CN108289881A - 用于治疗纤维化的赛尼克韦罗联合疗法 - Google Patents

用于治疗纤维化的赛尼克韦罗联合疗法 Download PDF

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Abstract

赛尼克韦罗(CVC)是与C‑C趋化因子受体5型(CCR5)和C‑C趋化因子受体2型(CCR2)结合的配体的口服活性拮抗剂。CVC阻断RANTES、MIP‑1α和MIP‑1β与CCR5的结合，以及MCP‑1/CCL2与CCR2的结合。本文提供了治疗纤维化和相关病状的方法，其包括共施用CVC与趋化因子拮抗剂、FXR激动剂、高剂量维生素E(>400iU/d)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR‑α)激动剂、PPAR‑γ激动剂和/或PPAR‑δ激动剂。

Description

用于治疗纤维化的赛尼克韦罗联合疗法
领域
本公开涉及含有赛尼克韦罗的药物组合物、其制备方法及其在治疗炎症以及结缔组织疾病和病症(诸如包括NASH的纤维化)的联合疗法中的用途。
背景
赛尼克韦罗(Cenicriviroc)(也称为CVC)是(S,E)-8-(4-(2-丁氧基乙氧基)苯基)-1-(2-甲基丙基)-N-(4-(((1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)亚硫酰基)苯基)-1,2,3,4-四氢苯并[b]吖辛因-5-甲酰胺的通用名。赛尼克韦罗甲磺酸盐的化学结构示于图1中。赛尼克韦罗结合至C-C趋化因子受体2型(CCR2)和C-C趋化因子受体5型(CCR5)受体并抑制它们的活性(24)。这些受体不仅在病毒如人类免疫缺陷病毒(HIV)进入细胞中起作用，而且对于将免疫细胞募集到损伤部位也很重要。这种受体活性的抑制可以具有抗炎作用。最近，已经检查了炎症在纤维化的发展中所起到的作用[30]。已经证明C-C趋化因子受体2型(CCR2)和CCR5可以在促进肝纤维化方面发挥作用[3,4,5,31 32]。
发明概述
在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗有需要的受试者中的纤维化或纤维化疾病或病状或病状的方法，其包括向所述受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和一种或多种另外的活性剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂选自GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、DPP-4抑制剂、Toll样受体4信号传导抑制剂、抗TGFβ抗体、噻唑烷二酮、PPAR亚型α和γ激动剂和口服胰岛素敏化剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂选自利拉鲁肽(liraglutide)、卡格列净(canagliflozin)、阿拉格列汀(anagliptin)、TAK-242、1D11、MSDC-0602、吡格列酮(pioglitazone)和罗格列酮(rosiglitazone)。
在一个实施方案中，纤维化或纤维化疾病或病状是肝纤维化或肾纤维化。在另一个实施方案中，肝纤维化与非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关。在另一个实施方案中，肝纤维化与非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)相关。在另一个实施方案中，肝纤维化与新发性肝硬化相关。在又一个实施方案中，肝纤维化包括非硬化性肝纤维化。在一个实施方案中，受试者被人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。在另一个实施方案中，受试者患有选自酒精性肝病、HIV和HCV共感染、病毒性肝炎(诸如HBV或HCV共感染)、2型糖尿病(T2DM)、代谢综合征(MS)及其组合的疾病或病状。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和一种或多种另外的活性剂；其中NASH与2型糖尿病(T2DM)相关。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和一种或多种另外的活性剂；其中NASH与代谢综合征(MS)相关。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和一种或多种另外的活性剂；其中NASH与HIV和HCV共感染相关。
在一个实施方案中，另外的活性剂选自GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、DPP-4抑制剂、Toll样受体4信号传导抑制剂、抗TGFβ抗体、噻唑烷二酮、PPAR亚型α和γ激动剂以及口服胰岛素敏化剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂选自利拉鲁肽、卡格列净、阿拉格列汀、TAK-242、1D11、MSDC-0602、吡格列酮和罗格列酮。
在一个实施方案中，赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物经配制成包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和富马酸的药物组合物。在一个实施方案中，将赛尼克韦罗或其盐或其溶剂化物配制成口服组合物。在一个实施方案中，赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物每天一次或每天两次施用。在另一个实施方案中，共施用包括同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。在另一个实施方案中，共施用进行一个或多个治疗周期。在另一个实施方案中，共施用进行1至24个治疗周期。在另一个实施方案中，每个治疗周期包括约7天或更多天。在又一个实施方案中，每个治疗周期包括约28天或更多天。在另一个实施方案中，共施用包括一个或多个治疗周期，并且每个治疗周期包括约28天。
在一个实施方案中，共施用包括口服施用、肠胃外施用或其组合。在另一个实施方案中，肠胃外施用包括静脉内施用、动脉内施用、肌内施用、皮下施用、骨内施用、鞘内施用或其组合。在一个实施方案中，赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物口服施用；并且另外的活性剂口服或肠胃外施用。
在一个实施方案中，共施用包括同时施用。在另一个实施方案中，赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和另外的活性剂同时共施用约28天或更久。
在另一个实施方案中，本发明提供一种方法，该方法还包括检测纤维化或所述纤维化疾病或病状或病状经治疗的受试者中的一种或多种生物分子的水平，以及基于一种或多种生物分子的水平的升高或降低确定治疗方案，其中生物分子选自由以下组成的组：脂多糖(LPS)、LPs结合蛋白(LBP)、16S rDNA、sCD14、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、连蛋白-1、胶原1a1和3a1、TGF-β、纤连蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纤维蛋白原、MCP-1、MIP-1α和-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝细胞细胞凋亡的生物标记物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)及其组合。
在另一个实施方案中，该方法还包括检测纤维化或所述纤维化疾病或病状或病状经治疗的受试者中的一种或多种生物分子的水平，其中一种或多种生物分子的水平相较于预定标准水平的升高或降低预测纤维化或纤维化疾病或病状的治疗功效，其中生物分子选自由以下组成的组：脂多糖(LPS)、LPS结合蛋白(LBP)、16S rDNA、sCD14、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、连蛋白-1、胶原1a1和3a1、TGF-β、纤连蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纤维蛋白原、MCP-1、MIP-1α和-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝细胞细胞凋亡的生物标记物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)、α2-巨球蛋白、载脂蛋白A1、触珠蛋白、透明质酸、羟基脯氨酸、III型胶原的N-端前肽、金属蛋白酶的组织抑制剂及其组合。在一个实施方案中，所述一种或多种生物分子在来自纤维化或纤维化疾病或病状经治疗的受试者的生物样品中进行测量。在另一个实施方案中，生物样品选自血液、皮肤、毛囊、唾液、口腔粘膜、阴道粘膜、汗液、泪液、上皮组织、尿液、精子、精液、精浆、前列腺液、预射精液(考珀液)、排泄物、活检物、腹水、脑脊液、淋巴、脑以及组织提取物样品或活检样品。
本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；和一种或多种另外的活性剂。在一个实施方案中，药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，药学上可接受的赋形剂包括富马酸。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合包装，其包含：
(a)至少一个单独剂量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；和
(b)至少一个单独剂量的一种或多种另外的活性剂。
在另一个实施方案中，组合包装还包含提供用于共施用(a)和(b)的方案的说明书文件。
在一个实施方案中，本发明提供一种分布抗纤维化剂的方法，其包括将预定量的第一药物组合物连同预定量的第二药物组合物分配给受试者，所述第一药物组合物包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物，所述第二药物组合物包含至少一种或多种活性剂。在另一个实施方案中，本发明提供一种分布抗纤维化剂的方法，其包括将预定量的第一药物组合物连同施用第一药物组合物的说明书与预定量的第二药物组合物分配给受试者，所述第一药物组合物包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物，所述第二药物组合物包含至少一种或多种活性剂。
附图简述
图1是赛尼克韦罗甲磺酸盐的化学式。
图2是比较配混成口服溶液的赛尼克韦罗甲磺酸盐与通过湿法制粒制备并与各种酸性增溶剂赋形剂混合的赛尼克韦罗甲磺酸盐在比格犬中的绝对生物利用率的图表。
图3是当与干燥剂一起包装时接受40℃和75％相对湿度下的加速稳定性测试的不同赛尼克韦罗制剂的总杂质和降解物含量的图表。
图4是不同赛尼克韦罗制剂的动态气相吸附等温线。
图5示出了在肾纤维化的小鼠UUO模型中评价CVC的研究示意图。BID施用的媒介物对照和CVC；i.p.QD每天一次施用的抗TGF-β1抗体即化合物1D11(阳性对照)；CVC，赛尼克韦罗；ip，腹膜内；PBS，磷酸盐缓冲盐水；QD，每天一次；TGF，转化生长因子；UUO，单侧输尿管堵塞
图6示出了肾纤维化小鼠UUO模型中的每个治疗组中的体重变化(第5天)。
图7示出了肾纤维化小鼠UUO模型中的每个治疗组中的胶原容积分数(CVF；面积％)评分。呈现的数据从CVC 20mg/kg/天组中的动物中排除异常值，其具有大于比群组中的任何其它动物高2倍标准偏差的CVF值。
图8示出了来自假手术的肾皮质组织的mRNA表达
图9示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物中直到第9周的体重变化。
图10A-C示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物中直到第9周的肝重和体重变化。图A示出了体重变化，图B示出了肝重变化，而图C示出了肝重-体重比变化。
图11A-F示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的全血和生物化学。图A示出了全血葡萄糖，图B示出了血浆ALT，图C示出了血浆MCP-1，图D示出了血浆MIP-1β，图E示出了肝脏甘油三酯，而图F示出了肝脏羟脯氨酸。
图12示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的HE染色肝脏切片。
图13示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的NAFLD活性评分。
图14示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的天狼猩红染色肝脏切片的代表性显微照片。
图15示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的F4/80免疫染色肝脏切片的代表性显微照片。
图16示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的炎症区域的百分比。
图17示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的F4/80和CD206双重免疫染色肝脏切片的代表性显微照片。
图18示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的F4/80和CD206双阳性细胞在F4/80阳性细胞中的百分比。
图19示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的F4/80和CD16/32双重免疫染色肝脏切片的代表性显微照片。
图20示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的F4/80和CD16/32双阳性细胞在F4/80阳性细胞中的百分比。
图21示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的M1/M2比。
图22示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的油红染色肝脏切片的代表性显微照片。
图23示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的脂肪沉积区域的百分比。
图24示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的肝脏中的TUNEL阳性细胞的代表性显微照片。
图25示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的TUNEL阳性细胞的百分比。
图26示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的定量RT-PCR。测量了TNF-α、MCP-1、1型胶原和TIMP-1的水平。
图27A-F示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第9周的定量RT-PCR的原始数据。图A示出了36B4的水平，图B示出了TNF-α的水平，图C示出了TIMP-1的水平，图D示出了1型胶原的水平，图E示出了36B4的水平，而图f示出了MCP-1的水平。
图28示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物从第6周到第18周的体重变化。
图29示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物从第6周到第18周的生存曲线。
图30A-C示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的体重和肝重。图A示出了体重，图B示出了肝重，而图C示出了肝重-体重比。
图31A-C示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的肝脏宏观外表。图A示出了仅用媒介物治疗的动物的肝脏，图B示出了用低剂量赛尼克韦罗治疗的动物的肝脏，而图C示出了用高剂量赛尼克韦罗治疗的动物的肝脏。
图32示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的可见肿瘤结节的数量。
图33示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的可见肿瘤结节的最大直径。
图34示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的HE染色肝脏切片的代表性显微照片。
图35示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的GS免疫染色肝脏切片的代表性显微照片。
图36示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的CD31免疫染色肝脏切片的代表性显微照片。
图37示出了经赛尼克韦罗(低或高剂量)治疗的动物在第18周的CD31阳性区域的百分比。
图38是HIV-1RNA<50个拷贝/mL的受试者随时间推移直到第48周的比例–快照算法–ITT–研究202。
图39示出了sCD14水平(106pg/mL)随时间推移直到第48周的相对于基线的LS平均变化-ITT。
图40示出了在基线处、第24周和第48周根据APRI和FIB-4纤维化指数评分进行分组的经CVC(合并数据)和EFV治疗的受试者。
图41示出了基线APRI变化对基线sCD14变化的散点图-第48周(ITT)。
图42示出了基线FIB-4变化对基线sCD14变化的散点图-第48周(ITT)。
图43示出了用于研究包含CVC和另外的治疗剂的联合治疗的研究设计。
图44示出了CDAA NASH模型中的临床前联合研究方案。对于预防性干预，动物将接受CDAA饮食和CVC或标准饮食和CVC持续22周。对于治疗性干预，动物接受单独的CVC或与OCA或GFT505联合的CVC。
图45示出了CDAA NASH模型中的另一种临床前联合研究方案。动物将接受仅CDAA饮食、治疗性干预(例如利拉鲁肽、伊格列净(ipragliflozin)或卡格列净、阿格列汀(alogliptin)或化合物1D11)或与治疗性干预联合的CVC。
具体实施方式
应当理解的是，单数形式如“一个/种”和“该/所述”在整个本申请中是为了方便而使用，然而，除非上下文或明确的陈述另外指出，否则单数形式也意图包括复数。此外，应该理解的是，本文中所提到的每一期刊文章、专利、专利申请、出版物等在此通过引用整体并入本文并用于所有目的。所有的数值范围应当被理解为包括该数值范围内的每一个数值点，并且应该被解释为单独地列举每一个数值点。涉及相同组分或性质的所有范围的端点是包含性的并且意图为可独立地组合。
定义：
除了下面所讨论的术语，在本申请中使用的所有术语旨在具有本领域技术人员在本发明的时间下将赋予它们的含义。
“约”包括具有与参考值大体上相同的作用或提供大体上相同的结果的所有值。因此，由术语“约”涵盖的范围将根据使用该术语的上下文而变化，例如，与参考值相关联的参数。因此，根据上下文，“约”可以意指例如±15％、±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％或±小于1％。重要的是，由术语“约”开头的参考值的所有列举旨在也是参考值的单独列举。尽管有前述内容，但在本申请中，术语“约”具有关于药代动力学参数如曲线下面积(包括AUC、AUCt和AUC∞)、Cmax、Tmax等的特殊含义。当与药代动力学参数的值关联使用时，术语“约”意指参考参数的80％至125％。
“赛尼克韦罗”是指化合物(S)-8-[4-(2-丁氧基乙氧基)苯基]-1-异丁基-N-(4-{[(1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基]亚硫酰基}苯基)-1,2,3,4-四氢-1-苯并吖辛因-5-甲酰胺(结构如下所示)。赛尼克韦罗的物质组成的细节公开于美国专利申请公开号2012/0232028中，该申请出于所有目的在此通过引用整体并入。相关制剂的细节公开于美国申请号61/823,766中，该申请出于所有目的在此通过引用整体并入。
“本发明的化合物”或“本发明化合物”是指赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物。
“大体上类似”意指组合物或制剂的特性和量在很大程度上类似于参考组合物或制剂的组合物或制剂。
“药学上可接受的”是指可以在医学或药学中使用，包括用于兽医目的，例如施用给受试者的物质或方法。
“盐”和“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。“酸加成盐”是指保持游离碱的生物有效性和性质，不是生物学上或其它方面不期望的，并且由无机酸和有机酸形成的那些盐。“碱加成盐”是指保持游离酸的生物有效性和性质，不是生物学上或其它方面不期望的，并且由无机碱或有机碱加成到游离酸上所制备的那些盐。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱性残基诸如胺的无机或有机酸加成盐；酸性残基的碱金属或有机加成盐；和类似物，或包括前述盐中的一种或多种的组合。药学上可接受的盐包括活性剂的盐和季铵盐。例如，酸性盐包括那些由无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等衍生的盐；其它可接受的无机盐包括金属盐如钠盐、钾盐、铯盐等；和碱土金属盐如钙盐、镁盐等，或包括前述盐中的一种或多种的组合。药学上可接受的有机盐包括由有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、羟乙酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n是0-4)等制备的盐；有机胺盐如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、N,N’-二苄基乙二胺盐等；以及氨基酸盐如精氨酸、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等；或包括前述盐中的一种或多种的组合。
在一个实施方案中，赛尼克韦罗的酸加成盐是赛尼克韦罗甲磺酸盐，例如(S)-8-[4-(2-丁氧基乙氧基)苯基]-1-异丁基-N-(4-{[(1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基]亚硫酰基}苯基)-1,2,3,4-四氢-1-苯并吖辛因-5-甲酰胺单甲磺酸盐。在一个实施方案中，赛尼克韦罗甲磺酸盐是结晶材料，诸如浅绿至黄色结晶粉末。在一个实施方案中，赛尼克韦罗甲磺酸盐易溶于冰醋酸、甲醇、苯甲醇、二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺；可溶于吡啶和乙酸酐；且难溶于99.5％乙醇；微溶于乙腈、1-辛醇和四氢呋喃；而几乎不溶于乙酸乙酯和乙醚。在一个实施方案中，赛尼克韦罗甲磺酸盐易溶于pH为1至2的水溶液；在pH 3下难溶并且在pH 4至13下几乎不溶于水。
“溶剂化物”意指通过溶剂化(溶剂分子与本发明活性剂的分子或离子的结合)形成的复合物，或由溶质离子或分子(即，本发明的活性剂)与一个或多个溶剂分子组成的聚集体。在本发明中，优选的溶剂化物是水合物。
“药物组合物”是指本公开的化合物和本领域中普遍接受的用于将生物活性化合物递送给哺乳动物(例如人类)的介质的制剂。这种介质包括所有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
“治疗”包括改善、减轻和减少疾病或病状的例子，或疾病或病状的症状。
“施用”包括任何施用模式，诸如口服、皮下、舌下、经粘膜、肠胃外、静脉内、动脉内、经颊、舌下、局部、阴道、直肠、眼部、耳部、鼻、吸入、肌内、骨内、囊内和经皮或其组合。“施用”还可以包括开处方或对于包含特定化合物的剂型配处方。“施用”还可以包括提供对实施涉及特定化合物或包含该化合物的剂型的方法的指导。
“治疗有效量”意指当施用给受试者用于治疗疾病、病症或其它不希望的医学病状时足以具有针对该疾病、病症或病状的有益作用的活性物质的量。治疗有效量将根据活性物质的化学特性和制剂形式、疾病或病状及其严重程度以及待治疗的患者的年龄、体重和其它相关特性而变化。确定给定活性物质的治疗有效量在本领域的一般技术范围内并且通常只需要常规实验。
纤维化：
纤维化是在修复或反应过程中过量纤维结缔组织在器官或组织中的形成。这可以是反应性的、良性的或病理性的状态。结缔组织在器官和/或组织中的沉积可以摧毁下面的器官或组织的结构和功能。纤维化是纤维组织的过量沉积的这种病理状态，以及在愈合时结缔组织沉积的过程。
纤维化与疤痕形成过程的相似性在于两者都涉及位于结缔组织下方的经刺激细胞，其包括胶原和糖胺聚糖。介导许多免疫和炎性反应的细胞因子在纤维化的发展中发挥作用。由诸如脂肪堆积、病毒病原、过量饮酒、肝毒素的因素导致的肝细胞损伤不可避免地触发炎性免疫反应。细胞因子和趋化因子在肝脏中的产生增加导致募集促炎性单核细胞(前体细胞)，它们随后成熟为促炎性巨噬细胞。促炎性巨噬细胞在性质上是促纤维生成的，并且最终导致肝星状细胞(HSC)的激活，肝星状细胞主要负责细胞外基质(ECM)的沉积。
导致炎症的各种免疫细胞群的浸润是急性和慢性肝损伤后的中心病原特征。慢性肝脏炎症导致连续肝细胞损伤，这可导致纤维化、肝硬化、ESLD和HCC。肝内免疫细胞之间的相互作用导致增加枯否细胞(Kupffer cell)和HSC的激活和迁移，并且对于肝纤维化的发展是关键事件。另外，关于CCR2和CCR5在肝纤维化的发病机制中的作用的证据越来越多[1-7,9,31]。C-C趋化因子家族的这些成员由促纤维生成细胞表达，这些细胞包括促炎性单核细胞和巨噬细胞、枯否细胞和HSC[1-4]。CCR2信号传导通过调节骨髓源性成纤维细胞而在肾纤维化的发病机制中起重要作用[8]。CCR2阳性和CCR5阳性单核细胞以及CCR5阳性T淋巴细胞被局部释放的MCP-1和RANTES吸引，并且能够促进肾脏中的慢性间质性炎症[10,11]。在啮齿动物中，CVC在肝脏、肠系膜淋巴结和肠(也被描述为肠-肝轴)中具有高分布。肠道菌群的破坏和其对肠-肝轴的下游效应都在代谢障碍如肥胖、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中起重要作用[16,23]。
表1列出了由肝细胞表达的趋化因子[30]。
肝星状细胞(HSC)的激活在肝纤维化的发病机制中起重要作用。在肝损伤后，肝星状细胞(HSC)被激活并表达基质金属蛋白酶(MMP)及其特异性组织抑制剂(TIMP)的组合[32]。在肝损伤的早期阶段，HSC瞬时表达MMP-3、MMP-13和尿激酶血纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)并且表现出基质降解表型。细胞外基质的降解似乎不是CCR2或CCR5依赖性的。
激活的HSC可以通过诱导单形核白细胞和多形核白细胞的浸润而增强炎症反应。浸润性单核细胞和巨噬细胞经由几种机制(包括增加细胞因子的分泌和产生氧化应激相关产物)参与纤维化的发展。激活的HSC可以表达CCR2和CCR5并且产生趋化因子，这些趋化因子包括MCP-1、MIP-1α、MIP-1β和RANTES。CCR2促进HSC趋化性和肝纤维化的发展。在人类肝脏疾病中，增加的MCP-1与巨噬细胞募集以及肝纤维化和原发性胆汁性肝硬化的严重程度有关。CCR5刺激HSC迁移和增殖。
在肝损伤和HSC激活的后期阶段，模式发生变化且细胞表达具有降解正常肝基质的能力的MMP的组合，同时抑制在肝纤维化中累积的纤维状胶原的降解。这种模式的特征在于促MMP-2和膜型1(MT1)-MMP表达的组合，其促使活性MMP-2在细胞周围的产生和正常肝基质的局部降解。另外，TIMP-1的表达显著增加，从而导致更全面地抑制间质胶原酶(MMP-1/MMP-13)对纤维状肝脏胶原的降解。在与慢性酒精性肝病相关的肝损伤中，TNF-α、IL-1、IL-6以及趋化因子IL-8/CXCL8的产生增加。TNF-α也是非酒精性脂肪肝病的重要介质。这些途径在肝纤维化的进展中起重要作用。抑制HSC的激活和加快激活的HSC的清除可以是用于解决肝纤维化的有效策略。
趋化因子家族在炎症中起着重要的调节作用。这个家族的成员包括但不限于：CXC受体和配体，包括但不限于：CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7、CXCR8、CXCR9、CXCR10、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16和CXCL17；CC趋化因子和受体，包括但不限于CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9和CCR10；C趋化因子，包括但不限于XCL1、XCL2和XCR1；以及CX3C趋化因子，包括但不限于CS3CL1和CX3CR1。这些分子在纤维化器官或组织中可能上调。在另外的实施方案中，这些分子在纤维化器官或组织中可能下调。在另外的实施方案中，在这些趋化因子的信号传导途径中的分子可能在纤维化器官或组织中上调。在另外的实施方案中，在这些趋化因子的信号传导途径中的分子可能在纤维化器官或组织中下调。
纤维化可以发生在身体内的许多组织中，包括但不限于肺、肝、骨髓、关节、皮肤、消化道、淋巴结、血管或心脏并且通常是炎症或损伤的结果。纤维化或纤维化疾病和/或病状的非限制性实例包括肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肝硬化、心内膜心肌纤维化、心肌梗塞、心房纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、尘肺病并发症、肾原性系统性纤维化、克罗恩氏病(Crohn's Disease)、瘢痕疙瘩、硬皮病/系统性硬化、关节纤维化、佩罗尼氏病(Peyronie's disease)、掌腱膜挛缩症(Dupuytren'scontracture)、与动脉粥样硬化相关的纤维化、淋巴结纤维化、新发性肝硬化、非硬化性肝纤维化、肾纤维化和粘连性关节囊炎。
治疗效用的实施方案：
本发明提供了用于治疗纤维化和/或纤维化疾病和/或病状的联合疗法。当在肝损伤发作(TAA)时或不久之后(TAA；HFD)但从未确立肝硬化(TAA)而开始CVC治疗时，在动物研究中观察到CVC的抗纤维化作用。这表明CVC的抗纤维化作用在具有确立的肝纤维化并处在重大的疾病进展风险下的群体中可能更显著。这些包括：与2型糖尿病(T2DM)和代谢综合征(MS)、HIV和HCV共感染或HCV感染相关的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，酒精性肝病，病毒性肝炎(诸如HBV或HCV感染)，新发性肝硬化，非硬化性肝纤维化及其组合。
NASH
本文公开的联合疗法可以用于治疗由非酒精性脂肪性肝炎(NASH)引起的肝纤维化，NASH是影响2％至5％的美国人的常见肝脏疾病。虽然由于NASH所导致的肝损伤具有酒精性肝病的一些特点，但是它发生在很少或根本不饮酒的人中。NASH的主要特征是肝脏中的脂肪，以及炎症和肝细胞损伤(气球样变性)。NASH可能是严重的并且可能导致肝硬化，在肝硬化中肝被永久损伤并结疤，并且不再能够适当地工作。非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是与肥胖相关性病症如2型糖尿病和代谢综合征相关的常见且经常“沉默”的肝病，其发生在很少或根本不饮酒的人中，并且特征在于脂肪在肝脏中的积累，没有其它明显的原因。[32-43]NAFLD疾病谱的起点是简单的脂肪变性，其特征在于脂肪在肝脏中的累积。无炎症的肝脏脂肪变性通常是良性和缓慢的或无进展的。NASH是NAFLD的更晚期和严重的亚型，其中脂肪变性并发肝细胞损伤和炎症，伴有或不伴有纤维化。
肥胖相关性病症的患病率上升已经促使NASH的患病率迅速升高。患有NAFLD的受试者的约10％至20％将会进展至NASH[44]。
NAFLD是慢性肝病的最常见的原因。[45]大多数美国研究报告了10％到35％的NAFLD患病率；然而，这些比率随研究群体和诊断方法而变化。[46]由于大约三分之一的美国人口被认为是肥胖的，因此NAFLD在美国人群中的患病率可能为约30％[46]。一项研究发现，NAFLD影响大约27％至34％的美国人，或估计有8.6亿至1.08亿患者。[44]NAFLD并非美国独有。来自世界的其它地方(包括巴西、中国、印度、以色列、意大利、日本、韩国、斯里兰卡和台湾)的报告表明，患病率在6％到35％的范围内(中位数为20％)。[46]由澳大利亚胃肠病学会(Gastroenterological Society of Australia)/澳大利亚肝脏协会(AustralianLiver Association)进行的一项研究发现，NAFLD影响估计有550万的澳大利亚人，包括年龄≥50岁的所有成年人中的40％。[47]澳大利亚的一项重度肥胖患者的研究发现，这些患者中的25％患有NASH。[48]
需要进行肝活检来作出NASH的确诊。在美国针对中年个体的研究中，组织学证实的NASH患病率为12.2％。[49]目前将NASH在美国的患病率估计为约900万至1500万(美国人口的3％至5％)，在欧盟和中国的患病率相似。[46,50]肥胖人群中NASH的患病率在10％至56％的范围内(中位数为33％)。[46]在来自加拿大的一系列较瘦个体的尸检中，脂肪性肝炎和纤维化的患病率分别为3％和7％。[46]在发展中地区，NASH的患病率也在增加，这是因为这些地区的人们开始采用更久坐的生活方式和西式饮食[51]，这些饮食包括高脂肪和糖/果糖含量的加工食品。[52]
NASH是由肝脂肪变性和炎症以及肝细胞损伤的存在确定的严重慢性肝病，其伴有或不伴有纤维化。[34]慢性肝脏炎症是纤维化的前兆，其可以发展为肝硬化、晚期肝病和肝细胞癌。除了胰岛素抗性、改变的脂质储存和代谢、胆固醇在肝脏中的积累、导致肝损伤增加的氧化应激和继发于肠道菌群破坏的细菌易位[34,53-56](与高果糖含量饮食相关)都被认为是导致NASH进展的重要辅助因素。[57-60]由于肥胖和糖尿病日益增多，预计NASH将成为晚期肝病的最常见原因和肝移植的最常见指征。[46,61-63]NASH的负担，加上缺乏任何得到批准的治疗性干预措施，代表了尚未满足的医疗需求。
在另外的实施方案中，肝纤维化与新发性肝硬化相关。在一些实施方案中，肝硬化与酒精损害有关。在另外的实施方案中，肝硬化与肝炎感染有关，所述肝炎感染包括但不限于乙型肝炎和丙型肝炎感染、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎或脂肪肝疾病。在一些实施方案中，本发明提供了治疗有发展为肝纤维化或肝硬化的风险的受试者的方法。
在另一个实施方案中，纤维化包括非硬化性肝纤维化。在又一个实施方案中，受试者被人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。在又一个实施方案中，受试者感染了肝炎病毒，包括但不限于HCV(C型肝炎病毒)。在另外的实施方案中，受试者患有糖尿病。在另外的实施方案中，受试者患有2型糖尿病。在另外的实施方案中，受试者患有1型糖尿病。在另外的实施方案中，受试者患有代谢综合征(MS)。在另一个实施方案中，受试者患有酒精性肝病。在另一个实施方案中，受试者患有病毒性肝炎。在一个实施方案中，病毒性肝炎由HBV感染引起。在另一个实施方案中，病毒性肝炎由HCV感染引起。在另外的实施方案中，受试者患有这些疾病或病症中的一种或多种。在另外的实施方案中，受试者有发展为这些疾病中的一种或多种的风险。在另外的实施方案中，受试者具有胰岛素抗性。在另外的实施方案中，受试者具有增加的血糖浓度、高血压、升高的胆固醇水平、升高的甘油三酯水平，或者是肥胖的。在另外的实施方案中，受试者具有多囊卵巢综合征。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗方法，其中赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物与一种或多种另外的活性剂共施用。在另一个实施方案中，另外的活性剂是抗炎剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂是趋化因子受体拮抗剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制趋化因子与趋化因子受体的结合。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制配体与CCR1的结合。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制CCR5配体与CCR1的结合。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂可以抑制肝脏载脂蛋白CIII表达、抑制胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)表达、诱导高密度脂蛋白介导的经肝胆固醇流出、防止胆汁淤积性肝损伤、减轻肝脏炎症和/或纤维化、降低肝脂质积累和/或抑制促炎和/或促纤维化基因表达。在一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂选自包括但不限于以下的组：法尼醇X受体(FXR)激动剂、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-δ激动剂、高剂量维生素E(>400iU/d)、GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、DPP-4抑制剂、Toll样受体4信号传导抑制剂、抗TGFβ抗体、噻唑烷二酮、PPAR亚型α和γ激动剂和口服胰岛素敏化剂、奥贝胆酸、3-[2-[2-氯-4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-(1-甲基乙基)-4-异噁唑基]甲氧基]苯基]乙烯基]苯甲酸(GW4064)、2-甲基-2-[[4-[2-[[(环己基氨基)羰基](4-环己基丁基)氨基]乙基]苯基]硫基]-丙酸(GW7647)和2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)、3-(3,4-二氟苯甲酰基)-1,2,3,6-四氢-1,1-二甲基氮杂[4,5-b]吲哚-5-甲酸1-甲基乙酯(WAY-36245)、胆汁酸衍生物(例如INT-767、INT-777)、氮杂[4,5-b]吲哚、1-[(4-氯苯基)甲基]-3-[(1,1-二甲基乙基)硫基]-α,α-二甲基-5-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-丙酸(MK886)、N-((2S)-2-(((1Z)-1-甲基-3-氧-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-烯基)氨基)-3-(4-(2-(5-甲基-2-苯基-1,3-噁唑-4-基)乙氧基)苯基)丙基)丙酰胺(GW6471)、2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲基硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)、利拉鲁肽、卡格列净、阿拉格列汀、TAK-242、1D11、MSDC-0602、吡格列酮和罗格列酮或其组合。
某些实施方案包括用于监测和/或预测如本文所述的本治疗的治疗功效的方法。此类方法包括检测纤维化或纤维化疾病或病状经治疗的受试者中(或来自该受试者的生物样品中)的一种或多种生物分子如生物标记物的水平，其中一种或多种生物分子的水平相较于预定标准水平的升高或降低指示或预测本治疗的治疗功效。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗方法，其包括检测纤维化或纤维化疾病或病状经治疗的受试者中的一种或多种生物分子的水平，以及基于一种或多种生物分子的水平的升高或降低确定治疗方案，其中所述生物分子选自由以下组成的组：脂多糖(LPS)、LPS结合蛋白(LBP)、16S rDNA、sCD14、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、连蛋白-1、胶原1a1和3a1、TGF-β、纤连蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纤维蛋白原、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝细胞细胞凋亡的生物标记物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)、或细菌易位的生物标记物如LPS、LBP、sCD14和I-FABP、α2-巨球蛋白、载脂蛋白A1、触珠蛋白、透明质酸、羟脯氨酸、III型胶原的N-末端前肽、金属蛋白酶的组织抑制剂或其组合。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗方法，其包括检测纤维化或纤维化疾病或病状经治疗的受试者中的一种或多种生物分子的水平，其中一种或多种生物分子的水平相较于预定标准水平的升高或降低预测纤维化或纤维化疾病或病状的治疗功效。
在另外的实施方案中，一种或多种生物分子在来自纤维化或纤维化疾病或病状经治疗的受试者的生物样品中进行测量。在又一个实施方案中，生物样品选自血液、皮肤、毛囊、唾液、口腔粘膜、阴道粘膜、汗液、泪液、上皮组织、尿液、精子、精液、精浆、前列腺液、预射精液(考珀液)、排泄物、活检物、腹水、脑脊液、淋巴、脑以及组织提取物样品或活检样品。
NASH的CDAA小鼠模型
胆碱缺乏型L-氨基酸限定(CDAA)饮食已被用作NASH的啮齿动物模型，并且其特征在于脂肪变性、炎性细胞浸润和纤维化(Nakae等人(1995)Toxic.Pathol.23(5):583-590)。NASH可以通过抑制肝细胞中的脂肪酸氧化而产生。CDAA饮食小鼠体重未增加或外周胰岛素敏感性没有变化(Kodama等人(2009)Gastroenterology 137(4):1467-1477)。CDAA模型(如MCD模型)可用于研究NASH疾病谱的炎症和纤维化要素。
联合疗法：
本发明的化合物可以单独使用或与一种或多种另外的活性剂联合使用。所述一种或多种另外的活性剂可以是能够对有需要的受试者施加治疗作用的任何化合物、分子或物质。所述一种或多种另外的活性剂可以“共施用”，即，作为不同的药物组合物或配混在单一药物组合物中以协调方式一起施用给受试者。通过“共施用”，所述一种或多种另外的活性剂也可以与本发明化合物同时施用，或与本发明化合物分开施用，包括在不同的时间和以不同的频率。所述一种或多种另外的活性剂可以通过任何已知的途径施用，诸如口服、静脉内、皮下、肌内、经鼻等；且治疗剂也可以通过任何常规途径施用。在许多实施方案中，所述一种或多种另外的活性剂中的至少一种和任选两种可以口服施用。
这些一种或多种另外的活性剂包括但不限于抑制肝载脂蛋白CIII表达、抑制胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)表达、诱导高密度脂蛋白介导的经肝胆固醇流出、防止胆汁淤积性肝损伤、减轻肝脏炎症和/或纤维化、降低肝脂质积累、抑制促炎和/或促纤维化基因表达的药剂，法尼醇X受体(FXR)激动剂，和/或过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α和δ)激动剂，抗炎剂，趋化因子受体拮抗剂，或其组合。当两种或更多种药物联合使用时，每种药物的剂量通常与该药物在独立使用时的剂量相同，但是当一种药物干扰另一种药物的代谢时，每种药物的剂量应适当地调整。每种药物可以同时施用或在小于12小时的时间间隔内分开施用。如本文所述的剂型如胶囊可以按适当的间隔施用。例如，每天一次、每天两次、每天三次等等。具体地讲，所述剂型每天施用一次或两次。甚至更具体地讲，所述剂型每天施用一次。还更具体地讲，所述剂型每天施用两次。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂包括但不限于法尼醇X受体(FXR)激动剂、高剂量维生素E(>400iU/d)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)激动剂、PPAR-γ激动剂和PPAR-δ激动剂、奥贝胆酸、吡格列酮、3-[2-[2-氯-4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-(1-甲基乙基)-4-异噁唑基]甲氧基]苯基]乙烯基]苯甲酸(GW4064)、2-甲基-2-[[4-[2-[[(环己基氨基)羰基](4-环己基丁基)氨基]乙基]苯基]硫基]-丙酸(GW7647)和2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)、3-(3,4-二氟苯甲酰基)-1,2,3,6-四氢-1,1-二甲基氮杂[4,5-b]吲哚-5-甲酸1-甲基乙酯(WAY-36245)、胆汁酸衍生物(例如INT-767、INT-777)、氮杂[4,5-b]吲哚、1-[(4-氯苯基)甲基]-3-[(1,1-二甲基乙基)硫基]-α,α-二甲基-5-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-丙酸(MK886)、N-((2S)-2-(((1Z)-1-甲基-3-氧-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-烯基)氨基)-3-(4-(2-(5-甲基-2-苯基-1,3-噁唑-4-基)乙氧基)苯基)丙基)丙酰胺(GW6471)、2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲基硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗炎剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂是趋化因子受体拮抗剂。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制趋化因子配体与趋化因子受体的结合。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制配体与CCR1的结合。在另一个实施方案中，另外的活性剂抑制CCR5配体与CCR1的结合。在一个实施方案中，趋化因子配体包括但不限于MCP-1(CCL2)、MIP-1α(CCL3)、RANTES(CCL5)、MIP-3β(CCL19)、SLC(CCL21)、Mig(CXCL9)、IP-10(CXCL10)、CSCL16、LEC(CCL16)、IL-8(CXCL8)、嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)(CCL11)、MIP-1β(CCL4)、CX3CL1、KC(CXCL1)、MIP-2(CXCL2)、MIP-3α(CCL20)、CXCL16、TECK(CCL25)、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL17和CCL18或其组合。在一个实施方案中，趋化因子受体包括但不限于CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9和CCR10；C趋化因子，包括但不限于XCL1、XCL2和XCR1；乙基CX3C趋化因子，包括但不限于CS3CL1和CX3CR1或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂抑制CCR5配体(例如MIP-1α、RANTES)与CCR1的结合。在一个实施方案中，另外的治疗剂是Aplaviroc、Vicriviroc、Maraviroc、趋化因子肽衍生物、小分子抑制剂、抗体、Met-RANTES、AOP-RANTES、RANTES(3–68)、嗜酸粒细胞趋化因子(3–74)、Met-Ckbeta7、I-Tac/E0H1、CPWYFWPC-肽、衍生自化合物J113863的小分子、化合物J113863的小分子反式异构体、SB-328437(Glaxo-SmithKline)、RO116-9132-238(Roche Bioscience)、化合物25(Merck)、A-122058(Abbott Laboratories)、DPCA37818、DPC168、化合物115(Bristol-MyersSquibb)、哌啶拮抗剂、CP-481,715(Pfizer)、MLN3897(Millennium/Sanofi Aventis)、BX471(结构如下所示，Berlex/Scherring AG)、AZD-4818(Astra-Zeneca)、BMS-817399(Bristol-Myers Squibb)、CAM-3001(Medimmune)、CCX354-C(Chemo-Centryx)、CCx915/MK-0812、INCB8696(InCyte)、RO5234444、GW766994、JC1、BKT140、丙帕锗(propagermanium)、紫草素(Shikonin)、BX471和/或YM-344031。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括GLP-1受体激动剂在一个实施方案中，GLP-1受体激动剂包括但不限于利拉鲁肽、艾塞那肽、利西拉肽、阿必鲁肽、杜拉鲁肽、司美鲁肽、OG217SC和/或塔斯鲁肽或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是利拉鲁肽。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括SGLT2抑制剂。在一个实施方案中，SGLT2抑制剂包括但不限于伊格列净、卡格列净、达格列净(dapagliflozin)、瑞格列净(remogliflozin)和/或依帕列净(empagliflozin)或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是伊格列净。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是卡格列净。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括DPP-4抑制剂。在一个实施方案中，DPP-4抑制剂包括但不限于西他列汀(sitagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、维格列汀(vildagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利格列汀(linagliptin)、阿那列汀(anagliptin)、特内利汀(teneligliptin)、吉米列汀(gemigliptin)、杜拓格利普汀(dutogliptin)、黄连素(berberine)、曲格列汀(trelagliptin)和/或羽扇醇(lupeol)或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是阿那列汀。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括Toll样受体-4信号传导抑制剂。在一个实施方案中，另外的治疗剂是Toll样受体-4信号传导的小分子抑制剂。在一个实施方案中，Toll样受体-4信号传导抑制剂包括但不限于TAK-242、依立托伦(eritoran)、阿米替林(amitriptyline)、环苯扎林(cyclobenzaprine)、异丁司特(ibudilast)、丙咪嗪(imipramine)、酮替芬(ketotifen)、米安色林(mianserin)、纳洛酮(naloxone)、纳曲酮(naltrexone)、丙戊茶碱(propentofylline)和/或LPS-RS或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是TAK-242。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括TGF-β抑制剂。在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗TGFβ单克隆抗体。在一个实施方案中，抗TGFβ单克隆抗体包括但不限于1D11、CAT-192、夫苏木单抗(Fresolimumab)(GC1008)或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是1D11。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括噻唑烷二酮。在一个实施方案中，噻唑烷二酮激活PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)。在一个实施方案中，噻唑烷二酮包括但不限于吡格列酮和/或罗格列酮(rohsiglitazone)。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括PPAR亚型α和γ激动剂。在一个实施方案中，PPAR亚型α和γ激动剂包括但不限于沙罗格列扎(saroglitazar)、洛贝格列酮(lobeglitazone)、替格列扎(tesaglitazar)、阿格列扎(aleglitazar)和/或莫格列扎(muraglitazar)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括口服胰岛素敏化剂。在一个实施方案中，口服胰岛素敏化剂是MSDC-0602。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括PPARα亚型激动剂。在一个实施方案中，PPARα亚型激动剂包括但不限于贝特类药物、两亲性羧酸、氯贝丁酯(clofibrate)、吉非贝齐(gemfibrozil)、环丙贝特(ciprofibrate)、苯扎贝特(bezafibrate)、非诺贝特(fenofibrate)和/或K877或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是K877。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括MetAP2抑制剂。在一个实施方案中，MetAP2抑制剂包括但不限于Beloranib、ZGN-839、XMT1107、烟曲霉素(fumagillin)和/或TNP-470或其组合。在示例性实施方案中，MetAP2抑制剂是Beloranib、ZGN-839和/或XMT1107。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括甲基化黄嘌呤衍生物。在一个实施方案中，甲基化黄嘌呤衍生物包括但不限于咖啡因、氨茶碱、IBMX、副黄嘌呤、己酮可可碱、可可碱和/或茶碱或其组合。在一个示例性实施方案中，甲基化黄嘌呤衍生物是己酮可可碱。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括蛋白质的正五聚蛋白家族的成员。在一个示例性实施方案中，正五聚蛋白是正五聚蛋白-2。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括NADPH氧化酶抑制剂。在一个实施方案中，NADPH氧化酶抑制剂包括但不限于GKT136901、GKT137831、GKT-901、吡唑并吡啶、三唑并嘧啶衍生物、VAS2870和/或VAS3947或其组合。在示例性实施方案中，NADPH氧化酶抑制剂是GKT137831和/或GKT-901。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括半胱天冬酶抑制剂。在一个实施方案中，半胱天冬酶抑制剂是小分子半胱天冬酶抑制剂。在一个实施方案中，半胱天冬酶抑制剂是泛半胱天冬酶抑制剂。在一个实施方案中，半胱天冬酶抑制剂包括但不限于VX-765、GS-9450、恩利卡生(Emricasan)、普那卡生(Pralnacasan)、磺酰胺、醌、环氧醌(epoxyquinone)、环氧醌醇(epoxyquinol)和/或一氧化氮(NO)供体或其组合。在一个示例性实施方案中，半胱天冬酶抑制剂是恩利卡生。在一个示例性实施方案中，半胱天冬酶抑制剂是GS-9450。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括ASK-1抑制剂。在一个实施方案中，ASK-1抑制剂包括但不限于硫氧还蛋白、GS-4997、TC ASK 10、3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮和/或5-(5-苯基-呋喃-2-基亚甲基)-2-硫代-噻唑烷-4-酮或其组合。在一个示例性实施方案中，ASK-1抑制剂是GS-4997。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括赖氨酰氧化酶样2(LOXL-2)抑制剂。在一个实施方案中，赖氨酰氧化酶样2(LOXL-2)抑制剂包括但不限于抗LOXL-2单克隆抗体、西妥珠单抗(simtuzumab)、β-氨基丙腈、小分子抑制剂和/或PXS-4728A或其组合。在一个示例性实施方案中，赖氨酰氧化酶样2(LOXL-2)抑制剂西妥珠单抗。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)/血管粘附蛋白1(VAP-1)抑制剂。在一个实施方案中，氨基脲敏感的胺氧化酶(SSAO)/血管粘附蛋白1(VAP-1)抑制剂包括但不限于PXS4728A、PXS-4681A、SSAO/VAP-1的小分子抑制剂和/或PXS-4159A或其组合。在一个示例性实施方案中，SSAO/VAP-1抑制剂是PXS4728A。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括回肠胆汁酸转运体。在一个实施方案中，回肠胆汁酸转运体包括但不限于A3309、A4250和/或伊洛比利巴(eliobixibat)或其组合。在示例性实施方案中，回肠胆汁酸转运体是A4250或伊洛比利巴。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括顶端钠依赖性胆汁酸转运体。在一个实施方案中，顶端钠依赖性胆汁酸转运体包括但不限于SHP626、GSK-2330672、264W94、A4250、苯并噻呯(benzothiepine)类似物、SC-435和/或SC-635或其组合。在示例性实施方案中，顶端钠依赖性胆汁酸转运体是SHP626和/或GSK-2330672。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括噻唑烷二酮线粒体靶标(mToT)调节剂。在一个实施方案中，噻唑烷二酮线粒体靶标(mToT)的调节剂包括但不限于mToT、MSDC-0160和/或MSDC-0602或其组合。在一个示例性实施方案中，mToT调节剂是mToT。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括半胱胺酒石酸氢盐。在一个实施方案中，半胱胺酒石酸氢盐包括但不限于半胱胺、RP103和/或Procysbi或其组合。在一个示例性实施方案中，半胱胺酒石酸氢盐是半胱胺。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括Toll样受体4激动剂。在一个实施方案中，Toll样受体4激动剂包括但不限于模拟LPS的合成肽、PAMP、JKB-121和/或VB201或其组合。在示例性实施方案中，Toll样受体4激动剂是JKB-121和/或VB201。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂。在一个实施方案中，乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂包括但不限于soraphen A、小分子ACC抑制剂、5-(十四烷氧基)-2-糠酸(TOFA)、andrimid和/或NDI-010976或其组合。在一个示例性实施方案中，ACC抑制剂是NDI-010976。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括成纤维细胞生长因子(FGF)19激素。在一个实施方案中，FGF19激素是工程化的人FGF19激素。在一个示例性实施方案中，FGF19激素是NGM282。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括脂肪酸-胆汁酸缀合物(FABAC)。在一个实施方案中，脂肪酸-胆汁酸缀合物包括但不限于Aramchol和/或EBHU18或其组合。在一个示例性实施方案中，脂肪酸-胆汁酸缀合物是Aramchol。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括二酰甘油酰基转移酶-1抑制剂(DGAT-1)。在一个实施方案中，二酰甘油酰基转移酶-1抑制剂包括但不限于AZD7687、普地斯特(pradigastat)、XP620和/或P7435或其组合。在示例性实施方案中，二酰基甘油酰基转移酶-1抑制剂是普地斯特和/或P7435。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括二酰甘油酰基转移酶-2抑制剂(DGAT-2)。在一个实施方案中，二酰甘油酰基转移酶-2抑制剂包括但不限于H2-003、H2-005、ISIS-DGAT2Rx和/或PF-06424439或其组合。在示例性实施方案中，二酰基甘油酰基转移酶-2抑制剂是ISIS-DGAT2Rx和/或PF-06424439。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括P2Y13受体激动剂。在一个实施方案中，P2Y13受体激动剂包括但不限于AR-C69931MX、2MeSADP、Ap4A和/或CER-209或其组合。在示例性实施方案中，二酰甘油酰基转移酶-2抑制剂是CER-209。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗炎细胞因子。在一个实施方案中，抗炎细胞因子包括但不限于IL-10、IL-4、IL-13、IL-35、TGF-β或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是IL-10。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抑制炎性细胞因子的分子。在一个实施方案中，可被抑制的炎性细胞因子包括但不限于TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IFNγ、TGF-β或其组合。在一个实施方案中，另外的治疗剂是TNF-α抑制剂。在一个实施方案中，TNF-α抑制剂是戊氧基菲林(pentoxyphylline)、沙利度胺(thalidomide)、吡非尼酮(pirfenidone)、抗TNF-α抗体或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是戊氧基菲林。在另一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是依那西普(etanercept)
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗病毒药物。在一个实施方案中，抗病毒药物包括但不限于干扰素、IFN-α2b、聚乙二醇化干扰素、PEG-IFN-α2b、IFN-γ1b、IFN-α2a、PEG-IFNα2a、IFN-α或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是IL-10。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括血管紧张素II受体拮抗剂。在一个实施方案中，血管紧张素II受体拮抗剂包括但不限于氯沙坦(losartan)、替米沙坦(telmisartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、阿齐沙坦(azilsartan)、奥美沙坦(olmesartan)、缬沙坦(valsartan)、非马沙坦(fimasartan)、坎地沙坦(candesartan)或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是氯沙坦。在另一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是坎地沙坦。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括单克隆抗体。在一个实施方案中，单克隆抗体包括但不限于抗LOXL2、GS-6624、抗CTGF、GF-3019、抗MCP1、抗CCL2、抗MCP1/CCL2、CNT0888、抗IL-13、QAX576、抗IL-4、抗Il-4/13、SAR156597、抗-αVβ6、STX-100、抗-IL-17A、抗-IL-17R、夫苏木单抗、FG-3019、苏金单抗(secukinumab)、lxekizumab、brodalumab、RG4934、NI-1401、SCH 900117、ABT-122、MDS-1338、抗CXCR4、抗-Mir21或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括营养补充剂。在一个实施方案中，营养补充剂包括但不限于生育酚、维生素、扶正化瘀(fuzheng huayu)、甘草酸、维生素E、维生素C、维生素D、维生素D3、ω-3脂肪酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗逆转录病毒疗法。在一个实施方案中，抗逆转录病毒疗法包括但不限于HIV抗逆转录病毒疗法、进入抑制剂、NRTI、NtRTI、NNRTI、整合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、拉替拉韦(raltegravir)、利托那韦(ritonavir)加强蛋白酶抑制剂、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)、富马酸泰诺福韦酯(disproxil fumate)、恩替卡韦(entecavir)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗氧化剂。在一个实施方案中，抗氧化剂包括但不限于丹酚酸B、NAC、α-硫辛酸或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗增殖剂。在一个实施方案中，抗增殖剂包括但不限于奥替普拉(oltipraz)、四硫钼酸盐、吗替麦考酚酯(Mycophenolate Mofetil)(MMF)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、西罗莫司(Sirolimus)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括ET1拮抗剂。在一个实施方案中，ET1拮抗剂包括但不限于ETIAR拮抗剂、ET1BR拮抗剂、双重ET1AR和ET1BR拮抗剂、波生坦(bosentan)、安立生坦(ambrisentan)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括激酶抑制剂。在一个实施方案中，激酶抑制剂包括但不限于伊马替尼(imatinib)、阿法替尼(afatinib)、阿西替尼(axitinib)、波舒替尼(bosutinib)、西妥昔单抗(cetuximab)、克唑替尼(crizotinib)、达沙替尼(dasatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、福他替尼(fostamatinib)、吉非替尼(gefitinib)、依鲁替尼(ibrutinib)、伊马替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、木利替尼(mubritinib)、尼达尼布(nitendanib)、尼罗替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、哌加他尼(pegaptanib)、鲁索替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、SU6656、凡德他尼(vandetanib)、威罗菲尼(vemurafenib)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括生长激素抑制素模拟物。在一个实施方案中，生长激素抑制素模拟物包括但不限于奥曲肽(octreotide)、兰瑞肽(Lanreotide)(INN)、醋酸兰瑞肽或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括JNK抑制剂。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是CC-930。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括CXCR2拮抗剂。在一个实施方案中，CXCR2拮抗剂包括但不限于SB656933、瑞帕利辛(reparixin)、DF2162、AZ-10397767、SB332235、SB468477、SCH572123或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括HMGR抑制剂。在一个实施方案中，HMGR抑制剂包括但不限于辛伐他汀、洛伐他汀、康帕丁(美伐他汀)、普伐他汀(prevastatin)、西伐他汀、罗伐他汀、他汀类或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括mTOR抑制剂。在一个实施方案中，mTOR抑制剂包括但不限于依维莫司(everolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、西罗莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、地弗莫司(deforolimus)、ATP竞争性mTOR激酶抑制剂或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括皮质类固醇。在一个实施方案中，皮质类固醇包括但不限于氢化可的松、醋酸可的松、特戊酸硫氢可的松、泼尼松(pednisolone)、强的松、甲基强的松龙、曲安奈德、曲安西龙醇(triamcinolone alcohol)、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、氟轻松(flucinoninde)、醋酸氟轻松(flucinolone acetonide)、哈西奈德(halcinonide)、倍他米松(betamethasome)、倍他米松磷酸钠、地塞米松、地塞米松磷酸钠、氟可龙(flucortolone)或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括免疫抑制剂。在一个实施方案中，免疫抑制剂包括但不限于环孢菌素A、麦考酚酸、硫唑嘌呤或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括脂肪酶抑制剂。在一个实施方案中，脂肪酶抑制剂包括但不限于奥利司他、或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括瘦素类似物。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是美曲普汀(metreleptin)。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括糖尿病治疗剂。在一个示例性实施方案中，糖尿病治疗剂包括但不限于二甲双胍、磺酰脲、格列奈类(meglitinides)、噻唑烷二酮类(thiazolidinediones)、DPP-4抑制剂、GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、胰岛素疗法或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括神经化学受体拮抗剂。在一个实施方案中，神经化学受体拮抗剂包括但不限于CBR1拮抗剂、LH-21、阿片受体拮抗剂、纳曲酮或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括神经化学受体激动剂。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是CB2R激动剂。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括Hh或Hh(R)(SMO)拮抗剂。在一个实施方案中，Hh或Hh(R)(SMO)拮抗剂包括但不限于维莫德吉(vismodegib)、GDC-0449、Hh(R)阻断剂、LY2940680、SMO拮抗剂或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括CCR5拮抗剂。在一个实施方案中，CCR5拮抗剂包括但不限于TBR-652、vicriviroc、aplaviroc、maraviroc、INCB009471或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括CXCR4拮抗剂。在一个实施方案中，CXCR4拮抗剂包括但不限于小分子抑制剂、单克隆抗体抑制剂、BKT140、TG-0054、普乐沙福(plerixafor)、POL6326、MDX-1338或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括CXCR3拮抗剂。在一个实施方案中，CXCR3拮抗剂包括但不限于小分子抑制剂、单克隆抗体抑制剂、SCH546738、AMG487或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括NOX抑制剂。在一个实施方案中，NOX抑制剂包括但不限于小分子抑制剂、单克隆抗体抑制剂、GKT137831、VAS2870或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括免疫调节剂。在一个示例性的实施方案中，另外的治疗剂是考帕松(copaxone)。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括NOX抑制剂。在一个实施方案中，NOX抑制剂包括但不限于小分子抑制剂、单克隆抗体抑制剂、GKT137831、VAS2870或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括AMPK激动剂。AMPK激动剂包括但不限于二甲双胍、苯乙双胍、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)、2-脱氧-D-葡萄糖(2DG)、水杨酸盐、A-769662、脂联素或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括TGF-β途径抑制剂。在一个实施方案中，TGF-β途径抑制剂包括但不限于反义寡核苷酸、AP-12009、AP-11014、NovaRx、大分子抑制剂、乐地单抗(lerdelimumab)、美妥珠单抗、GC-1008、1D11、SR-2F、2G7、小分子抑制剂、LY-550410、Ly-580276、LY-364947、LY-2109761、LY-2157299、LY-573636、SB-431542、SD-208、SD-093、Ki-26894、Sm16、NPC-30345、A-83-01、SX-007、IN-1130、Trx-xFoxH1b、Trx-Lef1、反义转染的肿瘤细胞、可溶性TGFβRII:Fc、lucanix、β聚糖/TGFβRIII或其组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括肌成纤维细胞募集抑制剂。在一个实施方案中，另外的治疗剂是AM152。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抗Th17MMP诱导物。在一个实施方案中，另外的治疗剂是卤夫酮(Halofuginone)。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括腺苷受体A2A拮抗剂。在一个实施方案中，另外的治疗剂是ZM241385。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括前微小RNA。在一个实施方案中，前微小RNA是miR-29家族的成员。在一个实施方案中，另外的治疗剂是AM152。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括抑制微小RNA的药剂。在一个实施方案中，抑制微小RNA的药剂抑制miR-122。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是Miravirsen。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括大麻素受体1拮抗剂。在一个实施方案中，大麻素受体1拮抗剂包括但不限于利莫那班(rimonabant)或其类似物、二芳基吡唑衍生物、溴乙那班(surinabant)、AM251、伊必那班(ibipinabant)或其组合
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括Schuppan和Kim(2013)J.Clin.Invest.123(5):1887-1901中列出的那些，其内容出于所有目的通过引用整体并入。在一个实施方案中，其中列出的一种或多种另外的治疗剂的组合使用可以与CVC联合用于治疗纤维化或纤维化疾病或病状，如本申请中所述。
在一个实施方案中，另外的治疗剂包括法尼醇X受体(FXR)激动剂。在一个实施方案中，法呢醇X受体(FXR)激动剂包括但不限于咖啡醇(cafestol)、鹅去氧胆酸、奥贝胆酸(OCA)和/或fexaramine或其组合。在一个示例性实施方案中，另外的治疗剂是奥贝胆酸(OCA)。
共施用的方法
在一个方面，本发明提供治疗有需要的患者中的纤维化或纤维化疾病或病状的方法。该方法包括向有需要的患者共施用治疗有效量的上述至少一种另外的治疗剂；和至少一种如上所述的CVC化合物或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。术语“患者”或“受试者”包括人类和动物，优选哺乳动物。
在一个实施方案中，该方法还包括共施用另外的治疗剂。也就是说，该方法包括向有需要的患者共施用治疗有效量的至少一种另外的治疗剂；和至少一种如上所述的CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。另外的活性剂可以是具有生物活性或治疗作用的任何化合物、药剂、分子、组合物或药物。另外的活性剂可以(1)激动法尼醇X受体(FXR)；(2)激动过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)；(3)抑制肝脏载脂蛋白CIII表达；(4)抑制胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)表达；(5)诱导高密度脂蛋白介导的经肝胆固醇流出；(6)防止胆汁淤积性肝损伤；(7)减轻肝脏炎症和/或纤维化；(8)降低肝脂质积累；(9)抑制促炎和/或促纤维化基因表达，(10)充当抗炎剂，和/或(11)抑制趋化因子结合。优选地，另外的活性剂是法尼醇X受体(FXR)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)激动剂或趋化因子拮抗剂。如本文所用，术语“法尼醇X受体(FXR)”激动剂是激活法尼醇X受体(FXR)的药物或分子。如本文所用，术语“过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)”是激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的药物或分子。如本文所用，术语“趋化因子拮抗剂”是抑制、减少、消除或阻断趋化因子与其一种或多种同源受体结合的药物或分子。FXR和PPAR-α激动剂的实例包括但不限于Px-102、fexaramine、法格列酮(farglitazar)、奥贝胆酸、3-[2-[2-氯-4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-(1-甲基乙基)-4-异噁唑基]甲氧基]苯基]乙烯基]苯甲酸(GW4064)、2-甲基-2-[[4-[2-[[(环己基氨基)羰基](4-环己基丁基)氨基]乙基]苯基]硫基]-丙酸(GW7647)和2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)、3-(3,4-二氟苯甲酰基)-1,2,3,6-四氢-1,1-二甲基氮杂[4,5-b]吲哚-5-甲酸1-甲基乙酯(WAY-36245)、胆汁酸衍生物(例如INT-767、INT-777)、氮杂[4,5-b]吲哚、1-[(4-氯苯基)甲基]-3-[(1,1-二甲基乙基)硫基]-α,α-二甲基-5-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-丙酸(MK886)、N-((2S)-2-(((1Z)-1-甲基-3-氧-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-烯基)氨基)-3-(4-(2-(5-甲基-2-苯基-1,3-噁唑-4-基)乙氧基)苯基)丙基)丙酰胺(GW6471)、2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲基硫基)苯基]-3-氧-1(E)-丙烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸(GFT505)或其组合。趋化因子拮抗剂的实例包括但不限于Aplaviroc、Vicriviroc、Maraviroc、Met-RANTES、AOP-RANTES、RANTES(3–68)、嗜酸粒细胞趋化因子(3–74)、Met-Ckbeta7、I-Tac/E0H1、CPWYFWPC-肽、衍生自化合物J113863的小分子、化合物J113863的小分子反式异构体、SB-328437(Glaxo-SmithKline)、RO116-9132-238(Roche Bioscience)、化合物25(Merck)、A-122058(Abbott Laboratories)、DPCA37818、DPC168、化合物115(Bristol-Myers Squibb)、哌啶拮抗剂、CP-481715(Pfizer)、MLN3897(Millennium/SanofiAventis)、BX471(Berlex/Scherring AG)、AZD-4818(Astra-Zeneca)、BMS-817399(Bristol-Myers Squibb)、CAM-3001(Medimmune)、CCX354-C(Chemo-Centryx)、CCx915/MK-0812、INCB8696(InCyte)、RO5234444、GW766994、JC1、BKT140、丙帕锗、紫草素、BX471和/或YM-344031。
如本文所用，术语“治疗有效量”表示可在患者中产生一种或多种预期生物效应(诸如改善、减轻、改观或纠正受试者中的纤维化和/或纤维化疾病或病症的病状、症状和/或作用)的量。该量是指联合给予的(a)另外的治疗剂和(b)CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药的量。术语“治疗有效量”还可以指联合给予的(a)另外的治疗剂和(b)CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药的量。本领域的技术人员可以理解，取决于个体患者的病状，对于每个患者而言治疗有效量可以不同。
在一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药以约30mg/天至约500mg/天的剂量施用。在一个实施方案中，另外的治疗剂以约5mg/m2至约3g/m2的剂量施用。
施用剂量可以以mg/m2/天为单位表示，其中可以使用患者身高和体重用各种可用公式以m2计算患者的体表面积(BSA)。或者，施用剂量可以以mg/天为单位表示，其不考虑患者的BSA。鉴于患者的身高和体重，将一个单位转换为另一个单位是简单直接的。
术语“共施用”是指以协调方式一起施用(a)另外的治疗剂和(b)CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。例如，共施用可以是同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
在一个实施方案中，共施用进行一个或多个治疗周期。所谓“治疗周期”示指共施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药的预定时间段。典型地，在每个治疗周期结束时检查患者以评估本联合疗法的作用。在一个实施方案中，共施用进行1至48个治疗周期。在另一个实施方案中，共施用进行1至36个治疗周期。在另一个实施方案中，共施用进行1至24个治疗周期。
在一个实施方案中，每个治疗周期具有约3天或更多天。在另一个实施方案中，每个治疗周期具有约3天至约60天。在另一个实施方案中，每个治疗周期具有约5天至约50天。在另一个实施方案中，每个治疗周期具有约7天至约28天。在另一个实施方案中，每个治疗周期具有28天。在一个实施方案中，治疗周期具有约29天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约30天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约31天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约一个月的治疗周期。在另一个实施方案中，治疗周期是3周至6周的任何时间长度。在另一个实施方案中，治疗周期是4周至6周的任何时间长度。在又一个实施方案中，治疗周期是4周。在另一个实施方案中，治疗周期是一个月。在另一个实施方案中，治疗周期是5周。在另一个实施方案中，治疗周期是6周。
取决于患者的状况和预期的治疗作用，另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药中的每一者施用频率可以从每天一次到每天六次不等。也就是说，施用频率可以是每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次或每天六次。
治疗周期中可能会有一个或多个间隙日。所谓“间隙日”是指既不施用另外的治疗剂也不施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药时的一天。换句话说，在间隙日不施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药中的任一种。任何治疗周期都必须具有至少有一个非间隙日。所谓“非间隙日”是指施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药中的至少一种时的一天。
所谓“同时施用”是指在同一天施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。对于同时施用，可以同时或一次一个地施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。
在同时施用的一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用1至4次持续7至28天；并且另外的治疗剂每天施用1至4次持续7至28天。在同时施用的另一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用一次持续28天；并且另外的治疗剂每天施用一次持续28天。
所谓“顺序施用”是指在连续共施用两天或更多天的时间段而没有任何间隙日的情况下，在任何给定的一天只施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药中的一种。
在顺序施用的一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用1至4次持续7至21天；并且另外的治疗剂每天施用1至4次持续7至21天。在顺序施用的另一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用1至4次持续14天；并且另外的治疗剂每天施用1至4次持续14天。
在顺序施用的一个具体实施方案中，本发明的方法包括一个或多个治疗周期，并且每个治疗周期具有28天，其中另外的治疗剂每天施用一次持续7天，并且CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用一次持续21天。施用另外的治疗剂的7天和施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药的21天独立地为连贯的或不连贯的。例如，在连贯施用中，施用另外的治疗剂的7天可以是治疗周期的第1天至第7天，并且施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药的21天可以是治疗周期中的第8天至第28天。
所谓“重叠施用”是指在连续共同施用两天或更多天的时间段而没有任何间隙日的情况下，至少有一天同时施用，并且至少有一天只施用另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药中的一种。
在重叠施用的一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用1至4次持续28天；并且另外的治疗剂每天施用1至4次持续7至14天。
在重叠施用的一个具体实施方案中，本发明的方法包括一个或多个治疗周期并且每个治疗周期具有28天，其中另外的治疗剂每天施用一次持续7天，并且CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或其前药每天施用一次持续28天。施用另外的治疗剂的7天可以是连贯的或不连贯的。例如，在连贯施用中，施用另外的治疗剂的7天可以是治疗周期中的第1天至第7天。
所谓“间隔施用”是指具有至少一个间隙日的共施用时间段。“连续施用”是指没有任何间隙日的共施用时间段。如上所述，连续施用可以是同时的、顺序的或重叠的。
在间隔施用的一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用1至4次持续7至21天；另外的治疗剂每天施用1至4次持续7至21天，并且治疗周期中存在1至14天间隙日。
在间隔施用的一个具体实施方案中，本发明的方法包括一个或多个治疗周期并且每个治疗周期具有28天，其中另外的治疗剂每天施用一次持续7天，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药每天施用一次持续7至14天，并且在治疗周期中存在7至14天间隙日。例如，另外的治疗剂从第1天至第7天每天施用一次；CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药从第15天至第28天每天施用一次；并且第7天至第14天是治疗周期中的间隙日。
在本方法中，共施用包括口服施用、肠胃外施用或其组合。肠胃外施用的实例包括但不限于静脉内(IV)施用、动脉内施用、肌内施用、皮下施用、骨内施用、鞘内施用或其组合。另外的治疗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药可以独立地口服或肠胃外施用。在一个实施方案中，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药经口服施用；并且另外的治疗剂经肠胃外施用。肠胃外施用可以经由注射或输注进行。
在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药并且另外的治疗剂包括法尼醇X受体(FXR)激动剂。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括高剂量维生素E(>400iU/d)。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)激动剂。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括PPAR-γ激动剂。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括PPAR-δ激动剂。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括3-[2-[2-氯-4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-(1-甲基乙基)-4-异噁唑基]甲氧基]苯基]乙烯基]苯甲酸(GW4064)。在本发明方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括2-甲基-2-[[4-[2-[[(环己基氨基)羰基](4-环己基丁基)氨基]乙基]苯基]硫基]-丙酸(GW7647)。在本发明方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药并且另外的治疗剂包括吡格列酮。在本方法的一个实施方案中，联合疗法包括CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且另外的治疗剂包括趋化因子拮抗剂。
在一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，连贯7天施用另外的治疗剂，然后连贯14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，连贯14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，然后连贯7天施用另外的治疗剂。在又一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，连贯前7天施用另外的治疗剂，并且连贯前14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在又一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，连贯前7天施用另外的治疗剂，并且连贯前28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，连贯28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且连贯7天与CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药重叠施用另外的治疗剂。在另一个实施方案中，在治疗周期的第1至7天施用另外的治疗剂，并且在治疗周期的第1至14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在治疗周期的第1至7天施用另外的治疗剂，并且在治疗周期的第1至28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在治疗周期的第1至7天施用另外的治疗剂，并且在治疗周期的第8至21天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在又一个实施方案中，在治疗周期的第1至14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且在治疗周期的第15至21天施用另外的治疗剂。在另一个实施方案中，治疗周期为28天、29天、30天或31天。在另一个实施方案中，治疗周期是从4周到6周长的任何时间长度。
在一个实施方案中，通过24小时连续输注每日施用另外的治疗剂。在另一个实施方案中，每12小时通过静脉内输注经1至2小时施用另外的治疗剂。在另一个实施方案中，每天两次皮下施用另外的治疗剂。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，每隔一天施用另外的治疗剂，总共施用3天。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，每隔一天施用另外的治疗剂，总共施用4天。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，在第1、3和5天施用另外的治疗剂。在又一个实施方案中，在一个治疗周期中，在第1、3、5和7天施用另外的治疗剂。
在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，连贯前14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，在CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药施用完成后连贯7天施用第一种另外的治疗剂，且与第一种另外的治疗化合物施用重叠3天施用第二种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，连贯前28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，在14天的CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药施用完成后连贯7天施用第一种另外的治疗剂，且与第一种另外的治疗剂施用重叠3天施用第二种另外的治疗剂。
在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，连贯前7天施用第一种另外的治疗剂，与第一种另外的治疗剂施用重叠连贯3天施用第二种另外的治疗剂，且连贯前28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，连贯前7天施用第一种另外的治疗剂，与第一种另外的治疗剂施用重叠连贯3天施用第二种另外的治疗剂，且连贯前14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，在第1至7天施用第一种另外的治疗剂，在第1至3天施用第二种另外的治疗剂，且在第1至14天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在一个治疗周期中，在第1至7天施用第一种另外的治疗剂，在第1至3天施用第二种另外的治疗剂，且在第1至28天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，在第1至7天施用第一种另外的治疗剂，在第1至3天施用第二种另外的治疗剂，且在第1至7天和第15至21天施用CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。
在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第1至14天以200mg/天口服施用，第一种另外的治疗剂在第1至第7天以100mg/m2/天经静脉内施用，并且第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第1至7天和第15至21天以200mg/天口服施用，第一种另外的治疗剂在第1至第7天以100mg/m2/天经静脉内施用，并且第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第1至14天以60mg/天口服施用，第一种另外的治疗剂在第1至第7天以100mg/m2/天经静脉内施用，并且第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第1至28天以60mg/天口服施用，第一种另外的治疗剂在第1至第7天以100mg/m2/天经静脉内施用，并且第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用。在另一个实施方案中，对于一个治疗周期而言，CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第1至7天和第15至21天以60mg/天口服施用，第一种另外的治疗剂在第1至第7天以100mg/m2/天经静脉内施用，并且第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用。
在一个具体的实施方案中，对于一个治疗周期而言，第一种另外的治疗剂在第1至7天以100mg/m2/天经静脉内施用，第二种另外的治疗剂在第1至3天以60mg/m2/天经静脉内施用，并且CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药在第8至21天以200mg/天口服施用。
在又一个实施方案中，联合方案作为一线疗法给予(例如，给予不适于肝或肾纤维化标准治疗的患者)。在另一个实施方案中，联合方案作为二线疗法给予(例如，给予接受先前治疗后的肝或肾纤维化患者)。
药物组合物、剂量和施用：
在一个方面，本发明提供了用于治疗纤维化和/或纤维化疾病或病状的药物组合物和组合包装。
该组合物旨在通过合适的途径施用，这些途径包括但不限于口服、肠胃外、直肠、外用和局部。对于口服施用，可以配制胶囊和片剂。组合物呈液体、半液体或固体形式，并以适合于每种施用途径的方式配制。
在一个实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的(a)另外的治疗剂；和(b)CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。成分(a)和(b)是药物活性成分。除了(a)和(b)之外，药物组合物还可以包含另外的活性成分。例如，药物组合物可以包含如上所述的另外的活性剂。在一个实施方案中，另外的活性剂是FXR或PPAR-α激动剂。在一个实施方案中，另外的活性剂是趋化因子拮抗剂。
在一个具体的实施方案中，药物组合物包含FXR激动剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个具体实施方案中，药物组合物包含PPAR-α激动剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在一个具体实施方案中，药物组合物包含趋化因子拮抗剂和CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。
特定受试者的剂量可以根据该受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别、膳食、施用时间、施用途径、排泄速率和待治疗的特定疾病状况的程度通过将这些和其它因素考虑在内来确定。
本发明提供一种治疗方法，其中赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物经配制成口服组合物。
本发明提供一种治疗方法，其中赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物例如每天施用一次或每天施用两次。可以施用所述剂型达足以治疗纤维化疾病或病状的持续时间。
在口服施用的情况下，日剂量在每体重50kg的成人约5至1000mg，优选约10至600mg，以及更优选约10至300mg，最优选约15至200mg活性成分(即作为本发明的化合物)的范围内，并且药物可以例如每天施用一次或以2至3个分剂量施用。
赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物可以经配制成适于口服或注射施用的任何剂型。当口服施用该化合物时，它可以经配制成用于口服施用的固体剂型，例如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等等。它还可以经配制成用于口服施用的液体剂型，诸如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。如本文所用的术语“片剂”是指通过将化合物和合适的辅料均匀地混合并压制成圆形或不规则的锭剂所制备的那些固体制剂，主要是用于口服施用的普通片剂，还包括口含片、舌下片、颊圆片(buccal wafer)、咀嚼片、分散片、可溶性片剂、泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片等。如本文所用的术语“胶囊”是指通过将化合物或化合物与合适的辅料一起填充到空心胶囊中或密封进软胶囊材料中所制备的那些固体制剂。根据溶解性和释放性质，胶囊可以分为硬胶囊(常规胶囊)、软胶囊(软壳胶囊)、缓释胶囊、控释胶囊、肠溶胶囊等。如本文所用的术语“丸剂”是指通过经由合适的方法混合化合物和合适的辅料所制备的球形或接近球形的固体制剂，包括滴丸、糖衣丸、小丸等。如本文所用的术语“颗粒剂”是指通过混合化合物和合适的辅料所制备并具有一定粒度的干燥颗粒状制剂。颗粒剂可以分为可溶性颗粒剂(通常称为颗粒剂)、混悬颗粒剂、泡腾颗粒剂、肠溶颗粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂等。如本文所用的术语“口服溶液剂”是指通过将化合物溶解在适于口服施用的溶剂中所制备的沉降液体制剂。如本文所用的术语“口服混悬剂”是指通过将不溶性化合物分散于液体媒介物中所制备的用于口服施用的混悬剂，还包括干混悬剂或浓缩混悬剂。如本文所用的术语“糖浆”是指含有化合物的浓缩蔗糖水溶液。可注射剂型可以通过制剂领域中的常规方法来生产，并且可以选择水性溶剂或非水性溶剂。最常用的水性溶剂是注射用水，以及0.9％氯化钠溶液或其它合适的水溶液。常用的非水性溶剂是植物油，主要是注射用大豆油，以及醇、丙二醇、聚乙二醇等的其它水溶液。
在一个实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含赛尼克韦罗或其盐和富马酸。在某些实施方案中，赛尼克韦罗或其盐是赛尼克韦罗甲磺酸盐。
在另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐对富马酸的重量比为约7:10至约10:7，诸如约8:10至约10:8、约9:10至约10:9或约95:100至约100:95。在其它另外的实施方案中，富马酸按组合物的重量计以约15％至约40％，诸如约20％至约30％，或约25％的量存在。在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐按组合物的重量计以约15％至约40％，诸如约20％至约30％，或约25％的量存在。
在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐和富马酸的组合物还包含一种或多种填充剂。在更具体的实施方案中，所述一种或多种填充剂选自微晶纤维素、磷酸氢钙、纤维素、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨醇、淀粉和碳酸钙。例如，在某些实施方案中，所述一种或多种填充剂是微晶纤维素。在特定的实施方案中，所述一种或多种填充剂对赛尼克韦罗或其盐的重量比为约25:10至约10:8，诸如约20:10至约10:10，或约15:10。在其它特定的实施方案中，所述一种或多种填充剂按组合物的重量计以约25％至约55％，诸如约30％至约50％或约40％的量存在。在其它另外的实施方案中，所述组合物还包含一种或多种崩解剂。在更具体的实施方案中，所述一种或多种崩解剂选自交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠和羟乙酸淀粉钠。例如，在某些实施方案中，所述一种或多种崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。在具体的实施方案中，所述一种或多种崩解剂对赛尼克韦罗或其盐的重量比为约10:10至约30:100，诸如约25:100。在其它特定的实施方案中，所述一种或多种崩解剂按组合物的重量计以约2％至约10％，诸如约4％至约8％，或约6％的量存在。在其它另外的实施方案中，所述组合物还包含一种或多种润滑剂。在更具体的实施方案中，所述一种或多种润滑剂选自滑石、二氧化硅、硬脂精、硬脂酸镁和硬脂酸。例如，在某些实施方案中，所述一种或多种润滑剂是硬脂酸镁。在特定的实施方案中，所述一种或多种润滑剂按组合物的重量计以约0.25％至约5％，诸如约0.75％至约3％，或约1.25％的量存在。
在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐和富马酸的组合物大体上类似于表2的组合物。在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐和富马酸的组合物大体上类似于表3和4的组合物。在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐和富马酸的任何组合物通过包括干法制粒的方法来生产。在其它另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐和富马酸的任何组合物当与干燥剂包装在一起时，在约75％相对湿度下暴露于约40℃下六周后具有不超过约4重量％的水含量，诸如不超过2重量％。在其它另外的实施方案中，任何上述组合物当与干燥剂包装在一起时，在75％相对湿度下暴露于40℃下12周后具有不超过约2.5％的总杂质水平，诸如不超过1.5％。在其它另外的实施方案中，任何上述组合物的赛尼克韦罗或其盐在口服施用后具有大体上类似于溶液中的赛尼克韦罗或其盐在口服施用后的生物利用率的平均绝对生物利用率。在另外的实施方案中，赛尼克韦罗或其盐在比格犬中具有约10％至约50％(如约27％)的绝对生物利用率。
在另一个实施方案中，提供了一种药物制剂，其包含赛尼克韦罗或其盐和富马酸的组合物。在另外的实施方案中，制剂中的组合物可以是颗粒的形式。在其它另外的实施方案中，制剂中的组合物置于胶囊壳中。在其它另外的实施方案中，制剂的组合物置于小袋中。在其它另外的实施方案中，制剂的组合物是片剂或片剂的组分。在其它另外的实施方案中，制剂的组合物是多层片剂的一个或多个层。在其它另外的实施方案中，制剂包含一种或多种另外的药学上无活性的成分。在其它另外的实施方案中，制剂大体上类似于表9中的制剂。在其它另外的实施方案中，提供了具有大体上类似于表9的组成的片剂。在其它另外的实施方案中，任何上述实施方案是经包衣的基材。在另一个实施方案中，提供了制备任何上述实施方案的方法。在另外的实施方案中，所述方法包括配混赛尼克韦罗或其盐和富马酸以形成配混物，并且将该配混物干法制粒。在其它另外的实施方案中，所述方法还包括将一种或多种填充剂与赛尼克韦罗或其盐以及富马酸配混以形成配混物。在其它另外的实施方案中，所述方法还包括将一种或多种崩解剂与赛尼克韦罗或其盐以及富马酸配混以形成配混物。在其它另外的实施方案中，所述方法还包括将一种或多种润滑剂与赛尼克韦罗或其盐以及富马酸配混以形成配混物。在其它另外的实施方案中，所述方法还包括将干法制粒的配混物压成片剂。在其它另外的实施方案中，所述方法包括用干法制粒的配混物填充胶囊。
此外，本发明的化合物可以包含在输血用血或血液衍生物中或与其组合使用。在一个实施方案中，本发明的化合物可以与清除潜伏HIV储器并加入输血用血或血液衍生物中的一种或多种药剂组合地被包括或使用。通常，输血用血或血液衍生物通过混合从多个人员获得的血液而产生，并且在一些情况下，未感染的细胞被感染HIV病毒的细胞污染。在这样的情况下，未感染细胞有可能感染HIV病毒。当本发明的化合物与清除潜伏HIV储器的一种或多种药剂一起被加入输血用血或血液衍生物中时，可以防止或控制病毒的感染和增殖。特别是当储存血液衍生物时，添加本发明的化合物能有效地防止或控制病毒的感染和增殖。另外，当将被HIV病毒污染的输血用血或血液衍生物施用给人时，可以通过将本发明的化合物与清除潜伏HIV储器的一种或多种药剂一起添加到血液或血液衍生物中防止该病毒在人的身体内的感染和增殖。例如，通常对于预防通过口服施用使用血液或血液衍生物后的HIV感染性疾病而言，剂量在每体重约60kg的成人约0.02至50mg/kg，优选约0.05至30mg/kg，以及更优选约0.1至10mg/kg CCR5/CCR2拮抗剂的范围内，并且药物可以每天施用一次或以2至3个剂量施用。当然，虽然可以基于分开日剂量所需的单位剂量控制剂量范围，但如上所述，特定受试者的剂量可以根据该受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别、膳食、施用时间、施用途径、排泄速率和待治疗的特定疾病状况的程度通过将这些和其它因素考虑在内来确定。在这种情况下，施用途径也被适当选择，并且本发明的用于预防HIV感染性疾病的药物可以在输血或使用血液衍生物之前直接添加到输血用血或血液衍生物中。在这样的情况下，理想的是将本发明的药物在输血或使用血液衍生物前24小时，优选12小时，或更优选6小时立即与血液或血液衍生物混合。
除了输血用血或血液衍生物以外，当本发明的组合物与输血用血或血液衍生物和/或其它活性剂一起施用时，所述药物优选在输血或使用血液衍生物的同一时间至1小时前之间施用。更优选地，例如，每天施用所述药物1次至3次，并且持续施用4周。
在另一个实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂可以是用于制备药物组合物作为活性成分的媒介物、载体或施用介质的任何惰性或轻微活性物质。在一个实施方案中，药学上可接受的赋形剂是释放速率控制成分。“释放速率控制成分”是指可以控制活性成分释放速率的成分。药学上可接受的赋形剂可与活性成分一起用于配制合适的药物制剂，诸如供口服施用的溶液、混悬液、片剂、分散片、丸剂、胶囊、粉剂、持续释放制剂或酏剂，或供肠胃外施用的无菌溶液或混悬液，以及透皮贴片制剂和干粉吸入剂。通常使用本领域熟知的技术和程序将上述活性成分配制成药物组合物。
在一个实施方案中，组合包装包含(a)至少一个单独剂量的另外的治疗剂，和(b)至少一个单独剂量的CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。在另一个实施方案中，组合包装还包含提供用于共施用(a)和(b)的方案的说明书文件。
通常，组合物经配制成供单剂量施用。为了配制组合物，将(a)和(b)的重量分数以有效浓度溶解、混悬、分散或以其它方式混合在选定的媒介物中，使得所治疗的病状得到缓解或改善。适于施用本文所提供的(a)和(b)的药物载体、媒介物或其它介质包括本领域技术人员已知适于特定施用模式的任何此类载体。
此外，(a)和(b)可以配制成组合物中唯一的药物活性成分，或者可以与其它活性成分组合。脂质体混悬剂(包括组织靶向脂质体，如肿瘤靶向脂质体)也可适合作为药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备。例如，脂质体制剂可以按照本领域已知的那样进行制备。简言之，可通过在烧瓶内部干燥卵磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸(7:3摩尔比)形成脂质体如多层囊泡(MLV)。添加本文提供的化合物在缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶液并且振荡烧瓶直至脂质膜分散。洗涤所得囊泡以去除未包封的化合物，通过离心而沉淀，然后重悬于PBS中。
活性成分以足以发挥治疗有效作用的量包含在药学上可接受的赋形剂中，对所治疗的患者具有最小或没有不希望的副作用。活性成分在药物组合物中的浓度将取决于活性化合物的吸收、失活和排泄速率，化合物的物理化学特性，给药计划和施用量以及本领域技术人员已知的其它因素。
典型地，治疗有效剂量应产生约0.1ng/ml至约50至约100μg/ml的活性成分血清浓度。药物组合物通常应提供每天每千克体重约0.001mg至约2000mg化合物的剂量。制备药物剂量单位形式以提供每剂量单位形式约1mg至约1000mg并且在某些实施方案中约10mg至约500mg、约20mg至约250mg或约25mg至约100mg的必需活性成分或必需成分的组合。在某些实施方案中，制备药物剂量单位形式以提供约1mg、20mg、25mg、50mg、100mg、250mg、500mg、1000mg或2000mg的必需活性成分。在某些实施方案中，制备药物剂量单位形式以提供约50mg的必需活性成分。
活性成分可一次性施用，或者可分成多个较小剂量以各种时间间隔施用。应理解，精确的剂量和治疗持续时间随所治疗的疾病而变化并且可使用已知的试验方案根据经验确定或通过从体内或体外试验数据推断而确定。值得注意的是，浓度和剂量值也可以随着要缓解的病状的严重程度和/或患者的年龄、体重和其它健康问题而变化。还应当理解，对于任何特定受试者，具体的剂量方案应随着时间根据个体需要以及管理或监督组合物施用的人员的专业判断而调整，并且本文提出的浓度范围仅为示例性的而无意限制要求保护的组合物的范围或实践。
因此，将有效浓度或量的本文所述的活性成分或其药学上可接受的衍生物与供全身、外用或局部施用的合适的药物载体、媒介物或其它介质混合以形成药物组合物。以有效改善纤维化和/或纤维化疾病或病状的一种或多种症状或治疗或预防纤维化和/或纤维化疾病或病状的量包含化合物。活性化合物在组合物中的浓度将取决于活性化合物的吸收、失活、排泄速率，给药计划，施用量，特定制剂以及本领域技术人员已知的其它因素。
用于肠胃外、皮内、皮下应用或外用的溶液剂或混悬剂可以包含任何下列组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇、二甲基乙酰胺或其它合成溶剂；抗微生物剂，如苯甲醇和对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸和亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐；以及张力调节剂，如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以封装在由玻璃、塑料或其它合适材料制成的安瓿瓶、一次性注射器或者单剂量或多剂量小瓶中。
在活性成分表现出溶解性不足的情况下，可以使用增溶化合物的方法。此类方法是本领域技术人员已知的，并且包括但不限于使用助溶剂如二甲基亚砜(DMSO)、使用表面活性剂如或溶解在碳酸氢钠水溶液中。
混合或添加活性成分后，所得混合物可为溶液剂、混悬剂、乳液等。所得混合物的形式取决于许多因素，包括预期的施用模式和化合物在所选载体或媒介物中的溶解度。在一个实施方案中，有效浓度足以改善所治疗的疾病、病症或病状的症状并且可根据经验确定。
药物组合物呈含有适量化合物或其药学上可接受的衍生物的单位剂量形式如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液剂或混悬剂、和口服溶液剂或混悬剂、以及水-油乳液提供，以向人类和动物施用。药物治疗活性化合物及其衍生物通常以单位剂量形式或多剂量形式配制和施用。如本文所用的单位剂量形式是指适于人类和动物受试者并且如本领域已知的那样单独包装的物理离散单位。每个单位剂量含有足以产生所需治疗作用的预定量的治疗活性化合物以及所需的药物载体、媒介物或稀释剂。单位剂量形式的实例包括安瓿和注射器以及单独包装的片剂或胶囊。单位剂量形式可分多份或多次施用。多剂量形式是包装在单个容器中呈分开的单位剂量形式施用的多个相同单位剂量形式。多剂量形式的实例包括片剂或胶囊的小瓶、瓶或品脱或加仑瓶。因此，多剂量形式是多个在包装上未分开的单位剂量。
也可制备控释制剂。控释制剂的合适实例包括含有本文提供的活性成分的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈成形制品(例如薄膜或微囊)的形式。控释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯、L-谷氨酸与L-谷氨酸乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)组成的可注射微球)以及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸使得分子能够释放100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间期限较短。当包封的活性成分在体内长时间保持时，它们可由于在37℃下暴露于水分而变性或聚集，从而导致生物活性的丧失和可能的结构变化。可根据所涉及的作用机制设计合理的策略进行稳定化。例如，如果发现聚集机制是通过硫基-二硫化物交换的分子间S-S键形成，则可通过修饰巯基残基，从酸性溶液中冻干，控制水分含量，使用适当的添加剂，并开发特定聚合物基质组合物来实现稳定化。控释制剂的其它实例包括经包衣的组合物。例如，包衣可以起到降低活性成分释放速率的屏障的作用；或者包衣是肠溶的，即在酸性环境中几乎不可溶并因而延迟活性成分的释放直到组合物到达pH环境为中性或碱性的下部胃肠道。
可以制备含有0.005％至100％范围内的活性成分而余量由无毒赋形剂构成的剂型或组合物。对于口服施用，通过掺入任何常用的赋形剂例如药物级甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、纤维素衍生物、交联羧甲基纤维素钠、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁或糖精钠而形成药学上可接受的无毒组合物。此类组合物包括溶液剂、混悬剂、片剂、胶囊剂、粉剂和缓释制剂，例如但不限于植入物和微囊化递送系统，以及生物可降解的生物相容性聚合物，如胶原、乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚乳酸等。制备这些组合物的方法是本领域技术人员已知的。所考虑的组合物可以含有约0.001％-100％，在某些实施方案中约0.1-85％，通常约75-95％的活性成分。
活性成分或药学上可接受的衍生物可以用保护活性成分免于从身体快速消除的载体制备，例如定时释放制剂或包衣。该组合物可以包含其它活性化合物以获得所需的性质组合。本文提供的活性成分或如本文所述的其药学上可接受的衍生物还可有利地与另一种在一般技术中已知在治疗一种或多种上文所提及的疾病或医学病状(诸如纤维化和/或纤维化疾病或病状)中有价值的药理学剂一起施用以用于治疗性或预防性目的。应该理解的是，这种联合疗法构成了本文提供的组合物和治疗方法的另一方面。
供口服施用的组合物
口服药物剂型为固体、凝胶或液体。固体剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。口服片剂的类型包括压缩、咀嚼糖锭和片剂，它们可具有肠溶衣、糖衣或薄膜衣。胶囊可以为硬或软明胶胶囊，而颗粒剂和粉剂可与本领域技术人员已知的其它成分的组合一起呈非泡腾或泡腾形式提供。
在某些实施方案中，制剂是固体剂型，诸如胶囊剂或片剂。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任何以下成分或类似性质的化合物：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂和调味剂。
粘合剂的实例包括微晶纤维素、黄芪胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊。润滑剂包括滑石、淀粉、硬脂酸镁或硬脂酸钙、石松子和硬脂酸。稀释剂包括例如乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘露糖醇和磷酸二钙。助流剂包括但不限于胶态二氧化硅。崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠、海藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、膨润土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。着色剂包括例如经批准认证的水溶性FD和C染料中的任一种及其混合物；和混悬在氧化铝水合物上的水溶性FD和C染料。甜味剂包括蔗糖、乳糖、甘露糖醇和人工甜味剂如糖精以及许多喷雾干燥的调味料。调味剂包括从植物如水果中提取的天然调味料和产生愉悦感的化合物的合成共混物，例如但不限于薄荷和水杨酸甲酯。润湿剂包括单硬脂酸丙二醇酯、山梨糖醇酐单油酸酯、二乙二醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂酰醚。催吐包衣包括脂肪酸、脂肪、蜡、虫胶、氨化虫胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素。薄膜包衣包括羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸乙酸纤维素。
如果需要口服施用，则可以将活性成分提供在避免其免受胃酸性环境影响的组合物中。例如，可将组合物配制在肠溶衣中，该肠溶衣保持其在胃中的完整性并且在肠道中释放活性化合物。也可以与抗酸剂或其它此类成分组合配制所述组合物。
当剂量单位形式为胶囊时，其除了以上类型的材料外还可以包含液体载体，如脂肪油。另外，剂量单位形式可以包含改变剂量单位的物理形式的各种其它材料，例如糖和其它肠溶剂包衣。活性成分也可作为酏剂、混悬剂、糖浆、圆片、喷剂、口香糖等的组分施用。糖浆除了活性化合物外还可以包含作为甜味剂的蔗糖以及某些防腐剂、染料和着色剂及调味料。活性成分也可与不损害所需作用的其它活性材料或与对所需作用进行补充的其它材料如抗酸剂、H2阻断剂和利尿剂混合。
包含在片剂中的药学上可接受的赋形剂是粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂和润湿剂。由于肠溶衣，肠溶衣片抵抗胃酸的作用并在中性或碱性肠道中溶解或崩解。糖衣片是向其施加药学上可接受的物质的不同层的压制片剂。薄膜衣片是用聚合物或其它合适的包衣进行包衣的压制片剂。多重压制片剂是利用前述药学上可接受的物质通过多于一个压缩循环而制成的压制片剂。上述剂型中也可以使用着色剂。调味剂和甜味剂用于压制片剂、糖衣片、多重压制片剂和咀嚼片。调味剂和甜味剂在咀嚼片和锭剂的形成中特别有用。
液体剂型包括水溶液、乳液、混悬剂、溶液和/或由非泡腾颗粒剂复水的混悬剂和由泡腾颗粒剂复水的泡腾制剂。水溶液包括例如酏剂和糖浆。乳液为水包油或油包水的。
酏剂为澄清、甜味的水醇制剂。酏剂中使用的药学上可接受的赋形剂包括溶剂。糖浆是糖例如蔗糖的浓缩水溶液，并且可以包含防腐剂。乳液是双相体系，其中一种液体以小球体的形式遍布分散于另一种液体中。乳液中使用的药学上可接受的赋形剂为非水液体、乳化剂和防腐剂。混悬剂使用药学上可接受的助悬剂和防腐剂。供复水成液体口服剂型的非泡腾颗粒剂中所用的药学上可接受的物质包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。供复水成液体口服剂型的泡腾颗粒剂中所用的药学上可接受的物质包括有机酸和二氧化碳源。着色剂和调味剂用于上述所有剂型中。溶剂包括甘油、山梨糖醇、乙醇和糖浆。
防腐剂的实例包括甘油、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、苯甲酸钠和醇。用于乳液中的非水液体的实例包括矿物油和棉籽油。乳化剂的实例包括明胶、阿拉伯胶、黄芪胶、膨润土和表面活性剂如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。助悬剂包括羧甲基纤维素钠、果胶、黄芪胶、Veegum和阿拉伯胶。稀释剂包括乳糖和蔗糖。甜味剂包括蔗糖、糖浆、甘油和人工甜味剂如糖精。润湿剂包括单硬脂酸丙二醇酯、山梨糖醇酐单油酸酯、二乙二醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂酰醚。有机酸包括柠檬酸和酒石酸。二氧化碳源包括碳酸氢钠和碳酸钠。着色剂包括经批准认证的水溶性FD和C染料中的任一种及其混合物。调味剂包括从植物如水果中提取的天然调味料和产生愉悦口感的化合物的合成共混物。
对于固体剂型而言，将例如碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液或混悬剂包封在明胶胶囊中。对于液体剂型而言，可将例如在聚乙二醇中的溶液用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释以易于计量施用。
或者，可通过将活性化合物或盐溶解或分散在植物油、二醇、甘油三酯、丙二醇酯(例如，碳酸丙烯酯)和其它此类载体中，并且将这些溶液或混悬剂包封在硬或软明胶胶囊壳中来制备液体或半固体口服制剂。其它有用的制剂包括但不限于含有本文提供的化合物、二烷基化单或聚亚烷基二醇(包括但不限于1,2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚)和一种或多种抗氧化剂(如丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴醚(BHA)、没食子酸丙酯、维生素E、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨糖醇、磷酸、硫代二丙酸及其酯和二硫代氨基甲酸酯)的那些，其中350、550和750是指聚乙二醇的大致平均分子量。
其它制剂包括但不限于醇水溶液，包括药学上可接受的缩醛。这些制剂中所用的醇是具有一个或多个羟基的任何药学上可接受的水混溶性溶剂，包括但不限于丙二醇和乙醇。缩醛包括但不限于低级烷基醛的二(低级烷基)缩醛如乙醛二乙缩醛。
在所有实施方案中，片剂和胶囊制剂可如本领域技术人员已知那样进行包衣以便改变或维持活性成分的溶出。因此，例如，它们可包有常规的肠可消化包衣，如水杨酸苯酯、蜡和邻苯二甲酸乙酸纤维素。
注射剂、溶液和乳液
在一个实施方案中，本文还考虑到了通常特征在于皮下、肌肉或静脉内注射的肠胃外施用。注射剂可以常规形式制备，如作为液体溶液或混悬剂、作为在注射前适于在液体中形成溶液或混悬剂的固体形式、或作为乳液。合适的赋形剂为例如水、盐水、右旋糖、丙三醇或乙醇。另外，如果需要，待施用的药物组合物也可含微量无毒辅助物质如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解度增强剂以及其它此类试剂，例如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺和环糊精。在一个实施方案中，组合物作为水溶液施用，该水溶液具有作为赋形剂的羟丙基-β-环糊精(HPBCD)。在一个实施方案中，水溶液含有约1％至约50％的HPBCD。在一个实施方案中，水溶液含有约1％、3％、5％、10％或约20％的HPBCD。
本文还设想了缓释或持续释放系统的植入，使得维持恒定的剂量水平。简言之，本文提供的化合物分散在内部固体基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑聚氯乙烯、增塑尼龙、增塑聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲硅氧烷、碳酸硅共聚物、亲水性聚合物(如丙烯酸和甲基丙烯酸酯的水凝胶)、胶原、被外部聚合膜(例如，聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物)包围的交联聚乙烯醇和部分水解的交联聚乙酸乙烯酯、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯与乙酸乙烯酯、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯的共聚物、离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡胶、表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物和不溶于体液的乙烯/乙烯基氧乙醇。在控制释放速率的步骤中，化合物通过外部聚合膜扩散。此类肠胃外组合物中所含的活性化合物的量高度取决于其具体性质以及化合物的活性和受试者的需要。
组合物的肠胃外施用包括静脉内、皮下和肌内施用。供肠胃外施用的制剂包括易于注射的无菌溶液，就在使用之前易于和溶剂组合的无菌干燥可溶性产品(如冻干粉，包括皮下注射片)，易于注射的无菌混悬剂，就在使用之前易于和媒介物组合的无菌干燥不溶性产品和无菌乳液。溶液可为水性或非水性的。
如果静脉内施用，则合适的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)及含有增稠剂和增溶剂如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇的溶液及其混合物。
肠胃外制剂中所用的药学上可接受的赋形剂包括水性媒介物、非水性媒介物、抗菌剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、乳化剂、掩蔽或螯合剂和其它药学上可接受的物质。
水性媒介物的实例包括氯化钠注射剂、林格氏注射剂(Ringers Injection)、等渗右旋糖注射剂、无菌水注射剂、右旋糖和乳酸林格氏注射剂。非水性肠胃外媒介物包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。必需向包装在多剂量容器中的肠胃外制剂添加抑菌或抑真菌浓度的抗菌剂，其包括苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和氯化苄乙氧铵。等渗剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。助悬剂和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨醇酯80(80)。金属离子的掩蔽或螯合剂包括EDTA。药物载体还包括用于水溶性媒介物的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；和用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。调节药物活性化合物的浓度，使得注射剂提供产生所需药理学效应的有效量。如本领域已知的那样，精确剂量取决于患者或动物的年龄、体重和状况。将单位剂量肠胃外制剂包装在安瓿、小瓶或带针头的注射器中。如本领域已知和实践的那样，用于肠胃外施用的所有制剂必需是无菌的。
说明性地，静脉或动脉输注含活性化合物的无菌水溶液是有效的施用模式。另一个实施方案是必要时注射以产生所需药理学效应的含活性物质的无菌水或油溶液或混悬剂。
设计用于局部和全身施用的注射剂。通常将治疗有效剂量配制成所含活性化合物的浓度为至少约0.1％w/w直至约90％w/w或更高，诸如超过1％w/w活以用于所治疗的组织。活性成分可一次性施用，或者可分成多个较小剂量以各种时间间隔施用。应理解，精确的剂量和治疗持续时间随所治疗的组织而变化并且可使用已知的试验方案根据经验确定或通过从体内或体外试验数据推断而确定。应该注意的是，浓度和剂量值也可以随着所治疗的个体的年龄而变化。还应当理解，对于任何特定受试者，具体的剂量方案应随着时间根据个体需要以及管理或监督制剂施用的人员的专业判断而调整，并且本文提出的浓度范围仅为示例性的而无意限制要求保护的组合物的范围或实践。
化合物可以以微粉化或其它合适的形式混悬，或者可以衍生化以产生更易溶解的活性产物或产生前药。所得混合物的形式取决于许多因素，包括预期的施用模式和化合物在所选载体或媒介物中的溶解度。有效浓度足以改善所述病状的症状并且可根据经验确定。
持续释放组合物
本文提供的活性成分可以通过控释方式或通过本领域普通技术人员熟知的递送装置施用。实例包括但不限于以下美国专利号中所述的那些：3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123和4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556、5,639,480、5,733,566、5,739,108、5,891,474、5,922,356、5,972,891、5,980,945、5,993,855、6,045,830、6,087,324、6,113,943、6,197,350、6,248,363、6,264,970、6,267,981、6,376,461、6,419,961、6,589,548、6,613,358、6,699,500和6,740,634，其中每一篇均通过引用并入本文。以不同的比例使用例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合以提供所需的释放曲线，可以将此类剂型用于提供一种或多种活性成分的缓慢或控制释放。本领域普通技术人员已知的合适的控释制剂(包括本文所述的那些)可容易地选择用于本文提供的活性成分。
所有控释药物产品都有一个共同的目标，即相比其非控释对应物所实现的而言改进药物治疗。理想情况下，在医学治疗中使用最佳设计的控释制剂的特征在于在最短的时间内使用最少量的药物来治愈或控制病状。控释制剂的优点包括药物活性延长、给药频率降低和患者依从性增加。另外，控释制剂可用于影响作用起效时间或其它特性，诸如血药水平，并因此可影响副作用(例如不良作用)的发生。
大多数控释制剂被设计为最初释放一定量的药物(活性成分)，其立即产生期望的治疗作用，并且逐渐且持续释放其它量的药物以在延长的时间段内维持这种水平的治疗或预防作用。为了在体内维持这种恒定的药物水平，药物必须从剂型中释放出来，其速率将取代从身体代谢和排泄的药物量。可以通过各种条件刺激活性成分的控制释放，这些条件包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物。
在某些实施方案中，可以使用静脉内输注、植入式渗透泵、透皮贴剂、脂质体或其它施用模式施用药剂。在一个实施方案中，可以使用泵。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料。在又一个实施方案中，可以将控释系统置于治疗靶标附近，即仅需要全身剂量的一部分。在一些实施方案中，将控释装置引入受试者体内靠近不适当免疫激活部位或肿瘤。活性成分可分散在固体内部基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑聚氯乙烯、增塑尼龙、增塑聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲硅氧烷、碳酸硅共聚物、亲水性聚合物(如丙烯酸和甲基丙烯酸酯的水凝胶)、胶原、被外部聚合膜(例如，聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物)包围的交联聚乙烯醇和部分水解的交联聚乙酸乙烯酯、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯与乙酸乙烯酯、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯的共聚物、离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡胶、表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物和不溶于体液的乙烯/乙烯基氧乙醇。然后活性成分在控制释放速率的步骤中通过外部聚合膜扩散。包含在此类肠胃外组合物中的活性成分的百分比高度取决于其特定性质以及受试者的需要。
靶向制剂
本文提供的活性成分或其药学上可接受的衍生物也可以配制成靶向待治疗的受试者的特定组织、受体或其它身体区域。许多这样的靶向方法是本领域技术人员熟知的。本文预期所有此类靶向方法均可用于本发明的组合物中。对于靶向方法的非限制性实例，参见例如美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。
在一个实施方案中，脂质体混悬剂(包括组织靶向脂质体，如肿瘤靶向脂质体)也可适合作为药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备。简言之，可通过在烧瓶内部干燥卵磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸(7:3摩尔比)形成脂质体如多层囊泡(MLV)。添加本文提供的化合物在缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶液并且振荡烧瓶直至脂质膜分散。洗涤所得囊泡以去除未包封的化合物，通过离心而沉淀，然后重悬于PBS中。
分配方法
在一个方面，本发明提供了分配抗纤维化剂的方法。术语“抗纤维化剂”表示治疗或控制疾病，特别是纤维化和/或纤维化疾病或病状的化学药剂。
在一个实施方案中，该方法包括将预定量的第一药物组合物联合预定量的第二药物组合物分配给受试者。第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含另外的治疗剂。在一个具体的实施方案中，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含FXR激动剂。在另一个具体实施方案中，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含PPAR-α激动剂。在一个具体的实施方案中，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含趋化因子拮抗剂。术语“抗纤维化剂”表示治疗或控制疾病，特别是纤维化和/或纤维化疾病或病状的化学药剂。在另一个实施方案中，该方法包括分配与第一和第二药物组合物联合的预定量的第三药物组合物。第三药物组合物包含如上所述的另外的治疗剂。
在另一个实施方案中，该方法包括将预定量的第一药物组合物连同施用第一药物组合物的说明书与预定量的第二药物组合物分配给受试者。在另一个实施方案中，该方法包括将预定量的第一药物组合物连同施用第一药物组合物的说明书与预定量的第二药物组合物和预定量的第三药物组合物分配给受试者。例如，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含FXR激动剂；或者，第一药物组合物包含FXR激动剂，并且第二药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。第三药物组合物包含如上文所述的第二种另外的治疗剂。在一个实施方案中，第二种另外的治疗剂是另一种FXR激动剂。在一个实施方案中，第二种另外的治疗剂是PPAR-α激动剂。在另一个实例中，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含PPAR-α激动剂；或者，第一药物组合物包含PPAR-α激动剂，而第二药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。第三药物组合物包含如上文所述的第二种另外的治疗剂。在一个实施方案中，第二种另外的治疗剂是另一种PPAR-α激动剂。在一个实施方案中，第二种另外的治疗剂是FXR激动剂。在另一个实例中，第一药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药，并且第二药物组合物包含趋化因子拮抗剂；或者，第一药物组合物包含趋化因子拮抗剂，而第二药物组合物包含CVC或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。第三药物组合物包含如上文所述的第二种另外的治疗剂。
下面的实施例进一步详细说明本发明，但不应被解释为限制其范围。
实施例
实施例1–赛尼克韦罗甲磺酸盐组合物
在Key 1L筒式制粒机中通过湿法制粒，然后盘式干燥、筛分、混合并在Carver压机上压成片剂制备一系列除酸性增溶剂的特性不同以外相同的赛尼克韦罗甲磺酸盐组合物。表2中示出制剂的组成。
表2
将片剂施用给比格犬。还施用口服溶液作为对照。测定制剂和口服溶液的绝对生物利用率，并在图2中示出。结果显示，具有富马酸的赛尼克韦罗甲磺酸盐的生物利用率显著高于所测试的任何其它增溶剂。
实施例2：赛尼克韦罗甲磺酸盐组合物
将赛尼克韦罗甲磺酸盐、富马酸、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与颗粒外微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁配混、干法制粒、研磨、共混，并压成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片剂。所得片剂具有表3中所示的组成。
表3.
a.相当于150mg赛尼克韦罗游离碱。
b.添加在粉末共混物的颗粒外部分中。
举例来说，表4中给出实施例2b(即，Ex.2b)中的组分的浓度百分比和每片剂质量。
表4
组分 浓度(重量/重量％) 每片剂质量(mg)
赛尼克韦罗甲磺酸盐 26.26 170.69a
富马酸 24.62 160.00
微晶纤维素 41.87 272.18
交联羧甲基纤维素钠 6.00 39.00
硬脂酸镁 1.25 8.13
总计 100.0 650.0
a相当于150mg赛尼克韦罗游离碱
实施例3：赛尼克韦罗甲磺酸盐组合物
将赛尼克韦罗甲磺酸盐、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与颗粒外微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、富马酸、胶体二氧化硅和硬脂酸镁配混、干法制粒、干燥、研磨、共混，并压成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片剂。所得片剂具有表5中所示的组成。
表5
组分 浓度(重量/重量％) 每片剂质量(mg)
赛尼克韦罗甲磺酸盐 26.26 28.45a
富马酸 24.62 26.67
微晶纤维素 41.87 45.36
交联羧甲基纤维素钠 6.00 39.00
硬脂酸镁 1.25 1.35
总计 100.0 108.3
a相当于25mg赛尼克韦罗游离碱
值得注意的是，表5的制剂具有与表3b相同的组分比，且只是用于各片剂的组分的总量不同。因此，表4示出具有150mg赛尼克韦罗(基于游离碱)的片剂，而表CC-1示出具有25mg赛尼克韦罗(基于游离碱)的片剂，其组分比与表4中所示的实施例2b的150mg片剂相同。
实施例4–参考
如下制备表6的基于柠檬酸的制剂。将赛尼克韦罗、羟丙基纤维素、甘露糖醇和交联羧甲基纤维素钠与微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、柠檬酸、胶体二氧化硅、滑石和硬脂酸镁配混、湿法制粒、干燥、研磨和共混。将所得共混物压成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片剂。用羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇8000、二氧化钛和黄色氧化铁对片剂包衣。由此制备的包衣片剂基本上与公开在美国专利申请公开号2008/031942中的那些相同(参见例如表3)。
表6
组分 mg/片剂 重量/重量％
赛尼克韦罗甲磺酸盐 28.91 4.68
甘露糖醇 341.09 56.85
微晶纤维素 80.00 12.94
胶体二氧化硅 12.00 2.00
无水柠檬酸 75.00 12.14
羟丙基纤维素 12.00 1.94
交联羧甲基纤维素钠 30.00 4.85
滑石 12.00 1.94
硬脂酸镁 9.00 1.46
羟丙基甲基纤维素 11.71 1.89
聚乙二醇8000 2.69 0.44
二氧化钛 3.03 0.49
黄色氧化铁 0.57 0.09
实施例5–参考
将赛尼克韦罗和醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯溶解在甲醇中并喷雾干燥成含25重量％赛尼克韦罗的细粉(基于赛尼克韦罗游离碱的重量)。将所述粉末与胶体二氧化硅、微晶纤维素、甘露糖醇、月桂基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁配混。将配混物压成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片剂。表7中示出片剂的最终组成。
表7
组分 重量％ 质量(mg)
赛尼克韦罗(呈甲磺酸盐) 8.33 50.00
醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯 25.00 150.00
月桂基硫酸钠 2.00 12.00
交联羧甲基纤维素钠 6.00 36.00
微晶纤维素 27.83 167.00
甘露糖醇 27.83 167.00
胶体二氧化硅 1.00 6.00
硬脂酸镁 2.00 12.00
总计 100.0 600.0
实施例6：CVC制剂的生物利用率
将实施例3的片剂在比格犬中的绝对生物利用率与实施例4和5的片剂，以及赛尼克韦罗甲磺酸盐的口服溶液和含赛尼克韦罗甲磺酸盐粉末的明胶胶囊的绝对生物利用率作比较。结果在表8中示出。
表8
组分 绝对生物利用率(％)
口服溶液 25.8
胶囊中的粉末 6.4
实施例3 26.6
实施例4 21.1
实施例5 12.4
这个实施例证实，具有富马酸的干法制粒片剂(Ex.3)中赛尼克韦罗的生物利用率基本上类似于口服溶液的生物利用率，且显著高于具有富马酸(Ex.1b)或柠檬酸(Ex.4)的湿法制粒片剂中赛尼克韦罗的生物利用率，且超过具有呈含HPMC-AS的喷雾干燥分散体的无定形赛尼克韦罗的片剂(Ex.5)的生物利用率两倍。这些结果是令人惊讶的，因为没有理由怀疑结晶API的干法制粒相对于湿法制粒和无定形喷雾干燥分散显著增加的生物利用率。因为常使用无定形喷雾干燥分散来增加水溶性差的药物的生物利用率，所以更是如此。这些结果也是令人惊讶的，因为富马酸的溶出时间比柠檬酸慢，且以酸相对于CVC API的更低的质量比使用(柠檬酸:API 3:1对比富马酸:API 1.06:1)。因此，令人惊讶地，对于CVC，富马酸被证明是比柠檬酸更有效的增溶剂。
实施例7：CVC制剂的加速稳定性
通过暴露于75％相对湿度和40℃的环境下，将实施例2b的片剂的加速稳定性与实施例1b、4和5的片剂的加速稳定性作比较。在研究期间，将所有片剂与干燥剂一起包装。如图3中所示，实施例2b的片剂令人惊讶地比其它湿法制粒片剂稳定得多，且与喷雾干燥的分散片的稳定性类似。实施例2b与实施例4的片剂之间的这种稳定性差异尤其令人惊讶，因为只有这两者之间的显著差异才是制备制剂的方法(干法制粒对比湿法制粒)。这些结果也是令人惊讶的，因为先前并不知道制粒方法能够对赛尼克韦罗生物利用率和稳定性都产生影响。
实施例8：CVC制剂的稳定性
通过将片剂暴露在75％相对湿度和40℃的环境下六周测试实施例2和3的片剂的稳定性。在研究期间，所有片剂都与干燥剂一起包装。结果示于表9中，该表显示了片剂在这些条件下极为稳定。
表9
时间(周) 水含量(％) 强度(％) 总杂质(％)
0 1.5 99.1 1.2
2 1.4 99.2 1.1
4 1.4 98.0 1.0
6 1.4 98.6 1.0
实施例9：CVC制剂的稳定性
25℃下的动态蒸汽吸附等温线将实施例3和4的片剂的稳定性与赛尼克韦罗甲磺酸盐的稳定性相联系。以5％间隔从0％相对湿度至90％相对湿度进行吸附。在每个间隔下，将每个样品平衡不少于10分钟且不多于30分钟。当质量增加速率不超过每分钟0.03重量/重量％时或者30分钟后(以较短者为准)，停止平衡。出现在图4中的结果显示，实施例2b的片剂比实施例4的那些片剂明显更稳定。这个结果与实施例3一致，吸湿明显少于实施例4。实施例4相比于实施例2b的吸湿性增加可以与较高移动水含量相关，较高移动水含量进而可导致实施例4的部分凝胶化和后续稳定性降低。
实施例10：双重CCR2和CCR5拮抗剂赛尼克韦罗在NASH小鼠模型中的抗纤维化活性和抗炎活性
背景：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的特征在于脂肪积聚、慢性炎症(包括促炎性单核细胞和巨噬细胞)，且在存在纤维化时，可导致肝硬化或肝细胞癌。当前没有批准用于NASH的疗法。证据表明，2型C-C趋化因子受体(CCR)和它的主要配体单核细胞趋化蛋白-1有助于肝脏中的促炎性单核细胞募集。赛尼克韦罗(CVC)是一种口服强效双重CCR2/CCR5拮抗剂，其在48周2b期研究中，在143名HIV-1感染成人中示出有利的安全性和耐受性(NCT01338883)。在饮食诱导的NASH(导致肝细胞癌)的小鼠模型中评价CVC；提供来自模型的第一纤维化阶段的数据。
方法：通过在出生2天后单次注射200μg链脲霉素(导致血糖控制受损)，随后从4周龄开始高脂肪饮食，在雄性小鼠中诱导NASH。从6至9周龄开始，3组动物(n＝6只/组)通过管饲法每天两次施用0(媒介物)、20(低剂量)或100(高剂量)mg/kg/天的CVC剂量。在9周龄时处死动物，并对肝脏进行生化、基因表达和组织学评价。
结果：CVC处理对体重或肝重、全血葡萄糖或肝脏甘油三酯没有影响。相比于对照，两个CVC处理组中的平均(±SD)丙氨酸转氨酶水平都显著下降(对于低剂量、高剂量和媒介物，分别为58±12、51±13和133±80U/L；p<0.05)，且处理组中的肝脏羟脯氨酸倾向于下降。通过实时RT-PCR，全肝脏裂解物中1型胶原mRNA用CVC处理时下降27–37％。纤维化面积(通过天狼猩红染色)的百分比通过CVC处理相对于对照显著下降(p<0.01)：当包括血管周围间隙时，对于20mg/kg/天、100mg/kg/天和对照，分别为0.66％±0.16、0.64％±0.19和1.10％±0.31；当扣除血管周围间隙时，分别为0.29％±0.14、0.20％±0.06和0.61％±0.23。重要的是，组织学非酒精性脂肪肝病活性评分(在这个模型中，未处理小鼠的评分为0)在用CVC处理时显著下降(对于低剂量、高剂量和媒介物，分别为4.0±0.6、3.7±0.8和5.3±0.5；p<0.05)，这主要是因为炎症和气球样变性评分减小导致的。如先前在人类中所示，在小鼠中观察到血浆单核细胞趋化蛋白-1水平的CVC剂量-相关补偿性增加(对于低剂量和高剂量分别为1.1和1.5倍增加)，这与CCR2的拮抗作用相一致。
结论：这些数据表明，CVC(一种当前人类试验中针对HIV-1的研究药剂)在NASH小鼠模型中具有抗纤维化和抗炎活性，从而批准临床研究。这些发现提供以下方面的进一步证据：破坏CCR2/单核细胞趋化蛋白-1轴可能是一种新型NASH治疗方法。
实施例11：赛尼克韦罗(一种双重CCR2/CCR5拮抗剂)在硫代乙酰胺诱导的肝纤维化和肝硬化大鼠模型中的显著抗纤维化活性
背景：2和5型C-C趋化因子受体(CCR)在促炎性单核细胞和巨噬细胞、枯否细胞(Kupffer cells)和肝星状细胞(HSC)上表达，它们促进肝中的炎症和纤维发生。赛尼克韦罗(CVC；新型强效口服双重CCR2/CCR5拮抗剂)在48周2b期研究中在143名HIV-1感染成人中具有有利的安全性/耐受性(NCT01338883)。这项研究评价CVC在出现由于硫代乙酰胺(TAA)-诱导的损伤所引起的肝纤维化的大鼠中的体内抗纤维化影响和治疗干预相对于疾病发作的定时。
方法：在Sprague-Dawley大鼠中通过腹膜内施用150mg/kg的TAA每周3次持续8周诱导纤维化。大鼠(n＝4–8只/组)在最初8周接受TAA的同时(组1；早期干预)、在完成TAA施用后的4–8周期间(组2；出现纤维化)或8–12周期间(组3；肝硬化逆转)接受CVC 30mg/kg/天(a)、CVC 100mg/kg/天(b)或媒介物对照(c)。对肝脏进行生化、基因表达和组织学评价。
结果：当与TAA同时开始时(组1)，30mg(组1a)和100mg(组1b)的CVC显著减少了纤维化(分别减少49％和38％；p<0.001)，如通过胶原形态测定估计。组1a和1b的1型胶原的蛋白质水平分别降低30％和12％，而α-SMA分别降低17％和22％。在TAA诱导的损伤后4周开始治疗时(组2)，对CVC 30mg(组2a，胶原减少36％；p<0.001)观察到统计上显著的抗纤维化作用，而对CVC 100mg(组2b)未观察到。当在第8周(存在肝硬化)开始治疗并继续4周(组3)时，CVC对纤维发生基因表达或纤维化没有显著作用。
结论：CVC是一种由于TAA引起的非硬化性肝纤维化的强效抗纤维化剂。该药物在早期干预(组1)和出现纤维化(组2a)时是有效的，但在已经形成肝硬化时(组3)无效。
实施例12：双重CCR5/CCR2拮抗剂赛尼克韦罗在肾纤维化小鼠模型中的抗纤维化活性
背景：赛尼克韦罗(CVC)是一种已经完成2b期HIV开发的每天一次的新型口服双重CCR5/CCR2拮抗剂(研究202；NCT01338883)。CVC在555名已经用至少一个剂量治疗的受试者(包括115名在48周持续时间内用CVC治疗的感染HIV-1成人)中具有有利的安全特性。最近，CVC在饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的小鼠模型和硫代乙酰胺诱导的纤维化的大鼠模型中展示出显著的抗纤维化活性。这里，我们在已经确立的由单侧输尿管堵塞(UUO)诱导的肾纤维化的小鼠模型中评价了CVC。
方法：在手术程序前一天(第-1天)将测试动物分配成重量匹配的治疗组。雄性CD-1小鼠(N＝51只；年龄7–8周)通过无菌剖腹手术经历假手术或右侧输尿管完全结扎即UUO(图5)。从第0至5天：经历假手术的小鼠通过每天两次管饲法接受媒介物对照(0.5％甲基纤维素+1％Tween-80)；进行永久UUO的小鼠通过每天两次管饲法接受媒介物对照、CVC 7mg/kg/天或CVC 20mg/kg/天。另一组从第-1至4天以3mg/kg/天接受每天一次腹膜内注射的抗转化生长因子TGF-β1抗体，化合物1D11(阳性对照)，并从第0至5天接受媒介物对照。起初将CVC 100mg/kg/天组(N＝9只)包括在研究中，但因为濒死状态而提前终止(因为没有动物达到第5天，所以没进行分析)。高达2000mg/kg/天的CVC剂量在不涉及手术程序的小鼠毒性研究中耐受良好。在第5天，麻醉动物，在处死前收集血液和组织。
研究终点：研究终点包括：a)体重和肾重；b)经由对苦味酸天狼猩红染色进行组织学定量图像分析(获得十张图像/深度/肾，并使用光学显微术[在200倍下]盲法评估，以使得能够取样60–70％的肾皮质区)评价阻塞肾中的纤维化，并通过复合胶原容积分数(CVF[成像总面积％])评分进行量化，所述评分表示为来自阻塞肾的三个解剖学上不同(间隔200–250μM)的组织切片或深度的平均阳性染色；c)冷冻的肾皮质组织活检样品的羟脯氨酸含量，如通过生化分析所评估；d)促纤维化和炎性生物标记物(包括MCP-1、胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1、纤连蛋白-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结缔组织生长因子-1(CTGF-1)的mRNA表达；经由(Life TechnologiesTM,Carlsbad,CA,USA)测定法评估，将相对表达针对HPRT(次黄嘌呤磷酸核糖转移酶)归一化。
统计分析：将数据表示为平均值±平均值标准误差(SEM)。利用GraphPad(GraphPad Software,Inc.,San Diego,CA,USA)进行统计分析。通过未配对t检验分析假手术+媒介物对照与UUO+媒介物对照组之间，和UUO+媒介物对照与UUO+化合物-1D11(阳性对照)组之间的治疗差异。通过单向ANOVA(方差分析)与邓奈特检验(Dunnett’s test)(事后(post-hoc))分析UUO+媒介物对照与CVC-剂量组之间的治疗差异。
方法：CVC展示出显著的抗纤维化作用，如通过已经确立的肾纤维化的小鼠UUO模型中胶原容积分数或CVF(组织学阻塞肾切片中针对胶原为染色阳性的面积％)的减小所定义。阻塞肾中观察到胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1和纤连蛋白-1 mRNA表达下降的趋势，但这些并未达到统计显著性。综上，CVC的作用模式、在动物模型(肾和肝)中的抗纤维化活性和广泛的安全性数据库支持在纤维化疾病中的进一步评价。计划在非HIV感染的NASH和肝纤维化患者中进行概念验证研究。还计划在HIV-1感染患者中进行III期试验，以评价在共施用指南优选的第三药剂时固定剂量的CVC/拉米夫定(3TC)组合作为新型“骨架(backbone)”相对于富马酸替诺福韦二吡呋酯/恩曲他滨(TDF/FTC)。
结果：体重和阻塞肾的重量：CVC 7mg/kg/天和化合物1D11(阳性对照)对体重没作用，而CVC 20mg/kg/天导致体重在第5天时相对于UUO+媒介物对照组存在适度但不明显的下降(5％)(p<0.05)(图6；体重变化以克[g]显示)。阻塞或对侧肾重量或肾重量指数相对于UUO+媒介物对照组未观察到显著的治疗作用(CVC或化合物1D11[阳性对照])(数据未显示)。组织学：CVF的复合测量值(针对三种深度求取面积％的平均值[±SEM])在UUO+媒介物对照组中显著高于假手术组(11.4±1.0倍；p<0.05)(图7)。CVC 7和20mg/kg/天和化合物1D11(阳性对照)相对于UUO+媒介物对照组显著削弱了UUO诱导的CVF的复合测量值(针对三种深度求取的平均值[±SEM])的增加(分别减少28.6±8.8％、31.8±6.8％和50.3±7.3％；p<0.05)。
羟脯氨酸含量：来自UUO+媒介物对照组的阻塞肾的羟脯氨酸含量(占蛋白质的％)相对于假手术组显著增加(0.72％相对于0.27％；p<0.05)(数据未显示)。相对于UUO+媒介物对照组，测试的任一CVC剂量都不影响UUO诱导的阻塞肾羟脯氨酸含量增加；然而化合物1D11(阳性对照)组具有显著更低的水平(0.55％相对于0.72％；p<0.05)(数据未显示)。
促纤维化和炎性生物标记物mRNA表达：对于每种评价的生物标记物(MCP-1、胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1、纤连蛋白-1、α-SMA和CTGF-1)，UUO+媒介物对照组中mRNA的表达与假手术组相比显著增加(p<0.05)(图8)。CVC 7和20mg/kg/天减弱UUO诱导的胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1和纤连蛋白-1 mRNA表达增加。然而，这些降低与UUO+媒介物对照组相比没有达到统计显著性。化合物1D11(阳性对照)相对于UUO+媒介物对照组显著减少了UUO诱导的胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1和纤连蛋白-1的mRNA表达的增加(p<0.05)。与UUO+媒介物对照组(未显示α-SMA和CTGF-1 mRNA的数据)相比，CVC 7和20mg/kg/天和化合物1D11(阳性对照)对于UUO诱导的阻塞肾皮质MCP-1、α-SMA和CTGF-1 mRNA表达增加没有显著影响。
结论：CVC展示出显著的抗纤维化作用，如通过已经确立的肾纤维化的小鼠UUO模型中胶原容积分数或CVF(组织学阻塞肾切片中针对胶原为染色阳性的面积％)的减小所定义。阻塞肾中观察到胶原1a1、胶原3a1、TGF-β1和纤连蛋白-1 mRNA表达下降的趋势，但这些并未达到统计显著性。综上，CVC的作用模式、在动物模型(肾和肝)中的抗纤维化活性和广泛的安全性数据库支持在纤维化疾病中的进一步评价。计划在非HIV感染的NASH和肝纤维化患者中进行概念验证研究。还计划在HIV-1感染患者中进行III期试验，以评价在共施用指南优选的第三药剂时固定剂量的CVC/拉米夫定(3TC)组合作为新型“骨架”相对于富马酸替诺福韦二吡呋酯/恩曲他滨(TDF/FTC)。
实施例13：APRI和FIB-4纤维化评分的提高与经48周接受赛尼克韦罗的感染HIV-1成人中sCD14的降低相关
背景和目标：赛尼克韦罗(CVC)(一种每天一次的新型口服CCR2/CCR5拮抗剂)已经在临床试验中展示出有利的安全性和抗HIV活性。CVC在两种肝病动物模型中展示出抗纤维化活性。在研究202(NCT01338883)中对APRI和FIB-4评分进行事后分析。
方法：将具有CCR5嗜性HIV-1、BMI≤35kg/m2且无明显肝病(即，ALT/AST级别≤2，总胆红素≤ULN，无HBV、HCV、活性或慢性肝病或肝硬化)的143名成人以4:1随机分配至CVC或依法韦仑(efavirenz,EFV)。计算APRI和FIB-4评分。在无数据缺失的患者中评估从基线(BL)到第24和48周的评分类别变化。评价APRI和FIB-4评分相对于BL的变化与MCP-1(CCR2配体)和sCD14(炎性生物标记物)水平之间的相关性。
结果：在BL时，相较于EFV，更多的服用CVC的患者APRI≥0.5和FIB-4≥1.45；高于这些阈值的CVC患者的比例在第24和48周时下降(表10)。在第24周时，观察到APRI评分的变化与MCP-1水平之间(p＝0.014)，以及FIB-4评分的变化与sCD14水平之间(p＝0.011)具有显著相关性，且在第48周时观察到APRI(p＝0.028)和FIB-4评分(p＝0.007)的变化与sCD14水平之间具有显著相关性。(表10)。
表10
/表1
结论：在这个没有明显肝病的群体中，CVC治疗与APRI和FIB-4评分的提高相关，且在第48周在APRI和FIB-4评分的变化与sCD14水平之间观察到相关性。经证实的CCR2/CCR5拮抗性、在动物模型中的抗纤维化作用以及广泛的临床安全性数据都支持CVC在肝纤维化中的临床研究。
实施例14：赛尼克韦罗在非酒精性脂肪性肝炎STAM模型中的体内功效研究
进行了这项体内功效研究以检查赛尼克韦罗在非酒精性脂肪性肝炎的STAMTM小鼠模型中的作用。
材料和方法
实验设计和治疗
研究组
组1-媒介物：十八只NASH小鼠从6周龄开始以10mL/kg的体积每天两次(9:00和19:00)口服施用媒介物。
组2-赛尼克韦罗20mg/kg(CVC-低)：十八只NASH小鼠从6周龄开始以10mg/kg的剂量每天两次(20mg/kg/天)(9:00和19:00)口服施用补充有赛尼克韦罗的媒介物。
组3-赛尼克韦罗100mg/kg(CVC-高)：十八只NASH小鼠从6周龄开始以50mg/kg的剂量每天两次(100mg/kg/天)(9:00和19:00)口服施用补充有赛尼克韦罗的媒介物。
表11汇总了治疗计划表：
表11
结果
第1部分：用于评估CVC的抗NASH/纤维化作用的研究
直到第9周的体重变化和一般情况(图9)
体重在治疗期间逐渐增加。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均体重在治疗期间无显著差异。本研究中没有动物的一般情况在整个治疗期间显示出恶化。
在第9周处死之日的体重(图10A和表12)
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均体重无显著差异(媒介物：18.9±3.3g，CVC-低：19.5±2.0g，CVC-高：18.7±0.9g)。
表12：第9周的体重和肝重
第9周的肝重和肝重-体重比(图10B&C和表12)
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均肝重无显著差异(媒介物：1270±326mg，CVC-低：1334±99mg，CVC-高：1307±119mg)。
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均肝重-体重比无显著差异(媒介物：6.6±0.8％，CVC-低：6.9±1.0％，CVC-高：7.0±0.8％)。
第9周的全血和生物化学
图11A-D和表13中示出全血葡萄糖数据。
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的血糖水平无显著差异(媒介物：590±108mg/dL，CVC-低：585±91mg/dL，CVC-高：585±91mg/dL)。4.4.2.血浆ALT(图11B，表14)。与媒介物组相比，CVC-低组和CVC-高组显示出血浆ALT水平显著降低(媒介物：133±80U/L，CVC-低：58±12U/L，CVC-高：52±13U/L)。
表13：第9周的血液和肝脏生物化学
图11C和表13中示出了血浆MCP-1数据。CVC-高组显示出血浆MCP-1水平与媒介物组相比显著增加。媒介物组与CVC-低组之间的血浆MCP-1水平无显著差异(媒介物：60±4pg/mL，CVC-低：68±16pg/mL，CVC-高：91±14pg/mL)。
图11D、表13示出了血浆MIP-1β数据。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的血浆MIP-1β水平无显著差异(媒介物：18±5pg/mL，CVC-低：18±2pg/mL，CVC-高：20±4pg/mL)。
第9周的肝脏生物化学
图11D和表13中示出了肝脏甘油三酯含量数据。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的肝脏甘油三酯含量无显著差异(媒介物：40.8±20.4mg/g肝脏，CVC-低：48.5±16.1mg/g肝脏，CVC-高：51.7±14.1mg/g肝脏)。
图11E和表13中示出了肝脏羟脯氨酸含量数据。与媒介物组相比，CVC-低组和CVC-高组中的肝脏羟脯氨酸含量趋于下降(媒介物：0.75±0.18μg/mg，CVC-低：0.63±0.05μg/mg，CVC-高：0.62±0.09μg/mg)。
第9周的组织学分析
图12和13以及表15中示出了HE染色和NAFLD活性评分数据。来自媒介物组的肝切片展现出严重的小泡性和大泡性脂肪沉积、肝细胞气球样变性和炎性细胞浸润。CVC-低组和CVC-高组显示出炎性细胞浸润和肝细胞气球样变性的中度改善，与媒介物组相比，NAS显著减少(媒介物：5.3±0.5，CVC-低：4.0±0.6，CVC-高：3.7±0.8)。图12中示出了HE染色切片的代表性显微照片。
表14：第9周的NAFLD活性评分
NAS组成部分的定义
图14、15、16和表15中示出了天狼猩红染色数据。来自媒介物组的肝切片在肝小叶的中心周围区域中示出胶原沉积。与媒介物组相比，在CVC-低组和CVC-高组中，中心周围区域中的胶原沉积显著减少。与媒介物组相比，CVC-低组和CVC-高组中的纤维化面积(天狼猩红染色阳性面积)显著减小(媒介物：1.10±0.31％，CVC-低：0.66±0.16％，CVC-高：0.64±0.19％)。与媒介物组相比，CVC-低组和CVC-高组中修改的纤维化面积也显著降低(媒介物：0.61±0.23％，CVC-低：0.29±0.14％，CVC-高：0.20±0.06％)。
表15：第9周的组织学分析
图14中示出了肝的天狼猩红染色切片的代表性显微照片。
图15和16以及表15示出了F4/80免疫组织化学数据。来自媒介物组的肝切片的F4/80免疫染色证明肝小叶中累积了F4/80+细胞。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的F4/80+细胞的数量和大小以及炎症面积(F4/80阳性面积)的百分比无显著差异(媒介物：4.99±1.10％，CVC-低：4.77±1.02％，CVC-高：4.96±0.60％)。
图15中示出了F4/80-免疫染色切片的代表性显微照片。
图17-21和表15中示出了F4/80+CD206+和F4/80+CD16/32+免疫组织化学数据。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的巨噬细胞中的F4/80+CD206+细胞的百分比无显著差异(媒介物：34.3±4.2％，CVC-低：34.7±6.3％，CVC-高：33.1±3.0％)。媒介物组与CVC-低组间的巨噬细胞中的F4/80+CD16/32+细胞的百分比无显著差异。与媒介物相比，CVC-高组中F4/80+CD16/32+细胞的百分比趋于增加(媒介物：33.5±3.7％，CVC-低：38.7±7.6％，CVC-高：41.5±8.2％)。媒介物组与CVC-低组间的M1/M2比无显著差异。在CVC-高组中，与媒介物相比，M1/M2比趋于增加(媒介物：99.6±20.2％，CVC-低：112.3±17.0％，CVC-高：125.1±21.9％)。
图17和19中示出F4/80和CD206、F4/80和CD16/32双免疫染色切片的代表性显微照片。
图22、23和表15中示出了油红染色数据。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的脂肪沉积以及脂肪沉积面积(油阳性面积)的百分比无显著差异(媒介物：9.66±5.02％，CVC-低：6.51±3.88％，CVC-高：7.23±3.59％)。
图22中示出了油红染色切片的代表性显微照片。
图23、25和表15中示出了TUNEL染色数据。与媒介物组相比，CVC-低组中的TUNEL阳性细胞的百分比显著增加。媒介物组与CVC-高组间的TUNEL阳性细胞的百分比无显著差异(媒介物：36.0±3.7％，CVC-低：43.3±2.9％，CVC-高：39.0±5.3％)。
图24中示出了肝脏中TUNEL阳性细胞的代表性显微照片。
图26和表16-17中示出了第9周的基因表达分析。
表16：第9周的基因表达分析
表17：第9周的P值
TNFα
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的TNFαmRNA表达水平无显著差异(媒介物：1.00±0.24，CVC-低：1.16±0.39，CVC-高：1.09±0.23)。
MCP-1
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的MCP-1 mRNA无显著差异(媒介物：1.00±0.31，CVC-低：1.05±0.50，CVC-高：1.00±0.53)。
1型胶原
与媒介物组相比，CVC-低组中1型胶原mRNA表达水平显著下调。与媒介物组相比，CVC-高组中1型胶原mRNA表达水平倾向于下调。(媒介物：1.00±0.42，CVC-低：0.63±0.10，CVC-高：0.73±0.04)。
TIMP-1
媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的TIMP-1 mRNA表达水平无显著差异(媒介物：1.00±0.46，CVC-低：0.75±0.32，CVC-高：0.80±0.20)。
第2部分：用于评估CVC的抗HCC作用的研究
直到第18周的体重变化(图28)
体重在治疗期间逐渐增加。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均体重在治疗期间无显著差异。
图29中示出了存活分析数据。在媒介物组中，十二只小鼠中有四只在第59天(ID112)、第75天(ID113、115)和第84天(ID116)死亡(将施用的第一天指定为第0天)。在CVC-低组中，十二只小鼠中有六只在第62天(ID209)、第64天(ID217)、第75天(ID212)、第76天(ID213)、第84天(ID215)和第86天(ID208)死亡。在CVC-高组中，十二只小鼠中有五只在第62天(ID317)、第65天(ID312)、第70天(ID316)、第78天(ID314)和第85天(ID309)死亡。在死亡动物中，除NASH的典型肝脏病变以外，没有异常尸检发现。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的存活率无显著差异。按照发货人指示，在18周龄时比安排的时间更早地处死其余的动物(原本安排在20周龄时处死)。
图30A和表18中示出了第18周的处死之日的体重数据。与媒介物组相比，CVC-高组中的体重倾向于下降。媒介物组与CVC-低组之间的平均体重无显著差异(媒介物：23.0±2.3g，CVC-低：22.9±3.5g，CVC-高：20.8±2.7g)。
表18：第18周的体重和肝重
图30B&C和表18中示出了第18周的肝重和肝重-体重比数据。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均肝重无显著差异(媒介物：1782±558mg，CVC-低：1837±410mg，CVC-高：1817±446mg)。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的平均肝重-体重比无显著差异(媒介物：7.7±2.2％，CVC-低：8.3±2.8％，CVC-高：8.8±2.3％)。
第18周的肝脏宏观分析
图31A-C中示出了肝脏的宏观外观。
图32和表29中示出了肝脏表面上形成的可见肿瘤结节的数量。载体组与CVC-低组或CVC-高组间的每只小鼠的肝肿瘤结节数量无显著差异(媒介物：2.4±4.1，CVC-低：1.5±1.9，CVC-高：3.6±2.5)。
表19：第18周的肝脏宏观分析
图33和表19中示出肝脏表面上形成的可见肿瘤结节的最大直径。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间的最大肿瘤直径无显著差异(媒介物：4.0±4.7mm，CVC-低：4.8±5.4mm，CVC-高：5.3±5.1mm)。
第18周的组织学分析
图34中示出了HE染色数据。HE染色揭示媒介物组中的炎性细胞浸润、大泡性和小泡性脂肪沉积、肝细胞气球样变性、变异病灶和结节病变。媒介物组中八只小鼠中有六只表现出HCC病变。在CVC-低组中，六只小鼠中有五只检测到HCC病变，而在CVC-高组中，七只小鼠中有六只检测到HCC病变。媒介物组与CVC-低组或CVC-高组间未发现明显差异。
图34中示出了HE染色切片的代表性显微照片。
图35中示出了GS免疫组织化学数据。分别地，在媒介物组中，八只小鼠中有六只检测到切片中有GS阳性结节，在CVC-低组中，六只小鼠中有五只检测到切片中有GS阳性结节，而在CVC-高组中，七只小鼠中有七只检测到切片中有GS阳性结节。
图35中示出了GS染色切片的代表性显微照片。
图36和37以及表20示出了CD31免疫组织化学数据。与媒介物组相比，CVC-低组中的CD31阳性面积倾向于减小。与媒介物组相比，CVC-高组中的CD31阳性面积倾向于增大(媒介物：2.71±1.36％，CVC-低：1.47±1.10％，CVC-高：3.68±1.37％)。
图36中示出CD31染色切片的代表性显微照片。
表20：第18周的组织学分析
表21：第18周的P值
总结与讨论
在第9周的分析中，用低和高剂量CVC治疗以剂量依赖性方式显著减小了纤维化面积，证实CVC在本研究中具有抗纤维化作用。用低和高剂量CVC治疗还降低了1型胶原的mRNA表达水平和肝羟脯氨酸含量，这支持了它的抗纤维化性质。与媒介物组相比，CVC治疗组以剂量依赖性方式显著降低了血浆ALT水平和NAS。NAS的提高可归因于小叶炎症和肝细胞气球样变性的减少。因为肝细胞气球样变性来源于氧化应激诱导的肝细胞损伤，且与NASH的疾病进展有关[26；27]，所以这强烈地暗示了CVC通过抑制肝细胞损伤和气球样变性改善NASH病状。总之，CVC在本研究中具有潜在的抗NASH和保肝作用。
如人类中所示，血浆MCP-1水平在本研究中通过用CVC治疗而增加，表明CVC对CCR2具有剂量依赖性拮抗作用，而血浆MIP-1β水平不因所述治疗而显示出任何显著变化。为了研究CVC的作用机制，我们评价了CVC对巨噬细胞群体的作用。初步结果证实，与媒介物组相比，CVC显示出高M1/M2比倾向性，这暗示CVC可能通过调控发炎肝脏中的巨噬细胞亚群的平衡来抑制纤维发生。未来将对此进行进一步研究。
在第18周的分析中，CVC治疗组中未观察到对NASH衍生的HCC的作用。总之，CVC在本研究中显示出抗NASH、保肝和抗纤维化作用。
实施例15：HIV-1感染的成人受试者中的长期功效数据
研究202的功效结果
研究设计和目标
如美国申请号61/968,829和62/024,713(均通过引用整体并入本文，以用于所有目的)中所描述的那样，在对与已批准的抗逆转录病毒药剂依法韦仑(EFV,)相比评价CVC 100mg和CVC 200mg的功效和安全性的随机、双盲、双模拟、48周比较性研究(研究202)进行的分析表明CVC施用具有抗纤维化作用。
炎症的生物标记物
作为探索性分析，测量炎症生物标记物MCP-1、sCD14、高敏C-反应性蛋白[hs-CRP]、白介素-6[IL-6]、D-二聚体和纤维蛋白原)的水平。表22中汇总了MCP-1、sCD14、hs-CRP、IL-6、D-二聚体和纤维蛋白原的基线值和在第24周和第48周相对于基线的变化。
表22
N＝受试者数。
注意：基线定义为在开始研究治疗前最后一次无缺失评估。
*与EFV臂的成对比较，使用基于ANCOVA模型的LS均值，因素包括治疗、基线和基线时的HIV-1RNA，显示p值＜0.001。
#治疗臂之间的差异(如通过控制基线HIV-1RNA的van Elteren检验所评估)具有统计显著性(p值：0.048)。
使用CVC观察到MCP-1(CCR2的配体)随时间增加的剂量响应，而MCP-1在EFV臂中保持基线值(参见图38)。EFV和CVC 100mg与CVC 200mg治疗组之间的血浆MCP-1相较于基线的变化的差异在第24周和第48周具有统计显著性(p<0.001)(参见表22)。
此外，在两个CVC治疗组中，观察到sCD14在48周治疗期间的下降(重复sCD14分析的线性混合模型分析，参见下文)，而在EFV臂中，观察到sCD14在相同的观察期内增加(参见图39)。可溶性CD14是单核细胞激活的生物标记物，且独立地与大型、长期定群研究中HIV感染患者的发病率和死亡率以及具有慢性病毒性肝炎的患者和具有严重肝纤维化的患者中的较差临床结果相联系。
sCD14样品起初在2个单独批次中进行分析：批次1包括第24周初步分析前的样品，而批次2包括第32周和第48周(研究结束)样品。表22中提供来自两批次分析的sCD14相对于基线的变化的结果。进行全部在一个批次中分析的存档样品的重复分析，以获得不同时间点的分析一致性。为控制协变量的作用，对sCD14相对于基线的变化进行线性混合模型重复测量分析(分析日期为2013年9月)。除CVC200mg臂中从基线到第32周的变化以外，与使用EFV观察到的增加相比，两种剂量(100和200mg)下在48周治疗期间使用CVC观察到的sCD14水平的减少(LS均值)具有统计显著性(p<0.05)(参见表23和图39)。
表23
在CVC和EFV治疗组中，其它炎症生物标记物(hs-CRP、IL-6、D-二聚体)的变化类似。
APRI和FIB-4评分
此外，在来自这个纳入根据严格合格标准(HIV-1感染且而非ALT/AST级别≥2，总胆红素>ULN，HBV和/或HCV、活性或慢性肝病、肝硬化，或BMI>35kg/m2)无明显肝病的受试者的研究的数据的事后分析中，在≥10％的所有CVC治疗受试者中随时间的推移观察到AST-与-血小板比率指数(APRI)和综合了标准生化值、血小板、ALT、AST和年龄(FIB-4)的无创性肝纤维化指数评分的提高(合并CVC 100mg和200mg的数据)(图40)。在EFV臂中，5％的受试者在第24周且6％的受试者在第48周的APRI评分相较于基线下降一个类别；没有用EFV治疗的受试者的FIB-4评分下降一个类别，其中所有受试者在基线时评分<1.45。
如上所述，在这个研究中，CVC还对sCD14(单核细胞激活的重要标记物)具有显著影响。在上述相同事后分析中，CVC治疗的受试者在第24周的FIB-4评分与sCD14水平的变化间以及第48周的APRI和FIB-4评分与sCD14水平的变化间具有统计上显著的相关性。图41和图42中示出第48周的结果。
没有在临床病理学参数或任何组织(包括肝)中通过在1000mg/kg/天的高剂量下的显微评价看见炎症的指征，其中在慢性(3和9个月)猴毒性研究中的血浆MCP-1水平是对照的约5倍。
事实上，在NASH的小鼠模型中观察到100mg/kg/天剂量下的CVC的抗纤维化作用，还看见显著增加的血浆MCP-1水平。另外，在48周内在经CVC治疗的受试者中观察到APRI和FIB-4纤维化指数评分的提高，尽管MCP-1显著且持续地升高。另外，在此研究中，CVC在经受CVC 100mg和200mg治疗的115名受试者中普遍耐受良好长达48周。
第1年和第2年的NAS和肝纤维化阶段(NASH CRN系统和Ishak)的变化将通过组织学进行评估。也将评估肝活检物上的胶原的形态测定定量评估的变化。将评价疗效终点与MCP-1血浆水平之间的相关性，以确定CVC治疗下所观察到的持久MCP-1增加是否在具有由NASH引起的肝纤维化的受试者中造成潜在危险。
实施例16：炎症和免疫功能的生物标记物
使用CVC观察到MCP-1(在单核细胞上发现的趋化因子受体，CCR2的配体)随时间增加的剂量响应，而MCP-1在EFV臂中保持基线值。EFV与CVC 100mg和CVC 200mg治疗臂之间的相对于血浆MCP-1的基线的变化的差异在第24周和第48周是统计显著的(p<0.001)，这表明CVC的有效和剂量依赖性CCR2阻断。此外，在两个CVC治疗臂中均观察到sCD14(单核细胞激活的生物标记物和HIV感染的死亡率的独立预测因子)在最初24周内的下降，而在EFV臂中，在相同的观察期内观察到sCD14的增加。在第24周和第48周之间，sCD14水平在经CVC治疗的受试者中恢复到基线值，而它们在经EFV治疗的受试者中继续上升。CVC臂与EFV臂之间的相对于基线的变化的差异在第24周和第48周以及在重复分析中的第48周是统计显著的(p<0.001)。这些结果表明CVC对降低单核细胞激活的潜在作用。
在治疗臂之间没有观察到其它炎症生物标记物(hs-CRP、纤维蛋白原、IL-6和D-二聚体)和免疫功能生物标记物(CD4+T细胞或CD8+T细胞上的总CD38+表达和总HLA DR+表达)的相对于基线的变化的有意义的差异。
实施例17：评价NASH中的肝组织学改善的CVC研究
基于指示CVC具有抗炎性和抗纤维化活性并且普遍耐受良好的非临床和临床数据，Tobira计划在2期研究中在患有由NASH所引起的肝纤维化的受试者中研究CVC。该2期研究将评价CVC治疗患有肝纤维化的成年受试者中的NASH的功效，这些成年受试者由于至少一种促成因素的存在而处在疾病进展的风险下，这些促成因素包括2型糖尿病(T2DM)、具有由美国国家胆固醇教育计划(NCEP)所定义的至少1项代谢综合征(MS)标准的高体质指数(BMI)(>25kg/m2)、桥连纤维化和/或明确型NASH(NAS≥5)。
该2期研究旨在评价CVC治疗这种严重病状的潜力并解决患有由NASH所引起的肝纤维化的患者的未满足的重大医疗需求。该研究是随机、双盲、安慰剂对照研究，其经设计评价CVC 150mg在患有由NASH所引起的肝纤维化的受试者中相比于安慰剂的疗效和安全性。研究群体由由于NASH(NAS≥4)处于疾病进展风险下的肝纤维化(NASH临床研究网络[CRN]阶段1-3)受试者组成。
将在研究652-2-203中基于以下考虑评价CVC 150mg(DP7制剂)的剂量对肝纤维化受试者中的NASH的治疗：
预期CVC将提供抗炎性和抗纤维化活性，这主要是由于其对CCR2和CCR5共受体的拮抗作用以及对促炎性单核细胞募集、迁移和浸润到肝损伤部位所产生的影响。因此，对于选择用于本研究的剂量的主要考虑因素是确保CVC血浆暴露足以提供CCR2和CCR5的接近最大的拮抗作用。
CVC对CCR2和CCR5的拮抗作用已在体外和离体研究中以及CVC治疗HIV-1感染的2项临床研究(2a期研究652-2-201和2b期研究652-2-202)中进行评价。在每种情况下，观察到CCR2和CCR5的有效的和浓度依赖性的拮抗作用。通过在这2项2期研究中分别测量血浆MCP-1(CCR2的配体)浓度的相对于基线的变化和血浆HIV-RNA(HIV进入所需的CCR5共受体)的变化确立了CCR2和CCR5拮抗作用的临床证据。
在研究652-2-202中，在115名HIV-1感染受试者中评价了CVC100mg和CVC 200mg(DP6制剂)的剂量长达48周(CVC摄入的平均[SE]持续时间：41.1[1.33]周)，并且发现它们在治疗HIV感染方面有效且耐受良好。基于表明增加的CVC血浆浓度与改善的病毒学结果具有相关性的暴露-响应分析，CVC 200mg被认为是用于在3期研究中进一步评价CVC作为治疗HIV感染的抗病毒剂的适当剂量。
然而，当在相同的给药条件下施用CVC时(研究652-1-111、652-1-110、652-2-202)，在非HIV感染的健康志愿受试者中的CVC血浆暴露似乎比在HIV感染受试者中高。在研究652 2 203中将评价CVC 150mg的剂量对肝纤维化受试者中的NASH的治疗。基于引用的现有数据，该剂量被认为是在治疗上相关的范围内并且预期将在患有NASH和肝纤维化的受试者中提供与CVC 200mg的那些暴露相当的暴露，CVC 200mg在研究652-2-202中进行评价并且被发现产生有效的CCR2和CCR5拮抗作用。
计划共有250名受试者(每个治疗臂125名受试者)，并且总研究治疗持续时间为2年。研究群体将包括患有NASH(NAS≥4)和肝纤维化(阶段1至3[NASH CRN系统])的受试者，这些受试者由于≥1个促成因素的存在而具有增加的疾病进展风险：
2型糖尿病的书面证据
具有如NCEP所定义的代谢综合征的下列标准中的至少1个的高BMI(>25kg/m2)：
中心性肥胖：腰围≥102cm或40英寸(男性)，≥88cm或35英寸(女性)
血脂异常：TG≥1.7mmol/L(150mg/dL)
血脂异常：HDL胆固醇<40mg/dL(男性)，<50mg/dL(女性)
血压≥130/85mmHg(或高血压经治疗)
空腹血糖≥6.1mmol/L(110mg/dL)；或
桥连纤维化(NASH CRN阶段3)和/或明确型NASH(NAS≥5)。
将会有2个治疗期。治疗期1将由1年的双盲随机治疗(CVC 150mg或匹配的安慰剂)组成。受试者和研究人员在1期期间将对治疗分配保持不知情。在治疗期2期间，原本随机分配到CVC 150mg的受试者将再继续接受该治疗一年，且原本随机分配到安慰剂的受试者将从安慰剂转向CVC 150mg。
受试者将接受研究药物，每天一次(QD)，持续2年。该研究将包括2个治疗期：治疗期1(第一年)和治疗期2(第二年)。合格的受试者将在治疗的第一年期间(治疗期1)被分配到接受CVC(n＝126)或匹配的安慰剂(n＝126)。对于治疗期2，经安慰剂治疗的受试者的一半(在基线处随机化)将转向CVC，而另一半将在第二年的治疗中继续接受安慰剂。在基线处(第1天)，在筛选评价后，合格的受试者将利用通过筛选时的NAS(4或≥5)和纤维化分期(≤2或>2)分层的置换区组随机化而分配给治疗组。合格的受试者将以2:1:1的比率被随机分配至以下3个治疗臂之一，如图24中所示。
表24
臂 N 治疗期1 治疗期2
A 126 CVC 150mg，QD CVC 150mg，QD
B 63 匹配安慰剂，QD CVC 150mg，QD
C 63 匹配安慰剂，QD 匹配安慰剂，QD
CVC和匹配安慰剂将会作为双盲研究药物施用。研究药物(CVC/匹配安慰剂)应该每天早晨随食物一起服用。
主要终点(第1年)活检必须在治疗期1结束前的1个月内和开始治疗期2之前进行。最后(第2年)活检必须在研究药物治疗结束前的1个月内进行。
募集将在有限数量的地点开始，直到最多20名受试者已被随机分配和治疗并且安全性数据已由数据监测委员会(DMC)审查。第一次DMC审查将在第一名受试者被募集的3个月内，或当最多20名受试者已被随机分配并且至少10名受试者已被治疗1个月时进行，以先发生者为准。一旦DMC已评价这些最初的10至20名受试者的安全性数据并确定该研究可以继续，就将进行其余的研究受试者的后续募集。
在治疗期1期间，所有受试者将在第1个月的第2周和第4周接受安全性评估。另外，最初的20名受试者将在第1个月的第1周和第3周接受安全性评估。所有受试者将在第2个月期间每2周接受一次研究访问评估，在第3至6个月期间每个月接受一次访问评估，以及在第8、10和12个月接受访问评估。在治疗期2期间，受试者将在第13至15个月期间每个月接受访问，以及在第18、21和24个月接受访问。
重点评估
在研究期间：
肝活检将在筛选时、在主要终点处(第1年：治疗期1结束前的1个月内和开始治疗期2之前)和在第2年(治疗结束前的1个月内)进行。
促炎性细胞因子、炎症的生物标记物、肝细胞细胞凋亡的生物标记物、细菌易位的生物标记物、空腹代谢参数、肾参数和eGFR将在基线处以及第3、6、12、15、18和24个月进行测量。
在可用的部位，非侵入性肝成像(例如，超声瞬时弹性成像[TE]、二维磁共振弹性成像[MRE]、声辐射力脉冲[ARFI])的评估将在基线处以及在第6、12、18和24个月进行。
CVC的药代动力学样品将在基线处(在即将开始治疗前的给药前样品)、第0.5、3和15个月(给药前和给药后至少1小时)以及第6、12、18和24个月(给药前)进行收集。
体重、腰围、臀围、臂围和三头肌皮褶厚度将在基线处和第3、6、12、15、18和24个月进行测量。身高将在筛选时和第12个月进行。
身体检查和实验室分析将在每次访问时进行。ECG将在基线处和在第3、6、12、15、18和24个月进行。
不良事件和伴随用药将在每次访问时进行评估。
知情同意书和有关NASH、肝纤维化和肝活检程序的患者教育材料将在筛选访问时进行审查。
研究药物日记将在分配研究药物的同时被提供给每名受试者。该日记将在所有治疗期间访问和早期停药访问时进行审查。
受试者将在接受其最后治疗后的1个月返回诊所以接受研究结束时的随访评价。
该研究的主要疗效目标将是评价第1年的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活性评分(NAS)相对于筛选活检的肝组织学改善，由最小2分的NAS改善(其中在多于1个类别中至少1分的改善)和没有纤维化阶段的同时恶化(恶化被定义为进展至桥连纤维化或肝硬化)所定义。
--次要疗效目标包括：在第2年评价NASH的解决和没有纤维化分期的同时恶化(恶化被定义为进展至桥连纤维化或肝硬化)；在第1年评价NASH的解决和没有纤维化阶段的同时恶化(恶化被定义为进展至桥连纤维化或肝硬化)；评价在肝纤维化成人受试者中CVC在NASH的1年和2年治疗中的安全性和耐受性；在群体PK分析中表征CVC的血浆PK；在第2年评价NAS的肝脏组织学改善，由最小2分的NAS改善(其中在多于1个类别中至少1分的改善)和没有纤维化阶段的同时恶化(恶化被定义为进展至桥连纤维化或肝硬化)所定义；评价CVC对比安慰剂在肝纤维化成人受试者中的功效，如通过在第1和2年的肝活组织检查中的形态定量胶原的变化所确定；在第1和2年评价组织纤维化阶段的变化(非酒精性脂肪性肝炎临床研究网络[NASH CRN]系统和Ishak)；在第1和2年评价肝组织纤维发生蛋白(α-平滑肌肌动蛋白[α-SMA])的变化；在第3、6、12、15、18和24个月评价非侵入性肝纤维化标记物(APRI、FIB-4、透明质酸、FibroTest(FibroSure)、NAFLD纤维化评分[NFS]和增强的肝纤维化试验[ELF])的相对于基线的变化；在第1和2年评价肝细胞细胞凋亡生物标记物的相对于基线的变化；在第3、6、12、15、18和24个月评价肝脏参数和空腹代谢参数的相对于基线的变化；在第3、6、12、15、18和24个月评价体重、BMI、腰围、腰臀比、臂围和三头肌皮褶的相对于基线的变化。
第三目标包括评价非侵入性肝成像方法(例如，超声瞬时弹性成像[TE]、二维磁共振弹性成像[MRE]、声辐射力脉冲[ARFI])在第6、12、18和24个月(在可用的部位)的相对于基线的变化；促炎性细胞因子和炎症生物标记物在第3、6、12、15、18和24个月的相对于基线的变化；肾小球滤过率估计值(eGFR)和肾参数在第3、6、12、15、18和24个月的相对于基线的变化；以及与细菌易位相关的生物标记物在第3、6、12、15、18和24个月的相对于基线的变化。
实施例18：对CVC联合疗法治疗纤维化的评价
该非临床研究旨在评价单独使用CVC或与FXR激动剂或PPAR-α和-δ激动剂联合治疗纤维化的治疗。简言之，CVC将单独(22周、8周和4周)或与FXR激动剂或PPAR-α激动剂同时联合施用四周。这项研究将在NASH的CDAA小鼠模型中进行。图43示出了将在本研究中使用的不同治疗组。
主要目标是比较用媒介物对照或CVC治疗野生型小鼠对比CCR2-/-小鼠(标准饲料对比CDAA饮食，经22周施用)。
次要目标将在仅接受CDAA饮食的小鼠中进行研究。我们将比较22周的CVC治疗与8周治疗(14到22周)和4周治疗(18到22周)。此外，我们将比较使用单独的CVC对比单独的FXR激动剂对比单独的PPAR-α和-δ对比CVC和FXR激动剂(GW 4064)对比CVC和PPAR-α激动剂(GW7647)进行的4周治疗(18到22周)。
本文中的详细说明描述了本发明的各个方面和实施方案，然而，除非另有规定，否则这些都无意为限制性的。事实上，已阅读本公开的本领域技术人员将预想到可以在不脱离本发明的范围和精神的情况下作出的变化、改变和调整，所有这些都应该被认为是本发明的一部分，除非另有规定。因此，申请人预想本文所描述的发明将仅受所附权利要求书限制。
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Claims (40)

1.一种治疗有需要的受试者中的纤维化或纤维化疾病或病状或病状的方法，其包括向所述受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；和一种或多种另外的活性剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述另外的活性剂选自由以下组成的组：GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、DPP-4抑制剂、Toll样受体4信号传导抑制剂、抗TGFβ抗体、噻唑烷二酮、PPAR亚型α和γ激动剂、法尼醇X受体激动剂和口服胰岛素敏化剂。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述另外的活性剂选自由以下组成的组：利拉鲁肽、卡格列净、阿拉格列汀、TAK-242、1D11、MSDC-0602、吡格列酮、奥贝胆酸(OCA)和罗格列酮。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述纤维化或纤维化疾病或病状是肝纤维化或肾纤维化。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物经配制成包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物和富马酸的药物组合物。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述肝纤维化与非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关。
7.如权利要求4所述的方法，其中所述肝纤维化与非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)相关。
8.如权利要求4所述的方法，其中所述肝纤维化与新发性肝硬化相关。
9.如权利要求4所述的方法，其中所述肝纤维化包括非硬化性肝纤维化。
10.如权利要求4所述的方法，其中所述受试者被人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述受试者患有选自由以下组成的组的疾病或病状：酒精性肝病、HIV和HCV共感染、病毒性肝炎(诸如HBV或HCV感染)、2型糖尿病(T2DM)、代谢综合征(MS)及其组合。
12.一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向所述受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；其中所述NASH与2型糖尿病(T2DM)相关；和一种或多种另外的活性剂；。
13.一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向所述受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；其中所述NASH与代谢综合征(MS)相关；和一种或多种另外的活性剂。
14.一种治疗有需要的受试者中的NASH的方法，其包括向所述受试者共施用治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；其中所述NASH与HIV和HCV共感染相关；和一种或多种另外的活性剂。
15.如权利要求12、13或14中任一项所述的方法，其中所述另外的活性剂选自由以下组成的组：GLP-1受体激动剂、SGLT2抑制剂、DPP-4抑制剂、Toll样受体4信号传导抑制剂、抗TGFβ抗体、噻唑烷二酮、PPAR亚型α和γ激动剂、法尼醇X受体激动剂和口服胰岛素敏化剂。
16.如权利要求12、13或14中任一项所述的方法，其中所述另外的活性剂选自由以下组成的组：利拉鲁肽、卡格列净、阿拉格列汀、TAK-242、1D11、MSDC-0602、吡格列酮、奥贝胆酸(OCA)和罗格列酮。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物经配制成口服组合物。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物每天施用一次或每天施用两次。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共施用包括同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述共施用进行一个或多个治疗周期。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述共施用进行1至24个治疗周期。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述治疗周期中的每一个包括约7天或更多天。
23.如权利要求20所述的方法，其中所述治疗周期中的每一个包括约28天或更多天。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共施用包括口服施用、肠胃外施用或其组合。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述肠胃外施用包括静脉内施用、动脉内施用、肌内施用、皮下施用、骨内施用、鞘内施用或其组合。
26.如权利要求24所述的方法，其中赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物口服施用；并且所述另外的活性剂口服或肠胃外施用。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共施用包括一个或多个治疗周期，并且每个治疗周期包括约28天。
28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共施用包括同时施用。
29.如权利要求28所述的方法，其中赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物与所述另外的活性剂同时共施用约28天或更久。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其包括检测纤维化或所述纤维化疾病或病状或病状经治疗的受试者中的一种或多种生物分子的水平，以及基于一种或多种生物分子的水平的升高或降低确定治疗方案，其中所述生物分子选自由以下组成的组：脂多糖(LPS)、LPs结合蛋白(LBP)、16S rDNA、sCD14、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、连蛋白-1、胶原1a1和3a1、TGF-β、纤连蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纤维蛋白原、MCP-1、MIP-1α和-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝细胞细胞凋亡的生物标记物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)及其组合。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其包括检测纤维化或所述纤维化疾病或病状或病状经治疗的受试者中的一种或生物分子的水平，其中一种或多种生物分子的水平相较于预定标准水平的升高或降低预测纤维化或所述纤维化疾病或病状的治疗功效，其中所述生物分子选自由以下组成的组：脂多糖(LPS)、LPs结合蛋白(LBP)、16SrDNA、sCD14、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、连蛋白-1、胶原1a1和3a1、TGF-β、纤连蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纤维蛋白原、MCP-1、MIP-1α和-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝细胞细胞凋亡的生物标记物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)及其组合。
32.如权利要求30或31所述的方法，其中所述一种或多种生物分子在来自纤维化或所述纤维化疾病或病状经治疗的受试者的生物样品中进行测量。
33.如权利要求34所述的方法，其中所述生物样品选自血液、皮肤、毛囊、唾液、口腔粘膜、阴道粘膜、汗液、泪液、上皮组织、尿液、精子、精液、精浆、前列腺液、预射精液(考珀液)、排泄物、活检物、腹水、脑脊液、淋巴、脑以及组织提取物样品或活检样品。
34.一种药物组合物，其包含治疗有效量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；和一种或多种另外的活性剂。
35.如权利要求34所述的药物组合物，其还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
36.如权利要求35所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂包含富马酸。
37.一种组合包装，其包含
(a)至少一个单独剂量的赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物；和
(b)至少一个单独剂量的一种或多种另外的活性剂。
38.如权利要求37所述的组合包装，其还包括提供用于共施用(a)和(b)的方案的说明书文件。
39.一种分配抗纤维化剂的方法，其包括将预定量的包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物的第一药物组合物组合预定量的包含至少一种或多种活性剂的第二药物组合物分配给受试者。
40.一种分布抗纤维化剂的方法，其包括将预定量的包含赛尼克韦罗或其盐或溶剂化物的第一药物组合物组合施用所述第一药物组合物的说明书与预定量的包含至少一种或多种活性剂的第二药物组合物分配给受试者。
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