CN108186565A - 一种磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种磷脂低温溶解‑微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法，包括以下步骤：(1)将磷脂溶解于油脂中，以制备油相；(2)将水相的各组分混合溶解以制备水相；(3)将步骤(2)制得的水相加入到步骤(1)制得的油相中，进行剪切以制备初乳；以及(4)采用微射流技术将所述初乳制备成乳剂。根据本发明的方法能够提高制得的乳剂的稳定性，降低磷脂的氧化和水解，降低多不饱和脂肪酸的氧化，降低过氧化物和甲氧基苯胺值，提高乳剂的粒度分布均匀性，以及降低PFAT5的比例。

Description

一种磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法。

背景技术

脂肪乳剂是完全性肠外营养治疗法(TPN)的重要组成部分之一。除提供机体代谢所需能量外，还为机体提供生物膜和生物活性的物质代谢所需的多不饱和脂肪酸，并且通过与氨基酸和葡萄糖输液配合使用，可在不经口服摄食的状态下提供维持机体应激状态所需的各种营养素。

近年来，针对omega-3不饱和脂肪酸抑制炎症表达和对心脑血管疾病的治疗作用的研究越来越受到人们的重视，这促进了含omega-3不饱和脂肪酸(尤其是EPA和DHA)的新型脂肪乳剂的开发。

油脂中多不饱和脂肪酸的存在，使油脂易产生氧化反应，因此，单不饱和脂肪酸在脂肪乳剂中的应用也不断被开发，主要是omega-9单不饱和脂肪酸的应用。

针对不同来源油脂本身存在的缺陷性，含多种油脂组成的新型脂肪乳剂被不断开发。最新的多组分脂肪乳剂为含有中链甘油三酸酯、大豆油、鱼油和橄榄油的亚微乳剂。

中链甘油三酸酯是一种饱和脂肪酸，高温条件下不易氧化变性，但是大豆油、鱼油和橄榄油中均含有不饱和脂肪酸，在高温条件下，脂肪酸链上的双键发生水解、氧化等反应而形成醛酮等有害物质，尤其是鱼油，需要在-20℃低温条件下充氮保存。药典中对于鱼油原料以及制备的制剂均有对醛酮类降解物质的限制，即甲氧基苯胺值的限度有严格要求。

所述亚微乳剂中另一个重要组成部分为乳化剂，目前制剂中最常用的乳化剂为磷脂，其也需要在-20℃低温条件下充氮保存，磷脂在制备亚微乳的过程中以及在制得的磷脂产品的贮存过程中非常容易氧化和水解，其中，氧化形成醛酮类化合物，会造成人体的肝功能损伤，水解则会生成溶血磷脂。溶血磷脂是一类具有较强表面活性的性质，能使红细胞及其它细胞的膜破裂，引起溶血或细胞坏死。由于溶血磷脂的溶血或溶解细胞膜作用，因而磷脂类产品皆要对其中溶血磷脂的量进行严格控制。对于脂肪乳剂类产品，由于在溶液状态下卵磷脂可能会发生部分水解，在放置过程中溶血磷脂的量有可能增加，因而制剂中也应严格控制溶血磷脂的量，保证临床用药的安全性。

目前的含多种油脂的亚微乳剂制备工艺一般包括两步：第一步是在一定温度下油相和水相的溶解；以及第二步是通过剪切和均质来制备乳剂。接着将均质形成的亚微乳溶液经过高压灭菌(115℃～121℃，10～30分钟)以制成终产品。例如，在专利申请CN201310439684.0中，制备工艺中油相和水相的溶解温度为60～80℃，均质的温度30～60℃。这样的高温条件下，很容易引起油脂和磷脂的氧化水解，导致终产品中过氧化物、醛酮类化合物和溶血磷脂含量增加。

此外，磷脂的氧化，会导致磷脂的乳化能力下降，使得在剪切和均质过程中水包油的成乳过程效率下降，导致乳剂出油和形成大乳粒(大于5μm的乳滴)，脂肪乳剂作为水包油型的分散体系，要求粒度范围一般在0.05～10μm，平均粒径为200～300nm，并且脂肪乳剂的粒度应当呈现为正态分布的形式。当大于5μm的乳滴占脂肪乳油相体积的百分比(PFAT5)超过0.4％时，乳剂极不稳定，肉眼可观察到相分离现象。有报道显示，当乳剂中的PFAT5为0.1％时，给予大鼠72h输注后血浆的谷草转氨酶含量明显变大，肝酶代谢不正常，肝脏已达到病理程度损伤状态，提示长时间的乳剂输注，肝中脂滴会发生聚集，最初产生脂肪肝，随后转为肝脏炎症进而导致肝细胞坏死，此外，产生的活性氧化物质会影响肝脏正常生理功能。因此，制剂中的PFAT5对脂肪乳剂的临床应用安全性和制剂稳定性有重要影响。

微射流技术是指在超高压的压力作用下，使流体经过孔径很微小的阀心以产生几倍音速，从而达到分散、均质、乳化等效果。微射流不需要额外的流源，射流的形成直接来源于周围流体。

发明内容

[技术问题]

为了克服上述的现有亚微乳剂的制备技术的缺陷，本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种全新的亚微乳剂制备方法，所述方法能够提高制得的乳剂的稳定性，降低磷脂的氧化和水解，降低多不饱和脂肪酸的氧化，降低过氧化物和甲氧基苯胺值，提高乳剂的粒度分布均匀性，以及降低PFAT5的比例。

[技术方案]

本发明通过如下技术方案来实现：一种磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法，其包括以下步骤：

(1)将磷脂溶解于油脂中，以制备油相；

(2)将水相的各组分混合溶解以制备水相；

(3)将步骤(2)制得的水相加入到步骤(1)制得的油相中，进行剪切以制备初乳；以及

(4)采用微射流技术将所述初乳制备成乳剂。

优选地，本发明所述磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法在步骤(4)之后进一步包括：

(5)灌装；以及

(6)灭菌。

在优选实施方式中，步骤(1)在超临界二氧化碳气体氛围状态下进行；

步骤(2)在室温条件下进行。

在优选实施方式中，在上述步骤(1)中，所述油脂包括大豆油、甘油三酸酯、橄榄油、鱼油和dl-α-生育酚；以及所述磷脂包括蛋黄卵磷脂。

在优选实施方式中，所述油相包含以下重量份的组分：

进一步地，所述大豆油为精制大豆油，所述甘油三酸酯为中链甘油三酸酯，所述橄榄油为精制橄榄油，以及所述鱼油为纯化鱼油。

所述精制大豆油为本领域常用的精制大豆油。一般地，该精制大豆油中的脂肪酸的碳原子数为14～24，其中，十四烷酸含量不大于0.2％，十六烷酸的含量范围为9.0～13.0％，十六碳烯酸含量不大于0.3％，十八烷酸的含量范围为2.5～5.0％，十八碳烯酸的含量范围为17.0～30.0％，十八碳二烯酸的含量范围为48.0～58.0％，十八碳三烯酸的含量范围为5.0～11.0％，二十烷酸的含量不大于1.0％，二十碳烯酸的含量不大于1.0％，二十二烷酸的含量不大于1.0％，二十二碳烯酸的含量不大于0.3％，二十四烷酸的含量不大于0.3％，酸值不大于0.3，过氧化物不得过3.0，菜籽甾醇不得过0.3％，细菌内毒素小于0.5EU/ml。

所述中链甘油三酸酯为本领域常用的中链甘油三酸酯。一般地，该中链甘油三酸酯中脂肪酸的碳原子数为6～12，其中，辛酸(C8)和葵酸(C10)的含量不低于95％。

所述精制橄榄油为本领域常用的精制橄榄油。一般地，该精制橄榄油中的脂肪酸的碳原子数为16～24，其中，油酸的含量范围为60.0～85.0％，亚油酸的含量范围为3.5～10.0％，亚麻酸含量不得过1.0％，硬脂酸的含量为0.5～5.0％，棕榈酸的含量为7.5～20.0％，酸值不得过0.2，过氧化物不得过3.0，细菌内毒素小于0.5EU/ml。

所述纯化鱼油为本领域常用的纯化鱼油。一般地，该纯化鱼油中二十碳五烯酸(EPA)的含量不低于13％，二十二碳六稀酸(DHA)的含量不低于9％，EPA和DHA的含量和不低于28％，甲氧基苯胺值不高于15.0，细菌内毒素小于5EU/ml。。

所述纯化鱼油来源于包括但不限于鲱鱼油、沙丁鱼油、鲑鱼油和深海鳕鱼油。

此外，在上述步骤(1)中，温度为30～35℃，并且充入二氧化碳气体至压力为7.0～7.5MPa。

根据一个实施方式，在上述步骤(2)中，特别地，所述水相包含甘油22.5～27.5重量份；油酸钠0.270～0.330重量份；以及650-880重量份的注射用水。

此外，所述水相还包含氢氧化钠以调节pH为9.0～12.0。

此外，在上述步骤(2)中，将制得的水相的温度加热至30～35℃。

根据一个实施方式，在上述步骤(3)中，特别地，将所述水相加入到所述油相中，利用剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。其中，所述剪切机可采用本领域已知的剪切机，包括但不限于定子转子式剪切机。

其中，所述油相与所述水相的重量比为10：90～35：65。

此外，在所述初乳的制备结束后，缓慢释放配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。

根据一个实施方式，在上述步骤(4)中，特别地，所述微射流技术联合应用低压和高压来进行乳化。具体地，首先在低压3000～5000psi下乳化1遍，然后迅速冷却至10～15℃，再在高压10000～20000psi下乳化1遍。

根据一个实施方式，在上述步骤(5)中，将制得的乳剂灌装入灌装瓶中。特别地，采用抽真空充氮的方式灌装，即先抽真空和充氮将待灌装瓶内充满氮气，接着灌入乳液。

根据一个实施方式，在上述步骤(6)中，将灌装的乳剂灭菌。特别地，将灌装的乳剂在高温下灭菌。例如，可采用旋转水浴灭菌器在115～121℃下持续8～30分钟，以达到灭菌效果。

[有益效果]

本发明联合使用磷脂低温溶解-微射流技术来制备脂肪乳剂。在根据本发明的方法中，磷脂的溶解过程没有有机溶剂的加入，避免了终产品中的溶剂残留，因而更加绿色环保，产品的安全性更高。此外，磷脂在较低的温度条件(30～35℃)下溶解于油脂中，避免了高温加热引起的磷脂氧化，有助于提高磷脂的乳化能力。

此外，本发明仅需要均质两遍即可获得脂肪乳剂，且制备的乳粒粒度分布均匀。

此外，根据本发明的方法能够提高制得的乳剂的稳定性，降低磷脂的氧化和水解，降低多不饱和脂肪酸的氧化，降低过氧化物和甲氧基苯胺值，提高乳剂的粒度分布均匀性，以及降低PFAT5的比例。

具体实施方式

下文中，将更加详细地描述本发明。

本说明书和权利要求书中所用的术语或词语不应被限制性地解读为常规的或词典的含义，而应基于发明人可以适当地定义术语的概念以便以可能最佳的方式描述其发明的原则而被解读为与本发明的技术思想相对应的含义和概念。

[原辅料]

精制大豆油：广州白云山汉方现代药业有限公司、铁岭新兴药业有限公司；

中链甘油三酸酯：铁岭新兴药业有限公司、德国Lipoid公司、德国IOI OLEO公司；

精制橄榄油：广州白云山汉方现代药业有限公司；

纯化鱼油：冰岛LYSI公司；

dl-α-生育酚：德国BSF公司；

蛋黄卵磷脂：德国LIPOID公司、日本丘比公司、广州汉方广州白云山汉方现代药业有限公司。

[仪器设备]

定子转子剪切机：德国IKA公司，型号：T25；

均质机：德国APV公司，型号：2000型；

乳粒测定仪：美国PSS公司，型号：380和780型；

超临界萃取釜：南通睿智超临界科技发展有限公司，定制。

实施例1

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至30℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至30℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在3000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在10000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例2

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至30℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.5MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至30℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪乳化，先在3000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在10000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例3

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至31℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.2MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至31℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在3000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在10000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例4

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至35℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.5MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至35℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在3000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在10000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例5

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至31℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.2MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至31℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在15000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例6

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至30℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.5MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至30℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在15000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例7

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至30℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.5MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至30℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在20000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例8

取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂12克加入其中，罐体腔内预热至35℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.5MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至30℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在20000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例9

取大豆油精制大豆油54g、中链甘油三酸酯54克、精制橄榄油45克、纯化鱼油27克和dl-α-生育酚125毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂10克加入其中，罐体腔内预热至31℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.2MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至31℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在15000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

实施例10

取大豆油精制大豆油66g、中链甘油三酸酯66克、精制橄榄油55克、纯化鱼油33克和dl-α-生育酚145毫克，加入至1号耐压配制罐中，取蛋黄卵磷脂14克加入其中，罐体腔内预热至31℃，充入二氧化碳气体至腔内压力为7.2MPa，使磷脂分散于混合油脂中，得到油相。在2号配制罐中将甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，加热至31℃。然后，将水相加入到油相中，利用定子转子式剪切机进行剪切溶解，以制备初乳。之后，缓慢释放1号配制罐内气体，使罐内压力恢复正常大气压。用氮气替换原来的二氧化碳气体，接着使所述初乳进入高压微射流仪中进行乳化，先在5000psi的低压下乳化1遍，样品迅速冷却至15℃，再在15000psi的高压下乳化1遍，过滤，充氮灌装，121℃下灭菌15分钟。

比较例

氮气保护下，取大豆油精制大豆油60g、中链甘油三酸酯60克、精制橄榄油50克、纯化鱼油30克和dl-α-生育酚135毫克，搅拌预热至60～80℃，得到油相。取蛋黄卵磷脂12克、甘油25克、油酸钠300毫克和氢氧化钠溶液(2mg/ml)10ml，溶于763g注射用水中制得水相(pH为9.8～11.5)，在8000rpm条件下高速剪切5min至磷脂充分分散。氮气保护下，在8000rpm条件下将水相缓缓加入油相制备初乳，进入高压均质机，过程中均质温度保持40～45℃，200巴下进行2遍，500巴下进行6遍均质以制备乳剂，灌装后，121℃下灭菌15分钟。

评价上述实施例1至8以及比较例的平均粒径、PDI、PFAT5、甲氧基苯胺值和溶血磷脂，其中，将制备的乳剂用过0.22μm滤膜的水稀释10000～20000倍后，采用动态光散射原理的粒度分析仪测定上述乳剂的平均粒径和PDI值；取样0.5～1.0ml的乳剂样品，采用基于光阻(光消减)原理的单粒子光学传感技术测定所述乳剂的PFAT5值；采用紫外分光光度计测定样品的甲氧基苯胺值，采用正相高效液相色谱仪联用蒸发光检测器测定乳剂中的溶血磷脂含量。

结果如以下表1所示：

[表1]

根据表1的比较结果，可以看出，与比较例相比，根据本发明的实施例1至10在PDI、PFAT5、甲氧基苯胺值和溶血磷脂方面均取得了优良的技术效果。

Claims (10)

1.一种磷脂低温溶解-微射流技术制备复合油脂纳米乳的方法，其包括以下步骤：

(1)将磷脂溶解于油脂中，以制备油相；

(2)将水相的各组分混合溶解以制备水相；

(3)将步骤(2)制得的水相加入到步骤(1)制得的油相中，进行剪切以制备初乳；以及

(4)采用微射流技术将所述初乳制备成乳剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其在步骤(4)之后进一步包括：

(5)灌装；以及

(6)灭菌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(1)在超临界二氧化碳气体氛围状态下进行；以及步骤(2)在室温条件下进行。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，在步骤(1)中，温度为30～35℃，并且充入二氧化碳气体至压力为7.0～7.5MPa。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(1)中，所述油脂包括大豆油、甘油三酸酯、橄榄油、鱼油和dl-α-生育酚；以及所述磷脂包括蛋黄卵磷脂，

优选地，所述油相包含以下重量份的组分：

优选地，所述大豆油为精制大豆油，所述甘油三酸酯为中链甘油三酸酯，所述橄榄油为精制橄榄油，以及所述鱼油为纯化鱼油。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(2)中，所述水相包含甘油22.5～27.5重量份；油酸钠0.270～0.330重量份；以及650-880重量份的注射用水；

此外，所述水相还包含氢氧化钠以调节pH为9.0～12.0，

此外，在步骤(2)中，将制得的水相的温度加热至30～35℃。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(3)中，将所述水相加入到所述油相中，利用剪切机进行剪切溶解，以制备初乳，

其中，所述油相与所述水相的重量比为10：90～35：65。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(4)中，所述微射流技术联合应用低压和高压来进行乳化，具体地，首先在低压3000～5000psi下乳化1遍，然后迅速冷却至10～15℃，再在高压10000～20000psi下乳化1遍。

9.根据权利要求2所述的方法，其中，在步骤(5)中，采用抽真空充氮的方式灌装，即先抽真空和充氮将待灌装瓶内充满氮气，接着灌入乳液。

10.根据权利要求2所述的方法，其中，在步骤(6)中，采用旋转水浴灭菌器在115～121℃下持续8～30分钟，以达到灭菌效果。