CN108185110B - 一种提高米糠蛋白功能性质的方法 - Google Patents

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Abstract

一种提高米糠蛋白功能性质的方法,包括以下步骤:(1)将新鲜米糠粉碎,得到米糠细粉;(2)配制纤维素酶和脂肪氧合酶混合液,将酶混合液与米糠细粉搅拌均匀后控温控湿反应;(3)将反应后的米糠挤压稳定化、干燥、脱脂,得到脱脂米糠;(4)将脱脂米糠用碱溶酸沉法提取米糠蛋白,冷冻干燥,即得到一种功能性质较好的米糠蛋白。采用本发明方法制备米糠蛋白,可以全面提高米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,且方法简单,易于控制。

Description

一种提高米糠蛋白功能性质的方法
技术领域
本发明涉及一种提高米糠蛋白功能性质的方法。
背景技术
米糠是糙米碾白过程中分离出来的一种副产物,包括糙米的果皮层、种皮层、外胚乳层和糊粉层及部分胚乳细胞以及大部分胚芽和少量碎米等。我国是全球最大的稻谷生产国和消费国,年产米糠1000万吨以上,我国米糠资源世界第一。米糠是稻谷籽粒的精华所在,虽然只占稻谷质量的6%~8%,但却集中了64%的稻米营养素和90%以上的人体必需元素,米糠的深度开发利用可使米糠的附加值提高60倍,因此,米糠是一种极具开发潜力的高附加值资源。尽管我国米糠产量世界第一,但米糠的有效利用率很低(不足20 %),大部分作为饲料使用,资源浪费严重。这主要是由于米糠中脂肪水解酶和脂肪氧合酶含量高且活性强,导致其酸值在短短几小时之内快速增加,造成米糠迅速酸败,甚至发热霉变,从而影响综合利用。
近年来,蔡勇建等研究发现,在短期储藏时间内,虽然米糠酸败程度和米糠蛋白氧化程度逐渐增加,但米糠蛋白的功能性质却呈现先上升后下降的趋势,其持水性、持油性、起泡性和乳化稳定性均在贮藏3 d(72 h)时达到最大值,分别为476.82%、345.89%、74.30%和18.13 min,起泡稳定性和乳化性则在第1 d(24 h)时达到最大值,分别为54.19%和63.71m2/g。(参考文献:蔡勇建,叶建芬,吴晓娟,等. 米糠贮藏时间对米糠蛋白功能性质影响[J]. 粮食与油脂, 2015, 26(6): 31-34.)但是,这种提高米糠蛋白功能性质的方法时间太长,而且乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能性质达到最优的贮藏时间不同,条件难以控制。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,克服现有技术存在的上述缺陷,提供一种方法简单、易于控制的提高米糠蛋白功能性质的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种提高米糠蛋白功能性质的方法,包括以下步骤:(1)将新鲜米糠粉碎,得到米糠细粉;(2)配制纤维素酶和脂肪氧合酶混合液,将酶混合液与米糠细粉搅拌均匀后控温控湿反应;(3)将反应后的米糠挤压稳定化、干燥、脱脂,得到脱脂米糠;(4)将脱脂米糠用碱溶酸沉法提取米糠蛋白,冷冻干燥,即得到一种功能性质较好的米糠蛋白。
进一步,具体操作步骤如下:
(1)米糠粉碎:将新鲜米糠用粉碎机进行粉碎、过筛,细度达到180~200目,得到米糠细粉;
(2)复合酶催化反应:用水配制纤维素酶浓度为2~4 g/L和脂肪氧合酶浓度为1~3 g/L的酶混合液,将酶混合液与步骤(1)得到的米糠细粉按质量比60~80:100混合,并用搅拌器搅拌均匀;将混合后的米糠放于人工气候箱的托盘中控温控湿反应,得到复合酶催化反应后的米糠;
(3)脱脂米糠的制备:将步骤(2)得到的复合酶催化反应后的米糠采用双螺杆挤压机进行稳定化处理,稳定化条件为:米糠水分含量18wt%~24wt%,进料量16~22 kg/h,螺杆转速100~140 r/min,挤压温度120~140 ℃;将挤压后的米糠冷却到40~50 ℃,在烘箱中维持40~50 ℃干燥(优选干燥2~3 h)后取出,用粉碎机粉碎至80~100目,再将粉碎后米糠用正己烷或石油醚脱脂,得到脱脂米糠;
(4)米糠蛋白的制备:将步骤(3)得到的脱脂米糠和水按1 g:6~8 mL混合,用1.0~1.5 mol/L NaOH溶液调节pH值至9.4~9.6,在30~40 ℃、100~140 r/min下搅拌反应(优选2~3 h),随后在9 000~10 000 r/min下离心(优选10~12 min),取上清液用1.0~1.5 mol/L HCl溶液调节pH至4.0~4.2,在20~25 ℃静置(优选30~40 min),随后在4000~5000 r/min,4~6℃下离心(优选10~12 min),得到米糠蛋白沉淀,用4~6 ℃的水洗涤沉淀(优选洗涤沉淀2~4次)后,再将蛋白沉淀按1 g:6~8 mL分散于4~6 ℃的水中,用1.0~1.5 mol/L NaOH溶液调节pH至7.0,冷冻干燥得到一种功能性质较好的米糠蛋白。
本发明所用纤维素酶可使结构致密、质地坚硬的米糠纤维、半纤维在短时间内(2~3 h)适度水解,减少其对蛋白质的束缚作用,同时利用米糠内源脂肪水解酶将所含米糠脂质适度水解,形成游离的多不饱和脂肪酸;再利用米糠内源脂肪氧合酶和适当添加的外源脂肪氧合酶在短时间内(2~3 h)使游离的多不饱和脂肪酸氧化形成脂质自由基、脂质氢过氧化物和活性醛等脂质过氧化产物;再利用脂质过氧化产物在短时间内(4~6 h)将米糠蛋白适度氧化,米糠蛋白空间结构略微展开,蛋白质分子柔性增加,此时米糠蛋白溶解性变化幅度较小,较多的水分子有机会进入米糠蛋白内部,从而增加持水性;米糠蛋白暴露出来的部分疏水基团可与脂质结合,增加其持油性;持水性和持油性的改善使得略微展开的米糠蛋白分子易于吸附到气-液界面,形成粘弹性能好和稳定性强的界面蛋白膜,从而提高米糠蛋白的乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能性质。
进一步,步骤(1)中,所述新鲜米糠的酸值≤4mg KOH / g油。
进一步,步骤(2)中,搅拌速率200~800 r/min,搅拌时间10~20 min。
进一步,步骤(2)中,所述纤维素酶的酶活为1×105~2×105 U/g,脂肪氧合酶的酶活为5×104~6×104 U/mg,均为食品级。
进一步,步骤(2)中,所述控温控湿反应,是先在温度50~60 ℃,相对湿度85~95%下反应2~3 h,然后保持相对湿度不变,温度降低到20~30 ℃下反应2~3 h,再将温度升高到30~40 ℃,相对湿度降低到35~40%继续反应4~6 h。初始控温控湿条件为:温度50~60 ℃,相对湿度85~95%,是为了在最适温度和较适宜的水分活度条件下提高纤维素酶的催化反应速率;随后控温控湿条件变为:温度20~30 ℃,相对湿度85~95%,是为了在最适温度和较适宜的水分活度条件下提高脂肪氧合酶的催化反应速率;最后控温控湿条件为:温度30~40 ℃,相对湿度35~40%,是为了提高脂质过氧化产物诱导的蛋白质氧化反应速率的同时,将米糠中的水分降低到18%~24%(w:w),以利于后续的挤压稳定化工序。
进一步,步骤(3)中,所述稳定化处理,一是为了将米糠内源脂肪水解酶和脂肪氧合酶,以及外源纤维素酶和脂肪氧合酶灭活;二是为了使米糠颗粒适度膨化,改变其质构,使米糠油在后续脱脂工序中能更彻底地脱除,提高米糠蛋白的得率和纯度。
进一步,步骤(3)中,脱脂的料液比1 g:3~5 mL;重复脱脂2~4次。
进一步,步骤(4)中,所述的功能性质较好的米糠蛋白:持水性875%~901%,持油性711%~755%,乳化性81~85 m2/g,乳化稳定性286~307 min,起泡性165%~183%,起泡稳定性85%~87%。
本发明的有益效果如下:
(1)可以全面提高米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,具体为:持水性875%~901%、持油性711%~755%、乳化性81~85 m2/g、乳化稳定性286~307 min、起泡性165%~183%和起泡稳定性85%~87%。
(2)文献报道常规储藏24~72 h后,米糠蛋白的功能性质才能达到最佳。而本方法采用的复合酶催化反应时间仅需8~12 h,时间大大缩短,且米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性均在同一时间达到最佳效果,反应条件和效果更好控制。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的新鲜米糠购自湖南长沙霞凝国家粮食储备库;纤维素酶(CAS 编号9012-54-8)、脂肪氧合酶(CAS 编号9029-60-1)和其它化学试剂,均通过常规商业途径获得。
实施例1
一种提高米糠蛋白功能性质方法,具体操作步骤如下:
(1)米糠粉碎:将500g新鲜米糠(酸值3.2 mg KOH / g油)用高速万能粉碎机进行粉碎、过筛,细度达到180目,得到米糠细粉;
(2)复合酶催化反应:用去离子水配制纤维素酶(酶活1×105 U/g)浓度为4 g/L和脂肪氧合酶(酶活5×104 U/mg)浓度为3 g/L的酶混合液,将酶混合液与步骤(1)得到的米糠细粉按质量比60:100混合,并用电动搅拌器搅拌均匀,搅拌速率200 r/min,搅拌时间20min;将混合后的米糠放于人工气候箱的托盘中控温控湿反应,先在温度50 ℃,相对湿度85%下反应2 h,然后保持相对湿度不变,温度降低到20 ℃下反应2 h,再将温度升高到40℃,相对湿度降低到35%继续反应6 h,得到复合酶催化反应后的米糠;
(3)脱脂米糠的制备:将步骤(2)得到的复合酶催化反应后的米糠采用双螺杆挤压机进行稳定化处理,稳定化条件为:米糠水分含量18wt%,进料量16 kg/h,螺杆转速100 r/min,挤压温度120 ℃;将挤压后的米糠冷却到40 ℃,在烘箱中维持40 ℃干燥3 h后取出,用高速万能粉碎机粉碎至80目,再将粉碎后米糠用正己烷脱脂,料液比1 g:5 mL混合脱脂,重复脱脂2次,得到脱脂米糠;
(4)米糠蛋白的制备:将步骤(3)得到的脱脂米糠和去离子水按1 g:6 mL混合,用1.0 mol/L NaOH溶液调节pH值至9.4,在30 ℃、100 r/min下搅拌反应2 h,随后在9 000 r/min下离心10 min,取上清液用1.0 mol/L HCl溶液调节pH至4.0,在20 ℃静置30 min,随后在4000 r/min,4 ℃下离心10 min得到米糠蛋白沉淀,用4 ℃的去离子水洗涤沉淀2次后,再将蛋白沉淀按1 g:6 mL分散于4 ℃的去离子水中,用1.0 mol/L NaOH溶液调节pH至7.0,冷冻干燥得到一种功能性质较好的米糠蛋白。
以上方法制备的米糠蛋白为试验组。同时,以新鲜米糠为原料,提供对照组,对照组除不经过复合酶催化反应以外,粉碎、挤压稳定化、干燥、脱脂、碱溶酸沉、冷冻干燥提取等工序和参数与试验组一致。
对照组和试验组米糠蛋白的功能性质测定操作如下:
1、米糠蛋白持水性和持油性测定:准确称取200 mg米糠蛋白(m 1 )与10 mL去离子水在质量m 2 的离心管中混合,用涡流振荡器混合搅拌均匀。然后在3 000 r/min离心20min,轻轻倒出上清液避免损失蛋白质,称总质量m 3 ,米糠蛋白持水性(WHC)表示为吸收水的质量占样品的单位质量(克水/克干蛋白),计算公式:
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。准确称取200 mg米糠蛋白(M 1 )与15 mL大豆油在质量为M 2 的离心管中混合,用涡流振荡器混合搅拌均匀。然后在3000 r/min离心20 min,轻轻倒出上清液避免损失蛋白质,称总质量M 3 。米糠蛋白持油性(OHC)表示为吸收油的质量占样品的单位质量(克油/克干蛋白),计算公式:
Figure DEST_PATH_IMAGE004
2、米糠蛋白起泡性和泡沫稳定性测定:准确称取米糠蛋白200 mg溶于20 mL 0.05mol/L pH7.0的磷酸盐缓冲液中,使用高速均质机以10 000 r/min均质30 s,重复3次,测量均质后的体积V 0 ,静置30 min后测量泡沫体积V 1 ,米糠蛋白的起泡能力(FC)和泡沫稳定性(FS)计算公式:
Figure DEST_PATH_IMAGE005
Figure DEST_PATH_IMAGE006
3、米糠蛋白乳化性和乳化稳定性测定:用去离子水配置1 mg/mL米糠蛋白溶液,取12 mL蛋白溶液和4 mL大豆油混合。然后将混合物用高速均质机以10 000 r/min均质2min,取100 μL米糠蛋白-大豆油乳状液与5 mL 0.1%十二烷基硫酸钠用涡流振荡器混合均匀,在500 nm处测定吸光度A 0 ,静置30 min后测定吸光度A 30 ,米糠蛋白的乳化性(EAI)和乳化稳定性(ESI)计算公式:
Figure DEST_PATH_IMAGE007
Figure DEST_PATH_IMAGE008
式中:N表示稀释倍数;C表示样品溶解液中蛋白质浓度;
Figure DEST_PATH_IMAGE009
表示油相所占的分数。
经测定,试验组米糠蛋白的持水性875%%,持油性711%%,乳化性81 m2/g,乳化稳定性286 min,起泡性165%,起泡稳定性85%。
对照组米糠蛋白的持水性406%,持油性266%,乳化性27 m2/g,乳化稳定性154min,起泡性65%,起泡稳定性54%。
试验组米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,分别是对照组的2.16倍、2.67倍、3倍、1.86倍、2.54倍、1.57倍。
实施例2
一种提高米糠蛋白功能性质方法,具体操作步骤如下:
(1)米糠粉碎:将500g新鲜米糠(酸值3.6 mg KOH / g油)用高速万能粉碎机进行粉碎、过筛,细度达到180~200目,得到米糠细粉;
(2)复合酶催化反应:用去离子水配制纤维素酶(酶活为1.5×105 U/g)浓度为3g/L和脂肪氧合酶(酶活为5.5×104 U/mg)浓度为1 g/L的酶混合液,将酶混合液与步骤(1)得到的米糠细粉按质量比70:100混合,并用电动搅拌器搅拌均匀,搅拌速率500 r/min,搅拌时间15 min;将混合后的米糠放于人工气候箱的托盘中控温控湿反应,先在温度55 ℃,相对湿度90%下反应2.5 h,然后保持相对湿度不变,温度降低到25 ℃下反应2.5 h,再将温度升高到35 ℃,相对湿度降低到37 %继续反应5 h,得到复合酶催化反应后的米糠;
(3)脱脂米糠的制备:将步骤(2)得到的复合酶催化反应后的米糠采用双螺杆挤压机进行稳定化处理,稳定化条件为:米糠水分含量20wt%,进料量18 kg/h,螺杆转速120 r/min,挤压温度130 ℃;将挤压后的米糠冷却到45 ℃,在烘箱中维持45 ℃干燥2.5 h后取出,用高速万能粉碎机粉碎至90目,再将粉碎后米糠用正己烷脱脂,料液比1 g:4 mL混合脱脂,重复脱脂3次,得到脱脂米糠。
(4)米糠蛋白的制备:将步骤(3)得到的脱脂米糠和去离子水按1 g:7 mL混合,用1.2 mol/L NaOH溶液调节pH值至9.5,在35 ℃、120 r/min下搅拌反应2.5 h,随后在9500r/min下离心11 min,取上清液用1.2 mol/L HCl溶液调节pH至4.1,在22 ℃静置35 min,随后在4500 r/min,5 ℃下离心11 min得到米糠蛋白沉淀,用5 ℃的去离子水洗涤沉淀3次后,再将蛋白沉淀按1 g:7 mL分散于5 ℃的去离子水中,用1.2 mol/L NaOH溶液调节pH至7.0,冷冻干燥得到一种功能性质较好的米糠蛋白。
以上方法制备的米糠蛋白为试验组。同时,以新鲜米糠为原料,提供对照组,对照组除不经过复合酶催化反应以外,粉碎、挤压稳定化、干燥、脱脂、碱溶酸沉、冷冻干燥提取等工序和参数与试验组一致。
对照组和试验组米糠蛋白的功能性质测定方法与实施例1中的测定方法相同。
经测定,试验组米糠蛋白的持水性893%,持油性734%,乳化性84 m2/g,乳化稳定性299 min,起泡性177%,起泡稳定性86%。
对照组米糠蛋白的持水性409%,持油性274%,乳化性28 m2/g,乳化稳定性156min,起泡性66%,起泡稳定性55%。
试验组米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,分别是对照组的2.18倍、2.69倍、3倍、1.92倍、2.68倍、1.56倍。
实施例3
一种提高米糠蛋白功能性质方法,具体操作步骤如下:
(1)米糠粉碎:将500g新鲜米糠(酸值4.0 mg KOH / g油)用高速万能粉碎机进行粉碎、过筛,细度达到200目,得到米糠细粉;
(2)复合酶催化反应:用去离子水配制纤维素酶(酶活为2×105 U/g)浓度为2 g/L和脂肪氧合酶(酶活为6×104 U/mg)浓度为1 g/L的酶混合液,将酶混合液与步骤(1)得到的米糠细粉按质量比80:100混合,并用电动搅拌器搅拌均匀,搅拌速率800 r/min,搅拌时间10 min;将混合后的米糠放于人工气候箱的托盘中控温控湿反应,先在温度60 ℃,相对湿度95%下反应3 h,然后保持相对湿度不变,温度降低到30 ℃下反应3 h,再将温度升高到30 ℃,相对湿度降低到40 %继续反应4 h,得到复合酶催化反应后的米糠;
(3)脱脂米糠的制备:将步骤(2)得到的复合酶催化反应后的米糠采用双螺杆挤压机进行稳定化处理,稳定化条件为:米糠水分含量24wt%,进料量22 kg/h,螺杆转速140 r/min,挤压温度140 ℃;将挤压后的米糠冷却到50 ℃,在烘箱中维持50 ℃干燥2 h后取出,用高速万能粉碎机粉碎至100目,再将粉碎后米糠用石油醚脱脂,料液比1 g:5 mL混合脱脂,重复脱脂4次,得到脱脂米糠;
(4)米糠蛋白的制备:将步骤(3)得到的脱脂米糠和去离子水按1 g:8 mL混合,用1.5 mol/L NaOH溶液调节pH值至9.6,在40 ℃、140 r/min下搅拌反应3h,随后在10 000 r/min下离心12 min,取上清液用1.5 mol/L HCl溶液调节pH至4.2,在25 ℃静置40 min,随后在5000 r/min,6℃下离心12 min得到米糠蛋白沉淀,用6℃的去离子水洗涤沉淀4次后,再将蛋白沉淀按1 g:8 mL分散于6 ℃的去离子水中,用1.5 mol/L NaOH溶液调节pH至7.0,冷冻干燥得到一种功能性质较好的米糠蛋白。
以上方法制备的米糠蛋白为试验组。同时,以新鲜米糠为原料,提供对照组,对照组除不经过复合酶催化反应以外,粉碎、挤压稳定化、干燥、脱脂、碱溶酸沉、冷冻干燥提取等工序和参数与试验组一致。
对照组和试验组米糠蛋白的功能性质测定方法与实施例1中的测定方法相同。
经测定,试验组米糠蛋白的持水性901%,持油性755%,乳化性85 m2/g,乳化稳定性307min,起泡性183%,起泡稳定性87%。
对照组米糠蛋白的持水性412%,持油性279%,乳化性28 m2/g,乳化稳定性157min,起泡性68%,起泡稳定性56%。
试验组米糠蛋白的持水性、持油性、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,分别是对照组的2.19倍、2.71倍、3.04倍、1.96倍、2.69倍、1.55倍。

Claims (6)

1.一种提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将新鲜米糠粉碎,得到米糠细粉;(2)配制纤维素酶和脂肪氧合酶混合液,将酶混合液与米糠细粉搅拌均匀后控温控湿反应;(3)将反应后的米糠挤压稳定化、干燥、脱脂,得到脱脂米糠;(4)将脱脂米糠用碱溶酸沉法提取米糠蛋白,冷冻干燥,即得到一种功能性质较好的米糠蛋白;
具体操作步骤如下:
(1)米糠粉碎:将新鲜米糠用粉碎机进行粉碎、过筛,细度达到180~200目,得到米糠细粉;
(2)复合酶催化反应:用水配制纤维素酶浓度为2~4 g/L和脂肪氧合酶浓度为1~3 g/L的酶混合液,将酶混合液与步骤(1)得到的米糠细粉按质量比60~80:100混合,并用搅拌器搅拌均匀;将混合后的米糠放于人工气候箱的托盘中控温控湿反应,得到复合酶催化反应后的米糠;
(3)脱脂米糠的制备:将步骤(2)得到的复合酶催化反应后的米糠采用双螺杆挤压机进行稳定化处理,稳定化条件为:米糠水分含量18wt%~24wt%,进料量16~22 kg/h,螺杆转速100~140 r/min,挤压温度120~140 ℃;将挤压后的米糠冷却到40~50 ℃,在烘箱中维持40~50 ℃干燥后取出,用粉碎机粉碎至80~100目,再将粉碎后米糠用正己烷或石油醚脱脂,得到脱脂米糠;
(4)米糠蛋白的制备:将步骤(3)得到的脱脂米糠和水按1 g:6~8 mL混合,用1.0~1.5mol/L NaOH溶液调节pH值至9.4~9.6,在30~40 ℃、100~140 r/min下搅拌反应,随后在9000~10 000 r/min下离心,取上清液用1.0~1.5 mol/L HCl溶液调节pH至4.0~4.2,在20~25 ℃静置,随后在4000~5000 r/min,4~6 ℃下离心,得到米糠蛋白沉淀,用4~6 ℃的水洗涤沉淀后,再将蛋白沉淀按1 g:6~8 mL分散于4~6 ℃的水中,用1.0~1.5 mol/LNaOH溶液调节pH至7.0,冷冻干燥得到一种功能性质较好的米糠蛋白;
步骤(2)中,所述控温控湿反应,是先在温度50~60 ℃,相对湿度85~95%下反应2~3h,然后保持相对湿度不变,温度降低到20~30 ℃下反应2~3 h,再将温度升高到30~40℃,相对湿度降低到35~40 %继续反应4~6 h。
2.根据权利要求1所述的提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述新鲜米糠的酸值≤4mg KOH / g油。
3.根据权利要求1或2所述的提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于:步骤(2)中,搅拌速率200~800 r/min,搅拌时间10~20 min。
4.根据权利要求1或2所述的提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述纤维素酶的酶活为1×105~2×105 U/g,脂肪氧合酶的酶活为5×104~6×104 U/mg。
5.根据权利要求1或2所述的提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于:步骤(3)中,脱脂的料液比1 g:3~5 mL;重复脱脂2~4次。
6.根据权利要求1或2所述的提高米糠蛋白功能性质的方法,其特征在于:步骤(4)中,所述的功能性质较好的米糠蛋白:持水性875%~901%,持油性711%~755%,乳化性81~85m2/g,乳化稳定性286~307 min,起泡性165%~183%,起泡稳定性85%~87%。
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