KR20180032641A - Ox40 항체 및 tlr4 조정제의 조합물 및 그의 용도 - Google Patents
Ox40 항체 및 tlr4 조정제의 조합물 및 그의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20180032641A KR20180032641A KR1020187005697A KR20187005697A KR20180032641A KR 20180032641 A KR20180032641 A KR 20180032641A KR 1020187005697 A KR1020187005697 A KR 1020187005697A KR 20187005697 A KR20187005697 A KR 20187005697A KR 20180032641 A KR20180032641 A KR 20180032641A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- cancer
- mouse
- ser
- Prior art date
Links
- UTKXLNYDAVEAKD-RDUCAROFSA-N CCCCCCCCCCC[C@H](CC(N[C@@H](CO[C@@H](C(C1OC(C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OCCCCCCCCCC)=O)NC(C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OCCCCCCCCCC)=O)OC(CO)[C@H]1O[O](O)(O)=O)C(O)=O)=O)OCCCCCCCCCC Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](CC(N[C@@H](CO[C@@H](C(C1OC(C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OCCCCCCCCCC)=O)NC(C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OCCCCCCCCCC)=O)OC(CO)[C@H]1O[O](O)(O)=O)C(O)=O)=O)OCCCCCCCCCC UTKXLNYDAVEAKD-RDUCAROFSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7008—Compounds having an amino group directly attached to a carbon atom of the saccharide radical, e.g. D-galactosamine, ranimustine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
OX40 조정제 및 TLR4 조정제의 조합물, 그의 제약 조성물, 그의 용도, 및 암에서의 용도를 포함한 상기 조합물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 본원에 개시되어 있다.
Description
본 발명은 포유동물에서 암을 치료하는 방법 및 이러한 치료에 유용한 조합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 항-OX40 항원 결합 단백질 (ABP) 및 1종 이상의 TLR4 조정제의 조합물에 관한 것이다.
암을 포함한 과다증식성 장애의 유효 치료는 종양학 분야에서 지속적인 목표이다. 일반적으로, 암은 세포 분열, 분화 및 아폽토시스 세포 사멸을 제어하는 정상 과정의 탈조절로부터 유발되고, 비제한적 성장, 국부 확장 및 전신 전이에 대한 잠재력을 갖는 악성 세포의 증식을 특징으로 한다. 정상 과정의 탈조절은 신호 전달 경로에서의 이상, 및 정상 세포에서 발견된 것들과 상이한 인자에 대한 반응을 포함한다.
면역요법은 과다증식성 장애를 치료하기 위한 하나의 접근법이다. 과학자 및 임상의가 다양한 유형의 암 면역요법의 개발에서 마주친 주요 장애물은 종양 퇴행으로 이어지는 강건한 항종양 반응을 탑재하기 위해 자기 항원 (암)에 대한 내성을 파괴하는 것이었다. 종양을 표적화하는 소분자 및 대분자 작용제의 전통적인 개발과는 달리, 암 면역요법은 보다 지속적인 효과를 유도하고 재발을 최소로 하기 위해 이펙터 세포의 기억 풀을 생성하는 잠재력을 갖는 면역계의 세포를 표적화한다.
OX40은 면역계의 다중 과정에 수반되는 공동-자극 분자이다. OX40 수용체에 결합하고 OX40 신호전달을 조정하는 항원 결합 단백질 및 항체는 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 암에 대한 면역요법으로서 개시되어 있다.
아미노알킬 글루코사미니드 포스페이트 (AGP)는 톨-유사 수용체 4 (TLR4)의 합성 리간드이다. AGP는 백신 보조제로서 및 면역화된 동물에서 시토카인 생산을 자극하고, 대식세포를 활성화하고, 선천성 면역 반응을 촉진하고, 항체 생산을 증대시키기 위한 것으로 유용한 것으로 공지되어 있다.
암의 치료에 있어서 최근 많은 진보가 있었지만, 암의 영향으로 고통받는 개체의 보다 효과적이고/거나 증진된 치료에 대한 필요가 남아있다. 항종양 면역을 증진시키기 위한 치료 접근법을 조합하는 것과 관련된 본원의 조합물 및 방법은 이 필요를 다룬다.
항-OX40 항원 결합 단백질 (ABP) 및 1종 이상의 TLR4 조정제의 조합물이 본원에 제공된다. 또한 본 발명의 조성물을 사용하여 인간에서 암을 치료하는 방법, 및 요법, 예컨대 암에 대한 요법을 위한 조합물의 용도가 제공된다. 추가로 암 치료를 필요로 하는 대상체에게, 예를 들어 1종 이상의 제약 조성물의 조합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체, 예컨대 인간의 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다.
한 실시양태에서, OX40 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 것이다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 항체의 CDR, 또는 개시된 CDR 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 항체의 VH, VL 또는 둘 다, 또는 개시된 VH 또는 VL 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, OX40 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 항체의 CDR, 또는 개시된 CDR 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 항체의 VH, VL 또는 둘 다, 또는 개시된 VH 또는 VL 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원의 도면에 제시된 CDR 또는 VH 또는 VL 서열, 또는 그에 대해 90% 동일성을 갖는 서열 중 1종 이상을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 6-7의 106-222 항체의 CDR, 예를 들어 도 6에 개시된 바와 같은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1, 2 및 3에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3, 및 예를 들어 각각 서열식별번호: 7, 8 및 9에 제시된 바와 같은 서열을 갖는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 106-222, Hu106 또는 Hu106-222 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원 도 6-7에 제시된 바와 같은 106-222 항체의 VH 및 VL 영역, 예를 들어 서열식별번호: 4에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 10에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 도 7에서와 같은 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 본원 도 6에서의 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 본원 도 7에서의 서열식별번호: 11에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 Hu106-222 항체 또는 106-222 항체 또는 Hu106 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 106-222, Hu106-222 또는 Hu106이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 10-11의 119-122 항체의 CDR, 예를 들어 각각 서열식별번호: 13, 14 및 15에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-122 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원 도 10에서의 서열식별번호: 16에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 본원 도 11에 제시된 바와 같은 서열식별번호: 22에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 17에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 23에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-122 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는, 예를 들어 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-222 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 14-15에 제시된 바와 같은 119-43-1 항체의 CDR을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같은 119-43-1 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 도 14-17에 제시된 바와 같은 119-43-1 항체의 VH 영역 중 1종 및 VL 영역 중 1종을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같은 119-43-1 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 본원 도 14-17에 개시된 바와 같은 119-43-1 또는 119-43-1 키메라이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같은 것이다. 추가 실시양태에서, 이 단락에 기재된 ABP 또는 항체 중 어느 1종은 인간화이다. 추가 실시양태에서, 이 단락에 기재된 ABP 또는 항체 중 어느 1종은 인간화 항체를 제조하기 위해 조작된다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 임의의 항-OX40 ABP 또는 항체의 임의의 마우스 또는 키메라 서열은 인간화 항체를 제조하기 위해 조작된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 다음을 포함한다: (a) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; (b) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; (c) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; (d) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; (e) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 (f) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 다음을 포함한다: (a) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; (b) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; (c) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; (d) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; (e) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 (f) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 다음을 포함한다: 서열식별번호: 1 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 2 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 및/또는 서열식별번호: 3 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3, 또는 그에 대해 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 다음을 포함한다: 서열식별번호: 7 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 8 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2 및/또는 서열식별번호: 9 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역.
추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 다음을 포함한다: 서열식별번호: 10, 11, 22 또는 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 ("VL"), 또는 서열식별번호: 10, 11, 22 또는 23의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 4, 5, 16 및 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 ("VH"), 또는 서열식별번호: 4, 5, 16 및 17의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 5의 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 서열, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 17의 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 23의 가변 경쇄 서열, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 12 또는 24의 핵산 서열, 또는 서열식별번호: 12 또는 24의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되는 가변 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 6 또는 18의 핵산 서열, 또는 서열식별번호: 6 또는 18의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되는 가변 중쇄를 포함한다.
또한 모노클로날 항체가 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 서열식별번호: 10 또는 22의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 10 또는 22의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 추가로 서열식별번호: 4 또는 16의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 4 또는 16의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체가 추가로 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 하기 서열 목록에 개시된 바와 같은 CDR, VH 영역 및 VL 영역, 및 항체, 및 이들을 코딩하는 핵산을 포함한다.
도 1a는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 TLR4 효능제 (CRX-527)의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이다.
도 1b는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86)의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이며; 도 1a에서의 대조군 처리는 도 1b에서의 것과 동일하다.
도 2는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 5 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이다.
도 3은 38일에 걸쳐 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 25 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 둘 다의 조합물의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이며; 도 2에서의 대조군 처리는 도 3에서의 것과 동일한 동물을 나타낸다.
도 4a-4f는 42일에 걸쳐 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서의 마우스 군에서 대조군 항체 (IgG), 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 5 또는 25 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 OX86 및 CRX-527의 조합물의 개별 마우스에서의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 도 4a-4f에서 연구에 남아있는 마우스에 대한 평균 군 종양 부피는 도 2-3에서의 플롯을 생성하는데 사용되었다.
도 5는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 4, 20 또는 100 ug의 TLR4 효능제 (CRX-601)의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다.
도 6-12는 본 발명의 ABP 및 항체의 서열, 예를 들어 CDR 및 VH 및 VL 서열을 보여준다.
도 13-17은 본 발명의 ABP 및 항체의 서열, 예를 들어 CDR 및 VH 및 VL 서열을 보여준다.
도 18은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 종양내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다.
도 19는 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 종양내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05).
도 20은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 TLR4 효능제 CRX-601의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 21은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 정맥내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다 (*p-값 ≤ 0.05).
도 22는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 항체 클론 OX-86, 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 ug 또는 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 23은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 ug 또는 25 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 24는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤0.05)
도 25는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여준다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 26 a-c는 투여 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 25 ug의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에서의 백혈구 및 면역-활성화의 증가를 보여주는 그래프이다.
도 27 a-b는 투여 1 및 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 래트 항-마우스 OX40R 수용체 항체 (클론 OX-86), 및 둘 다의 조합물 처리된 마우스에서의 면역-활성화 시토카인 TNF 알파 (a) 및 IL-12p70 (b)의 증가를 보여주는 그래프이다.
도 28은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨). (*p-값 <0.05)
도 29는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨). (*p-값 <0.05)
도 30은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05)
도 31은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05)
도 32는 연구 6에서 무종양 마우스의 CT-26 종양 리챌린지를 보여주는 그래프이다. 제1 투여 68일 후에, 무종양 마우스에게 CT-26 종양 세포를 리챌린지하였다. 나이브 대조군 마우스를 또한 포함시켰다. 종양이 대조군 나이브 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였지만, 종양을 거부하였으며, 처리군에서는 어떠한 종양도 성장하지 않았다.
도 33은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨.) (*p-값 <0.05)
도 34는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 종양내 투여에 대해 DOPC/CHOL 리포솜 제제가 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 35는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 36은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 37은 연구 7에서 무종양 마우스의 CT-26 종양 리챌린지를 보여주는 그래프이다. 제1 투여 80일 후에, 무종양 마우스에게 표시된 수의 마우스에서 CT-26 종양 세포를 리챌린지하였다. 나이브 대조군 마우스를 또한 포함시켰다. 종양이 대조군 나이브 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였지만, 종양을 거부하였으며, 처리군에서는 어떠한 종양도 성장하지 않았다.
도 38은 군 7의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스.
도 39는 군 8의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 좌측 측복부 종양에서 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스.
도 40은 군 12의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 좌측 측복부 종양에서 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
도 41a-41d는 연구 8에서 모든 처리군에 대한 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. 제60일까지 연구에 남아있는 마우스는 완전히 무종양이었다.
도 42a-c는 시험관내 세포 배양에서 24시간에서 인간 CD4+ T 세포 (a), 수지상 세포 (b), 및 단핵구 (c)에 대해 일정 범위의 농도 (0.01 - 1000 ng/ml)로의 CRX601 처리에 의해 유도된 OX40 발현의 상향조절을 보여주는 그래프이다.
도 1b는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86)의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이며; 도 1a에서의 대조군 처리는 도 1b에서의 것과 동일하다.
도 2는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 5 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이다.
도 3은 38일에 걸쳐 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 25 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 둘 다의 조합물의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 결과는 10마리 동물의 평균이며; 도 2에서의 대조군 처리는 도 3에서의 것과 동일한 동물을 나타낸다.
도 4a-4f는 42일에 걸쳐 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서의 마우스 군에서 대조군 항체 (IgG), 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 5 또는 25 ug의 TLR4 효능제 (CRX-527), 및 OX86 및 CRX-527의 조합물의 개별 마우스에서의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. 도 4a-4f에서 연구에 남아있는 마우스에 대한 평균 군 종양 부피는 도 2-3에서의 플롯을 생성하는데 사용되었다.
도 5는 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 4, 20 또는 100 ug의 TLR4 효능제 (CRX-601)의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다.
도 6-12는 본 발명의 ABP 및 항체의 서열, 예를 들어 CDR 및 VH 및 VL 서열을 보여준다.
도 13-17은 본 발명의 ABP 및 항체의 서열, 예를 들어 CDR 및 VH 및 VL 서열을 보여준다.
도 18은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 종양내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다.
도 19는 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 종양내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05).
도 20은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 TLR4 효능제 CRX-601의 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 21은 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 정맥내 투여된 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다 (*p-값 ≤ 0.05).
도 22는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 항체 클론 OX-86, 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 ug 또는 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 23은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 ug 또는 25 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 24는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (*p-값 ≤0.05)
도 25는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여준다. (*p-값 ≤ 0.05)
도 26 a-c는 투여 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 25 ug의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에서의 백혈구 및 면역-활성화의 증가를 보여주는 그래프이다.
도 27 a-b는 투여 1 및 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 ug의 TLR4 효능제 CRX-601, 래트 항-마우스 OX40R 수용체 항체 (클론 OX-86), 및 둘 다의 조합물 처리된 마우스에서의 면역-활성화 시토카인 TNF 알파 (a) 및 IL-12p70 (b)의 증가를 보여주는 그래프이다.
도 28은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨). (*p-값 <0.05)
도 29는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨). (*p-값 <0.05)
도 30은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05)
도 31은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05)
도 32는 연구 6에서 무종양 마우스의 CT-26 종양 리챌린지를 보여주는 그래프이다. 제1 투여 68일 후에, 무종양 마우스에게 CT-26 종양 세포를 리챌린지하였다. 나이브 대조군 마우스를 또한 포함시켰다. 종양이 대조군 나이브 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였지만, 종양을 거부하였으며, 처리군에서는 어떠한 종양도 성장하지 않았다.
도 33은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨.) (*p-값 <0.05)
도 34는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 종양내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물의 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 종양내 투여에 대해 DOPC/CHOL 리포솜 제제가 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 35는 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 36은 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 주사를 통해 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스의 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. (CRX-601 정맥내 투여에 대해 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클이 사용됨) (*p-값 <0.05).
도 37은 연구 7에서 무종양 마우스의 CT-26 종양 리챌린지를 보여주는 그래프이다. 제1 투여 80일 후에, 무종양 마우스에게 표시된 수의 마우스에서 CT-26 종양 세포를 리챌린지하였다. 나이브 대조군 마우스를 또한 포함시켰다. 종양이 대조군 나이브 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였지만, 종양을 거부하였으며, 처리군에서는 어떠한 종양도 성장하지 않았다.
도 38은 군 7의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스.
도 39는 군 8의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 좌측 측복부 종양에서 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스.
도 40은 군 12의 개별 마우스의 종양 성장을 보여주는 그래프이다: 총 3회 용량에 대해 좌측 측복부 종양에서 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
도 41a-41d는 연구 8에서 모든 처리군에 대한 생존 곡선을 보여주는 그래프이다. 제60일까지 연구에 남아있는 마우스는 완전히 무종양이었다.
도 42a-c는 시험관내 세포 배양에서 24시간에서 인간 CD4+ T 세포 (a), 수지상 세포 (b), 및 단핵구 (c)에 대해 일정 범위의 농도 (0.01 - 1000 ng/ml)로의 CRX601 처리에 의해 유도된 OX40 발현의 상향조절을 보여주는 그래프이다.
조성물 및 조합물
면역계의 개선된 기능은 암에 대한 면역요법의 목표이다. 이론에 얽매이지는 않지만, 면역계가 활성화되고 효과적으로 퇴행을 유발하거나 또는 종양을 제거하기 위해서는, 종양 층에서뿐만 아니라 면역계의 다양한 구획 사이에 효율적인 교차-대화가 존재하여야 하는 것으로 생각된다. 살종양 효과는 1개 이상의 단계, 예를 들어 미성숙 수지상 세포에 의한 항원의 흡수, 및 배액 림프절에서 각각 나이브 CD8 (세포독성) 및 CD4 (헬퍼) 림프구에 대한 성숙 수지상 세포에 의한 MHC I 및 II를 통한 처리된 항원의 제시에 좌우된다. 나이브 T 세포는 항원 제시 세포 (APC), 예컨대 수지상 세포 상에서 B7 패밀리의 공동-자극 분자와 결속하는 분자, 예컨대 CTLA-4 및 CD28을 발현한다. 면역 감시 동안 T 세포를 체크하기 위해, APC 상의 B7은 우선적으로 T 림프구 상의 억제 분자인 CTLA-4에 결합한다. 그러나, APC 상의 동족 펩티드 제시를 통한 T 세포 수용체 (TCR)와 MHC 부류 I 또는 II 수용체 사이의 결속 시에, 공동-자극 분자는 CTLA-4로부터 분리되고, 대신에 보다 낮은 친화성 자극 분자 CD28에 결합하여, T 세포 활성화 및 증식을 유발한다. 프라이밍된 T 림프구의 이러한 확장 집단은 이들이 원위 종양 부위로 이동함에 따라 이들에게 제시된 항원의 기억을 유지한다. 동족 항원을 보유하는 종양 세포와 마주치면, 이들은 세포용해 매개자, 예컨대 그랜자임 B 및 퍼포린을 통해 종양을 제거한다. 이러한 분명히 단순화된 순서의 사건들은 여러 시토카인, 공동-자극 분자 및 체크 포인트 조정제에 고도로 좌우되어 종양을 제거할 수 있는 세포의 기억 풀로 이들 프라이밍된 T 림프구를 활성화 및 분화시킨다.
따라서, 신생 면역요법 전략은 T 세포 공동-자극 분자, 예를 들어 OX40을 표적화하는 것이다. OX40 (예를 들어, hOX40 또는 hOX40R)은 다른 세포들 중에서도 활성화된 CD4 및 CD8 T 세포 상에 발현되는 종양 괴사 인자 수용체 패밀리 구성원이다. 그의 기능 중 하나는 이들 세포의 분화 및 장기간 생존에 있다. OX40에 대한 리간드 (OX40L)는 활성화된 항원-제시 세포에 의해 발현된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는, 예를 들어 OX40L의 경우와 중복되는 메카니즘으로 OX40에 "결속함으로써" OX40을 조정하고, T 세포의 성장 및/또는 분화를 촉진하고, 장기 기억 T-세포 집단을 증가시킨다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 OX40에 결합하고 결속한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 OX40을 조정한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 OX40L을 모방함으로써 OX40을 조정한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 효능제 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 OX40을 조정하고, T 세포의 증식을 유발한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 OX40을 조정하고, CD4 T 세포의 증식을 개선, 증대, 증진 또는 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 CD8 T 세포의 증식을 개선, 증대, 증진 또는 증가시킨다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 CD4 및 CD8 T 세포 둘 다의 증식을 개선, 증대, 증진 또는 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는, 예를 들어 CD4 또는 CD8 T 세포, 또는 CD4 및 CD8 T 세포 둘 다의 T 세포 기능을 증진시킨다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 이펙터 T 세포 기능을 증진시킨다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 및 항체는 CD8 T 세포의 장기간 생존을 개선, 증대, 증진 또는 증가시킨다. 추가 실시양태에서, 임의의 상기 효과는 종양 미세환경에서 발생한다.
T 조절 세포 (Treg) 뿐만 아니라 종양 자체 둘 다에 의해 생산된 매개자 (예를 들어, 형질전환 성장 인자 (TGF-β) 및 인터류킨-10 (IL-10))에 의한 종양 부위에서의 잠재적으로 강건한 면역억제 반응의 차단이 동일하게 중요하다. 암의 중요한 면역 발병기전은 종양 층 및 염증 부위에서 발견되는 Treg의 수반일 수 있다. 일반적으로, Treg 세포는 순환에서 자연적으로 발생하고, 면역계가 외부 병원체와 마주치고 그를 제거한 후에 경계 상태이지만 조용한 상태로 복귀하도록 돕는다. Treg 세포는 자기 항원에 대한 관용을 유지하도록 돕고, 기능에 있어서 자연적으로 억제성이며, 표현형상 CD4+, CD25+, FOXP3+ 세포를 특징으로 한다. 관용을 파괴하여 특정 암을 효과적으로 치료하기 위해, 요법의 한 모드는 종양 부위에서 Treg를 우선적으로 제거하는 것이다. 항종양 반응으로 이어지는 Treg 표적화 및 제거는 약한 면역원성인 종양과 비교하여 면역원성인 종양에서 보다 성공적이었다. 많은 종양은 전구체 CD4+25+ 세포가 Treg로서 FOXP3+ 표현형 및 기능을 획득하도록 유발함으로써 면역 반응을 방해할 수 있는 시토카인, 예를 들어 TGF-β를 분비한다.
수용체, 또는 예를 들어 수용체의 임의의 천연 또는 기존 기능을 변화시키기 위한 다른 표적 수단과 관련하여, 예를 들어 본원에 사용된 "조정하다"는, 수용체 또는 표적에 대한 천연 또는 인공 리간드의 결합에 영향을 미치는 것을 의미하고; 수용체 또는 표적을 통해 임의의 부분 또는 전체 입체형태적 변화 또는 신호전달을 개시하는 것을 포함하고, 또한 수용체 또는 표적과 그의 천연 또는 인공 리간드와의 부분 또는 전체 결합을 방지하는 것을 포함한다. 또한 막 결합된 수용체 또는 표적의 경우에 수용체 또는 표적이 막에서 다른 단백질 또는 분자와 상호작용하는 방식으로의 임의의 변화 또는 그의 천연 또는 비변화 상태와 비교하여 막 구획 내 임의의 국재화 (또는 다른 분자와의 공동-국재화)의 변화가 포함된다. 따라서, 조정제는 표적 또는 수용체를 조정하는 화합물 또는 리간드 또는 분자이다. "조정하다"는 효능작용, 예를 들어 신호전달, 뿐만 아니라 길항작용, 또는 비변화 또는 비조정 상태로 일어나는 리간드 또는 화합물 또는 분자와의 상호작용 또는 신호전달의 차단을 포함한다. 따라서, 조정제는 효능제 또는 길항제일 수 있다. 추가로, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 모든 조정제가 1종의 표적 또는 수용체에 대한 절대 선택성을 가질 것이 아니라, 여전히 그 표적 또는 수용체에 대한 조정제로 간주된다는 것을 인식할 것이며; 예를 들어 TLR4 조정제는 또한 또 다른 TLR에 결속할 수 있지만, 여전히 TLR4 조정제로 간주된다. 다른 조정제는 다중 특이성을 갖는 것으로, 예컨대 TLR7/8 조정제는 TLR7 및 TLR8 둘 다를 조정하는 것으로 공지되어 있다. 이러한 공지된 이중 또는 다중 특이성을 갖는 분자는 각각의 그의 표적의 조정제로 간주되며; 즉, TLR7/8 조정제는 본원에 사용된 TLR7 조정제이고 마찬가지로 TLR7/8 조정제는 본원에 사용된 TLR8 조정제이다.
표적 또는 수용체의 "효능제"는 표적 또는 수용체와 상호작용하는 천연 리간드 또는 분자의 1종 이상의 기능을 모방하는 분자 또는 화합물 또는 리간드이고, 수용체를 통한 1종 이상의 신호전달 사건을 개시하는 것, 천연 리간드의 1종 이상의 기능을 모방하는 것, 수용체를 통한 공지된 기능수행 또는 신호전달에서 보이는 1종 이상의 부분 또는 전체 입체형태적 변화를 개시하는 것을 포함한다.
따라서, 한 실시양태에서, OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 종양 환경 내에서 다른 T 세포에 대한 Treg 세포의 억제 효과를 억제한다.
축적 증거는 종양에서 T 이펙터 세포에 대한 Treg의 비가 항종양 반응과 상관관계가 있다는 것을 시사한다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 OX40 ABP 또는 항체는 T 이펙터 수 및 기능을 증대시키고 Treg 기능을 억제하도록 OX40을 조정한다.
OX40의 항종양 효과를 증진, 증대, 개선, 증가 및 달리 변화시키는 것은 본 발명의 목적이다. 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체 및 또 다른 화합물, 예컨대 본원에 기재된 TLR 조정제의 조합물이 본원에 기재된다.
따라서, 본원에 사용된 용어 "본 발명의 조합물"은 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 예컨대 AGP를 포함하는 조합물을 지칭하며, 이들 각각은 본원에 기재된 바와 같이 개별적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 상호교환가능하게 사용되며, 단수 형태이든 또는 복수 형태이든 악성 형질전환을 겪거나 또는 이상 또는 비조절 성장 또는 과다증식을 유발하는 세포 변화를 겪은 세포를 지칭한다. 이러한 변화 또는 악성 형질전환은 통상적으로 이러한 세포가 숙주 유기체에 대해 병적이 되도록 하며, 따라서 병적이 되거나 될 수 있으며 개입으로부터의 이익이 요구되거나 그로부터 이익을 얻을 수 있는 전암 또는 전암성 세포가 또한 포함되도록 의도된다. 원발성 암 세포 (즉, 악성 형질전환 부위 근처에서 수득되는 세포)는 널리 확립된 기술, 예컨대 조직학적 검사에 의해 비-암성 세포로부터 용이하게 구별될 수 있다. 본원에 사용된 암 세포의 정의는 원발성 암 세포, 뿐만 아니라 암 세포 선조로부터 유래된 임의의 세포를 포함한다. 이는 전이된 암 세포, 및 암 세포로부터 유래된 시험관내 배양물 및 세포주를 포함한다. 통상적으로 고형 종양으로 나타나는 일종의 암을 지칭하는 경우에, "임상적으로 검출가능한" 종양은, 예를 들어 CAT 스캔, MR 영상화, X선, 초음파 또는 촉진과 같은 절차에 의해 종양 덩이에 기반하여 검출가능하고/거나 환자로부터 수득가능한 샘플에서의 1종 이상의 암-특이적 항원의 발현으로 인해 검출가능한 것이다. 다시 말해서, 본원의 용어는 임상의가 전암, 종양, 상피내 성장, 뿐만 아니라 후기 전이성 성장으로 지칭하는 것을 비롯하여, 세포, 신생물, 암 ?? 임의의 단계의 종양을 포함한다. 종양은 액상 종양을 의미하는 조혈 종양, 예를 들어 혈액 세포의 종양 등일 수 있다. 이러한 종양에 기반한 임상 상태의 구체적 예는 백혈병, 예컨대 만성 골수구성 백혈병 또는 급성 골수구성 백혈병; 골수종, 예컨대 다발성 골수종; 림프종 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "작용제"는 조직, 계, 동물, 포유동물, 인간 또는 다른 대상체에서 목적하는 효과를 생성하는 물질을 의미한다. 따라서, 용어 "항신생물제"는 조직, 계, 동물, 포유동물, 인간 또는 다른 대상체에서 항신생물성 효과를 생성하는 물질을 의미한다. 용어 "작용제"는 단일 화합물 또는 2종 이상의 화합물의 조합물 또는 조성물일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 및 그의 파생어는 치료 요법을 의미한다. 특정한 상태와 관련하여, 치료하는은 다음을 의미한다: (1) 상태 또는 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상을 호전시키는 것; (2) (a) 상태를 야기하거나 또는 그의 원인이 되는 생물학적 캐스케이드에서의 1종 이상의 지점 또는 (b) 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상을 방해하는 것; (3) 상태와 연관된 증상, 효과 또는 부작용 중 1종 이상 또는 상태 또는 그의 치료와 연관된 증상, 효과 또는 부작용 중 1종 이상을 완화시키는 것; 또는 (4) 상태 또는 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상의 진행을 늦추는 것.
본원에 사용된 "예방"은 상태 또는 그의 생물학적 징후의 가능성 또는 중증도를 실질적으로 감소시키기 위한, 또는 이러한 상태 또는 그의 생물학적 징후의 발병을 지연시키기 위한 약물의 예방적 투여를 의미한다. 통상의 기술자는 "예방"이 절대 용어가 아님을 인지할 것이다. 예방 요법은, 예를 들어 대상체가 높은 암 발생 위험이 있는 것으로 간주되는 경우, 예컨대 대상체가 강력한 암 가족력을 갖는 경우 또는 대상체가 발암물질에 노출된 바 있는 경우에 적절하다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은, 예를 들어 연구원 또는 임상의에 의해 추구되는 조직, 계, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출할 약물 또는 제약 작용제의 양을 의미한다. 또한, 용어 "치료 유효량"은 이러한 양을 받지 않은 상응하는 대상체와 비교하여, 질환, 장애 또는 부작용의 개선된 치료, 치유, 예방 또는 호전, 또는 질환 또는 장애의 진행 속도에서의 감소를 유발하는 임의의 양을 의미한다. 용어는 정상적인 생리학적 기능을 증진시키기에 효과적인 양을 그의 범주 내에 또한 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은, 예를 들어 연구원 또는 임상의에 의해 추구되는 조직, 계, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출할 약물 또는 제약 작용제의 양을 의미한다. 또한, 용어 "치료 유효량"은 이러한 양을 받지 않은 상응하는 대상체와 비교하여, 질환, 장애 또는 부작용의 개선된 치료, 치유, 예방 또는 호전, 또는 질환 또는 장애의 진행 속도에서의 감소를 유발하는 임의의 양을 의미한다. 용어는 정상적인 생리학적 기능을 증진시키기에 효과적인 양을 그의 범주 내에 또한 포함한다.
본원에 사용된 용어 "조합" 및 그의 문법적 변형은 화합물 A (OX-40 ABP) 및 화합물 B (TLR4 효능제) 또는 그의 제약상 허용되는 염의 치료 유효량의 동시 투여 또는 임의의 방식의 개별 순차적 투여를 의미한다. 또한, 화합물이 동일한 투여 형태로 투여되는지는 중요하지 않으며, 예를 들어 1종의 화합물은 정맥내로 투여될 수 있고, 다른 화합물은 종양내로 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "조합 키트"는 본 발명에 따른 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는데 사용되는 제약 조성물 또는 조성물들을 의미한다. 둘 다의 화합물이 동시에 투여되는 경우에, 조합 키트는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염을 단일 제약 조성물, 예컨대 정제, 또는 개별 제약 조성물 중에 함유할 수 있다. 화합물이 동시에 투여되지 않는 경우에, 조합 키트는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염을 개별 제약 조성물 중에 함유할 것이다. 조합 키트는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염을 단일 패키지 내의 개별 제약 조성물 중에 또는 개별 패키지 내의 개별 제약 조성물 중에 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 다음 성분을 포함하는 조합 키트를 제공한다:
제약상 허용되는 담체와 함께, 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및
제약상 허용되는 담체와 함께, 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염.
또 다른 실시양태에서, 조합 키트는 하기 성분:
제약상 허용되는 담체와 함께, 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및
제약상 허용되는 담체와 함께, 화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염
을 포함하며, 상기 성분은 순차적, 개별 및/또는 동시 투여에 적합한 형태로 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 조합 키트는 다음을 포함한다:
화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제1 용기; 및
화합물 B 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제2 용기, 및 상기 제1 및 제2 용기를 함유하기 위한 용기 수단.
"조합 키트"는 또한 설명서, 예컨대 투여량 및 투여 설명서에 의해 제공될 수 있다. 이러한 투여량 및 투여 설명서는, 예를 들어 약물 제품 라벨에 의해 의사에게 제공되는 종류의 것일 수 있거나, 또는 의사에 의해 제공되는 종류의 것, 예컨대 환자에 대한 설명서일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "화합물 A2"는 인간 OX-40에 대한 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 의미한다. 적합하게는 화합물 A2는 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 제시된 바와 같은 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 모노클로날 항체를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "화합물 B2"는 화학식 I 또는 화학식 Ia의 TLR4 효능제를 의미한다. 적합하게는 화합물 B2는 TLR4 효능제 CRX-601을 의미한다.
적합하게는, 본 발명의 조합물은 "명시된 기간" 이내에 투여된다.
본원에 사용된 용어 "명시된 기간" 및 그의 문법적 변형은 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나와 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 투여 사이의 시간 간격을 의미한다. 달리 정의되지 않는 한, 명시된 기간은 동시 투여를 포함할 수 있다. 달리 정의되지 않는 한, 명시된 기간은 하루 동안의 화합물 A2 및 화합물 B2의 투여를 지칭한다.
적합하게는, 화합물이 "명시된 기간" 이내에 투여되고 동시에 투여되지 않는 다면, 이들은 둘 다 서로에 대해 약 24시간 이내에 투여되며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 24시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 12시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 12시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 11시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 11시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 10시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 10시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 9시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 9시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 8시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 8시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 7시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 7시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 6시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 6시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 5시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 5시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 4시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 4시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 3시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 3시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 2시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 2시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 1시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 1시간일 것이다. 본원에 사용된 약 45분 미만 간격의 화합물 A2 및 화합물 B2의 투여는 동시 투여로 간주된다.
적합하게는, 본 발명의 조합물이 "명시된 기간" 동안 투여되는 경우에, 화합물들은 "지속 기간" 동안 공-투여될 것이다.
본원에 사용된 용어 "지속 기간" 및 그의 문법적 변형은 본 발명의 화합물 둘 다가 나타낸 연속 일수 동안 투여된다는 것을 의미한다. 달리 정의되지 않는 한, 연속 일수는 치료 시작으로 개시되거나 또는 치료 종료로 종결되는 것은 아니며, 단지 연속 일수가 치료 과정 동안의 일부 시점에 이루어지는 것이 요구된다.
"명시된 기간" 투여에 관하여: 적합하게는, 둘 다의 화합물은 적어도 1일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 1일일 것이고; 적합하게는, 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 3일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 3일일 것이고; 적합하게는, 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 5일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 5일일 것이고; 적합하게는, 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 7일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 7일일 것이고; 적합하게는, 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 14일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 14일일 것이고; 적합하게는, 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 30일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 30일일 것이다.
적합하게는, 화합물이 "명시된 기간" 동안 투여되지 않는 경우에, 이들은 순차적으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "순차적 투여" 및 그의 문법적 변형은 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 2일 이상 동안 1일 1회 투여되고, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 후속적으로 연속 2일 이상 동안 1일 1회 투여되는 것을 의미한다. 또한, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나와 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 순차적 투여 사이에 휴약기를 이용하는 것이 본원에서 고려된다. 본원에 사용된 휴약기는 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나의 순차적 투여 후 및 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 투여 전에 화합물 A2 및 화합물 B2 중 어느 것도 투여되지 않는 일수의 기간일 것이다. 적합하게는 휴약기는 다음으로부터 선택된 일수의 기간이다: 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 및 14일.
순차적 투여에 관하여: 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 30일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 30일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 14일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 7일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 7일 동안 투여된다.
적합하게는, 화합물 B2가 순서상 먼저 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 투여될 것이다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 14일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 7일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 7일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 7일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3일 동안 투여된다.
"명시된 기간" 투여 및 "순차적" 투여에 이어서 반복 투여가 후속될 수 있거나 또는 교차 투여 프로토콜이 후속될 수 있으며, 반복 투여 또는 교차 투여 프로토콜 전에 휴약기가 선행될 수 있는 것으로 이해된다.
본 발명의 방법은 또한 암 치료의 다른 치료 방법과 함께 사용될 수 있다.
요법에 사용하기 위해, 본 발명의 조합물의 치료 유효량을 미가공 화학물질로서 투여하는 것이 가능할 수 있지만, 조합물을 제약 조성물 또는 조성물들로 제공하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 화합물 A2 및/또는 화합물 B2, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본 발명의 조합물은 상기 기재된 바와 같다. 담체(들)는 제제의 다른 성분과 상용성이고 제약 제제화할 수 있고 그의 수용자에게 유해하지 않다는 관점에서 허용가능해야 한다. 본 발명의 또 다른 측면에 따라 화합물 A2 및/또는 화합물 B2를 1종 이상의 제약상 허용되는 담체와 혼합하는 것을 포함하는, 제약 제제의 제조 방법이 또한 제공된다. 상기 나타낸 바와 같이, 이용되는 제약 조합물의 이러한 요소는 개별 제약 조성물로 제공될 수 있거나 또는 하나의 제약 제제로 함께 제제화될 수 있다.
제약 제제는 단위 용량당 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제공될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같이, 용량당 활성 성분의 양은 치료될 상태, 투여 경로 및 환자의 연령, 체중 및 상태에 좌우될 것이다. 바람직한 단위 투여 제제는 활성 성분의 1일 용량 또는 하위-용량, 또는 그의 적절한 분획을 함유하는 것이다. 또한, 이러한 제약 제제는 제약 기술분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
화합물 A2 및 화합물 B2는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 종양내, 질 및 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척수강내 및 경막외 포함)를 포함한다. 바람직한 경로는, 예를 들어 조합물의 수용자의 상태 및 치료될 암에 따라 달라질 수 있는 것으로 인지될 것이다. 또한 투여되는 각각의 작용제는 동일한 또는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있으며 화합물 A2 및 화합물 B2가 제약 조성물/제제 중에 함께 배합될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
본 발명의 조합물의 치료 유효량 (또는 조합물의 각각의 성분의 치료 유효량)의 투여는, 조합물이 성분 화합물의 치료 유효량의 개별 투여와 비교하였을 때 하기 개선된 특성 중 1종 이상을 제공할 것이라는 점에서 개별 성분 화합물에 비해 유리하다: i) 가장 활성인 단일 작용제보다 더 큰 항암 효과; ii) 상승작용적 또는 고도로 상승작용적인 항암 활성; iii) 감소된 부작용 프로파일을 갖는 증진된 항암 활성을 제공하는 투여 프로토콜; iv) 독성 효과 프로파일의 감소; v) 치료 범위의 증가; 또는 vi) 성분 화합물 중 하나 또는 둘 다의 생체이용률의 증가.
본 발명은 본원의 성분 중 1종 이상 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본 발명의 조합물은 하나는 본 발명의 ABP 또는 항체를 포함하고 다른 것은 TLR4 조정제를 포함하며 이들 각각은 동일하거나 상이한 담체, 희석제 또는 부형제를 가질 수 있는 것인 2종의 제약 조성물을 포함할 수 있다. 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)는 제제의 다른 성분과 상용성이고 제약 제제화할 수 있고 그의 수용자에게 유해하지 않다는 관점에서 허용가능해야 한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 제제는 수성 또는 리포솜일 수 있다. 한 실시양태에서, 리포솜 제제는 DOPC/CHOL 리포솜 제제일 수 있다.
본 발명의 조합물의 성분 및 이러한 성분을 포함하는 제약 조성물은 임의의 순서로, 및 상이한 경로로 투여될 수 있으며; 성분 및 그를 포함하는 제약 조성물은 동시에 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라 본 발명의 조합물의 성분 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합하는 것을 포함하는, 제약 조성물의 제조 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 성분은 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 성분에 대해, 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 질 및 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척수강내 및 경막외 포함)를 포함한다. 바람직한 경로는, 예를 들어 조합물의 수용자의 상태 및 치료될 암에 따라 달라질 수 있다. 투여되는 각각의 작용제는 동일하거나 상이한 경로에 의해 투여될 수 있고, 성분은 함께 또는 개별 제약 조성물 중에 배합될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 종양내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여되고, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 다른 성분은 종양내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 모든 성분은 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여된다. 대안적 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 모든 성분은 종양내로 투여된다. 예를 들어 이 단락에서의 임의의 실시양태에서, 본 발명의 성분은 1종 이상의 제약 조성물로서 투여된다.
OX40에 결합하는 항원 결합 단백질 및 항체
"항원 결합 단백질 (ABP)"은 항체 또는 항체와 유사한 방식으로 기능하는 조작된 분자를 포함한, 항원에 결합하는 단백질을 의미한다. 이러한 대안적 항체 포맷은 트리아바디, 테트라바디, 미니안티바디 및 미니바디를 포함한다. 또한 본 개시내용에 따른 임의의 분자의 1종 이상의 CDR이 적합한 비-이뮤노글로불린 단백질 스캐폴드 또는 골격 상에 배열되어 있을 수 있는 대안적 스캐폴드, 예컨대 아피바디, SpA 스캐폴드, LDL 수용체 부류 A 도메인, 아비머 (예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301 참조) 또는 EGF 도메인이 포함된다. ABP는 또한 이러한 항체 또는 다른 분자의 항원 결합 단편을 포함한다. 추가로, 적절한 경쇄와 쌍을 이루는 경우에, ABP는 전장 항체, (Fab')2 단편, Fab 단편, 이중특이적 또는 이중파라토픽 분자 또는 그의 등가물 (예컨대 scFV, 비- 트리- 또는 테트라-바디, 탠드Ab 등)로 포맷화된 본 발명의 VH 영역을 포함할 수 있다. ABP는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4; 또는 IgM; IgA, IgE 또는 IgD인 항체 또는 그의 변형된 변이체를 포함할 수 있다. 항체 중쇄의 불변 도메인은 이에 따라 선택될 수 있다. 경쇄 불변 도메인은 카파 또는 람다 불변 도메인일 수 있다. ABP는 또한 항원 결합 영역 및 비-이뮤노글로불린 영역을 포함하는 WO86/01533에 기재된 유형의 키메라 항체일 수 있다.
따라서, 본원에서 본 발명의 ABP 또는 항-OX40 항원 결합 단백질은 OX40에 결합하는 것이고, 일부 실시양태에서, 하기 중 1종 이상을 수행한다: OX40을 통해 신호전달을 조정하거나, OX40의 기능을 조정하거나, OX40 신호전달을 효능작용하거나, OX40 기능을 자극하거나 또는 OX40 신호전달을 공동-자극한다. 미국 특허 9,006,399의 실시예 1은 OX40 결합 검정을 개시한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 기능을 확립하기 위한 다양한 다른 널리 공지된 검정을 용이하게 인식할 것이다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 항원 결합 도메인 및 임의로 이뮤노글로불린-유사 도메인 또는 그의 단편을 갖는 분자를 지칭하며, 모노클로날 (예를 들어 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE 및 그의 변형된 변이체), 재조합, 폴리클로날, 키메라, 인간화, 이중파라토픽, 이중특이적 및 이종접합체 항체, 또는 폐쇄된 입체형태 다중특이적 항체를 포함한다. "항체"는 이종, 동종, 동계 또는 그의 다른 변형된 형태를 포함하였다. 항체는 단리 또는 정제될 수 있다. 항체는 또한 재조합, 즉 재조합 수단에 의해 생산될 수 있으며; 예를 들어, 참조 항체에 대해 90% 동일한 항체는 관련 기술분야에 공지된 재조합 분자 생물학 기술을 사용하여 특정 잔기의 돌연변이유발에 의해 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 적절한 경쇄와 쌍을 이루는 경우에, 천연 항체의 구조로 포맷화될 수 있거나 또는 전장 재조합 항체, (Fab')2 단편, Fab 단편, 이중특이적 또는 이중파라토픽 분자 또는 그의 등가물 (예컨대 scFV, 비- 트리- 또는 테트라-바디, 탠드Ab 등)로 포맷화될 수 있는 본 발명의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 또는 그의 변형된 변이체일 수 있다. 항체 중쇄의 불변 도메인은 이에 따라 선택될 수 있다. 경쇄 불변 도메인은 카파 또는 람다 불변 도메인일 수 있다. 항체는 또한 항원 결합 영역 및 비-이뮤노글로불린 영역을 포함하는 WO86/01533에 기재된 유형의 키메라 항체일 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 ABP 및 항체가 OX40의 에피토프에 결합한다는 것을 인식할 것이다. ABP의 에피토프는 ABP가 결합하는 그의 항원의 영역이다. 2종의 ABP는, 각각이 다른 것의 항원에의 결합을 경쟁적으로 억제 (차단)하는 경우에 동일하거나 중첩된 에피토프에 결합한다. 즉, 1x, 5x, 10x, 20x 또는 100x 과량의 1종의 항체는 경쟁 항체가 결여된 대조군과 비교하여 경쟁적 결합 검정에서 측정된 바와 같이 적어도 50%, 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 다른 것의 결합을 억제한다 (예를 들어, 문헌 [Junghans, et al., Cancer Res. 50:1495, 1990] 참조). 대안적으로, 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 항원 내의 모든 아미노산 돌연변이가 본질적으로 다른 것의 결합을 감소 또는 제거하는 경우에, 2종의 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 추가로, 예를 들어 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소 또는 제거하는 경우에, 동일한 에피토프는 "중첩 에피토프"를 포함할 수 있다.
결합 강도는 본 발명의 ABP 또는 항체의 투약 및 투여에서 중요할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 OX40, 바람직하게는 인간 OX40에 고친화도로 결합한다. 예를 들어, 비아코어(Biacore)®에 의해 측정되는 경우에, 항체는 OX40, 바람직하게는 인간 OX40에 1-1000nM 또는 500nM 이하의 친화도 또는 200nM 이하의 친화도 또는 100nM 이하의 친화도 또는 50 nM 이하의 친화도 또는 500pM 이하의 친화도 또는 400pM 이하, 또는 300pM 이하의 친화도로 결합한다. 추가 측면에서 항체는 비아코어®에 의해 측정되는 경우에, 약 50nM 내지 약 200nM 또는 약 50nM 내지 약 150nM의 OX40, 바람직하게는 인간 OX40에 결합한다. 본 발명의 한 측면에서 항체는 OX40, 바람직하게는 인간 OX40에 100nM 미만의 친화도로 결합한다.
추가 실시양태에서, 결합은 비아코어®에 의해 측정된다. 친화도는 하나의 분자, 예를 들어 본 발명의 항체의, 또 다른 것, 예를 들어 그의 표적 항원에 대한 단일 결합 부위에서의 결합의 강도이다. 항체의 그의 표적에 대한 결합 친화도는 평형 방법 (예를 들어 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 방사선면역검정 (RIA)), 또는 동역학 (예를 들어 비아코어® 분석)에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 비아코어® 방법은 결합 친화도를 측정하는데 사용될 수 있다.
결합력은 다중 부위에서 2종의 분자의 서로에 대한 결합의 강도의 총 합계이며, 예를 들어 상호작용의 결합가가 고려된다.
한 측면에서, 본 발명의 ABP 또는 항체 및 OX40, 바람직하게는 인간 OX40 상호작용의 평형 해리 상수 (KD)는 100 nM 이하, 10 nM 이하, 2 nM 이하 또는 1 nM 이하이다. 대안적으로 KD는 5 내지 10 nM; 또는 1 내지 2 nM일 수 있다. KD는 1 pM 내지 500 pM; 또는 500 pM 내지 1 nM일 수 있다. 통상의 기술자는 KD 수치가 더 작을수록 결합이 더 강하다는 것을 인지할 것이다. KD의 역수 (즉, 1/KD)는 단위 M-1을 갖는 평형 회합 상수 (KA)이다. 통상의 기술자는 KA 수치가 더 클수록 결합이 더 강하다는 것을 인지할 것이다.
해리율 상수 (kd) 또는 "오프-레이트"는 한편으로는 ABP 또는 항체 및 다른 한편으로는 OX40, 바람직하게는 인간 OX40의 복합체의 안정성, 즉 초당 붕괴되는 복합체의 분율을 기재한다. 예를 들어, 0.01 s-1의 kd는 초당 1%의 복합체 붕괴와 동등하다. 한 실시양태에서, 해리율 상수 (kd)는 1x10-3 s-1 이하, 1x10-4 s-1 이하, 1x10-5 s-1 이하, 또는 1x10-6 s-1 이하이다. kd는 1x10-5 s-1 내지 1x10-4 s-1; 또는 1x10-4 s-1 내지 1x10-3 s-1일 수 있다.
본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체와 참조 항체 사이에, 예를 들어 OX40, OX40의 에피토프 또는 OX40의 단편에의 결합에 대한 경쟁은 경쟁 ELISA, FMAT 또는 비아코어®에 의해 결정될 수 있다. 한 측면에서, 경쟁 검정은 비아코어®에 의해 수행된다. 이 경쟁에 대한 여러 가능한 이유가 존재한다: 2종의 단백질이 동일 또는 중첩 에피토프에 결합할 수 있거나, 결합의 입체 억제가 존재할 수 있거나, 또는 제1 단백질의 결합이 제2 단백질의 결합을 방지 또는 감소시키는 항원에서의 입체형태적 변화를 유도할 수 있음.
본원에 사용된 "결합 단편"은 항원-결합 부위를 포함하며 본원에 정의된 바와 같은 OX40에 결합할 수 있는, 예를 들어 비제한적으로 모 또는 전장 항체의 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 본 발명의 ABP 또는 항체의 부분 또는 단편을 의미한다.
본 발명의 ABP 및 항체의 기능적 단편은 본원에서 고려된다.
따라서, "결합 단편" 및 "기능적 단편"은 무손상 항체의 Fc 단편이 결여되고, 순환으로부터 보다 신속하게 제거되고, 무손상 항체보다 더 적은 비-특이적 조직 결합을 가질 수 있는 Fab 및 F(ab')2 단편일 수 있다 (Wahl, et al., J. Nuc. Med. 24:316-325 (1983)). Fv 단편이 또한 포함된다 (Hochman, et al., Biochemistry 12:1130-1135 (1973); Sharon, et al., Biochemistry 15:1591-1594 (1976)). 이들 다양한 단편은 통상적인 기술, 예컨대 프로테아제 절단 또는 화학적 절단을 사용하여 생산된다 (예를 들어, 문헌 [Rousseaux, et al., Meth. Enzymol., 121:663-69 (1986)] 참조).
본원에 사용된 "기능적 단편"은 항원-결합 부위를 포함하며 모 ABP 또는 항체와 동일한 표적에 결합할 수 있는, 예를 들어 비제한적으로 동일한 에피토프에 결합할 수 있고, 또한 본원에 기재되거나 또는 관련 기술분야에 공지된 1종 이상의 조정 또는 다른 기능을 유지하는 본 발명의 ABP 또는 항체의 부분 또는 단편을 의미한다.
본 발명의 ABP 및 항체가 천연 항체의 구조로 포맷화될 수 있는 본 발명의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있으므로, 기능적 단편은 본원에 기재된 바와 같은 전장 ABP 또는 항체의 결합 또는 1종 이상의 기능을 유지하는 것이다. 따라서, 본 발명의 ABP 또는 항체의 결합 단편은 적절한 경쇄와 쌍을 이루는 경우에, VL 또는 VH 영역, (Fab')2 단편, Fab 단편, 이중특이적 또는 이중파라토픽 분자의 단편 또는 그의 등가물 (예컨대 scFV, 비- 트리- 또는 테트라-바디, 탠드Ab 등)을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "CDR"은 항원 결합 단백질의 상보성 결정 영역 아미노산 서열을 지칭한다. 이들은 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역이다. 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR (또는 CDR 영역)이 이뮤노글로불린의 가변 부분에 존재한다.
CDR 서열에 대한 다양한 넘버링 규정이 존재한다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다; 코티아 (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883), 카바트 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM (University of Bath) 및 접촉 (University College London). "최소 결합 단위"를 제공하기 위해, 카바트, 코티아, AbM 및 접촉 방법 중 적어도 2종을 사용하여 최소 중첩 영역을 결정할 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 하위부분일 수 있다. 항체의 구조 및 단백질 폴딩은 다른 잔기가 CDR 서열의 일부로 간주된다는 것을 의미할 수 있고, 통상의 기술자에 의해 그와 같이 이해될 것이다. CDR 정의 중 일부는 사용된 개별 간행물에 따라 달라질 수 있다는 것이 주목된다.
달리 언급되지 않는 한 및/또는 구체적으로 확인된 서열의 부재 하에, 본원에서 "CDR", "CDRL1", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1", "CDRH2", "CDRH3"에 대한 지칭은 임의의 공지된 규정에 따라 넘버링된 아미노산 서열을 지칭하며; 대안적으로, CDR은 가변 경쇄의 "CDR1", "CDR2", "CDR3" 및 가변 중쇄의 "CDR1", "CDR2" 및 "CDR3"으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 넘버링 규정은 카바트 규정이다.
본원에 사용된 용어 "CDR 변이체"는 적어도 1종, 예를 들어 1, 2 또는 3종의 아미노산 치환(들), 결실(들) 또는 부가(들)에 의해 변형된 CDR을 지칭하며, 여기서 CDR 변이체를 포함하는 변형된 항원 결합 단백질은 실질적으로 변형전 항원 결합 단백질의 생물학적 특징을 유지한다. 변형될 수 있는 각각의 CDR은 단독으로 또는 또 다른 CDR과 조합되어 변형될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 한 측면에서, 변형은 치환, 특히 예를 들어 표 1에 제시된 바와 같은 보존적 치환이다.
표 1
예를 들어, 변이체 CDR에서, 최소 결합 단위의 아미노산 잔기는 동일하게 유지될 수 있지만, 카바트 또는 코티아 정의(들)의 일부로서 CDR을 포함하는 플랭킹 잔기는 보존적 아미노산 잔기로 치환될 수 있다.
상기 기재된 바와 같은 변형된 CDR 또는 최소 결합 단위를 포함하는 이러한 항원 결합 단백질은 본원에서 "기능적 CDR 변이체" 또는 "기능적 결합 단위 변이체"로 지칭될 수 있다.
항체는 임의의 종의 것일 수 있거나 또는 교차 종에게 투여하기에 적합하도록 변형될 수 있다. 예를 들어 마우스 항체로부터의 CDR은 인간에게의 투여를 위해 인간화될 수 있다. 임의의 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 임의로 인간화 항체이다.
"인간화 항체"는 비인간 공여자 이뮤노글로불린으로부터 유래된 CDR을 갖고, 분자의 나머지 이뮤노글로불린-유래된 부분은 1종 (또는 1종 초과)의 인간 이뮤노글로불린(들)으로부터 유래된 것인 조작된 항체의 유형을 지칭한다. 추가로, 프레임워크 지지 잔기는 결합 친화도를 보존하기 위해 변경될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Queen, et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson, et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)] 참조). 적합한 인간 수용자 항체는 공여자 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해 통상적인 데이터베이스, 예를 들어 카바트® 데이터베이스, 로스 알라모스 데이터베이스, 및 스위스 단백질 데이터베이스로부터 선택된 것일 수 있다. 공여자 항체의 프레임워크 영역에 대한 상동성 (아미노산 기반)에 의해 특징화된 인간 항체는 공여자 CDR의 삽입을 위한 중쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 가변 프레임워크 영역을 제공하기에 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 공여할 수 있는 적합한 수용자 항체는 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 수용자 항체 중쇄 및 경쇄는 동일한 수용자 항체로부터 기원할 것이 요구되지 않는다는 것이 주목되어야 한다. 선행 기술은 이러한 인간화 항체를 생산하는 여러 방식을 기재한다 - 예를 들어 EP-A-0239400 및 EP-A-054951 참조.
추가 실시양태에서, 인간화 항체는 IgG인 인간 항체 불변 영역을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, IgG는 임의의 상기 참고문헌 또는 특허 공개에 개시된 바와 같은 서열이다.
뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대해, 용어 "동일한" 또는 "동일성"은 최적으로 정렬되고 적절한 삽입 또는 결실과 비교하였을 때 2개의 핵산 또는 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성의 정도를 나타낸다.
2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입할 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려한, 이들 서열이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, 동일성％ = 동일한 위치의 수/총 위치의 수 x 100). 2개의 서열 사이의 서열의 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 하기 기재된 바와 같은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
질의 핵산 서열과 대상 핵산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 백분율로 표현되는 "동일성" 값이며, 이는 대상 핵산 서열이 쌍별 BLASTN 정렬을 수행한 후 질의 핵산 서열과 100% 질의 적용범위를 가질 때 BLASTN 알고리즘에 의해 계산된다. 질의 핵산 서열과 대상 핵산 서열 사이의 이러한 쌍별 BLASTN 정렬은 국립 생명공학 연구소의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTN 알고리즘의 디폴트 세팅을 사용하고 낮은 복잡성 영역에 대한 필터를 턴 오프하여 수행한다. 중요하게는, 질의 핵산 서열은 본원의 1개 이상의 청구항에서 확인되는 핵산 서열에 의해 기재될 수 있다.
질의 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 백분율로 표현되는 "동일성" 값이며, 이는 대상 아미노산 서열이 쌍별 BLASTP 정렬을 수행한 후 질의 아미노산 서열과 100% 질의 적용범위를 가질 때 BLASTP 알고리즘에 의해 계산된다. 질의 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 이러한 쌍별 BLASTP 정렬은 국립 생명공학 연구소의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTP 알고리즘의 디폴트 세팅을 사용하고 낮은 복잡성 영역에 대한 필터를 턴 오프하여 수행한다. 중요하게는, 질의 아미노산 서열은 본원의 1개 이상의 청구항에서 확인되는 아미노산 서열에 의해 기재될 수 있다.
본원의 본 발명의 임의의 실시양태에서, ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원에 개시된 서열식별번호에 의해 정의된 바와 같이 제시 또는 언급된 서열에 대해 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91 또는 90 퍼센트 동일성을 갖는 어느 하나의 또는 모든 CDR, VH, VL을 가질 수 있다.
인간 OX40 수용체에 결합하는 ABP 및 항체 (즉, 항-OX40 ABP 및 항-인간 OX40 수용체 (hOX40R) 항체, 때때로 "항-OX40 ABP 또는 항-OX40 항체" 및/또는 그의 다른 변형으로 본원에서 지칭됨)가 본원에 제공된다. 이들 항체는 병리상태가 OX40 신호전달을 수반하는 급성 또는 만성 질환 또는 상태의 치료 또는 예방에 유용하다. 한 측면에서, 인간 OX40R에 결합하며 암 치료 또는 질환에 대한 치료로서 효과적인 항원 결합 단백질 또는 단리된 인간 항체 또는 이러한 단백질 또는 항체의 기능적 단편이, 예를 들어 또 다른 화합물 예컨대 TLR4 조정제 또는 TLR4 효능제와 조합되어 기재된다. 본원에 개시된 임의의 항원 결합 단백질 또는 항-OX40 항체는 의약으로서 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질 또는 항-OX40 항체 중 어느 1종 이상은 암, 예를 들어 본원에 개시된 것을 치료하기 위한 방법 또는 조성물에 사용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 단리된 항체는 OX40에 결합하고, 하기 유전자로부터 코딩되는 OX40에 결합할 수 있다: NCBI 수탁 번호 NP_003317, 진펩트(Genpept) 수탁 번호 P23510 또는 그에 대해 90 퍼센트 상동성 또는 90 퍼센트 동일성을 갖는 유전자. 본원에 제공된 단리된 항체는 하기 진뱅크 수탁 번호 중 하나를 갖는 OX40 수용체에 추가로 결합할 수 있다: AAB39944, CAE11757 또는 AAI05071.
OX40 수용체에 결합하고/거나 그를 조정하는 항원 결합 단백질 및 항체는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 본 발명의 예시적인 ABP 및 항체는, 예를 들어 국제 출원일 2012년 2월 9일 국제 공개 번호 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570), 및 국제 출원일 2011년 8월 23일 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시되어 있다. (임의의 정의가 상충되는 경우에, 본 출원이 우선함). 한 실시양태에서, 본 발명의 OX40 항체는 미국 특허 번호 9,163,085에 개시되어 있다.
TLR4 조정제
본 발명의 조합물은 TLR4 "조정제", 즉 TLR4를, 예를 들어 그에 결합하고 입체형태적 변화를 개시함으써 또는 TLR4에 결속하여 신호전달함으로써 조정하는 분자, TLR4 리간드와의 결합을 차단하는 분자를 포함한다.
한 실시양태에서, TLR4 조정제는 아미노알킬 글루코사미니드 포스페이트 화합물 (AGP)이다. TLR4는 박테리아 LPS (리포폴리사카라이드)를 인식하고, 활성화되는 경우에 선천성 면역 반응을 개시한다. AGP는 박테리아 LPS의 지질 A 단백질의 모노사카라이드 모방체이고, 화합물의 "아실 쇄" 상의 에테르 및 에스테르 연결로 개발되었다. 이들 화합물의 제조 방법은, 예를 들어 WO 2006/016997, 미국 특허 번호 7,288,640 및 6,113,918, 및 WO 01/90129에 공지 및 개시되어 있다. 다른 AGP 및 관련 방법은 미국 특허 번호 7,129,219, 미국 특허 번호 6,525,028 및 미국 특허 번호 6,911,434에 개시되어 있다. 본 발명의 조성물에 사용된 아실 쇄 상의 에테르 연결을 갖는 AGP는 WO 2006/016997에 공지 및 개시되어 있다. WO 2006/016997의 단락 [0019] 내지 [0021]에서 화학식 (III)에 따라 제시 및 기재된 AGP 화합물은 본원에 청구된 방법 및 조합물에 사용될 수 있다.
본 발명에 사용된 AGP 화합물은 하기와 같은 화학식 1로서 제시된 구조를 갖는다:
여기서
m은 0 내지 6이고;
n은 0 내지 4이고;
X는 O 또는 S, 바람직하게는 O이고;
Y는 O 또는 NH이고;
Z는 O 또는 H이고;
각각의 R1, R2, R3은 C1-20 아실 및 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R4는 H 또는 Me이고;
R5는 -H, -OH, -(Cl-C4) 알콕시, -PO3R8R9, -OPO3R8R9, -SO3R8, -OSO3R8, -NR8R9, -SR8, -CN, -NO2, -CHO, -CO2R8, 및 -CONR8R9로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R8 및 R9는 각각 독립적으로 H 및 (Cl-C4) 알킬로부터 선택되고;
각각의 R6 및 R7은 독립적으로 H 또는 PO3H2이다.
화학식 1에서 통상적인 지방 아실 잔기 (즉, 2차 아실옥시 또는 알콕시 잔기, 예를 들어, R1O, R2O, 및 R3O)가 부착된 3' 입체생성 중심의 배위는 R 또는 S, 바람직하게는 R이다 (칸-인골드-프렐로그 우선순위 규칙에 의해 지정된 바와 같음). R4 및 R5가 부착된 아글리콘 입체생성 중심의 배위는 R 또는 S일 수 있다. 모든 입체이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 둘 다, 및 그의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 간주된다.
헤테로원자 X 및 아글리콘 질소 원자 사이의 탄소 원자의 수는 변수 "n"에 의해 결정되며, 이는 0 내지 4의 정수, 또는 0 내지 2의 정수일 수 있다.
통상적인 지방산 R1, R2, 및 R3의 쇄 길이는 약 6 내지 약 16개의 탄소, 또는 약 9 내지 약 14개의 탄소일 수 있다. 쇄 길이는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 실시양태는 R1, R2 및 R3이 6 또는 10 또는 12 또는 14인 쇄 길이를 포함한다.
화학식 1은 L/D-세릴, -트레오닐, -시스테이닐 에테르 및 에스테르 지질 AGP, 효능제 및 길항제 둘 다 및 그의 동족체 (n=1-4), 뿐만 아니라 다양한 카르복실산 생동배체를 포괄한다 (즉, R5는 염 형성 가능한 산성 기이고; 포스페이트는 글루코사민 유닛의 4- 또는 6- 위치에 존재할 수 있으며, 바람직하게는 4-위치에 존재함).
화학식 1의 AGP 화합물을 사용하는 본 발명의 한 실시양태에서, n은 0이고, R5는 CO2H이고, R6은 PO3H2이고, R7은 H이다. 이 AGP 화합물은 하기와 같은 화학식 1a의 구조로서 제시된다:
여기서 X는 O 또는 S이고; Y는 O 또는 NH이고; Z는 O 또는 H이고; 각각의 R1, R2, R3은 C1-20 아실 및 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; R4는 H 또는 메틸이다.
화학식 1a에서 통상적인 지방 아실 잔기 (즉, 2차 아실옥시 또는 알콕시 잔기, 예를 들어, R1O, R2O, 및 R3O)가 부착된 3' 입체생성 중심의 배위는 R 또는 S, 바람직하게는 R이다 (칸-인골드-프렐로그 우선순위 규칙에 의해 지정된 바와 같음). R4 및 CO2H가 부착된 아글리콘 입체생성 중심의 배위는 R 또는 S일 수 있다. 모든 입체이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 둘 다, 및 그의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 간주된다.
화학식 1a는 L/D-세릴, -트레오닐, -시스테이닐 에테르 또는 에스테르 지질 AGP, 효능제 및 길항제 둘 다를 포괄한다.
화학식 1 및 화학식 1a 둘 다에서, Z는 이중 결합에 의해 부착된 O 또는 각각 단일 결합에 의해 부착된 2개의 수소 원자이다. 즉, 화합물은 Z=Y=O인 경우에 에스테르-연결되고; Z =O 및 Y=NH인 경우에 아미드-연결되고; Z=H/H 및 Y=O인 경우에 에테르-연결된다.
화학식 1의 화합물은 CRX-601 및 CRX-527로 지칭된다. 그의 구조는 하기와 같이 제시된다:
추가적으로, 또 다른 바람직한 실시양태는 제시된 구조를 갖는 CRX-547을 사용한다. CRX-547
또 다른 실시양태는 AGP, 예컨대 보다 짧은 2차 아실 또는 알킬 쇄를 갖는 AGP에 대해 증가된 안정성을 제공하는 CRX-602 또는 CRX-526을 포함한다.
본 발명의 추가 실시양태에서, TLR4 조정제는 효능제이다. 추가 실시양태에서, 효능제인 TLR4 조정제는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: CRX-601, CRX-547 및 CRX-527.
AGP 완충제
본 발명의 한 실시양태에서, TLR4 조정제, 예컨대 AGP를 포함하는 조성물은 쯔비터이온성 완충제를 사용하여 완충된다. 본 발명의 한 실시양태에서, 쯔비터이온성 완충제는 아미노알칸술폰산 또는 적합한 염이다. 아미노알칸술폰산 완충제의 예는 HEPES, HEPPS/EPPS, MOPS, MOBS 및 PIPES를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 한 실시양태에서, 완충제는 인간에서 사용하기에, 예컨대 상업적 주사 제품에 사용하기에 적합한 제약상 허용되는 완충제이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 완충제는 HEPES이다.
치료 방법
본 발명의 조합물은 OX40 및/또는 TLR4의 결속이 유익한 장애에서 유용성을 갖는 것으로 여겨진다.
따라서, 본 발명은 또한 요법에서, 특히 OX40 및/또는 TLR4의 결속이 유익한 장애, 특히 암의 치료에서 사용하기 위한 본 발명의 조합물을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 TLR4 효능제, 예컨대 CRX-601과 인간화 모노클로날 OX40 항체와의 조합물을 사용하여 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 인간화 OX40 항체는 정맥내로 투여되고, TLR4 효능제는 종양내로 투여되어, 환자에서 종양(들) 내 압스코팔 효과를 유발한다.
본원에 사용된 용어 "압스코팔 효과"는 국부 치료가 단지 치료된 부위 뿐만이 아니라 원위 종양 부위에서도 종양 퇴행을 유발하는 현상을 의미한다. 문헌 [Postow, et al., N Engl J Med 366 (10): 925-31 (2012)].
본 발명의 추가 측면은 본 발명의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, OX40 및/또는 TLR4의 결속이 유익한 장애의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 추가 측면은 OX40 및/또는 TLR4의 결속이 유익한 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 조합물의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 장애는 암이다. 적합하게는, 본 발명은 암의 치료를 위한 본 발명의 조합물의 용도를 제공한다.
본 발명의 조합물을 사용한 치료에 적합한 암의 예는 두경부암, 유방암, 폐암, 결장암, 난소암 및 전립선암의 원발성 및 전이성 형태 둘 다를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합하게는 암은 다음으로부터 선택된다: 뇌암 (신경교종), 교모세포종, 성상세포종, 다형성 교모세포종, 바나얀-조나나 증후군, 코우덴병, 레르미트-두크로스병, 유방암, 염증성 유방암, 윌름스 종양, 유잉 육종, 횡문근육종, 상의세포종, 수모세포종, 결장암, 두경부암, 신장암, 폐암, 간암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 골육종, 골의 거대 세포 종양, 갑상선암, 림프모구성 T 세포 백혈병, 만성 골수 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발상-세포 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, AML, 만성 호중구성 백혈병, 급성 림프모구성 T 세포 백혈병, 형질세포종, 면역모세포성 대세포 백혈병, 외투 세포 백혈병, 다발성 골수종 거핵모구성 백혈병, 다발성 골수종, 급성 거핵구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 적백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종,, 비-호지킨 림프종, 림프모구성 T 세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 신경모세포종, 방광암, 요로상피암, 폐암, 외음부암, 자궁경부암, 자궁내막암, 신암, 중피종, 식도암, 타액선암, 간세포성암, 위암, 비인두암, 협부암, 구강암, GIST (위장 기질 종양) 및 고환암.
추가적으로, 치료될 암의 예는 바렛 선암종; 담도 암종; 유방암; 자궁경부암; 담관암종; 중추 신경계 종양, 예컨대 원발성 CNS 종양, 예컨대 교모세포종, 성상세포종 (예를 들어, 다형성 교모세포종) 및 상의세포종, 및 속발성 CNS 종양 (즉, 중추 신경계의 외부에서 기원하는 종양의 중추 신경계로의 전이); 결장직장암, 예컨대 대장 결장 암종; 위암; 두경부의 암종, 예컨대 두경부의 편평 세포 암종; 혈액암, 예컨대 백혈병 및 림프종, 예컨대 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병 (AML), 골수이형성 증후군, 만성 골수 백혈병, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 거핵모구성 백혈병, 다발성 골수종 및 적백혈병; 간세포성 암종; 폐암, 예컨대 소세포 폐암 및 비소세포 폐암; 난소암; 자궁내막암; 췌장암; 뇌하수체 선종; 전립선암; 신암; 육종; 피부암, 예컨대 흑색종; 및 갑상선암을 포함한다.
적합하게는, 본 발명은 다음으로부터 선택된 암을 치료하거나 또는 그의 중증도를 경감시키는 방법에 관한 것이다: 뇌암 (신경교종), 교모세포종, 성상세포종, 다형성 교모세포종, 반나얀-조나나 증후군, 코우덴병, 레르미트-두크로스병, 유방암, 결장암, 두경부암, 신장암, 폐암, 간암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종 및 갑상선암.
한 실시양태에서, 본 발명은 난소암, 유방암, 췌장암 및 전립선암으로부터 선택된 암을 치료하거나 또는 그의 중증도를 경감시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 인간을 포함한 포유동물에서 전암성 증후군을 치료하거나 또는 그의 중증도를 경감시키는 방법에 관한 것이며, 여기서 전암성 증후군은 다음으로부터 선택된다: 자궁경부 상피내 신생물, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 골수이형성 증후군, 재생불량성 빈혈, 자궁경부 병변, 피부 모반 (전흑색종), 전립선 상피내 (관내) 신생물 (PIN), 관 상피내 암종 (DCIS), 결장 폴립 및 중증 간염 또는 간경변증.
본 발명의 조합물은 단독으로 또는 1종 이상의 다른 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가 측면에서 본 발명의 조합물을 추가의 치료제 또는 치료제들과 함께 포함하는 추가의 조합물, 상기 조합물을 포함하는 조성물 및 의약, 및 요법에서의, 특히 OX40 및/또는 TLR4의 결속에 감수성인 질환의 치료에서의 상기 추가의 조합물, 조성물 및 의약의 용도를 제공한다.
실시양태에서, 본 발명의 조합물은 암 치료의 다른 치료 방법과 함께 사용될 수 있다. 특히, 항신생물 요법에서, 상기 언급된 것 이외의 다른 화학요법제, 호르몬제, 항체 작용제 뿐만 아니라 수술 및/또는 방사선 치료와의 조합 요법이 고려된다. 본 발명에 따른 조합 요법은 따라서 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체 및/또는 TLR4 조정제의 투여를 포함할 뿐만 아니라 다른 항신생물제를 포함한 다른 치료제의 임의적인 사용을 포함한다. 작용제의 이러한 조합물은 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있고, 개별적으로 투여되는 경우에 이는 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로, 시간상 가깝게 및 멀게 둘 다로 일어날 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조합물은 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 항신생물제를 포함한다.
한 실시양태에서, 추가의 항암 요법은 수술 및/또는 방사선요법이다.
한 실시양태에서, 추가의 항암 요법은 적어도 1종의 추가의 항신생물제이다.
치료될 감수성 종양에 대해 활성을 갖는 임의의 항신생물제가 조합물에 사용될 수 있다. 유용한 전형적인 항신생물제는 항미세관제, 예컨대 디테르페노이드 및 빈카 알칼로이드; 백금 배위 착물; 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬술포네이트, 니트로소우레아 및 트리아젠; 항생제, 예컨대 안트라시클린, 악티노마이신 및 블레오마이신; 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대 에피포도필로톡신; 항대사물, 예컨대 퓨린 및 피리미딘 유사체 및 항-폴레이트 화합물; 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대 캄프토테신; 호르몬 및 호르몬 유사체; 신호 전달 경로 억제제; 비-수용체 티로신 혈관신생 억제제; 면역요법제; 아폽토시스촉진제; 및 세포 주기 신호전달 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
항미소관제 또는 항유사분열제: 항미세관제 또는 항유사분열제는 세포 주기의 M 기 또는 유사분열기 동안 종양 세포의 미세관에 대해 활성인 기 특이적 작용제이다. 항미세관제의 예는 디테르페노이드 및 빈카 알칼로이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
천연 공급원으로부터 유래된 디테르페노이드는 세포 주기의 G2/M 기에서 작동하는 기 특이적 항암제이다. 디테르페노이드는 미세관의 β-튜불린 서브유닛에 결합함으로써 이 단백질을 안정화시키는 것으로 여겨진다. 이어서, 단백질의 해체가 억제되며 유사분열이 정지되고 세포 사멸이 이어지는 것으로 보인다. 디테르페노이드의 예는 파클리탁셀 및 그의 유사체 도세탁셀을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
파클리탁셀, (2R,3S)-N-벤조일-3-페닐이소세린을 갖는 5β,20-에폭시-1,2α,4,7β,10β,13α-헥사-히드록시탁스-11-엔-9-온 4,10-디아세테이트 2-벤조에이트 13-에스테르는 태평양주목 탁수스 브레비폴리아(Taxus brevifolia)로부터 단리된 천연 디테르펜 생성물이고, 주사액 탁솔(TAXOL)®로서 상업적으로 입수가능하다. 이는 테르펜의 탁산 패밀리의 구성원이다. 파클리탁셀은 미국에서 불응성 난소암의 치료에서의 임상 용도 (Markman, et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583 (1991); McGuire, et al., Ann. lntem, Med., 111:273 (989)) 및 유방암의 치료 (Holmes, et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797 (1991))에 대해 승인되었다. 파클리탁셀은 피부에서의 신생물 (Einzig, et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46 (2001)) 및 두경부 암종 (Forastire, et al., Sem. Oncol., 20:56, (1990))의 치료를 위한 잠재적 후보이다. 상기 화합물은 또한 다낭성 신장 질환 (Woo, et al., Nature, 368:750 (1994)), 폐암 및 말라리아의 치료에 대한 잠재력을 나타낸다. 파클리탁셀을 사용한 환자의 치료는 역치 농도 (50nM)를 초과하는 투여의 지속기간과 관련하여 골수 억제 (다중 세포 계통, 문헌 [Ignoff, et al., Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998])를 유발한다 (Kearns, et al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23 (1995)).
도세탁셀, 5β-20-에폭시-1,2α,4,7β,10β,13α-헥사히드록시탁스-11-엔-9-온 4-아세테이트 2-벤조에이트, 3수화물을 갖는 (2R,3S)- N-카르복시-3-페닐이소세린,N-tert-부틸 에스테르, 13-에스테르는 주사액 탁소테레(TAXOTERE)®로서 상업적으로 입수가능하다. 도세탁셀은 유방암의 치료에 대해 지시된다. 도세탁셀은 유럽 주목의 침엽으로부터 추출된 천연 전구체, 10-데아세틸-바카틴 III을 사용하여 제조된 파클리탁셀 q.v.의 반합성 유도체이다.
빈카 알칼로이드는 페리윙클 식물로부터 유래된 기 특이적 항신생물제이다. 빈카 알칼로이드는 튜불린에 특이적으로 결합함으로써 세포 주기의 M 기 (유사분열)에서 작용한다. 따라서, 결합된 튜불린 분자는 미세관으로 중합할 수 없다. 유사분열이 중기에서 정지되어 세포 사멸이 이어지는 것으로 여겨진다. 빈카 알칼로이드의 예는 빈블라스틴, 빈크리스틴 및 비노렐빈을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
빈블라스틴, 빈카류코블라스틴 술페이트는 주사액으로서 벨반(VELBAN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 이것이 다양한 고형 종양의 2차 요법으로서 지시되는 것이 가능하지만, 주로 고환암 및 다양한 림프종, 예컨대 호지킨병; 및 림프구성 및 조직구성 림프종의 치료에서 지시된다. 골수억제는 빈블라스틴의 용량-제한 부작용이다.
빈크리스틴, 빈카류코블라스틴, 22-옥소-, 술페이트는 주사액으로서 온코빈(ONCOVIN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 빈크리스틴은 급성 백혈병의 치료에 대해 지시되고, 또한 호지킨 및 비-호지킨 악성 림프종에 대한 치료 요법에서 용도가 발견된 바 있다. 탈모증 및 신경계 효과는 빈크리스틴의 가장 흔한 부작용이고, 그보다 덜한 정도로 골수억제 및 위장 점막염 영향이 발생한다.
비노렐빈, 3',4'-디데히드로 -4'-데옥시-C'-노르빈카류코블라스틴 [R-(R*,R*)-2,3-디히드록시부탄디오에이트 (1:2)(염)]은 비노렐빈 타르트레이트의 주사액 (나벨빈(NAVELBINE)®)으로서 상업적으로 입수가능하며, 반합성 빈카 알칼로이드이다. 비노렐빈은 다양한 고형 종양, 특히 비소세포 폐암, 진행성 유방암 및 호르몬 불응성 전립선암의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제, 예컨대 시스플라틴과 조합되어 지시된다. 골수억제는 비노렐빈의 가장 흔한 용량-제한 부작용이다.
백금 배위 착물: 백금 배위 착물은 DNA와 상호작용성인 비-기 특이적 항암제이다. 백금 착물은 종양 세포에 진입하고, 아쿠아화를 겪고, DNA와 가닥내 및 가닥간 가교를 형성하여 종양에 유해한 생물학적 영향을 유발한다. 백금 배위 착물의 예는 옥살리플라틴, 시스플라틴 및 카르보플라틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
시스플라틴, 시스-디암민디클로로백금은 주사액으로서 플라티놀(PLATINOL)®로서 상업적으로 입수가능하다. 시스플라틴은 주로 전이성 고환암 및 난소암 및 진행성 방광암의 치료에서 지시된다.
카르보플라틴, 백금, 디암민 [1,1-시클로부탄-디카르복실레이트(2-)-O,O']은 주사액으로서 파라플라틴(PARAPLATIN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 카르보플라틴은 주로 진행성 난소 암종의 1차 및 2차 치료에서 지시된다.
알킬화제: 알킬화제는 비-기 항암 특이적 작용제 및 강한 친전자체이다. 전형적으로, 알킬화제는 DNA 분자의 친핵성 모이어티, 예컨대 포스페이트, 아미노, 술프히드릴, 히드록실, 카르복실, 및 이미다졸 기를 통한 DNA에 대한 공유 연결을 알킬화에 의해 형성한다. 이러한 알킬화는 핵산 기능을 파괴하여 세포 사멸을 유발한다. 알킬화제의 예는 질소 머스타드, 예컨대 시클로포스파미드, 멜팔란, 및 클로람부실; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴; 및 트리아젠, 예컨대 다카르바진을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
시클로포스파미드, 2-[비스(2-클로로에틸)아미노]테트라히드로-2H-1,3,2-옥사자포스포린 2-옥시드 1수화물은 주사액 또는 정제로서 시톡산(CYTOXAN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 시클로포스파미드는 악성 림프종, 다발성 골수종, 및 백혈병의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다.
멜팔란, 4-[비스(2-클로로에틸)아미노]-L-페닐알라닌은 주사액 또는 정제로서 알케란(ALKERAN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 멜팔란은 다발성 골수종, 및 난소의 비-절제가능 상피 암종의 완화적 치료에 대해 지시된다. 골수 억제는 멜팔란의 가장 흔한 용량-제한 부작용이다.
클로람부실, 4-[비스(2-클로로에틸)아미노]벤젠부탄산은 류케란(LEUKERAN)® 정제로서 상업적으로 입수가능하다. 클로람부실은 만성 림프성 백혈병, 및 악성 림프종, 예컨대 림프육종, 거대 여포성 림프종, 및 호지킨병의 완화적 치료에 대해 지시된다.
부술판, 1,4-부탄디올 디메탄술포네이트는 밀레란(MYLERAN)® 정제로서 상업적으로 입수가능하다. 부술판은 만성 골수 백혈병의 완화적 치료에 대해 지시된다.
카르무스틴, 1,3-[비스(2-클로로에틸)-1-니트로소우레아는 동결건조된 물질의 단일 바이알로서 비크뉴(BiCNU)®로서 상업적으로 입수가능하다. 카르무스틴은 뇌 종양, 다발성 골수종, 호지킨병 및 비-호지킨 림프종에 대해 단일 작용제로서 또는 다른 작용제와 조합되어 완화적 치료에 대해 지시된다.
다카르바진, 5-(3,3-디메틸-1-트리아제노)-이미다졸-4-카르복스아미드는 물질의 단일 바이알로서 DTIC-돔(DTIC-Dome)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 다카르바진은 전이성 악성 흑색종의 치료에 대해 지시되고, 호지킨병의 2차 치료에 대해 다른 작용제와 조합되어 지시된다.
항생 항신생물제: 항생 항신생물제는 DNA와 결합하거나 또는 그에 삽입되는 비-기 특이적 작용제이다. 전형적으로, 이러한 작용은 안정한 DNA 복합체 또는 가닥 파괴를 유발하여, 핵산의 통상의 기능을 파괴함으로써 세포 사멸을 유발한다. 항생 항신생물제의 예는 악티노마이신, 예컨대 닥티노마이신, 안트로시클린, 예컨대 다우노루비신 및 독소루비신; 및 블레오마이신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
악티노마이신 D로서 또한 공지된 닥티노마이신은 주사가능한 형태로 코스메겐(COSMEGEN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 닥티노마이신은 윌름스 종양 및 횡문근육종의 치료에 대해 지시된다.
다우노루비신, (8S-시스-)-8-아세틸-10-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-α-L-릭소-헥소피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라히드로-6,8,11-트리히드록시-1-메톡시-5,12 나프타센디온 히드로클로라이드는 리포솜 주사가능한 형태로서 다우녹솜(DAUNOXOME)®으로서 또는 주사가능한 형태로서 세루비딘(CERUBIDINE)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 다우노루비신은 급성 비림프구성 백혈병 및 진행성 HIV 연관 카포시 육종의 치료에서 완화 유도에 대해 지시된다.
독소루비신, (8S, 10S)-10-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-α-L-릭소-헥소피라노실)옥시]-8-글리콜로일, 7,8,9,10-테트라히드로-6,8,11-트리히드록시-1-메톡시-5,12 나프타센디온 히드로클로라이드는 주사가능한 형태로서 루벡스(RUBEX)®로서 또는 아드리아미신 RDF(ADRIAMYCIN RDF)®로서 상업적으로 입수가능하다. 독소루비신은 주로 급성 림프모구성 백혈병 및 급성 골수모구성 백혈병의 치료에 대해 지시되지만, 일부 고형 종양 및 림프종의 치료에 또한 유용한 성분이다.
블레오마이신, 스트렙토미세스 베르티실루스(Streptomyces verticillus)의 균주로부터 단리된 세포독성 당펩티드 항생제의 혼합물은 블레녹산(BLENOXANE)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 블레오마이신은 편평 세포 암종, 림프종 및 고환 암종의 완화적 치료로서 단일 작용제로서 또는 다른 작용제와 조합되어 지시된다.
토포이소머라제 II 억제제: 토포이소머라제 II 억제제는 에피포도필로톡신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
에피포도필로톡신은 맨드레이크 식물로부터 유래된 기 특이적 항신생물제이다. 에피포도필로톡신은 전형적으로 토포이소머라제 II 및 DNA와 함께 3원 복합체를 형성하여 DNA 가닥 파괴를 유발함으로써 세포 주기의 S 및 G2 기에 있는 세포에 영향을 미친다. 가닥 파괴가 축적되고 세포 사멸이 이어진다. 에피포도필로톡신의 예는 에토포시드 및 테니포시드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
에토포시드, 4'-데메틸-에피포도필로톡신 9[4,6-0-(R )-에틸리덴-β-D-글루코피라노시드]는 주사액 또는 캡슐로서 베페시드(VePESID)®로서 상업적으로 입수가능하며, 통상적으로 VP-16으로 공지되어 있다. 에토포시드는 고환암 및 비소세포 폐암의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다.
테니포시드, 4'-데메틸-에피포도필로톡신 9[4,6-0-(R )-테닐리덴-β-D-글루코피라노시드]는 주사액으로서 부몬(VUMON)®으로서 상업적으로 입수가능하며, 통상적으로 VM-26으로 공지되어 있다. 테니포시드는 소아에서 급성 백혈병의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다.
항대사물 신생물제: 항대사물 신생물제는 DNA 합성을 억제하거나, 또는 퓨린 또는 피리미딘 염기 합성을 억제하여 DNA 합성을 제한함으로써 세포 주기의 S 기 (DNA 합성)에서 작용하는 기 특이적 항신생물제이다. 따라서, S 기는 진행되지 않고, 세포 사멸이 이어진다. 항대사물 항신생물제의 예는 플루오로우라실, 메토트렉세이트, 시타라빈, 메르캅토퓨린, 티오구아닌 및 겜시타빈을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
5-플루오로우라실, 5-플루오로-2,4- (1H,3H)피리미딘디온은 플루오로우라실로서 상업적으로 입수가능하다. 5-플루오로우라실의 투여는 티미딜레이트 합성의 억제로 이어지고, 또한 RNA 및 DNA 둘 다 내로 혼입된다. 그 결과는 전형적으로 세포 사멸이다. 5-플루오로우라실은 유방, 결장, 직장, 위 및 췌장 암종의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다. 다른 플루오로피리미딘 유사체는 5-플루오로 데옥시우리딘 (플록수리딘) 및 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트를 포함한다.
시타라빈, 4-아미노-1-β-D-아라비노푸라노실-2 (1H)-피리미디논은 시토사르-유(CYTOSAR-U)®로서 상업적으로 입수가능하며, 통상적으로 Ara-C로 공지되어 있다. 시타라빈은 성장하는 DNA 쇄 내로의 시타라빈의 말단 혼입에 의해 DNA 쇄 신장을 억제함으로써 S-기에서 세포 기 특이성을 나타내는 것으로 여겨진다. 시타라빈은 급성 백혈병의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다. 다른 시티딘 유사체는 5-아자시티딘 및 2',2'-디플루오로데옥시시티딘 (겜시타빈)을 포함한다.
메르캅토퓨린, 1,7-디히드로-6H-퓨린-6-티온 1수화물은 퓨린톨(PURINETHOL)®로서 상업적으로 입수가능하다. 메르캅토퓨린은 아직 상세불명의 메카니즘에 의해 DNA 합성을 억제함으로써 S-기에서 세포 기 특이성을 나타낸다. 메르캅토퓨린은 급성 백혈병의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다. 유용한 메르캅토퓨린 유사체는 아자티오프린이다.
티오구아닌, 2-아미노-1,7-디히드로-6H-퓨린-6-티온은 타블로이드(TABLOID)®로서 상업적으로 입수가능하다. 티오구아닌은 아직 상세불명의 메카니즘에 의해 DNA 합성을 억제함으로써 S-기에서 세포 기 특이성을 나타낸다. 티오구아닌은 급성 백혈병의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다. 다른 퓨린 유사체는 펜토스타틴, 에리트로히드록시노닐아데닌, 플루다라빈 포스페이트 및 클라드리빈을 포함한다.
겜시타빈, 2'-데옥시-2', 2'-디플루오로시티딘 모노히드로클로라이드 (β-이성질체)는 겜자르(GEMZAR)®로서 상업적으로 입수가능하다. 겜시타빈은 S-기에서 및 G1/S 경계를 통한 세포 진행의 차단에 의해 세포 기 특이성을 나타낸다. 겜시타빈은 국부 진행성 비소세포 폐암의 치료에서 시스플라틴과 조합되어 지시되고, 국부 진행성 췌장암의 치료에서 단독으로 지시된다.
메토트렉세이트, N-[4[[(2,4-디아미노-6-프테리디닐) 메틸]메틸아미노] 벤조일]-L-글루탐산은 메토트렉세이트 소듐으로서 상업적으로 입수가능하다. 메토트렉세이트는 퓨린 뉴클레오티드 및 티미딜레이트의 합성에 요구되는 디히드로폴산 리덕타제의 억제를 통해 DNA 합성, 복구 및/또는 복제를 억제함으로써 S-기에서 특이적으로 세포 기 효과를 나타낸다. 메토트렉세이트는 융모막암종, 수막 백혈병, 비-호지킨 림프종, 및 유방, 두부, 경부, 난소 및 방광의 암종의 치료에서 단일 작용제로서 또는 다른 화학요법제와 조합되어 지시된다.
토포이소머라제 I 억제제: 캄프토테신 및 캄프토테신 유도체를 포함하는 캄프토테신은 토포이소머라제 I 억제제로서 입수가능하거나 또는 개발 중에 있다. 캄프토테신 세포독성 활성은 그의 토포이소머라제 I 억제 활성과 관련된 것으로 여겨진다. 캄프토테신의 예는 이리노테칸, 토포테칸, 및 하기 기재된 7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20-캄프토테신의 다양한 광학 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
이리노테칸 HCl, (4S)-4,11-디에틸-4-히드록시-9-[(4-피페리디노피페리디노) 카르보닐옥시]-1H-피라노[3',4',6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H,12H)-디온 히드로클로라이드는 주사액 캄프토사르(CAMPTOSAR)®로서 상업적으로 입수가능하다. 이리노테칸은 그의 활성 대사물 SN-38과 함께 토포이소머라제 I - DNA 복합체에 결합하는 캄프토테신의 유도체이다. 세포독성은 토포이소머라제 I : DNA : 이리노테칸 또는 SN-38 3원 복합체와 복제 효소와의 상호작용에 의해 유발된 복구불가능한 이중 가닥 파괴의 결과로서 발생하는 것으로 여겨진다. 이리노테칸은 결장 또는 직장의 전이성 암의 치료에 대해 지시된다.
토포테칸 HCl, (S)-10-[(디메틸아미노)메틸]-4-에틸-4,9-디히드록시-1H-피라노[3',4',6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14-(4H,12H)-디온 모노히드로클로라이드는 주사액 하이캄틴(HYCAMTIN)®으로서 상업적으로 입수가능하다. 토포테칸은, 토포이소머라제 I - DNA 복합체에 결합하고 DNA 분자의 비틀림 변형에 반응하여 토포이소머라제 I에 의해 유발되는 단일 가닥 파괴의 재라이게이션을 방지하는 캄프토테신의 유도체이다. 토포테칸은 난소암 및 소세포 폐암의 전이성 암종의 2차 치료에 대해 지시된다.
호르몬 및 호르몬 유사체: 호르몬 및 호르몬 유사체는 호르몬(들) 및 암의 성장 및/또는 성장의 결여 사이에 관계가 있는 암을 치료하는데 유용한 화합물이다. 암 치료에 유용한 호르몬 및 호르몬 유사체의 예는 소아에서 악성 림프종 및 급성 백혈병의 치료에 유용한 아드레노코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니손 및 프레드니솔론; 부신피질 암종, 및 에스트로겐 수용체를 함유하는 호르몬 의존성 유방 암종의 치료에 유용한 아미노글루테티미드 및 다른 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸, 레트라졸, 보라졸, 및 엑세메스탄; 호르몬 의존성 유방암 및 자궁내막 암종의 치료에 유용한 프로게스트린, 예컨대 메게스트롤 아세테이트; 전립선 암종 및 양성 전립선 비대의 치료에 유용한 에스트로겐, 안드로겐, 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 시프로테론 아세테이트 및 5α-리덕타제, 예컨대 피나스테리드 및 두타스테리드; 호르몬 의존성 유방 암종 및 다른 감수성 암의 치료에 유용한 항에스트로겐, 예컨대 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 아이오독시펜, 뿐만 아니라 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM), 예컨대 미국 특허 번호 5,681,835, 5,877,219, 및 6,207,716에 기재된 것; 및 전립선 암종의 치료를 위한 황체형성 호르몬 (LH) 및/또는 여포 자극 호르몬 (FSH)의 방출을 자극하는 고나도트로핀-방출 호르몬 (GnRH) 및 그의 유사체, 예를 들어, LHRH 효능제 및 길항제, 예컨대 고세렐린 아세테이트 및 류프롤리드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
신호 전달 경로 억제제: 신호 전달 경로 억제제는 세포내 변화를 일으키는 화학적 과정을 차단 또는 억제하는 억제제이다. 본원에 사용된 이러한 변화는 세포 증식 또는 분화이다. 본 발명에 유용한 신호 전달 경로 억제제는 수용체 티로신 키나제, 비-수용체 티로신 키나제, SH2/SH3 도메인 차단제, 세린/트레오닌 키나제, 포스파티딜 이노시톨-3 키나제, 미오이노시톨 신호전달 및 Ras 종양유전자의 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
여러 단백질 티로신 키나제는 세포 성장의 조절에 수반되는 다양한 단백질 내의 특정 티로실 잔기의 인산화를 촉매한다. 이러한 단백질 티로신 키나제는 수용체 또는 비-수용체 키나제로서 광범위하게 분류될 수 있다.
수용체 티로신 키나제는 세포외 리간드 결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 티로신 키나제 도메인을 갖는 막횡단 단백질이다. 수용체 티로신 키나제는 세포 성장의 조절에 수반되고, 일반적으로 성장 인자 수용체로 지칭된다. 예를 들어 과다발현 또는 돌연변이에 의한, 많은 이들 키나제의 부적절한 또는 비제어된 활성화, 즉 비정상적 키나제 성장 인자 수용체 활성은 비제어된 세포 성장을 유발하는 것으로 제시된 바 있다. 따라서, 이러한 키나제의 이상 활성은 악성 조직 성장과 연결되어 왔다. 따라서, 이러한 키나제의 억제제는 암 치료 방법을 제공할 수 있다. 성장 인자 수용체는, 예를 들어 표피 성장 인자 수용체 (EGFr), 혈소판 유래 성장 인자 수용체 (PDGFr), erbB2, erbB4, ret, 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFr), 이뮤노글로불린-유사 및 표피 성장 인자 동일성 도메인을 갖는 티로신 키나제 (TIE-2), 인슐린 성장 인자 -I (IGFI) 수용체, 대식세포 콜로니 자극 인자 (cfms), BTK, ckit, cmet, 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 수용체, Trk 수용체 (TrkA, TrkB 및 TrkC), 에프린 (eph) 수용체, 및 RET 원종양유전자를 포함한다. 성장 수용체의 여러 억제제는 개발 중에 있고, 리간드 길항제, 항체, 티로신 키나제 억제제 및 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 성장 인자 수용체 및 성장 인자 수용체 기능을 억제하는 작용제는, 예를 들어 문헌 [Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver, et al. DDT, Vol 2, No. 2 (February 1997); 및 Lofts, F. J., et al., Growth factor receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy (Workman, Paul and Kerr, David, CRC press 1994, London)]에 기재되어 있다.
성장 인자 수용체 키나제가 아닌 티로신 키나제는 비-수용체 티로신 키나제로 지칭된다. 항암 약물의 표적 또는 잠재적 표적인, 본 발명에 유용한 비-수용체 티로신 키나제는 cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (초점 부착 키나제), 브루톤 티로신 키나제, 및 Bcr-Abl을 포함한다. 이러한 비-수용체 키나제 및 비-수용체 티로신 키나제 기능을 억제하는 작용제는 문헌 [Sinh, et al., Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research, 8 (5): 465-80 (1999); 및 Bolen, et al., Annual review of Immunology, 15: 371-404 (1997)]에 기재되어 있다.
SH2/SH3 도메인 차단제는, PI3-K p85 서브유닛, Src 패밀리 키나제, 어댑터 분자 (Shc, Crk, Nck, Grb2) 및 Ras-GAP를 포함한 다양한 효소 또는 어댑터 단백질에서 SH2 또는 SH3 도메인 결합을 방해하는 작용제이다. 항암 약물에 대한 표적으로서의 SH2/SH3 도메인은 문헌 [Smithgall, T.E., Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 34(3) 125-32 (1995)]에 논의되어 있다.
Raf 키나제 (rafk), 미토겐 또는 세포외 조절 키나제 (MEK), 및 세포외 조절 키나제 (ERK)의 차단제를 포함하는 MAP 키나제 캐스케이드 차단제; 및 PKC (알파, 베타, 감마, 엡실론, 뮤, 람다, 이오타, 제타)의 차단제를 포함하는 단백질 키나제 C 패밀리 구성원 차단제를 포함하는 세린/트레오닌 키나제의 억제제. IkB 키나제 패밀리 (IKKa, IKKb), PKB 패밀리 키나제, akt 키나제 패밀리 구성원, 및 TGF 베타 수용체 키나제. 이러한 세린/트레오닌 키나제 및 그의 억제제는 문헌 [Yamamoto, et al., Journal of Biochemistry, 126 (5) 799-803 (1999) ; Brodt, et al., Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107 (2000); Massague, et al., Cancer Surveys, 27:41-64 (1996); Philip, et al., Cancer Treatment and Research, 78: 3-27 (1995), Lackey, et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10) 223-226 (2000); 미국 특허 번호 6,268,391; 및 Martinez-Iacaci, et al., Int. J. Cancer, 88(1), 44-52 (2000)]에 기재되어 있다.
PI3-키나제, ATM, DNA-PK, 및 Ku의 차단제를 포함하는 포스포티딜 이노시톨-3 키나제 패밀리 구성원의 억제제가 본 발명에 또한 유용하다. 이러한 키나제는 문헌 [Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; 및 Zhong, H., et al., Cancer Res., (2000) 60(6), 1541-1545]에 논의되어 있다.
미오-이노시톨 신호전달 억제제, 예컨대 포스포리파제 C 차단제 및 미오이노시톨 유사체가 본 발명에 또한 유용하다. 이러한 신호 억제제는 문헌 [Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed. (Paul Workman and David Kerr, CRC press 1994, London)]에 기재되어 있다.
신호 전달 경로 억제제의 또 다른 군은 Ras 종양유전자의 억제제이다. 이러한 억제제는 파르네실트랜스퍼라제, 게라닐-게라닐 트랜스퍼라제, 및 CAAX 프로테아제의 억제제 뿐만 아니라 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임 및 면역요법을 포함한다. 이러한 억제제는 야생형 돌연변이체 ras를 함유하는 세포에서 ras 활성화를 차단함으로써, 항증식제로서 작용하는 것으로 제시된 바 있다. Ras 종양유전자 억제는 문헌 [Scharovsky, et al. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99 - 102; 및 BioChim. Biophys. Acta, (1989) 1423(3):19-30]에 논의되어 있다.
상기 언급된 바와 같이, 수용체 키나제 리간드 결합에 대한 항체 길항제는 신호 전달 억제제로서 또한 작용할 수 있다. 신호 전달 경로 억제제의 이러한 군은 수용체 티로신 키나제의 세포외 리간드 결합 도메인에 대한 인간화 항체의 사용을 포함한다. 예를 들어 임클론(Imclone) C225 EGFR 특이적 항체 (문헌 [Green, et al., Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286] 참조); 헤르셉틴(Herceptin)® erbB2 항체 (문헌 ["Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases", Breast Cancer Res., 2000, 2(3), 176-183] 참조); 및 2CB VEGFR2 특이적 항체 (문헌 [Brekken, et al., "Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice", Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124] 참조).
항혈관신생제: 비-수용체 MEK 혈관신생 억제제를 포함한 항혈관신생제가 또한 유용할 수 있다. 항혈관신생제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 것, (예를 들어 항-혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙 [아바스틴(Avastin)™]), 및 다른 메카니즘에 의해 작용하는 화합물 (예를 들어 리노미드, 인테그린 αvβ3 기능의 억제제, 엔도스타틴 및 안지오스타틴);
면역요법제: 면역치료 요법에 사용되는 작용제가 또한 화학식 (I)의 화합물과의 조합에 유용할 수 있다. 예를 들어 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키는 생체외 및 생체내 접근법, 예컨대 시토카인, 예컨대 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자를 사용한 형질감염, T-세포 무반응을 감소시키는 접근법, 형질감염된 면역 세포, 예컨대 시토카인-형질감염된 수지상 세포를 사용하는 접근법, 시토카인-형질감염된 종양 세포주를 사용하는 접근법, 및 항-이디오타입 항체를 사용하는 접근법을 포함하는 면역요법 접근법.
아폽토시스촉진제: 아폽토시스촉진 요법에 사용되는 작용제 (예를 들어, bcl-2 안티센스 올리고뉴클레오티드)가 또한 본 발명의 조합물에 사용될 수 있다.
세포 주기 신호전달 억제제: 세포 주기 신호전달 억제제는 세포 주기의 제어에 수반되는 분자를 억제한다. 시클린 의존성 키나제 (CDK)로 불리는 단백질 키나제의 패밀리, 및 시클린으로 지칭되는 단백질의 패밀리와의 그의 상호작용은 진핵 세포 주기를 통한 진행을 제어한다. 상이한 시클린/CDK 복합체의 협응적 활성화 및 불활성화는 세포 주기를 통한 정상적인 진행을 위해 필요하다. 세포 주기 신호전달의 여러 억제제가 개발 중에 있다. 예를 들어, CDK2, CDK4 및 CDK6을 포함한 시클린 의존성 키나제 및 이들에 대한 억제제의 예는, 예를 들어, 문헌 [Rosania, et al., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230]에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 및 항미세관제, 백금 배위 착물, 알킬화제, 항생제, 토포이소머라제 II 억제제, 항대사물, 토포이소머라제 I 억제제, 호르몬 및 호르몬 유사체, 신호 전달 경로 억제제, 비-수용체 티로신 MEK 혈관신생 억제제, 면역요법제, 아폽토시스촉진제 및 세포 주기 신호전달 억제제로부터 선택된 적어도 1종의 항신생물제를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 및 디테르페노이드 및 빈카 알칼로이드로부터 선택된 항미세관제인 적어도 1종의 항신생물제를 포함한다.
추가 실시양태에서, 항신생물제는 디테르페노이드이다.
추가 실시양태에서, 항신생물제는 빈카 알칼로이드이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 및 백금 배위 착물인 적어도 1종의 항신생물제를 포함한다.
추가 실시양태에서, 항신생물제는 파클리탁셀, 카르보플라틴 또는 비노렐빈이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제, 및 신호 전달 경로 억제제인 적어도 1종의 항신생물제를 포함한다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 성장 인자 수용체 키나제, VEGFR2, TIE2, PDGFR, BTK, erbB2, EGFr, IGFR-1, TrkA, TrkB, TrkC 또는 c-fms의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 세린/트레오닌 키나제 rafk, akt 또는 PKC-제타의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 키나제의 src 패밀리로부터 선택된 비-수용체 티로신 키나제의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 c-src의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 파르네실 트랜스퍼라제 및 게라닐게라닐 트랜스퍼라제의 억제제로부터 선택된 Ras 종양유전자의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 PI3K로 이루어진 군으로부터 선택된 세린/트레오닌 키나제의 억제제이다.
추가 실시양태에서, 신호 전달 경로 억제제는 이중 EGFr/erbB2 억제제, 예를 들어 N-{3-클로로-4-[(3-플루오로벤질) 옥시]페닐}-6-[5-({[2-(메탄술포닐) 에틸]아미노}메틸)-2-푸릴]-4-퀴나졸린아민 (하기 구조)이다:
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 또는 용매화물 및 세포 주기 신호전달 억제제인 적어도 1종의 항신생물제를 포함한다.
추가 실시양태에서, 세포 주기 신호전달 억제제는 CDK2, CDK4 또는 CDK6의 억제제이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 방법 및 용도에서의 포유동물은 인간이다.
나타낸 바와 같이, 본 발명의 조합물 (항-OX40 ABP 또는 항체 및 TLR4 조정제)의 치료 유효량이 인간에게 투여된다. 전형적으로, 본 발명의 투여되는 작용제의 치료 유효량은, 예를 들어 대상체의 연령 및 체중, 치료가 요구되는 정확한 상태, 상태의 중증도, 제제의 성질 및 투여 경로를 포함한 다수의 인자에 좌우될 것이다. 궁극적으로, 치료 유효량은 담당 의사의 판단에 달려있을 것이다.
하기 실시예는 단지 예시를 위해 의도되며, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예
실시예 1: 결장암에 대한 CT-26 동계 마우스 모델에서 OX86 단독요법의 처리
CT26 마우스 결장 암종 (CT26.WT; ATCC #CRL-2638) 세포주를 ATCC로부터 입수하였다. 그것은 관련 기술분야에 공지된 N-니트로소-N-메틸우레탄-(NNMU) 유도된 미분화 결장 암종 세포주이다. 예를 들어, 그것은 다음 문헌에 기재되어 있다: [Wang M, et al. Active immunotherapy of cancer with a nonreplicating recombinant fowlpox virus encoding a model tumor-associated antigen. J. Immunol. 154: 4685-4692, 1995 (PubMed: 7722321)]. 래트 IgG1을 바이오엑셀로부터 입수하였다. OX86 (하이브리도마 134) 세포를 유럽피안 셀 컬쳐 콜렉션으로부터 입수하고, 하를란에 의해 제조하였으며; OX86은 설치류에 사용되는 도구 항-OX40 모노클로날 항체에 대한 명칭이고; 설치류 OX40, 예를 들어 마우스 OX40 (수용체)에 결합하는 설치류 항체이다.
OX86 및 래트 IgG1을 묽은 DPBS에 희석하였다.
종양 세포의 제조를 위해, ATCC (cat# CRL-2638, lot# 59227052)로부터의 CT-26 (마우스 결장 암종 세포)의 동결된 (-140℃) 바이알을 해동시키고, 후속 주에 걸쳐 기초 RPMI (10% FBS 함유) 배지에서 배양하였다.
CT-26 세포 (계대 12)를 플라스크로부터 완전 배지에서 수거하였다. 세포를 원심분리하고, RPMI (FBS 부재)에 재현탁시켰으며, 이 단계를 3회 반복한다. 세포 밀도 및 생존율을 트리판 블루 배제를 통해 체크하였다. 이어서, 세포를 목적하는 밀도 (mL당 5x105개 세포)로 희석하고, 얼음 상에 유지시켰다.
OX40 모노클로날 항체 (mAb) OX86의 용량 증량을 종양 성장을 감소시키는데 있어서의 그의 효능에 대해 평가하였다. 동물을 칭량하고, 제0일에 마우스당 0.5x105개 CT26 종양 세포로 우측 뒷쪽 4분의 1 지점에 접종하였다. 총 130마리의 마우스에게 종양 세포를 접종하였으며 - 30% 실패율을 가정할 때 (연구 시작 시에 너무 크거나 또는 너무 작음), 목표는 각각의 군에 대해 n=10을 갖는 것이었다. 종양 세포 접종 후에, 종양 성장 및 총 체중을 연구 지속기간 동안 1주 3회 측정한다. 평균 종양 부피가 대략 100 mm3였을 때 제10일 또는 제11일에 무작위화가 이루어졌다. 무작위화 일에 시작하여, 동물에게 OX86 mAb 또는 래트 IgG1 이소형을 총 6회 용량에 대해 격주로 i.p. 투여하였다. 마우스는 종양이 연속 2회 측정 동안 >2000 cu mm에 도달할 때까지 연구에 남아있었으며, 이들을 다른 이유로 인해 (즉, 체중 감소 >20%, 종양 상의 궤양화 등) 또는 연구의 종료까지 연구로부터 제거하였다. 안락사 후에 종양을 제거하고, 유동 분석을 위해 해리 및/또는 IHC 분석을 위해 FFPE에 적용하였다.
처리
용량
마우스의 수
군 1: 마우스당 0.5x105개 세포
마우스당 래트 IgG1 400 ug
10-13마리
군 2: 마우스당 0.5x105개 세포
마우스당 OX86 400 ug
10-13마리
군 3: 마우스당 0.5x105개 세포
마우스당 OX86 200 ug
10-13마리
군 4: 마우스당 0.5x105개 세포
마우스당 OX86 100 ug
10-13마리
군 5: 마우스당 0.5x105개 세포
마우스당 OX86 50 ug
10-13마리
제0일: 종양 세포로의 sc 접종
제1일, 제4일, 제6일, 제8일: 동물을 칭량하고, 종양에 대해 체크하고, 존재하는 경우에 종양을 측정하였다.
무작위화 일 (대략 제10일): 동물을 무작위화하여 적절한 군을 나타내는 케이지 내에 넣었다.
연구 종료까지 격주 투여: 동물에게 OX86 또는 항 래트 IgG1을 ip 투여하였으며, 여기서 상기 제시된 양은 마우스당 기준이었다.
연구 종료까지 3주마다 측정: 동물을 칭량하고, 종양을 측정하였다.
약 10마리 동물로부터의 평균 종양 중량을 평균내었다. 오차 막대는 SEM 분석을 나타낸다. P 값을 하기에 기반하여 계산하였다: P 값은 생존 곡선이 전체 집단에서 동일하였다는 귀무 가설을 시험하였다. 다시 말해서, 귀무 가설은 처리가 생존을 변화시키지 않았다는 것이다. 미가공 p-값은 스텝다운 본페로니 방법을 통한 다중 비교에 대해 조정되었다.
상기 프로토콜을 사용하여 도 1b에서의 결과를 생성하였으며, 개별 마우스의 결과는 도 4에서 찾을 수 있다. 이들 도면은 CT-26 세포로 접종되고 래트 IgG1로 처리된 마우스가 예상한 바와 같이 수그러들지 않고 성장하는 종양을 발생시켰으며, 반면에 OX40 모노클로날 항체 (mAb) OX86을 사용한 투여는 래트 IgG1 대조군과 비교하였을 때 종양 성장의 분명한 억제 및 증가된 생존율을 유도하였다는 것을 입증한다.
실시예 2: TLR4 (CRX-527)로의 처리를 사용한 CT-26 연구의 결과
상기 OX40 단독요법 처리 프로토콜에 TLR4 조정제, 예컨대 CRX-527의 추가를 사용하여 TLR4 단독요법 및 항-mOX40 면역요법과 TLR4 조정제와의 조합을 연구하였다.
처리
용량 (마우스당)
마우스의 수
군 0:
마우스당 0.5x105개 세포
비히클
10-13마리
군 a:
마우스당 0.5x105개 세포
CRX-527; 4 ug
10-13마리
군 b:
마우스당 0.5x105개 세포
CRX-527; 20 ug
10-13마리
군 c:
마우스당 0.5x105개 세포
CRX-527; 100 ug
10-13마리
제0일: 종양 세포로의 sc 접종
제1일, 제4일, 제6일, 제8일: 동물을 칭량하고, 종양에 대해 체크하고, 측정하였다.
무작위화 일 (대략 제10일): 동물을 무작위화하여 적절한 군을 나타내는 케이지 내에 넣었다.
연구 종료까지 격주 투여: 동물에게 상기에 나타낸 양 (마우스당)의 TLR 화합물 CRX-527 또는 비히클을 ip 투여하였다.
연구 종료까지 3주마다 측정: 동물을 칭량하고, 종양을 측정하였다.
상기 프로토콜을 사용하여 도 1a 및 도 2-6에서 나타낸 투여량에서의 결과를 생성하였다. 거의 모든 경우에서, 0.5x105개 CT-26 결장직장 종양 세포로 우측 뒷쪽 4분의 1 지점에 접종한 Balb/c 마우스는 단지 비히클 (2% 글리세롤)로 i.p. 처리하였을 때만 예상한 바와 같이 진행하는 종양을 발생시켰다. TLR 4 효능제 CRX-527 (도 2-5) 및 CRX-601 (도 6)은 비히클 처리된 동물과 비교하였을 때 용량-의존성 방식으로 종양 성장을 억제하였다. 용량 의존성은 또한 모델의 생존율에서도 보였다.
실시예 3: OX40 (즉, 설치류 OX40 수용체에 대해 생성된 항체인 OX-86) 및 CRX-527을 사용한 조합 치료
하기 처리 스케줄을 수행하였다:
투여
처리 1
처리 2
마우스의 수
군 1: 마우스당 0.5x105개 세포
래트 IgG1
약물 비히클
10-13마리
군 2: 마우스당 0.5x105개 세포
OX86 50 ug
약물 비히클
10-13마리
군 3: 마우스당 0.5x105개 세포
래트IgG1
CRX-527 5ug
10-13마리
군 4: 마우스당 0.5x105개 세포
래트IgG1
CRX-527 25ug
10-13마리
군 5: 마우스당 0.5x105개 세포
OX86 50 ug
CRX-527 5ug
10-13마리
군 6: 마우스당 0.5x105개 세포
OX86 50 ug
CRX-527 25ug
10-13마리
제0일: 종양 세포로의 SC 접종
제1일, 제4일, 제6일, 제8일: 동물을 종양에 대해 체크하고, 존재하는 경우에 종양을 측정하였다.
연구 등록 일 (대략 제10일): 동물을 무작위화하고, 처리 1을 제공하였다.
등록 후 격주: 등록 일에 시작하여, 마우스에게 총 6회 용량에 대해 격주로 i.p. 투여를 제공하였다.
연구 종료까지 3주마다: 동물을 칭량하고, 종양을 측정하였다.
OX86 처리를 TLR4 조정제 처리 (CRX-527)와 조합하였을 때, 마우스는 종양 부담의 보다 높은 감소를 나타냈고, 단독으로의 처리보다 더 길게 생존하였다.
실시예 4: 단독요법 및 항-mOX40R 항체 및 화학식 I의 TLR4 표적화 분자를 사용한 조합 치료
마우스에게 OX40 항체; 화학식 1의 화합물 (화학식 Ia의 화합물, CRX-527, CRX-547 및 CRX-601 (TLR4 효능제) 포함) 또는 둘 다의 조합물을 투여하였다. 각각의 처리는 유의한 항종양 활성을 갖는다.
적어도 2가지 유의한 발견이 존재한다. 첫째로, 마우스에서, 항-OX40R 또는 항-OX40 항체 및 TLR4 효능제 조합의 조합물은 각각 비처리 대조군에 비해 확립된 CT-26 종양의 성장을 지연시켰다. 둘째로, 마우스에서 유의한 항종양 효과는 단독요법 처리와 비교하여 TLR4 효능제 및 항-OX40R 항체 조합물에서 관찰되었다.
실시예 5: OX40R ABS (즉, 설치류 OX40 수용체에 대해 생성된 항체인 항-mOX40 수용체 항체 클론 OX-86) 및 CRX-601을 사용한 조합 치료
물질 및 방법
생체내 항종양 효능 연구
TLR4 효능제 (CRX601)의 생체내 항종양 효능을 뮤린 CT-26 결장 암종 동계 고형 종양 모델에서 단독요법으로서 및 래트 항-마우스 OX40 항체 클론 OX86과 조합하여 평가하였다. 7 내지 8주령 암컷 Balb/c 마우스 (BALB/cAnNCrl, 찰스 리버)를 이들 연구에 사용하였다. 뮤린 CT-26 결장 암종 세포 (ATCC 카탈로그 번호 CRL-2638 lot# 59227052)를 5% CO2 하의 가습 37℃ 인큐베이터 내에서 10% 태아 소 혈청 (FBS)이 보충된 RPMI 성장 배지에서 배양하였다. 대수 성장으로 배양된 CT-26 세포를 조직 배양 플라스크로부터 수거하고, 4℃에서 450xg로 5분 동안 원심분리하여 10분 동안 세포를 펠릿화하였다. 상청액을 폐기하고, 세포를 칼슘 및 마그네슘이 없는 빙냉 포스페이트 완충 염수 (PBS)에서 세척하고, 다시 4℃에서 450xg로 5분 동안 원심분리하여 10분 동안 세포를 펠릿화하였다. 세포를 FBS가 없는 멸균 RPMI 배지에 재현탁시키고, 500,000개 세포/ml의 세포 농도로 조정하였다. 100 μl의 세포 스톡을 각각의 Balb/c 마우스의 우측 측복부 내로 피하 주사를 통해 이식하였다. 10 또는 11일 후에 평균 종양 크기가 대략 100 mm3에 도달하였을 때, 마우스를 종양 크기에 따른 연구 코호트로 무작위화하고, 제1 처리 용량을 제공하였다. TLR4 효능제 (CRX601) 또는 비히클을 나타낸 바와 같이 전신 정맥내 또는 직접적 종양내 주사를 통해 투여하였다. 정맥내 및 종양내 투여에 사용된 CRX-601 비히클은 나타낸 경우에 0.5%였다. CRX-601 리포솜 종양내 투여를 위해, GSK Lot #1783-157-B에 의해 제조된 DOPC/CHOL 리포솜을 사용하였다. 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX86) (래트 하이브리도마 그릿츠 ID 50776, BP232 2013으로부터 사내 발현 및 정제됨) 또는 래트 IgG1 이소형 대조군 항체 (바이오엑셀 카탈로그 # BE0088)를 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 제공되는 복강내 주사를 통해 투여하였다. 캘리퍼 측정을 1주에 3회 취하여 종양 성장을 평가하고, 종양 <2,000 mm3를 갖는 마우스를 30일에서 대략 115일까지 연구에 유지시켰다. 연속 2회 측정에 대해 종양 >2,000 mm3를 갖는 마우스 또는 개방형 궤양을 형성한 종양을 갖는 마우스를 연구로부터 제거하였다. 종양 부피를 식 (0.52) x (길이) x (폭2)을 사용하여 계산하였다. 연구 6 및 7에서, 무종양 마우스를 원래 접종 부위로부터의 반대 측복부 상에, 상기 기재된 바와 같이 CT-26 종양 세포를 리챌린지하고, 종양 성장을 상기 기재된 바와 같이 모니터링하였다. 모든 연구를 실험 동물의 관리, 복지 및 처리에 대한 GSK 정책에 따라 수행하고, GSK에서의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 검토하였다.
면역표현형결정 및 시토카인 분석
종양, 혈액 및 조직을 CT-26 마우스로부터 제1 CRX-601 투여 후 제0일, 제1일 및 제8일에 수거하였다. 마우스 백혈구 및 해리된 종양 단세포를 면역표현형결정을 위한 다색 유동 세포측정 분석을 위해 표면 또는 세포내 염색 항체로 새로 염색하였다. 멀티플렉스 시토카인 분석을 동일한 연구로부터의 마우스 혈장 샘플을 사용하여 수행하였다.
통계적 분석
연구 1-4에 대해, 종양 성장 억제의 유의성을 결정하기 위해, 제1 투여 11일 후 (연구 1), 15일 후 (연구 2 및 3) 또는 19일 후 (연구 4)에서의 종양 부피를 상이한 처리군 사이에 비교하였다. 분석 전에, 상이한 처리군에서의 분산의 격차로 인해 종양 부피를 자연 로그 변환시켰다. 이어서 로그 변환된 데이터에 대해 ANOVA에 이어서 쌍별 비교를 수행하였다. SAS 9.3 및 R 3.0.2 분석 소프트웨어를 사용하였다. 카플란-마이어 (KM) 방법을 수행하여 주어진 시간에서 상이한 처리군의 생존 확률을 추정하였다. 생존 분석을 위한 사건은 종양 부피 2000 mm3 또는 종양 궤양화 중 먼저 일어나는 것이다. 컷-오프 부피까지의 정확한 시간은 로그 종양 부피 및 2개의 관찰 (컷-오프 부피를 초과한 제1 관찰 및 컷-오프 부피 직전의 하나의 관찰) 일 사이에 선형 선을 피팅시켜 추정하였다. 종점까지의 중앙 시간 및 그의 상응하는 95% 신뢰 구간을 계산하였다. 이어서, 로그-순위 검정에 의해 KM 생존 곡선이 임의의 2개의 군 사이에서 통계적으로 상이한지 아닌지 여부를 검정하였다. 미가공 p-값, 뿐만 아니라 처리군 사이의 생존 분석에 의한 사건까지의 일수의 비교 및 나타난 일에서의 로그 변환된 종양 부피의 비교로부터의 오류 발견율 (FDR) 조정된 p-값을 결정하였다. FDR 조정된 p-값 ≤ 0.05를 갖는 것을 통계적으로 유의한 것으로 선언하였다.
연구 6 및 7에 대해, 종양 성장 억제의 유의성을 결정하기 위해, 제1 투여 12일 후에서의 종양 부피를 상이한 처리군 사이에 비교하였다. 처리를 표준 ANOVA 방법에 이어서 다중도에 대한 FDR 조정에 의해 비교하였다. 반응은 등분산성 (등분산) 이유로 부피의 제곱근이다. 카플란-마이어 (KM) 방법을 수행하여 주어진 시간에서 상이한 처리군의 생존 확률을 추정하였다. 이들 생존 분석에 대해, "사멸"은 종양 부피 컷오프 (2000 mm3)를 넘는 것을 의미한다. "생존율"은 "사멸"하지 않은 마우스의 비율을 의미하고, "생존 시간"은 "사멸"까지의 일수를 의미한다. 마우스가 두 측정 일 사이에 부피 컷오프를 넘은 경우에, 이때 "사멸" 일을 선형 내삽에 의해 추정하였다. 마우스가 부피 컷오프를 1회 초과로 넘은 경우에, 첫번재로 넘은 경우를 사용하였다. 2가지 처리에 대해 표준 로그-순위 검정에 의해 처리를 비교하였다. 로그-순위 p-값을 FDR (오류 발견율) 방법을 사용하여 다중도에 대해 조정하였다. 유의성은 FDR <= 0.05로서 정의하였다. 모든 계산 및 그래프를 R 소프트웨어, 버전 3.2.3을 사용하여 행하였다.
결과
6개의 연구 (연구 1 내지 4 및 연구 6 내지 7)를 수행하여 CRX601 및 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 클론 OX86 둘 다를 단독으로 및 서로와 조합하여 처리된 마우스에서 종양 크기 및 생존 시간을 평가하였다. 1개의 추가의 연구 (하기 연구 5)를 수행하여 CRX601 및 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 클론 OX86 둘 다를 단독으로 및 서로와 조합하여 처리된 마우스에서 시토카인 방출 및 T 세포 활성화를 평가하였다.
연구 1
종양내 투여를 사용한 CRX-601 단독요법 활성을 결정하기 위해, 마우스에게 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 열거된 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 종양내 투여된 비히클
군 2: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 종양내 투여된 CRX-601 0.1 ug/마우스
군 3: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 종양내 투여된 CRX-601 1 ug/마우스
군 4: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 종양내 투여된 CRX-601 10 ug/마우스
군 5: CRX-601 50 ug/마우스 단일 용량
종양내 투여에서, CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 TLR4 효능제 CRX-601에 대한 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 관찰하였다. 10 μg 및 50 μg 투여된 마우스는 비히클과 비교하여 최초 투여 11일 후에 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. 결과는 도 18에 제시된다.
또한 이 연구에서 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스는 생존 시간에서 통계적으로 유의한 증가를 나타냈다. 50 μg 투여된 마우스는 연구가 종료되었을 때 CT26 종양 세포 접종 후 제42일까지 비히클과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. 이 날에, 단지 50 ug 및 10 ug CRX-601 군으로부터의 마우스만이 연구에 남아있었다. 50 μg 군에서 4마리 마우스 중 3마리는 무종양이었으며, 이때 제4 마우스는 854.19 mm3의 종양 부피를 나타냈다. 10 μg 군에 남아있는 단일 마우스는 무종양이었다. (도 19 참조).
연구 2
정맥내 투여에서 CRX-601 단독요법 활성을 결정하기 위해, 마우스에게 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 비히클
군 2: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 CRX-601 1 ug/마우스
군 3: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 CRX-601 10 ug/마우스
군 4: CRX-601 100 ug/마우스 단일 용량
정맥내 투여에서, 이 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 TLR4 효능제 CRX-601에 대한 용량-의존성 항종양 활성 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨)을 관찰하였다. 10 μg 및 100 μg 투여된 마우스는 비히클과 비교하여 최초 투여 15일 후에 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다 (도 20 참조).
또한 이 CT-26 동계 마우스 종양 모델에서 TLR4 효능제 CRX-601로 처리된 마우스는 비히클과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가를 나타냈다. 100 μg 투여된 마우스는 연구가 CT-26 종양 세포 접종 후 제32일에 종료되었을 때 비히클과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가 (*p-값 ≤ 0.05)를 나타냈다. 이 군에 남아있는 3마리 마우스 중 1마리는 무종양이었으며, 반면에 다른 마우스는 1500.49 및 962.61 mm3의 종양 부피를 나타냈다. 10 μg 용량 군에 남아있는 단일 마우스는 188.0 mm3의 종양 부피를 가졌다. (도 21 참조)
연구 3
단독 및 항-OX40과 조합된 CRX-601 활성을 결정하기 위해, 마우스에게 때 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클
군 2: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 10 ug/마우스
군 3: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 4: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 10 ug/마우스
군 5: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스
군 6: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 10 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 7: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
이 CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 25 μg/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 μg 또는 25 μg/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물에 대해 항종양 활성을 평가하였다 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨). 1주에 1회 투여된 10 ug/마우스 또는 25 ug/마우스의 준최적 단독요법 CRX-601 용량은 비히클과 비교하여 단독으로 투여되었을 때 통계적으로 유의한 종양 성장 억제를 나타내지 않았고, OX86 25 ug/마우스 용량도 래트 IgG1과 비교하여 그러하였다. 그러나, 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 투여된 25 μg/마우스 OX86과 조합하여 총 3회 용량에 대해 10 μg 또는 25 μg/마우스로 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX601은 비히클 및 래트 IgG1과 비교하여 및 CRX601 및 OX86 단독요법과 비교하여 최초 투여 15일 후에 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다 (도 22 참조).
이 CT-26 동계 마우스 모델 연구에서, 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 25 ug/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 10 μg 또는 25 μg의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에 대해 생존 이점을 또한 결정하였다. CT-26 종양 세포 접종 후 제106일에 연구가 종료되었을 때, 총 6회 용량에 대해 2x/주 투여된 25 μg/마우스 OX86과 조합하여 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 CRX-601 10 μg 및 25 μg/마우스는 비히클 및 래트 IgG1 대조군 둘 다와 비교하여 및 OX86 및 CRX-601 단독요법과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. CRX-601 25 μg/마우스 + OX86 군에서 3마리의 남아있는 마우스가 무종양이었으며, CRX-601 10 μg/마우스 + OX86 군에서 1마리의 마우스가 무종양이었다. (도 23 참조).
연구 4
연구 3을 25 ug/마우스의 CRX-601 단독으로 및 항-OX40과 조합하여 반복하였다. 마우스에게 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 2: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스
군 3: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 4: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 5: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 25 μg/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 또는 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 μg/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물에 대해 항종양 활성을 관찰하였다 (시간 경과에 따른 종양 부피에 의해 측정됨). 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 투여된 25 μg/마우스 OX86과 조합하여 총 3회 용량에 대해 25 μg/마우스로 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX601이 CRX601 및 OX86 단독요법과 비교하여 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다 (도 24 참조).
CT-26 동계 마우스 모델에서 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 정맥내 투여된 25 μg/마우스의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 또는 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 25 μg/마우스의 TLR4 효능제 CRX-601, 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에 대해 생존 곡선을 측정하였다. 총 6회 용량에 대해 2x/주 투여된 25 μg/마우스 OX86과 조합하여 총 3회 용량에 대해 1x/주 정맥내 투여된 CRX601 25 μg/마우스가 단독요법과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. 이 통계적 분석은 모든 남아있는 마우스가 무종양이었을 때 종양 세포 접종 후 제64일에 수행하였다. 이들 마우스를 제111일에 연구 종료까지 모니터링하였다. 이 날에, 군 5 CRX-601 25 ug/마우스 + OX86에서의 7마리 마우스가 무종양으로 남아있었고, 군 3 CRX-601 25 ug/마우스 + 래트 IgG1에서의 2마리 마우스가 무종양으로 남아있었으며, 군 4 비히클 + OX86에서의 1마리 마우스가 무종양으로 남아있었다. (도 25 참조).
연구 5
결과는 코호트당 5마리 동물의 평균이다.
투여 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 μg의 TLR4 효능제 CRX-601, 25 μg의 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체 (클론 OX-86), 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에서 백혈구 및 면역-활성화를 평가하였다. CRX-601 및 항-OX86의 조합으로 처리된 마우스에서 종양-침윤 백혈구의 유의한 증가를 관찰하였다. CRX-601 및 항-OX86의 조합으로 처리된 마우스에서 순환 CD4 T 세포 상의 T 세포 활성화 마커 CD25의 발현의 상승작용적 증가를 관찰하였다. CRX-601 및 항-OX86의 조합으로 처리된 마우스에서 순환 CD4 T 세포 상의 T 세포 활성화 연관 마커 CTLA4, PD1 및 ICOS의 상승작용적 증가를 관찰하였다. 결과는 도 26 a-c에 제시된다.
투여 1 및 8일 후에 측정된 결장암의 CT-26 동계 마우스 모델에서 10 μg의 TLR4 효능제 CRX-601, 래트 항-mOX40R 항체 (OX-86), 및 둘 다의 조합물로 처리된 마우스에서 면역-활성화 시토카인 TNF 알파 및 IL-12p70의 증가를 관찰하였다. IL-12p70은 도 27b에 제시된 바와 같이 투여 8일 후에만 단지 검출가능하였다. 결과는 도 27 a-b에 제시된다.
연구 6
CRX-601이 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클 중에서 (IV) 또는 종양내 (IT) 투여되었을 때 단독 및 항-OX40과 조합된 CRX-601 활성을 비교하기 위해, 마우스에게 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 2: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 3: 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 4: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 5: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 6: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 7: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
처리군에 대해 항종양 활성을 평가하였다 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨). 25 ug/마우스의 준최적 단독요법 CRX-601 용량은 정맥내 (군 2) 또는 종양내 (군 6) 투여되었을 때 상응하는 대조군 (각각 군 1 및 군 5)과 비교하여 통계적으로 유의한 종양 성장 억제를 나타내지 않았다. 단독요법 OX86 25 ug/마우스 용량은 또한 대조군 1 및 5와 비교하여 통계적으로 유의한 종양 성장 억제를 나타내지 않았다. 그러나, OX86 25 ug/마우스 IP 용량 (군 4)과 조합되어 정맥내 제공된 CRX601 25 ug/마우스 용량은 대조군 1 및 OX86 단독요법 군 3과 비교하여 최초 투여 12일 후에 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. OX86 25 ug/마우스 IP 용량 (군 7)과 조합하여 종양내 제공된 CRX601 25 ug/마우스 용량은 또한 대조군 5 및 OX86 단독요법 군 3과 비교하여 최초 투여 12일 후에 또한 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. 정맥내 (군 4) 또는 종양내 (군 7) 투여된 CRX601 25 ug/마우스와 OX86 25 ug/마우스 IP와의 조합은 이 연구에서 종양 성장 억제에 대해 CRX601 단독요법 군 2 또는 군 6과 비교하여 통계적으로 유의하지 않았다 (도 28 및 29 참조).
이 CT-26 동계 마우스 모델에서, 연구 생존 이점을 또한 결정하였다. 제1 투여 68일 후에, 정맥내 (군 4) 또는 종양내 (군 7) 투여된 CRX601 25 ug/마우스와 OX86 25 ug/마우스 IP와의 조합은 각각 그의 대조군 1 또는 대조군 5와 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. OX86 IP (군 4)와 조합된 CRX-601의 정맥내 투여는 10마리 마우스 중 6마리에서 무종양을 유발하였고, OX86 IP (군 7)와 조합된 CRX-601의 종양내 투여는 10마리 마우스 중 3마리에서 무종양을 유발하였다. 단독요법 군은 대조군과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가를 나타내지 않았다 (도 30 및 31 참조). 나이브 대조군 마우스 및 완전 퇴행된 무종양 마우스에게 제68일에 CT26 종양 세포를 리챌린지하였다. CT26 종양은 나이브 대조군 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였으나, 거부되었으며, 처리군 마우스에서는 어떠한 종양 성장도 없었다. 이는 CRX-601 또는 OX86 처리와 조합된 CRX-601로 인한 지속적인 항종양 기억 면역을 나타낸다 (도 32 참조). OX86 단독요법 군 3에서의 2마리 마우스는 제68일에 27.86 및 1576.27 mm3의 종양 부피를 가졌고, 리챌린지하지 않았다.
연구 7
CRX-601이 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클을 사용하여 정맥내 (IV) 투여되거나 또는 DOPC/CHOL 리포솜 제제를 사용하여 종양내 (IT) 투여되었을 때 단독 및 항-OX40과 조합된 CRX-601 활성을 비교하기 위해, 마우스에게 5x104개 CT-26 세포를 접종하고, 종양 크기가 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 대략 100 mm3에 도달하였을 때 하기 10개의 군으로 무작위화하였다.
군 1: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 2: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 3: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 4: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 5: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (DOPC/CHOL 리포솜) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 6: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (DOPC/CHOL 리포솜) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 7: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 8: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
최초 투여 12일 후에 처리군에 대해 항종양 활성을 평가하였다 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨). 25 ug/마우스의 준최적 단독요법 CRX-601 용량은 정맥내 (군 2) 또는 종양내 (군 7, 리포솜 제제) 투여되었을 때 상응하는 대조군 (각각 군 1 및 군 5)과 비교하여 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. 단독요법 OX86 25 ug/마우스 IP 용량 군 3 및 군 7은 또한 대조군 1 및 5와 비교하여 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. OX86 25 ug/마우스 IP 용량 (군 4)과 조합된 정맥내 제공된 CRX601 25 ug/마우스 용량은 대조군 1 및 OX86 단독요법 군 3과 비교하여 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. OX86 25 ug/마우스 IP 용량 (군 8)과 조합된 DOPC/CHOL 리포솜 제제로 종양내 제공된 CRX601 25 ug/마우스 용량은 또한 대조군 5와 비교하여 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 종양 성장 억제를 나타냈다. 정맥내 (군 4) 또는 종양내 (군 8) 투여된 CRX601 25 ug/마우스와 OX86 25 ug/마우스 IP와의 조합은 이 연구에서 제12일에 종양 성장 억제에 대해 CRX601 단독요법 군 2 또는 군 7과 비교하여 통계적으로 유의하지 않았다 (도 33 및 34 참조).
이 CT-26 동계 마우스 모델 연구에서, 생존 이점을 또한 제1 투여 80일 후에 결정하였다. 단독요법으로서 IV 투여된 CRX601 (군 2) 또는 OX86 IP와 조합하여 IV 투여된 CRX601 (군 4)은 대조군 1과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. 군 2 및 4는 10마리 마우스 중 5마리가 각각 완전 종양 퇴행을 나타내도록 하였다 (도 35 참조). DOPC/CHOL 리포솜 제제로 단독요법으로서 종양내 투여된 CRX601 (군 7) 또는 리포솜 종양내 대조군과 함께 OX86 단독요법 (군 6) 둘 다는 대조군 5와 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. OX86 IP와 조합된 종양내 CRX601 DOPC/CHOL 리포솜 제제 용량 (군 8)은 대조군 5와 비교하여서뿐만 아니라 CRX601 종양내 (군 7) 및 OX86 (군 6) 단독요법 대조군과 비교하여서도 생존에서 통계적으로 유의한 (*p-값 ≤ 0.05) 증가를 나타냈다. 종양내 단독요법 대조군 6 및 7에서 3마리 및 2마리 마우스와 비교하여, OX86 IP와 조합된 종양내 CRX601 DOPC/CHOL 리포솜 용량에서 10마리 마우스 중 9마리가 완전 퇴행되고 무종양이었다. 따라서, 종양내 단독요법 대조군 군 6 및 7과 비교하여 OX86과 조합된 종양내 CRX601 리포솜 제제 용량에서 상승작용을 관찰하였다 (도 36 참조). 나이브 대조군 마우스 및 완전 퇴행된 무종양 마우스에게 제80일에 CT26 종양 세포를 리챌린지하였다. CT26 종양은 나이브 대조군 마우스에서 예상된 바와 같이 성장하였으나, 거부되었으며, 처리군 마우스에서는 어떠한 종양 성장도 없었다. 이 결과는 지속적인 항종양 기억이 CRX-601 또는 OX86 처리와 조합된 CRX-601로 인한 것임을 나타낸다 (도 37 참조). 이 종양 성장 결여는 CRX-601 또는 OX86 처리와 조합된 CRX-601로 인한 지속적인 항종양 기억을 나타낸다 (도 37 참조).
연구 8
압스코팔 효과는 국부 종양 처리 후 원위 종양 퇴행으로서 설명된다. 압스코팔 효과를 평가하기 위해, 마우스에게 단일 종양 접종에 대한 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 좌측 측복부에 5x104개 CT-26 세포 및 우측 측복부에 5x104개 CT-26 세포를 접종하였다. 따라서, 이 연구에서, 각각의 마우스는 우측 측복부 상에 1개 및 좌측 측복부 상에 1개인 2개의 종양을 보유하였다. 종양 크기가 우측 측복부의 경우 대략 100 mm3에 도달하고 좌측 측복부 종양 크기가 유사하였을 때 마우스를 하기 제시된 바와 같은 10개의 군으로 무작위화하였다. 단독 및 항-OX40과 조합된 CRX-601 활성의 압스코팔 효과를 결정하기 위해, CRX-601을 DOPC/CHOL 리포솜 제제 또는 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 제제를 사용하여 단지 좌측 측복부 종양에만 종양내 (IT) 투여하였다. 종양 크기를 우측 및 좌측 측복부 종양 둘 다에 대해 모니터링하였다. 추가로, 전신 활성에 대한 대조군으로서 CRX-601을 0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 비히클을 사용하여 단독으로 및 항-OX40과 조합하여 정맥내 (IV) 투여하였다 (군 7).
군 1: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 2: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 3: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 4: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 5: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 6: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 7: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 8: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 9: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (DOPC/CHOL 리포솜) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 10: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 비히클 (DOPC/CHOL 리포솜) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
군 11: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 래트 IgG1 25 ug/마우스
군 12: 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스
처리군에 대해 항종양 활성을 평가하다 (시간 경과에 따른 종양 성장 억제에 의해 측정됨). 어느 하나 또는 둘 다의 종양이 2,000 mm3에 도달하는 경우에 마우스를 연구로부터 제거하였다. 제1 투여 후 연구 제60일까지, 연구에 남아있는 모든 마우스는 완전히 무종양이었으며, 압스코팔 효과 및 생존 이점을 결정하였다. 전신 투여 조합 군 7, 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 정맥내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스의 경우, 10마리 마우스 중 7마리가 우측 및 좌측 측복부 종양 둘 다에 대해 무종양이었다 (도 38). 조합 군 8, 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스의 경우, 10마리 마우스 중 3마리가 단지 좌측 측복부 종양만이 종양내 주사를 받기는 하였지만 둘 다의 종양에 대해 완전 종양 퇴행을 나타냈다 (도 39). 조합 군 12, 총 3회 용량에 대해 1주에 1회 종양내 투여된 CRX-601 25 ug/마우스 (DOPC/CHOL 리포솜 중) + 총 6회 용량에 대해 1주에 2회 복강내 투여된 OX86 25 ug/마우스의 경우, 10마리 마우스 중 5마리가 단지 좌측 측복부 종양만이 종양내 주사를 받기는 하였지만 둘 다의 종양에 대해 완전 종양 퇴행을 나타냈다 (도 40). 따라서, 복강내 투여된 OX86과 조합되어 종양내 투여된 CRX-601 제제는 압스코팔 효과를 입증하였다 (군 8 및 12). 국부 좌측 측복부 종양 IT 주사는 원위 우측 측복부 종양 퇴행을 유발하였다. 3종의 조합 군 7, 8 및 12 사이에 생존 이점에서 어떠한 통계적 차이도 없었다. 군 7은 모든 비히클 및 이소형 대조군과 비교하여, 및 또한 모든 CRX-601 및 OX86 단독요법 군과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가를 입증하였다 (***p-값 ≤ 0.006). 군 12 조합은, 군 11 CRX-601 25 ug/마우스 리포솜 제제 + 래트 IgG1에 비해 통계적으로 유의하지 않았지만 (p-값 = 0.119), 군 10 리포솜 비히클 IT + OX86과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가를 나타냈다 (**p-값 = 0.006). 군 8 조합은, 군 6 비히클 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스) IT + OX86에 비해 통계적으로 유의하지 않았지만 (p-값 = 0.5), 군 4 CRX-601 25 ug/마우스 (0.5% 글리세롤/4% 덱스트로스 중) IT + 래트 IgG1과 비교하여 생존에서 통계적으로 유의한 증가를 나타냈다 (*p-값 = 0.013). 도 41은 모든 군에 대한 생존 곡선을 보여준다.
실시예 6: 시험관내 세포 배양에서 24시간에서 인간 CD4+ T 세포 (a), 수지상 세포 (b), 및 단핵구 (c)에 대해 일정 범위의 농도 (0.01 - 1000 ng/ml)로의 CRX601 처리에 의해 유도된 OX40 발현
실험 기술:
시험관내 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 검정을 수행하여 OX40 발현에 대한 CRX601의 효과를 평가하였다. 새로 단리된 인간 PBMC를 생존율에 대해 체크하고, 24-웰 비 조직 배양 처리된 플레이트에서 웰당 2백만개 세포의 밀도로 AIM-V 무혈청 배지에서 배양하였다. PBMC를 24시간 동안 일정 용량 농도 (0.01μg/ml - 1,000 μg/ml, 비히클 블랭크 포함)의 CRX-601로 자극하였다. 인큐베이션의 종료까지, OX40 발현의 유동 세포측정 평가를 위해 세포를 수집하였다. T 세포, 수지상 세포 및 단핵구 상의 CRX601에 의한 OX40 수용체 발현의 신속한 상향조절은 CRX601이 항-OX40 항체의 표적을 상향조절하여, 항-OX40 항체의 치료 활성을 강화시킬 수 있고, 생체내에서 TLR4+OX40 조합물의 상승작용적 항종양 활성으로 이어질 수 있다는 것을 입증하였다.
OX40 항체 서열 목록
SEQUENCE LISTING
<110> GLAXOSMITHKLINE INTELLECTUAL PROPERTY
DEVELOPMENT LIMITED
<120> Combinations and Uses and Treatments
thereof
<130> PU65949
<160> 47
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 1
Asp Tyr Ser Met His
1 5
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 2
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 3
Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 4
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 458
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 6
actagtacca ccatggcttg ggtgtggacc ttgctattcc tgatggcagc tgcccaaagt 60
atccaagcac aggttcagtt ggtgcagtct ggatctgagc tgaagaagcc tggagcctca 120
gtcaaggttt cctgcaaggc ttctggttat accttcacag actattcaat gcactgggtg 180
cgacaggctc caggacaagg tttaaagtgg atgggctgga taaacactga gactggtgag 240
ccaacatatg cagatgactt caagggacgg tttgtcttct ctttggacac ctctgtcagc 300
actgcctatt tgcagatcag cagcctcaaa gctgaggaca cggctgtgta ttactgtgct 360
aatccctact atgattacgt ctcttactat gctatggact actggggtca gggaaccacg 420
gtcaccgtct cctcaggtaa gaatggcctc tcaagctt 458
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 7
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 8
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 9
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr
1 5
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 12
<211> 416
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 12
gctagcacca ccatggagtc acagattcag gtctttgtat tcgtgtttct ctggttgtct 60
ggtgttgacg gagacattca gatgacccag tctccatcct ccctgtccgc atcagtggga 120
gacagggtca ccatcacctg caaggccagt caggatgtga gtactgctgt agcctggtat 180
caacagaaac caggaaaagc ccctaaacta ctgatttact cggcatccta cctctacact 240
ggagtccctt cacgcttcag tggcagtgga tctgggacgg atttcacttt caccatcagc 300
agtctgcagc ctgaagacat tgcaacatat tactgtcagc aacattatag tactcctcgg 360
acgttcggtc agggcaccaa gctggaaatc aaacgtaagt agaatccaaa gaattc 416
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 13
Ser His Asp Met Ser
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 14
Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Glu
1 5 10 15
Arg
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 15
His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 120
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60
Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60
Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 451
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 18
actagtacca ccatggactt cgggctcagc ttggttttcc ttgtccttat tttaaaaagt 60
gtacagtgtg aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tagtgcagcc tggagggtcc 120
ctgagactct cctgtgcagc ctctgaatac gagttccctt cccatgacat gtcttgggtc 180
cgccaggctc cggggaaggg gctggagttg gtcgcagcca ttaatagtga tggtggtagc 240
acctactatc cagacaccat ggagagacga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac 300
tcactgtacc tgcaaatgaa cagtctgagg gccgaggaca cagccgtgta ttactgtgca 360
agacactatg atgattacta cgcctggttt gcttactggg gccaagggac tatggtcact 420
gtctcttcag gtgagtccta acttcaagct t 451
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 19
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 20
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 21
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 22
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 22
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 23
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 24
<211> 428
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 24
gctagcacca ccatggagac agacacactc ctgttatggg tactgctgct ctgggttcca 60
ggttccactg gtgaaattgt gctgacacag tctcctgcta ccttatcttt gtctccaggg 120
gaaagggcca ccctctcatg cagggccagc aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat 180
atgcactggt accaacagaa accaggacag gctcccagac tcctcatcta tcttgcatcc 240
aacctagaat ctggggtccc tgccaggttc agtggcagtg ggtctgggac agacttcacc 300
ctcaccatca gcagcctaga gcctgaggat tttgcagttt attactgtca gcacagtagg 360
gagcttccgc tcacgttcgg cggagggacc aaggtcgaga tcaaacgtaa gtacactttt 420
ctgaattc 428
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 25
Asp Ala Trp Met Asp
1 5
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 26
Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Asn Gly
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 27
Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 28
<211> 414
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 28
atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60
gtgaagcttg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120
tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180
gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240
tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300
tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360
gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 414
<210> 29
<211> 138
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 29
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 30
<211> 448
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 30
actagtacca ccatgtactt gggactgaac tatgtattca tagtttttct cttaaatggt 60
gtccagagtg aagtgaagct ggaggagtct ggaggaggct tggtgcaacc tggaggatcc 120
atgaaactct cttgtgctgc ctctggattc acttttagtg acgcctggat ggactgggtc 180
cgccagtctc cagagaaggg gcttgagtgg gttgctgaaa ttagaagcaa agctaataat 240
catgcaacat actatgctga gtctgtgaat gggaggttca ccatctcaag agatgattcc 300
aaaagtagtg tctacctgca aatgaacagc ttaagagctg aagacactgg catttattac 360
tgtacgtggg gggaagtgtt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc 420
tcctcaggtg agtccttaaa acaagctt 448
<210> 31
<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 31
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 32
Lys Ser Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala
1 5 10
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 33
Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 34
Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Thr
1 5
<210> 35
<211> 378
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 35
atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60
gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120
atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180
ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240
aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300
gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360
accaagctgg agctgaaa 378
<210> 36
<211> 126
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 36
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp
100 105 110
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
115 120 125
<210> 37
<211> 413
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 37
gctagcacca ccatgagacc gtctattcag ttcctggggc tcttgttgtt ctggcttcat 60
ggtgctcagt gtgacatcca gatgacacag tctccatcct cactgtctgc atctctggga 120
ggcaaagtca ccatcacttg caagtcaagc caagacatta acaagtatat agcttggtac 180
caacacaagc ctggaaaagg tcctaggctg ctcatacatt acacatctac attacagcca 240
ggcatcccat caaggttcag tggaagtggg tctgggagag attattcctt cagcatcagc 300
aacctggagc ctgaagatat tgcaacttat tattgtctac agtatgataa tcttctcacg 360
ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgtaagtaca cttttctgaa ttc 413
<210> 38
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 38
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp
100 105 110
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
115 120 125
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 39
cgctgttttg acctccatag 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 40
tgaaagatga gctggaggac 20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 41
ctttcttgtc caccttggtg 20
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 42
gctgtcctac agtcctcag 19
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 43
acgtgccaag catcctcg 18
<210> 44
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 44
atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60
gtgaagctgg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120
tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180
gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240
tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300
tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360
gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcagcctcc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 45
<211> 469
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 45
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Thr Cys Asn Val
210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly Lys
465
<210> 46
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polynucleotide
<400> 46
atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60
gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120
atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180
ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240
aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300
gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360
accaagctgg agctgaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702
<210> 47
<211> 233
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic polypeptide
<400> 47
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp
100 105 110
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
Claims (20)
- OX40에 결합하는 항원 결합 단백질 (ABP) 및 TLR4 조정제의 조합물이며, 여기서 ABP는 OX40을 조정하는 것인 조합물.
- 제1항에 있어서, OX40에 결합하는 ABP가 서열식별번호: 1 및 13으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 2 및 14로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열식별번호: 3 및 15로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열식별번호: 7 및 19로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 8 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열식별번호: 9 및 21로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 인간화 모노클로날 항체인 조합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, OX40에 결합하는 ABP가 (a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; (b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; (c) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; (d) 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; (e) 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 (f) 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 인간화 모노클로날 항체인 조합물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, OX40에 결합하는 ABP가 서열식별번호: 4 및 5로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체이며, 여기서 항체는 서열식별번호: 10 및 11로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함하는 것인 조합물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, OX40에 결합하는 ABP가 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체인 조합물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, TLR4 조정제가 TLR4 효능제인 조합물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, TLR4 조정제가 아미노알킬 글루코사미니드 포스페이트 (AGP)인 조합물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, TLR4 조정제가 화학식 I 및 화학식 Ia로부터 선택된 화합물인 조합물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, TLR4 조정제가 CRX-601; CRX-547; CRX-602; 및 CRX-527로부터 선택된 것인 조합물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, TLR4 조정제가 하기 제시된 화학식 CRX-601을 갖는 것인 조합물.
- 암의 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조합물을 제약상 허용되는 담체 및 제약상 허용되는 희석제 중 적어도 1종과 함께 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 환자에서 암을 치료하는 방법.
- 인간 OX40에 결합하는 OX40 항체의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 TLR4 효능제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물.
- 제12항에 있어서, 인간 OX40에 결합하는 항체가 서열식별번호: 4에 제시된 바와 같은 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열; 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH 영역, 및 서열식별번호: 10에 제시된 바와 같은 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열; 및 서열식별번호: 11에 제시된 바와 같은 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하고, TLR4 효능제가 CRX-601인 제약 조성물.
- 암의 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 제12항 또는 제13항의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 환자에서 암을 치료하는 방법.
- 제14항에 있어서, 항체 및 TLR4 효능제가 동시에; 임의의 순서로 순차적으로; 전신으로; 정맥내로; 및 종양내로 중에서 선택된 경로로 환자에게 투여되는 것인 치료 방법.
- 제14항 또는 제15항에 있어서, OX40 항체가 정맥내로 투여되고, TLR4 효능제가 종양내로 투여되는 것인 치료 방법.
- 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 흑색종; 폐암; 비소세포 폐암 (NSCLC); 신장암; 신세포 암종 (RCC) 유방암; 전이성 유방암; 삼중-음성 유방암 (TNBC); 두경부암; 결장암; 결장직장암 (CRC); 난소암; 췌장암; 간암; 간세포성 암종 (HCC); 전립선암; 방광암; 위암; 액상 종양; 고형 종양; 조혈 종양; 백혈병; 비-호지킨 림프종 (NHL); 림프종; 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL)으로부터 선택된 것인 치료 방법.
- 제17항에 있어서, 인간이 1종 초과의 고형 종양을 갖고, TLR4 효능제가 상기 인간의 단일 종양에 종양내로 투여되고, TLR4가 투여되지 않은 적어도 1종의 고형 종양의 종양 크기가 감소되는 것인 치료 방법.
- 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조합물의 용도.
- 암의 치료를 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조합물의 용도.
Applications Claiming Priority (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562201828P | 2015-08-06 | 2015-08-06 | |
| US62/201,828 | 2015-08-06 | ||
| US201562247488P | 2015-10-28 | 2015-10-28 | |
| US62/247,488 | 2015-10-28 | ||
| US201662300400P | 2016-02-26 | 2016-02-26 | |
| US62/300,400 | 2016-02-26 | ||
| US201662322906P | 2016-04-15 | 2016-04-15 | |
| US62/322,906 | 2016-04-15 | ||
| PCT/IB2016/053285 WO2017021791A1 (en) | 2015-08-06 | 2016-06-03 | Combinations of an ox40 antibody and a tlr4 modulator and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180032641A true KR20180032641A (ko) | 2018-03-30 |
Family
ID=56131579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020187005697A KR20180032641A (ko) | 2015-08-06 | 2016-06-03 | Ox40 항체 및 tlr4 조정제의 조합물 및 그의 용도 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20170275371A1 (ko) |
| EP (1) | EP3331560A1 (ko) |
| JP (2) | JP2018525378A (ko) |
| KR (1) | KR20180032641A (ko) |
| CN (1) | CN108025073A (ko) |
| AU (1) | AU2016304401B2 (ko) |
| BR (1) | BR112018002530A2 (ko) |
| CA (1) | CA2994910A1 (ko) |
| CL (1) | CL2018000303A1 (ko) |
| CO (1) | CO2018001238A2 (ko) |
| CR (1) | CR20180080A (ko) |
| DO (1) | DOP2018000034A (ko) |
| EA (1) | EA201890457A1 (ko) |
| HK (1) | HK1249410A1 (ko) |
| IL (1) | IL257067A (ko) |
| MA (1) | MA43556A (ko) |
| MX (1) | MX2018001515A (ko) |
| PH (1) | PH12018500254A1 (ko) |
| TW (1) | TW201716084A (ko) |
| WO (1) | WO2017021791A1 (ko) |
| ZA (1) | ZA201800468B (ko) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG11201608106PA (en) | 2014-03-31 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists |
| KR20230149857A (ko) | 2016-07-07 | 2023-10-27 | 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 | 항체-애쥬번트 접합체 |
| WO2019133647A1 (en) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Thevax Genetics Vaccine Co., Ltd. | Combination of a fusion protein vaccine with anti-ox40 antibody for use in eliciting antigen-specific immune responses |
| WO2020030570A1 (en) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combinations of an ox40 antibody and a tlr4 modulator and uses thereof |
| CA3130794A1 (en) | 2019-03-15 | 2020-09-24 | Bolt Biotherapeutics, Inc. | Immunoconjugates targeting her2 |
| WO2020228828A1 (zh) * | 2019-05-15 | 2020-11-19 | 郑州威瑞生物技术有限公司 | 诱导免疫细胞活性的组合物及使用该组合物治疗疾病的方法 |
| US20240002425A1 (en) * | 2020-11-11 | 2024-01-04 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Novel aminoalkyl glucosaminide 4-phosphate derivative |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57106673A (en) | 1980-12-24 | 1982-07-02 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Dibenzo(b,f)(1,4)oxazepin derivative |
| GB8422238D0 (en) | 1984-09-03 | 1984-10-10 | Neuberger M S | Chimeric proteins |
| GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| US5681835A (en) | 1994-04-25 | 1997-10-28 | Glaxo Wellcome Inc. | Non-steroidal ligands for the estrogen receptor |
| US6113918A (en) | 1997-05-08 | 2000-09-05 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
| GB9716557D0 (en) | 1997-08-06 | 1997-10-08 | Glaxo Group Ltd | Benzylidene-1,3-dihydro-indol-2-one derivatives having anti-cancer activity |
| CN1606446A (zh) | 2000-05-19 | 2005-04-13 | 科里克萨有限公司 | 用单糖和二糖类化合物预防和治疗传染病和其他疾病的方法 |
| WO2002012258A1 (en) | 2000-08-04 | 2002-02-14 | Corixa Corporation | New immunoeffector compounds |
| US20050053973A1 (en) | 2001-04-26 | 2005-03-10 | Avidia Research Institute | Novel proteins with targeted binding |
| US20050089932A1 (en) | 2001-04-26 | 2005-04-28 | Avidia Research Institute | Novel proteins with targeted binding |
| TW200303759A (en) * | 2001-11-27 | 2003-09-16 | Schering Corp | Methods for treating cancer |
| US6525028B1 (en) | 2002-02-04 | 2003-02-25 | Corixa Corporation | Immunoeffector compounds |
| US6911434B2 (en) | 2002-02-04 | 2005-06-28 | Corixa Corporation | Prophylactic and therapeutic treatment of infectious and other diseases with immunoeffector compounds |
| US7288640B2 (en) | 2002-07-08 | 2007-10-30 | Corixa Corporation | Processes for the production of aminoalkyl glucosaminide phosphate and disaccharide immunoeffectors, and intermediates therefor |
| EP2572714A1 (en) * | 2002-12-30 | 2013-03-27 | 3M Innovative Properties Company | Immunostimulatory Combinations |
| US7960522B2 (en) | 2003-01-06 | 2011-06-14 | Corixa Corporation | Certain aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use |
| US20050164301A1 (en) | 2003-10-24 | 2005-07-28 | Avidia Research Institute | LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers |
| CN103221427B (zh) | 2010-08-23 | 2016-08-24 | 德克萨斯州立大学董事会 | 抗ox40抗体和使用其的方法 |
| GB201101331D0 (en) * | 2011-01-26 | 2011-03-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions and uses |
| KR101685262B1 (ko) | 2011-08-23 | 2016-12-21 | 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | 항-ｏｘ４０ 항체 및 이의 사용 방법 |
| EP2659906A1 (en) * | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
| BR112016013963A2 (pt) * | 2013-12-17 | 2017-10-10 | Genentech Inc | terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1 |
-
2016
- 2016-05-30 TW TW105116887A patent/TW201716084A/zh unknown
- 2016-06-03 JP JP2018506136A patent/JP2018525378A/ja active Pending
- 2016-06-03 CA CA2994910A patent/CA2994910A1/en not_active Abandoned
- 2016-06-03 AU AU2016304401A patent/AU2016304401B2/en not_active Ceased
- 2016-06-03 EP EP16729378.6A patent/EP3331560A1/en not_active Withdrawn
- 2016-06-03 MA MA043556A patent/MA43556A/fr unknown
- 2016-06-03 EA EA201890457A patent/EA201890457A1/ru unknown
- 2016-06-03 CN CN201680054466.7A patent/CN108025073A/zh active Pending
- 2016-06-03 WO PCT/IB2016/053285 patent/WO2017021791A1/en active Application Filing
- 2016-06-03 KR KR1020187005697A patent/KR20180032641A/ko unknown
- 2016-06-03 BR BR112018002530A patent/BR112018002530A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-06-03 CR CR20180080A patent/CR20180080A/es unknown
- 2016-06-03 MX MX2018001515A patent/MX2018001515A/es unknown
-
2017
- 2017-06-06 US US15/615,032 patent/US20170275371A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-01-22 IL IL257067A patent/IL257067A/en unknown
- 2018-01-23 ZA ZA2018/00468A patent/ZA201800468B/en unknown
- 2018-02-02 PH PH12018500254A patent/PH12018500254A1/en unknown
- 2018-02-02 CL CL2018000303A patent/CL2018000303A1/es unknown
- 2018-02-05 DO DO2018000034A patent/DOP2018000034A/es unknown
- 2018-02-06 CO CONC2018/0001238A patent/CO2018001238A2/es unknown
- 2018-06-22 HK HK18108033.2A patent/HK1249410A1/zh unknown
-
2019
- 2019-06-28 US US16/455,957 patent/US20190338042A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-05-21 JP JP2021086434A patent/JP2021121622A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PH12018500254A1 (en) | 2018-08-13 |
| EP3331560A1 (en) | 2018-06-13 |
| MX2018001515A (es) | 2018-03-15 |
| BR112018002530A2 (pt) | 2018-09-25 |
| MA43556A (fr) | 2021-03-24 |
| JP2021121622A (ja) | 2021-08-26 |
| WO2017021791A1 (en) | 2017-02-09 |
| CR20180080A (es) | 2018-04-02 |
| AU2016304401B2 (en) | 2019-05-16 |
| US20170275371A1 (en) | 2017-09-28 |
| ZA201800468B (en) | 2019-07-31 |
| CO2018001238A2 (es) | 2018-05-10 |
| CL2018000303A1 (es) | 2018-07-06 |
| HK1249410A1 (zh) | 2018-11-02 |
| DOP2018000034A (es) | 2018-10-31 |
| CA2994910A1 (en) | 2017-02-09 |
| JP2018525378A (ja) | 2018-09-06 |
| AU2016304401A1 (en) | 2018-02-15 |
| EA201890457A1 (ru) | 2018-09-28 |
| TW201716084A (zh) | 2017-05-16 |
| CN108025073A (zh) | 2018-05-11 |
| US20190338042A1 (en) | 2019-11-07 |
| IL257067A (en) | 2018-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2016304401B2 (en) | Combinations of an OX40 antibody and a TLR4 modulator and uses thereof | |
| JP7350118B2 (ja) | 組合せ処置およびその方法 | |
| US20180222989A1 (en) | Combination treatments and uses and methods thereof | |
| WO2017021912A1 (en) | Combined tlrs modulators with anti ox40 antibodies | |
| AU2016303550B2 (en) | Combination treatments and uses and methods thereof | |
| AU2016303387B2 (en) | TLR4 agonists and compositions thereof and their use in the treatment of cancer | |
| US20180222990A1 (en) | Combination Treatments and Uses and Methods Thereof | |
| US20220098303A1 (en) | Combination treatments for cancer comprising belantamab mafodotin and an anti ox40 antibody and uses and methods thereof | |
| KR20220070011A (ko) | 항원 결합 단백질 | |
| HOOS et al. | Patent 2994635 Summary | |
| WO2020030570A1 (en) | Combinations of an ox40 antibody and a tlr4 modulator and uses thereof |