CN108251364A

CN108251364A - TCRab和CD45RA阳性细胞耗尽的细胞组合物

Info

Publication number: CN108251364A
Application number: CN201711441791.1A
Authority: CN
Inventors: V.胡珀特; 梁永恆; S.美天施; J.齐奥内克
Original assignee: Miltenyi Biotec GmbH
Current assignee: Meitianshi Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2016-12-27
Filing date: 2017-12-27
Publication date: 2018-07-06
Also published as: EP3342855B1; EP3342855A1; JP7094100B2; JP2018138539A; US20180179490A1

Abstract

本发明涉及从来源于骨髓或血液的样品制备细胞群的方法，其包括以下步骤：a)将样品分成含有50‑99%的样品细胞的第一部分和含有50‑1%的样品细胞的第二部分，b)用针对TCR α/β的第一标志物标记第一部分的细胞，c)用针对CD45RA的第二标志物标记第二部分的细胞，d)从第一和第二部分中除去标记的细胞，并将剩余的细胞合并成细胞群。此外，本发明涉及细胞组合物和细胞组合物的用途。

Description

TCRab和CD45RA阳性细胞耗尽的细胞组合物

技术领域

本发明涉及：可从骨髓或血液获得的细胞组合物，其中细胞群耗尽了TCR α/β阳性细胞和CD45RA阳性细胞；提供所述细胞组合物的方法及其用途。

背景技术

干细胞移植越来越多地用于治疗血液学、肿瘤学、免疫学和遗传学疾病。通常，干细胞从骨髓或者在白细胞分离术(leukapheresis)后处理的动员血液(mobilized blood)中提取。

取决于供体，干细胞移植仍然遭受源自移植物对受体的反应(移植物抗宿主病，GvHD或GvHR)的并发症。其它常见的并发症包括移植的干细胞植入失败、调理步骤的毒性或由于免疫重建延长或不完全导致的治疗下的感染。

为了避免并发症并为给定的受体定制干细胞移植物，已知从起始细胞组合物富集和/或耗尽某些细胞亚群。在这方面，现有技术中描述了几种耗尽和/或富集策略。特别地，CD34+细胞的富集和CD3+细胞的耗尽是该领域中的已知方法。

在US20140308250A1公开的另一种方法中，可从骨髓或血液获得的细胞群耗尽了TCR α/β阳性细胞，同时耗尽了CD19阳性细胞。如此获得的细胞群可用于在干细胞或骨髓移植后重建人的造血系统。该细胞群包含另外的免疫细胞，例如，天然杀伤细胞、γ/δ T细胞、树突细胞、单核细胞。这些细胞群具有抗肿瘤和/或抗病毒作用，或者有助于干细胞的植入。然而，通过US20140308250A1中公开的方法获得的细胞组合物不含有病原体特异性T细胞，后者可比单独的NK细胞和γ/δ T细胞更有效地解决感染。

已知在病毒抗原遭遇时基于细胞因子分泌从单独的细胞样品分离病毒特异性T细胞。该方法昂贵、耗时且产生受限于对抗用于加工的抗原的反应性的低细胞数量。

本发明的目的是提供方法和细胞组合物，其适于通过耗尽TCR α/β和CD45RA阳性细胞重建造血系统，但除了NK细胞、TCRγ/δ T细胞、B细胞和血液树突细胞之外仍含有记忆T细胞。

尽管本发明的主要应用在干细胞移植中，但是本发明还可以用于其它临床背景，包括过继性细胞疗法，例如供体淋巴细胞输注，用于治疗感染、混合嵌合状态(mixedchimerism)和癌症复发。

发明内容

本发明的第一个方面是从来源于骨髓或血液的样品制备细胞群的方法，其包括以下步骤：a)将样品分成含有50-99%的样品细胞的第一部分和含有50-1%的样品细胞的第二部分，b)用针对TCR α/β的第一标志物标记第一部分的细胞，c)用针对CD45RA的第二标志物标记第二部分的细胞，d)从第一和第二部分中除去标记的细胞，并将剩余的细胞合并成细胞群。

本发明的另一目的是一种药物组合物，其包含可从骨髓、全血或处理过的血液获得的细胞群，其中所述细胞群耗尽了TCR α/β阳性细胞和CD45RA阳性细胞达0.1至7.0 log。

本发明的又一个目的是所述药物组合物用于在干细胞或骨髓移植后重建人的造血系统，或用于以过继性细胞转移的形式预防和治疗感染、混合嵌合状态或癌症复发的用途或使用方法。

附图说明

参考以下附图来描述各种示例性细节，其中：

图1显示了对于白细胞分离术、TCRab耗尽部分和混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽)，CD4+和CD8+ T细胞的IFNγ产生，对于每种样品减去阴性对照。

图2显示了对于TCRab耗尽部分和混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽)，CD4+和CD8+ T细胞的IFNγ产生，对于每种样品减去阴性对照。

图3显示了在与同种异体细胞相互作用后，CD45RA阴性和CD45RA阳性细胞的BrdU细胞计数和细胞培养上清液中的干扰素γ含量。

具体实施方式

本发明的方法涉及从来源于骨髓或血液的样品制备细胞群。术语“来源于骨髓或血液的样品”包括可从骨髓、其级分或预处理的骨髓、全血、血液级分、血液制品或处理过的血液、通过白细胞清除术(白细胞分离术)、静脉穿刺或骨髓穿刺获得的细胞制备物获得的所有细胞群。优选地，细胞制备物获自先前在干细胞移植背景下用干细胞动员药物治疗的健康供体。

术语“耗尽”是指来自细胞群的某些细胞的量的减少。耗尽可以基于由例如细胞表面标志物(例如TCR α/β或CD45RA)的存在(或不存在)达至少两个对数级、优选至少三个对数级、特别优选至少4个对数级(例如4.6个对数级)、最优选至少4个到5个对数级定义的细胞的量。

根据对数级的除去如下：1 log：不需要的细胞的90%除去；2 log：99%；3 log：99.9%；和4 log：99.99%。用于计算分离性能的方法是本领域技术人员已知的，并且见述于例如Bosio等, Isolation and Enrichment of Stem Cells(干细胞的分离和富集),Advances in Biochemical Engineering and Biotechnology, Springer Verlag BerlinHeidelberg, 2009。

使用细胞表面标志物TCR α/β和表面标志物CD45RA进行本发明的耗尽方法。耗尽可以用现有技术中已知的任何技术进行，例如，淘洗(panning)、淘选(elutriation)或磁性细胞分离。因为高的耗尽效率，使用磁性细胞分离的耗尽是优选的，例如使用CLINIMACSPlus或CLINIMACS Prodigy仪器，两者均可从Miltenyi Biotec GmbH获得。

在进一步的变型中，本发明涉及用于制备细胞群的方法，特别是体外方法。该方法包括以下步骤：

- 提供来源于供体的骨髓或血液的细胞样品(其具有特别包含TCR α/β阳性和CD45RA阳性细胞的群体)

- 将细胞样品分成第一和第二部分

- 自第一细胞群耗尽TCR α/β阳性细胞

- 自第二群体耗尽CD45RA阳性细胞

- 合并TCR α/β和CD45RA耗尽的产物。

优选地，使用针对TCR α/β的抗体或抗原结合片段进行TCR α/β阳性细胞的耗尽。基于受体TCR α/β的SEQ ID NO: 1-11的蛋白质或核苷酸序列(参见序列方案)，可以产生针对TCR α/β的抗体或抗原片段或其衍生物或缀合物并用于TCR α/β阳性细胞的耗尽。

在一个优选的实施方案中，所述方法还包括以下步骤：用第三标志物标记第一部分和/或第二部分和/或细胞群的表达CD19的细胞，并除去标记的细胞。

标记

本发明的方法中使用的第一、第二和/或第三标志物可以包含分别针对TCR α/β和/或针对CD45RA和/或CD19的抗体或抗原结合片段和检测部分。

标志物的检测部分可以相同或不同，可以是荧光染料、磁性颗粒或放射性标记。

CD45RA是未致敏T细胞和B细胞上的表面分子。术语CD45RA阳性细胞是指在表面上表达CD45RA分子，并且合适的CD45RA结合分子(例如针对CD45RA的抗体)可以特异性结合的细胞。

TCR α-β是T细胞上的表面分子。术语“TCR α/β阳性细胞”是指在表面上表达TCRα/β分子，并且合适的TCR α/β结合分子(例如抗体)可以特异性结合的细胞。

术语“抗体”是指人或动物来源(例如大鼠、兔、山羊、马或小鼠)的任何单克隆或多克隆抗体，包括很大程度保留了原始抗体的结合能力的这些抗体的衍生物。这些抗体的优选衍生物是嵌合抗体，包括例如小鼠或大鼠的可变区和人恒定区的嵌合抗体。术语“抗体”还包括双功能或双特异性抗体和抗体构建体，如来自单链的Fv (scFv)或抗体融合蛋白。术语“scFv”(单链Fv片段)是本领域技术人员已知的，并且优选以重组方式产生该片段。

用于本发明的抗体可以是人的或人源化的。术语“人源化抗体”是指这样的人抗体，其中至少一个抗体结合位点(互补决定区，CDR) (例如CDR3，优选全部六个CDR)被来自具有期望特异性的人抗体的CDR取代。任选地，非人恒定区被人抗体的恒定区取代。用于产生人抗体的方法例如在EP 0239400 A1和WO 90/07861 A1中描述。

术语抗原结合片段是指如上文定义的抗体的片段，例如分离的轻链和重链、Fab、ab/c、Fv、Fab'、F(ab')2。抗原结合片段可以包含轻链的可变区和重链的可变区，二者不必然一起。

第一、第二和/或第三标志物的检测部分可以是荧光染料、磁性颗粒或放射性标记。合适的检测部分和将检测部分缀合至抗体或抗原结合片段的方法是本领域技术人员熟知的。

耗尽

在本发明的方法中，样品的细胞被分成第一部分和第二部分。优选地，第一部分含有60%至99%、70%至99%、75至99%、85至99%、90至99%或95至99%的样品细胞，并且第二部分的相应范围合计达100%。

在如已所述地标记各部分的细胞之后，从样品中除去来自第一和第二部分的标记的细胞。基于检测部分的性质完成标记的细胞的除去。在检测部分是荧光染料的情况下，通过基于荧光的方法如FACS或使用TYTO仪器(Miltenyi Biotec GmbH)进行除去。在检测部分是磁性颗粒的情况下，使用本领域技术人员已知的磁性细胞分选。稍后描述包括磁性细胞分选的优选实施方案。

标记的细胞的除去可以在第一个实施方案中完成，其中在步骤d)中，合并第一和第二部分，并从合并的部分中除去标记的细胞。当各部分含有荧光染料和磁性颗粒等不同性质的检测部分时，或者如果需要更纯的耗尽，则该策略是优选的。

在本发明的第二个实施方案中，在步骤d)中，分别从第一和第二部分中除去标记的细胞，并且将各部分的剩余细胞合并。当使用具有相同性质的检测部分或甚至相同的检测部分，和/或需要更快的处理时，第二策略是优选的。

本发明的方法可以以几种变型进行，例如：

变型A)从10%的样品细胞中耗尽CD45RA细胞，然后从90%的样品中耗尽TCR α/β (或TCRα/β和CD19)，将两种耗尽的细胞样品合并

变型B)从10%的样品中耗尽CD45RA，然后从90%的样品中耗尽TCR α/β (或TCR α/β和CD19)，但是保留两种样品作为两个分开的单独产物

变型C)用CD45RA标记10%的样品，然后用TCR α/β-生物素标记90%的样品，合并所得的各部分，然后用抗生物素试剂标记整个产物，并磁性分离。任选地，在每个标记步骤之间/之后执行清洗步骤

变型D)用CD45RA标记10%的样品，然后用TCR α/β-生物素标记90%的样品，用抗生物素试剂标记，合并所得各部分并磁性分离。任选地，在每个标记步骤之间/之后执行清洗步骤

变型E)通过单次通过柱或两次通过柱(“大量耗尽(bulk depletion)”+“灵敏耗尽(sensitive depletion)”)的磁性耗尽步骤(导致最高耗尽效率)

变型F)通过单次通过柱来磁性耗尽CD45RA部分，通过两次通过来磁性耗尽TCR α/β部分

变型G)处理样品，然后重新缓冲至可用于输注的溶液中

变型H)用输注溶液(而不是CliniMACS缓冲液)处理样品

在类似地除去标记的细胞的所有变型中，剩余的细胞被合并到缺少至少一部分TCR ab和CD45RA阳性细胞的细胞群中。优选地，TCRab和CD45RA双阳性细胞的总数小于2.5万个/千克受体重量或小于总有核细胞群的0.1%，如小于0.03%或甚至小于0.005%。

例如，TCRα/β和CD45RA双阳性T细胞应该被耗尽超过99.99% (4 log)至小于25000个TCRab+/CD45RA+细胞/kg患者体重的最终细胞剂量，即对于100 kg患者而言，至小于250万个细胞。TCRα/β阳性/CD45RA阴性记忆T细胞应被保持至安全但免疫有效的剂量，即10万至1亿个/kg，或对于100 kg患者而言10E6至10E9个细胞。应保持(最低可能的消耗) TCRα/β阴性细胞(CD45RA阳性和阴性细胞群)，例如至约2.4E9 γ/δ T细胞的总细胞剂量(即在5百万-2.5亿个/kg的范围内)，或者对于100 kg患者而言2400万个γ/δ T细胞(即在500E6至25E9的范围内)。

自动处理

在一个优选的实施方案中，整个过程在自动封闭系统中进行，所述系统包括用于细胞样品、标记缀合物、洗涤缓冲液、废物和所需细胞群的储存容器，一个或多个离心室，适合于标记缀合物的检测部分的检测和分离工具，和用于连接目的的管道装置。术语“自动封闭系统”是指适于无菌使用的系统，即空气和流体紧密封闭，具有或不具有用于无菌压力补偿的工具，并且不需要手动交互。这样的系统例如描述于WO2009072003A2或WO2009072006A2中，并且由Miltenyi Biotec GmbH以商品名CLINIMACS Plus或CLINIMACS Prodigy商业化。

自动化处理包括将起始材料分成第一和第二部分的预定分流比，确定样品中的细胞数量，加入适量的抗体或细胞分离试剂，在适当的温度下在适当的搅拌下将细胞产物与试剂一起温育，通过离心除去未结合的试剂并除去上清液，通过低速离心除去血小板内容物并除去上清液，将细胞在磁场中通过磁分离柱，并以预定义的体积和溶液配置细胞产物。

药物组合物

本发明的方法可以用于获得药物组合物。因此，本发明的另一个目的是一种药物组合物，其包含可从骨髓或血液获得的细胞群，其中细胞群耗尽了TCR α/β阳性细胞和CD45RA阳性细胞达0.1 log至7.0 log。

优选地，可以用所公开的本发明的方法获得药物组合物。

该药物组合物可用于在干细胞或骨髓移植后重建人的造血系统；或用于以过继性细胞转移的形式预防和治疗感染、混合嵌合状态或癌症复发。

干细胞和骨髓移植

对于骨髓移植，在全身麻醉下将约1升的骨髓-血液混合物从供体的骨盆骨移出。

为了从血液中移出干细胞，在数天内将身体的自身激素样物质施用给供体，其刺激了干细胞的产生及其从骨髓转移到血液循环系统。用于预处理供体以移出骨髓或血液干细胞的方法是现有技术，并且是技术人员已知的。

血液干细胞移植的目的是给受体装备可分化成血细胞的健康干细胞群。因此，受体的缺陷或病理细胞被替换。在同种异体移植中，组织来源于健康的供体。这可以是相同的孪生子、HLA相同的同胞、非HLA相同的家族成员(错配的相关供体)、单倍体相同的供体或不相关的HLA相容供体。同种异体移植的主要目标是用健康的功能性造血系统(包括免疫系统)完全替代受体的疾病或有缺陷的造血系统，例如骨髓。然而，干细胞移植也可以用自体即患者自身的细胞进行。

第一选择的供体就相关的组织相容性抗原HLA-A、B、C、DRBI和DQB1而言是相同的同胞(Identical Sibling：IdSib)。但是，这种相同的同胞只能在约30%的病例中发现，以致通常需要找到HLA相同的不相关供体(匹配的不相关供体，MUD)。由于并非所有组织相容性抗原是已知的，并且只有有限数量的等位基因可以被测试，所以需要假定与同胞供体相比，与相同的不相关供体更差的匹配。

显著部分的患者群体仍然无供体。对于这些患者，可以使用与受体只有HLA等位基因的一个单倍型相同(即单倍体相同)的相关供体。

不相关的供体(MUD)的移植物最常用于造血干细胞移植。对于MUD背景中的未操纵移植物，GvHD是主要的并发症。严重的GvHD病例被认为是危及生命的，需要用免疫抑制物质进行大规模治疗(massive therapy)，对此已经描述了约40%的应答率。

移植

实际移植可以分为两个阶段。通过化疗和/或放射疗法的调理，受体的免疫系统被破坏，使得转移或移植的骨髓或干细胞不被排斥。也就是说，受体准备移植物的植入。这越好地实现，移植物的非植入或排斥风险就越低。取决于调理的强度，要实现的目标是破坏患者中剩余的白血病细胞或恶性细胞。移植在第0天以静脉内方式进行。患者通常保持在适合这种情况的病房中，直到移植物植入和直接毒性消失。在移植物植入和直接毒性减弱后，在头三个月内需要进行严格监测。监测的强度在很大程度上取决于供体的类型和并发症，并融入定期的终生护理中。

适应症/用途

本发明或通过本发明的方法获得的细胞群或药物组合物可用于治疗需要同种异体干细胞移植的所有医学适应症，如造血系统的先天性和获得性恶性和非恶性疾病。治疗可以包括同种异体干细胞移植。特别地，根据本发明或用本发明的方法获得的药物组合物可以用于在干细胞或骨髓移植后重建人的造血系统。此外，根据本发明或用本发明的方法获得的药物组合物可以用于以过继性细胞转移的形式预防和治疗感染、混合嵌合状态、癌症复发或免疫病症，有或没有基因修饰或进一步的细胞操作。另外的适应症是对化疗或放射疗法的剂量强化作出反应的恶性疾病。

在治疗期间，可以使用免疫抑制剂如环孢菌素、皮质类固醇、抗代谢物和单克隆抗淋巴细胞抗体以控制GvHD。

在药物组合物的优选实施方案中，组合物还包含至少一种药学上可接受的载体或添加剂。这样的载体或添加剂是本领域技术人员已知的。

可以施用药物组合物用于治疗癌症，例如白血病和其它疾病，例如急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、再生障碍性贫血、地中海贫血、先天性缺陷(HHS)，以及抗实体瘤(例如成神经细胞瘤、肉瘤等)，对其表示需要同种异体移植，或预期TCR α/β、CD45耗尽的细胞制剂的治疗效果。

此外，为了实现造血系统的良好重建，在同种异体移植期间需要转移足够量的CD34+细胞(至少200万个、更好超过400万个/千克受体体重)。如果在细胞分离后维持足够的记忆T细胞(例如超过100万个CD45RA-T细胞/千克)，则B细胞可以保留在移植物中以保持B细胞免疫。或者，通过CD19耗尽从移植物中除去的B细胞应该以可能的最少数量存在，或者应当通过例如抗CD20抗体的体内施用而随后在受体中除去。

耗尽细胞群的待施用于人患者的量通常在2×10E10至1×10E11个淋巴细胞之间。

尽管已经结合上面概述的示例性实施方式描述了各种细节，但是在查阅前述公开内容时，各种替代方案、修改、变化、改进和/或实质等同方案(无论是已知的还是目前没有预料或不能预料的)可变得显而易见。因此，以上阐述的示例性实施方式旨在是说明性的而不是限制性的。

实施例

抗原特异性T细胞可以在干细胞移植后支持免疫防御，并且可以保护患者免于不同的疾病(例如CMV、EBV、流感)。通过CD45RA和CD45RO的表达，可将T细胞分成记忆T细胞(CD45RO+/CD45RA-)和未致敏T细胞(CD45RA+/CD45RO-)。

可以通过重复的抗原接触(例如来自CMV、EBV或流感的抗原)使CD45RO+记忆T细胞再激活，并产生几种细胞因子(例如IFNγ)以引发针对感染的免疫应答。CD45RA耗尽的血液产物(例如LP或全血)主要含有CD45RO+记忆T细胞，其可以针对不同的抗原起反应并产生INFγ。

相反，在TCRab耗尽的细胞产物中，CD45RO+记忆T细胞也被耗尽，并且在这些细胞产物中预期几乎没有抗原特异性T细胞。

在本发明的方法中，使用TCRab和CD45RA耗尽的组合作为分离策略。作为实例，靶细胞部分含有95%的TCRab耗尽产物和5%的CD45RA耗尽产物。

实验的一般描述

缩写列表：CMV：巨细胞病毒，EBV：Ebstein-Barr病毒，IFNγ：干扰素-γ，LP：白细胞分离术，MQ：MACSQuant分析仪10，SEB：葡萄球菌肠毒素B，TCRab：T细胞受体αβ

在以下实验中，用一个LP (对于TCRab耗尽为½ LP，对于CD45RA为½ LP)进行TCRab耗尽和CD45RA耗尽。将95%的TCRab耗尽部分和5%的CD45RA耗尽部分混合在一起并用不同的抗原刺激。温育6小时后，通过细胞内染色和MQ测量来测量INFγ的产生。将混合物95:5的INFγ生产与未分离的LP和TCRab耗尽部分进行比较。

实验的逐步描述

A)白细胞分离术样品的分流

•一半用于CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec GmbH)的LP-TCRab-耗尽

•一半用于CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec GmbH)的CD45RA耗尽

B)耗尽后，将TCRab耗尽部分和CD45RA耗尽部分以95:5的细胞比混合

C)以下部分用于快速细胞因子测定(检测抗原特异性T细胞)，根据数据表RapidCytokine Inspector (CD4/CD8 T Cell) Kit, 130-097-343 (Miltenyi Biotec GmbH)进行

•未分离的白细胞分离术

•TCRab耗尽部分

•混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽部分)

D)根据相应刺激剂的数据表，用以下抗原刺激所有部分：

•CEF-Pool→ 数据表130-098-426 (PepTivator® CEF MHC Class I Plus)(Miltenyi Biotec GmbH)

•CMV (pp56和IE-1 Peptivator) → 数据表130-093-493 (Miltenyi Biotec GmbH)(PepTivator® CMV IE-1)和130-093-438 (PepTivator® CMV pp65) (Miltenyi BiotecGmbH)

•EBV-Consensus-Pool → 数据表130-099-764 (PepTivator® EBV Consensus)(Miltenyi Biotec GmbH)

•SEB (阳性对照)

•无刺激(阴性对照)

E)在37℃下刺激细胞6小时，2小时后加入布雷菲德菌素A(阻断胞吐作用)

F)用抗-IFNγ-PE和Rapid Cytokine Inspector进行细胞内染色，根据数据表RapidCytokine Inspector (CD4/CD8 T Cell) Kit, 130-097-343 (Miltenyi Biotec GmbH)和Rapid Cytokine Inspector Anti- Cytokine Antibodies, 130-097-600 (MiltenyiBiotec GmbH)进行

G)在MACSQuant分析仪10 (Miltenyi Biotec GmbH)上测量染色的细胞。

实验结果

IFNγ+ T细胞(IFNγ产生)的频率越高，抗原特异性细胞的反应越高，干细胞移植的积极效果越高。对于混合物95:5预计这种效应，但对于TCRab耗尽的靶细胞部分则不能。

混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽部分)显示与TCRab耗尽部分相比，用CEF-Pool和CMV刺激后IFNγ的产生。这表明混合物95:5含有针对CMV和来自CEF-Pool (CMV、EBV、流感)的肽的抗原特异性T细胞，与TCRab耗尽部分相比，这是有利的。

图1显示了对于白细胞分离术、TCRab耗尽部分和混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽)，CD4+和CD8+ T细胞的IFNγ产生，对于每种样品减去阴性对照。与TCRab耗尽部分相比，从“混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽)”列可以看到IFNγ产生的积极作用。

图2显示了对于TCRab耗尽部分和混合物95:5 (TCRab耗尽:CD45RA耗尽)，CD4+和CD8+ T细胞的IFNγ产生，对于每种样品减去阴性对照。来自TCRab耗尽部分的细胞显示无反应，即无IFNγ产生，而通过本发明的方法获得的细胞显示IFNγ产生的积极作用。

用本发明的方法获得的抗原特异性T细胞可以在干细胞移植后支持免疫防御，并且可以保护患者免于不同的疾病(例如CMV、EBV、流感)。

同种异体反应性的减少

未处理的分离术产物含有同种异体反应性T细胞，在输注给患者后可能导致严重的副作用。同种异体反应性通过TCR α/β耗尽而除去。TCRα/β耗尽和CD45RA耗尽产物的组合可含有同种异体反应性细胞，如果它们被包括在CD45RA耗尽产物中的话。

程序：通过磁性细胞分选将外周血单核细胞分离成CD45RA阳性和CD45RA阴性细胞。γ辐照的第三方PBMC用作刺激细胞以激活共培养系统中的CD45RA阳性或阴性应答细胞。通过BrdU计数评估CD45RA阳性和阴性细胞的增殖反应。活化状态通过定量细胞培养上清液中的干扰素-γ来评估。进行了三个独立的实验。

结果：与CD45RA阴性细胞相比，CD45RA阳性细胞具有显著更高的BrdU计数(200000对比40000)，表明在与同种异体细胞相互作用时在CD45RA阳性而非CD45RA阴性细胞中有活性增殖。在与同种异体细胞相互作用后，在CD45RA阳性而非CD45RA阴性细胞的上清液中检测到干扰素γ。

结论：向TCR α/β耗尽的干细胞产物添加CD45RA耗尽的细胞不会为干细胞产物增加不需要的同种异体反应潜力。

细胞产物/药物组合物的制造

在CliniMACS plus上：设置分离程序DEPLETION 3.1并使用CliniMACS DepletionTubing Set。CD45RA标记的细胞(5%)被添加到再施用袋中，紧接之后完成用TCRab标记的产物运行的DEPLETION 3.1 /Depletion Tubing Set的灵敏耗尽。

耗尽前的组成：

24.5% TCRab+/CD45RA+细胞(1.12E10 × 24.5%= 2.74E9)

耗尽后的组成：

0.03% TCRab+/CD45RA+细胞(3.33E9 × 0.03%= 1E6)，TCRab+/CD45RA+细胞的3.43log耗尽。

CPCH1762895 序列表

<110> Miltenyi Biotec GmbH

<120> TCRab和CD45RA阳性细胞耗尽的细胞组合物

<130> MIL_104

<160> 11

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 142

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser

1 5 10 15

Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln

20 25 30

Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys

35 40 45

Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val

50 55 60

Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn

65 70 75 80

Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys

85 90 95

Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn

100 105 110

Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val

115 120 125

Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

130 135 140

<210> 2

<211> 426

<212> DNA

<213> 智人

<400> 2

ccaaatatcc agaaccctga ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac 60

aagtctgtct gcctattcac cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat 120

tctgatgtgt atatcacaga caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc 180

aacagtgctg tggcctggag caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac 240

agcattattc cagaagacac cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg 300

gtcgagaaaa gctttgaaac agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg 360

ttccgaatcc tcctcctgaa agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg 420

tccagc 426

<210> 3

<211> 3430

<212> DNA

<213> 智人

<400> 3

ttcccgtata aagcatgaga ccgtgacttg ccagccccac agagccccgc ccttgtccat 60

cactggcatc tggactccag cctgggttgg ggcaaagagg gaaatgagat catgtcctaa 120

ccctgatcct cttgtcccac agatatccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga 180

gactctaaat ccagtgacaa gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat 240

gtgtcacaaa gtaaggattc tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg 300

tctatggact tcaagagcaa cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt 360

gcaaacgcct tcaacaacag cattattcca gaagacacct tcttccccag cccaggtaag 420

ggcagctttg gtgccttcgc aggctgtttc cttgcttcag gaatggccag gttctgccca 480

gagctctggt caatgatgtc taaaactcct ctgattggtg gtctcggcct tatccattgc 540

caccaaaacc ctctttttac taagaaacag tgagccttgt tctggcagtc cagagaatga 600

cacgggaaaa aagcagatga agagaaggtg gcaggagagg gcacgtggcc cagcctcagt 660

ctctccaact gagttcctgc ctgcctgcct ttgctcagac tgtttgcccc ttactgctct 720

tctaggcctc attctaagcc ccttctccaa gttgcctctc cttatttctc cctgtctgcc 780

aaaaaatctt tcccagctca ctaagtcagt ctcacgcagt cactcattaa cccaccaatc 840

actgattgtg ccggcacatg aatgcaccag gtgttgaagt ggaggaatta aaaagtcaga 900

tgaggggtgt gcccagagga agcaccattc tagttggggg agcccatctg tcagctggga 960

aaagtccaaa taacttcaga ttggaatgtg ttttaactca gggttgagaa aacagccacc 1020

ttcaggacaa aagtcaggga agggctctct gaagaaatgc tacttgaaga taccagccct 1080

accaagggca gggagaggac cctatagagg cctgggacag gagctcaatg agaaaggaga 1140

agagcagcag gcatgagttg aatgaaggag gcagggccgg gtcacagggc cttctaggcc 1200

atgagagggt agacagtatt ctaagtacgc cagaaagctg ttgatcggct tcaagcaggg 1260

aagggacacc taatttgctt ttcttttctt tttttttttt tttttttttt tttttttgag 1320

atggagtttt gctcttgttg cccaggctgg agtgcaatgg tgcatcttgg ctcactacaa 1380

gcctctgcct cccaggttca agtgattctc ctgcctcagc ctcccaagta gctgggatta 1440

caggcaccca ccaccatgcc cggctaattt tttgtatttt tagtagagac agggtttcac 1500

tatgttggcc aggctggtct cgaactcctg acctcaggtg atccacccgc ttcagcctcc 1560

caaagtgctg ggattacagg cgtgagccac cacacccggc ctgcttttct taaagatcaa 1620

tctgagtgct gtacggagag tgggttgtaa gccaagagta gaagcagaaa gggagcagtt 1680

gcagcagaga gatgatggag gcctgggcac ggtggtggca gggaggtaac caacaccatt 1740

caggtttcaa aggtagaacc atgcagggat gagaaagcaa agaggggatc aaggaaggca 1800

gctggatttt ggcctgagca gctgagtcaa tgatagtgcc gtttactaag aagaaaccaa 1860

ggaaaaaatt tggggtgcag ggatcaaaac tttttggaac atatgaaagt acgtgtttat 1920

actctttatg gcccttgtca ctatgtatgc ctcgctgcct cattggactc tagaatgaag 1980

ccaggcagag cagggtctat gtgtgatggc acatgtggcc agggtcatgc agacatgtac 2040

tttgtacaaa cagtgtatat tgagtaaata gaaatggtgt ccaggagccg aggtatcgtc 2100

ctgccagggc caggggctct ccctagcagg tgctcatatg ctgtaagttc cctccagatc 2160

tctccacaag gaggcatgga aaggctgtag ttgttcacct gcccaagaac taggaggtct 2220

ggggtgggag agtcagcctg ctctggatgc tgaaagaatg tctgtttttc cttttagaaa 2280

gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac aggtaagaca ggggtctagc 2340

ctgggtttgc acaggattgc cgaagtgatg aacccgcaat aaccctgcct ggatgaggga 2400

gtgggaagaa attagtagat gtgggaatga atgatgagga atggaaacag cggttcaaga 2460

cctgcccaga gctgggtggg gtctctcctg aatccctctc accgtctctg actttccgtt 2520

ctaagcactt tgaggatgag tttctagctt caatagacca aggactctct cctaggcctc 2580

tgtattcctt tcaacagctc cactgtcaag agagccagag agagcttctg ggtggcccag 2640

ctgtgaaatt tctgagtccc ttagggatag ccctaaacga accagatcat cctgaggaca 2700

gccaagaggt tttgccttct ttcaagacaa gcaacagtac tcacataggc tgtgggcaat 2760

ggtcctgtct ctcaagaatc ccctgccact cctcacaccc accctgggcc catattcatt 2820

tccatttgag ttgttcttat tgagtcatcc ttcctgtggc agcggaactc actaaggggc 2880

ccatctggac ccgaggtatt gtgaagataa attctgagca cctaccccat ccccagaagg 2940

gctcagaaat aaaataagag ccaagtctag tcggtgtttc ctgtcttgaa acacaatact 3000

gttggccctg gaagaatgca cagaatctgt ttgtaagggg atatgcacag aagctgcaag 3060

ggacaggagg tgcaggagct gcaggcctcc cccacccagc ctgctctgcc ttggggaaaa 3120

ccgtgggtgt gtcctgcagg ccatgcaggc ctgggacatg caagcccata accgctgtgg 3180

cctcttggtt ttacagatac gaacctaaac tttcaaaacc tgtcagtgat tgggttccga 3240

atcctcctcc tgaaagtggc cgggtttaat ctgctcatga cgctgcggct gtggtccagc 3300

tgaggtgagg ggccttgaag ctgggagtgg ggtttaggga cgcgggtctc tgcgtgcatc 3360

ctaagctctg agagcaaacc tccctgcagg gtcttgcttt taagtccaaa gcctgagccc 3420

accaaactct 3430

<210> 4

<211> 177

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys

50 55 60

Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu

65 70 75 80

Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys

85 90 95

Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg

115 120 125

Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser

130 135 140

Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala

145 150 155 160

Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp

165 170 175

Phe

<210> 5

<211> 531

<212> DNA

<213> 智人

<400> 5

gaggacctga acaaggtgtt cccacccgag gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag 60

atctcccaca cccaaaaggc cacactggtg tgcctggcca caggcttctt ccccgaccac 120

gtggagctga gctggtgggt gaatgggaag gaggtgcaca gtggggtcag cacagacccg 180

cagcccctca aggagcagcc cgccctcaat gactccagat actgcctgag cagccgcctg 240

agggtctcgg ccaccttctg gcagaacccc cgcaaccact tccgctgtca agtccagttc 300

tacgggctct cggagaatga cgagtggacc caggataggg ccaaacccgt cacccagatc 360

gtcagcgccg aggcctgggg tagagcagac tgtggcttta cctcggtgtc ctaccagcaa 420

ggggtcctgt ctgccaccat cctctatgag atcctgctag ggaaggccac cctgtatgct 480

gtgctggtca gcgcccttgt gttgatggcc atggtcaaga gaaaggattt c 531

<210> 6

<211> 2042

<212> DNA

<213> 智人

<400> 6

tgcatcctag ggacagcata gaaaggaggg gcaaagtgga gagagagcaa cagacactgg 60

gatggtgacc ccaaaacaat gagggcctag aatgacatag ttgtgcttca ttacggccca 120

ttcccagggc tctctctcac acacacagag cccctaccag aaccagacag ctctcagagc 180

aaccctggct ccaacccctc ttccctttcc agaggacctg aacaaggtgt tcccacccga 240

ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac acccaaaagg ccacactggt 300

gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg agctggtggg tgaatgggaa 360

ggaggtgcac agtggggtca gcacggaccc gcagcccctc aaggagcagc ccgccctcaa 420

tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtctcg gccaccttct ggcagaaccc 480

ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc tcggagaatg acgagtggac 540

ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc gaggcctggg gtagagcagg 600

tgagtggggc ctggggagat gcctggagga gattaggtga gaccagctac cagggaaaat 660

ggaaagatcc aggtagcaga caagactaga tccaaaaaga aaggaaccag cgcacaccat 720

gaaggagaat tgggcacctg tggttcattc ttctcccaga ttctcagccc aacagagcca 780

agcagctggg tcccctttct atgtggcctg tgtaactctc atctgggtgg tgccccccat 840

ccccctcagt gctgccacat gccatggatt gcaaggacaa tgtggctgac atctgcatgg 900

cagaagaaag gaggtgctgg gctgtcagag gaagctggtc tgggcctggg agtctgtgcc 960

aactgcaaat ctgactttac ttttaattgc ctatgaaaat aaggtctctc atttattttc 1020

ctctccctgc tttctttcag actgtggctt tacctcgggt aagtaagccc ttccttttcc 1080

tctccctctc tcatggttct tgacctagaa ccaaggcatg aagaactcac agacactgga 1140

gggtggaggg tgggagagac cagagctacc tgtgcacagg tacccacctg tccttcctcc 1200

gtgccaacag tgtcctacca gcaaggggtc ctgtctgcca ccatcctcta tgagatcctg 1260

ctagggaagg ccaccctgta tgctgtgctg gtcagcgccc ttgtgttgat ggccatggta 1320

agcaggaggg caggatgggg ccagcaggct ggaggtgaca cactgacacc aagcacccag 1380

aagtatagag tccctgccag gattggagct gggcagtagg gagggaagag atttcattca 1440

ggtgcctcag aagataactt gcacctctgt aggatcacag tggaagggtc atgctgggaa 1500

ggagaagctg gagtcaccag aaaacccaat ggatgttgtg atgagcctta ctatttgtgt 1560

ggtcaatggg ccctactact ttctctcaat cctcacaact cctggctctt aataaccccc 1620

aaaactttct cttctgcagg tcaagagaaa ggatttctga aggcagccct ggaagtggag 1680

ttaggagctt ctaacccgtc atggtttcaa tacacattct tcttttgcca gcgcttctga 1740

agagctgctc tcacctctct gcatcccaat agatatcccc ctatgtgcat gcacacctgc 1800

acactcacgg ctgaaatctc cctaacccag ggggacctta gcatgcctaa gtgactaaac 1860

caataaaaat gttctggtct ggcctgactc tgacttgtga atgtctggat agctccttgg 1920

ctgtctctga actccctgtg actctcccca ttcagtcagg atagaaacaa gaggtattca 1980

aggaaaatgc agactcttca cgtaagaggg atgaggggcc caccttgaga tcaatagcag 2040

aa 2042

<210> 7

<211> 179

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys

50 55 60

Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu

65 70 75 80

Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys

85 90 95

Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg

115 120 125

Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser

130 135 140

Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala

145 150 155 160

Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp

165 170 175

Ser Arg Gly

<210> 8

<211> 178

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser

1 5 10 15

Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala

20 25 30

Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly

35 40 45

Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu

50 55 60

Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg

65 70 75 80

Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln

85 90 95

Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg

100 105 110

Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala

115 120 125

Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala

130 135 140

Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val

145 150 155 160

Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Ser

165 170 175

Arg Gly

<210> 9

<211> 537

<212> DNA

<213> 智人

<400> 9

gaggacctga aaaacgtgtt cccacccgag gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag 60

atctcccaca cccaaaaggc cacactggtg tgcctggcca caggcttcta ccccgaccac 120

gtggagctga gctggtgggt gaatgggaag gaggtgcaca gtggggtcag cacagacccg 180

cagcccctca aggagcagcc cgccctcaat gactccagat actgcctgag cagccgcctg 240

agggtctcgg ccaccttctg gcagaacccc cgcaaccact tccgctgtca agtccagttc 300

tacgggctct cggagaatga cgagtggacc caggataggg ccaaacctgt cacccagatc 360

gtcagcgccg aggcctgggg tagagcagac tgtggcttca cctccgagtc ttaccagcaa 420

ggggtcctgt ctgccaccat cctctatgag atcttgctag ggaaggccac cttgtatgcc 480

gtgctggtca gtgccctcgt gctgatggcc atggtcaaga gaaaggattc cagaggc 537

<210> 10

<211> 534

<212> DNA

<213> 智人

<400> 10

gacctgaaaa acgtgttccc acccgaggtc gctgtgtttg agccatcaga agcagagatc 60

tcccacaccc aaaaggccac actggtgtgc ctggccacag gcttctaccc cgaccacgtg 120

gagctgagct ggtgggtgaa tgggaaggag gtgcacagtg gggtcagcac agacccgcag 180

cccctcaagg agcagcccgc cctcaatgac tccagatact gcctgagcag ccgcctgagg 240

gtctcggcca ccttctggca gaacccccgc aaccacttcc gctgtcaagt ccagttctac 300

gggctctcgg agaatgacga gtggacccag gatagggcca aacctgtcac ccagatcgtc 360

agcgccgagg cctggggtag agcagactgt ggcttcacct ccgagtctta ccagcaaggg 420

gtcctgtctg ccaccatcct ctatgagatc ttgctaggga aggccacctt gtatgccgtg 480

ctggtcagtg ccctcgtgct gatggccatg gtcaagagaa aggattccag aggc 534

<210> 11

<211> 2008

<212> DNA

<213> 智人

<400> 11

atggcgtagt ccccaaagaa cgaggaccta gtaacataat tgtgcttcat tatggtcctt 60

tcccggcctt ctctctcaca catacacaga gcccctacca ggaccagaca gctctcagag 120

caaccctagc cccattacct cttccctttc cagaggacct gaaaaacgtg ttcccacccg 180

aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag gccacactgg 240

tgtgcctggc cacaggcttc taccccgacc acgtggagct gagctggtgg gtgaatggga 300

aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag cccgccctca 360

atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtctc ggccaccttc tggcagaacc 420

cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat gacgagtgga 480

cccaggatag ggccaaacct gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg ggtagagcag 540

gtgagtgggg cctggggaga tgcctggagg agattaggtg agaccagcta ccagggaaaa 600

tggaaagatc caggtagcgg acaagactag atccagaaga aagccagagt ggacaaggtg 660

ggatgatcaa ggttcacagg gtcagcaaag cacggtgtgc acttccccca ccaagaagca 720

tagaggctga atggagcacc tcaagctcat tcttccttca gatcctgaca ccttagagct 780

aagctttcaa gtctccctga ggaccagcca tacagctcag catctgagtg gtgtgcatcc 840

cattctcttc tggggtcctg gtttcctaag atcatagtga ccacttcgct ggcactggag 900

cagcatgagg gagacagaac cagggctatc aaaggaggct gactttgtac tatctgatat 960

gcatgtgttt gtggcctgtg agtctgtgat gtaaggctca atgtccttac aaagcagcat 1020

tctctcatcc atttttcttc ccctgttttc tttcagactg tggcttcacc tccggtaagt 1080

gagtctctcc tttttctctc tatctttcgc cgtctctgct ctcgaaccag ggcatggaga 1140

atccacggac acaggggcgt gagggaggcc agagccacct gtgcacaggt acctacatgc 1200

tctgttcttg tcaacagagt cttaccagca aggggtcctg tctgccacca tcctctatga 1260

gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc agtgccctcg tgctgatggc 1320

catggtaagg aggagggtgg gatagggcag atgatggggg caggggatgg aacatcacac 1380

atgggcataa aggaatctca gagccagagc acagcctaat atatcctatc acctcaatga 1440

aaccataatg aagccagact ggggagaaaa tgcagggaat atcacagaat gcatcatggg 1500

aggatggaga caaccagcga gccctactca aattaggcct cagagcccgc ctcccctgcc 1560

ctactcctgc tgtgccatag cccctgaaac cctgaaaatg ttctctcttc cacaggtcaa 1620

gagaaaggat tccagaggct agctccaaaa ccatcccagg tcattcttca tcctcaccca 1680

ggattctcct gtacctgctc ccaatctgtg ttcctaaaag tgattctcac tctgcttctc 1740

atctcctact tacatgaata cttctctctt ttttctgttt ccctgaagat tgagctccca 1800

acccccaagt acgaaatagg ctaaaccaat aaaaaattgt gtgttgggcc tggttgcatt 1860

tcaggagtgt ctgtggagtt ctgctcatca ctgacctatc ttctgattta gggaaagcag 1920

cattcgcttg gacatctgaa gtgacagccc tctttctctc cacccaatgc tgctttctcc 1980

tgttcatcct gatggaagtc tcaacaca 2008

Claims

1. 从来源于骨髓或血液的样品制备细胞群的方法，包括以下步骤：a)将样品分成含有50-99%的样品细胞的第一部分和含有50-1%的样品细胞的第二部分，b)用针对TCR α/β的第一标志物标记第一部分的细胞，c)用针对CD45RA的第二标志物标记第二部分的细胞，d)从第一和第二部分中除去标记的细胞，并将剩余的细胞合并成细胞群。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一标志物包含针对TCR α/β的抗体或抗原结合片段和检测部分。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二标志物包含针对CD45RA的抗体或抗原结合片段和检测部分。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，用针对CD19的第三标志物标记所述第一部分和/或所述第二部分和/或所述细胞群的细胞，并除去标记的细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第三标志物包含针对CD19的抗体或抗原结合片段和检测部分。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一和/或第二和/或第三标志物的检测部分是荧光染料、磁性颗粒或放射性标记。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤d)中，合并第一部分和第二部分，并从合并的部分除去标记的细胞。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤d)中，分别从第一部分和第二部分中除去标记的细胞，并且将各部分的剩余细胞合并。

9. 药物组合物，其包含可从骨髓、全血或处理过的血液获得的细胞群，其中所述细胞群耗尽TCR α/β阳性细胞和CD45RA阳性细胞达0.1至7.0 log。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述细胞群通过根据权利要求1至8中任一项所述的方法获得。

11.根据权利要求9或10所述的药物组合物用于在干细胞或骨髓移植后重建人的造血系统的用途。

12.根据权利要求9或10所述的药物组合物用于预防和治疗感染、混合嵌合状态、癌症复发或免疫病症的用途。