CN108025073A

CN108025073A - Ox40抗体和tlr4调节子的组合及其用途

Info

Publication number: CN108025073A
Application number: CN201680054466.7A
Authority: CN
Inventors: C.J.弗朗西斯; 高华欣; N.雅纳曼德拉; 李玉锋
Original assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Current assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Priority date: 2015-08-06
Filing date: 2016-06-03
Publication date: 2018-05-11
Also published as: US20170275371A1; ZA201800468B; JP2021121622A; AU2016304401B2; HK1249410A1; CL2018000303A1; AU2016304401A1; US20190338042A1; CR20180080A; EP3331560A1; EA201890457A1; DOP2018000034A; CO2018001238A2; MX2018001515A; BR112018002530A2; IL257067A; JP2018525378A; WO2017021791A1; CA2994910A1; PH12018500254A1

Abstract

本发明公开了OX40调节剂和TLR4调节子的组合、其药物组合物、其用途和治疗方法，包括给药给药所述组合，包括用于癌症。

Description

OX40抗体和TLR4调节子的组合及其用途

技术领域

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法，以及涉及有效用于这种治疗的组合。特别是，本发明涉及抗OX40抗原结合蛋白(ABP)和一种或多种TLR4调节子的组合。

背景技术

对过度增生疾病包括癌症的有效治疗一直是肿瘤学领域的目标。一般而言，癌症由控制细胞分裂、分化和细胞凋亡死亡的正常过程中的失调而产生，且其特征为恶性细胞的增殖，其具有无限生长、局部扩张和全身转移的潜力。正常过程的失调包括信号转导途径的异常，以及对与正常细胞中所发现的那些不同的因子的反应。

免疫疗法为治疗过度增生疾病的方法之一。科学家和临床医生在各种类型的癌症免疫疗法的发展上已遇到的主要障碍为打破自体抗原(癌症)的耐受性，以产生强大的抗肿瘤反应，使肿瘤消退。与传统的开发靶向肿瘤的小分子与大分子药剂不同，癌症免疫疗法靶向免疫系统的细胞，其具有会产生效应细胞记忆池的潜力，以诱发更持久的效应并使复发最小化。

OX40为免疫系统的多种过程中所涉及的共刺激分子。结合至OX40受体并调节OX40信号传递的抗原结合蛋白与抗体是本领域已知的，并已公开作为用于如癌症的免疫疗法。

氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯(Aminoalkyl glucosaminide phosphate，AGP)为Toll样受体4(TLR4)的合成配体。AGP已知可使用作疫苗佐剂且用于刺激细胞因子产生、活化巨噬细胞、促进先天免疫反应，和增加在免疫化动物中产生的抗体。

尽管最近在癌症治疗上已有许多进展，但仍需要更有效和/或增强的治疗患有癌症的个体的疗法。本发明的涉及用于增强抗肿瘤免疫性的组合疗法的组合与方法可解决此需求。

发明内容

本发明提供了抗OX40抗原结合蛋白(ABP)和一种或多种TLR4调节子的组合。还提供了使用本发明的组合物治疗人的癌症的方法，以及该组合用于治疗的用途，如治疗癌症。还提供了在需要癌症治疗的受试者(如人)中调节免疫应答的方法，包括向所述受试者给药有效量的所述组合，例如，所述组合在一种或多种药物组合物中。

在一个实施方案中，所述OX40抗原结合蛋白为WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日中公开的。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有90％同一性的CDR。在另一实施方案中所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的抗体的VH、VL或二者，或与公开的VH或VL序列具有90％同一性的VH或VL。

在另一实施方案中，OX40抗原结合蛋白公开于WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有90％同一性的CDR。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的VH、VL或二者，或具有与公开的VH或VL序列90％同一性的VH或VL。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含本发明的图中所示的CDR或VH或VL序列、或与其具有90％同一性的序列的一种或多种。

在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体包含106-222抗体的CDR抗体，例如，如本发明图6-7所示，例如，具有如图6所公开的SEQ ID NO 1、2和3的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和例如分别具有SEQ ID NO 7、8和9的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的106-222、Hu106或Hu106-222抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含本发明图6-7所示的106-222抗体的VH和VL区，例如，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH和如图7所示具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体包含具有本发明图6中SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH，和具有本发明图7中SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的Hu106-222抗体或106-222抗体或Hu106抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体为106-222，Hu106-222或Hu106，例如，WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日所公开的。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含119-122抗体的CDR，例如，如本发明图10-11所示，例如，分别具有SEQ ID NO 13、14和15的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含具有本发明图10中的SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH，和具有本发明图11中的SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VL。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体为119-222或Hu119或Hu119-222抗体，例如，如WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日所公开。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含119-43-1抗体的CDR，例如，如本发明图14-15所示。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的CDR。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含图14-17所示的119-43-1抗体的VH区之一和VL区之一。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的VH和VL区。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体为本发明图14-17公开的119-43-1或119-43-1嵌合体(chimeric)。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体如WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日公开。在其它实施方案中，该段落所述的ABP或抗体的任一个是人源化的。在其它实施方案中，该段落所述的ABP或抗体的任一个被设计为制备人源化抗体。在另一实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。

在另一实施方案中，本发明任何抗OX40ABP或抗体的任何小鼠或嵌合序列被设计为制备人源化抗体。

在一个实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO.7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ IDNO.9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.15的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO.19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQID NO.21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：包含SEQ ID NO:1或13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:2或14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；和/或包含SEQ ID NO:3或15的氨基酸序列的重链可变区CDR3，或与其具有90％同一性的重链可变区CDR。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：包含SEQ ID NO:7或19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:8或20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和/或包含SEQ ID NO:9或21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，或与其具有90％同一性的重链可变区。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：包含SEQ ID NO:10、11、22或23的氨基酸序列的轻链可变区(“VL”)，或与SEQ ID NO:10、11、22或23的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含：包含SEQID NO:4、5、16和17的氨基酸序列的重链可变区(“VH”)，或与SEQ ID NO:4、5、16和17的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含SEQ ID NO:5的可变重链序列和SEQ ID NO:11的可变轻链序列，或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含SEQ ID NO:17的可变重链序列和SEQ ID NO:23的可变轻链序列或与其具有90％同一性的序列。

在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含SEQ ID NO:12或24的核酸序列编码的可变轻链，或与SEQ ID NO:12或24的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变轻链。在另一实施方案中，本发明的抗OX40ABP或抗体包含SEQ ID NO:6或18的核酸序列编码的可变重链，或与SEQ ID NO:6或18的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变重链。

本发明还提供了单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含可变轻链，该可变轻链包含SEQ ID NO:10或22的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10或22的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。还提供了包含可变重链的单克隆抗体，该可变重链包含SEQ ID NO:4或16的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4或16的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

本发明另一实施方案包括以下序列表公开的CDR、VH区和VL区、以及抗体和编码其的核酸。

附图简述

图1A为显示TLR4激动剂(CRX-527)在CT-26同系基因型(syngeneic)小鼠的结肠癌模型中的剂量依赖性抗肿瘤活性的图(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。结果为10只动物的平均值。

图1B为显示大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中的剂量依赖性抗肿瘤活性的图(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。其结果为10只动物的平均值；图1A的对照治疗与图1B相同。

图2为显示大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)、5μg的TLR4激动剂(CRX-527)、及两者的组合在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中的抗肿瘤活性的图(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。结果为10只动物的平均值。

图3为大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)、25μg的TLR4激动剂(CRX-527)、及两者的组合在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中的剂量依赖性抗肿瘤活性的图，其测定38天(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。结果为10只动物的平均值；图2的对照治疗代表与图3中的那些相同的动物。

图4A-4F为对照抗体(IgG)、大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)、5或25μg的TLR4激动剂(CRX-527)、及OX86与CRX-527的组合在一组CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中的各小鼠的剂量依赖性抗肿瘤活性的图，其测定42天(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。以图4A-4F中研究所残留的小鼠的平均组别肿瘤体积绘制图2-3中的图。

图5为显示4、20、或100μg的TLR4激动剂(CRX-601)在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中的剂量依赖性抗肿瘤活性的图(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。

图6-12显示本发明ABP和抗体的序列，如CDR及VH与VL序列。

图13-17显示本发明ABP和抗体的序列，如CDR及VH与VL序列。

图18为显示瘤内给药的TLR4激动剂CRX-601在CT-26同系基因型小鼠的肿瘤模型中的剂量依赖性抗肿瘤活性的图(以随时间对肿瘤的生长抑制进行测定)。

图19为显示在CT-26同系基因型小鼠的肿瘤模型中用瘤内给药的TLR4激动剂CRX-601治疗的小鼠存活曲线的图(*p-值≤0.05)。

图20为显示在CT-26同系基因型小鼠的肿瘤模型中的TLR4激动剂CRX-601的剂量依赖性抗肿瘤活性(通过随时间的肿瘤生长抑制所测定)的图(*p-值≤0.05)。

图21为显示在CT-26同系基因型小鼠的肿瘤模型中用静脉内给药的TLR4激动剂CRX-601治疗的小鼠的存活曲线的图(*p-值≤0.05)。

图22为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40抗体克隆OX-86的抗肿瘤活性(通过随时间对肿瘤的生长抑制所测定)、25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40抗体克隆OX-86(其通过腹腔内注射，每周二次，共给药6次)的抗肿瘤活性(通过随时间对肿瘤的生长抑制所测定)，10μg或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过静脉内给药，1x/周，共给药3次)以及二者的组合的抗肿瘤活性的图(*p-值≤0.05)。

图23为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)通过每周腹腔内注射二次共给药6次、用10μg或25μg的TLR4激动剂CRX-601通过静脉内给药1x/周共给药3次、和二者的组合所治疗的小鼠的存活曲线的图(*p-值≤0.05)。

图24为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗(克隆OX-86)(其通过腹腔内注射，每周二次，共给药6次)，或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过静脉内给药，1x/周，共给药3次)，和二者的组合的抗肿瘤活性(如通过随时间的肿瘤生长抑制测量)的图(*p-值≤0.05)。

图25显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)通过每周腹腔内注射二次共给药6次，或用25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601通过1x/周静脉内给药共给药3次，和二者的组合来治疗的小鼠的存活曲线(*p-值≤0.05)。

图26A-C为显示在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中在给药8天后测量的用10μg TLR4激动剂CRX-601、25μg大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)和二者的组合治疗的小鼠中白细胞和免疫活化增加的图。

图27A-B为显示在CT-26同系基因型小鼠的结肠癌模型中在给药1天和8天后测量的用10μg的TLR4激动剂CRX-601、大鼠的抗小鼠OX40R受体抗体(克隆OX-86)、和二者的组合治疗的小鼠中免疫活化细胞因子TNFα(A)和IL-12p70(B)的增加的图。

图28为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(其通过腹腔内注射，每周二次，共给药6次)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过静脉内给药，1x/周，共给药3次)、和二者的组合的抗肿瘤活性(通过随时间的对肿瘤的生长抑制所测定)的图。(对于CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图29为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(其通过腹腔内注射，每周二次，共给药6次)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过瘤内给药，1x/周，共给药3次)、和二者的组合的抗肿瘤活性(通过随时间对肿瘤的生长抑制所测定)的图。(对于CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图30为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40抗体(克隆OX-86)通过每周腹腔内注射二次共给药6次、或用25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601通过1x/周的静脉内给药共给药3次、和二者的组合所治疗的小鼠的存活曲线的图。(对于CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图31为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)通过每周腹腔内注射二次共给药6次、或用25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601通过1x/周的瘤内给药共给药3次、和二者的组合所治疗的小鼠的存活曲线的图。(对于CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图32为显示在研究6中CT-26肿瘤对无肿瘤小鼠再攻击的图。首次给药后68天，用CT-26肿瘤细胞再攻击无肿瘤小鼠。天然的对照小鼠也包括在内。尽管在天然对照小鼠中肿瘤如预期生长，但在治疗组中肿瘤被排斥且无肿瘤生长。

图33为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(其通过腹腔内注射，每周二次，共给药6次)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过静脉内给药，1x/周，共给药3次)、和二者的组合的抗肿瘤活性(通过随时间对肿瘤的生长抑制所测定)的图(对于静脉内给药的CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图34为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(其通过腹腔内注射给药，每周二次，共给药6次)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(其通过瘤内给药，1x/周，共给药3次)、和二者的组合的抗肿瘤活性(通过随时间对肿瘤的生长抑制所测定)的图。(对于瘤内给药的CRX-601使用DOPC/CHOL脂质体制剂)(*p-值<0.05)。

图35为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)每周腹腔内注射二次共给药6次、或用25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601进行1x/周的静脉内给药共给药3次、和二者的组合所治疗的小鼠的存活曲线的图。(对于静脉内给药的CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图36为显示在CT-26同系基因型小鼠模型中用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)通过每周腹腔内注射二次共给药6次、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601通过1x/周的静脉内给药共给药3次、和二者的组合所治疗的小鼠的存活曲线的图。(对于静脉内给药的CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体)(*p-值<0.05)。

图37为显示在研究7中CT-26肿瘤对无肿瘤小鼠进行再攻击的图。首次给药后80天，以标记的小鼠数量对无肿瘤小鼠用CT-26肿瘤细胞再攻击。天然的对照小鼠也包括在内。尽管在天然对照小鼠中肿瘤如预期生长，但在治疗组中肿瘤被排斥且无肿瘤生长。

图38为显示组7的各小鼠的肿瘤生长的图，其中：用25μg/小鼠的CRX-601(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)通过每周静脉内给药一次共给药3次+用25μg/小鼠的OX86通过每周腹膜内给药二次共给药6次。

图39为显示组8的各小鼠的肿瘤生长的图，其中：用25μg/小鼠的CRX-601(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)通过每周在左侧腹肿瘤中瘤内给药一次共给药3次+用25μg/小鼠的OX86通过每周腹膜内给药二次共给药6次。

图40为显示组12的各小鼠的肿瘤生长的图，其中：用25μg/小鼠的CRX-601(在DOPC/CHOL脂质体中)通过每周在左侧腹肿瘤中瘤内给药一次共给药3次+用25μg/小鼠的OX86通过每周腹膜内给药二次共给药6次。

图4A-4D为显示研究8中所有治疗组的存活曲线的图。到第60天在研究中剩余的小鼠完全无肿瘤。

图42A-C为显示在体外细胞培养24小时的人CD4+T细胞(A)、树突状细胞(B)和单核细胞(C)中以一系列浓度范围内(0.01–1000ng/ml)的CRX601治疗所诱导的OX40表达上调的图。

发明详述

组合物和组合

免疫系统功能的改善是癌症免疫治疗的一个目标。尽管不受理论束缚，但是认为为了激活免疫系统并且有效地引起肿瘤的消退或消除，在免疫系统的各个部分之间以及在肿瘤床之间必须有有效的交流(cross-talk)。杀肿瘤作用取决于一个或多个步骤，例如，未成熟树突细胞摄取抗原和在引流淋巴结中由成熟树突细胞经由MHC I和II分别向初始CD8(细胞毒性)和CD4(辅助)淋巴细胞呈递加工的抗原。初始T细胞表达与抗原呈递细胞(APC)如树突细胞上的B7家族的共刺激分子结合的分子，如CTLA-4和CD28。为了在免疫监视过程中保持T细胞受检测，APC上的B7优先结合T淋巴细胞上的抑制性分子CTLA-4。然而，当T细胞受体(TCR)与I类或II类MHC受体通过APC上的同源肽呈递相接合时，共刺激分子与CTLA-4脱离，并且反而与较低亲和力的刺激性分子CD28结合，导致T细胞活化和增殖。这种扩大的被诱导的T淋巴细胞群体在其接近远处肿瘤部位时保留了呈递给它们的抗原的记忆。在遇到携带同源抗原的肿瘤细胞时，它们通过细胞溶解介质如粒酶B和穿孔素消除肿瘤。这种显然简单化的事件顺序高度依赖于几种细胞因子、共刺激分子和检查点调节剂来激活和分化这些被诱导的T淋巴细胞成为可以消除肿瘤的细胞记忆池。

因此，一种新兴的免疫治疗策略为靶向T细胞共刺激分子，如OX40。OX40(如hOX40或hOX40R)为肿瘤坏死因子受体家族的成员，其尤其在活化的CD4与CD8T细胞中表达。其功能之一为这些细胞的分化与长期存活。OX40的配体(OX40L)由经活化的抗原呈递细胞表达。在一个实施方案中，本发明的ABP和抗体调节OX40并促进T细胞的生长和/或分化，并增加长期记忆T-细胞群，如以与OX40L重叠的机理，通过“接合至”OX40。因此，在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体结合并接合至OX40。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体调节OX40。在另一实施方案中，本发明ABP和抗体通过模拟OX40L而调节OX40。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体为激动剂抗体。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体调节OX40，并导致T细胞增殖。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体调节OX40，并改善、扩大、加强或增加CD4T细胞的增殖。在另一实施方案中，本发明ABP和抗体改善、扩大、加强或增加CD8T细胞的增殖。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体改善、扩大、加强或增加CD4与CD8T细胞的增殖。在另一实施方案中，本发明ABP和抗体增进T细胞如CD4或CD8T细胞、或CD4与CD8T细胞二者的功能。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体增强效应T细胞功能。在另一实施方案中，本发明的ABP和抗体改善、扩大、加强或增加CD8T细胞的长期存活。在另一实施方案中，前述效应的任一者皆在肿瘤微环境下发生。

同样重要的是在肿瘤位点处通过T调节细胞(Treg)以及肿瘤本身产生的媒介物(如转化生长因子(TGF-β)与白介素-10(IL-10))阻断潜在的强免疫抑制反应。癌症的重要免疫致病机制可涉及Treg，其发现于肿瘤床与发炎位置。一般而言，Treg细胞天然发生于循环系统，并即使是在警觉状态、在遇到并消除外部病原体后也可帮助免疫系统回复静默。Treg细胞可帮助维持自体抗原的耐受性，且具有天然抑制性功能，且它们表型表征为CD4+、CD25+、FOXP3+细胞。为了破坏耐受性以有效治疗某些癌症，治疗的一种模式为优先在肿瘤位点消除Treg。与具有较差免疫原性的肿瘤相比较，靶向并消除Treg在免疫原性的肿瘤上能更成功地导致抗肿瘤反应。许多肿瘤会分泌细胞因子，如TGF-β，其可通过导致前体CD4+25+细胞获得FOXP3+表型与Treg那样的功能而阻碍免疫应答。

本发明所用的“调节”，例如在关于受体或其他靶标时，是指改变该受体的任何天然或已有的功能，例如其是指影响天然或人造配体与该受体或靶标的结合；其包括启动任何部分或全部的构象变化或通过受体或靶标进行信号传递，还包括防止该受体或靶标与其天然或人造配体的部分或完全结合。在膜结合受体或靶标的情况下还包括，与其自然或未改变的状态相比较，受体或靶标与膜内其他蛋白或分子作用方式改变，或在膜隔室内的任何定位(或与其他分子共定位)的改变。因此，调节子为调节靶标或受体的化合物或配体或分子。“调节”包括激动(agonizing)如信号传递，以及拮抗或阻断在未改变或未调节状态时发生的信号传递或与配体或化合物或分子相互作用。因此，调节子可为激动剂或拮抗剂。此外，本领域技术人员应了解到并非所有调节子皆对一种靶标或受体具有绝对选择性，但仍被视为该靶标或受体的调节子；例如，TLR4调节子也可接合至另一TLR，但仍被视为TLR4调节子。其他调节子已知具有多重特异性，如TLR7/8调节子，其调节TLR7与TLR8两者。具有此已知的双重或多重特异性的分子被认为是其靶标的各自的调节子；即，TLR7/8调节子为本发明使用的TLR7调节子，类似地TLR7/8调节子也为本发明使用的TLR8调节子。

靶标或受体的“激动剂”为模拟与该靶标或受体相互作用的天然配体或分子的一种或多种功能的分子或化合物或配体，并包括引发经由该受体的一个或多个信号传递事件、模拟天然配体的一种或多种功能、启动一个或多个部分或完全的构象变化，其可见于经由该受体的已知的功能或信号传递中。

因此，在一个实施方案中，该OX40ABP或抗体会抑制Treg细胞对于其他T细胞的抑制作用，如在肿瘤环境下。

越来越多的证据表明肿瘤中Treg与T效应细胞的比例与抗肿瘤反应相关。因此，在一个实施方案中，本发明的OX40ABP或抗体调节OX40，以扩增T效应子(effector)数目与功能，并抑制Treg功能。

增强、扩增、增进、增加或者改变OX40的抗肿瘤作用为本发明的目标。本发明描述了本发明的抗OX40ABP或抗体与另一化合物例如本发明所述的TLR调节子的组合。

因此，本发明所用的术语“本发明的组合”是指包含抗OX40ABP或抗体与TLR4调节子例如AGP的组合，如本发明所述，其各自可分开或同时给药。

本发明所用的术语"癌症"、"新生物"与"肿瘤"可互相交换使用，且可为单一或复数形式，是指已经过导致异常或无调控的生长或过度增殖的恶性转化或细胞变化的细胞。此种变化或恶性转化通常会使此类细胞对宿主有机体有致病性，因此也预期包括会或可能会变成致病性且需要或可受益于干预的前期癌变或癌前细胞。原发性癌细胞(即，从恶性转化部位附近取得的细胞)可通过已确认的技术例如组织学检查而与非癌细胞区分。本发明所用的癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，也包括衍生自癌细胞祖先(ancestor)的任何细胞。这包括转移性癌细胞、体外培养物和衍生自癌细胞的细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，"临床上可检测"的肿瘤为在肿瘤块的基础上可检测的那些；例如通过如CAT扫描、MR成像、X-射线、超声或触诊的操作，和/或因为由病患取得的样本中一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测的肿瘤。换言之，本发明的术语包括细胞、新生物、癌症和任何阶段的肿瘤，包括临床所指的癌前期、肿瘤、原位生长、以及晚期转移性生长。肿瘤可为血液肿瘤，例如血细胞肿瘤等，即为液体肿瘤。基于此类肿瘤的临床病症的具体实例包括白血病如慢性髓细胞性白血病或急性髓细胞性白血病；骨髓瘤如多发性骨髓瘤；淋巴瘤等。

如本发明所述，术语“药剂”是指在组织、系统、动物、哺乳动物、人类或其他受试者中产生期望的作用的物质。因此，术语“抗肿瘤剂”是指在组织、系统、动物、哺乳动物、人或其他受试者中产生抗肿瘤作用的物质。术语“药剂”可为单一化合物或二种或多种化合物的组合或组合物。

如本发明所使用的，术语“治疗”及其相关表述表示治疗性治疗。当涉及具体的病症时，治疗表示：(1)改善该病症或该病症的一个或多个生物学表现，(2)干扰(a)引起或造成该病症的生物学级联中的一种或多个点，或(b)该病症的一个或多个生物学表现，(3)减轻与该病症相关的一种或多种症状、作用或副作用或与该病症或其治疗相关的一种或多种症状、作用或副作用，或者(4)减缓该病症的进展，或者减缓该病症的一个或多个生物学表现。

如本发明所述，“预防”是指预防性给药以基本上减少病症或其生物学表现的可能性或严重性，或者以延缓这种病症或其生物学表现的发作。本领域技术人员将理解“预防”不是绝对术语。例如，当受试者被认为处于患癌症的高风险时，例如当受试者具有强癌症家族史时或者当受试者已经暴露于致癌物质时，预防性治疗是合适的。

如本发明所使用的，术语“有效量”表示引发例如研究者或临床医师所追求的组织、系统、动物或人的生物学或药学响应的药物或药剂的量。此外，术语“治疗有效量”表示，与没有接受该量的相应受试者相比，引起疾病、病症或副作用的改进治疗、治愈、预防或减轻的量，或者使疾病或病症的进展速率降低的量。该术语还包括在其范围内有效地增强正常生理功能的量。

如本发明所使用的，术语“有效量”表示引发例如研究者或临床医师所追求的组织、系统、动物或人的生物学或药学响应的药物或药用制剂的量。此外，术语“治疗有效量”表示，与没有接受该量的相应受试者相比，引起疾病、病症或副作用的改进治疗、治愈、预防或减轻的量，或者使疾病或病症的进展速率降低的量。该术语还包括在其范围内有效地增强正常生理功能的量。

如本发明所使用的，术语“组合”及其语法变形，是指同时给药或者以任何分开的顺序给药治疗有效量的化合物A(OX-40ABP)和化合物B(TLR4激动剂)或其可药用的盐。此外，化合物是否以相同的剂型给药是无关紧要的，例如一种化合物可以静脉内给药，另一种化合物可以瘤内给药。

如本发明所使用的，术语“组合试剂盒”，表示用于给药根据本发明的化合物A或其可药用盐和化合物B或其可药用盐的一种或多种药物组合物。当该两种化合物同时给药时，所述组合试剂盒可以在单份药物组合物中(如片剂)或在独立的药物组合物中含有化合物A或其可药用盐和化合物B或其可药用盐。当不同时给药所述化合物时，所述组合试剂盒将在独立的药物组合物中含有化合物A或其可药用盐和化合物B或其可药用盐。该组合试剂盒可以在单个包装中的分开的药物组合物中或在独立包装中的独立药物组合物中包含化合物A或其可药用盐和化合物B或其可药用盐。

在一个实施方案中，本发明提供包含下列成分的组合试剂盒：

化合物A或其可药用盐，以及可药用载体；和

化合物B或其可药用盐，以及可药用载体。

在另一实施方案中，该组合试剂盒包含下列成分：

化合物A或其可药用盐，以及可药用载体；和

化合物B或其可药用盐，以及可药用载体，

其中各成分以适于顺序、分开和/或同时给药的形式提供。

在一个实施方案中，该组合试剂盒包含：

第一容器，其包含化合物A或其可药用盐以及可药用载体；和

第二容器，其包含化合物B或其可药用盐以及可药用载体；和

用于容纳所述第一容器和第二容器的容器装置。

所述“组合试剂盒”还可以提供说明书，如剂量和给药说明书。这些剂量和给药说明书可以为向医师提供的种类，例如药物产品标签，或者它们可以为由医师提供的种类，如向患者提供的说明书。

如本发明所述，术语“化合物A²”是指人OX-40的单克隆抗体或其抗原结合部分。适当地，化合物A²是指具有如SEQ ID NO:5所示的重链可变区和如SEQ ID NO:11所示的轻链可变区的人源化单克隆抗体。

如本发明所述，术语“化合物B²”是指式I或式Ia的TLR4激动剂。适当地，化合物B²是指TLR4激动剂CRX-601。

适当地，本发明的组合“在规定的期间内”给药。

如本文所使用的术语“规定的期间(specified period)”及其语法变形，表示给药化合物A²和化合物B²中的一种以及给药化合物A²和化合物B²中的另一种之间的时间间隔。除非另有说明，规定的期间可以包括同时给药。除非另有说明，规定的期间是指在一天内给药化合物A²和化合物B²。

适当地，如果在“规定的期间”内给药所述化合物而不同时给药，它们均可以在彼此相隔约24小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约24小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约12小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约12小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约11小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约11小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约10小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约10小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约9小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约9小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约8小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约8小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约7小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约7小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约6小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约6小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约5小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约5小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约4小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约4小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约3小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约3小时；适当地，它们可以在彼此相隔约2小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约2小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约1小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约1小时。如本发明所使用的，化合物A²和化合物B²的给药相隔小于约45分钟被认为是同时给药。

适当地，当本发明的组合以一段“规定的期间”给药时，各化合物共同给药一段“持续时间”。

如本发明所使用的术语“持续时间”及其语法变形，表示本发明的两种化合物连续给药指定数目的天数。除非另有说明，连续的天数不必须是在治疗起点开始或治疗终点结束，它只需要在治疗过程中的某时间点出现连续的天数。

关于“规定的期间”给药：适当地，两种化合物在规定的期间内给药至少一天–在该情况中，所述持续时间为至少一天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续3天–在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续5天–在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续7天–在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续14天–在该情况中，所述持续时间为至少14天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续30天–在该情况中，所述持续时间为至少30天。

适当地，如果所述化合物不在“规定的期间内(during a specifiled period)”给药，那么它们就是顺序给药。如本发明所使用的术语“顺序给药”及其语法变形，表示每天给药一次化合物A²和化合物B²中的一种，连续两天或更多天，接着每天给药一次化合物A²和化合物B²中的另一种，连续两天或更多天。同样地，本发明还包括在顺序给药化合物A²和化合物B²中的一种以及给药化合物A²和化合物B²中的另一种之间所使用的休药期。如本发明所使用的，休药期为在顺序给药化合物A²和化合物B²中的一种之后和在给药化合物A²和化合物B²中的另一种之前不给药化合物A²也不给药化合物B²的间隔天数。休药期为选自以下的一段天数：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。

关于顺序给药(sequential administration)：适当地，给药化合物A²和化合物B²中的一种连续1至30天，接着是任选的休药期，接着给药化合物A²和化合物B²中的另一种连续1至30天。适当地，给药化合物A²和化合物B²中的一种连续1至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物A²和化合物B²中的另一种连续1至21天。适当地，给药化合物A²和化合物B²中的一种连续1至14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物A²和化合物B²中的另一种连续1至14天。适当地，给药化合物A²和化合物B²中的一种连续1至7天，接着是1至10天的休药期，接着给药化合物A²和化合物B²中的另一种连续1至7天。

适当地，在该顺序中化合物B²首先给药，接着是任选的休药期，接着给药化合物A²。适当地，给药化合物B²连续3至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物A²连续3至21天。适当地，给药化合物B²连续3至21天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物A²连续3至21天。适当地，给药化合物B²连续3至21天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物A²连续3至21天。适当地，给药化合物B²连续21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物A²连续14天。适当地，给药化合物B²连续14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物A²连续14天。适当地，给药化合物B²连续7天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物A²连续7天。适当地，给药化合物B²连续3天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物A²连续7天。适当地，给药化合物B²连续3天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物A²连续3天。

应当理解，“规定的期间”给药和“顺序”给药之后可以为重复给药(dosing)或者可以接着交替的给药方案，休药期可以在重复给药或交替的给药方案之前。

本发明的方法还可以与其他治疗癌症的治疗方法一起使用。

尽管对于治疗应用而言，治疗有效量的本发明的组合可以以粗化学品(rawchemical)给药，但是优选该组合以一种或多种药物组合物存在。因此，本发明还提供药物组合物，其包含化合物A²和/或化合物B²以及一种或多种可药用载体。本发明的组合如上文所述。所述载体在以下方面必须是可接受的：与制剂中其他成分相容，能够形成药用制剂以及对其接受者无害。根据本发明的其他方面，还提供了制备药物制剂的方法，该方法包括混合化合物A²和/或化合物B²与一种或多种可药用载体。如上文所示，所用药物组合中的这些要素可以存在于独立的药物组合物中，或者一起配制成一种药物制剂。

药物制剂可以以每单位剂量含有预定量活性成分的单位剂型存在。如本领域技术人员所已知的，每剂量的活性成分的量取决于所治疗的病症、给药途径和患者的年龄、体重和状况。优选的单位剂量的制剂为那些含有每日剂量或亚剂量或其合适部分的活性成分的单位剂量制剂。此外，这些药物制剂可以通过药物领域公知的任何方法制备。

化合物A²和化合物B²可以通过任何适合的途径给药。合适的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服(buccal)和舌下)、瘤内、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。可以理解优选途径可随着例如该组合的受试者的状况和所治疗的癌症而变化。还可以理解所施用的各个药物可以通过相同或不同的途径给药，化合物A²和化合物B²可以一起配制成药物组合物/制剂。

给药治疗有效量的本发明的组合(或治疗有效量的该组合的各组分)相对于单个的组分化合物是有利的，因为与单独给药治疗有效量的的组分化合物相比，该组合将会提供下列改进的性质中的一种或多种：i)与活性最大的单个药剂相比有更高的抗癌作用，ii)协同的或高度协同的抗癌活性，iii)提供增强的抗癌活性和减少的副作用的给药方案，iv)毒性作用减少，v)治疗窗口增加，或者vi)组分化合物中的一种或两种的生物利用度增加。

本发明进一步提供药物组合物，其包含一种或多种本发明的成分，以及一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。本发明的组合物可包含两种药物组合物，一种包含本发明的ABP或抗体，另一种包含TLR4调节子，每一种皆具有相同或不同的载体、稀释剂或赋形剂。该载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中其他成分相容、能够形成药用制剂、以及对其接受者无害。在一个实施方案中，该制剂可为水性或脂质体的。在一个实施方案中，该脂质体制剂可为DOPC/CHOL脂质体制剂。

本发明的组合的成分，以及包含这些成分的药物组合物，可以任何顺序以及不同途径给药；所述成分和包含这些的药物组合物可同时给药。

根据本发明的另一方面，提供一种制备药物组合物的方法，包括混合本发明组合中的成分与一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的成分可以任何适当途径给药。就某些成分而言，适当的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服和舌下)、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。优选途径可随着例如该组合的受试者的病症和所治疗的癌症而变化。各药剂可以通过相同或不同的途径给药，各成分可以一起配制或位于独立的药物组合物中。

在一个实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分静脉内给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分经瘤内给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分全身性给药，如静脉内，以及本发明组合中的一种或多种其它成分经瘤内给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的所有成分全身性给药，如静脉内。在另一实施方案中，本发明的组合中的所有成分经瘤内给药。在该实施方案的任一者中，如在此段中，本发明的各成分作为一种或多种药物组合物给药。

结合OX40的抗原结合蛋白和抗体

“抗原结合蛋白(ABP)”是指结合至抗原的蛋白，包括抗体或功能类似于抗体的工程化的分子。此替代抗体形式包括三链抗体、四链抗体、微型抗体和微抗体。也包括另一种支架，其中本发明任一分子的一个或多个CDR可被排列到适当的非免疫球蛋白支架或骨架上，如亲和体(affibody)、SpA支架、LDL受体A类结构域、avimer(参见如美国专利申请公开号2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301)或EGF结构域。ABP还包括此抗体或其他分子的抗原结合片段。此外，ABP可包含全长抗体形式的本发明的VH区、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位(biparatopic)分子或其等效物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)(当与适当轻链配对时)。ABP可包含抗体，其为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；或IgM；IgA、IgE或IgD或其经修饰的变体。可相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定结构域可为κ或λ恒定结构域。ABP也可为WO86/01533中所描述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区以及非免疫球蛋白区。

因此，本发明的ABP或抗OX40抗原结合蛋白为可结合至OX40的蛋白，且在一些实施方案中具有以下一种或多种功能：调节通过OX40的信号传递、调节OX40功能、激动OX40信号传递、刺激OX40功能，或共刺激OX40信号传递。美国专利9,006,399的实施例1公开了OX40结合试验。本领域技术人员应容易了解到，有多种其他已知试验可确定此类功能。

本发明所用的术语“抗体”是指具有抗原结合结构域、以及任选地具有免疫球蛋白-样结构域或其片段的分子，并包括单克隆(如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE，及其经修饰的变体)、重组、多克隆、嵌合、人源化、双互补位(biparatopic)、双特异性与异缀合(heteroconjugate)抗体，或封闭构象的多特异性抗体。“抗体”包括异种的、同种异体的、同源的，或它们的其它修饰形式。抗体可为经分离或经纯化的。抗体也可为重组的，即以重组方式制造；例如，与参考抗体具有90％同一性的抗体可通过使用本领域已知的重组分子生物学技术使特定残基突变而产生。因此，本发明抗体可包含本发明的重链可变区与轻链可变区，其可为天然抗体结构的形式，或为全长重组抗体、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位分子或其等效物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)的形式(当与适当轻链配对时)。该抗体可为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其经修饰的变体。可相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定结构域可为κ或λ恒定结构域。抗体也可为WO86/01533中所描述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合结构域，以及非免疫球蛋白结构域。

本领域技术人员将认识到本发明的ABP和抗体结合OX40的表位。ABP的表位为ABP所结合的其抗原的结构域。如果两种ABP各自竞争性地抑制(阻断)另一种与抗原的结合，则这两种ABP结合至相同或重叠的表位。即，于竞争性结合测试中测得，与缺乏竞争抗体的对照相比，1x、5x、10x、20x或100x过量的一种抗体抑制另一种的结合达至少50％、75％、90％或甚至99％(参见例如，Junghans等人,Cancer Res.50:1495，1990)。此外，如果抗原中基本上所有降低或消除与一种抗体的结合的氨基酸突变也会降低或消除与另一种抗体的结合，则两种抗体具有相同的表位。此外，相同的表位可包括“重叠的表位”，例如，如果一些降低或消除与一种抗体的结合的氨基酸突变也会降低或消除与另一种的结合。

结合强度对于本发明的ABP或抗体的给药和施用是重要的。在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体以高亲和力结合至OX40，优选人OX40。例如，当以测量时，所述抗体以1-1000nM或500nM或更少的亲和力、或200nM或更少的亲和力、或100nM或更少的亲和力、或50nM或更少的亲和力、或500pM或更少的亲和力、或400pM或更少的亲和力、或300pM或更少的亲和力结合至OX40，优选人OX40。在另一方面，当以测量时，所述抗体以约50nM至约200nM或约50nM至约150nM的亲和力结合至OX40，优选人OX40。在本发明一个方面，所述抗体以少于100nM的亲和力结合至OX40，优选人OX40。

在另一实施方案中，结合通过测量。亲和力为一种分子例如本发明的抗体，与另一种分子例如其靶抗原，在单一结合位点的结合强度。抗体与其靶点的结合亲和力可通过平衡法(例如，酶联免疫吸收剂测试(ELISA)或放射免疫测定法(RIA))、或动力学(例如，分析)测定。例如，本领域已知的方法可用于测量结合亲和力。

亲合力是两种分子在多个位点上彼此结合的强度的总和，例如考虑到相互作用的效价。

在一个方面，本发明的ABP或抗体与OX40(优选人OX40)相互作用的平衡解离常数(KD)为100nM或更少，10nM或更少，2nM或更少或1nM或更少。或者，KD可为5至10nM之间；或1至2nM。KD可为1pM至500pM；或500pM至1nM。技术人员将认识到KD数值越小，结合越强。KD的倒数(即1/KD)是单位为M^-1的平衡缔合常数(KA)。技术人员将认识到，KA数值越大，结合越强。

解离速率常数(kd)或“解离速率”描述了一方面为ABP或抗体且另一方面为OX40(优选人OX40)的复合物的稳定性，即，每秒衰减的复合物分数。例如，0.01s^-1的kd相当于每秒衰减1％的复合物。在一个实施方案中，解离速率常数(kd)为1x10^-3s^-1以下、1x10^-4s^-1以下、1x10^-5s^-1以下或1x10^-6s^-1以下。kd可为1x10^-5s^-1至1x10^-4s^-1；或1x10^-4s^-1至1x10^-3s^-1。

本发明的抗OX40ABP或抗体与参考抗体在例如结合OX40、OX40的表位或OX40的片段方面的竞争可以通过竞争性ELISA、FMAT或测定。在一方面，通过进行竞争测定。这种竞争有几个可能的原因：两种蛋白质可结合至相同或重叠的表位；可存在对结合的立体位阻；或第一种蛋白的结合可以诱导抗原中的构象变化，其阻止或减少了第二种蛋白的结合。

本发明使用的“结合片段”是指本发明的ABP或抗体的部分或片段，其包括抗原结合位点且能够结合本发明定义的OX40，例如但不限于能够结合至亲本或全长抗体的相同表位。

本发明的ABP和抗体的功能性片段在本发明的考虑之内。

因此，“结合片段”和“功能性片段”可为缺乏完整抗体的Fc片段的Fab和F(ab')2片段，其更快速地从循环中清除，且可具有比完整抗体更少的非特异性组织结合(Wahl等人，J.Nuc.Med.24:316-325(1983))。还包括Fv片段(Hochman等人，Biochemistry 12:1130-1135(1973)；Sharon等人，Biochemistry 15:1591-1594(1976))。这些不同片段使用常规技术如蛋白酶裂解或化学裂解制备(参见，例如，Rousseaux，等人，Meth.Enzymol.，121:663-69(1986))。

本发明所用的“功能性片段”是指本发明的ABP或抗体的部分或片段，其包括抗原结合位点且能够与亲本ABP或抗体结合相同的靶标，例如但不限于，结合相同的表位，并且还保留本发明描述的或本领域已知的一种或多种调节或其他功能。

由于本发明的ABP和抗体可以包含可为天然抗体的结构的形式的本发明的重链可变区和轻链可变区，所以功能性片段是保留了结合或如本发明所述的全长ABP或抗体的一种或多种功能的片段。因此，本发明的ABP或抗体的结合片段可包含VL或VH区、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双互补位分子的片段或其等同物(如scFV、双琏-、三琏-或四琏-抗体、Tandabs等)(当与适当的轻链配对时)。

本发明所用的术语“CDR”是指抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链CDR和三个轻链CDR(或CDR区)。

本领域技术人员应了解到，CDR序列有各种编号约定；Chothia(Chothia等人，(1989)Nature 342：877-883)、Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,4th Ed.,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))、AbM(University of Bath)与Contact(University College London)。可确定使用Kabat、Chothia、AbM与contact法的至少二者所得的最小重叠结构域，以提供“最小结合单位”。最小结合单位可为CDR的次部分。抗体的结构与蛋白质折叠是指其他被视为CDR序列的部分的残基，且可由技术人员所理解。应注意到，某些CDR定义会随着所使用的各个公开而不同。

除非另有所述和/或没有特定指出的序列，本发明提及的“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”，是指依据任何已知约定编号的氨基酸序列；此外，CDR是指可变轻链的“CDR1”、“CDR2”与“CDR3”，以及可变重链的“CDR1”、“CDR2”与“CDR3”。在一些实施方案中，编号约定为Kabat约定。

本发明所用的术语“CDR变体”是指已通过至少1个(例如1、2或3个)氨基酸的取代、缺失或添加而修饰的CDR，其中包含CDR变体的修饰的抗原结合蛋白基本上维持抗原结合蛋白在修饰前的生理特性。应了解到，可被修饰的各CDR可单独修饰或与另一CDR组合修饰。在一方面，该修饰为取代，尤其是保守取代，如表1所示。

表1

侧链	成员
		疏水	Met，Ala，Val，Leu，Ile
中性亲水	Cys，Ser，Thr
		酸性的	Asp，Glu
碱性	Asn，Gln，His，Lys，Arg
		影响链取向的残基	Gly，Pro
芳族	Trp，Tyr，Phe

例如，在变体CDR中，最小结合单位的氨基酸残基可以保持相同，但是包含作为Kabat或Chothia定义的一部分的CDR的侧翼残基可以被保守性氨基酸残基所替换。

包含如上所述的修饰的CDR或最小结合单位的此类抗原结合蛋白在本发明中可被称为“功能性CDR变体”或“功能性结合单位变体”。

该抗体可来自任何物种，或经修饰而适于给药至交叉物种。例如，来自小鼠抗体的CDR可被人源化以给药至人体。在任一实施方案中，该抗原结合蛋白可任选为人源化抗体。

“人源化抗体”是指具有衍生自非人供体免疫球蛋白的CDR的工程化抗体类型，该分子的其它免疫球蛋白衍生部分衍生自一种(或多种)人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支撑残基以保持结合亲和力(参见例如，Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA,86:10029-10032(1989),Hodgson等人，Bio/Technology,9:421(1991))。根据与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性，可以由常规数据库中选择合适的人受体抗体，例如数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库。特征在于与供体抗体的框架区同源性(基于氨基酸)的人抗体可适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区以用于插入供体CDR。可以类似的方式选择能够提供轻链恒定区或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，受体抗体的重链和轻链不需要来源于相同的受体抗体。现有技术描述了生产这种人源化抗体的几种方法-例如参见EP-A-0239400和EP-A-054951。

在另一实施方案中，所述人源化抗体具有人抗体恒定区，其为IgG。在另一实施方案中，所述IgG为上述任一个文献或专利公开中公开的序列。

对于核苷酸和氨基酸序列，术语“相同”或“同一性”表示当两个核酸或两个氨基酸序列在最佳对齐并与合适的插入或缺失比较时的同一性程度。

两个序列之间的百分比同一性是，考虑到为了两个序列的最佳对齐而需要引入的缺口的数量以及各缺口的长度，由序列共享的相同位点的数量的函数(即，％同一性＝相同位点的数量/位点的总数乘以100)。如下所述，可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定。

查询核酸序列和主题核酸序列之间的同一性百分比为“同一性”值，以百分比表示，其是在进行了成对BLASTN比对后，当主题核酸序列与查询核酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTN算法计算得到的。查询核酸序列和主题核酸序列之间的这种成对BLASTN比对是通过使用BLASTN算法的默认设置(可获自National Center for BiotechnologyInstitute网站)进行的，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询核酸序列可以由在本发明的一个或多个权利要求中定义的核酸序列来描述。

查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的同一性百分比为“同一性”值，以百分比表示，其是在进行了成对BLASTN比对后，当主题氨基酸序列与查询氨基酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTP算法计算得到的。查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的这种成对BLASTP比对是通过使用BLASTP算法的默认设置(可获自National Center forBiotechnology Institute网站)进行的，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询氨基酸序列可以由在本发明的一个或多个权利要求中定义的氨基酸序列来描述。

在本发明任一实施方案中，所述ABP或抗体可具有与所示或参考的序列具有100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、或90％同一性的任何一个或所有CDR、VH、VL，例如，本发明公开的SEQ ID NO定义的序列。

本发明中提供了结合人OX40受体的ABP和抗体(即抗OX40ABP和抗人OX40受体(hOX40R)抗体，在本发明中有时称为“抗OX40ABP或抗OX40抗体”和/或它们的其它变体)。这些抗体在治疗或预防急性或慢性疾病或其病理涉及OX40信号传导的病症中是有用的。在一方面，描述了结合至人OX40R且有效作为癌症治疗或疾病治疗(例如与另一化合物如TLR4调节子或TLR4激动剂组合)的抗原结合蛋白或分离的人抗体或该蛋白质或抗体的功能性片段。本发明公开的任何抗原结合蛋白或抗OX40抗体可用作药物。任何一种或多种抗原结合蛋白或抗OX40抗体可用于该方法或组合物中以治疗癌症，例如，本发明公开的那些癌症。

如本发明所述的分离的抗体与OX40结合，并且可以与从以下基因编码的OX40结合：NCBI登录号NP_003317，Genpept登录号P23510或与其具有90％同源性或90％同一性的基因。本发明提供的分离的抗体可进一步结合至具有以下GenBank登记号：AAB39944、CAE11757或AAI05071之一的OX40受体。

结合和/或调节OX40受体的抗原结合蛋白和抗体是本领域已知的。本发明的示例性ABP和抗体公开于，例如国际公开号WO2013/028231(PCT/US2012/024570)、国际申请日2012年2月9日，和WO2012/027328(PCT/US2011/048752)、国际申请日2011年8月23日。(若与任何定义相冲突，以本申请为主)。在一个实施方案中，本发明的OX40抗体公开于美国专利号9,163,085。

TLR4调节子

本发明的组合包含TLR4“调节子”，即调节TLR4的分子，例如，通过结合并引发构象变化、或通过接合TLR4进行信号传递、阻断与TLR4配体结合的分子。

在一个实施方案中，TLR4调节子为氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯化合物(AGP)。TLR4识别细菌LPS(脂多糖)，且当活化时引发固有免疫应答。AGP为细菌LPS的脂质A蛋白的单糖模拟物，并已在该化合物的“酰基链”发展出醚与酯的连接键。制备这些化合物的方法为已知的并公开于如WO 2006/016997、美国专利号7,288,640与6,113,918，以及WO 01/90129。其它AGP与相关方法公开于美国专利号7,129,219、美国专利号6,525,028，与美国专利号6,911,434。在本发明组合物中使用的、在酰基链上的具有醚连接键的AGP为已知的并公开于WO 2006/016997。如WO 2006/016997中[0019]至[0021]段的式(III)所示并描述的AGP化合物可用于本发明所要求的方法与组合中。

本发明使用的AGP化合物具有如下式1所示的结构：

其中

m为0至6

n为0至4；

X为O或S，优选O；

Y为O或NH；

Z为O或H；

R₁、R₂、R₃各自独立选自C1-20酰基和C1-20烷基；

R₄为H或Me；

R₅独立选自-H、-OH、-(C1-C4)烷氧基、-PO₃R₈R₉、-OPO₃R₈R₉、-SO₃R₈、-OSO₃R₈、-NR₈R₉、-SR₈、-CN、-NO₂、-CHO、-CO₂R₈和–CONR₈R₉，其中R₈和R₉各自独立地选自H和(C1-C4)烷基；且

R₆和R₇各自独立地为H或PO₃H₂。

在式1中，正常脂肪酰基残基(即，仲酰氧基或烷氧基残基，例如R₁O、R₂O和R₃O)连接的3'立体中心的构型是R或S，优选R(由Cahn-Ingold-Prelog优先级规则指定)。R₄和R₅连接的糖苷配基立体中心的构型可以是R或S。所有立体异构体、对映异构体和非对映异构体及其混合物都被认为落入本发明的范围内。

杂原子X与糖苷配基氮原子之间的碳原子数由变量“n”确定，其可以是0至4的整数，或0至2的整数。

正常脂肪酸R₁、R₂和R₃的链长可为约6至约16个碳原子，或约9至约14个碳原子。链长可相同或不同。一些实施方案包括其中R₁、R₂和R₃的链长为6或10或12或14。

式1涵盖L/D-丝氨酰基醚和酯、-苏氨酰基醚和酯、-半胱氨酰基醚和酯的脂质AGP、激动剂和拮抗剂及其同系物(n＝1-4)以及不同羧酸生物电子等排体(即R₅为能够形成盐的酸性基团；磷酸根可在葡糖胺单元的4-或6-位，优选在4-位)。

在本发明的使用式1的AGP化合物的一个实施方案中，n为0，R₅为CO₂H，R₆为PO₃H₂且R₇为H。该AGP化合物如以下式1a的结构中所示：

其中X为O或S；Y为O或NH；Z为O或H；R₁、R₂、R₃各自独立选自C1-20酰基和C1-20烷基；且R₄为H或甲基。

在式1a中，正常脂肪酰基残基(即，仲酰氧基或烷氧基残基，例如R₁O、R₂O和R₃O)连接的3'立体中心的构型是R或S，优选R(由Cahn-Ingold-Prelog优先级规则指定)。R₄和CO₂H连接的糖苷配基立体中心的构型可以是R或S。所有立体异构体、对映异构体和非对映异构体及其混合物都被认为落入本发明的范围内。

式1a涵盖L/D-丝氨酰基醚和酯、-苏氨酰基醚和酯、-半胱氨酰基醚和酯的脂质AGP，既有激动剂又有拮抗剂。

在式1及式1a中，Z为通过双键连接的O或各自通过单键连接的两个氢原子。也就是说，该化合物在Z＝Y＝O时是酯连接型的；在Z＝O且Y＝NH时是酰胺连接型的；且在Z＝H/H且Y＝O时为醚连接型。

式1的化合物称为CRX-601和CRX-527。它们的结构如下所示:

此外，另一优选实施方案使用具有所示结构的CRX-547：

其它实施方案包括AGP，如CRX 602或CRX 526，其对具有较短的仲酰基或烷基链的AGP提供了增加的稳定性。

在本发明另一实施方案中，所述TLR4调节子为激动剂。在另一实施方案中，所述作为激动剂的TLR4调节子选自：CRX-601、CRX-547和CRX-527。

AGP缓冲液

在本发明一个实施方案中，包含TLR4调节子如AGP的组合物使用两性离子缓冲剂进行缓冲。在本发明一个实施方案中，所述两性离子缓冲剂为氨基链烷烃磺酸或合适的盐。氨基链烷烃磺酸缓冲剂的实例包括，但不限于，HEPES、HEPPS/EPPS、MOPS、MOBS和PIPES。在本发明一个实施方案中，所述缓冲液为可药用的缓冲液，适合用于人，如用于商业注射产品。在本发明一个实施方案中，所述缓冲剂为HEPES。

治疗方法

认为本发明的组合在其中接合OX40和/或TLR4是有益的疾病中具有实用性。

本发明因此还提供本发明的组合，其用于治疗，特别是治疗其中接合OX40和/或TLR4是有益的疾病，特别是癌症。

在一个实施方案中，本发明提供使用TLR4激动剂，如CRX-601，与人源化单克隆OX40抗体的组合治疗患者癌症的方法，其中所述人源化OX40抗体静脉内给药，且所述TLR4激动剂瘤内给药，导致在患者肿瘤中的远端效应。

本发明所用的术语“远端效应”，是指其中局部治疗不仅在治疗位点、还在远端肿瘤位点也引起肿瘤消退的现象。Postow，等人，N Engl J Med 366(10)：925–31(2012)。

本发明的另一方面提供治疗其中接合OX40和/或TLR4是有益的疾病的方法，包括给药本发明的组合。

本发明另一方面提供本发明的组合在制备用于治疗其中接合OX40和/或TLR4是有益的疾病的药物中的用途。在一些实施方案中，所述疾病为癌症。适当地，本发明提供本发明的组合用于治疗癌症的用途。

适合用本发明的组合治疗的癌症的实例包括但不限于头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和前列腺癌的原发性和转移性形式。适当地，所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜细胞瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞T细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、AML、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞T细胞性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核母细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非-霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、膀胱上皮癌、肺癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。

此外，所治疗的癌症的实例包括Barret腺癌；胆道癌；乳腺癌；子宫颈癌；胆管癌；中枢神经系统肿瘤，包括原发性CNS肿瘤如成胶质细胞瘤，星形细胞瘤(例如，多形性成胶质细胞瘤)和室管膜瘤，和继发性CNS肿瘤(即，起源于中枢神经系统外部、转移至中枢神经系统的肿瘤)；结肠直肠癌，包括大肠结肠癌；胃癌；头颈癌，包括头与颈的鳞状上皮细胞癌；血液癌症，包括白血病和淋巴瘤如急性成淋巴细胞性白血病，急性骨髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征，慢性骨髓性白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，巨核母细胞白血病，多发性骨髓瘤和红白血病；肝细胞癌；肺癌，包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌；卵巢癌；子宫内膜癌；胰腺癌；垂体腺瘤；前列腺癌；肾癌；肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤；和甲状腺癌。

适当地，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：脑癌(神经胶质瘤)、恶性胶质瘤、星形细胞瘤、多形性恶性胶质瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和甲状腺癌。

在一个实施方案中，本发明涉及治疗选自下列的癌症或减轻其严重性的方法：卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌。

在一个实施方案中，本发明涉及治疗哺乳动物包括人中的癌前期综合征或减轻其严重性的方法，其中所述癌前期综合征选自：宫颈上皮内瘤变、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(前黑素瘤)、前列腺上皮内(导管内)肿瘤(PIN)、导管原位癌(DCIS)、结肠息肉和严重的肝炎或肝硬化。

本发明的组合可单独使用，或与一种或多种其它治疗剂组合使用。因此本发明在另一方面提供包含本发明的组合与其它一种或多种治疗剂的进一步的组合，包含该组合的组合物和药物以及该进一步的组合、组合物和药物在治疗中的用途，特别是治疗对OX40和/或TLR4的接合敏感的疾病。

在实施方案中，本发明的组合可与癌症的其它治疗方法一起使用。尤其是，在抗肿瘤治疗中，与其他化疗、激素、抗体试剂以及手术和/或放射治疗(除了以上提到的)的组合疗法皆可考虑。因此，本发明的组合疗法包括给药本发明抗OX40ABP或抗体，和/或TLR4调节子，以及任选使用其他治疗剂，包括其它抗肿瘤剂。此类试剂的组合可共同给药或分开给药，以及当分开给药时，这可同时发生或以任何顺序相继给药，时间上将接近和远隔。在一个实施方案中，该药物组合包括本发明的抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子，以及任选至少一种其它抗肿瘤剂。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为手术和/或放射治疗。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为至少一种其它抗肿瘤剂。

对所治疗的易受影响的肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可在该组合中使用。有用的典型抗肿瘤剂包括但不限于，抗微管试剂如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配合物；烷化剂如氮芥，氧氮磷环类(oxazaphosphorine)，烷基磺酸盐，亚硝基脲，和三氮烯；抗生素试剂如蒽环类抗生素，放线菌素和博来霉素；拓扑异构酶II抑制剂如表鬼臼毒素；抗代谢物如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸血管发生抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡试剂；和细胞周期信号传递抑制剂。

抗微管或抗有丝分裂药物:

抗微管或抗有丝分裂药物为时相特异性药物，其在细胞周期中的M期或有丝分裂期具有针对肿瘤细胞微管的活性。抗微管药物的实例包括但不限于二萜类和长春花生物碱。

源自天然的来源的二萜类是时相特异性抗癌药物，其作用于细胞周期的G₂/M期。认为二萜类通过与微管的β-微管蛋白亚单元结合而使之稳定。然后该蛋白的分解似乎受到抑制，同时有丝分裂停止，进而细胞死亡。二萜类的实例包括但不限于紫杉醇及其类似物多西紫杉醇。

紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯，是一种天然的二萜产物，分离自太平洋红豆杉(Taxus brevifolia)且作为可注射溶液市售。其为萜类的紫杉烷家族的成员。紫杉醇在美国已经批准用于治疗顽固性卵巢癌(Markman等人，YaleJournal of Biology and Medicine，64:583，1991；McGuire等人，Ann.lntem，Med.，111:273,(989))和治疗乳腺癌(Holmes等人，J.Nat.Cancer Inst.，83:1797(1991))的临床应用。紫杉醇为治疗皮肤肿瘤(Einzig等人，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，20:46(2001))和头颈癌(Forastire等人，Sem.Oncol.，20:56，(1990))的潜在候选药。所述化合物也显示了对于多囊肾病(Woo等人，Nature，368:750.(1994))、肺癌和疟疾的治疗潜力。用紫杉醇治疗患者导致骨髓抑制(Multiple cell lineages，Ignoff等人，Cancer Chemotherapy PocketGuide，1998)，这与高于阈浓度(50nM)的给药持续时间有关(Kearns等人.，Seminars inOncology，3(6)p.16-23，(1995))。

多西紫杉醇，5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮-4-乙酸酯2-苯甲酸酯-N-叔丁酯13-(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸酯三水合物；其作为可注射溶液市售。多西紫杉醇用于治疗乳腺癌。多西紫杉醇是紫杉醇的半合成衍生物，其使用天然前体10-去乙酰基-浆果赤霉素III(提取自欧洲紫杉的针叶)制备。

长春花生物碱是时相特异性抗肿瘤药物，源自长春花植物。长春花生物碱通过特异性结合于微管蛋白作用于细胞周期的M期(有丝分裂)。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。有丝分裂被认为终止于分裂中期，然后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括但不限于长春碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春碱，硫酸长春碱，作为可注射溶液市售。尽管其可用作多种实体瘤的二线治疗，但其主要用于治疗睾丸癌和多种淋巴瘤包括霍奇金病；和淋巴细胞和组织细胞淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱剂量限制性副作用。

长春新碱，22-氧代长春碱硫酸盐，作为可注射溶液市售。长春新碱用于治疗急性白血病且还用于治疗霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤的治疗方案。脱发和神经作用是长春新碱最常见的副作用，且会发生较低程度的骨髓抑制和胃肠道粘膜炎作用。

长春瑞滨，3’,4’-二去氢-4’-脱氧-C’-去甲长春花碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸盐(1:2)(盐)]，作为酒石酸长春瑞滨可注射溶液市售，是半合成长春花生物碱。长春瑞滨用作单一药物或与其他化疗药物，例如顺铂组合，用于治疗多种实体瘤，如非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素性顽固性前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的剂量限制性副作用。

铂配合物：铂配合物为非时相特异性抗癌药物，其与DNA相互作用。铂配合物进入肿瘤细胞，进行水合并与DNA形成链内和链间交联，对肿瘤引起不利的生物作用。铂配合物的实例包括但不限于奥沙利铂、顺铂和卡铂。

顺铂，顺-二氨二氯合铂，作为可注射溶液市售。顺铂主要用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌和晚期膀胱癌。

卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸(2-)-O,O’]合铂，作为可注射溶液市售。卡铂主要用于一线和二线治疗晚期卵巢癌。

烷基化剂：烷基化剂为非时相特异性抗癌药物和强亲电试剂。通常，烷基化剂通过烷基化经由DNA分子的亲核部分与DNA形成共价键，所述亲核部分例如磷酸基、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基。所述烷基化扰乱了核酸功能，导致细胞死亡。烷基化剂的实例包括但不限于氮芥例如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥；烷基磺酸酯例如白消安；亚硝基脲例如卡莫司汀；和三氮烯例如达卡巴嗪。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-氧氮磷杂环己烯2-氧化物一水合物，作为可注射溶液或片剂市售。环磷酰胺用作单一药物或与其他化疗药物组合，以治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，作为可注射溶液或片剂市售。美法仑用于姑息治疗多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮瘤。骨髓抑制是美法仑最常见的剂量限制性副作用。

苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，作为片剂市售。苯丁酸氮芥用于姑息治疗慢性淋巴白血病和恶性淋巴瘤，例如淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金病。

白消安，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，作为片剂市售。白消安用于姑息治疗慢性骨髓性白血病。

卡莫司汀，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，作为冻干产品的单一药瓶市售。卡莫司汀作为单一药物或与其他药物组合用于姑息治疗脑瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。

达卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，作为产品的单一药瓶市售。达卡巴嗪用于治疗转移性恶性黑素瘤且与其他药物组合用于霍奇金病的二线治疗。

抗生素抗肿瘤药：抗生素抗肿瘤药为非时相特异性药物，其结合或嵌入DNA。通常，该作用形成稳定的DNA复合物或导致DNA链断裂，其扰乱了核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素抗肿瘤药物的实例包括但不限于放线菌素例如放线菌素D、蒽环类(anthrocyclins)例如柔红霉素和多柔比星；和博来霉素。

放线菌素D(Actinomycin D)，作为可注射形式的市售。放线菌素D用于治疗维尔姆斯肿瘤和横纹肌肉瘤。

柔红霉素，(8S-顺式)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-萘并萘醌盐酸盐，作为可注射形式的脂质体或可注射形式的市售。柔红霉素用于缓解诱导治疗急性非淋巴细胞白血病和与晚期HIV相关的卡波西肉瘤。

多柔比星，(8S，10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-8-乙醇酰基,7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12萘并萘醌盐酸盐，作为可注射形式的或ADRIAMYCIN市售。多柔比星主要用于治疗治疗急性成淋巴细胞白血病和急性成髓细胞白血病，但也是治疗一些实体瘤和淋巴瘤的有用成分。

博来霉素，分离自轮丝链霉菌株的细胞毒性糖肽抗生素混合物，作为市售。博来霉素作为单一药物或与其他药物组合用于姑息治疗鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌。

拓扑异构酶II抑制剂：拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼毒素类。

表鬼臼毒素类是时相特异性抗肿瘤药物，源自盾叶表鬼臼(mandrake)植物。表鬼臼毒素类通常在细胞周期的S和G₂期通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物引起DNA链断裂而影响细胞。DNA链断裂累积，随后细胞死亡。表鬼臼毒素类的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，作为可注射溶液或胶囊市售，且通常称为VP-16。依托泊苷作为单一药物或与其他化疗药物组合治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

替尼泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，作为可注射溶液市售，且通常称为VM-26。替尼泊苷作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗儿童急性白血病。

抗代谢抗肿瘤药物：抗代谢抗肿瘤药物是时相特异性抗肿瘤药物，其通过抑制DNA合成或通过抑制嘌呤或嘧啶碱基合成并因此限制DNA合成而作用于细胞周期的S期(DNA合成期)。因此，S期停止，细胞死亡。抗代谢抗肿瘤药物的实例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨喋呤、阿糖胞苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，作为氟尿嘧啶市售。给药5-氟尿嘧啶使得抑制胸苷酸合成，并且既可掺入RNA也可掺入DNA。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。其他氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿苷(氟尿苷)和5-氟脱氧尿苷单磷酸盐。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-D-呋喃阿拉伯糖基-2(1H)-嘧啶酮，市售商品为且通常称为Ara-C。认为阿糖胞苷通过抑制DNA链延长在S期显示出细胞时相特异性，这种作用是通过在正在生长的DNA链的末端结合阿糖胞苷而产生的。阿糖胞苷作为单一药物或与其他化疗药物组合治疗急性白血病。其他胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2’,2’-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。

巯嘌呤，1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，作为市售。巯嘌呤通过抑制DNA合成而在S期显示出细胞时相特异性，其机理尚不明确。巯嘌呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗急性白血病。一种可用的巯嘌呤类似物为硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤，2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，作为市售。硫鸟嘌呤通过抑制DNA合成而在S期表现出细胞时相特异性，其机理尚不明确。硫鸟嘌呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗急性白血病。其他嘌呤类似物包括喷司他丁、赤藓羟基壬基腺嘌呤、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨，2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，作为市售。吉西他滨通过阻断细胞从G1期进入S期从而在S期表现出细胞时相特异性。吉西他滨与顺铂组合用于治疗局部晚期非小细胞肺癌，以及单独治疗局部晚期胰腺癌。

甲氨喋呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，作为甲氨喋呤钠市售。甲氨喋呤通过抑制DNA合成、修复和/或复制而在S期表现出细胞时相特异性，这种作用通过抑制二氢叶酸还原酶实现，其为嘌呤核苷酸和胸苷酸的合成所需的物质。甲氨喋呤作为单一药物或与其他化疗药物组合用于治疗绒毛膜癌、脑脊膜白血病、非霍奇金淋巴瘤和乳腺癌、头癌、颈癌、卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂：喜树碱类，包括喜树碱和喜树碱衍生物，可用作拓扑异构酶I抑制剂，或在这一方面的研发。喜树碱的细胞毒性被认为与其拓扑异构酶I抑制活性有关。喜树碱的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康和下述7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙基二氧基-20-喜树碱的多种光学形式。

盐酸伊立替康，(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，作为可注射溶液市售。伊立替康是一种喜树碱衍生物，其与其活性代谢物SN-38一起结合至拓扑异构酶I-DNA复合物。认为细胞毒性的发生是拓扑异构酶I:DNA:伊立替康或SN-38的三元复合物与复制酶的相互作用所导致的不可修复的双链断裂的结果。伊立替康用于治疗结肠或直肠的转移性癌症。

盐酸托泊替康，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一盐酸盐，作为可注射溶液市售。托泊替康是一种喜树碱衍生物，其结合至拓扑异构酶I-DNA复合物，并防止由于DNA分子的链扭转造成的由拓扑异构酶I引起的单链断裂的重新连接。托泊替康用于转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。

激素和激素类似物：激素和激素类似物是有效治疗癌症的化合物，所述癌症的发展和/或缺少发展与激素有关。用于癌症治疗的激素和激素类似物的实例包括但不限于肾上腺皮质类固醇类，例如泼尼松和泼尼松龙，其用于治疗恶性淋巴瘤和儿童急性白血病；氨鲁米特和其他芳香酶抑制剂例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦，其用于治疗肾上腺皮质瘤和含雌激素受体的激素依赖性乳腺癌；孕激素，例如醋酸甲地孕酮，用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌；雌激素、雄激素和抗雄激素例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙孕酮和5α-还原酶例如非那雄胺和度他雄胺，用于治疗前列腺癌和良性前列腺肥大；抗雌激素例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene、以及美国专利号5,681,835、5,877,219和6,207,716公开的选择性雌激素受体调节剂(SERMS)，用于治疗激素依赖性乳腺癌和其他易感性癌症；且促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物(其刺激促黄体生成激素(LH)和/或促卵泡激素激素(FSH)的释放)用于治疗前列腺癌，例如LHRH激动剂和拮抗剂，例如醋酸戈舍瑞林和luprolide。

信号转导途径抑制剂：信号转导途径抑制剂是阻断或抑制激发细胞内变化的化学过程的那些抑制剂。本发明所用的该变化是细胞增殖或分化。用于本发明的信号转导抑制剂包括但不限于，受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、SH2/SH3域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3激酶、肌醇信号转导和Ras致癌基因的抑制剂。

几种蛋白酪氨酸激酶在多种参与细胞生长调节的蛋白中催化特定酪氨酰残基的磷酸化。所述蛋白酪氨酸激酶可宽泛地分为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是具有细胞外配体结合域、跨膜域和酪氨酸激酶域的跨膜蛋白。受体酪氨酸激酶参与细胞生长的调节且通常称为生长因子受体。许多这些激酶的不适当的或不受控制的活化，即异常的激酶生长因子受体活性，例如通过过度表达或突变引起的活性，已显示会导致不受控制的细胞生长。因此，所述激酶的异常活性与恶性组织生长相关。因此，所述激酶的抑制将提供癌症治疗方法。生长因子受体包括，例如，表皮生长因子受体(EGFr)、来自血小板的生长因子受体(PDGFr)、erbB2、erbB4、ret、血管内皮生长因子受体(VEGFr)、具有免疫球蛋白样和表皮生长因子标识域的酪氨酸激酶(TIE-2)、胰岛素生长因子-I(IGFI)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、BTK、ckit、cmet、成纤维细胞生长因子(FGF)受体、Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)、ephrin(eph)受体和RET原癌基因。几种生长受体的抑制剂正在研发之中，且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。抑制生长因子受体功能的生长因子受体和药物公开于例如以下文献中：Kath,John C.,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6):803-818；Shawver等，DDT Vol 2,No.2 February1997；和Lofts,F.J.等,“Growth factor receptors as targets”,New MolecularTargets for Cancer Chemotherapy(Workman,Paul和Kerr,David,CRC press 1994,London)。

不是生长因子受体激酶的酪氨酸激酶称为非受体酪氨酸激酶。用于本发明的非受体酪氨酸激酶(其为抗癌药物的靶点或潜在靶点)，包括cSrc、Lck、Fyn、Yes、Jak、cAbl、FAK(粘着斑激酶)、布鲁顿氏酪氨酸激酶和Bcr-Abl。抑制非受体酪氨酸激酶功能的非受体激酶和药物公开于以下文献中：Sinh等人,Journal of Hematotherapy and Stem CellResearch,8(5):465–80(1999)；和Bolen等人,Annual review of Immunology,15:371-404(1997)。

SH2/SH3域阻断剂为在多种酶或衔接蛋白(包括PI3-K p85亚单位、Src家族激酶、衔接分子(Shc、Crk、Nck、Grb2)和Ras-GAP)中扰乱SH2或SH3域结合的药物。SH2/SH3域作为抗癌药物的靶点于以下文献中讨论：Smithgall,T.E.,Journal of Pharmacological andToxicological Methods.34(3)125-32(1995)。

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)、促分裂素或细胞外调节激酶(MEK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的阻断剂；和蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKC(α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ)、IkB激酶家族(IKKa，IKKb)、PKB家族激酶、akt激酶家族成员和TGFβ受体激酶的阻断剂。所述丝氨酸/苏氨酸激酶及其抑制剂公开于以下文献中：Yamamoto等人，Journal of Biochemistry，126(5)799-803(1999)；Brodt等人，Biochemical Pharmacology，60.1101-1107(2000)；Massague等人，Cancer Surveys，27:41-64(1996)；Philip等人，Cancer Treatment and Research，78：3-27(1995)，Lackey等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，(10)223-226(2000)；美国专利号6,268,391；和Martinez-Iacaci等人，Int.J.Cancer，88(1)，44-52(2000)。

磷脂酰肌醇-3激酶家族成员的抑制剂包括PI3-激酶、ATM、DNA-PK和Ku的阻断剂，也可用于本发明中。所述激酶公开于以下文献中：Abraham,R.T.(1996),Current Opinionin Immunology.8(3)412-8；Canman,C.E.,Lim,D.S.(1998),Oncogene 17(25)3301-3308；Jackson,S.P.(1997),International Journal of Biochemistry and Cell Biology.29(7):935-8；和Zhong,H.等,Cancer Res,(2000)60(6),1541-1545。

本发明中有用的还有肌醇信号转导抑制剂，例如磷脂酶C阻断剂和肌醇类似物。这种信号抑制剂公开于以下文献中：Powis，G.和Kozikowski A.，(1994)New MolecularTargets for Cancer Chemotherapy ed.，Paul Workman和David Kerr，CRC press 1994，London。

另一类信号转导途径抑制剂是Ras致癌基因的抑制剂。所述抑制剂包括法呢基转移酶、香叶基-香叶基转移酶和CAAX蛋白酶抑制剂，以及反义寡核苷酸、核酶和免疫疗法。所述抑制剂已显示可在含野生型突变体ras的细胞中阻断ras活化，因而作用为抗增殖药物。Ras致癌基因抑制于以下文献中讨论：Scharovsky，等人(2000),Journal of BiomedicalScience.7(4)292-8；Ashby,M.N.(1998),Current Opinion in Lipidology.9(2)99–102；和BioChim.Biophys.Acta,(19899)1423(3):19-30。

如上所述，结合至受体激酶配体的抗体拮抗剂也可用作信号转导抑制剂。这类信号转导途径抑制剂包括将人源化抗体用于受体酪氨酸激酶的胞外配体结合域。例如Imclone C225EGFR特异性抗体(参见Green等,Monoclonal Antibody Therapy for SolidTumors,Cancer Treat.Rev.,(2000),26(4),269-286)；erbB2抗体(参见“Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor TyrosineKinases”,Breast Cancer Res.,2000,2(3),176-183)；和2CB VEGFR2特异性抗体(参见Brekken等,Selective Inhibition of VEGFR2Activity by a monoclonal Anti-VEGFantibody blocks tumor growth in mice,Cancer Res.(2000)60,5117-5124)。

抗血管生成药物：抗血管生成药物，包括非受体MEK血管生成抑制剂，也是有用的。抗血管生成药物例如抑制血管内皮生长因子作用的那些药物(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]和通过其他机理作用的化合物(例如利诺胺，整联蛋白αvβ3功能抑制剂、内皮抑制素和血管抑制素)；

免疫疗法药物：用于免疫疗法方案的药物也可与式(I)化合物组合。免疫疗法途径，包括例如离体和体内增加患者癌细胞的免疫原性的方法(例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染)、减少T细胞的无反应性的方法、使用转染的免疫细胞(例如细胞因子转染的树突状细胞)的方法、使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法、和使用抗独特型抗体(antidiotypic antibodies)的方法。

促凋亡药物：用于凋亡前(proapoptotic)治疗方案的药物(例如，bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明的组合。

细胞周期信号传递抑制剂：细胞周期信号传递抑制剂抑制参与细胞周期控制的分子。称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的蛋白激酶家族及其与称为细胞周期蛋白的蛋白家族的相互作用，控制了整个真核细胞周期的进程。不同细胞周期蛋白/CDK复合物的配位活化和失活是整个细胞周期的正常进程所必需的。几种细胞周期信号传递抑制剂正在研发中。例如，细胞周期调节蛋白依赖性激酶的实例包括CDK2、CDK4和CDK6以及其抑制剂，例如公开于以下文献中：Rosania等,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(2):215-230。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子和至少一种选自以下的抗肿瘤剂：抗微管药物、铂配合物、烷基化剂、抗生素药物、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂、免疫治疗药物、促凋亡药物和细胞周期信号传递抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子和至少一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物为选自二萜类和长春花生物碱的抗微管药物。

在另一实施方案中，所述抗肿瘤剂为二萜类。

在另一实施方案中，所述抗肿瘤剂为长春花生物碱。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子和至少一种抗肿瘤剂，其为铂配合物。

在另一实施方案中，所述抗肿瘤剂为紫杉醇、卡铂或长春瑞滨。

在一个实施方案中，本发明的组合包含抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子和至少一种抗肿瘤剂，其为信号转导途径抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为生长因子受体激酶VEGFR2、TIE2、PDGFR、BTK、erbB2、EGFr、IGFR-1、TrkA、TrkB、TrkC、或c-fms的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为丝氨酸/苏氨酸激酶rafk、akt或PKC-zeta的抑制剂.

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自激酶src家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为c-src抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为Ras致癌基因抑制剂，其选自法尼基转移酶和香叶基香叶基转移酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为选自PI3K的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导途径抑制剂为双重EGFr/erbB2抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲烷磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(以下结构)：

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，该抗肿瘤剂为细胞周期信号传递抑制剂。

在进一步的实施方案中，细胞周期信号传递抑制剂为CDK2、CDK4或CDK6的抑制剂.

在一个实施方案中本发明的方法和用途中哺乳动物的为人。

如所指示，治疗有效量的本发明的组合(抗OX40ABP或抗体和TLR4调节子)给药于人。通常，本发明的给药试剂的治疗有效量将取决于多种因素，包括，例如，受试者的年龄和体重、需要治疗的精确病症、病情的严重程度、制剂的性质以及给药途径。最终，治疗有效量将由监护医生酌情决定。

以下实施例仅用于说明，并不意图以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1：OX86单一疗法在CT-26同系基因型小鼠模型中对结肠癌的治疗

CT26小鼠结肠癌(CT26.WT；ATCC#CRL-2638)细胞系得自ATCC。其为由N-亚硝基-N-甲基氨基甲酸酯(NNMU)诱发的、本领域已知的未分化结肠癌细胞系。例如，其描述于：WangM等人Active immunotherapy of cancer with a nonreplicating recombinant fowlpoxvirus encoding a model tumor-associated antigen.J.Immunol.154:4685-4692,1995(PubMed:7722321)。大鼠IgG1得自Bioxcell。OX86(杂交瘤134)细胞得自European CellCulture collection，并由Harlan制造；OX86为用于啮齿动物中的工具抗OX40单克隆抗体的名称；其为啮齿动物抗体，结合至啮齿动物OX40，如小鼠OX40(受体)。

将OX86和大鼠IgG1在稀DPBS中稀释。

为了制备肿瘤细胞，将得自ATCC(cat#CRL-2638，lot#59227052)的CT-26(小鼠结肠癌细胞)的冷冻(-140℃)瓶解冻并在基础RPMI(具10％FBS)培养基中培养一整周。

CT-26细胞(第12代)收获自完全培养基培养瓶中。将细胞离心并再悬浮于RPMI(不含FBS)，此步骤重复3次。通过台盼蓝拒染法确认细胞密度与活力。然后将细胞稀释至希望的密度(5x10⁵细胞/毫升)并保存于冰上。

评估递增剂量的OX40单克隆抗体(mAb)OX86降低肿瘤生长的效率。在第0天，对动物称重并在每只小鼠右后肢接种0.5x10⁵个CT26肿瘤细胞。总共有130只小鼠被接种肿瘤细胞-假设有30％失败率(在研究开始时太大或太小)，目标为每组n＝10。在接种肿瘤细胞后，在研究期间肿瘤生长与总体重每周测量3次。在平均肿瘤体积接近100mm³的第10或11天进行随机分组。在随机分组之日开始，动物经腹膜内给药OX86mAb或大鼠IgG1同种型，每二周一次，共给药6次。将小鼠维持于研究中，直到肿瘤在二次连续测量中达到>2000立方毫米，由于其他理由(即重量损失>20％、肿瘤上的溃疡等)将小鼠自试验中移除，或直至试验结束。安乐死后，肿瘤被移出，并进行分解，进行流式分析和/或IHC分析的FFPE。

第0天：皮下接种肿瘤细胞。

第1、4、6、8天：对动物称重并检查肿瘤，若有的话，测量肿瘤。

随机分组日(约第10日)：对动物随机分组，并置于代表适当组别的笼中。

给药，每二周一次至研究结束：对动物经腹膜内给药OX86或抗大鼠IgG1，其中上述量以每只小鼠为基准。

测量，每三周一次，至研究结束：对动物称重并测量肿瘤

将来自约10只动物的平均肿瘤重量进行平均。误差棒显示SEM分析。依据以下计算P值：P值检测存活曲线在总族群中皆相等的零假设。换句话说，零假设为该治疗并不会改变存活。经由Stepdown Bonferroni法调整原始p值，以进行多重比较。

上述方案用于产生图1B的结果，各小鼠的结果可见于图4。这些图显示接种了CT-26细胞并以大鼠IgG1处理的小鼠，会发展出如预期的不会减弱生长的肿瘤，而与大鼠IgG1对照组相比，给药OX40单克隆抗体(mAb)OX86会导致对肿瘤生长的明显抑制，并增加存活力。

实施例2：以TLR4(CRX-527)治疗的CT-26研究的结果

向上述OX40单一疗法方案中加入TLR4调节子如CRX-527，以用于研究TLR4单一疗法，以及抗mOX40免疫疗法与TLR4调节子的组合。

第0天：皮下接种肿瘤细胞。

第1、4、6、8天：对动物称重并检查肿瘤且测量。

给药，每二周一次至研究结束：动物经腹膜内以(每只小鼠)以上所示的量给药TLR化合物CRX-527或载体。

测量，每三周一次，至研究结束：对动物称重并测量肿瘤。

上述方案用于以所示剂量产生图1A与图2-6的结果。几乎每个案例中，在右后肢接种有0.5x10⁵CT-26结肠直肠肿瘤细胞的Balb/c小鼠发展出了肿瘤，当仅经腹膜内载体(2％甘油)处理时，该肿瘤如预期进展。与经载体治疗的动物相比，TLR 4激动剂CRX-527(图2-5)与CRX-601(图6)以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。剂量依赖性也于该模型的存活力中观察到。

实施例3：以OX40(即OX-86，抗啮齿动物OX40受体的抗体)与CRX-527的组合治疗

进行下列治疗过程：

第0天：皮下接种肿瘤细胞。

研究参与日(约第10天)：对动物随机分组并接受治疗1。

参与后每二周：参与日开始，小鼠接受经腹膜内给药，每二周一次，共6次给药。

每三周一次，至试验结束：对动物称重并测量肿瘤。

当OX86治疗与TLR4调节子治疗(CRX-527)组合时，与任一单独治疗相比，小鼠表现出更高的肿瘤负荷减少且存活较久。

实施例4：单一疗法以及抗mOX40R抗体与式I的TLR4靶向分子的组合治疗

对小鼠给药OX40抗体；式1化合物(包括式Ia化合物、CRX-527、CRX-547与CRX-601(TLR4激动剂))，或二者的组合。每一疗法皆具有明显的抗肿瘤活性。

至少有两个重大发现。首先，在小鼠中，相对于未经治疗的对照组，抗OX40R或抗OX40抗体与TLR4激动剂的组合皆可延迟已建立的CT-26肿瘤的生长。第二，在小鼠中，与单一疗法相比较，在TLR4激动剂与抗OX40R抗体组合中，观察到明显的抗肿瘤效果。

实施例5：以OX40R ABS(即抗mOX40受体抗体克隆OX-86，抗啮齿动物OX40受体的抗体)与CRX-601的组合治疗

材料与方法

体内抗肿瘤效果研究

在鼠CT-26结肠癌同系基因型实体瘤模式中评估TLR4激动剂(CRX601)作为单一疗法和与大鼠的抗小鼠OX40抗体克隆OX86组合的体内抗肿瘤效果。七至八周龄的雌性Balb/c小鼠(BALB/cAnNCrl，Charles River)用于这些研究中。将鼠CT-26结肠癌细胞(ATCC目录号CRL-2638lot#59227052)在具有5％CO₂的潮湿的37℃培养箱中的补充有10％胎牛血清(FBS)的RPMI生长培养基中培养。以对数成长的CT-26细胞由组织培养瓶中收获，并以450xg离心5分钟，在4℃下10分钟，以沉淀出细胞。将上清液丢弃，将细胞在不含钙与镁的冰冷磷酸盐缓冲盐水(PBS)中清洗，且再次以450xg离心5分钟，在4℃下10分钟，以沉淀出细胞。将细胞再悬浮于不含FBS的无菌RPMI培养基中，并调整至细胞浓度为500,000细胞/毫升。将100μl的细胞储存液经皮下注射植入至每只Balb/c小鼠的右侧腹。10或11日后，当平均肿瘤大小达到约100mm³，将小鼠根据肿瘤大小随机分至研究组，且给药第一治疗剂量。依据指示，将TLR4激动剂(CRX601)或载体经由全身性静脉内注射或直接的瘤内注射给药。依据指示，用于静脉内与肿瘤内给药的CRX-601载体为0.5％。就CRX-601脂质体瘤内给药而言，使用GSK Lot#1783-157-B制备的DOPC/CHOL脂质体。大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX86)(从大鼠杂交瘤Grits ID 50776,BP232 2013在实验室内表达并纯化)或大鼠IgG1同种型对照抗体(BioXCell catalog#BE0088)，经由腹膜内注射给药，每周二次，总共给药6次。每周进行三次卡尺测量，以评估肿瘤的生长，肿瘤<2,000mm³的小鼠在试验中保留30至约115天。将连续两次测量的肿瘤>2,000mm³的小鼠，或肿瘤形成开放性溃疡的小鼠自研究中移除。肿瘤体积使用公式(0.52)x(长度)x(宽度²)计算。在研究6与7中，对无肿瘤小鼠用如上所述的CT-26肿瘤细胞在原始接种位置在侧腹部进行再攻击，并监测肿瘤生长，如上所述。所有研究皆根据GSK Policy on the Care,Welfare and Treatment of Laboratory Animals进行，并由GSK的Institutional Animal Care and Use Committee审查。

免疫分型和细胞因子分析

在第一次给药CRX-601后第0、1与8天自CT-26小鼠收获肿瘤、血液与组织。将小鼠白细胞与分解出的肿瘤单细胞立即用表面或细胞内染色抗体进行染色，以进行多色流式细胞分析以用于免疫分型(immunephenotyping)。使用来自同一研究的小鼠血浆样品进行多细胞因子分析。

统计分析

对于研究1-4，为了确定对肿瘤生长抑制的显著性，在不同治疗组之间比较第一次给药后11天(研究1)、15天(研究2与3)或19天(研究4)的肿瘤体积。在分析之前，由于不同治疗组中的变量不相等将肿瘤体积进行自然对数转换。然后对该对数转换数据上先后进行ANOVA和成对比较。使用SAS9.3与R 3.0.2分析软件。进行Kaplan-Meier(KM)方法以评估不同治疗组于特定时间的存活率。存活分析的事件为2000mm³肿瘤体积或肿瘤溃疡，以先发生者为准。通过在两次观察的对数肿瘤体积与天数之间拟合线性线来评估截断体积的确切时间，其中所述两次观察为：第一次观察到超过截断体积和截断体积之前刚刚进行的一次观察。计算了至终点的中位时间及其对应的95％置信区间。然后通过对数秩检验来测试任何两组之间的KM存活率曲线是否存在统计学差异。测定原始p值以及通过伪发现率(FDR)调整的p值，其来自通过比较治疗组之间至事件发生的天数(通过存活分析)以及比较在所指示天数时的对数变换肿瘤体积。认为FDR调节的p值≤0.05的那些具有统计学显著性。

对于研究6与7，为了确定对肿瘤生长抑制的显著性，在不同治疗组之间比较在第一次给药后12天的肿瘤体积。治疗以标准ANOVA法进行比较，然后为了多样性进行FDR调整。出于同方差(方差相等)的原因，反应为体积的平方根。进行Kaplan-Meier(KM)法，以评估不同治疗组于特定时间的存活率。对这些存活分析，“死亡”是指超过肿瘤体积截止值(2000mm³)。“存活”是指未“死亡”小鼠的比例，“存活时间”是指直至“死亡”的天数。若小鼠在二个测量日之间超过了截止体积，则“死亡”日以线性插值评估。若小鼠超过体积截止值多于一次，则使用第一次超过的值。治疗通过标准对数秩检验在两种治疗之间比较。对数秩p值使用FDR(伪发现率)法针对多样性进行调整。显著性定义为FDR<＝0.05。所有计算和图使用R软件，3.2.3版本完成。

结果

进行六个研究(研究1至4与研究6至7)，以评估经CRX601与大鼠的抗小鼠OX40受体抗体克隆OX86(单独和彼此组合)治疗的小鼠的肿瘤大小与存活时间。进行额外一个研究(以下的研究5)，以评估经CRX601与大鼠的抗小鼠OX40受体抗体克隆OX86(单独和彼此组合)治疗的小鼠的细胞因子释放与T细胞活化。

研究1

为了测定瘤内给药的CRX-601单一疗法的活性，对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞，且如材料与方法中所述，当肿瘤大小达到约100mm³随机分为下列10只小鼠的组中。

组1：载体，瘤内给药，每周二次，共6次给药

组2：CRX-601，0.1μg/小鼠，瘤内给药，每周二次，共6次给药

组3：CRX-601，1μg/小鼠，瘤内给药，每周二次，共6次给药

组4：CRX-601，10μg/小鼠，瘤内给药，每周二次，共6次给药

组5：CRX-601，50μg/小鼠，单次给药

在瘤内给药情况下，在CT-26同系基因型小鼠肿瘤模型中观察到TLR4激动剂CRX-601的剂量依赖性抗肿瘤活性(如通过随时间的肿瘤生长抑制测量)。相比于载体，在初始给药后11天，10μg和50μg剂量的小鼠显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。结果示于图18。

在此研究中，以TLR4激动剂CRX-601治疗的小鼠也显示出存活时间的统计学显著的增加。在CT26肿瘤细胞接种后第42天，当研究结束时，与载体相比较，给药50μg的小鼠在存活上显示出统计学显著的(*p-值≤0.05)增加。在此日，只有50μg与10μg CRX-601组的小鼠留在研究中。50μg组的4只小鼠中，有3只无肿瘤，第4只小鼠显示出肿瘤体积为854.19mm³。留在10μg组的唯一一只小鼠无肿瘤(参见图19)。

研究2

为了测定静脉内给药CRX-601单一疗法的活性，对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞，且当肿瘤大小达到约100mm³时将其随机分为下列10只小鼠的组中，如材料与方法中所述。

组1：载体，静脉内给药，每周二次，共6次给药。

组2：CRX-601，1μg/小鼠，静脉内给药，每周二次，共6次给药。

组3：CRX-601，10μg/小鼠，静脉内给药，每周二次，共6次给药。

组4：CRX-601，100μg/小鼠，单次给药。

通过静脉内给药，在CT-26同系基因型小鼠肿瘤模式中观察到TLR4激动剂CRX-601的剂量依赖性抗肿瘤活性(对时间测量对肿瘤生长的抑制)。与载体相比，10μg与100μg给药的小鼠在开始给药后15天显示出统计学上的显著的肿瘤生长抑制(*p值[图]0.05)(参见图20)。

在该CT-26同系基因型小鼠肿瘤模型中，与载体相比，以TLR4激动剂CRX-601治疗的小鼠也显示出存活统计学显著的增加。在接种CT26肿瘤细胞后第32天，当研究结束时，与载体相比，给药100μg的小鼠在存活上显示出统计学显著的增加(*p-值≤0.05)。留在此组的3只小鼠中，有1只无肿瘤，另二只小鼠显示出肿瘤体积为1500.49与962.61mm³。留在10μg剂量组的唯一小鼠的肿瘤体积为188.0mm³(参见图21)。

研究3

为了测定CRX-601单独和与抗OX40组合的活性，对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞且当肿瘤大小达到约100mm³时随机分为下列10只小鼠的组中，如材料与方法中所述。

组1：载体，静脉内给药，每周一次，共3次给药。

组2：大鼠IgG1，10μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组3：OX86，25μg/小鼠，每周二次给药，共6次给药。

组4：CRX-601，10μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药。

组5：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药。

组6：CRX-601，10μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药

组7：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药

在该CT-26同系基因型小鼠模型中，针对25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)每周静脉内给药二次共给药6次、10μg或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601静脉内给药1x/周共给药3次、和二者的组合，评估抗肿瘤活性(通过随时间测量对肿瘤生长的抑制)。次佳的单一疗法，即以10μg/小鼠或25μg/小鼠的CRX-601剂量每周给药一次，当单独给药时，与载体相比没有显示统计学显著的肿瘤生长抑制，25μg/小鼠剂量的OX86相比于大鼠IgG1也没有显示统计学显著的肿瘤生长抑制。然而，相比于载体和大鼠IgG1对照，以及相比于CRX601和OX86单一疗法，以10μg或25μg/小鼠静脉内每周给药一次共3次给药的CRX601与以25μg/小鼠每周给药二次共6次给药的OX86组合在初始给药后15天显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制(参见图22)。

在该CT-26同系基因型小鼠模型研究中，也对用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(每周二次静脉内给药共6次给药)、10μg或25μg的TLR4激动剂CRX-601(静脉内给药1x/周，共3次给药)、和二者的组合处理的小鼠测定存活优势。在接种CT-26肿瘤细胞后106天，在研究结束时，相比于载体和大鼠IgG1对照二者，以及相比于OX86和CRX-601单一疗法，10μg和25μg/小鼠的CRX-601(静脉内给药1x/周共3次给药)与25μg/小鼠的OX86(2x/周给药共6次给药)的组合显示存活统计学显著的(*p-值≤0.05)增加。保留在CRX-601 25μg/小鼠+OX86组中的三只小鼠无肿瘤，且CRX-601 10μg/小鼠+OX86组中的一只小鼠无肿瘤。(参见图23)。

研究4

使用单独的25μg/小鼠的CRX-601和其与抗OX40的组合重复研究3。对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞且当肿瘤大小达到约100mm³时随机分为下列10只小鼠的组中，如材料与方法中所述。

组1：载体，静脉内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组2：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药。

组3：载体，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组4：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组5：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

在CT-26同系基因型小鼠模型中，观察到25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(每周静脉内给药二次，共6次给药)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(静脉内给药1x/周共3次给药)、和二者的组合的抗肿瘤活性(通过随时间测量肿瘤体积)。以25μg/小鼠每周静脉内给药一次共3次给药的CRX601与以25μg/小鼠每周给药二次共6次给药的OX86的组合，相比于CRX601和OX86单一疗法，显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制(参见图24)。

在CT-26同系基因型小鼠模型中，对用25μg/小鼠的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)(每周静脉内给药二次共6次给药)、或25μg/小鼠的TLR4激动剂CRX-601(静脉内给药1x/周共3次给药)、和二者的组合处理的小鼠，测量存活曲线。相比于单一疗法，25μg/小鼠的CRX601(静脉内给药1x/周共3次给药)与25μg/小鼠的OX86(2x/周给药共6次给药)的组合，显示统计学显著的(p-值≤0.05)存活增加。该统计分析在肿瘤细胞接种后第64天进行，此时所有剩余小鼠无肿瘤。检测这些小鼠直到第111天研究结束。在这一天，组5(CRX-601 25μg/小鼠+OX86)中的7只小鼠保持无肿瘤，组3(CRX-601 25μg/小鼠+大鼠IgG1)中的2只小鼠保持无肿瘤，且组4(载体+OX86)中的1只小鼠保持无肿瘤。(参见图25)。

研究5

结果为每组5只动物的平均值。

在结肠癌的CT-26同系基因型小鼠模型中，在用10μg的TLR4激动剂CRX-601、25μg的大鼠的抗小鼠OX40受体抗体(克隆OX-86)和二者的组合处理的小鼠中评估白细胞和免疫活化，在给药后8天测量。在用CRX-601和抗OX86的组合治疗的小鼠中观察到肿瘤-浸润性白细胞的显著增加。在用CRX-601和抗OX86的组合治疗的小鼠中观察到T细胞活化标记物CD25的表达在循环CD4T细胞上的协同增加。在用CRX-601和抗OX86的组合治疗的小鼠中观察到T细胞活化相关的标记物CTLA4、PD1和ICOS在循环CD4T细胞上的协同增加。结果示于图26A-C。

在结肠癌的CT-26同系基因型小鼠模型中，在用10μg的TLR4激动剂CRX-601、大鼠抗mOX40R抗体(OX-86)和二者的组合处理的小鼠中观察到免疫激活细胞因子TNFα和IL-12p70的增加，在给药后1和8天测量。IL-12p70仅在给药后第8天可检测，如图27B所示。结果示于图27A-B。

研究6

为了比较单独的CRX-601和其与抗OX40组合的活性，其中CRX-601在0.5％甘油/4％葡萄糖的载体中经静脉内(IV)或瘤内(IT)给药，对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞且当肿瘤大小达到约100mm³时随机分为下列10只小鼠的组中，如材料与方法中所述。

组2：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组3：OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组4：CRX-601，25μg/小鼠，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组5：载体，瘤内给药每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组6：CRX-601，25μg/小鼠，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组7：CRX-601，25μg/小鼠，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

对治疗组评估抗肿瘤活性(通过随时间测量肿瘤生长抑制)。相比于相应的对照组(分别为组1和组5)，次佳的单一疗法，即25μg/小鼠的CRX-601剂量在静脉内给药(组2)或瘤内给药(组6)时没有显示统计学显著的肿瘤生长抑制。相比于对照组1和5，单一疗法25μg/小鼠的OX86剂量也没有显示统计学显著的肿瘤生长抑制。然而，相比于对照组1和OX86单一疗法组3，在初始给药后12天，25μg/小鼠剂量的静脉内给药的CRX601与25μg/小鼠腹膜内给药的OX86的组合(组4)显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。相比于对照组5和OX86单一疗法组3，瘤内给药的25μg/小鼠剂量的CRX601与腹膜内给药的25μg/小鼠的OX86的组合(组7)在初始给药后12天也显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。在该研究中，相比于CRX601单一疗法组2或组6，静脉内给药(组4)或瘤内给药(组7)的25μg/小鼠的CRX601与腹膜内给药的25μg/小鼠的OX86的组合在肿瘤生长抑制方面不是统计学显著的(参见图28和29)。

在该CT-26同系基因型小鼠模型中，也测定了研究的存活优势。分别相比于其对照组1或组5，首次给药后68天，静脉内给药(组4)或瘤内给药(组7)的25μg/小鼠的CRX601与腹膜内给药的25μg/小鼠的OX86的组合在存活方面显示统计学显著的(*p-值≤0.05)增加。静脉内给药的CRX-601与腹膜内给药的OX86的组合(组4)导致在10只小鼠中有6只无肿瘤，而瘤内给药CRX-601与腹膜内给药OX86的组合(组7)导致在10只小鼠中有3只无肿瘤。相比于对照组，单一疗法组没有显示统计学显著的存活增加(参见图30和31)。天然对照小鼠和完全消退的无肿瘤小鼠在第68天用CT26肿瘤细胞再攻击。CT26肿瘤如预期在天然对照小鼠中生长，但在治疗组小鼠中肿瘤细胞被拒绝且无肿瘤生长。这表明由于CRX-601或CRX-601与OX86治疗的组合产生了持续的抗肿瘤记忆免疫性(参见图32)。在OX86单一疗法组3中的两只小鼠在第68天具有的肿瘤体积分别为27.86mm³和1576.27mm³，且没有被再攻击。

研究7

为了比较单独的CRX-601和其与抗OX40组合的活性(其中CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体通过静脉内(IV)给药，或使用DOPC/CHOL脂质体制剂瘤内(IT)给药)，对小鼠接种5x10⁴CT-26细胞且当肿瘤大小达到约100mm³时随机分为下列10只小鼠的组中，如材料与方法中所述。

组1：载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组2：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)静脉内给药每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组3：载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组4：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药

组5：载体(DOPC/CHOL脂质体)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药

组6：载体(DOPC/CHOL脂质体)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药

组7：CRX-601，25μg/小鼠(在DOPC/CHOL脂质体中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组8：CRX-601，25μg/小鼠(在DOPC/CHOL脂质体中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

在初始给药后12天对治疗组评估抗肿瘤活性(通过随时间测量对肿瘤生长的抑制)。相比于相应的对照组(分别为组1和组5)，25μg/小鼠剂量的次佳单一疗法CRX-601在静脉内给药(组2)或瘤内给药(组7，脂质体制剂)时显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。相比于对照组1和5，组3和组7中单一疗法OX86，即腹膜内给药25μg/小鼠，也显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。相比于对照组1和OX86单一疗法组3，以25μg/小鼠静脉内给药的CRX601与以25μg/小鼠腹膜内给药的OX86的组合(组4)显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。相比于对照组5，使用DOPC/CHOL脂质体制剂以25μg/小鼠剂量瘤内给药的CRX601与以25μg/小鼠腹膜内给药的OX86的组合(组8)也显示统计学显著的(*p-值≤0.05)肿瘤生长抑制。在该研究中在第12天，相比于CRX601单一疗法组2或组7，以25μg/小鼠静脉内给药(组4)或瘤内给药(组8)的CRX601与以25μg/小鼠腹膜内给药的OX86的组合在肿瘤生长抑制方面没有统计学显著性(参见图33和34)。

在该CT-26同系基因型小鼠模型中，还在首次给药后80天测定存活优势。相比于对照组1，作为单一疗法静脉内给药的CRX601(组2)、或与腹膜内给药的OX86组合的静脉内给药的CRX601(组4)显示统计学显著的(*p-值≤0.05)存活增加。组2与组4在10只小鼠中有5只皆显示完全肿瘤退化(参见图35)。相比于对照组5，作为单一疗法使用DOPC/CHOL脂质体制剂瘤内给药的CRX601(组7)和使用脂质体瘤内对照的OX86单一疗法(组6)，都显示统计学显著的(*p-值≤0.05)存活增加。相比于对照组5，以及相比于瘤内给药的CRX601(组7)和OX86(组6)的单一疗法对照组，瘤内给药的CRX601DOPC/CHOL脂质体制剂与腹膜内给药的OX86的组合(组8)显示统计学显著的(*p-值≤0.05)存活增加。在瘤内给药的CRX601DOPC/CHOL脂质体与腹膜内给药的OX86的组合中，10只小鼠中有9只完全消退且无肿瘤，与此相比在瘤内单一疗法对照组6和7中10只小鼠中有3只和2只小鼠完全消退且无肿瘤。因此，相比于瘤内对照单一疗法组6和7，对于瘤内CRX601脂质体制剂与OX86的组合观察到协同作用(参见图36)。天然对照小鼠与完全消退的无肿瘤小鼠于第80天以CT26肿瘤细胞再攻击。在天然对照小鼠中，CT26肿瘤如预期生长，但在治疗组小鼠中肿瘤被排斥且无肿瘤生长。此结果表示有持久的抗肿瘤记忆性，这是由于CRX-601或CRX-601与OX86治疗的组合所致(参见图37)。缺少肿瘤生长表示有持久的抗肿瘤记忆性，这是由于CRX-601或CRX-601与OX86治疗的组合所致(参见图37)。

研究8

远端效应描述为在局部肿瘤治疗后的远端肿瘤消退。为了评估远端效应，对小鼠于左侧腹接种5x10⁴个CT-26细胞，于右侧腹接种5x10⁴个CT-26细胞，并如材料与方法中所述，以用于单一肿瘤接种。因此，在此研究中，每一小鼠具有两个肿瘤，一个在右侧腹，一个在左侧腹。当右侧腹肿瘤大小达到约100mm³，且左侧腹肿瘤大小类似时，将小鼠随机分为以下所示的10只小鼠的组中。为了测定CRX-601单独以及与抗OX40组合的远端效应，使用DOPC/CHOL脂质体制剂或0.5％甘油/4％葡萄糖制剂仅在左侧腹肿瘤中瘤内给药(IT)CRX-601。监测右侧腹与左侧腹二者的肿瘤大小。此外，CRX-601使用0.5％甘油/4％葡萄糖载体进行静脉内给药(IV)，其单独给药和与抗OX40组合给药，以作为全身性活性的对照(组7)。

组2：载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组3：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组4：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组5：载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组6：载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组7：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)，静脉内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组8：CRX-601，25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组9：载体(DOPC/CHOL脂质体)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组10：载体(DOPC/CHOL脂质体)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组11：CRX-601，25μg/小鼠(在DOPC/CHOL脂质体中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+大鼠IgG1，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

组12：CRX-601，25μg/小鼠(在DOPC/CHOL脂质体中)，瘤内给药，每周一次，共3次给药+OX86，25μg/小鼠，腹膜内给药，每周二次，共6次给药。

对治疗组评估抗肿瘤活性(通过随时间测量肿瘤生长抑制)。如果一个或两个肿瘤达到2,000mm³则将小鼠从研究移出。在第一次给药后第60个研究日，所有留在研究中的小鼠完全无肿瘤，并测定远端效应与存活优势。对于全身性给药的组合组7，即以25μg/小鼠(于0.5％甘油/4％葡萄糖中)每周静脉内给药一次共3次给药的CRX-601+以25μg/小鼠每周二次经腹膜内给药共6次给药的OX86，10只小鼠中有7只无肿瘤(对于右侧腹和左侧腹肿瘤二者)(图38)。对于组合组8，即以25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)每周一次瘤内给药共3次给药的CRX-601+以25μg/小鼠每周二次腹膜内给药共6次给药的OX86，10只小鼠中有3只显示二侧肿瘤完全消退，即使只有左侧腹肿瘤接受瘤内注射(图39)。对于组合组12，即以25μg/小鼠(在DOPC/CHOL脂质体中)每周一次瘤内给药共3次给药的CRX-601+以25μg/小鼠每周二次腹膜内给药共6次给药的OX86，10只小鼠中有5只显示二侧肿瘤完全消退，即使只有左侧腹肿瘤接受瘤内注射(图40)。因此，CRX-601制剂经瘤内给药与OX86经腹膜内给药的组合，会呈现出远端效应(组8与12)。局部左侧腹肿瘤的瘤内注射会导致远端右侧腹肿瘤消退。在三个组合组7、8与12中，在存活优势方面无统计学差异性。与所有载体与同种型对照相比，以及与所有CRX-601和OX86单一疗法组相比，组7在存活上呈现出统计学显著的增加(***p-值≤0.006)。相比于组10的瘤内脂质体载体+OX86，组12的组合显示在存活上显示统计学显著的增加(**p-值＝0.006)，尽管其相对组11，即25μg/小鼠的CRX-601脂质体制剂+大鼠IgG1不是统计学显著的(p-值＝0.119)。相比于组4，即以25μg/小鼠(在0.5％甘油/4％葡萄糖中)瘤内给药的CRX-601+大鼠IgG1，组8的组合在存活上显示统计学显著的增加(*p-值＝0.013)，尽管其相对组6，即瘤内给药的载体(0.5％甘油/4％葡萄糖)+OX86不是统计学显著的(p-值＝0.5)。图41显示所有组别的存活曲线。

实施例6：在体外细胞培养中于24小时的对人CD4+T细胞(A)、树突状细胞(B)和单核细胞(C)使用一定范围内浓度(0.01–1000ng/ml)的CRX601处理诱导的OX40表达。

实验描述:进行体外人类外周血单核细胞(PBMC)测试，以评估CRX601对OX40表达的作用。检查新鲜分离的人PBMC的活力，并将其培养于AIM-V无血清的培养基中，密度为于24-孔的无组织培养物处理的板中每孔二百万个细胞。PBMC以一系列给药浓度(0.01μg/ml–1,000μg/ml，包括载体空白组)的CRX-601刺激24小时。培养结束后，收集细胞以通过流式细胞术评估OX40表达。在T细胞、树突状细胞和单核细胞上CRX601对OX40受体表达的快速上调证实了CRX601上调抗OX40抗体的靶点，其可加强抗OX40抗体的治疗活性，并导致TLR4+OX40组合体内的协同抗肿瘤活性。

OX40抗体序列表

序列表

<110> 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司

<120> 组合及其用途和治疗

<130> PU65949

<160> 47

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 1

Asp Tyr Ser Met His

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 2

Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

<210> 3

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 3

Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 4

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 5

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 458

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 6

actagtacca ccatggcttg ggtgtggacc ttgctattcc tgatggcagc tgcccaaagt 60

atccaagcac aggttcagtt ggtgcagtct ggatctgagc tgaagaagcc tggagcctca 120

gtcaaggttt cctgcaaggc ttctggttat accttcacag actattcaat gcactgggtg 180

cgacaggctc caggacaagg tttaaagtgg atgggctgga taaacactga gactggtgag 240

ccaacatatg cagatgactt caagggacgg tttgtcttct ctttggacac ctctgtcagc 300

actgcctatt tgcagatcag cagcctcaaa gctgaggaca cggctgtgta ttactgtgct 360

aatccctact atgattacgt ctcttactat gctatggact actggggtca gggaaccacg 420

gtcaccgtct cctcaggtaa gaatggcctc tcaagctt 458

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 7

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 8

Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr

1 5

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<211> 9

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 9

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr

1 5

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<211> 107

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 11

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 12

<211> 416

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 12

gctagcacca ccatggagtc acagattcag gtctttgtat tcgtgtttct ctggttgtct 60

ggtgttgacg gagacattca gatgacccag tctccatcct ccctgtccgc atcagtggga 120

gacagggtca ccatcacctg caaggccagt caggatgtga gtactgctgt agcctggtat 180

caacagaaac caggaaaagc ccctaaacta ctgatttact cggcatccta cctctacact 240

ggagtccctt cacgcttcag tggcagtgga tctgggacgg atttcacttt caccatcagc 300

agtctgcagc ctgaagacat tgcaacatat tactgtcagc aacattatag tactcctcgg 360

acgttcggtc agggcaccaa gctggaaatc aaacgtaagt agaatccaaa gaattc 416

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 13

Ser His Asp Met Ser

1 5

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 14

Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Glu

1 5 10 15

Arg

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 15

His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 16

<211> 120

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 16

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met

50 55 60

Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr

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Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 17

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 17

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met

50 55 60

Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

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Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 451

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 18

actagtacca ccatggactt cgggctcagc ttggttttcc ttgtccttat tttaaaaagt 60

gtacagtgtg aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tagtgcagcc tggagggtcc 120

ctgagactct cctgtgcagc ctctgaatac gagttccctt cccatgacat gtcttgggtc 180

cgccaggctc cggggaaggg gctggagttg gtcgcagcca ttaatagtga tggtggtagc 240

acctactatc cagacaccat ggagagacga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac 300

tcactgtacc tgcaaatgaa cagtctgagg gccgaggaca cagccgtgta ttactgtgca 360

agacactatg atgattacta cgcctggttt gcttactggg gccaagggac tatggtcact 420

gtctcttcag gtgagtccta acttcaagct t 451

<210> 19

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 19

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His

1 5 10 15

<210> 20

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<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 20

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 21

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<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 21

Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 22

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 22

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

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Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 23

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 24

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 24

gctagcacca ccatggagac agacacactc ctgttatggg tactgctgct ctgggttcca 60

ggttccactg gtgaaattgt gctgacacag tctcctgcta ccttatcttt gtctccaggg 120

gaaagggcca ccctctcatg cagggccagc aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat 180

atgcactggt accaacagaa accaggacag gctcccagac tcctcatcta tcttgcatcc 240

aacctagaat ctggggtccc tgccaggttc agtggcagtg ggtctgggac agacttcacc 300

ctcaccatca gcagcctaga gcctgaggat tttgcagttt attactgtca gcacagtagg 360

gagcttccgc tcacgttcgg cggagggacc aaggtcgaga tcaaacgtaa gtacactttt 420

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<211> 5

<212> PRT

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<400> 25

Asp Ala Trp Met Asp

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<211> 19

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 26

Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

1 5 10 15

Val Asn Gly

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<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 27

Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5

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<211> 414

<212> DNA

<213> Mus sp.

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atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60

gtgaagcttg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120

tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180

gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240

tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300

tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360

gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 414

<210> 29

<211> 138

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 29

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 30

<211> 448

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 30

actagtacca ccatgtactt gggactgaac tatgtattca tagtttttct cttaaatggt 60

gtccagagtg aagtgaagct ggaggagtct ggaggaggct tggtgcaacc tggaggatcc 120

atgaaactct cttgtgctgc ctctggattc acttttagtg acgcctggat ggactgggtc 180

cgccagtctc cagagaaggg gcttgagtgg gttgctgaaa ttagaagcaa agctaataat 240

catgcaacat actatgctga gtctgtgaat gggaggttca ccatctcaag agatgattcc 300

aaaagtagtg tctacctgca aatgaacagc ttaagagctg aagacactgg catttattac 360

tgtacgtggg gggaagtgtt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc 420

tcctcaggtg agtccttaaa acaagctt 448

<210> 31

<211> 138

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 31

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 32

Lys Ser Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala

1 5 10

<210> 33

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 33

Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro

1 5

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<212> PRT

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<400> 34

Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Thr

1 5

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<211> 378

<212> DNA

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<400> 35

atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60

gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120

atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180

ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240

aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300

gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360

accaagctgg agctgaaa 378

<210> 36

<211> 126

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 36

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

35 40 45

Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

<210> 37

<211> 413

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 37

gctagcacca ccatgagacc gtctattcag ttcctggggc tcttgttgtt ctggcttcat 60

ggtgctcagt gtgacatcca gatgacacag tctccatcct cactgtctgc atctctggga 120

ggcaaagtca ccatcacttg caagtcaagc caagacatta acaagtatat agcttggtac 180

caacacaagc ctggaaaagg tcctaggctg ctcatacatt acacatctac attacagcca 240

ggcatcccat caaggttcag tggaagtggg tctgggagag attattcctt cagcatcagc 300

aacctggagc ctgaagatat tgcaacttat tattgtctac agtatgataa tcttctcacg 360

ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgtaagtaca cttttctgaa ttc 413

<210> 38

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 38

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

35 40 45

Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引物

<400> 39

cgctgttttg acctccatag 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引物

<400> 40

tgaaagatga gctggaggac 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引物

<400> 41

ctttcttgtc caccttggtg 20

<210> 42

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引物

<400> 42

gctgtcctac agtcctcag 19

<210> 43

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引物

<400> 43

acgtgccaag catcctcg 18

<210> 44

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 44

atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60

gtgaagctgg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120

tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180

gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240

tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300

tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360

gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcagcctcc 420

accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480

gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660

tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720

tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780

gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840

acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900

gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960

taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020

aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080

aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140

aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200

gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260

tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320

gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380

agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407

<210> 45

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 45

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

180 185 190

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

225 230 235 240

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

245 250 255

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

340 345 350

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460

Leu Ser Pro Gly Lys

465

<210> 46

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 46

atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60

gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120

atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180

ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240

aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300

gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360

accaagctgg agctgaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480

agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540

agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600

agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660

agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702

<210> 47

<211> 233

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 47

Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His

1 5 10 15

Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp

35 40 45

Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp

100 105 110

Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr

115 120 125

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

130 135 140

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

165 170 175

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

195 200 205

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

210 215 220

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

Claims

1.结合OX40的抗原结合蛋白(ABP)和TLR4调节子的组合，其中所述ABP调节OX40。

2.权利要求1所述的组合，其中结合至OX40的ABP为包含以下的人源化单克隆抗体：包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区CDR1：SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:13；包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区CDR2：SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:14；包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区CDR3：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:15；包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区CDR1：SEQ ID NO:7和SEQID NO:19；包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区CDR2：SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:20；和包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区CDR3：SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:21。

3.权利要求1或2所述的组合，其中所述结合至OX40的ABP为包含以下的人源化单克隆抗体：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO.3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO.8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

4.权利要求1至3任一项所述的组合，其中所述结合至OX40的ABP为包含重链可变区的抗体，该重链可变区包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：SEQID NO:4和SEQ ID NO:5，其中所述抗体进一步包括包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区：SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11。

5.权利要求1至4任一项所述的组合，其中所述结合至OX40的ABP为包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；该轻链可变区包含SEQID NO:11的氨基酸序列。

6.权利要求1至5任一项所述的组合，其中所述TLR4调节子为TLR4激动剂。

7.权利要求1至6任一项所述的组合，其中所述TLR4调节子为氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯(AGP)。

8.权利要求1至7任一项所述的组合，其中所述TLR4调节子为选自以下的化合物：式I和式Ia。

9.权利要求1至8任一项所述的组合，其中所述TLR4调节子选自：CRX-601；CRX-547；CRX-602；和CRX-527。

10.权利要求1至9任一项所述的组合，其中所述TLR4调节子具有如下所示的式CRX-601：

11.在有需要的人类患者中治疗癌症的方法，包括向患者给药权利要求1至10任一项的组合连同可药用的载体和可药用的稀释剂中的至少一种。

12.药物组合物，其包含治疗有效量的结合至人OX40的OX40抗体和包含治疗有效量的TLR4激动剂的第二药物组合物。

13.权利要求12所述的药物组合物，其中所述结合至人OX40的抗体包含具有选自以下的氨基酸序列的VH区：与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，且所述抗体包含具有选自以下的氨基酸序列的VL：与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；和与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，且其中所述TLR4激动剂为CRX-601。

14.在有需要的人类患者中治疗癌症的方法，包括向患者给药治疗有效量的权利要求12或13任一项所述的药物组合物。

15.权利要求14所述的治疗方法，其中所述抗体和TLR4激动剂以选自以下的途径给药于患者：同时；以任何顺序相继；全身；静脉内；和瘤内。

16.权利要求14或15所述的治疗方法，其中所述OX40抗体被静脉内给药，且所述TLR4激动剂被瘤内给药。

17.权利要求14至16任一项所述的治疗方法，其中所述癌症选自：黑素瘤；肺癌；非小细胞肺癌(NSCLC)；肾癌；肾细胞癌(RCC)；乳腺癌；转移性乳腺癌；三阴性乳腺癌(TNBC)；头颈癌；结肠癌；结肠直肠癌(CRC)；卵巢癌；胰腺癌；肝癌；肝细胞癌(HCC)；前列腺癌；膀胱癌；胃癌；液体肿瘤；实体瘤；造血系统肿瘤；白血病；非霍奇金淋巴瘤(NHL)；淋巴瘤；和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

18.权利要求17所述的治疗方法，其中所述人类具有多于一种的实体瘤，且其中所述TLR4激动剂被瘤内给药于所述人类的单一肿瘤，且其中未给药TLR4的至少一种实体瘤的肿瘤尺寸减少。

19.权利要求1至10任一项的组合用于制备药物的用途。

20.权利要求1至10任一项的组合用于治疗癌症的用途。