CN108220380A - 利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法 - Google Patents

利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法 Download PDF

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CN108220380A CN201810151338.5A CN201810151338A CN108220380A CN 108220380 A CN108220380 A CN 108220380A CN 201810151338 A CN201810151338 A CN 201810151338A CN 108220380 A CN108220380 A CN 108220380A
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李梦楠
张晓琪
贾士儒
谭之磊
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Abstract

本发明涉及一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：将经培养后的两种微生物的培养液加入到钙盐和尿素的混合液中，反应装置敞口放置，暴露于空气中进行矿化反应，反应完成后取出沉淀物质进行洗涤与烘干，即得碳酸钙制品；所述两种微生物分别是脲酶高产菌株巴氏芽孢八叠球菌和碳酸酐酶高产菌株短小芽孢杆菌。本发明中两菌种共同参与矿化过程在提高碳酸钙生成效率的同时，可以减少氨气产生对环境的污染，也可捕获大气中的CO2，两者优势互补，协同促进整个矿化过程。该方法中所利用的微生物资源丰富，酶催化反应高效、专一，生产工艺简单，成本低廉，同时得到的碳酸钙制品纯度较高，具有较好的胶结作用，可广泛用于土木工程领域。

Description

利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法
技术领域
本发明涉及一种碳酸钙的制备方法，特别是一种利用微生物矿化反应制备碳酸钙的方法，在本发明中应用到了两种微生物的共同矿化作用来制备碳酸钙。
背景技术
碳酸钙是一种重要的无机化工材料，也是一种典型的生物矿物，广泛应用于橡胶、塑料、造纸、油墨、涂料、医药、环保、食品等不同的领域。目前常用的碳酸钙制备方法可分为机械粉碎法和化学反应法。机械粉碎法通常是将天然石灰石、白至石进行粉碎而得到碳酸钙，用此法制得的碳酸钙为重质碳酸钙，粒径较大，一般为微米级。化学反应法制得的为轻质碳酸钙，包括碳化法、沉淀反应法和气体扩散法等。前者获得的制品尺寸大，且制取过程能耗高，粉尘大，资源有限。后者工艺过程较为复杂，能耗大，且易引起环境污染。
生物矿化是一种利用微生物矿化制备碳酸钙的方法，该方法中利用的微生物资源丰富，且其所依赖的酶促反应专一且高效，环境友好，可制得不同尺寸的碳酸钙，所制得的碳酸钙具有良好的胶结作用，亦被广泛用于土木工程领域。
进行生物矿化的微生物主要有两类，一类是能够产生脲酶的微生物，另一类是能够产生碳酸酐酶的微生物。前者能够在短时间内通过分解底物尿素产生大量的CO3 2-，同时提高环境pH，具有较高的矿化效率，后者可促进CO2的可逆水合，以CO2的水合作用为碳酸钙生成提供CO3 2-，后者生成CO3 2-的反应不及前者迅速，但前者在尿素分解过程中会产生氨气，而后者的整个反应过程不仅可捕获大气中的CO2，同时对环境友好无污染。
现阶段利用微生物矿化沉积碳酸钙已成为一种广泛应用的技术：
专利CN 1778934 A中提到利用巴氏芽孢杆菌所产生的脲酶分解底物尿素，产生CO3 2-同时提高环境pH，在掺入Ca2+的情况下诱导产生碳酸钙，从而得到碳酸钙制品。
专利CN 104818719 A中利用产脲酶微生物巴氏芽孢杆菌分解尿素矿化沉积碳酸钙。首先将微生物菌液与营养盐混合，0.5～1h后再以一定比例与钙盐溶液掺和灌浆，此方法可有效提高早期沉淀物的产量。
专利CN 106699026 A中以产脲酶微生物作为混凝土裂缝修复剂，通过分解尿素进而矿化沉积碳酸钙修复裂缝。在制备过程中，通过将一部分裂缝修复剂直接掺入混凝土中，实现对混凝土基体粘结薄弱区的裂缝自修复；同时，将另一部分裂缝修复剂首先吸附到膨胀珍珠岩载体内，然后再掺入混凝土中，用以提高再生混凝土在服役期间的裂缝自修复能力。
专利CN 102121033 A中提到利用蜡样芽孢杆菌所产生的碳酸酐酶分别在钙离子和碳酸氢根离子溶液体系与钙离子和利用碳酸氢铵溶液释放CO2的气体扩散体系中矿化制得碳酸钙。
专利CN 103342484 B中将碳酸酐酶微生物胶质芽孢杆菌固载于载体上，在水泥基材料成型时把钙源埋入水泥基材料内部，将固载细菌的载体集中于试件表面区域5mm范围内，待试件成型后制造裂缝，放入恒温水浴，通入空气养护， 30d裂缝完全修复。
专利CN 104261736 B中利用产碳酸酐酶微生物捕获CO2矿化沉积碳酸钙从而修复水泥基材料裂缝。在水泥基材料制备过程中，首先将碳酸酐酶微生物浓缩菌液与酵母菌粉固载于同一载体上，再将底物与营养物质混合固载与另一载体上，将两种固载物质的载体加入水泥基试件制备材料中，对成型试件制作裂缝，然后置于30℃恒温水浴中通入空气养护，21d后裂缝完全修复。
在现有发明中微生物矿化沉积技术均只使用一种微生物进行矿化沉积碳酸钙，单纯使用脲酶微生物虽矿化速率快，但其产生的氨气对环境有污染作用，单纯使用碳酸酐酶微生物虽可捕获大气中的CO2，环境友好，但其矿化速率相对来说较为缓慢。本发明与现有发明相比，是对现有利用微生物矿化制备碳酸钙方法的进一步改进，通过产脲酶与碳酸酐酶的两种微生物共同矿化沉积碳酸钙，可以综合利用两种矿化反应的优势，提高碳酸钙的生成效率，同时减轻尿素分解产生的氨气对环境的污染，还可捕获大气中的CO2。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术的不足之处，提供一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的新方法。
本发明实现目的的技术方案如下：
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，将经培养后分别接种有两种微生物的培养液加入到钙盐和尿素的混合液中，反应装置敞口放置，暴露于空气中进行矿化反应，反应完成后取出沉淀物质进行洗涤与烘干，即得碳酸钙制品；
所述两种微生物分别是脲酶高产菌株巴氏芽孢八叠球菌和碳酸酐酶高产菌株短小芽孢杆菌。
而且，巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基组分为：酵母提取物19～21g/L，硫酸铵9～11g/L，0.13mol/L的pH 8.5～9.5的Tris-Hcl；短小芽孢杆菌培养所用培养基组分为：蛋白胨4～6g/L，牛肉提取物1～3g/L，酵母提取物1～3g/L， NaCl 4～6g/L，pH 7.5～8.5。
而且，两种微生物的活化培养条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养12～24h。
而且，两种微生物的扩大培养条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养 18～24h。
而且，所取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌培养液的体积比为1～3：1。
而且，向钙盐和尿素混合液中掺入巴氏芽孢八叠球菌之后0～1h内掺入短小芽孢杆菌培养液。
而且，在矿化体系中两种微生物的培养液与钙盐和尿素混合液的体积比为1： 4。
而且，钙盐的浓度为1～2mol/L，钙盐与尿素的物质的量的比为1～2：1。
而且，矿化反应条件为：30～40℃，100～150r/min，反应24～48h。
而且，所述钙盐包括无机钙盐氯化钙，硝酸钙和有机钙盐乳酸钙，甲酸钙和乙酸钙。
本发明与现有技术相比的优点和积极效果如下：
本发明同时利用两种微生物进行矿化反应制备碳酸钙，一方面巴氏芽孢八叠球菌所产生的脲酶能够在短时间内分解底物尿素产生大量的CO3 2-，同时提高环境pH，另一方面短小芽孢杆菌所产生的碳酸酐酶可促进CO2的可逆水合，以CO2的水合作用为碳酸钙生成提供CO3 2-，后者生成CO3 2-的反应不及前者迅速，但前者在尿素分解过程中会产生氨气，而后者的整个反应过程不仅可捕获大气中的 CO2，同时对环境友好无污染。
本发明可同时利用两种矿化反应的优势，两者优势互补，弥补两者单独进行矿化反应时矿化效率低，污染环境等缺点。整个工艺过程操作简单，环境友好，碳酸钙制备效率高，所制得的碳酸钙被广泛用于工业中。
附图说明
图1为不同条件下得到的碳酸钙沉淀的XRD图谱，其中C代表方解石，V 代表球霰石。a、b、c、d、e、f分别代表在实施例1、2、3、4、5、 6条件下得到的碳酸钙沉淀的XRD图谱。
图2为不同条件下得到的碳酸钙沉淀的SEM图。图2a、图2b、图2c、图2d、图2e、图2f分别代表在实施例1、2、3、4、5、6条件下得到的碳酸钙沉淀的XRD图谱。
具体实施方式：
本发明提供一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，利用两种微生物各自产生的脲酶和碳酸酐酶的共同催化作用，有效的提高了矿化生成碳酸钙的效率。在该方法中将两种微生物分别进行活化培养，随后按一定比例取两种微生物的培养液，掺入到钙盐和尿素混合液中，反应完成后取出沉淀物质进行洗涤与烘干，即得碳酸钙制品。在同一矿化条件下使用该方法矿化制备碳酸钙相比单纯使用脲酶微生物，矿化效率最大提高了12.6％。该发明的主要特点是两种微生物共同矿化制备碳酸钙，本发明利用两种微生物在培养过程中各自产生的脲酶和碳酸酐酶的催化作用，前者可以在短时间内催化产生大量的CO3 2-，同时迅速提高环境pH，而后者通过催化CO2的可逆水合，可以减少前者分解尿素提供CO3 2-的量，从而减少氨气的产生。
在本发明中，巴氏芽孢八叠球菌所产生的脲酶催化尿素水解，可为碳酸钙生成提供CO3 2-，同时提高环境pH，在引入Ca2+后，在微生物的作用下即会诱导碳酸钙生成，整个反应过程如下所示：
NH2COOH+H2O→NH3+H2CO3
Cell-Ca2++CO3 2-→Cell-CaCO3
在本发明中，短小芽孢杆菌所产生的碳酸酐酶促进CO2的可逆水合，以CO2的水合作用为碳酸钙生成提供CO3 2-，在引入Ca2+后，在微生物的作用下即会诱导碳酸钙生成，整个反应过程如下所示：
本发明所涉及到的一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，具体包括以下步骤：
(1)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中进行活化培养，条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养12～24h。
(2)将活化完成的两株菌分别转接至已灭菌的新鲜培养基中进行扩大培养，条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养18～24h。
(3)按一定比例取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，掺入到钙盐和尿素混合液中。其中所取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌培养液的体积比为1～3：1，钙盐的浓度为1～2mol/L，钙盐与尿素的物质的量的比为1～2：1，整个矿化体系中两种微生物的培养液与钙盐和尿素混合液的体积比为1：4。置于30～40℃，100～150r/min条件下进行矿化反应，反应24～48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤2～3遍，置于60℃下干燥2～3h后取出，即得碳酸钙制品。
上述方法的具体作用，通过以下6个实施例来具体说明。
实施例1
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，步骤如下：
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10g，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌 20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为1:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，将两种微生物的培养液同时掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。
实施例2
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，步骤如下：
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10g，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌 20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为1:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，以先掺入巴氏芽孢八叠球菌培养液1h后再掺入短小芽孢杆菌培养液的方式将两种培养液掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。
实施例3
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，步骤如下：
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌 20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为2:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，将两种微生物的培养液同时掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。
实施例4
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，步骤如下：
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为2:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，以先掺入巴氏芽孢八叠球菌培养液1h后再掺入短小芽孢杆菌培养液的方式将两种培养液掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。
实施例5
一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，步骤如下：
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌 20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为3:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，将两种微生物的培养液同时掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。
实施例6
(1)配制巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基：称取Tris 15.75g溶于1L蒸馏水中，用50％的盐酸调节pH，配置成pH 9.0的Tris-Hcl缓冲液，再称取酵母提取物20g，硫酸铵10，溶于1LTris-Hcl缓冲液中；配制短小芽孢杆菌培养所用培养基：称取蛋白胨5g，牛肉提取物1.5g，酵母提取物1.5g，NaCl 5g，溶于 1L蒸馏水中调节pH为8.0。将配制的液体培养基分装于锥形瓶中，121℃灭菌 20min后取出备用。
(2)称取无水氯化钙166.5g，尿素60.1g溶于1L蒸馏水中，混合均匀，该混合溶液中氯化钙的浓度约为1.5mol/L，氯化钙与尿素的物质的量的比约为 1.5：1。
(3)在超净工作台中挑取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌单菌落分别接种至20mL已灭菌的培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养16h。
(4)将活化完成的两株菌在超净工作台中分别取1mL转接至100mL已灭菌的新鲜培养基中，置于30℃，180r/min条件下摇床培养18h。
(5)按体积比为3:1取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌的培养液，以先掺入巴氏芽孢八叠球菌培养液1h后再掺入短小芽孢杆菌培养液的方式将两种培养液掺入到氯化钙和尿素的混合液中，两种微生物的培养液与氯化钙和尿素混合液的体积比为1：4。反应装置敞口，置于37℃，120r/min条件下进行矿化反应，反应48h后取出沉淀物质用蒸馏水洗涤3遍，置于60℃下干燥2h后取出，即得碳酸钙制品。

Claims (10)

1.一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：将经培养后分别接种有两种微生物的培养液加入到钙盐和尿素的混合液中，反应装置敞口放置，暴露于空气中进行矿化反应，反应完成后取出沉淀物质进行洗涤与烘干，即得碳酸钙制品；
所述两种微生物分别是脲酶高产菌株巴氏芽孢八叠球菌和碳酸酐酶高产菌株短小芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：巴氏芽孢八叠球菌培养所用培养基组分为：酵母提取物19～21g/L，硫酸铵9～11g/L，0.13mol/L的pH 8.5～9.5的Tris-Hcl；短小芽孢杆菌培养所用培养基组分为：蛋白胨4～6g/L，牛肉提取物1～3g/L，酵母提取物1～3g/L，NaCl 4～6g/L，pH 7.5～8.5。
3.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：两种微生物的活化培养条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养12～24h。
4.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：两种微生物的扩大培养条件为25～37℃，150～200r/min，摇床培养18～24h。
5.根据权利要求1或2所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：所取巴氏芽孢八叠球菌和短小芽孢杆菌培养液的体积比为1～3：1。
6.根据权利要求1或2所述的一种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：向钙盐和尿素混合液中掺入巴氏芽孢八叠球菌之后0～1h内掺入短小芽孢杆菌培养液。
7.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：在矿化体系中两种微生物的培养液与钙盐和尿素混合液的体积比为1：4。
8.根据权利要求1所述的种利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：钙盐的浓度为1～2mol/L，钙盐与尿素的物质的量的比为1～2：1。
9.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：矿化反应条件为：30～40℃，100～150r/min，反应24～48h。
10.根据权利要求1所述的利用两种微生物共同矿化制备碳酸钙的方法，其特征在于：所述钙盐包括无机钙盐氯化钙，硝酸钙和有机钙盐乳酸钙，甲酸钙和乙酸钙。
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