CN108289968A

CN108289968A - 三芳基甲烷组合物和用于染色眼膜的染色组合物

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Publication number: CN108289968A
Application number: CN201680068532.6A
Authority: CN
Inventors: 高荻诚; 芳贺展弘; 井上敦词
Original assignee: WESTERN THERAPEUTICS INST Inc
Current assignee: WESTERN THERAPEUTICS INST Inc
Priority date: 2015-11-27
Filing date: 2016-10-20
Publication date: 2018-07-17
Also published as: IL259418B; JP5987102B1; EP3381475A4; EP3381475A1; US20180264142A1; CA3005714C; WO2017090349A1; HK1254472A1; IL259418A; US11534505B2; CA3005714A1; IL259418B2; JP2017095419A; US20230025076A1

Abstract

本发明提供一种抑制制剂的物理性质变动的含有BBG的制剂。一种组合物，含有：亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐；亮蓝G(BBG)的位置异构体或其药学上可接受的盐，在亮蓝G(BBG)、亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐、亮蓝G(BBG)的位置异构体和亮蓝G(BBG)的位置异构体的药学上可接受的盐的合计中，亮蓝G(BBG)和亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐中的一方或双方的含量为90重量％以上100重量％以下。

Description

三芳基甲烷组合物和用于染色眼膜的染色组合物

技术领域

本发明涉及一种高纯度的亮蓝G(Brilliant blue G,BBG)、其制备方法和物理性质稳定的用于染色眼膜的染色组合物。

背景技术

日本发明专利授权公报第4200222号中公开了一种含有亮蓝G(BBG)的、在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物。该染色组合物在欧州也获得了药品批准，而作为药剂制备和销售。其制剂具有极其优异的染色能力，对提高眼科治疗做出了巨大贡献。美国专利第6057160号的说明中公开了一种BBG的制备方法。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：日本发明专利授权公报第4200222号

专利文献2：美国专利第6057160号的说明书

发明内容

【发明要解决的技术问题】

日本发明专利授权公报第4200222号中使用市售的BBG或其钠盐。存在可能会发生实际制剂的物理性质变动的问题。【用于解决技术问题的技术方案】

本发明的发明人研究上述问题的结果，发现市售的BBG或其药学上可接受的盐(以下还简称为“盐”)含有BBG衍生物，最多只含有50％～60％的BBG。即，在基于现有技术的合成方法制备和提纯BBG的情况下，其中含有BBG衍生物，而BBG或其盐的含量最多只有50％～60％。本发明的发明人查明实际制剂的物理性质变动的原因是由于BBG衍生物的比例的变动，在此基础上发现了一种BBG或其盐的含量极高的BBG的制备方法。本发明基本上基于上述见解。

即，本发明的第1技术方案涉及一种含有三芳基甲烷衍生物、其药学上可接受的盐的三芳基甲烷组合物。三芳基甲烷衍生物包括：亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐；亮蓝G(BBG)的位置异构体或其药学上可接受的盐。而且，在“亮蓝G(BBG)、亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐、亮蓝G(BBG)的位置异构体和亮蓝G(BBG)的位置异构体的药学上可接受的盐”的合计中，亮蓝G(BBG)和亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐中的任一方或双方的含量为90重量％以上100重量％以下。亮蓝G(BBG)的位置异构体的意思是指，亮蓝G(BBG)中含有的环上附加的取代基的位置不同的化合物。上述组合物也可以适当地含有水、生理盐水等药学上可接受的溶剂、载体。

即，更详细地说明，本发明的第1技术方案涉及一种三芳基甲烷组合物，该三芳基甲烷组合物含有式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中的至少一方。

而且，在式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中，式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的含量为90重量％以上100重量％以下。

【化学式1】

上述组合物优选作为在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物使用。即，该在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物含有式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中的至少一方。而且，式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物、其药学上可接受的盐中，式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的含量为90重量％以上100重量％以下。

【化学式2】

本发明的第2技术方案涉及一种亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的制备方法，该方法能够有效地除去如上所述那样不为所知的存在的位置异构体。该方法包括以下工序：

苄基化工序，使式A1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与苄基化试剂反应，而得到式A2所示的化合物；

使三氧化硫或硫酸作用于式A2所示的化合物，而得到式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物；

从式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐。

【化学式3】

(上述式中X¹¹表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子，X¹²表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。)

第2技术方案的其他方式涉及一种亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的制备方法，包括以下工序：

使式B1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与加成有卤素原子的苄基化试剂反应，而得到式B2所示的卤化化合物；

取代式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物；

使式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物和碱反应，而得到式B4所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物；

从式B4所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式1所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐。

【化学式4】

(上述式中X²¹表示卤素原子，X²²表示卤素原子，X³表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。)

该方法优选为，

取代式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序包括以下工序：

使硫化物作用于式B2所示的卤化化合物，而得到式B2-1所示的化合物；

使亲电试剂SO₂Cl₂作用于式B2-1所示的化合物，而得到X²为氯原子的、式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。

【化学式5】

(上述式中，R²¹表示苯基或苄基，或者甲基、乙基、羟基、可被卤素原子取代的苯基或苄基。)

该方法优选为，取代式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序为以下工序：

使式B2所示的卤化化合物和格里纳德氏试剂发生作用，且使SO₂发生作用之后，使之与卤素离子发生作用，据此得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。

【发明效果】

根据本发明，能够提供一种BBG或其盐的含有率高，其结果不容易发生物理性质的变动的三芳基甲烷组合物。

根据本发明，能够提供一种BBG或其盐的含有率高且不容易发生物理性质的变动的、在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物。

根据本发明，能够提供一种BBG或其盐的含有率高的BBG的制备方法。

具体实施方式

下面，对用于实施本发明的方式进行说明。本发明并不局限于下面说明的方式，也包括本领域技术人员根据下面的方式在显而易见的范围内适当地进行修改得到的方式。

三芳基甲烷组合物

本发明的三芳基甲烷组合物包括式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物、其药学上可接受的盐中的至少一方。

式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物中式(1)所示的为亮蓝G(BBG)。而且，式(2)和(3)所示的三芳基甲烷衍生物是在制备BBG时现有技术中较多地含有的、未区别于BBG的化合物。这些化合物是BBG的异构体，其分子量与BBG相同。因此，认为这些异构体是在提纯所合成的BBG时也未被分离的物质。另外，难以从混合有这些异构体的三芳基甲烷组合物中仅提取BBG。本发明中，式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中，式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的含量为90重量％以上100重量％以下。

【化学式6】

上述式(1)～(3)表示例如在水溶液中电离状态的式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物。本发明也可以含有未电离状态的式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物。式(1)所示的化合物为亮蓝G(BBG)，BBG还称为N-乙基-N-[4-[[4-[N-乙基-N-(3-磺基苄基)氨基]-2-甲基苯基][4-[(4-乙氧基苯基)氨基]苯基]亚甲基]-3-甲基-2,5-环己二烯-1-亚基]-3-磺基苯甲铵(スルホナトベンゼンメタンアミニウム)。式(2)和(3)所示的化合物为BBG的位置异构体。

该组合物中优选为，式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物或其药学上可接受的盐中，式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的含量为90重量％以上99.99重量％以下，可以是该含量为90重量％以上99.9重量％以下，也可以是该含量为90重量％以上99重量％以下，也可以是该含量为90重量％以上98重量％以下，也可以是该含量为90重量％以上97重量％以下，也可以是该含量为90重量％以上95重量％以下，

该含量为91重量％以上99.99重量％以下，可以是该含量为91重量％以上99.9重量％以下，也可以是该含量为91重量％以上99重量％以下，也可以是该含量为91重量％以上98重量％以下，也可以是该含量为91重量％以上97重量％以下，也可以是该含量为91重量％以上95重量％以下，

该含量为92重量％以上99.99重量％以下，可以是该含量为92重量％以上99.9重量％以下，也可以是该含量为92重量％以上99重量％以下，也可以是该含量为92重量％以上98重量％以下，也可以是该含量为92重量％以上97重量％以下，也可以是该含量为92重量％以上95重量％以下，

该含量为93重量％以上99.99重量％以下，可以是该含量为93重量％以上99.9重量％以下，也可以是该含量为93重量％以上99重量％以下，也可以是该含量为93重量％以上98重量％以下，也可以是该含量为93重量％以上97重量％以下，也可以是该含量为93重量％以上95重量％以下，

该含量为95重量％以上99.99重量％以下，可以是该含量为95重量％以上99.9重量％以下，也可以是该含量为95重量％以上99重量％以下，也可以是该含量为95重量％以上98重量％以下，也可以是该含量为95重量％以上97重量％以下。

式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐例如为在水溶液中电离，此时的化学式中还存在与(1)不同的化学式。但是，这些方式对于本领域技术人员来说是显而易见的，电离的和未电离的均理所当然地包含于式(1)所示的BBG或其盐中。并且，BBG或其盐有时可能成为溶剂化合物(例如水合物)，由于这种方式实质上与BBG或其盐在水溶液中的行为相同，因此，这种方式也包含在式(1)所示的BBG或其盐中。

药理学上可接受的盐的例子包括无机碱、氨、有机碱、无机酸、有机酸、碱性有机酸、卤素离子等形成的盐和内盐(inner salt)。无机碱的例子包括碱金属(Na、K等)和碱土金属(Ca、Mg等)。有机碱的例子包括三甲胺、三乙胺、胆碱、普鲁卡因、乙醇胺等。无机酸的例子包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等。有机酸的例子包括对甲苯磺酸、甲磺酸、蚁酸、三氟乙酸和马来酸等。碱性氨基酸的例子包括赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、组氨酸等。

在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物

上述三芳基甲烷组合物能够作为在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物的活性成分使用。即，如专利文献1公开的那样，BBG或其盐作为在进行眼膜摘除时用于染色眼膜的染色组合物的活性成分(染料)是有效的。

根据本发明的优选方式之一，染色组合物可以在治疗眼球疾病的眼科手术中作为手术佐剂使用，所述眼科疾病如黄斑裂孔、高度近视性(hymyopic)黄斑裂孔引起的视网膜脱落、视网膜前膜、增生性糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、增生性玻璃体视网膜病变、像过熟白内障和先天性白内障那样的特异性白内障等玻璃体视网膜病变、以及分层角膜移植等。根据本发明的染色组合物，能够更清楚地确认难以识别的眼膜，提高外科手术中的安全性。

在本发明的更优选的方式中，染色组合物可以用于眼膜的染色，更优选为，用于内界膜或前囊的染色。

另外，根据本发明的方式之一，本发明的染色组合物可以与药理学上可接受的载体组合使用。可以配制成溶剂和药物粉末的组合的形式、或者充满于注射器中的溶液的形式、以及与透明质酸组合成为凝胶状溶液的形式。最优选为配制成溶液的形式，但并不需要限定于此。

根据本发明的方式之一，所述染色组合物配制成药学上可接受的溶液，但并不需要限定于此。这是由于BBG的、直接且容易地溶解在眼内清洗液中，还可以用注射器式过滤器除菌的特性。

并且，根据本发明的方式之一，所述染色组合物可以配制成溶解在眼内灌洗液、平衡盐溶液(BSS)、生理盐水中的溶液，或者最优选为，配制成溶解于作为眼内灌洗液(眼内清洗液)的OPEGUARD-MA(Senjyu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Osaka,Japan)中的溶液。但是，并不需要限定于这种形式。

并且，根据本发明的染色组合物的方式之一，优选为渗透压在298mOsm左右。根据该方式，本发明的染色组合物的渗透压与生理盐水相同。以前有报道称，ICG(indocyaninegreen,吲哚青绿)引起的视网膜色素上皮的损伤可能源于其溶液的渗透压较低。与此相关，本发明的一个方式中的染色组合物在不会引发在视网膜色素上皮中由于渗透压的差而引起的损伤等、与细胞膨胀或者脱水症状有关的组织损害(细胞脱落或者细胞死亡等)方面，具有优异的效果。

在本发明的优选方式之一中，本发明的染色组合物最好显示出中性pH，即，pH为pH＝7.4左右。

与该技术方案的药剂相关，提供一种对患者的眼睛给予该药剂来染色眼膜，而摘除染色的眼膜的方法。该方法包括调整含有BBG或其盐的染色组合物的步骤、使用预先规定的浓度的染色组合物来染色眼膜的步骤、和摘除染色的眼膜的步骤。即，该技术方案的药剂可以作为用于眼科手术的手术佐剂使用。作为本发明的优选方式之一，所述眼科手术对哺乳动物的眼球实施，更优选为对人的眼球实施。

并且，在本发明的方式之一中，所述染色组合物和/或使用其进行的染色法适当地用作眼科手术的一部分。根据本发明的优选方式，上述的眼科疾病手术为黄斑裂孔、近视性黄斑裂孔引起的视网膜脱落、视网膜前膜、增生性糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、增生性玻璃体视网膜病变、像过熟白内障和先天性白内障等的特异性白内障、以及分层角膜移植等的治疗中进行的外科手术，最优选为，是对玻璃体-视网膜疾病(尤其是黄斑裂孔和视网膜前膜(ERMS))和白内障进行的外科手术。

与该技术方案的药剂相关，还能够提供一种用于制备用于治疗眼科疾病的染色组合物的BBG或其盐的用途。尤其是，本发明还能够提供一种用于制备用于眼膜摘除的染色组合物的BBG或其盐的用途。

接着，对本发明的药剂中的BBG的剂量进行说明。本发明的药剂最好以0.1-10mg/ml的浓度，优选为以0.1-1.0mg/ml的浓度，最优选为以0.1-0.25mg/ml的浓度含有BBG。染色组合物中的BBG能够以0.25mg/ml的低浓度来获得充分的染色作用。

本发明的药剂的剂型没有特别限定。剂型的例子为注射剂。另外，通过采用前面说明的专利文献中公开的剂型，能够向眼内局部给药。为了制备注射剂，可以混合公知的载体(水等)和活性成分，封入注射器。剂型的制备方法可以适当地采用公知的方法。

本发明的神经保护剂也可以口服给药。该情况下，可以将作为活性成分的BBG或其盐与公知的载体混合，通过压片机压片来制剂化。

本发明的药剂在作为染色组合物使用的情况下，适量给予手术实施部位即可。例如，可以以1cc以上1ml以下的量来给予作为注射剂的本发明的药剂。在将本发明的药剂作为神经保护剂或抗炎剂使用的情况下，例如可以每天1～3次而给予规定期间。

BBG或其盐的制备方法(基本合成方案)

接着，对BBG或其盐的制备方法进行说明。这种基本的BBG或其盐的制备方法按下面的顺序包括下面三个工序。也可以在这些工序之前或之后包括其他工序。

使式A1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与苄基化试剂反应，而得到式A2所示的化合物(苄基化工序)。

使三氧化硫或硫酸作用于式A2所示的化合物，而得到式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。

【化学式7】

上述式中X¹¹表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。X¹¹的优选例为氢原子。氢原子被碱金属原子取代的羟基的意思是指，例如-ONa那样，羟基的氢原子被碱金属取代的基团。碱金属的例子为Na和K。卤素原子的例子为F、Cl、Br和I。

上述式中X¹²表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。X¹²的优选例为氢原子或钠原子。

使式A1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与苄基化试剂反应，而得到式A2所示的化合物的工序

【化学式8】

该工序例如可以如下这样进行：在稀有气体气氛下，将Al所示的化合物加入到碱性有机溶剂中，一边搅拌一边滴加加成有卤素原子的苄基化试剂，并保持搅拌状态。稀有气体的例子为氩气。有机溶剂的例子为乙腈等极性溶剂。碱化剂的例子为碳酸钾。反应在10℃以上35℃以下(例如室温下)进行即可。搅拌时间的例子为1小时以上1日以下。反应在通常气压下进行即可。

碱化剂的用量例如在A1所示的化合物的一半摩尔数以上2倍摩尔数以下即可。加成有卤素原子的苄基化试剂的意思是指，苄基化试剂中氢原子被卤素原子取代的化合物。加成有卤素原子的苄基化试剂的例子为苄基溴、苄基氯和苄基氟。加成有卤素原子的苄基化试剂的用量例如在A1所示的化合物的一半摩尔数以上2倍摩尔数以下即可。

使三氧化硫或硫酸作用于式A2所示的化合物，而得到式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序

【化学式9】

该工序为以下这样的工序：例如在冰冷却下使三氧化硫或硫酸作用于通过之前的工序得到的A2所示的化合物，而得到式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。三氧化硫也可以使用发烟硫酸。具体地说明，对A2所示的化合物冰冷却下，用浓硫酸稀释溶液。此后，在冰冷却下，慢慢地滴加发烟硫酸。此后，在室温或热水浴(例如100℃)中搅拌，进行反应。滴加时间的例子为5分钟以上1小时以下。搅拌时间的例子为2小时以上1日以下。

搅拌后，适当地一边搅拌一边滴加碱(例如，氢氧化钠、碳酸氢钠)，并适当地进行干燥，据此能够得到A3所示的化合物的盐(例如，X¹²为钠的盐)。

在该工序中优选为，通过将A3所示的化合物铯盐化来提高纯度，而降低异构体的含量。为了将A3所示的化合物铯盐化，例如可以使式A3所示的化合物与铯化合物(例如碳酸铯)反应。

从式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的工序

为了从式A3所示的化合物得到BBG或其盐，例如可以进行下面的工序。

首先，使两个式A3所示的化合物通过下述的式A3-1所示的化合物结合。

【化学式10】

上述式中X¹³表示卤素原子。X¹³的优选例为氯原子或溴原子。

上述工序是使2摩尔的式A3所示的化合物和1摩尔的式A3-1所示的化合物反应的工序。因此，优选式A3所示的化合物和式A3-1所示的化合物的比例大致为2：1(2/1)，也可以是1.5以上2.5以下，还可以是1.8以上2.2以下。

非常希望上述工序是在酒精(alcohol)溶剂中进行。酒精的例子为甲醇、乙醇和丁醇，优选的酒精是(稀释的)乙醇。该工序最好是在使用氧化剂使溶液呈酸性(例如，pH在0.3以上1以下)的状况下进行反应。氧化剂的例子为盐酸、浓盐酸、浓硫酸和浓硝酸。其中优选为盐酸或浓盐酸。优选在滴加式A3-1所示的化合物之后，在100℃以上140℃以下的状况下搅拌10小时以上200小时以下。在使反应液恢复到15℃以上35℃以下(例如室温)之后，添加碱。碱的例子为氢氧化钠水溶液。添加碱来进行调整，以使pH变为0.5以上1.5以下。通过对得到的析出物进行提纯，能够得到A4的晶体。

接着，从式A4所示的化合物得到反应性高的式A5所示的化合物。

【化学式11】

上述式中X^12’表示碱金属原子。X^12’的优选例为钾原子或钠原子。

该工序可以使用酸性的极性溶剂，使氧化剂作用于式A4所示的化合物。极性溶剂的例子为乙腈和水的混合溶剂。溶剂的酸度的例子为pH在1.5以上3以下。氧化剂的例子为CAN。该工序可以参照后述实施例适当地调整条件。

接着，使对乙氧基苯胺(p-phenetidine)作用于式A5所示的化合物，而得到式A6所示的BBG。

【化学式12】

式A5所示的化合物和对乙氧基苯胺为1：1反应，因此，式A5所示的化合物和对乙氧基苯胺的比例大致为1(1/1)即可，可以是0.8以上1.2以下，也可以是0.9以上1.1以下。

通过对这样得到的BBG或其盐适当地进行提纯，能够得到异构体的混合比例低的BBG或其盐。

BBG或其盐的制备方法(方案C-1和C-2)

接着，对用于制备BBG或其盐的、上述之外的例子进行说明。

该方法包括以下工序：使式B1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与加成有卤素原子的苄基化试剂反应，而得到式B2所示的卤化化合物；

从式B4所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式1所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的工序与前面说明的从式A3所示的化合物得到式1所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的工序相同。

【化学式13】

上述式中X²¹表示卤素原子。X²¹的优选例为氯原子或溴原子，优选为溴原子。

X²²表示卤素原子。X²²的优选例为氯原子或溴原子，优选为氯原子。

X³³表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。X²³的优选例为氢原子或钠盐。

使式B1所示的乙基-m-甲苯基胺(ethyl-m-tolyl-amine)与加成有卤素原子的苄基化试剂反应，而得到式B2所示的卤化化合物的工序

在实施例2中公开该工序的具体例。加成有卤素原子的苄基化试剂的例子为X²¹-Ph-CH₂-X²¹¹所示的化合物。X²¹-基团优选为存在于-CH₂-X²¹¹基团的间位的基团。Ph的意思为苯环。X²¹与前面定义的同样，X²¹¹表示卤素原子，可以与X²¹相同也可以与之不同。式B1所示的化合物(与式A1所示的化合物相同)和加成有卤素原子的苄基化试剂为1：1反应，因此，式B1所示的化合物和加成有卤素原子的苄基化试剂的比例大致为1(1/1)即可，可以是0.8以上1.2以下，也可以是0.9以上1.1以下。

取代式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序

该工序可以如下面说明的那样主要采用两个系统。其中的1个系统包括以下工序：

【化学式14】

上述式中，R²¹表示苯基或苄基，或者甲基、乙基、羟基、可被卤素原子取代的苯基或苄基。R²¹的优选例为苄基。

在使硫化物作用于式B2所示的卤化化合物，而得到式B2-1所示的化合物的工序中的硫化物的例子为式HSR²¹所示的化合物。该工序也可以在存在碱的情况下进行。

使亲电试剂SO₂Cl₂作用于式B2-1所示的化合物，而得到X²为氯原子的、式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序也可以在存在酸的情况下进行。

取代式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的第2个系统为以下工序：

(2)使式B2所示的卤化化合物和格里纳德氏试剂发生作用，且使SO₂发生作用之后，使之与卤素离子发生作用，据此得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。卤素离子例如是源自N-氯代琥珀酰亚胺的氯离子。该工序在实施例3中说明，可以根据实施例3适当地调整。

使式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物和碱反应，而得到式B4所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序

碱例如为HOX²³所示的化合物。碱的具体例为氢氧化钠。

实施例1

从式A1合成式A2(从IntBBG-01合成IntBBG-02)

【化学式15】

在氩气气流下，向2L的烧瓶放入76.1克(0.5629mol，TCI)Int BBG-01、116.7克(0.8443mmol)K₂CO₃、560mL乙腈(MeCN)，在18℃下添加105.9g(0.6191mol)溴化苄(BnBr)(TCI)(不发热)，在室温下搅拌4小时(逐渐发生反应热而内温上升到28℃)。

通过HPLC确认反应之后，过滤不溶物，将滤液减压浓缩(浴温：35～45℃)。向得到的浓缩残余物中添加1.2L的AcOEt(醋酸乙酯)、400mL水，进行萃取。将得到的有机层用200mL盐水(brine)洗涤之后，经Na₂SO₄干燥后减压浓缩(浴温：35～45℃)。

使用硅胶柱色谱法(N60硅胶1.1kg，CHCl₃/Hep＝1/2～1/10)对得到的残余物(138.2g)进行提纯，得到了125.7g粗产物Int.BBG-02(淡黄色油状物，99.1％产率，LC86.7％)。

对得到的125.7g粗产物进行减压蒸馏提纯，得到了90.05g的Int.BBG-02{淡黄色油状物，71.0％产率，LC 98.5％，lot.1403311，bp.141.5～154度(0.13～0.15kPa)}和24.51克的Int.BBG-02{淡黄色油状物，19.3％产率，LC 98.2％，lot.1403312，bp.115～141.5℃(0.15～0.17kPa)}。

从式A2合成式A3(从IntBBG-02合成IntBBG-03)

【化学式16】

向500mL的茄形烧瓶中放入30.0g的Int BBG-02(133.1mmol，LC 98.5％，lot.1403311)，在冰冷却下，用132mL浓硫酸进行稀释(溶解热大)。在冰冷却下用15分钟的时间向该溶液滴加20.0mL(292.9mmol)的60％发烟硫酸(反应热大。)。滴加结束后，除去冰浴，在100度浴温的油浴中搅拌6小时。

通过HPLC确认反应完成后，将反应溶液冰冷却(5℃)之后倒入900g冰中。在冰冷却下向得到的混合液中小心加入48％NaOH(aq)而将pH调整至5(内部温度在55℃以下，使用pH计。反应热大)。用300mL的AcOEt对得到的悬浮液进行洗涤，并对水层进行减压浓缩(浴温：45～55℃)。在浓缩时，进行1L×2次的甲苯、1L×1次的甲醇的共沸来除水。

向得到的浓缩残余物添加1L甲醇，过滤不溶物，将滤液减压浓缩、干燥而得到了43.2g粗产物Int.BBG-03(白色无定形粉末，106.2％产率，LC 72.8％，异构体17.6％，lot.140409)。

粗产物通过硅胶柱(N60硅胶，丙酮/水＝100:1)，另外，经反复提纯和浓缩而逐渐变成紫色，并观察到轻微分解(用丙酮、IPA(Isopropyl alcohol，异丙醇)、MeOH等实施溶解、浓缩)。该粗产物(淡紫色无定形粉末，LC 70.6％，异构体17.8％，lot.140409)直接用于下一工序。

结晶化的研究

由于Int.BBG-03的提纯效率不高，因此决定提高提纯效率。另外，已知Ca和Ba盐是无机盐，但水溶性低。另外，认为与二价离子的盐容易产生异构体之间的物理性质的差异，而研究了加入包括Ca的几种碱是否能获得水溶性降低的晶体。使用各种碱尝试结晶化的结果，得知对Int.BBG-03进行Cs盐化能够得到水溶性降低的盐。另外，还得知在Cs盐化的阶段异构体比率升高(异构体:17.6％→1.1％)

Cs盐化的优化：H₂O(底物×35w/v)，Cs₂CO₃(4.8当量)，产率35％

此外，以提高产率为目的减少H₂O(底物×15w/v)的结果，虽然回收率提高(77％)，但是异构体一点也未除去。

Cs盐的晶析研究：

MeOH/IPA＝1/10(×35v/w)·回收率：81％，异构体：1.1→0.5％

H₂O悬浮洗涤(×5v/w)·······回收率：50％，异构体:17.6→3.3％

H₂O悬浮洗涤(×2.5v/w)······回收率：81％，异构体：3.3→0.3％

得知对Int.BBG-03进行Cs盐化能够有效地防止掺杂异构体的事态。上述例子中，使碳酸铯和水的混合物与Int.BBG-03发生作用，但是，使适当调整的铯盐与Int.BBG-03反应而得到Int.BBG-03的铯化盐即可。

Int.BBG-03的Cs盐化和Int.BBG-03-Cs的提纯

【化学式17】

向5L的三角烧瓶中放入118.9g粗产物Int BBG-03(389.33mmol，LC 67.1％，异构体20.2％，lot.140519和LC 70.6％，异构体17.8％lot.140409)、4.1L(底物重量×35w/v)水、608.9g(1.869mol)的Cs₂CO₃，进行超声波搅拌，通过加温(40℃)形成均匀的黑色溶液之后，添加籽晶(约50mg)，静置2小时使其冷却。

由于没有观察到晶体析出，因此进一步添加籽晶(约50mg)，冰冷却，静置一夜(11小时)。

在冰冷却、5～7℃的内温下过滤取得析出的固形物(绒毛状)，进行减压干燥，得到了90.4g粗产物Int.BBG-03-Cs(白色固体，53.1％产率，LC 92.5％，异构体6.4％，lot.140519-crude)(＊由于固体容易溶解，因此过滤取得固体时基本不进行清洗、洗涤)。

向90.4克粗产物Int.BBG-03-Cs(LC 92.5％，异构体6.4％)添加225mL水，在75～80度下搅拌30分钟(基本上完全溶解)之后，冷却到室温(18℃)，添加籽晶，搅拌30分钟。

由于没有观察到晶体析出，因此，通过冰浴进行冷却，于是固体析出，进一步在冰冷却下搅拌1.5小时之后过滤取得固体，27mL(×0.3v/w)水洗，减压干燥，得到了68.1gInt.BBG-03-Cs(白色固体，75.6％回收率，LC 95.8％，异构体1.7％，lot.140519-1)。

使用得到的68.1克Int.BBG-03-Cs(LC 95.8％，异构体1.7％)进行与上述同样的加水晶析，得到了54.2g的Int.BBG-03-Cs(白色固体，79.7％回收率，LC 95.6％，异构体0.41％，lot.140519-2)。

从式A3合成式A4(从IntBBG-03合成IntBBG-04)

【化学式18】

向500mL的茄形烧瓶中添加10.0g粗产物Int BBG-03(32.74mmol，LC 70.6％，异构体17.8％lot.140409)、2.30g(16.37mmol)的4-氯苯甲醛(chlorobenzaldehyde)、60mL的EtOH、180mL水，使用浓盐酸将pH调整到0.7。在120℃的浴温下对反应液搅拌69小时。非常希望在该工序中向溶剂中添加乙醇等酒精。

通过HPLC确认反应之后(SM:TM＝1:11)，使反应液恢复到室温，使用1M NaOH(aq)将pH调整到1。调整pH之后，将反应液加热到60℃的浴温，在60℃下过滤取得析出物，用水冲洗，得到了3.48g粗产物Int.BBG-04(白色固体，28.9％产率，LC 89.0％，异构体4.4％)。

向得到的3.48g粗产物Int.BBG-04添加35mL的EtOH/H₂O＝1/3混合液，在60℃浴温下悬浮搅拌1小时。在60℃下过滤取得固体，用水冲洗，得到了3.34g的Int.BBG-04(白色固体，27.8％产率，LC 89.2％，异构体5.5％)。

向得到的3.34g粗产物Int.BBG-04添加35mL的EtOH/H₂O＝1/3混合液之后，用1MHCl(aq)将pH调整到1。在60℃浴温下对混合液悬浮搅拌1小时之后，在60℃下过滤取得固体，用水冲洗，得到了3.31g Int.BBG-04(白色固体，27.5％产率，LC 93.5％，异构体4.5％)。

向得到的3.31g粗产物Int.BBG-04添加35mL的EtOH，在60℃浴温下悬浮搅拌1小时。在60℃下过滤取得固体，用EtOH冲洗，得到了3.24g的Int.BBG-04(白色固体，27.0％产率，LC 93.3％，异构体4.5％，lot.140425)。

在该工序中，用水稀释之后，进行冷却，此后进行过滤，据此产率极大地上升。

从式A4合成式A5(从IntBBG-04合成IntBBG-05)

【化学式19】

向100mL的茄形烧瓶添加2.0克的Int BBG-04(2.727mmol，LC 93.3％，异构体4.5％，lot.140425)、20mL的MeCN、10mL的HCl/KCl缓冲水溶液(pH 1.87)，在室温下用5分钟添加3.88克(7.09mmol)硝酸铈(III)铵(CAN)的HCl/KCl缓冲水溶液(pH 1.87)10mL，在室温下搅拌1小时。

通过HPLC确认反应之后，将反应液倒入200mL的饱和Na₂SO₄水溶液、200mL的n-BuOH，进行萃取。分离有机层后，用100mL的n-BuOH萃取水层，分离有机层。用Na₂SO₄对得到的有机层进行干燥、减压浓缩(浴温：40～45℃)。

将得到的2.82g浓缩残余物用硅胶柱色谱法(用60g的N60硅胶，MeOH/CHCl₃＝1/9→2/8→3/7→4/6，9g的N60硅胶装实)进行提纯，得到1.10克Int.BBG-05{深绿色固体，53.5％产率，LC 97.2％(254nm)，LC 98.8％(600nm)，异构体：无峰分离，lot.140507-1}和0.5克Int.BBG-05{深绿色固体，24.3％产率，LC 81.0％(254nm)，LC 91.9％(600nm)，异构体：无峰分离，lot.140507-2}。

从式A5合成式A6(从IntBBG-05合成IntBBG-06(粗制BBG))

【化学式20】

向带螺帽的试管在室温下添加100mg的Int BBG-05(0.1327mmol，LC 98.8％，异构体:无峰分离，lot.140507-1)、19.1mg(0.1394mmol)的p-乙氧基苯胺(phenetidine)、1mL的n-丁醇(n-BuOH)，在105℃浴温下搅拌15小时。TLC中残存原料，因此，使反应液恢复到室温，添加3.6mg(0.02654mmol)的p-乙氧基苯胺(phenetidine)之后，在105℃浴温下搅拌2小时。TLC中残存原料，因此，进一步使反应液恢复到室温，添加18.2mg(0.1327mmol)的p-乙氧基苯胺(phenetidine)之后，在105℃浴温下搅拌2小时。

通过TLC确认反应之后，向反应液添加10mL的0.5M HCl(aq)，减压浓缩(转移到IPA，浴温：40～45℃)。向烧瓶添加10mL的0.5M HCl(aq)，进行超声波处理，用刮铲进行固体剥离，过滤取得固体，用0.5M HCl(aq)洗涤。对得到的固体进行减压干燥，得到了81.1mg的crude BBG(深紫红色固体，72.0％产率，LC 87.7％(600nm)，lot.140514)。

实施例2

从式B1合成式B2(从IntBBG-01合成IntBBG-025-1)

【化学式21】

向300mL的茄形烧瓶放入13.36克(98.55mmol,TCI)Int BBG-01、20.42g(147.8mmol,wako)的K₂CO₃、98mL的MeCN，在室温下添加24.63g(98.55mmol，wako)间溴溴苄(m-bromo benzylbromide)之后，在80℃下搅拌1小时。

通过TLC确认反应之后，过滤不溶物，对滤液进行减压浓缩。向浓缩残余物添加200mL的水、200mL的AcOEt，进行分液操作，而分离有机层。将得到的有机层用100mL的盐水(brine)洗涤，Na₂SO₄干燥，减压浓缩(浴温：35～45℃)。

将得到的30.19g浓缩残余物用硅胶柱色谱法(N60硅胶：90g，20％AcOEt/庚烷(heptane))进行提纯，得到了29.40g的Int BBG-025-1(淡黄色油状物，97.8％产率，LC96.8％，lot.140523)。

从式B2合成式B2-1(从IntBBG-025-1合成IntBBG-025-2)

【化学式22】

在Ar气流下，向300mL的烧瓶放入10.4g的Int BBG-025-1(34.18mmol，LC 96.8％，lot.140523)、11.8mL(68.36mmol)的DIPEA、100mL脱水二恶烷(dioxane(脱水))，在室温下Ar发泡10分钟。向反应液依次加入4.21mL(35.89mmol)苄硫醇(benzyl mercaptan)、989mg(1.709mmol)的9,9-二甲基-4,5-双二苯基膦氧杂蒽(Xantophos)、782mg(0.8545mmol)的Pd₂(dba)3，在95度内温下搅拌1小时。

通过HPLC确认反应之后，使反应液恢复到室温，添加200mL的AcOEt，在一定程度使不溶物溶解。通过硅藻土/硅胶＝50g/50g的混合垫过滤反应液，用AcOEt洗涤，减压浓缩滤液(浴温：)。

将得到的17.38g浓缩残余物用硅胶柱色谱法(N60速干硅胶：200克，1％AcOEt/庚烷(heptane))进行提纯，得到了12.65g的Int.BBG-025-2(淡黄色油状物，106.5％产率，LC96.8％，Lot.140527)。

从式B2-1合成式B3(从IntBBG-025-2合成IntBBG-025-3)

【化学式23】

向带螺帽的试管中放入408mg的Int BBG-025-2(1.174mmol,LC 96.8％，lot.140527)、4mL的AcOH，冷却到10℃。在10℃下用5分钟向反应液滴加0.38mL(4.696mmol)SO₂Cl₂的、AcOH溶液1.5mL，在同温度下搅拌30分钟。将SO₂Cl₂作为AcOH溶液缓慢加入是重要的。

通过HPLC确认反应之后，将反应液倒入冰冷却的100mL饱和NaHCO₃(aq)，用100mL的AcOEt萃取。将得到的有机层用50mL的饱和NaHCO₃(aq)洗涤、Na2SO₄干燥、减压浓缩(浴温：35～45℃)，得到了323mg粗产物Int.BBG-025-3(淡黄色油状物，85.0％产率，LC 91.0％，lot.140528)。

从式B3合成式B4(从IntBBG-025-3合成IntBBG-03-Na)

【化学式24】

向10mL的茄形烧瓶中放入301mg的Int BBG-025-3(0.9387mmol,LC 91.0％，lot.140528)、3mL的THF、0.94mL(1.878mmol)的2M NaOH(aq)，在50℃下搅拌30分钟。

通过HPLC确认反应之后，将反应液减压浓缩(浴温：45～50℃)。对浓缩残余物进行甲苯10mL×2次、甲醇10mL×1次共沸之后，添加10mL甲醇，过滤不溶物。在对得到的滤液进行浓缩干燥硬化之前，进行MeOH/IPA晶析(用MeOH溶解，部分浓缩，添加IPA，重复部分浓缩，置换到IPA中之后，施加超声波，粉碎固体，在0℃下搅拌30分，过滤取得)，得到了153.7mg的Int.BBG-03-Na(白色固体，50.0％产率，LC 90.3％，lot.140529-1)和204mg浓缩母液(白色无定形半固体，66.4％产率，LC 59.6％，lot.140529-2)。

另外，除上述之外，使用879mg的Int BBG-025-3(2.31mmol，纯度91.6％by LC-MS，lot.140525)同样地进行反应。

通过HPLC确认反应之后，将反应液减压浓缩(浴温：45～50)。对浓缩残余物进行甲醇20mL×3次共沸之后，添加10mL甲醇，过滤不溶物。

将得到的滤液减压浓缩、干燥，得到776mg粗产物Int.BBG-03-Na(白色固体，quant,LC88.0％，lot.140526)。

实施例3

从式B2合成式B3(从IntBBG-025-1合成IntBBG-025-3)

【化学式25】

在Ar气流下，向100mL的烧瓶中放入1.6mL(1.6mmol)的i-PrMgCl(1.0M in Et₂O)、20mL的THF(脱水)，冷却到-70℃。在-70℃下向反应液添加2.06mL(3.2mmol)的n-BuLi(1.55M in n-己烯(hexane))，搅拌10分钟。在-70℃下向反应液滴加1.216g的Int BBG-025-2(4.0mmol,C，lot.1740522)的5mL THF(脱水)溶液，在-60℃下搅拌1小时。由于残存有原料，因此在-60℃下向反应液依次滴加0.32mL(0.32mmol)的i-PrMgCl(1.0M in Et₂O)、0.41mL(0.64mmol)的n-BuLi(1.55M in n-己烯(hexane)，在-60℃下搅拌10分钟。

在-65℃下向反应液滴加5.2mL(40.0mmol)的SO₂(7.7M in THF)溶液(内温：-65→-55℃)，在-60℃下搅拌1.5小时。

在-60℃下向反应液添加650mg(5.76mmol)的NCS，在-20℃下搅拌30分钟之后，让其自然升温，在-20℃～室温下搅拌15小时。通过LC-MS确认反应之后，添加100mL的水和100mL的AcOEt，进行萃取。

将得到的有机层用50mL水、50mL盐水(brine)洗涤，Na₂SO₄干燥并减压浓缩(浴温：35～45℃)。

将得到的1.50g浓缩残余物用硅胶柱色谱法(N60速干硅胶：60克，AcOEt/庚烷(heptane)＝1/20)进行提纯，得到了879mg的Int.BBG-025-3(淡黄色油状物，67.9％产率，纯度91.6％by LC-MS，lot.140525)。

【产业上的利用可能性】

本发明可用于化学和医药产业。

Claims

1.一种三芳基甲烷组合物，含有三芳基甲烷衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，

所述三芳基甲烷衍生物或其药学上可接受的盐含有：亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐；亮蓝G(BBG)的位置异构体或其药学上可接受的盐，

亮蓝G(BBG)、亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐、亮蓝G(BBG)的位置异构体和亮蓝G(BBG)的位置异构体的药学上可接受的盐的合计中，所述亮蓝G(BBG)和亮蓝G(BBG)的药学上可接受的盐中的任一方或双方的含量为90重量％以上100重量％以下。

2.一种三芳基甲烷组合物，含有式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中的至少一方，其特征在于，

在所述式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物、其药学上可接受的盐中，式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的含量为90重量％以上100重量％以下,

【化学式26】

3.一种染色组合物，在进行眼膜摘除时用于染色眼膜，含有三芳基甲烷组合物，该三芳基甲烷组合物含有式(1)～(3)所示的三芳基甲烷衍生物和其药学上可接受的盐中的至少一方，其特征在于，

【化学式27】

4.一种亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括以下工序：

从式A3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式(1)所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐，

【化学式28】

上述式中X¹¹表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子，X¹²表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。

5.一种亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括以下工序：

从式B4所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物得到式1所示的亮蓝G(BBG)或其药学上可接受的盐，

【化学式29】

上述式中X²¹表示卤素原子，X²²表示卤素原子，X²³表示氢原子、羟基、氢原子被碱金属原子取代的羟基、碱金属原子或卤素原子。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

取代所述式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序包括以下工序：

使硫化物作用于所述式B2所示的卤化化合物，而得到式B2-1所示的化合物；

使亲电试剂SO₂Cl₂作用于所述式B2-1所示的化合物，而得到X²¹为氯原子的、式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物，

【化学式30】

上述式中，R²¹表示苯基或苄基，或者甲基、乙基、羟基、可被卤素原子取代的苯基或苄基。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

取代所述式B2所示的卤化化合物的卤素原子，而得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物的工序为以下工序：

使所述式B2所示的卤化化合物和格里纳德氏试剂发生作用，且使SO₂发生作用之后，使之与卤素离子发生作用，据此得到式B3所示的苄基乙基-m-甲苯基胺衍生物。