CN108218777A - 一种硫取代苯基吡唑类xor抑制剂及制备与应用 - Google Patents

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CN108218777A CN201711323589.9A CN201711323589A CN108218777A CN 108218777 A CN108218777 A CN 108218777A CN 201711323589 A CN201711323589 A CN 201711323589A CN 108218777 A CN108218777 A CN 108218777A
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Abstract

本发明属于医药化工技术领域，公开了一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂及制备与应用。所述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂具有式(I)所示的结构式。其制备方法为：将5‑溴‑2‑氟‑1‑氰基苯、硫化钠在DMF中室温反应，得到5‑溴‑2‑巯基‑1‑氰基苯，然后与溴代烷烃和无机碱在有机相中加热反应，得到5‑溴‑2‑烷硫基‑1‑氰基苯，再与1H‑吡唑‑4‑甲酸酯经C‑N偶联反应，水解、酸化后得到产物。本发明的产物对与痛风有关的黄嘌呤氧化酶表现出优良的抑制作用，并在急性高尿酸血症小鼠模型中，表现出优良的抑制效果，可用于制备抗高尿酸血症或痛风药物。

Description

一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂及制备与应用
技术领域
本发明属于医药化工技术领域，具体涉及一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂及制备与应用。
背景技术
尿酸是嘌呤在体内代谢的终产物，由次黄嘌呤、黄嘌呤在黄嘌呤氧化还原酶(xanthine oxidoreductase，XOR)的作用下生成。由于人类和灵长类动物的嘌呤代谢途径中缺乏尿酸氧化酶，不能将尿酸降解成极易溶于水的尿囊素，只能经肾脏排泄绝大部分尿酸。尿酸的过多产生以及排泄的减少都易导致高尿酸血症，进而形成痛风。
当尿酸在关节以及周围组织中沉积结晶时，会造成常见的关节炎。痛风是成年男性中最普遍的一种炎性关节病，并且在发达国家其患病率呈上升趋势，已成为威胁人类健康的严重代谢性疾病。另外，高尿酸血症和痛风也和一些慢性疾病有关，诸如代谢综合征、肾病以及心脑血管疾病。高尿酸血症也被认为与成年人疾病(比如高血压症)的形成有密切的关系。因此，对于高尿酸血症的治疗不仅可以有效治疗痛风而且可以有效预防各种与日常饮食有关的疾病。
控制尿酸水平是预防和治疗痛风的关键。目前，治疗高尿酸血症的药物除了抗炎、镇痛药用来缓解症状外，通过药物降低血尿酸浓度是防治痛风发生的有效方法，涉及促尿酸排泄和抑制尿酸生成两个方面。已上市的相关药物主要有4大类：1)以肾小管尿酸转运体为靶点的降尿酸药物，如来辛奴拉(lesinurad)、RDEA3170、阿卤芬酯(arhalofenate)和UR-1102；2)以XOR为靶点的降尿酸药物，如非布索坦和乌地辛(ulodesine)；3)黄嘌呤氧化还原酶和肾小管尿酸转运体的双重抑制剂，如KUX-1151和RLBN1001；4)尿酸氧化酶，如培格洛替酶(pegloticase，Krystexxa)和拉布立酶(rasburicase，Fasturtec)。
促尿酸排泄是降尿酸疗法的重要方面之一，通过调节尿酸盐阴离子转运体1(URAT1)、葡萄糖转运体9(GLUT9)和有机阴离子转运体家族(OAT)等影响着肾尿酸的排泄。目前临床上使用的促尿酸排泄的药物有苯溴马隆、丙磺舒、磺吡酮(苯磺唑酮sulfinpyrazone)等。但是，研究发现苯溴马隆有引起暴发性肝炎的危险，已从欧洲市场撤出，美国也因此未批准其上市；丙磺舒和苯磺唑酮均有抑制造血功能的严重不良反应。来辛奴拉是RDEA806的活性代谢产物。它能抑制URAT1和OAT4的尿酸转运功能，从而促进尿酸在肾的排泄。III期临床研究表明：该药200和400mg/d与别嘌醇或非布索坦联合用药，有效率可达90％，未发现严重不良反应，只有恶心、腹泻、便秘等常见不良反应，安全性较好。已于2015年9月在美国经FDA批准上市，联合XOR抑制剂用于高尿酸血症和(或)痛风的治疗，其上市后的进一步用药相关信息尚未报道。RDEA3170是新一代的URAT1选择性抑制剂，研究发现，RDEA3170体外对URAT1转运尿酸的抑制作用是苯溴马隆的3倍、是磺吡酮和丙磺舒的100倍。I期临床试验，证实了其降尿酸作用，目前，正在开展II期临床试验，评估其最佳治疗剂量，以及与非布索坦和别嘌醇的联合用药，研究结果尚未发布。阿卤芬酯是卤芬酯的对映体，通过抑制肾小管尿酸转运体URAT1、OAT4和OAT10，减少尿酸的重吸收。该药不仅有促尿酸排泄作用，还有抗炎作用。II期临床试验表明该药单药治疗、联合别嘌醇、联合非布索坦都是有效的促尿酸排泄药，有良好的应用潜力。
XOR是体内嘌呤分解代谢过程中的关键酶，与高尿酸血症、痛风的发生密切相关，通过抑制XOR的生物活性，可以阻断黄嘌呤氧化为次黄嘌呤、次黄嘌呤氧化为尿酸的通路，有效降低血尿酸水平，达到预防和治疗高尿酸血症和痛风的效果。目前已上市的XOR抑制剂有三种：基于机制的XOR抑制剂别嘌醇；基于结构的XOR抑制剂非布索坦；混合机制的抑制剂托匹司他。别嘌醇会引起严重的过敏反应、抑制骨髓造血功能等不良反应。非布索坦作为新型的抗痛风药物，通过肝脏代谢，可以较好的避免别嘌醇因肾脏代谢引起的不良反应，但其仍然存在肝功能异常、皮疹、腹泻、头疼和关节痛等常见的不良反应；托匹司他于2013年6月被日本批准上市，用于痛风或非痛风患者的高尿酸血症治疗。
此外，乌地辛是一种嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂，与XOR抑制剂或选择性XOR抑制剂相比，能更强地抑制尿酸前体的产生。虽然其作为一种嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂，有显著的降尿酸效果，但由于嘌呤核苷酸缺乏时会引起免疫缺陷和自身免疫性疾病，所以安全性不是很理想。
目前发现的能对URAT1和XOR有双重作用的药物非常少。KUX-1151是第1个进入临床试验的具有对XOR和URAT1双重作用的药物，在日本进行I期和II期临床研究，对其安全性和有效性进行临床评价，相关试验结果尚未报道。RLBN-1001是一种抗癌药物，但却能显著降低人血尿酸水平，具有对XOR和URAT1的双重抑制作用，在美国已进入临床研究阶段，但研究结果还未报道。另外一些新颖的RLBN-1001类似物，如RLBN-2020系列、RLBN-3010系列等，据报道具有更强的活性，抑制XOR的活性是别嘌醇的4倍，对URAT1的抑制作用与来辛奴拉相当，其中一个化合物对GLUT9还有中等程度的抑制作用。
尿酸氧化酶能把尿酸转化为溶于水的尿囊素，随尿液排出体外，因为人类缺失了尿酸酶的表达，所以只有通过引入外源性尿酸酶才能促进尿酸分解。2010年培格洛替酶在美国已批准上市，它经静脉给药用于治疗严重和难治性痛风，有显著的降尿酸能力。拉布立酶的降尿酸作用速度虽明显优于别嘌醇，但由于其与输液反应、过敏反应、高铁血红蛋白血症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏引起的溶血高度相关，所以限用于防治血液恶性肿瘤患者的急性高尿酸血症。
近年来高尿酸血症的发病率逐渐升高，给人们的生活带来了痛苦和不便，而目前在临床上所使用的降尿酸药物品种有限且均具有非常明显的副作用，因此，研究高效低毒的降尿酸药物具有重要的意义。随着近年来对XOR结构及作用机制等的不断研究，以XOR为靶点的抗高尿酸血症药物研发已取得一定的进展，开发高效低毒的XOR抑制剂是降低血液尿酸水平、治疗痛风的重要方向之一。
发明内容
针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂。
本发明的另一目的在于提供上述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂，其结构如式(I)所示：
其中，R代表C1-C6的烷基。优选的式(I)中，R分别代表异丙基、异丁基、仲丁基或乙基丁基。
除非另有说明，本发明的术语有如下含义：
“氢”是指氕(1H)，它是氢元素的主要稳定同位素。
“烷基”表示饱和脂肪烃基，包括直链和支链基团。
更优选的式(I)化合物包括如下任一项所述的化合物：
1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸。
上述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)在氮气保护下，将5-溴-2-氟-1-氰基苯(II)、硫化钠在有机溶剂中室温反应，得到5-溴-2-巯基-1-氰基苯(III)；
(2)将5-溴-2-巯基-1-氰基苯、溴代烷烃和无机碱在有机溶剂中加热反应，得到5-溴-2-烷硫基-1-氰基苯(IV)；
(3)氮气保护下，将5-溴-2-烷硫基-1-氰基苯、1H-吡唑-4-甲酸酯、CuI、无机碱、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺在有机溶剂中，经C-N偶联反应，得到1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸酯(V)；
(4)1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸酯经碱性水解、酸化后得到1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I)。
优选地，步骤(1)、(2)、(3)中所述的有机溶剂是指DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；步骤(2)、(3)中所述的无机碱是指K2CO3；步骤(4)中所述碱性水解、酸化是指在四氢呋喃和和乙醇的混合溶液(EtOH/THF)加入1MNaOH水溶液水解，再加入1M HCl水溶液酸化。
上述制备方法的合成路线图如图1所示。图中条件表示如下：i：Na2S，DMF；ii：溴代烷烃，K2CO3，DMF；iii：1H-吡唑-4-甲酸酯、CuI、K2CO3、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺、DMF；iv：1M NaOH，EtOH/THF，1M HCl。
上述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用。
优选地，所述抗高尿酸血症或痛风药物包括作为有效成分的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂或其药学上可接受的盐、酯和药学上可接受的载体。
优选地，所述药学上可接受的盐包括硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂与金属离子、有机碱形成的盐，可以保留母体化合物的生物有效性和性质的盐。
更优选地，所述金属离子是碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，所述有机碱是乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、哌啶或哌嗪。
本发明的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂及其制备方法具有如下优点及有益效果：
本发明的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂具有与已知黄嘌呤氧化酶抑制剂不同的化学结构；如在下面的实验例中所证实的，它们对与痛风有关的黄嘌呤氧化酶表现出优良的抑制作用，并在急性高尿酸血症小鼠模型中，表现出优良的抑制效果；因此，它们可以用于预防和治疗与黄嘌呤氧化酶相关的疾病，例如，高尿酸血症、心力衰竭、心血管疾病、高血压、肾疾病、炎症、关节病等。
附图说明
图1为本发明硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸的合成路线图。
图2为急性高尿酸血症小鼠给予实施例1的化合物I1和模型对照组、阳性对照组后血浆中尿酸含量随时间的变化图。
图3为长期高尿酸血症小鼠给予实施例1的化合物I1(5mg/kg)和对照组(Control)、模型对照组(Model)，阳性对照组(febuxostat(5mg/kg))后血浆中肌酐(Crea)、尿素氮(Urea Nitrogen)和尿酸(Uric acid)的测定结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
本实施例的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I1)的合成：
(1)N2保护下，5-溴-2-氟-1-氰基苯(II，3g，15mmol)、硫化钠(1.3g，16.5mmol)在DMF(30mL)中室温反应5h，TLC跟踪反应完全。加入300mL氢氧化钠溶液(1mol/L)搅拌0.5h。二氯甲烷洗涤(300mL×2)，水相用盐酸(6mol/L)酸化到pH＝2，二氯甲烷萃取(400mL×2)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥、浓缩，得5-溴-2-巯基-1-氰基苯(III)1.0g，收率31.2％。
(2)5-溴-2-巯基-1-氰基苯(0.5g，2.3mmol)溶于DMF(10mL)中，加入K2CO3(1.0g，7.0mmol)室温搅拌0.5h，加入溴代异丙烷(1.2g，7.0mmol)，50℃下反应5h，TLC跟踪反应完全。冷至室温，100mL水稀释，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝20:1)，得5-溴-2-异丙硫基-苯甲腈(IV1)0.2g，收率35.6％。
(3)N2保护下，1-H-吡唑-3-甲酸乙酯(0.11g，0.8mmol)、CuI(15.3mg，0.08mmol)、K2CO3(0.23g，1.7mmol)、5-溴-2-异丙硫基-苯甲腈(IV1，0.24g，1.0mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺(22.8mg，0.16mmol)和DMF(3mL)加入到25mL烧瓶中，110℃下反应24h。冷至室温，10mL水稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝10:1)，得1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(V1)0.15g，收率98.0％。
(4)1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(0.12g，0.38mmol)溶入THF(4mL)和乙醇(4mL)的混合溶液中，加入1M NaOH 0.8mL，回流1h，冷至室温，加入1M HCl调节pH为2-3，加水稀释，固体析出，抽滤，滤饼用水洗至中性，干燥，得1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I1)0.11g，收率100％。
产物的结构表征数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H,CH),8.16(s,1H,CH),7.96(d,1H,J＝8.7Hz,Ar-H),7.88(s,1H,Ar-H),7.54(d,1H,J＝8.7Hz,Ar-H),3.47(m,1H,CH(CH3)2),1.07(d,J＝6.5Hz,6H,CH(CH 3)2)；
13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ163.8,143.0,138.7,137.8,132.8,132.1,124.3,124.1,118.2,116.9,114.8,38.4,23.0。
实施例2
本实施例的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I2)的合成：
(1)5-溴-2-巯基-1-氰基苯(III，0.8g，4.0mmol)溶于DMF(10mL)中，加入K2CO3(1.6g，12.0mmol)，室温搅拌0.5h，加入溴代异丁烷(1.8g，12.0mmol)，85℃下反应3h，TLC跟踪反应完全。冷至室温，100mL水稀释，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝20:1)，得5-溴-2-异丁硫基-苯甲腈(IV2)0.56g，收率54.7％。
(2)N2保护下，1-H-吡唑-3-甲酸乙酯(0.21g，1.5mmol)、CuI(28.7mg，0.15mmol)、K2CO3(0.43g，3.1mmol)、5-溴-2-异丁硫基-苯甲腈(IV2，0.46g，1.8mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺(42.7mg，0.3mmol)和DMF(3mL)加入到25mL烧瓶中，110℃下反应24h。冷至室温，10mL水稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝10:1)，得1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(V2)0.29g，收率58.7％。
(3)1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(0.2g，0.6mmol)溶入THF(6mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1M NaOH水溶液1.2mL，回流1h，冷至室温，加入1MHCl水溶液调节pH为2-3，加水稀释，固体析出，抽滤，滤饼用水洗至中性，干燥，得白色固体1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I2)0.15g，收率82.9％。
产物结构表征数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H,COOH),9.13(s,1H),8.40(d,1H,J＝2.5Hz,CH),8.22-8.18(dd,1H,J＝8.2and 2.0Hz,Ar-H),8.12(s,1H,Ar-H),7.73(d,1H,J＝8.9Hz,Ar-H),3.05(d,2H,J＝6.8Hz,CH 2CH(CH3)2),1.92-1.76(m,1H,CH2CH(CH3)2),1.02(d,6H,J＝6.6Hz,CH2CH(CH 3)2)；
13C NMR(DMSO-d6)δ163.8,142.9,140.7,137.1,132.0,130.0,124.4,118.1,116.8,112.6,41.4,28.1,22.0。
实施例3
本实施例的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸的合成：
(1)5-溴-2-巯基-1-氰基苯(III，0.5g，2.3mmol)溶于DMF(10mL)中，加入K2CO3(1.0g，7.0mmol)，室温搅拌0.5h，加入溴代仲丁烷(1.0g，7.0mmol)，室温下反应2h，TLC跟踪反应完全。冷至室温，100mL水稀释，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝20:1)，得5-溴-2-仲丁硫基-苯甲腈(IV3)0.3g，收率48.3％。
(2)N2保护下，1-H-吡唑-3-甲酸乙酯(0.14g，1.0mmol)、CuI(19.1mg，0.1mmol)、K2CO3(0.29g，2.1mmol)、5-溴-2-仲丁硫基-苯甲腈(IV3，0.32g，1.2mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺(28.5mg，0.2mmol)和DMF(3mL)加入到25mL烧瓶中，110℃下反应24h。冷至室温，10mL水稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝10:1)，得1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(V3)0.2g，收率60.7％。
(3)1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(0.2g，0.6mmol)溶入THF(6mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1M NaOH水溶液1.2mL，回流1h，冷至室温，加入1MHCl水溶液调节pH为2-3，加水稀释，固体析出，抽滤，滤饼用水洗至中性，干燥，得白色固体1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I3)0.16g，收率88.5％。
产物结构表征数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.85(s,1H,COOH),8.28(s,1H,CH),7.55(s,1H,CH),7.34(dd,J＝8.8and 2.5Hz,1H,Ar-H),7.26(s,1H,Ar-H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H,Ar-H),2.69(q,J＝6.5Hz,1H,CHCH3CH2CH3),0.75(m,2H,CHCH3CH 2CH3),0.42(d,J＝6.7Hz,3H,CHCH 3CH2CH3),0.12(t,J＝7.4Hz,3H,CHCH3CH2CH 3)；
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ163.8,143.0,138.7,137.8,132.9,132.1,124.1,118.2,116.9,114.9,44.9,29.3,20.5,11.5。
实施例4
本实施例的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸的合成：
(1)5-溴-2-巯基-1-氰基苯(III，0.6g，2.8mmol)溶于DMF(5mL)中，加入K2CO3(1.16g，8.4mmol)室温搅拌0.5h，加入1-溴-2-乙基丁烷(1.39g，8.4mmol)，80℃下反应3h，TLC跟踪反应完全。冷至室温，50mL水稀释，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝1:20)，得5-溴-2-乙基丁硫基-苯甲腈(IV4)0.45g，收率53.9％。
(2)N2保护下，1-H-吡唑-3-甲酸乙酯(0.17g，1.25mmol)、CuI(23.9mg，0.125mmol)、K2CO3(0.35g，2.6mmol)、5-溴-2-乙基丁硫基-苯甲腈(IV4，0.45g，1.5mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺(35.6mg，0.25mmol)和DMF(3mL)加入到25mL烧瓶中，110℃下反应24h。冷至室温，10mL水稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(V乙酸乙酯:V石油醚＝1:10)，得1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(V4)0.3g，收率58.2％。
(3)1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸乙酯(0.28g，0.8mmol)溶入THF(6mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1M NaOH水溶液1.2mL，回流1h，冷至室温，加入1MHCl水溶液调节pH为2-3，加水稀释，固体析出，抽滤，滤饼用水洗至中性，干燥，得1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸(I4)0.25g，收率87.7％。
产物结构表征数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H,COOH),9.14(s,1H,CH),8.41(s,1H,CH),8.20(d,J＝8.8Hz,1H,Ar-H),8.13(s,1H,Ar-H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H,Ar-H),3.12(d,J＝5.9Hz,2H,CH 2CH(CH2CH3)2),1.52(dt,J＝11.9,6.1Hz,1H,CH2CH(CH2CH3)2),1.48-1.38(m,4H,CH2CH(CH 2CH3)2),0.87(t,J＝7.2Hz,6H,CH2CH(CH2CH 3)2；
13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ163.81,142.92,140.70,137.11,132.01,130.06,124.31,123.96,118.14,116.76,112.67。
以上实施例所得产物的活性评价：
一、化合物I1-I4对XOR的体外抑制活性评价
(1)溶液配制
缓冲液：将10×PBS(pH 7.4)稀释为1×PBS。除特别说明，反应体系中所指PBS均指1×PBS。
底物：称取15.2mg黄嘌呤，加入45mL PBS超声促溶，再加PBS定容至200mL，即得0.5mmol/L的底物溶液。
酶液：冰浴下，用20mL的PBS稀释10.2μL黄嘌呤氧化还原酶母液，即得到0.5μg/100μL的酶液。
待测化合物：分别准确称取实施例1、2、3、4中的产物I1-I4，用DMSO配制成1mmol/L的溶液贮备，于20℃避光储存。使用前用PBS稀释至所需浓度，DMSO含量要控制在5％以内以保证其对酶活无影响。
(2)测定
将上述配好的PBS溶液、样品或空白溶液(空白溶液为PBS溶液)、100μL酶液依次加入96孔板，在酶标仪中37℃下孵育3min，接着向孵化好的微孔板中加入底物启动反应，295nm处每隔1min读数一次，共读5min，每组实验平行测定三次。将在各浓度下的试验化合物的初速度转化为基于没有抑制剂存在下的初速度的抑制率百分比(％)，计算IC50值，结果如表1所示。
表1
由表1结果可知，本发明所得化合物I1-I4均在nM水平上表现出了对XOR的抑制作用，具有潜在的XOR抑制剂开发前景。
二、化合物I1在急性高尿酸血症小鼠模型中的降尿酸活性评价
(1)18-22g的SPF级ICR小鼠适应性喂养一周后，随机分组，分为模型对照组(Model组，氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤500mg·kg-1)，阳性对照组(氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤500mg·kg-1+非布索坦5mg·kg-1)，I1组(氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤500mg·kg-1+I1化合物5mg·kg-1)，每组8只。
(2)实验前称量小鼠体重，给予模型对照组及各给药组皮下注射氧嗪酸钾300mg·kg-1+腹腔注射次黄嘌呤500mg·kg-1，1h后测定血尿酸水平(记为1h血尿酸)，并立即对各药物组分别灌胃给予待测药物，模型对照组灌胃给予等量溶媒，给药后1h、2h、3h、4h分别测定尿酸值(分别记为2h、3h、4h、5h血尿酸)。所得结果以graphpad 6.0作图，以one-tailedStudents t-test统计分析，结果如图2所示(*与模型对照组相比P<0.05)。
由图2可知，在给药后的4h内，化合物I1的降血尿酸活性与非布索坦相当，都可以非常显著地降低急性高尿酸血症小鼠的血尿酸水平。
三、化合物I1在长期高尿酸血症小鼠模型中的降尿酸等活性评价
(1)18-22g的SPF级ICR小鼠适应性喂养一周后，随机分组，分为正常对照组(Control组，生理盐水)，模型对照组(Model组，氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤200mg·kg-1)，阳性对照组(氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤200mg·kg-1+非布索坦5mg·kg-1)，I1组(氧嗪酸钾300mg·kg-1+次黄嘌呤200mg·kg-1+I1化合物5mg·kg-1)，每组8只。
(2)实验前称量小鼠体重，每天于9:00分别给予模型对照组及各给药组皮下注射氧嗪酸钾300mg·kg-1+腹腔注射次黄嘌呤200mg·kg-1，正常对照组给予等量生理盐水，1h后分别测定血尿酸水平(记为1h血尿酸)，并立即对各药物组分别灌胃给予待测药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予等量溶媒，连续重复上述实验7天。于第七天给予治疗药物1h后，立即摘眼球取血，血液于0-4度静置10min，以10000r/min离心5min，小心吸取上层血浆，以自动生化分析仪(Beckman Coulter，AU5811，Tokyo，Japan)测定血浆肌酐(Crea)、尿素氮(Urea Nitrogen)和尿酸(Uric acid)值。所得结果以graphpad 6.0作图，以two-tailedStudent’s t-test统计分析，结果如图3所示(#与正常组相比P<0.05，*与模型组相比P<0.05)。
由图3可知，模型组的血尿酸水平显著高于正常组，造模成功(P<0.05)，模型组的血肌酐和尿素氮水平均显著高于正常组，提示长期高尿酸血症会对小鼠的肾功能造成一定损伤(P<0.05)。与模型组做比较，I1与非布索坦对高尿酸血症小鼠有显著的降尿酸作用(P<0.05)，此外，这两个化合物也显示了一定的降尿素氮作用(P<0.05)，微弱的降肌酐效果，说明这两个化合物在降低血尿酸活性之外，也能在一定程度上改善肾功能损伤。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂，其特征在于：所述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂具有式(I)所示的结构式：
其中，R代表C1-C6的烷基。
2.根据权利要求1所述的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂，其特征在于：R代表异丙基、异丁基、仲丁基或乙基丁基。
3.根据权利要求1所述的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂，其特征在于：所述硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂包括如下任一项所述的化合物：
1-(3’-氰基-4’-异丙硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-异丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-仲丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸；
1-(3’-氰基-4’-乙基丁硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸。
4.权利要求1～3任一项所述的一种硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)在氮气保护下，将5-溴-2-氟-1-氰基苯、硫化钠在DMF中室温反应，得到5-溴-2-巯基-1-氰基苯；
(2)将5-溴-2-巯基-1-氰基苯、溴代烷烃和无机碱在有机相中加热反应，得到5-溴-2-烷硫基-1-氰基苯；
(3)氮气保护下，将5-溴-2-烷硫基-1-氰基苯、1H-吡唑-4-甲酸酯、CuI、K2CO3、(E)-N,N’-二甲基-1,2-环己基二胺在DMF中，经C-N偶联反应，得到1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸酯；
(4)1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸酯经碱性水解、酸化后得到1-(3-氰基)-4-烷硫基-苯基)-吡唑-4-甲酸。
5.权利要求1～3任一项所述的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用，其特征在于：所述抗高尿酸血症或痛风药物包括作为有效成分的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂或其药学上可接受的盐、酯和药学上可接受的载体。
7.根据权利要求6所述的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用，其特征在于：所述药学上可接受的盐包括硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂与金属离子、有机碱形成的盐。
8.根据权利要求7所述的硫取代苯基吡唑类XOR抑制剂在制备抗高尿酸血症或痛风药物中的应用，其特征在于：所述金属离子是碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，所述有机碱是乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、哌啶或哌嗪。
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