CN108226348A - 硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 - Google Patents
硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108226348A CN108226348A CN201810229008.3A CN201810229008A CN108226348A CN 108226348 A CN108226348 A CN 108226348A CN 201810229008 A CN201810229008 A CN 201810229008A CN 108226348 A CN108226348 A CN 108226348A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- neomycinsulphate
- substance
- relation
- neomycin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 18
- SYJXFKPQNSDJLI-HKEUSBCWSA-N neamine Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](N)C[C@@H]1N SYJXFKPQNSDJLI-HKEUSBCWSA-N 0.000 claims description 68
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 55
- PGBHMTALBVVCIT-VZXHOKRSSA-N neomycin C Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VZXHOKRSSA-N 0.000 claims description 40
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 18
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 17
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims description 8
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 3
- 230000010148 water-pollination Effects 0.000 claims description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 27
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229960003704 framycetin Drugs 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000187438 Streptomyces fradiae Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000009658 destructive testing Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明属于化学检测领域，具体涉及硫酸新霉素的组分及有关物质的HPLC检测方法，包括（1）色谱条件与系统适用性试验（2）溶液制备（3）测定等步骤。本发明提供的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，该方法操作简单，分离度好，能够检出新霉素B和C两个较大的组分及较多的有关物质，检测效率高，具有良好的专属性、精密度和准确度，与现有技术相比能够检出更多的杂质，能更有效的对硫酸新霉素中的组分及有关物质进行控制，具有很强的实用性。
Description
技术领域
本发明属于化学检测领域，具体涉及硫酸新霉素的组分及有关物质的HPLC检测方法。
背景技术
硫酸新霉素（Neomycin sulfate）是首个被发现的氨基糖苷类抗生素，它是1949年Waksman等从新霉素链霉菌代谢产物中分离得到的混合物，其抗菌谱广，对葡萄球菌属、棒状杆菌属有良好的抑菌作用，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属等肠杆菌科细菌亦有良好作用。硫酸新霉素的主要成分为新霉素B和新霉素C，新霉素A（新霉胺）是新霉素B、C的降解产物之一。由于硫酸新霉素没有紫外吸收，目前应用的检测方法主要有微生物检定法（效价法）、柱前衍生化法、HPLC-ELSD法等，上述这些方法均只测定了硫酸新霉素的含量，没有对其组分B和C及有关物质进行测定，中国药典2015年版二部采用薄层色谱法控制硫酸新霉素中新霉胺的含量，操作较为繁琐，灵敏度欠佳，专属性不强，且对其他有关物质没有控制。 因此，寻求一种能够有效分离且尽可能多的检出硫酸新霉素中有关物质的方法，对于硫酸新霉素的质量控制具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，该方法操作简单分离度较好，检出的有关物质多，检测效率高，专属性强，检验方法较稳定，能有效的控制硫酸新霉素的质量。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：
用亲水性十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Waters Xselect HSS T3柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，流动相：0.15mol/L的三氟乙酸溶液，流速：1ml/min，进样量：10μl，柱温：30℃，检测器雾化温度：45℃，新霉素C相对于新霉素B的保留时间为0.85～0.95（约为0.9），新霉素C与主峰新霉素B之间的分离度不低于3.0；
（2）溶液制备：
①供试品溶液制备：取本品适量，加水溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
②自身对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置20ml容量瓶中，用水稀释成浓度为0.05mg/ml的溶液，作为自身对照溶液；
③新霉胺对照品溶液的制备：精密称取新霉胺对照品适量，用水定量稀释成浓度为0.02mg/ml的溶液，即得；
（3）测定：分别精密量取供试品溶液和自身对照溶液各10ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；供试品溶液中杂质新霉胺的含量，用新霉胺对照品溶液以外标法计算，新霉素C及其他有关物质的含量，用自身对照溶液以自身对照法计算。
上述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，所述的检测器为电喷雾检测器（CAD）。
上述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，用HPLC法检测硫酸新霉素能将新霉素B与新霉素C分离，可单独测定得出这两个组分的含量。
以下为本发明曲咪新乳膏中硫酸新霉素含量的HPLC检测方法的方法学验证情况：
1、专属性试验
1.1 新霉素B与新霉素C的定位
称取新霉素B留乙酸酯对照品及新霉素C六乙酸酯对照品约1mg，分别置10ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得新霉素B与新霉素C定位用溶液。（新霉素B和新霉素C定位的液相色谱图见图1-2）
1.2 破坏性试验
取硫酸新霉素原料进行破坏，考察其降解情况。精密称取硫酸新霉素原料504.24mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液1ml，置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为未破坏的供试品溶液（硫酸新霉素原料未破坏的液相色谱图见图3）。
（1）酸破坏：精密量取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，加6mol/L的盐酸溶液1ml，放置16小时后，用2mol/L的氢氧化钠中和，并用水稀释至刻度，摇匀（硫酸新霉素原料酸破坏和酸破坏空白的液相色谱图见图4）。
（2）碱破坏：精密量取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，加2mol/L的氢氧化钠溶液1ml，放置16小时后，用6mol/L的盐酸中和，并用水稀释至刻度，摇匀（硫酸新霉素原料碱破坏和碱破坏空白的液相色谱图见图5）。
（3）氧化破坏：精密量取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，加双氧水3ml，放置16小时后，用6mol/L的盐酸中和，并用水稀释至刻度，摇匀（硫酸新霉素原料氧化破坏和氧化破坏空白的液相色谱图见图6）。
（4）高温破坏：精密量取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，置沸水浴中加热3小时后，取出，冷却，并用水稀释至刻度，摇匀（硫酸新霉素原料高温破坏的液相色谱图见图7）。
（5）光照破坏：精密量取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，置强光4000Lx48小时后，取出，用水稀释至刻度，摇匀（硫酸新霉素原料光照破坏的液相色谱图见图8）。
试验结果表明，硫酸新霉素在酸破坏的条件下，杂质新霉胺的含量增加，在氧化破坏的条件下，产生了新的降解杂质，且硫酸新霉素主峰与破坏试验产生的杂质峰分离良好，系统可行。其他破坏条件下均无新的降解杂质产生，说明硫酸新霉素在碱性、高温、光照的条件下稳定。
1.3溶剂干扰试验
取溶剂水照上述色谱条件测定，结果溶剂对测定无干扰（见图9）。
2、线性关系考察
2.1 硫酸新霉素B线性关系考察
精密取称硫酸新霉素标准品11.09mg，置10ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为硫酸新霉素对照品贮备液（浓度：0.8828mg/ml）。再精密量取0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、1.6、2.0ml，分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液1～7。照上述色谱条件测定，结果表明硫酸新霉素B在8.828μg/ml～176.553μg/ml（相当于杂质含量0.88%～17.7%）范围内线性关系良好，线性方程为y = 0.01844x + 0.1538，相关系数r为0.999（见图10）。
2.2 新霉胺线性关系考察
精密称取新霉胺对照品10.36mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为新霉胺对照品储备液（浓度为：0.1036mg/ml）。再精密量取0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液1～8。照上述色谱条件测定，结果表明新霉胺在1.036μg/ml～31.080μg/ml（相当于新霉胺含量0.1%～3.1%）范围内线性关系良好，线性方程为y = 0.02905x +0.03643，相关系数r为0.9983（见图11）。
3、溶液稳定性考察
取供试品溶液分别在放置0、2、4、8、12、16小时后进样测定，测定新霉素B、新霉素C、新霉胺的峰面积和其他杂质的总峰面积，结果表明供试品溶液在16小时内稳定，新霉素B峰面积的RSD为0.8%、新霉素C峰面积的RSD为1.4%、新霉胺峰面积的RSD为1.6%、其他杂质总峰面积的RSD为4.1%（见表1），说明溶液稳定性良好。
4、进样精密度试验
取前述硫酸新霉素B线性关系考察下制备得到的标准曲线溶液4及新霉胺线性关系考察下制备得到的标准曲线溶液6连续进样6针，分别以新霉素B和新霉胺的峰面积考察仪器的精密度，结果新霉素B峰面积的RSD为1.4%，新霉胺峰面积的RSD为1.1%（见下表2），表明仪器精密度良好。
5、重复性试验
取硫酸新霉素原料分别制备6份供试品溶液，计算新霉胺的含量，结果6份样品中新霉胺含量的RSD为2.8%（见下表3），符合方法学的要求。
6、新霉胺回收试验
取新霉素原料做加样回收实验，称取9份，每份约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，标记为回收率1～9，回收率1～3精密加入前述新霉胺线性关系考察项下的新霉胺对照品储备溶液1ml，回收率4～6精密加入新霉胺对照品储备溶液2ml，回收率6～9精密加入新霉胺对照品储备溶液3ml，用水稀释并定容至刻度，摇匀，即得。按上述方法进样测定，结果表明，平均回收率为93.1%（见下表4），符合方法学要求。
7、定量限及检出限
分别取前述硫酸新霉素B线性关系考察下制备得到的标准曲线溶液1和新霉胺线性关系考察下制备得到的标准曲线溶液1计算定量限及检测限，结果表明新霉素B定量限为6.54μg/ml（0.07μg），检测限为1.96μg/ml（0.02μg）；新霉胺定量限为1.16μg/ml（0.012μg），检测限为0.35μg/ml（0.003μg）。
本发明的有益效果为：
本发明提供的一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，该方法操作简单，分离度好，灵敏度高，检出有关物质多，具有良好的专属性、精密度和准确度，与现有技术相比能够检出更多的有关物质，能更好的控制硫酸新霉素的质量。
附图说明
图1为新霉素B定位的液相色谱图；
图2为硫酸新C定位的液相色谱图；
图3为硫酸新霉素原料未破坏的液相色谱图；
图4为硫酸新霉素原料酸破坏和酸破坏空白的液相色谱图；
图5为硫酸新霉素原料碱破坏和碱破坏空白的液相色谱图；
图6为硫酸新霉素原料氧化破坏和氧化破坏空白的液相色谱图；
图7为硫酸新霉素原料高温破坏的液相色谱图；
图8为硫酸新霉素原料光照破坏的液相色谱图；
图9为溶剂水的液相色谱图；
图10为本发明制备的标准曲线溶液中新霉素B的浓度x（mg/ml）与峰面积y的线性关系图；
图11为本发明制备的标准曲线溶液中新霉胺的浓度x（mg/ml）与峰面积y的线性关系图；
图12为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中新霉素B含量比较图；
图13为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中新霉素C含量比较图；
图14为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中新霉胺含量比较图；
图15为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中最大单杂含量比较图；
图16为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中其他杂质含量比较图；
图17为采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法对2个厂家生产的硫酸新霉素原料中总杂质含量比较图。
具体实施方式
实施例1
一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：
用亲水性十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Waters Xselect HSS T3柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，流动相：0.15mol/L的三氟乙酸溶液，流速：1ml/min，进样量：10μl，柱温：30℃，CAD检测器雾化温度：45℃，新霉素C相对于新霉素B的保留时间为0.85～0.95（约为0.9），新霉素C与主峰新霉素B之间的分离度不低于3.0；
（2）溶液制备：
①供试品溶液制备：取本品适量，加水溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
②自身对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置20ml容量瓶中，用水稀释成浓度为0.05mg/ml的溶液，作为自身对照溶液；
③新霉胺对照品溶液的制备：精密称取新霉胺对照品适量，用水定量稀释成浓度为0.02mg/ml的溶液，即得；
（3）测定:分别精密量取供试品溶液和自身对照溶液各10ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；供试品溶液中杂质新霉胺的含量，用新霉胺对照品溶液以外标法计算，新霉素C及其他有关物质的含量，用自身对照溶液以自身对照法计算。
应用效果
选择2家企业的共17批硫酸新霉素原料及中检院硫酸新霉素对照品，采用硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法的方法步骤对其组分及有关物质进行检测，测定结果见下表5 。
测定结果显示，新霉素B的含量范围是69.35%～84.58%，平均值76.23%，新霉素C的含量范围是10.21%～23.18%，平均值16.19%，新霉胺的含量范围是0.118%～0.363%，平均值0.209%，最大单杂的含量范围是1.25%～3.70%，平均值2.290%，其他杂质含量范围是5.07%～9.76%，平均值7.372%，总杂质含量范围是15.42%～30.06%，平均值23.77%。其中宜昌三峡制药有限公司生产的原料中新霉素C、新霉胺、最大单个杂质、总杂质含量在总体上要高于四川省长征药业股份有限公司生产的原料，而四川省长征药业股份有限公司生产的原料中新霉素B的含量和其他杂质含量比宜昌三峡制药有限公司生产的原料要略高一些。
上述可见，采用本发明硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，灵敏度高，具有良好的专属性、精密度和准确度，检出有关物质多，能够更有效的对硫酸新霉素中的组分及有关物质进行控制，具有很好的实际应用效果。
Claims (3)
1.硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：
用亲水性十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Waters Xselect HSS T3柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，流动相：0.15mol/L的三氟乙酸溶液，流速：1ml/min，进样量：10μl，柱温：30℃，检测器雾化温度：45℃，新霉素C相对于新霉素B的保留时间为0.85～0.95，新霉素C与主峰新霉素B之间的分离度不低于3.0；
（2）溶液制备：
①供试品溶液制备：取本品适量，加水溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
②自身对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置20ml容量瓶中，用水稀释成浓度为0.05mg/ml的溶液，作为自身对照溶液；
③新霉胺对照品溶液的制备：精密称取新霉胺对照品适量，用水定量稀释成浓度为0.02mg/ml的溶液，即得；
（3）测定:分别精密量取供试品溶液和自身对照溶液各10ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；供试品溶液中杂质新霉胺的含量，用新霉胺对照品溶液以外标法计算，新霉素C及其他有关物质的含量，用自身对照溶液以自身对照法计算。
2.权利要求1所述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，所述的检测器为电喷雾检测器CAD。
3.权利要求1所述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，用HPLC法将新霉素B与新霉素C分离，可单独测定这两个组分的含量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810229008.3A CN108226348A (zh) | 2018-03-20 | 2018-03-20 | 硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810229008.3A CN108226348A (zh) | 2018-03-20 | 2018-03-20 | 硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108226348A true CN108226348A (zh) | 2018-06-29 |
Family
ID=62658882
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810229008.3A Pending CN108226348A (zh) | 2018-03-20 | 2018-03-20 | 硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108226348A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110872333A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-03-10 | 宜昌三峡制药有限公司 | 一种新霉素制备过程的工艺控制方法 |
| CN111024870A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-17 | 河北科技大学 | 硫酸新霉素组分及有关物质的检测方法 |
| CN111560041A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-08-21 | 新宇药业股份有限公司 | 一种硫酸新霉素的杂质及其制备方法 |
| WO2021043117A1 (zh) * | 2019-09-03 | 2021-03-11 | 四川海思科制药有限公司 | 2-((1s,2s,3r,6s,8s)-2-(氨甲基)三环[4.2.1.03,8]壬烷-2-基)乙酸苯磺酸盐或其组合物杂质检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4097428A (en) * | 1975-08-01 | 1978-06-27 | Abbott Laboratories | Fortimicin C and process for production thereof |
| CN101446578A (zh) * | 2008-12-24 | 2009-06-03 | 宜昌三峡制药有限公司 | 发酵液中新霉素含量的快速测定方法及装置 |
| CN104558068A (zh) * | 2014-12-19 | 2015-04-29 | 宜昌三峡制药有限公司 | 一种提取高质量新霉素的方法及所用装置 |
-
2018
- 2018-03-20 CN CN201810229008.3A patent/CN108226348A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4097428A (en) * | 1975-08-01 | 1978-06-27 | Abbott Laboratories | Fortimicin C and process for production thereof |
| CN101446578A (zh) * | 2008-12-24 | 2009-06-03 | 宜昌三峡制药有限公司 | 发酵液中新霉素含量的快速测定方法及装置 |
| CN104558068A (zh) * | 2014-12-19 | 2015-04-29 | 宜昌三峡制药有限公司 | 一种提取高质量新霉素的方法及所用装置 |
Non-Patent Citations (9)
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021043117A1 (zh) * | 2019-09-03 | 2021-03-11 | 四川海思科制药有限公司 | 2-((1s,2s,3r,6s,8s)-2-(氨甲基)三环[4.2.1.03,8]壬烷-2-基)乙酸苯磺酸盐或其组合物杂质检测方法 |
| TWI759845B (zh) * | 2019-09-03 | 2022-04-01 | 大陸商四川海思科製藥有限公司 | ]壬烷-2-基)乙酸苯磺酸鹽或其組合物的雜質檢測方法 |
| CN110872333A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-03-10 | 宜昌三峡制药有限公司 | 一种新霉素制备过程的工艺控制方法 |
| CN111024870A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-17 | 河北科技大学 | 硫酸新霉素组分及有关物质的检测方法 |
| CN111024870B (zh) * | 2019-11-28 | 2022-05-17 | 河北科技大学 | 硫酸新霉素组分及有关物质的检测方法 |
| CN111560041A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-08-21 | 新宇药业股份有限公司 | 一种硫酸新霉素的杂质及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108226348A (zh) | 硫酸新霉素组分及有关物质的hplc检测方法 | |
| Ng et al. | HPLC separation of tetracycline analogues: comparison study of laser-based polarimetric detection with UV detection | |
| Wahl et al. | Impurity profiling of carbocisteine by HPLC-CAD, qNMR and UV/vis spectroscopy | |
| CN107064368A (zh) | 衍生化hplc法测定水合肼的方法 | |
| CN110763796A (zh) | 一种液相色谱-蒸发光散射检测器测定烟用甜味剂的方法 | |
| CN107121503B (zh) | 一种磷酸特地唑胺及其有关物质的分析方法 | |
| CN104198598A (zh) | 一种维生素b12的测定方法 | |
| CN112710763B (zh) | 一种hplc法检测尼扎替丁中n-亚硝基二甲胺的方法 | |
| Zhou et al. | HPLC‐ELSD analysis of spectinomycin dihydrochloride and its impurities | |
| Douville et al. | Evaporative light scattering detection (ELSD): a tool for improved quality control of drug substances | |
| CN102809625B (zh) | 一种穿心莲内酯有关物质的测定方法 | |
| Rote et al. | Development of HPTLC method for determination of cefpodoxime proxetil and ambroxol hydrochloride in human plasma by liquid–liquid extraction | |
| Martínez-Mejía et al. | Use of experimental design to optimize a triple-potential waveform to develop a method for the determination of streptomycin and dihydrostreptomycin in pharmaceutical veterinary dosage forms by HPLC-PAD | |
| CN110361481A (zh) | 一种血液中万古霉素药物浓度监测试剂盒及其检测方法 | |
| CN114544850B (zh) | 一种达格列净中间体及杂质的检测方法 | |
| Dighe et al. | Quantitative estimation and validation of dapagliflozin and metformin hydrochloride in pharmaceutical dosage form by RP-HPLC | |
| CN112986450B (zh) | 一种异丙托溴铵中杂质a的检测方法 | |
| CN108693286A (zh) | 一种药物中基因毒性杂质硫酸二异丙酯的检测方法 | |
| Chen et al. | Analysis of impurity profiling of arbekacin sulfate by ion-pair liquid chromatography coupled with pulsed electrochemical detection and online ion suppressor-ion trap-time off light mass spectrometry | |
| CN113671077A (zh) | 丙烯酰氯及其有关物质检测方法 | |
| CN102269737A (zh) | 一种酮戊二酸精氨酸盐的hplc检测方法 | |
| Jain et al. | Stability-indicating RP-HPLC Method for Estimation of Salmeterol xinafoate in Bulk and in Pharmaceutical Formulation | |
| Prajapati et al. | Development and validation of high performance thin-layer chromatographic method for determination of atomoxetine hydrochloride in pharmaceutical dosage forms | |
| CN114280190B (zh) | 一种用于检测双半胱氨酸有关物质的试剂盒 | |
| CN110361489A (zh) | 一种血液中阿米替林药物浓度监测试剂盒及其检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180629 |