的活化和增殖状态也将在同一样品中同时评估。

还将采集血液样品以用于分离PBMC和血浆。血浆样品将用于分析与T细胞活化有关的循环可溶性因子，并且可以根据测定的可用性分析可溶性OX40和可溶性OX40-药物复合物。要分析的因素可以包括但不限于：IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL 10、IL-8、IL-12p70、IL-13和IL-17以及针对肿瘤、自身或病毒抗原的抗体。

从全血中分离的PBMC将被保存并存储用于其他细胞类型(例如免疫调节群体，其可以包括但不限于骨髓来源的抑制细胞)的流式细胞术、随后进行的功能分析或评估T细胞库的多样性、其与临床反应的关系以及对抗体106-222治疗的反应的变化。可以分析PBMC的功能状态以用于细胞因子的表达，所述细胞因子可以包括但不限于IFN-γ、IL-2、TNFα、IL-17、粒酶B和CD107a。还可以评估PBMC的基因组(DNA)和基因表达(RNA或蛋白质)改变以确定免疫相关标记中的治疗相关变化。

肿瘤组织

在剂量扩展队列中以及如果可能的话在剂量递增队列中的至少10名受试者中的归档肿瘤组织以及新鲜的治疗前和治疗后活检组织，将通过IHC评估肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)及其它免疫细胞上表型和功能性免疫细胞标记物的表达以及肿瘤细胞表面上免疫信号标记物的表达，以了解抗肿瘤免疫应答。另外，如果可能的话，将对进展时获得的肿瘤组织样品进行类似的分析。此外，可对肿瘤组织进行测序以评估TCR多样性以及评估任何与反应相关的DNA/RNA/蛋白质变化。

其他生物标记可以通过附加数据进行评估。样本收集、处理、储存和运输的细节将在SRM中提供。

遗传学

有关基因研究的信息已包含在附录7中。

数据管理

对于这项研究，受试者数据将被输入到GSK定义的eCRF中，以电子方式传输给GSK或指定人员，并与经过验证的数据系统中其他来源提供的数据相结合。

临床数据的管理将根据适用的GSK标准和数据清除程序进行，以确保数据的完整性，例如消除数据中的错误和不一致性。

AE和伴随药物项目将使用MedDRA(调节活性医学词典)和经内部验证的药物词典GSKDrug进行编码。

eCRF(包括查询和审计追踪)将由GSK保留，副本将发送给调查员以保留作为调查员的副本。根据GSK的政策，受试者首字母缩写(initials)不会被收集或传输给GSK。

数据分析注意事项

在剂量递增队列中，基于所有可用数据(包括生物标记物和PK数据以及先前队列的安全性概况)将递增剂量。另外，可以计算来自连续重新评估方法(N-CRM)分析[Neuenschwander，2008]的推荐剂量。N-CRM是一种贝叶斯自适应剂量递增方案。该方法是完全自适应的，并利用了每次剂量分配时可用的所有DLT信息。固定和自适应临床试验模拟器(FACTS)将用于进行N-CRM分析。试验中登记的所有受试者的DLT信息用于更新估计的剂量-毒性关系，并在下一次递增/递减决策中提供除3+3设计外的支持性信息；预计3+3算法将被用作剂量递增的主要标准。

扩展阶段旨在评估初步疗效。为了评估包括安全性、反应和药效学数据在内的累积数据，将进行无效(futility)评估并暂停招募。该方法是基于，如果继续招募直到所有计划的受试者都被招募，则预测成功的可能性[Lee，2008]。

对于第1部分：单药疗法剂量扩展，在每个队列中招募了10名受试者之后，根据表21中总结的规则，观察到的反应的数量可以用于指导进一步的招募。然而，将在做招募决定时考虑所有可用的数据。

表21单一疗法扩展队列招募指导

a.阴影区域是暂停招募的特定区域。

从10名受试者开始，允许最大样本量为20，当真实反应率为30％时，该设计的I型错误率(α)为0.128，检验力为88％。该试验的目的不是为了疗效而尽早停止，而是为了评估成功的预测概率为1％或更低时的无效。用于评估无效的I型错误率、检验力和成功预测概率是通过明确说明最小和最大样本量、无效停止率以及选择优化标准作为替代假设下的最大化功效而得出的。用于确定设计的贝叶斯先验是Beta(0.1,0.9)，这是一个相对无信息量的分布，平均反应率为10％。在零假设下，如果真实反应率为10％，则设计的预期样本量为每个扩展队列16名受试者，提前终止的概率为73％。在替代假设下，如果真实反应率为30％，则设计的预期样本量为每个扩展队列20名受试者，并且提前终止的概率为6％。

这些操作特征假定遵循无效评估规则。如果不是，并且试验继续进行，直到评估了20名受试者，则总体1型错误率从0.128增加到0.133，检验力从88％增加到89％。

用于为组合队列的扩展阶段创建无效评估规则的统计学方法将与单药疗法阶段相似，其根据选择用于研究的肿瘤类型所确定。另外，如果PK和生物标记物数据表明队列间临床活性具有强烈的相似性，则可以使用贝叶斯多层模型来跨队列共享信息。

CRM建议的剂量递增水平、无效评估规则和后验概率仅仅是指导原则，团队在决策时会考虑整体数据。

分析人群

所有治疗人群定义为接受至少一次抗体106-222给药的所有受试者。将根据此分析群体评估安全性和抗癌活性。

PK人群将由来自所有治疗人群的所有受试者组成，对所述受试者获得并分析PK样品。

抗癌活性分析

所有治疗人群都将被用于抗癌活性分析。由于这是一项I期研究，因此根据临床证据和反应标准评估抗癌活性。如果数据要求，反应数据将按照剂量水平进行汇总。

如果数据要求，将对每名受试者计算并列出PFS和反应的持续时间。PFS定义为根据临床或放射学评估或任何原因造成的死亡，以先发生者为准，从第一次给药日起至疾病进展日的时间。反应持续时间被定义为在实现总体反应(即未确认或确认的CR或PR)的受试者中，从首次记录CR或PR证据到由于任何原因导致疾病进展或死亡的时间。如果受试者没有记录的事件日期，PFS将在最后一次适当评估时被审查。RAP将提供关于审查规则的进一步细节。如果数据要求，PFS将使用Kaplan-Meier方法进行汇总。

次要分析

药代动力学分析

药代动力学参数

抗体106-222和派姆单抗的PK分析将由临床药理学建模和模拟(CPMS)部门、GSK或Merck Sharp and Dohme Corp.负责。

药物浓度-时间数据的PK分析将在CPMS，Quantitative Sciences，GSK的指导下通过非房室方法进行。如果数据允许，将确定以下PK参数：

·Cmax

·到Cmax的时间(tmax)

·Cmin

·血浆浓度-时间曲线下面积(AUC(0-t)，AUC(0-τ)(重复给药)和/或AUC(0-∞)(单次给药))

·表观终末期消除速率常数(λz)(单次给药)

·表观终末期半衰期(t 1/2)(单次给药)

·亲本药物的全身清除(CL)

药代动力学数据的统计分析

PK参数数据的统计分析将由Clinical Statistics,GSK负责。

将列出每名受试者的药物浓度-时间数据，并通过队列在每个时间点的描述统计学进行汇总。PK参数数据将针对每名受试者列出并通过队列描述统计学进行汇总。

来自这项研究的数据可与其他研究的数据结合起来进行群体PK分析，这些数据将单独报告。

药代动力学/药效学分析

从药效学样品获得的数据将被描述性地和/或图形性地总结，并且如果有必要的话，将进行探索性PK/药效学分析以通知剂量选择决定。

免疫原性分析

将收集血清样品并测试与抗体106-222和派姆单抗结合的抗体的存在。按照时间和事件时间表(时间和事件表部分)中所述收集用于测试抗-抗体106-222和抗-派姆单抗抗体的血清样品。记录每个血样采集的实际日期和时间。SRM提供了血液样本采集(包括要收集的容量)、处理、储存和运输程序的详细信息。

计划的免疫原性样本的时间和数量可在研究过程中根据新获得的数据进行更改，以确保进行适当的安全监测。如果超敏性反应：1)被研究者认为具有临床显著性；或2)导致受试者从研究中退出，则应该在事件发生时以及之后的30天、12周和24周从受试者取血样以进行免疫原性测试。对于过早退出研究的受试者，在退出时和最后一次给药后随访的30天、12周和24周时进行免疫原性检测。

使用目前批准的分析方法，使用分层测试方案：筛选、确认和滴定步骤，以测试血清中是否存在抗-抗体106-222的抗体。治疗出现的ADA的存在将使用抗体106-222桥接式ADA测定法进行测定，其中生物分析确定的割点(cut-point)在测定验证期间测定。在给药抗体106-222后具有等于或高于割点的值的样品将被认为是治疗出现的ADA阳性的。这些ADA阳性标本将在确认检测中进一步评估，且确认的阳性标本将通过效价评估进一步表征。在研究结束时将报告抗-抗体106-222的抗体测试的结果，并将包括发病率和效价。将分析给药受试者中抗体106-222的抗体的存在或不存在，然后描述性总结和/或由图形表示。

其他分析

转化研究分析

转化研究调查的结果可以在主要临床研究报告(CSR)中报道。由数据决定，来自所有比较的所有感兴趣的终点将被描述性地和/或图形性地总结。

有关转化研究分析的进一步细节将在RAP中解决。

新型生物标记物分析

这些生物标记物研究的结果可与主要临床研究报告分开报告。由数据决定，来自所有比较的所有感兴趣的终点将被描述性地和/或图形性地总结。

可以进行额外的探索性分析以进一步表征新型生物标记物。

药物遗传学分析

有关PGx分析的更多详细信息，请参阅附录7和PGx RAP。

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缩写

商标信息

评估疾病、疾病进展和反应标准的指南-改编自RECIST 1.1版

评估指南

请注意以下事项：

·在整个研究中必须使用相同的诊断方法，包括使用造影剂(如果适用)，以评估病变。必须根据图像采集指南使用造影剂。

·应使用标尺或卡尺以毫米(mm)为单位采集和记录所有测量数据。

·超声不是一种适合疾病评估的方式。如果用超声确定新病变，则需要CT或MRI确认。

·氟脱氧葡萄糖(FDG)-PET通常不适用于疾病的持续评估。然而，FDG-PET可用于确认新的疾病位点，其中阳性FDG-PET扫描与CT/MRI上存在的新的疾病位点相对应，或者基线FDG-PET对于新病变部位先为阴性。FDG-PET也可用于代替标准骨扫描，提供的覆盖范围允许调查所有可能的骨疾病部位，并且在所有评估中进行FDG-PET。

·如果进行PET/CT，则CT组件只能用于标准反应评估(如果进行的是诊断质量)，其包括所需的解剖覆盖范围和规定的造影剂使用。评估方法应在eCRF上注明为CT。

临床检查：临床检测到的病变仅在浅表时(例如皮肤结节)才被视为可测量的。在皮肤病变的情况下，需要通过彩色摄影记录文件，包括尺子/卡尺以测量病变的大小。

CT和MRI：建议使用5mm连续切片的造影剂增强CT。可测量的基线病变的最小尺寸应该是切片厚度的两倍，当切片厚度为5mm时最小病变尺寸为10mm。MRI是可以接受的，但在使用时，应优化扫描序列的技术规格，以评估疾病的类型和部位，并且必须使用相同的影像检查在相同的解剖平面测量病变。只要有可能，应该使用相同的扫描仪。

X射线：一般来说，由于病变定义较差，X射线不应用于测量靶标病变。胸部X线的病变如果被明确界定并被充气肺所包围，则可视为可测量的；然而胸部CT优先于胸部X线。

脑部扫描：如果需要脑部扫描，那么造影剂增强的MRI优于造影剂增强的CT。

疾病评估指南

可测量和不可测量的定义

可测量病变：

可以在至少一个维度(最长维度)准确测量的非结节病变，所述维度：

·当扫描切片厚度不大于5mm时，对于MRI或CT，≥10mm。如果切片厚度大于5mm，则可测量病变的最小尺寸必须至少是切片厚度的两倍(例如，如果切片厚度为10mm，则可测量的病变必须是≥20mm)。

·对于临床检查或医学摄影检查，≥10毫米的卡尺/标尺测量值。

·对于胸部X光检查，≥20毫米。

·另外，如果满足以下，则淋巴结可以被认为是病理性扩大和可测量的：

当通过CT或MRI评估时在短轴≥15mm(切片厚度建议不超过5mm)。在基线和随访中，只测量短轴。

不可测量的病变：

所有其他病变，包括病变太小而不能被认为是可测量的(最长直径<10mm或具有≥10mm和<15mm短轴的病理性淋巴结)以及真正不可测量的病变，其包括：软脑膜疾病、腹水、胸膜或心包积液、炎性乳腺疾病、皮肤或肺的淋巴管受累、通过体检确定的腹部肿块/腹部器官肿大(通过可重现的成像技术不可测量)。

可测量的疾病：存在至少一个可测量的病变。无法通过影像学或照相评估测量的可触及的病变不能被用作唯一可测量的病变。

不可测量的唯一疾病：仅存在不可测量的病变。注意：每个方案都不允许不可测量的唯一疾病。

免疫相关的RECIST反应标准

表22：靶标病变的评价

a.根据RECIST v1.1可测量。

b.治疗决策将取决于免疫-相关的RECIST标准。

基于总的可测量的肿瘤负荷的抗肿瘤应答

对于基于RECIST v1.1和免疫相关RECIST标准[Wolchok，2009]的修订的RECIST标准，考虑初始指标和可测量的新病变。在基线肿瘤评估中，计算所有指数病变(最多总共5个病变(每个器官最多2个病变)，代表所有涉及的病变)测量平面中最长直径的总和(SLD)。注意：如果淋巴结包含在SLD中，则只有淋巴结的短轴被添加到总和中。短轴是淋巴结或淋巴结肿块的与最长直径垂直的最长直径。在随后的每次肿瘤评估中，将基线指标病变和新的可测量病变(≥10mm；每个器官最多5个新病变：5个新皮肤病变和10个内脏病变)的SLD加在一起以提供总肿瘤负荷：

肿瘤负荷＝SLD_指数病变+SLD_{新的可测量病变}

使用免疫相关的RECIST标准的时间点反应评估

每个评估时间点肿瘤负荷的百分比变化描述了常规和新的可测量病变出现时的大小和生长动力学。在每次肿瘤评估中，根据肿瘤负荷的变化(排除irPD后)确定指标和新的可测量病变的反应。必须相对于基线测量值(即筛选时所有指标病变的SLD)评估肿瘤负荷的减少。

评估非靶标病变

评估非靶标病变反应的定义如下：

·完全反应(CR)：所有非靶标病变消失。在基线处确定为疾病部位的所有淋巴结必须是非病理性的(例如<10mm短轴)。

·非CR/非PD：在基线≥10mm短轴处，持续出现的1个或更多个非靶标病变或淋巴结被确定为疾病部位。

·进展性疾病(PD)：现有非靶标病变的明确进展。

·不适用(NA)：基线没有非靶标病变。

·不可评估(NE)：不能按上述四个定义之一进行分类。

注意：

·在存在可测量的疾病的情况下，仅基于非靶标疾病的进展需要大幅度恶化，因此即使靶标疾病中存在SD或PR，总体肿瘤负荷已充分经增加，从而值得停止治疗。

·未在根据评估时间表的特定时间点评估的非靶标病变部位应排除在反应测定之外(例如，非靶标反应不必为“不可评估”)。

新的病变

表示疾病进展的新恶性肿瘤必须是明确的。在随访中鉴定的在基线处未扫描出的解剖学位置的病变被认为是新的病变。

任何不明确的新病变都应该继续随访。研究人员可以自行决定是否继续治疗，直到下一次计划评估为止。如果在下一次评估中认为新病变是明确的，则应记录进展。

整体反应的评估

表23给出了在单个时间点针对靶标和非靶标病变的所有可能的肿瘤反应组合的总体反应，其中对于在基线处具有可测量疾病的受试者出现或不出现新病变。

表23：在基线处评估具有可测量疾病的受试者的总体反应

CR＝完全反应，PR＝部分反应，SD＝疾病稳定，PD＝进行性疾病，NA＝不适用，且NE＝不可评价

评估最佳总体反应

最好的总体反应是从治疗开始到疾病进展/复发记录的最佳反应，并且将由GSK根据研究者在每个时间点的反应评估来通过程序确定。

·要被分配到SD状态，后续疾病评估必须在第一次给药后以最少的间隔天数符合SD标准达至少一次。

·如果未满足SD的最少时间，最佳反应取决于后续评估。例如，如果在评估SD后评估PD且SD不符合最短时间要求，则最佳反应将是PD。或者，在不符合最低时间标准的SD评估后，失去跟踪的受试者将被视为无法评估。

确认标准：

要分配为PR或CR的状态，应在首次符合反应标准后不少于4周(28天)进行确诊疾病评估。

ECOG行为状态^a

a.Oken，1982.

附录7：遗传研究

遗传研究目标与分析

遗传研究的目标是研究遗传变异与以下几点之间的关系：

·对药物的反应，包括抗体106-222或派姆单抗或任何伴随药物；

·NSCLC、SCCHN、RCC、黑素瘤、膀胱癌、STS、TNBC或MSI CRC、易感性、严重程度和进展及相关状况

遗传数据可在研究进行中或研究完成后产生。遗传评估可包括集中候选基因方法和/或检查整个基因组中的大量遗传变异(全基因组分析)。遗传分析将利用研究中收集的数据，并将仅限于理解以上强调的目标。可以使用来自多个临床研究的数据来进行分析以调查这些研究目标。

将使用适当的描述性和/或统计分析方法。任何计划分析的详细说明将在开始分析之前记录在报告和分析计划(RAP)中。计划分析和基因调查结果将按需要作为临床RAP和研究报告的一部分或在独立的遗传学RAP和报告中报告。

研究群体

任何参加研究的受试者都可以参与基因研究。任何接受过同种异体骨髓移植的受试者都必须排除在基因研究之外。

研究评估和程序

成功的基因研究的一个关键组成部分是在临床研究期间收集样本。即使没有确定先验假设，样本采集也可以促使在未来进行遗传分析，以帮助了解疾病和药物反应的变化。

·取6mL血样进行脱氧核糖核酸(DNA)提取。在受试者符合所有资格要求并提供遗传研究的知情同意后，在基线访视时收集血样。实验室手册介绍了遗传样本的收集和运输说明。来自血样的DNA可以进行质量控制分析以确认样品的完整性。如果有关于样品质量的担忧，那么可销毁样品。血液样本将一次性采集，除非由于不能利用原始样本而需要重复的样本。

基因样本被标记(或“编码”)为具有与用于标记研究中的其他样本和数据相同的研究具体数字。这个数字可以由调查员或现场工作人员追踪或链接回受试者。被编码的样本不携带个人标识符(例如姓名或社会安全号码)。

样品将被安全地储存，并且可在最后一名受试者完成研究后保存至多15年，或者GSK会尽快销毁样品。GSK或与GSK合作的人员(例如其他研究人员)只会将本研究收集的样品用于本方案和知情同意书中所述目的。样品可以作为伴随诊断开发的一部分以支持GSK药物产品。

受试者可以随时要求其样品被销毁。

知情同意

不希望参与遗传研究的受试者仍可参与研究。在采集遗传研究的血液样本之前，必须获得遗传知情同意书。

受试者退出研究

如果已经同意参与遗传研究的受试者出于任何随访失踪之外的原因退出临床研究，则如果已经收集遗传样品，则将给药受试者以下关于遗传样品的选项之一的选择：

·继续参与遗传研究，在这种情况下保留遗传DNA样本；

·停止参与遗传研究并销毁遗传DNA样本。

如果受试者因任何原因撤销了遗传研究的同意或要求销毁样品，调查人员必须填写相应的文件，以要求在GSK指定的时间范围内销毁样品，并将文件保存在现场研究记录中。

基因型数据可以在研究期间或研究完成后生成，并且可以在研究期间分析或储存以用于未来分析。

·如果受试者撤回对遗传研究的同意并且未分析基因型数据，则该数据不会被分析或用于未来的研究。

·在撤回同意时已经分析的遗传数据将继续存储并在适当时使用。

筛选和基线失败

如果收集了遗传研究样本并确定受试者不符合参与研究的入选标准，那么研究者应通知受试者其遗传样本将被销毁。不需要任何表格来完成此过程，因为它将作为同意书和样本核对过程的一部分完成。在这种情况下，样本销毁表单将无法包含在站点文件中。

研究结果和受试者遗传数据的保密性的规定

GSK可将临床研究报告中的遗传学研究结果总结出来，也可在科学期刊上发表。

GSK可与其他科学家分享遗传研究数据，以便根据知情同意进一步进行科学理解。除非法律要求，否则GSK不会向受试者、家属、保险公司或雇主告知在研究时不与受试者的医疗护理相关的个人基因分型结果。这是由于遗传研究产生的信息通常是初步的，因此结果的显著性和科学有效性尚未确定。此外，研究实验室产生的数据可不符合纳入临床护理的监管要求。

实施例2

与C57/BL6菌株同源的MC38结肠腺癌肿瘤模型用于证明，使用抗OX40激动剂抗体与抗PD-1拮抗剂抗体的组合的改善的抗肿瘤活性。该实验比较了MC38荷瘤小鼠对三种方案之一的治疗的抗肿瘤反应：用小鼠抗小鼠PD-1单克隆抗体(抗PD-1)的单药疗法、用大鼠抗小鼠OX40抗体的单药疗法抗体、克隆OX-86(抗OX40)以及用这两种药物同时施用的组合疗法。在该研究中，抗PD-1以5mg/kg腹膜内(IP)施用，对于4个周期中的每一个都是每5天施用一次。对于4个周期中的每一个，抗OX40都以10mg/kg每5天IP施用一次。同种型对照组包括以下组合：特异性针对同种型IgG1的腺病毒六邻体25的小鼠单克隆抗体，对于4个周期中的每一个，每5天以5mg/kg IP施用一次；和特异性针对同种型IgG1的人IL-4的大鼠单克隆抗体，对于4个周期中的每一个，每5天以10mg/kg IP施用一次。当平均肿瘤体积达到115mm³时(第0天)开始治疗。

如图16所示的结果所证实的，在第18天使用PD-1拮抗剂和抗OX40激动剂的组合疗法的平均抗肿瘤反应大于用抗OX40单一药剂治疗观察到的抗肿瘤反应(p＝0.00005，双侧p值，Gehan-Breslow非参数检验)或抗PD-1单一药剂治疗观察到的抗肿瘤反应(p＝0.00005，双侧p值，Gehan-Breslow非参数检验)。如图16所示，这两种药物的组合表现出在12个中有5个完全消退，使得没有可测量的肿瘤保留，并且12个中有7个部分消退，其中第18天的肿瘤体积小于第0天的起始肿瘤体积。在单一药物治疗组中没有观察到完全和部分消退。使用Fishers Exact Pair-Wise检验来确定对不同治疗的反应的统计学显著性，并且结果显示在表24中。通过监测动物体重来评估治疗耐受性。不存在与单一药物或组合治疗的施用相关的显著体重减轻，表明治疗具有良好的耐受性。三个动物死亡(同种型对照组中两个，组合组中一个)是由于战斗相关的创伤并且与治疗无关。

表24：双尾Fisher精确检验：第18天肿瘤体积的成对比较

*双尾Fisher精确检验：第18天肿瘤体积的成对比较。

序列表

<110> 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司

默沙东公司

<120> 组合治疗及其用途和方法

<130> PU65945 PCT

<140>

<141>

<150> 62/204,555

<151> 2015-08-13

<150> 62/200,779

<151> 2015-08-04

<160> 115

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 1

Asp Tyr Ser Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 2

Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 3

Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 4

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 5

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 458

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 6

actagtacca ccatggcttg ggtgtggacc ttgctattcc tgatggcagc tgcccaaagt 60

atccaagcac aggttcagtt ggtgcagtct ggatctgagc tgaagaagcc tggagcctca 120

gtcaaggttt cctgcaaggc ttctggttat accttcacag actattcaat gcactgggtg 180

cgacaggctc caggacaagg tttaaagtgg atgggctgga taaacactga gactggtgag 240

ccaacatatg cagatgactt caagggacgg tttgtcttct ctttggacac ctctgtcagc 300

actgcctatt tgcagatcag cagcctcaaa gctgaggaca cggctgtgta ttactgtgct 360

aatccctact atgattacgt ctcttactat gctatggact actggggtca gggaaccacg 420

gtcaccgtct cctcaggtaa gaatggcctc tcaagctt 458

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 7

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 8

Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 9

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr

1 5

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 11

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 12

<211> 416

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 12

gctagcacca ccatggagtc acagattcag gtctttgtat tcgtgtttct ctggttgtct 60

ggtgttgacg gagacattca gatgacccag tctccatcct ccctgtccgc atcagtggga 120

gacagggtca ccatcacctg caaggccagt caggatgtga gtactgctgt agcctggtat 180

caacagaaac caggaaaagc ccctaaacta ctgatttact cggcatccta cctctacact 240

ggagtccctt cacgcttcag tggcagtgga tctgggacgg atttcacttt caccatcagc 300

agtctgcagc ctgaagacat tgcaacatat tactgtcagc aacattatag tactcctcgg 360

acgttcggtc agggcaccaa gctggaaatc aaacgtaagt agaatccaaa gaattc 416

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 13

Ser His Asp Met Ser

1 5

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 14

Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Glu

1 5 10 15

Arg

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 15

His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 16

<211> 120

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 16

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met

50 55 60

Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 17

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 17

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met

50 55 60

Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 451

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 18

actagtacca ccatggactt cgggctcagc ttggttttcc ttgtccttat tttaaaaagt 60

gtacagtgtg aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tagtgcagcc tggagggtcc 120

ctgagactct cctgtgcagc ctctgaatac gagttccctt cccatgacat gtcttgggtc 180

cgccaggctc cggggaaggg gctggagttg gtcgcagcca ttaatagtga tggtggtagc 240

acctactatc cagacaccat ggagagacga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac 300

tcactgtacc tgcaaatgaa cagtctgagg gccgaggaca cagccgtgta ttactgtgca 360

agacactatg atgattacta cgcctggttt gcttactggg gccaagggac tatggtcact 420

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<210> 19

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 19

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His

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<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 20

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

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<210> 21

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<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 21

Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 22

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 22

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 23

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 24

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 24

gctagcacca ccatggagac agacacactc ctgttatggg tactgctgct ctgggttcca 60

ggttccactg gtgaaattgt gctgacacag tctcctgcta ccttatcttt gtctccaggg 120

gaaagggcca ccctctcatg cagggccagc aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat 180

atgcactggt accaacagaa accaggacag gctcccagac tcctcatcta tcttgcatcc 240

aacctagaat ctggggtccc tgccaggttc agtggcagtg ggtctgggac agacttcacc 300

ctcaccatca gcagcctaga gcctgaggat tttgcagttt attactgtca gcacagtagg 360

gagcttccgc tcacgttcgg cggagggacc aaggtcgaga tcaaacgtaa gtacactttt 420

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<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 25

Asp Ala Trp Met Asp

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<211> 19

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 26

Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

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Val Asn Gly

<210> 27

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<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 27

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<211> 414

<212> DNA

<213> Mus sp.

<400> 28

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gtgaagcttg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120

tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180

gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240

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tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360

gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 414

<210> 29

<211> 138

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 29

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 30

<211> 448

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 30

actagtacca ccatgtactt gggactgaac tatgtattca tagtttttct cttaaatggt 60

gtccagagtg aagtgaagct ggaggagtct ggaggaggct tggtgcaacc tggaggatcc 120

atgaaactct cttgtgctgc ctctggattc acttttagtg acgcctggat ggactgggtc 180

cgccagtctc cagagaaggg gcttgagtgg gttgctgaaa ttagaagcaa agctaataat 240

catgcaacat actatgctga gtctgtgaat gggaggttca ccatctcaag agatgattcc 300

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tgtacgtggg gggaagtgtt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc 420

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<210> 31

<211> 138

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 31

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 32

Lys Ser Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala

1 5 10

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<211> 7

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 33

Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro

1 5

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<211> 8

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 34

Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Thr

1 5

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<211> 378

<212> DNA

<213> Mus sp.

<400> 35

atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60

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atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180

ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240

aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300

gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360

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<210> 36

<211> 126

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 36

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

35 40 45

Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

<210> 37

<211> 413

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 37

gctagcacca ccatgagacc gtctattcag ttcctggggc tcttgttgtt ctggcttcat 60

ggtgctcagt gtgacatcca gatgacacag tctccatcct cactgtctgc atctctggga 120

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caacacaagc ctggaaaagg tcctaggctg ctcatacatt acacatctac attacagcca 240

ggcatcccat caaggttcag tggaagtggg tctgggagag attattcctt cagcatcagc 300

aacctggagc ctgaagatat tgcaacttat tattgtctac agtatgataa tcttctcacg 360

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<210> 38

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 38

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

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Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

引物"

<400> 39

cgctgttttg acctccatag 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

引物"

<400> 40

tgaaagatga gctggaggac 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

引物"

<400> 41

ctttcttgtc caccttggtg 20

<210> 42

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

引物"

<400> 42

gctgtcctac agtcctcag 19

<210> 43

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

引物"

<400> 43

acgtgccaag catcctcg 18

<210> 44

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 44

atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60

gtgaagctgg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120

tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180

gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240

tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300

tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360

gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcagcctcc 420

accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480

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agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407

<210> 45

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 45

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

180 185 190

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

225 230 235 240

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

245 250 255

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

340 345 350

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460

Leu Ser Pro Gly Lys

465

<210> 46

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多核苷酸"

<400> 46

atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60

gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120

atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180

ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240

aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300

gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360

accaagctgg agctgaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480

agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540

agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600

agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660

agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702

<210> 47

<211> 233

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 47

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

35 40 45

Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr

115 120 125

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

130 135 140

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

165 170 175

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

195 200 205

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

210 215 220

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 48

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 48

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

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Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

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370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

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Ser Pro Gly Lys

450

<210> 49

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 49

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg

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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 50

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 50

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

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210 215 220

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Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

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Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 51

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 51

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 52

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 52

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 53

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 53

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 54

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 54

Asn Tyr Tyr Met Tyr

1 5

<210> 55

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 55

Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 56

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 56

Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 57

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 57

Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 58

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 58

Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 59

Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 60

<211> 435

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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hPD-1.08A重链可变区序列"

<400> 60

atgrgatgga gctgtatcat kctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60

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gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 300

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aactacgacg ggggctttga ctactggggc caaggcacta ctctcacagt ctcctcagcc 420

aaaacgacac cccca 435

<210> 61

<211> 453

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A轻链可变区序列"

<400> 61

atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60

gacattgtgc tgacacagtc tcctacttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 120

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caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctttc ttgcatccaa cctagagtct 240

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300

cctgtggagg aggaggacgc tgcaacctat tattgtcagc acagttggga gcttccgctc 360

acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420

atcttcccac catccagtaa gcttgggaag ggc 453

<210> 62

<211> 464

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A重链可变区序列"

<400> 62

atgraatgca gctgggttat yctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagttgtcc 120

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccaac tactatatgt actgggtgaa gcagaggcct 180

ggacaaggcc ttgagtggat tggggggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat 240

gagaagttca agaacaaggc cacactgact gtagacagtt cctccagcac aacctacatg 300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtacaag aagggattat 360

aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcagcc 420

aaaacgacac ccccatccgt ytatcccbtg gcccctggaa gctt 464

<210> 63

<211> 438

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A轻链可变区序列"

<400> 63

atggagwcag acacactsct gytatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggc 60

gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctgggaca gagggccgcc 120

atctcatgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtac 180

caacagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

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cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga ccttccgctc 360

acgttcggta ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420

atcttcccac catccagt 438

<210> 64

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A重链可变区序列"

<400> 64

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Leu Tyr Trp Met Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys

115 120

<210> 65

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A轻链可变区序列"

<400> 65

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Phe Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 66

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A重链可变区序列"

<400> 66

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Ser Ser Ser Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys

115 120

<210> 67

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A轻链可变区序列"

<400> 67

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Ala Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 68

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A轻链CDR1序列"

<400> 68

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 69

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A轻链CDR2序列"

<400> 69

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 70

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1-08A轻链CDR3序列"

<400> 70

Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 71

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A重链CDR1序列"

<400> 71

Ser Tyr Tyr Leu Tyr

1 5

<210> 72

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A重链CDR2序列"

<400> 72

Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 73

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.08A重链CDR3序列"

<400> 73

Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 74

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A轻链CDR1序列"

<400> 74

Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 75

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A轻链CDR2序列"

<400> 75

Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser

1 5

<210> 76

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A轻链CDR3序列"

<400> 76

Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 77

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A重链CDR1序列"

<400> 77

Asn Tyr Tyr Met Tyr

1 5

<210> 78

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A重链CDR2序列"

<400> 78

Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 79

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

hPD-1.09A重链CDR3序列"

<400> 79

Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 80

<211> 417

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

109A-H重链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 80

atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcac caacaggagc ccactcccaa 60

gtgcagctgg tgcagtctgg agttgaagtg aagaagcccg gggcctcagt gaaggtctcc 120

tgcaaggctt ctggctacac ctttaccaac tactatatgt actgggtgcg acaggcccct 180

ggacaagggc ttgagtggat gggagggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat 240

gagaagttca agaacagagt caccttgacc acagactcat ccacgaccac agcctacatg 300

gaactgaaga gcctgcaatt tgacgacacg gccgtttatt actgtgcgag aagggattat 360

aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caagggacca cggtcaccgt ctcgagc 417

<210> 81

<211> 417

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

密码子优化的109A-H重链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 81

atggactgga cctggtctat cctgttcctg gtggccgctc ctaccggcgc tcactcccag 60

gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc 120

tgcaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggctccc 180

ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac 240

gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccaccac cgcctacatg 300

gagctgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac 360

cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctcc 417

<210> 82

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

密码子优化的409A-H重链全长序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 82

atggccgtgc tgggcctgct gttctgcctg gtgaccttcc cttcctgcgt gctgtcccag 60

gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc 120

tgtaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggcccca 180

ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac 240

gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccacaac cgcctacatg 300

gaactgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac 360

cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctccgct 420

agcaccaagg gcccttccgt gttccctctg gccccttgct cccggtccac ctccgagtcc 480

accgccgctc tgggctgtct ggtgaaggac tacttccctg agcctgtgac cgtgagctgg 540

aactctggcg ccctgacctc cggcgtgcac accttccctg ccgtgctgca gtcctccggc 600

ctgtactccc tgtcctccgt ggtgaccgtg ccttcctcct ccctgggcac caagacctac 660

acctgcaacg tggaccacaa gccttccaac accaaggtgg acaagcgggt ggagtccaag 720

tacggccctc cttgccctcc ctgccctgcc cctgagttcc tgggcggacc ctccgtgttc 780

ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc ggacccctga ggtgacctgc 840

gtggtggtgg acgtgtccca ggaagatcct gaggtccagt tcaattggta cgtggatggc 900

gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcct cgggaggaac agttcaactc cacctaccgg 960

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga atacaagtgc 1020

aaggtcagca acaagggcct gccctcctcc atcgagaaaa ccatctccaa ggccaagggc 1080

cagcctcgcg agcctcaggt gtacaccctg cctcctagcc aggaagagat gaccaagaat 1140

caggtgtccc tgacatgcct ggtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggagtgg 1200

gagagcaacg gccagccaga gaacaactac aagaccaccc ctcctgtgct ggactccgac 1260

ggctccttct tcctgtactc caggctgacc gtggacaagt cccggtggca ggaaggcaac 1320

gtcttttcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1380

tccctgtctc tgggcaag 1398

<210> 83

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-11轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(60)

<400> 83

atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtat 180

caacagaaac ctggccaggc tcccaggctc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggcgtcccag ccaggttcag tggtagtggg tctgggacag acttcactct caccatcagc 300

agcctagagc ctgaagattt tgcagtttat tactgtcagc acagcaggga ccttccgctc 360

acgttcggcg gagggaccaa agtggagatc aaa 393

<210> 84

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-16轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(60)

<400> 84

atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120

atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtac 180

ctccagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 300

agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc 360

acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa 393

<210> 85

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-17轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(60)

<400> 85

atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg 60

gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120

atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtat 180

ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggagtcccag acaggttcag tggcagtggg tcaggcactg ctttcacact gaaaatcagc 300

agggtggagg ctgaggatgt tggactttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc 360

acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa 393

<210> 86

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

密码子优化的K09A-L-11轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 86

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag 60

atcgtgctga cccagtcccc tgccaccctg tccctgagcc ctggcgagcg ggctaccctg 120

agctgcagag cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatcag 180

cagaagccag gccaggcccc tcggctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgccc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc 300

ctggagcctg aggacttcgc cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

tttggcggcg gaacaaaggt ggagatcaag 390

<210> 87

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

密码子优化的K09A-L-16轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 87

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag 60

atcgtgctga cccagtcccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc 120

tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg 180

cagaagcctg gccagtcccc ccagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgacc ggttctccgg ctccggcagc ggcaccgact tcaccctgaa gatctcccgg 300

gtggaggccg aggacgtggg cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag 390

<210> 88

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

密码子优化的K09A-L-17轻链可变区序列"

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(57)

<400> 88

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgac 60

atcgtgatga cccagacccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc 120

tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg 180

cagaagcctg gccagtcccc tcagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgacc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgctt ttaccctgaa gatctccaga 300

gtggaggccg aggacgtggg cctgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag 390

<210> 89

<211> 139

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

109A-H重链可变区序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 89

Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 90

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

409A-H重链全长序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 90

Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys

1 5 10 15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Gly Lys

465

<210> 91

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-11轻链可变区序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 91

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 92

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-16轻链可变区序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 92

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 93

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-17轻链可变区序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 93

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 94

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

109A-H重链全长序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

<223> /note="信号肽"

<400> 94

Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys

1 5 10 15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

210 215 220

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

225 230 235 240

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

245 250 255

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

340 345 350

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460

Leu Ser Pro Gly Lys

465

<210> 95

<211> 237

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-11轻链全长序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

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<400> 95

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln

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Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<211> 237

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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K09A-L-16轻链全长序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

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Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

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Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

165 170 175

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180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

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Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 97

<211> 237

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

K09A-L-17轻链全长序列"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(19)

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<400> 97

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

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Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

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Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

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Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln

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180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 98

<211> 440

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 98

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser

115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys

180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

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210 215 220

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Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

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260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 99

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 99

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

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115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 100

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 100

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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100 105 110

Ser

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 101

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

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<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 102

Asn Ser Gly Met His

1 5

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 103

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

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<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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肽"

<400> 104

Asn Asp Asp Tyr

1

<210> 105

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 105

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 106

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 106

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 107

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

肽"

<400> 107

Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr

1 5

<210> 108

<211> 131

<212> PRT

<213> 人类

<400> 108

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Asp Ser Arg Gly Tyr Ser Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr

100 105 110

Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 109

<211> 113

<212> PRT

<213> 人类

<400> 109

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Pro

85 90 95

Trp Ala Ser Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr

<210> 110

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 110

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asp Tyr Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met

115 120 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 111

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 111

Met Glu Ser Gln Ile Gln Val Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Leu Ser

1 5 10 15

Gly Val Asp Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp

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Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser

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Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr

100 105 110

Ser Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 112

<211> 136

<212> PRT

<213> 人类

<400> 112

Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly Val Gln Cys

1 5 10 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

20 25 30

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

35 40 45

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

50 55 60

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

65 70 75 80

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

85 90 95

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

100 105 110

Ala Arg Gly Leu Thr Gly Ala Thr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 113

<211> 128

<212> PRT

<213> 人类

<400> 113

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Lys Ala Thr Gly Val Pro Ala

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser

100 105 110

Lys Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly

115 120 125

<210> 114

<211> 139

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 114

Met Asp Phe Gly Leu Ser Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Ser

1 5 10 15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe

35 40 45

Pro Ser His Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Leu Val Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro

65 70 75 80

Asp Thr Met Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

85 90 95

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 115

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /note="人工序列的描述：合成的

多肽"

<400> 115

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser

35 40 45

Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

65 70 75 80

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

100 105 110

Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val

115 120 125

Glu Ile Lys

130

Claims

1.在有需要的人中治疗癌症的方法，包括向人给药:

治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；和

治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQID NO:56的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

2.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

3.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

4.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

5.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

6.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

7.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQID NO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

8.权利要求1所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

9.权利要求1至8任一项所述的方法，其中所述癌症为实体瘤。

10.权利要求1至9任一项所述的方法，其中所述癌症选自：黑素瘤、肺癌、肾癌、乳腺癌、头颈癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌和胃癌。

11.权利要求1至10任一项所述的方法，其中所述结合至OX40的单克隆抗体和所述结合至人PD-1的单克隆抗体同时给药。

12.权利要求1至10任一项所述的方法，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体和所述结合至人PD-1的单克隆抗体以任何顺序相继给药。

13.权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述结合至OX40的单克隆抗体和/或结合至人PD-1的单克隆抗体被静脉内给药。

14.权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述结合至OX40的单克隆抗体和/或所述结合至人PD-1的单克隆抗体被瘤内给药。

15.权利要求1至14任一项所述的方法，其中所述结合至OX40的单克隆抗体以约0.1mg/kg至约10mg/kg的剂量给药。

16.权利要求1至15所述的方法，其中所述结合至OX40的单克隆抗体以选自以下的频率给药：每天一次，每周一次，每两周一次(Q2W)，和每三周一次(Q3W)。

17.权利要求1至16任一项所述的方法，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体以约200mg的剂量给药。

18.权利要求1至17任一项所述的方法，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体以每三周一次给药。

19.在患有癌症的人中减小肿瘤大小的方法，包括向所述人给药：治疗有效量的结合至人OX40的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；和治疗有效量的结合至人PD-1的单克隆抗体，其包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

20.权利要求19所述的方法，其中所述人根据RECIST 1.1版显示完全反应或部分反应。

21.权利要求1-10或12-20任一项所述的方法，其中在静脉内给药结合至人OX40的单克隆抗体结束后的至少1小时且不超过2小时开始向人静脉内给药所述结合至人PD-1的单克隆抗体。

22.药物组合物或试剂盒。其包含

23.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

24.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ IDNO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

25.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，该VL区包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

26.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

27.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

28.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQID NO:49的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

29.权利要求22的药物组合物或试剂盒，其中所述结合至人OX40的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，且所述结合至人PD-1的单克隆抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

30.组合试剂盒，其包含根据权利要求22至29任一项的药物组合物或试剂盒以及一种或多种药学可接受的载体。

31.权利要求13至15任一项的药物组合物或试剂盒在制备用于治疗癌症的药物中的用途。