CN108192824A - 一种nk细胞的双层培养装置、系统及方法 - Google Patents

一种nk细胞的双层培养装置、系统及方法 Download PDF

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Abstract

一种NK细胞的双层培养装置，包括：NK细胞室，用于供养NK细胞，所述NK细胞室包括侧壁和基本水平的底壁，所述底壁由透气性材料构成，所述底壁还设有半透膜；细胞培养室，用于接受供养物质以培养滋养细胞。本发明的有益效果为：1、NK细胞室和细胞培养室通过半透膜将两者隔开，使得NK细胞室中NK细胞所释放的细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质可以通过半透膜进入到细胞培养室中为其利用，且两者中所培养的细胞不会透过半透膜进行混合，降低了细胞培养的成本，且结构简单；2、由于NK细胞室底壁由透气性材料构成，有助于NK细胞室和细胞培养室的气体交换；3、可以抑制NK细胞室的压力变动且抑制气泡流入到细胞培养室。

Description

一种NK细胞的双层培养装置、系统及方法
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种NK细胞的双层培养装置、系统及方法。
背景技术
细胞的培养是生物技术的关键因素。在研究阶段，细胞培养的量少，但当研究转向有利于人类和动物健康的目的时，培养的量通常会增加。这种数量的增加通常被称为放大。某些用于研究阶段细胞培养的装置和方法已经发展成熟，这是因为它们允许培养多种不同的细胞，因此对于大多数使用者是有用的。令人遗憾的是，目前市面上的这些装置效率低，并且在放大过程中它们在劳力、污染风险以及费用方面的效率就变得更低了。这就需要开发替代的装置和方法，这类装置和方法用于研究并保持改进的放大研究和放大效率。这个讨论确定了常规技术中的许多缺陷，并且提出解决方法，所述方法随后将进行更详细的描述。
另外，对于一边输送培养液一边进行细胞培养的细胞培养装置来说，需要持续长时间进行培养液的输送。因此，在使用注射器泵等一定容量的泵进行输送的情况下，需要大容量的注射器泵。由于这样大容量的注射器泵是大型的，因而无法置于显微镜的载物台上，难以定期观察细胞的培养状态。此外，若装置呈大型化，则可搬动性变差，因而在培养液的输送中，小型的管式泵等是适宜的。
此处，对于管式泵，其在结构上具有不能避免脉动、无法使培养液的流量恒定的问题。此外，本发明人反复进行了实验，结果确认到，若抑制脉动、将培养液的流量维持在一定范围内，则能够避免细胞的死亡。
在许多应用中，需要通过取出或替换少量的培养基来经常供给培养物是会有问题的。例如，如果多孔组织培养板的目的是为了进行试验，则操作培养基可能会影响到那些试验的结果。而且，由于培养基的量如此之少，只要少量蒸发就可能会发生溶质浓度的不利变化。允许培养基以较高的高度驻留而不损害细胞培养功能的多孔组织培养板，由于使需要保持培养物存活的操作最小化并且减少因蒸发引起的浓度变化的量，因此优于那些传统的培养板。需要有更好的替代传统装置的方式。
发明内容
为了克服上述所述的不足，本发明的目的是提供一种了优异的透气的、可抑制气泡且操作简单、成本较低的NK细胞的双层培养装置、系统及方法。
本发明解决其技术问题的技术方案是：
一种NK细胞的双层培养装置，包括：
NK细胞室，用于供养NK细胞，所述NK细胞室包括侧壁和基本水平的底壁，所述底壁由透气性材料构成，所述底壁还设有半透膜；
细胞培养室，用于接受供养物质以培养滋养细胞，所述细胞培养室固定在可摇动装置上，用于促进所述细胞培养室之间的非细胞成分交换；
送液管路，用于所述NK细胞室和所述细胞培养室之间的输送；
所述NK细胞室和所述细胞培养室均设置有至少一营养液入口及基质细胞添加口；
所述NK细胞室和所述细胞培养室为垂直放置，所述NK细胞室底部通过半透膜与所述细胞培养室顶部相连接；
在本具体实施例中，所述NK细胞室顶部设有非密封盖，所述细胞培养室底部设有用于换液的阀门装置。
在本具体实施例中，所述NK细胞室侧壁内表面设有挠性膜，同时随着所述NK细胞室压力的变动而弯曲。
在本具体实施例中，所述送液管路设有除去气泡的气泡除去装置。
在本具体实施例中，所述NK细胞的双层培养装置还包括：
压力均匀化单元，对所述NK细胞室和所述细胞培养室内的压力变动进行抑制；
速度调整部件，用于控制所述NK细胞室内溶液输送的速度。
在本具体实施例中，所述NK细胞室包括NK细胞、纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胎盘生长因子，促红细胞生成素等。
在本具体实施例中，所述NK细胞室和所述细胞培养室均包括适于贴壁细胞培养的培养皿、培养板、培养罐，适合于高密度培养的多滤膜性培养罐和适合于炫富细胞培养的培养袋、培养罐中的一种。
在本具体实施例中，所述NK细胞室还设有用于高密度培养贴壁细胞的多层细胞培养滤膜。
本发明提供了一种NK细胞的双层培养系统，其具有：
上面所述的NK细胞的双层培养装置以及
容纳所述NK细胞的双层培养装置的恒温器。
本发明还提供了一种NK细胞的双层培养方法，其为使用上述 NK细胞的双层培养装置的培养方法，其中，该方法具有下述步骤：
S1、在NK细胞室中培养NK细胞；
S2、NK细胞室中NK细胞释放细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质；
S3、所述细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质通过所述 NK细胞室底部的半透膜进入所述细胞培养室，形成滋养细胞。
本发明的有益效果为：1、NK细胞室和细胞培养室通过半透膜将两者隔开，使得NK细胞室中NK细胞所释放的细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质可以通过半透膜进入到细胞培养室中为其利用，且两者中所培养的细胞不会透过半透膜进行混合，降低了细胞培养的成本，且结构简单；
2、由于NK细胞室底壁由透气性材料构成，有助于NK细胞室和细胞培养室的气体交换；
3、可以抑制NK细胞室的压力变动且抑制气泡流入到细胞培养室。
附图说明
为了易于说明，本发明由下述的较佳实施例及附图作以详细描述。
图1为本发明实施例一中的双室袋式NK细胞的培养装置的结构示意图。
图2为本发明实施例二中的双室罐式NK细胞的培养装置的结构示意图。
图3为本发明提供的NK细胞的双层培养方法的步骤流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图1-3及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语″安装″、″相连″、″连接″应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
请参阅图1-3，一种NK细胞的双层培养装置，包括：
NK细胞室，用于供养NK细胞，NK细胞室包括NK细胞、纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胎盘生长因子，促红细胞生成素等。
更重要的是，NK细胞室包括侧壁和基本水平的底壁，底壁由透气性材料构成，底壁还设有半透膜，NK细胞室侧壁内表面设有挠性膜，同时随着所述NK细胞室压力的变动而弯曲。NK细胞室还设有用于高密度培养贴壁细胞的多层细胞培养滤膜。
具体地，透气性材料，可以是任意的膜、薄膜或用于透气的细胞培养装置的材料，如硅树脂、氟代乙烯聚丙烯、聚烯烃和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物。大量的用于学习有关透气性材料和它们在细胞培养中的用途的原始资料都可以用于额外的指导。所用的词语薄膜或膜意味着跨过透气性材料的距离非常短，本发明的实施方式会发挥作用。
透气性材料应当根据各种特性进行选择，所述的特性包括透气性、湿气透过性、随所需的与细胞的相互作用而改变的能力、光学清晰度、物理强度等。存在描述说已被成功用于细胞培养的透气性材料的各种不同的类型的信息。硅树脂通常是一个不错的选择。它具有优异的氧气透过性，可以进行光学检测，不容易穿孔，一般其上不会结合有细胞，并且易于制成多种形状。如果使用硅树脂，它在需要进行气体交换的区域可以小于约0.2英寸、约0.1英寸、约 0.05英寸或约0.030英寸。根据用途选择最佳材料。例如，在将暴露于深低温保藏的用途中，可以是优选的。
构造允许增加培养基体积的壁，也可以具有减少培养基的蒸发作用的有利效果。培养基蒸发是细胞培养中的一个问题，这是因为它改变了存在于培养基中的溶质的浓度。
作为挠性膜的材质，只要为以能够充分改变NK细胞室的容积的程度进行弯曲的材料就没有特别限定，例如可以为挠性树脂或橡胶等弹性体，也可以为具有挠性的金属。另外，其是以与培养液不发生反应的材质形成的，这自不消说。
半透膜即为选择性透过膜，其只允许离子和小分子物质自由通过，而生物大分子如细胞等则不能自由通过，其原因是因为半透膜的孔径比离子和小分子的大，但比生物大分子如蛋白质和淀粉的小。本发明中采用半透膜将NK细胞室和细胞培养室连接起来，使得两个细胞室之间的小分子物质能进行自由交换，如NK细胞室中供养的NK细胞所分泌的细胞因子、蛋白多肽等能通过半透膜进入到细胞培养室中供滋养细胞的生长所用，其对滋养细胞具有促增或促进某种途径的活化作用，而NK细胞室和细胞培养室中所培养的NK 细胞和滋养细胞并不会通过半透膜进行交换，有效保持细胞培养的单一性，避免细胞混杂。
优选地，半透膜的孔径≤0.22μm。具体地，所述半透膜的孔径为0.22μm、0.1μm，当然，也可以根据实际生产的需要选择其他孔径大小的半透膜。本发明所述半透膜允许细胞因子、蛋白多肽、水分、营养物质或抗体等小分子物质自由通过，但不允许NK细胞或滋养细胞的通过。
更优选地，所述NK细胞室中还设置有多层细胞培养滤膜，其可以实现高密度培养贴壁细胞，即细胞可以在细胞培养滤膜的表面上附着生长，而多层的细胞培养滤膜可以最大面积地培养NK细胞，提高空间利用率。
同时，细胞培养室，用于接受供养物质以培养滋养细胞，细胞培养室固定在可摇动装置上，用于促进细胞培养室之间的非细胞成分交换，NK细胞室和细胞培养室均设置有至少一营养液入口及基质细胞添加口；NK细胞室和细胞培养室为垂直放置，NK细胞室底部通过半透膜与细胞培养室顶部相连接。
较佳实施例中，细胞培养室固定在可摇动装置上，用于促进细胞培养室之间的非细胞成分交换。本发明中细胞培养室可以通过固定在可轻度摇动、振动或旋转的装置上，如固定在摇床上，可以有效促进NK细胞室和所细胞培养室之间的非细胞成分(即细胞因子、蛋白多肽或抗体等充分交换，满足目标细胞生长的需要。
进一步地，NK细胞室和细胞培养室均包括适于贴壁细胞培养的培养皿、培养板、培养罐，适合于高密度培养的多滤膜性培养罐和适合于炫富细胞培养的培养袋、培养罐中的一种。本发明中对于NK 细胞的双层培养装置可以采用不同类型的培养器皿作为细胞培养室，并且在细胞培养室设置有一进液及接种通道，可用于加入营养液和进行细胞接种，实现对细胞的培养。另外，本发明的细胞培养室允许气体如CO2的自由进出。需说明的是，由于细胞种类及目标产物差异性较大，高密度培养的最终细胞数量无法用一个确切的值或范围界定。
NK细胞室顶部设有非密封盖，所述细胞培养室底部设有用于换液的阀门装置。
送液管路，用于NK细胞室和细胞培养室之间的输送，送液管路设有除去气泡的气泡除去装置。
进一步地，NK细胞的双层培养装置还包括：
压力均匀化单元，对NK细胞室和细胞培养室内的压力变动进行抑制；
速度调整部件，用于控制NK细胞室内溶液输送的速度。
进一步地，本发明中的NK细胞室和细胞培养室既可以为水平放置的，也可以为垂直放置的。当其为水平放置时，NK细胞室通过设置有半透膜的细管与细胞培养室相连接，此时半透膜设置于连接两个细胞培养室的细管内部中间位置；当其为垂直放置时，NK细胞室底部通过半透膜与细胞培养室的顶部相连接，此时NK细胞室的底部与细胞培养室的顶部是贴合在一起的。
实施例一
双室袋式NK细胞的培养装置
本实施例描述的双培养袋式NK细胞的培养装置具备如下特点：培养袋所用的材料允许气体(如CO2)自由通过，但不允许其他液体分子渗漏出去。NK细胞室10和细胞培养室20之间通过一个细管31相连，相连的细管31中间有一个选择性半透膜30，选择性半透膜30的孔径为0.22μm。这种选择性半透膜30允许NK细胞室10中培养的NK细胞所分泌的细胞因子、蛋白多肽、抗体或其他小分子物质到达细胞培养室20中，为细胞培养室20所培养的细胞利用，这些通过半透膜30的细胞因子、蛋白多肽、抗体或其他小分子物质对细胞培养室20所接种的滋养细胞有促进增殖或有促进某种途径的活化作用，每个培养袋都有相应的细胞接种及加液口40 (见图1)，并且所述培养袋可以置于能轻度旋转或振动的装置上，这种旋转或振动由于培养液中的除细胞以外的物质成分能充分交换。
实施例二
双室罐式NK细胞的培养装置
本实施例描述的双培养罐式NK细胞培养装置具备如下特点： NK细胞室10和细胞培养室20空间上是垂直放置的，且其中间所连接的选择性半透膜30的孔径为0.1μm。这种选择性半透膜30允许NK细胞室10中培养的NK细胞所分泌的细胞因子、蛋白多肽、抗体或其他小分子物质到达细胞培养室20中，为细胞培养室20所培养的滋养细胞利用，这些通过选择性半透膜30的细胞因子、蛋白多肽、抗体或其他小分子物质对细胞培养室20所接种的细胞有促进增殖或有促进某种途径的活化作用。NK细胞室10由一个盖子50 盖住，但不是完全密封，允许气体(如CO2)与外界发生交换(见图2)。这种装置可以置于能轻度旋转或振动的装置上，这种旋转或振动由于培养液中的除细胞以外的物质成分能充分交换。
本发明提供了一种NK细胞的双层培养系统，其具有：
上面所述的NK细胞的双层培养装置以及
容纳NK细胞的双层培养装置的恒温器。
如图3所示，本发明还提供了一种NK细胞的双层培养方法，其为使用上述NK细胞的双层培养装置的培养方法，其中，该方法具有下述步骤：
S1、在NK细胞室中培养NK细胞；
S2、NK细胞室中NK细胞释放细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质；
S3、细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质通过所述NK 细胞室底部的半透膜进入所述细胞培养室，形成滋养细胞。
本发明的有益效果为：1、NK细胞室和细胞培养室通过半透膜将两者隔开，使得NK细胞室中NK细胞所释放的细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质可以通过半透膜进入到细胞培养室中为其利用，且两者中所培养的细胞不会透过半透膜进行混合，降低了细胞培养的成本，且结构简单；
2、由于NK细胞室底壁由透气性材料构成，有助于NK细胞室和细胞培养室的气体交换；
3、可以抑制NK细胞室的压力变动且抑制气泡流入到细胞培养室。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种NK细胞的双层培养装置，其特征在于，包括：
NK细胞室，用于供养NK细胞，所述NK细胞室包括侧壁和基本水平的底壁，所述底壁由透气性材料构成，所述底壁还设有半透膜；
细胞培养室，用于接受供养物质以培养滋养细胞，所述细胞培养室固定在可摇动装置上，用于促进所述细胞培养室之间的非细胞成分交换；
送液管路，用于所述NK细胞室和所述细胞培养室之间的输送；
所述NK细胞室和所述细胞培养室均设置有至少一营养液入口及基质细胞添加口；
所述NK细胞室和所述细胞培养室为垂直放置，所述NK细胞室底部通过半透膜与所述细胞培养室顶部相连接。
2.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述NK细胞室顶部设有非密封盖，所述细胞培养室底部设有用于换液的阀门装置。
3.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述NK细胞室侧壁内表面设有挠性膜，同时随着所述NK细胞室压力的变动而弯曲。
4.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述送液管路设有除去气泡的气泡除去装置。
5.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述NK细胞的双层培养装置还包括：
压力均匀化单元，对所述NK细胞室和所述细胞培养室内的压力变动进行抑制；
速度调整部件，用于控制所述NK细胞室内溶液输送的速度。
6.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述所NK细胞室包括NK细胞、纤维细胞生长因子1、纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胎盘生长因子，促红细胞生成素等。
7.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述NK细胞室和所述细胞培养室均包括适于贴壁细胞培养的培养皿、培养板、培养罐，适合于高密度培养的多滤膜性培养罐和适合于炫富细胞培养的培养袋、培养罐中的一种。
8.根据权利要求1所述的NK细胞的双层培养装置，其特征在于，所述NK细胞室还设有用于高密度培养贴壁细胞的多层细胞培养滤膜。
9.一种NK细胞的双层培养系统，其具有：
权利要求1~8的任一项所述的NK细胞的双层培养装置以及
容纳所述NK细胞的双层培养装置的恒温器。
10.一种NK细胞的双层培养方法，其为使用权利要求1~8任一项所述的NK细胞的双层培养装置的培养方法，其中，该方法具有下述步骤：
S1、在NK细胞室中培养NK细胞；
S2、过滤掉所述NK细胞室中的细胞因子、水分以及营养；
S3、通过所述NK细胞室底部的半透膜进入所述细胞培养室，形成滋养细胞。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717853A (zh) * 2020-05-26 2021-11-30 赛宇细胞科技股份有限公司 细胞培养装置及其方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005044996A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 St Jude Children's Research Hospital Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain
CN104893975A (zh) * 2015-05-28 2015-09-09 深圳富利鑫健康产业发展有限公司 一种双室选择透过性细胞培养装置及其应用
CN105985931A (zh) * 2016-06-21 2016-10-05 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 一种nk细胞体外扩增组合物及nk细胞扩增方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005044996A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 St Jude Children's Research Hospital Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain
CN104893975A (zh) * 2015-05-28 2015-09-09 深圳富利鑫健康产业发展有限公司 一种双室选择透过性细胞培养装置及其应用
CN105985931A (zh) * 2016-06-21 2016-10-05 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 一种nk细胞体外扩增组合物及nk细胞扩增方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
石永云: ""自然杀伤细胞与妊娠研究进展"", 《国外医学妇产科学分册》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717853A (zh) * 2020-05-26 2021-11-30 赛宇细胞科技股份有限公司 细胞培养装置及其方法

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