CN108272829A - Pitpnc1在制备治疗胃癌的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于基因和蛋白的功能与应用领域，涉及磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1(phosphatidylinositol transfer protein cytoplasmic 1,PITPNC1)的新用途，特别是涉及PITPNC1在制备治疗胃癌的药物中的应用。本发明证实了沉默PITPNC1慢病毒转染对胃癌细胞网膜转移的抑制性。本发明为研究抑制胃癌网膜转移的新靶点和新策略提供了理论依据和临床基础。

Description

PITPNC1在制备治疗胃癌的药物中的应用

技术领域

本发明属于基因和蛋白的功能与应用领域，涉及磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1(PITPNC1)的新用途，特别是涉及PITPNC1在制备治疗胃癌的药物中的应用。

背景技术

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率与死亡率均位列我国各类肿瘤前三位[Chen,W.,et al.,Cancer statistics in China,2015.CA Cancer J Clin,2016.66(2):p.115-32.]，整体治疗效果及预后较差。网膜转移是胃癌常见的转移方式和特征性表现，是胃癌患者预后不良的重要因素之一，深入研究其机制对改善患者预后具有重要意义。胃癌早期诊断率低，网膜转移后失去根治手术机会，预后较差，寻找有效的抑制网膜转移的药物可改善患者预后，目前缺乏有效的用药靶点。

胃癌发生网膜种植性转移是一个多阶段、多因素参与的复杂过程。其基本步骤包括：原发灶癌细胞脱落进入腹腔；脱落癌细胞抵抗失巢凋亡；癌细胞黏附大网膜，增殖侵袭，新生血管形成，发展成转移癌结节。可见抵抗失巢凋亡、具备黏附功能是大网膜转移灶形成的必要条件。肿瘤细胞抵抗失巢凋亡的机制研究涉及整合素转变、抗凋亡通路激活、上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及非编码RNA调控等多个领域，而失巢后的肿瘤细胞通过能量代谢重组增加抵抗凋亡的能力成为近年来研究热点。研究表明，脱离细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的肿瘤细胞因葡萄糖摄取减少激活AMPK(Adenosine 5‘-monophosphate(AMP)-activated protein kinase)，抑制乙酰辅酶A羧化酶1/2(acetyl-CoA carboxylases 1and 2,ACC1/2)从而减少因脂肪酸合成消耗的NADPH((Reduced)Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate)，促进脂肪酸β氧化增加NADPH产生，避免肿瘤细胞发生失巢凋亡[Paoli,P.,E.Giannoni,and P.Chiarugi,Anoikismolecular pathways and its role in cancer progression.Biochim Biophys Acta,2013.1833(12):p.3481-3498.]。可见对于失巢后的肿瘤细胞，脂肪酸氧化在其代谢重组以维持生存及促进转移发生过程中具有重要作用。就胃癌网膜转移而言，网膜脂肪细胞在网膜转移过程中可能有重要作用：已有研究发现，转移灶中的脂肪细胞可为肿瘤细胞提供能源物质，促进肿瘤细胞代谢重组和定植；与脂肪细胞共培养的胃癌细胞脂肪酸摄取增加，脂肪酸分解代谢加强，通过PI3K-Akt通路上调侵袭能力[Xiang,F.,et al.,Omentaladipocytes enhance the invasiveness of gastric cancer cells by oleic acid-induced activation of the PI3K-Akt signaling pathway.Int J Biochem Cell Biol,2017.84:p.14-21.]。然而，网膜脂肪细胞是否可通过促进胃癌细胞脂肪酸β氧化从而诱导抵抗失巢凋亡仍不明确。

磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1(phosphatidylinositol transfer proteincytoplasmic 1,PITPNC1)是一个新发现的参与高尔基体分泌的蛋白[Halberg,N.,et al.,PITPNC1Recruits RAB1B to the Golgi Network to Drive MalignantSecretion.Cancer Cell,2016.29(3):p.339-53.]，与肿瘤转移相关[Png,K.J.,et al.,AmicroRNA regulon that mediates endothelial recruitment and metastasis bycancer cells.Nature,2011.481(7380):p.190-4.]，具有结合与转运磷脂酸的能力，可维持细胞内膜系统间的磷脂酰肌醇循环，进而维持细胞内膜系统的稳定及细胞第二信使功能的正常进行[Garner,K.,et al.,Phosphatidylinositol transfer protein,cytoplasmic1(PITPNC1)binds and transfers phosphatidic acid.J Biol Chem,2012.287(38):p.32263-76.]。而关于此磷脂酸转运蛋白在网膜脂肪细胞诱导胃癌细胞抵抗失巢凋亡过程中的作用未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1(phosphatidylinositoltransfer protein cytoplasmic 1,PITPNC1)的新用途，具体是PITPNC1的表达调控物在制备治疗胃癌的药物中的应用。

根据本发明所述的应用的进一步特征，所述PITPNC1的表达调控物是PITPNC1的抑制剂。优选地，所述PITPNC1的抑制剂是含PITPNC序列的shRNA的慢病毒。

根据本发明所述的应用的进一步特征，所述治疗胃癌的药物是抑制胃癌网膜转移的药物。

在本发明中，发明人对111例胃癌患者的石蜡组织标本进行PITPNC1免疫组化(immunohistochemistry,IHC)表达量评估，并在功能学实验中探索脂肪细胞对胃癌细胞的黏附、抵抗失巢凋亡功能的影响。在机制挖掘层面，发明人检测了与脂肪细胞共培养后胃癌细胞脂肪酸摄取水平及β氧化水平，并针对PITPNC1调控胃癌细胞脂质代谢、黏附及抵抗失巢凋亡的分子机制进行研究。综合有关实验结果表明，PITPNC1的表达水平与胃癌网膜转移相关，参与胃癌细胞脂质代谢从而诱导黏附及抵抗失巢凋亡。故确定PITPNC1检测可以有效预测胃癌患者预后，可以将PITPNC1的表达调控物应用于制备治疗胃癌的药物，特别是将PITPNC1的抑制剂用于制备抑制胃癌网膜转移的药物。

本发明构造了含PITPNC序列的shRNA的慢病毒，获得了PITPNC1稳定沉默的细胞株。实验结果表明，沉默PITPNC1的胃癌细胞的脂肪酸β氧化速率明显降低，细胞黏附功能明显下降，失巢凋亡增加，明显的证实了沉默PITPNC1慢病毒转染对胃癌细胞网膜转移的抑制性。

本发明首次揭示了在胃癌中，肿瘤细胞可通过脂肪酸β氧化利用网膜脂肪细胞来源的脂肪酸；首次证实网膜脂肪细胞可以增加胃癌细胞黏附能力，诱导抵抗失巢凋亡；首次发现PITPNC1在网膜转移胃癌病灶中的特异性表达，并提供PITPNC1作为抑制胃癌网膜转移的药物靶标。总的来说，PITPNC1是介导胃癌网膜转移的重要分子，其通过促进胃癌细胞以脂肪酸β氧化途径利用网膜细胞来源的脂肪酸，增加了胃癌细胞黏附能力和失巢凋亡抵抗。因此，可以认为，沉默PITPNC1有可能成为抑制胃癌网膜转移的重要手段之一。因此，本发明为研究抑制胃癌网膜转移的新靶点和新策略提供了理论依据和临床基础。

附图说明

图1A是从8例癌旁组织及胃癌组织的手术标本所提取的PITPNC1蛋白的蛋白质印迹杂交(Western blot，WB)代表图(N：正常胃黏膜；C：同一病人胃癌组织；P：患者)。

图1B是2例癌旁组织、胃癌组织及网膜转移灶所提PITPNC1的蛋白的WB代表图(N：正常胃黏膜；C：同一病人胃癌组织；M：同一病人胃癌网膜转移组织)。

图1C是111例癌旁组织、胃癌组织及网膜转移灶的PITPNC1免疫组化染色代表图。放大倍数：200倍(上)、400倍(下)。

图1D是免疫组化检测PITPNC1在胃癌组织与癌旁组织表达量差异的结果统计图。

图1E是11例免疫组化检测PITPNC1在胃癌组织与网膜转移灶表达量差异的结果统计图。

图1F和图1G是根据PITPNC1免疫组化评分分组后，胃癌患者的预后分析的Kaplan-Meier曲线图，图1F为总生存(Overall survival，OS)，图1G为无进展生存期(Progression-Free-Survival，PFS)。

图1H是将患者按TNM分期、临床分期、是否死亡、是否复发分组后不同组别中阴性、弱阳性、强阳性PITPNC1表达水平频数示意图。

图1I是根据TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中PITPNC1表达量高低分组后，胃癌患者的预后分析的Kaplan-Meier曲线图，作图软件：Graphpad Prism 5。

图1J和图1K是裸鼠腹腔注射过表达PITPNC1的胃癌细胞株后小鼠活体成像代表图及网膜转移代表图。

图2A是人大网膜脂肪组织来源脂肪细胞在光镜下(左)和油红染色(右)的形态，放大倍数：100倍。

图2B是光镜下悬浮培养的BGC823、AGS，或分别与脂肪细胞共培养后d0、d3、d6、d9的成球能力，放大倍数：100倍。

图2C是悬浮培养的BGC823、AGS分别与脂肪细胞共培养后，结晶紫染色粘附细胞。

图2D是MTT方法检测悬浮培养的BGC823、AGS细胞分别与脂肪细胞共培养后的细胞粘附率。

图2E是悬浮培养的BGC823、AGS分别与脂肪细胞共培养后，WB检测肿瘤细胞内凋亡指标改变。

图2F是BGC823、AGS分别与脂肪细胞共培养后失巢凋亡检测，其中活细胞(绿色荧光)，凋亡细胞(红色荧光)放大倍数：200。

图3A是MTT方法检测悬浮培养的BGC823、AGS细胞分别与脂肪细胞共培养后的失巢凋亡率。

图3B至图3D分别是悬浮培养的BGC823、AGS分别与脂肪细胞共培养后添加CPT1抑制剂依托莫司的脂肪酸氧化速率、ROS(流式细胞仪检测)、ATP差异。

图3E是悬浮培养的BGC823、AGS分别与脂肪细胞共培养后，WB检测肿瘤细胞内脂肪酸β氧化限速酶肉碱脂酰转移酶I(carnitine palmityl transferase，CPT1B)表达改变。

图4A是与脂肪细胞共培养后BGC823、AGS内PITPNC1表达量的免疫荧光(Immunofluorescence，IF)检测代表图。

图4B-4D分别是悬浮培养的BGC823、AGS予过表达、沉默PITPNC1、过表达PITPNC1加CPT1抑制剂依托莫司处理后检测脂肪酸B氧化速率差异、ROS(流式细胞仪检测)、ATP差异。

图4E是悬浮培养的BGC823、AGS予过表达、沉默PITPNC1、过表达PITPNC1加CPT1抑制剂依托莫司处理后，结晶紫染色粘附细胞。

图4F是MTT方法检测悬浮培养的BGC823、AGS细胞予过表达、沉默PITPNC1、过表达PITPNC1加CPT1抑制剂依托莫司处理后的细胞粘附率。

图4G是悬浮培养的BGC823、AGS细胞予过表达、沉默PITPNC1、过表达PITPNC1加CPT1抑制剂依托莫司处理后失巢凋亡检测，其中活细胞(绿色荧光)，凋亡细胞(红色荧光)放大倍数：200。

图4H是MTT方法检测悬浮培养的BGC823、AGS细胞予过表达、沉默PITPNC1、过表达PITPNC1加CPT1抑制剂依托莫司处理后的失巢凋亡率。

图4I是悬浮培养的BGC823、AGS予过表达、沉默PITPNC1处理后，WB检测凋亡指标、脂肪酸β氧化限速酶CPT1表达改变。

图4J是悬浮培养的AGS予两种CPT1抑制剂(Etomoxir依托莫司、Ranolazine)处理后WB检测凋亡指标、脂肪酸β氧化限速酶CPT1表达改变。

图5是质粒pLKD-U6-shRNA-EF1a-LUC-F2A-Puro的图谱。

具体实施方式

实施例一：PITPNC1在胃癌组织中高表达，与网膜转移转移相关，提示胃癌患者不良预后。

收集8例新鲜胃癌患者手术标本，WB检测可见，PITPNC1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织(图1A)。其中有两例患者存在网膜转移灶，WB及qPCR检测可见，PITPNC1在网膜转移灶表达高于原位胃癌组织，高于正常胃黏膜组织(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)(图1B)。

使用免疫组化法(IHC)对111例胃癌患者的石蜡组织标本进行PITPNC表达量评估，其中11例有网膜转移灶石蜡组织标本。结果显示，PITPNC1在胃癌网膜转移灶表达显著高于原位胃癌组织(***P<0.001)(图1C、E)且高于癌旁正常组织(****P<0.0001)(图1C、D)。

根据PITPNC1染色深度，所有患者被分成3组，分别是阴性组(0～2分)、弱阳性组(3～5分)、强阳性组(大于5分)。在111例胃癌患者中，总共有87例为PITPNC1阳性，相较于24例阴性患者，阳性病例占有显著多数。而在87例阳性病例中，43例为弱阳性，44例为强阳性。

使用Kaplan-Meier生存曲线评估PITPNC1表达与111例胃癌患者预后的影响，发现PITPNC1强阳性组对比弱阳性及阴性组患者具有较短的OS(图1F)及PFS(图1G)。

把所有患者分别按T分期、N分期、M分期及临床分期(TNM总分期)、是否死亡或复发分组，本发明发现，PITPNC1的表达与T分期(P<0.01)、N分期(P<0.01)、M分期(P<0.0001)及TNM总分期(P<0.0001)相关，各个分期中PITPNC1表达水平分组频数如图所示(*P<0.05，**P<0.01，****P<0.0001)(图1H)。

TCGA数据库分析得到类似的结果，PITPNC1高表达患者较低表达患者有较短的OS及PFS(图1I)。

将过表达PITPNC1且用荧光素酶基因标记的胃癌细胞株BGC823以1.0*10^7数量腹腔注入4周龄裸鼠体内，注射1周后行活体成像，结果可见PITPNC1过表达组相对于空载对照组的腹腔转移灶数量及体积较大(图1J)，网膜转移灶较多(图1K)，说明PITPNC1促进胃癌细胞网膜转移。

根据上述的临床观察结果，本发明认为PITPNC1在胃癌中主要参与了网膜转移相关过程，致使患者不良预后。然而，PITPNC1的高表达是否与网膜脂肪细胞相关尚不明确。因此，本发明在后续的实验中用脂肪细胞与胃癌细胞共培养，观察胃癌细胞的功能变化及与PITPNC1的关系。

实施例二：网膜来源脂肪细胞可提高胃癌细胞黏附能力，诱导失巢凋亡抵抗。

为了探究网膜中富含的脂肪细胞对胃癌细胞的作用，本发明分离提取了良性病变患者手术标本内的网膜脂肪细胞，油红染色检测脂肪细胞浓度(图2A)。在BGC823和AGS两株人胃癌细胞株中均可见到，与脂肪细胞共培养可显著增加肿瘤细胞克隆形成能力(图2B)、黏附能力(图2C-D)(**P<0.01，***P<0.001)。

胃癌细胞发生网膜转移，除了需要较强的黏附和增殖能力，抵抗失巢凋亡是转移成功的重要前提。本发明证实，与脂肪细胞共培养后，悬浮培养的胃癌细胞失巢凋亡发生明显减少(图2F)，WB检测可见，脂肪细胞可增加肿瘤细胞脂肪酸转运蛋白CD36表达，抗凋亡蛋白Bcl-2明显增加，凋亡指标Bax明显减少(图2E)，可见网膜脂肪细胞诱导胃癌细胞抵抗失巢凋亡。

上述实验在现象层面证明，网膜来源脂肪细胞可提高胃癌细胞黏附能力，诱导胃癌细胞失巢凋亡抵抗。

实施例三：脂肪细胞通过促进胃癌细胞脂肪酸β氧化，提高胃癌细胞黏附能力，诱导失巢凋亡抵抗。

在卵巢癌中有研究证明，脂肪细胞可以促进卵巢癌细胞内脂解作用及脂肪酸β氧化[7]。故为了明确网膜脂肪细胞对胃癌细胞的作用机制，本发明检测了脂肪酸β氧化在脂肪细胞对胃癌细胞黏附能力，失巢凋亡抵抗的促进作用中的影响。MTT法检测细胞失巢凋亡实验结果显示，悬浮培养的胃癌细胞与脂肪细胞共培养后可明显降低肿瘤细胞失巢凋亡发生率，予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可抵消共培养时失巢凋亡抵抗现象(图3A)(*P<0.05，**P<0.01)。

脂肪酸β氧化速率检测证实，与脂肪细胞共培养的悬浮胃癌细胞对比单独悬浮培养的胃癌细胞脂肪酸β氧化速率明显增加，同时予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显回复悬浮胃癌细胞脂肪酸β氧化速率(图3B)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

流式细胞仪检测肿瘤细胞ROS水平可见，与脂肪细胞共培养的悬浮胃癌细胞ROS产生明显下降，予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显增加肿瘤细胞ROS产生(图3C)(**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

ATP检测发现，脂肪细胞可显著促进胃癌细胞ATP产生，但予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显回复升高的ATP(图3D)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

WB实验发现，与脂肪细胞共培养的悬浮培养的胃癌细胞的脂肪酸β氧化限速酶CPT1B表达明显增加，同时，PITPNC1表达也增加(图3E)。

因此，可以推断，脂肪细胞通过促进胃癌细胞脂肪酸β氧化，提高胃癌细胞黏附能力，诱导失巢凋亡抵抗。

实施例四：PITPNC1通过促进胃癌细胞脂肪酸β氧化，促进黏附和抵抗失巢凋亡。

在前一部分实验中，已经证明了脂肪细胞通过促进胃癌细胞脂肪酸β氧化，提高胃癌细胞黏附能力，诱导失巢凋亡抵抗。在调控脂质代谢的分子中，发现悬浮的胃癌细胞与脂肪细胞共培养后，其PITPNC1表达增加(图3E)，所以在本部分实验中，使用了慢病毒转染的方法制备了稳定过表达及或沉默PITPNC1的胃癌细胞株，探究PITPNC1在脂肪细胞对胃癌细胞功能调控中的介导作用。

本发明构造了含PITPNC序列的shRNA的慢病毒。shRNA购自上海的Obiotechnonogy和元生物技术股份有限公司，以感染复数200转染BGC823及AGS两株胃癌细胞。经1μg/mL嘌呤霉素筛选2周后，经过WB验证获得PITPNC1稳定沉默的细胞株。

Sh-PITPNC1载体：pLKD-U6-shRNA-EF1a-LUC-F2A-Puro，质粒图谱见图5。

用Age I和EcoR I酶切去U6启动子下游的ccdB毒性基因，插入待构建的shRNA序列。

对照质粒，含有ccdB毒性基因，其序列为：

CCGGCAACAAGATGAAGAGCACCAACTCGAGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTTT

shPITPNC1质粒：含有插入的PITPNC1序列，其序列为：

CCGGCGGGTGTATCTCAACAGCAAACTCGAGTTTGCTGTTGAGATACACCCGTTTTTG

采用免疫荧光检测与脂肪细胞共培养后，胃癌细胞的PITPNC1表达显著增加(图4A)。

脂肪酸β氧化速率检测证实，过表达PITPNC1的胃癌细胞，脂肪酸β氧化速率明显增加，但同时予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显回复增加的脂肪酸β氧化速率，沉默PITPNC1的胃癌细胞的脂肪酸β氧化速率明显降低(图4B)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)。

流式细胞仪检测肿瘤细胞ROS水平可见，过表达PITPNC1的胃癌细胞ROS产生明显下降，予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显增加肿瘤细胞ROS产生，沉默PITPNC1的胃癌细胞的ROS产生也增加(图4C)(**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

ATP检测发现，PITPNC1可显著促进胃癌细胞ATP产生，但予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显回复升高的ATP，沉默PITPNC1可显著降低ATP产生(图4D)(**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

黏附实验证明，PITPNC1可显著促进胃癌细胞的黏附功能，予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显回复，沉默PITPNC1可显著降低其黏附功能(图4E、F)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。

失巢凋亡检测发现，PITPNC1可减少悬浮胃癌细胞的失巢凋亡发生，予ETX抑制肿瘤细胞的脂肪酸β氧化可明显增加失巢凋亡(图4G、H)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)。

WB实验发现，过表达PITPNC1的胃癌细胞脂肪酸β氧化限速酶CPT1B表达明显增加，抗凋亡指标Bcl-2明显增加，凋亡指标Bax明显减少，沉默后发生相反改变(图4I)，予CPT1B抑制剂ETX或Ranolazine均可回复脂肪酸β氧化速率的增加及失巢凋亡抵抗作用(图4J)。

至此，本发明证实了网膜脂肪细胞通过诱导胃癌细胞PITPNC1表达，促进胃癌细胞黏附，抵抗失巢凋亡，最终促进胃癌细胞网膜转移。

综上所述，本发明首次确认PITPNC1作为胃癌网膜转移生物标志物的药物靶点及病理学意义。PITPNC1高表达预示了胃癌患者较差的预后及网膜转移风险增加。因此，本发明进一步研究了在此过程中可能涉及的相关分子机制。本发明证明了网膜脂肪细胞对胃癌细胞黏附及失巢凋亡抵抗的诱导功能，且是通过诱导PITPNC1的表达，促进胃癌细胞的脂肪酸β氧化而实现的。

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，在肿瘤相关性死亡中居第二位[VanCutsem,E.,et al.,Gastric cancer.Lancet,2016.388(10060):p.2654-2664.]。胃癌早期症状不明显，超过2/3的胃癌患者诊断时已是晚期，而晚期胃癌的5年生存率仅20-30％[Shi,W.J.and J.B.Gao,Molecular mechanisms of chemoresistance in gastriccancer.World Journal of Gastrointestinal Oncology,2016.8(9):p.673-681.]。其中，网膜转移患者失去根治手术机会，预后更差。

此前已有报道，网膜脂肪细胞可以为卵巢癌细胞提供能量促进肿瘤细胞生长和网膜转移[Nieman,K.M.,et al.,Adipocytes promote ovarian cancer metastasis andprovide energy for rapid tumor growth.Nat Med,2011.17(11):p.1498-503.]。在胃癌中网膜脂肪细胞可通过分泌油酸，激活胃癌细胞PI3K-Akt通路促进侵袭[Xiang,F.,etal.,Omental adipocytes enhance the invasiveness of gastric cancer cells byoleic acid-induced activation of the PI3K-Akt signaling pathway.Int J BiochemCell Biol,2017.84:p.14-21.]。硫酸葡聚糖可通过抑制胃癌细胞HIF-1α表达，减少ITGβ1表达从而抑制胃癌腹膜转移[Xu,Y.,et al.,Inhibition of peritoneal metastasis ofhuman gastric cancer cells by dextran sulphate through the reduction in HIF-1alpha and ITGbeta1expression.Oncol Rep,2016.35(5):p.2624-34.]。在乳腺癌细胞中，脂肪酸β氧化可帮助抵抗失巢凋亡[Carracedo,A.,et al.,A metabolic prosurvivalrole for PML in breast cancer.J Clin Invest,2012.122(9):p.3088-100.]。但在网膜转移复杂的发生过程中，脂肪细胞是否通过其他机制进一步促进胃癌发生网膜转移？其中的机制是否可预测网膜转移发生及预测患者预后，仍有待发现和利用。

本发明证实，网膜脂肪细胞可上调胃癌细胞PITPNC1表达，从而促进胃癌细胞脂肪酸β氧化供能，增强其黏附能力，抵抗失巢凋亡。临床数据方面，可见网膜转移灶PITPNC1显著高表达，PITPNC1高表达与网膜转移显著相关，且PITPNC1预示患者较差的临床分期和较短的OS及PFS。总的来说，本发明的实验室研究成果较好的证明，PITPNC1可作为预测胃癌不良预后及发生网膜转移的指标，是抑制胃癌网膜转移的药物靶标，有良好的应用前景和开发空间，是广大胃癌网膜转移患者的值得期待的研究与发明。

Claims (4)

1.磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1(phosphatidylinositol transfer proteincytoplasmic1,PITPNC1)的表达调控物在制备治疗胃癌的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述PITPNC1的表达调控物是PITPNC1的抑制剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述PITPNC1的抑制剂是含PITPNC序列的shRNA的慢病毒。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述治疗胃癌的药物是抑制胃癌网膜转移的药物。