CN108254514A

CN108254514A - 一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法

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Publication number: CN108254514A
Application number: CN201611232761.5A
Authority: CN
Inventors: 史先蓉; 苏丹; 王利春; 王晶翼
Original assignee: Sichuan Kelun Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Sichuan Kelun Pharmaceutical Research Co Ltd; Sichuan Kelun Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2016-12-28
Filing date: 2016-12-28
Publication date: 2018-07-06

Abstract

本发明公开了一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法，所述脂肪乳类注射液包含油脂类成分，它包括以下步骤：(1)取待测样品，加入无机盐溶液作为破乳剂，有机溶剂萃取，取有机层；(2)室温真空旋蒸除去有机溶剂，测定残留物的过氧化值。本发明的方法通过破乳、有机溶剂萃取、获得油脂类成分，解决了样品的溶解性问题，并能对油脂类成分中的过氧化物进行准确测定，且方法的重现性较好。同时，本发明方法在不加热的条件下制备，避免了样品因加热导致加速氧化而造成测定结果偏高的问题。方法准确性高，有效监控了脂肪乳注射液的过氧化值，增加药品的安全性和有效性。

Description

一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法

技术领域

本发明涉及制剂的检测方法，具体涉及一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法。

背景技术

脂肪乳类注射液中的油脂，会在氧存在下生成过氧化物。然而，这些过氧化物很不稳定，可继续分解成醛、酮、酸等破坏人体细胞膜的正常生理功能小分子化合物，从而诱导疾病的发生和发展。因此，有必要对脂肪乳类注射液的过氧化值进行检测，得知其中过氧化物的含量，从而有效监控脂肪乳类注射液的质量，保障用药的安全性和有效性。

目前，现有脂肪乳类制剂中过氧化值测定方法主要有直接测定法、旋蒸法和冻干法，详见中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》和《丙泊酚乳状注射液质量标准》(征求意见稿)。

对于直接测定法而言，脂肪乳注射剂溶解在冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)溶剂中，需使用大量有机溶剂，其终点不易判定，导致测定结果不准确，方法的重现性差。过多使用有机溶剂也增加检测成本，且污染环境。

旋蒸法测定时，采用60℃水浴真空旋转蒸发除去水分，温度高且旋转时间过长可能导致油脂类的物质继续降解产生过氧化值，导致测定结果偏离真实值，过氧化值超限度。同样不能真实反映出制剂中的过氧化物含量。

对于冻干法而言，其冻干时间过长，也不易完全除水，并且冻干需要专门设备，导致该方法性价比不高。

因此，针对现有技术存在的种种缺陷，有必要探索出一种更加准确、快速、低成本的测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法，其特征在于：所述脂肪乳类注射液包含油脂类成分，它包括以下步骤：

(1)取待测样品，加入无机盐溶液作为破乳剂，有机溶剂萃取，取有机层；

(2)室温真空旋蒸除去有机溶剂，测定残留物的过氧化值。

进一步地，所述无机盐的阳离子为碱金属离子，无机盐的阴离子为氯离子、磷酸根离子、磷酸一氢根离子或磷酸二氢根离子。

进一步地，所述无机盐选自NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、KCl、KH₂PO₄和K₂HPO₄中的任一种或多种，优选为Na₂HPO₄或KCl。

进一步地，所述破乳剂体积与待测样品中油脂类成分质量之比为0.25mL:1g～5mL:1g；进一步优选为2.5mL:1g。

进一步地，步骤(1)中，所述有机溶剂为乙醚。

进一步地，所述乙醚与待测样品的体积(mL)比为2:1，萃取的次数为1-5次，优选3次。

进一步地，步骤(2)中，所述测定残留物过氧化值的方法包括以下步骤：

取残留物，溶剂溶解，在酸性条件下，加入碘化钾反应，用硫代硫酸钠溶液滴定生成的碘，根据硫代硫酸钠的用量计算得到过氧化值。

进一步地，所述溶剂为体积(mL)比为3∶2的冰醋酸-三氯甲烷。

进一步地，所述溶剂体积与待测样品中油脂类成分质量之比为15mL:1g。

进一步地，所述碘化钾为饱和碘化钾溶液，该饱和碘化钾溶液体积与待测样品中油脂类成分质量之比为0.25mL:1g。

进一步地，所述脂肪乳类注射液中油脂类成分为0.1g/mL～0.2g/mL。

进一步地，所述脂肪乳类注射液为前列地尔注射液、中长链脂肪乳注射液、脂肪乳注射液、环孢素脂肪乳注射液、丙泊酚脂肪乳注射液、鱼油脂肪乳注射液或多西他赛脂肪乳注射液。

本发明的方法通过破乳、有机溶剂萃取、获得油类和脂质物，油类和脂质物在冰乙酸-三氯甲烷(3:2)混合液中溶解性较好，解决了样品的溶解性问题，并能对油类与脂质物中的过氧化物进行准确测定，且方法的重现性较好。

同时，本发明方法在不加热的情况下，破乳提取油脂，既能测得过氧化值，也避免了样品在制备过程中因加热使其加速氧化造成测定结果偏高的问题，与现有方法相比，本发明的方法准确性高，有效监控了脂肪乳注射液的过氧化值，增加药品的安全性和有效性。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明的方法

量取适量脂肪乳注射液，置于分液漏斗中，加入无机盐溶液破乳。加入乙醚萃取乳剂，剧烈振摇，静置分层，收集乙醚层(油相层)。可用乙醚多次萃取水相层。合并乙醚层(油相层)，用旋转蒸发仪室温真空旋转蒸干，取残留物加入冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)(两种试剂临用前通入氮气或二氧化碳除去溶解氧)，轻轻振摇使之溶解，即得供试品溶液。加入饱和碘化钾反应，密塞，振摇，加新沸过的冷水与淀粉指示液，立即用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失，根据硫代硫酸钠的用量计算得到过氧化值。并将滴定的结果用空白试验校正。

按中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》计算脂肪乳注射液的过氧化值，如下式：

过氧化值＝(V₁－V₀)×C×1000/(V×L)

式中，V₁为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)的体积，mL；

V₀为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)的体积，mL；

C为硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)的浓度，mol/L；

V为供试品的取样量，mL；

L为油脂类物质的标示量，g/mL。

实施例2本发明方法的工艺筛选

①直接破乳

取[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]10mL，置于分液漏斗中。加入饱和无机盐破乳剂，振摇，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟，加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失。由表1可知，脂肪乳注射液采用直接破乳剂但不萃取的方法测定过氧化值，仅有选用氯化钾作为破乳剂的供试液滴定显蓝紫色；

②破乳后萃取

取[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]10mL，置于分液漏斗中。加入饱和无机盐破乳剂，再加20mL乙醚萃取，振摇，静置分层。水相层转移至另一分液漏斗，用40mL乙醚萃取，合并有机相层，并用旋转蒸发仪在室温下浓缩。取有机相加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，轻轻振摇使溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟，加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失。另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。选用不同的无机盐作为破乳剂，同法操作，消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)的体积如表1所示。

表1破乳剂的筛选结果

由表1可知，采用破乳后萃取的方法测定过氧化值，供试液颜色变化敏锐，不同破乳剂萃取液消耗滴定液体积基本一致。观察萃取过程的试验现象，供试液呈3种分层现象：供试液上下两层均澄清；供试液上层澄清、下层浑浊(氯化钾)；供试液上层澄清、中间层浑浊、下层澄清。其中，由于上层澄清、下层浑浊易观察和分液，故选用氯化钾或磷酸二氢钠作为破乳剂效果最佳。

③破乳剂加入量的筛选

取[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]10mL*6份，分别加入饱和氯化钾0.5～10mL，用乙醚20mL萃取，振摇，静置分层。将水相层转移至第二个分液漏斗中，用40mL乙醚萃取，弃去水相层，收集有机层除去乙醚溶剂，残留物加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL(两种试剂临用前通入氮气或二氧化碳除去溶解氧)，振摇使溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟，加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，结果见表2。

表2破乳剂加入量的筛选结果

试验结果表明，加入破乳剂的量0.5～10mL对测定结果均无影响，加入5mL时下层溶液粘度减小，且分层更明显，因此确定加入破乳剂的体积为5mL。

④萃取次数的筛选

取[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]10mL*5份，分别加入饱和氯化钾5mL，用乙醚20mL萃取，振摇，静置分层。将水相层转移至第二个分液漏斗中，自“加乙醚20mL”起依次萃取不同的次数，弃去水层，收集有机层除去乙醚，残留物加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL(两种试剂临用前通入氮气或二氧化碳除去溶解氧)，振摇使溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟，加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。结果见表3。

表3萃取次数的筛选结果

试验结果表明萃取次数2～5测得结果基本一致，为保证方法的耐用性准确性故选择萃取次数定为3次。

⑤多次重复性实验

分别量取6份[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]，置6个分液漏斗中，每份溶液10mL。分别加入氯化钾饱和溶液5mL，用20mL乙醚萃取，振摇，静置分层。用乙醚萃取水相层，合并乙醚层(有机相层)，用旋转蒸发仪在室温下浓缩。在6份残留物中分别加入冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，振摇使溶解，并加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟。分别加入新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失。另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。根据各供试品所消耗硫代硫酸钠的用量，按中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》计算脂肪乳注射液的过氧化值。

测得6份供试品的过氧化值分别为：0.87、0.85、0.88、0.85、0.88、0.89。

实施例3本发明方法与现有技术方法的比较实验

在现有技术方法中，选择直接测定法和旋蒸法，与本发明方法进行对比实验。供试待测品选用放置6个月的脂肪乳注射液[20％脂肪乳(OO)/10％氨基酸(15)/葡萄糖(40％)电解质注射液中20％脂肪乳(OO)腔室]，放置温度为25度或30度。三种方法实验步骤操作如下：

直接测定法：取供试待测品10mL，置250mL碘瓶中，加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)60mL，振摇使溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，继续振摇1分钟，加新沸过的冷水100mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至上层水相紫色消失；另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)60mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。按照中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》收录方法计算供试待测品的过氧化值。

旋蒸法：取供试待测品10mL，加无水乙醇20mL，于60℃水浴减压旋转蒸发除去水分。加冰乙酸-三氯甲烷(3:2)混合液30mL使残留物溶解。加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟，加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至上层水相紫蓝色消失。另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。按照中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》收录方法计算供试待测品的过氧化值。

本发明方法：取供试待测品10mL，置分液漏斗中。加氯化钾饱和溶液5mL和乙醚20mL，振摇萃取，静置分层，分离有机相，水相重复萃取两次。合并有机相乙醚层。用旋转蒸发仪在室温下浓缩。残留物加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，振摇使之溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟。加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至上层水相紫色消失；另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。按照中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》收录方法计算供试待测品的过氧化值。

三种方法各进行五组供试待测品的测定，结果如下：

直接测定法中，五组消耗的硫代硫酸钠滴定液的体积经过空白试验校正后为零，计算过氧化值为零；

旋蒸法和本发明方法所测定供试待测品的过氧化值数据见表4和表5所示：

表4旋蒸法测定供试待测品的过氧化值

供试待测品	第1组	第2组	第3组	第4组	第5组
						过氧化值	20.82	19.17	20.20	22.27	21.24

表5本发明方法测定供试待测品的过氧化值

供试待测品	第1组	第2组	第3组	第4组	第5组
						过氧化值	0.98	0.89	0.91	1.09	0.95

结果分析：

供试待测品通过直接测定方法检出的过氧化值为零；通过旋蒸法检出的过氧化值在19～23之间；通过本发明方法检出的过氧化值在0.8～1.1之间。

在脂肪乳注射液的实际生产和使用过程中，即使采取必要的隔绝氧措施，仍不可能使脂肪乳注射液完全处于绝对无氧条件。所以脂肪乳注射液中油脂在氧存在环境下暴露，发生氧化生成过氧化物是必然存在的。药典规定，脂肪乳注射液中过氧化值应不高于6。由于脂肪乳注射液中的过氧化物会进一步氧化生成的醛、酮化合物，对使用者产生副作用，因此在实际生产和存储过程中，需要保持脂肪乳注射液的过氧化值在尽可能低的水平。

由于上述种种原因，在实际检测过程中，脂肪乳注射液中客观存在的过氧化值可能检测不出或者检测值大于实际值。当脂肪乳注射液中过氧化值检测不出时，实际存在注射液中的过氧化物不能被监控，对使用者不利；当脂肪乳注射液中过氧化值在检测时的检测值大于实际值时，不利于生产者的合法运营。所以，脂肪乳注射液中客观存在的过氧化值需要准确的测定出来。

在本实验中，客观的比较了本发明方法与现有技术的直接测定法和旋蒸法对于过氧化值的检测，供试待测品通过直接测定方法检出的过氧化值为零，不能有效检出供试待测品过氧化值；供试待测品通过旋蒸法检出的过氧化值在19～23之间，大大高于药典规定的上限值，在实际生产和存贮过程采取了严格的隔绝氧措施条件下，过氧化值已超异常；供试待测品通过本发明方法检出的过氧化值在0.8～1.1之间，能准确有效的检出供试待测品的实际过氧化值。

实施例4多种脂肪乳注射液过氧化值的测定

取前列地尔注射液(OO)10mL、中长链脂肪乳注射液(C8-24)10mL、脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(19％)注射液中脂肪乳腔室10mL、脂肪乳(10％)氨基酸(15)葡萄糖(20％)注射液中脂肪乳(10％)腔室10mL、环孢素脂肪乳注射液10mL、脂肪乳注射液(20％)10mL，分别置于不同分液漏斗中。在各分液漏斗中进行如下操作：加入氯化钾饱和溶液5mL，用乙醚20mL萃取，振摇，静置分层；将水相层转移至第二个分液漏斗中，用40mL乙醚萃取，合并乙醚层(有机相层)；用旋转蒸发仪在室温下浓缩；残留物加冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，振摇使之溶解，加饱和碘化钾溶液0.5mL，振摇1分钟；加新沸过的冷水30mL与淀粉指示液0.5mL，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫色消失；另取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)30mL，同法操作，作为空白试验校正溶液。按照中国药典《脂肪乳注射液(C14-C24)质量标准》收录方法，分别计算各供试品的过氧化值。

表6多品种的测定结果

综上所述，本发明的方法通过破乳、有机溶剂萃取、获得油类和脂质物，油类和脂质物在冰乙酸-三氯甲烷(3:2)混合液中溶解性较好，解决了样品的溶解性问题，并能对油类与脂质物中的过氧化物进行准确测定，且方法的重现性较好。

同时，本发明方法在不加热的情况下，破乳提取油脂，既能测得过氧化值，也避免了样品在制备过程中因加热使其加速氧化，造成测定结果偏高的问题，方法准确性高，有效监控了脂肪乳注射液的过氧化值，增加药品的安全性和有效性。

Claims

1.一种测定脂肪乳类注射液过氧化值的方法，其特征在于：所述脂肪乳类注射液包含油脂类成分，它包括以下步骤：

(2)室温真空旋蒸除去有机溶剂得到残留物，测定残留物的过氧化值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无机盐的阳离子为碱金属离子，无机盐的阴离子为氯离子、磷酸根离子、磷酸一氢根离子或磷酸二氢根离子，优选的，所述无机盐选自NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、KCl、KH₂PO₄和K₂HPO₄中的任一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述破乳剂体积与待测样品中油脂类成分质量之比为0.25mL:1g～5mL:1g；进一步优选为2.5mL:1g。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂为乙醚。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述乙醚与待测样品的体积比为2:1，萃取的次数为1-5次，优选3次。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述测定残留物过氧化值的方法包括以下步骤：

取残留物，用有机溶剂溶解后，加入碘化钾反应，用硫代硫酸钠溶液滴定生成的碘，根据硫代硫酸钠的用量计算得到过氧化值。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述溶剂为体积比为3∶2的冰醋酸-三氯甲烷；所述溶剂体积与待测样品中油脂类成分质量之比为15mL:1g。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述碘化钾为饱和碘化钾溶液，该饱和碘化钾溶液体积与待测样品中油脂类成分质量之比为0.25mL:1g。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：所述脂肪乳类注射液中油脂类成分为0.1g/mL～0.2g/mL。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于：所述脂肪乳类注射液为前列地尔注射液、中长链脂肪乳注射液、脂肪乳注射液、环孢素脂肪乳注射液、丙泊酚脂肪乳注射液、鱼油脂肪乳注射液或多西他赛脂肪乳注射液。