CN108174649A - 一种促进二色补血草快速开花结实的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种促进二色补血草快速开花结实的方法。促进二色补血草快速开花结实的最佳方案为：以种子为材料，春化温度3℃时，30天左右二色补血草植株的开花率可达100％。而以二色补血草幼苗为材料，10℃时45天可以满足二色补血草的幼苗春化要求。将幼苗分别放置在不同的光照时间的培养条件下，发现每天的光照时间为14h时，二色补血草幼苗则可以进入花期。本发明填补了二色补血草人为花诱导方面的空白，找到一种最佳的促进二色补血草提前进入花期的有效方法，快速且有效的获得二色补血草后代种子，为探讨二色补血草的相关基因功能分析研究奠定基础并提供实验支持。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种促进二色补血草快速开花结实的方法。
背景技术
全世界盐碱地的面积正在逐年增加，中国是世界上拥有盐碱地较多的国家之一，尤其是耕地盐渍化的现象日趋严重，这对于农业发展以及环境保护都是巨大的挑战，充分发掘盐生植物资源、利用盐生植物宝库的任务就尤为迫切。具有典型盐腺结构的泌盐盐生植物二色补血草[Limonium bicolor(Bunge)O.Kuntze]是白花丹科(蓝雪科，Plumbaginaceae)补血草属(Limonium)的双子叶泌盐盐生植物，具有多细胞盐腺，多分布于盐碱地和滨海滩涂，耐盐性较强，在改造盐碱地和培育耐盐植物方面有重要的研究价值，被誉为改造盐碱地的“先锋植物”，是黄河三角洲盐渍化滩涂泌盐盐生植物的优势物种，而其特有的盐腺结构是其适应盐渍环境的主要因素。而对二色补血草进行耐盐性分析及其盐腺发育和功能基因研究则离不开二色补血草植株的繁育。
二色补血草是典型的二年生草本植物，一般情况下，从种子萌发的二色补血草幼苗当年不能开花。在其个体发育过程中必须经过一个低温时期，才能继续下一个阶段的发育，诱导成花，否则不能正常开花。许多二年生植物属于这一类，如月见草、毛地黄、毛蕊花等，秋季播种后，以幼苗的形式越冬完成春化过程，第二年春天开花。而对于二色补血草而言，春季播种则不能正常开花结实。除此之外，植物开花还需要光周期的调节，即要满足一定的光照时间才可以诱导开花，因此，可以通过找到植物花诱导所需的光照时间，满足其光周期，从而加速其生殖生长进程，缩短其生活周期的时间。
前期对二色补血草的研究多集中在其耐盐性分析(于德花2008；李田等2010)、再生体系的建立(范小峰等2007)、盐腺结构的观察(Ziegler and Lüttge 1967；Wiehe andBreckle 1990；辛莎莎等2011；倪细炉等2012)、叶片泌盐能力的测定(Arisz et al.1955；Faraday et al.1986；Ding et al.2010)、叶片EST文库的构建(Chen et al.2007；Wang etal.2008)等。目前，对二色补血草盐腺相关基因的研究和分析方面较多，这就迫切需要加快获得二色补血草后代种子的进程，缩短其生长发育周期。然而，二色补血草植株开花所需的低温和光照条件的研究还未见报道。
发明内容
本发明主要目的是提供一种促进二色补血草快速开花结实的方法，可以快速且有效的获得二色补血草后代种子，为探讨二色补血草相关基因功能分析研究提供实验支持。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：
本发明提供一种促进二色补血草快速开花结实的方法，所述方法为：将二色补血草种子在低温环境中处理13～34天；或将二色补血草种子培育至长成幼苗，将幼苗在低温环境中放置25～60天后，取出后放于温室中进行培养，并进行光照处理。
进一步地，所述二色补血草种子在2～5℃低温环境中处理25～34天。
更进一步地，所述二色补血草种子在3℃低温环境中处理30天。
本发明通过实验发现将二色补血草的种子放在3℃条件下13天，部分幼苗即可完成春化过程，但随着时间的延长，植株开花率逐渐增加，当春化时间达到25天时，绝大多数种子都可以完成春化作用，其幼苗开花率可以达到95％以上，30天时，二色补血草幼苗开花率达到100％。
进一步地，将幼苗在8～12℃低温环境中放置30～55天。
更进一步地，将幼苗在10℃低温环境中放置45天。
本发明通过实验证明，10℃条件下45天可以满足二色补血草的春化要求
进一步地，光照处理时间为13～16h。
更进一步地，光照处理时间为14h。
本发明技术人员通过给予二色补血草不同的光照时间时，发现光照时长为14h时，可以促进二色补血草植株开花。
本发明通过实验获得了二色补血草种子春化的温度为3℃、处理30天，或者幼苗春化10℃、处理45天都可以促使二色补血草完成春化作用，缩短进入花期的时间。二色补血草为长日照植物，完成春化后的二色补血草植株，当满足光照时间大于14h时，则可以进入花期，完成生殖生长过程。本发明填补了二色补血草人为花诱导方面的空白，找到一种最佳的促进二色补血草提前进入花期的有效方法，快速且有效的获得二色补血草后代种子，为探讨二色补血草的相关基因功能分析研究奠定基础并提供实验支持。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1：3℃条件下二色补血草种子春化开始时种子(A)、种子萌发(B)。
图2：萌动种子春化的时间对开花率的影响。
图3：春化后的二色补血草幼苗在自然光周期下的开花情况(A)和10℃条件下二色补血草幼苗春化时间对开花率的影响(B)。
图4：二色补血草植株在光照时间为14h时抽薹现蕾。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例
(一)种子春化
1)分别取50粒二色补血草种子均匀放于盛有滤纸的培养皿中。
2)分别加入5mL的1/5Hoagland营养液，将培养皿放于3℃冰箱中。
3)分别处理0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、17、
20、25、30、34天。处理时进行倒计时的方法，使所有处理在同一天结束
低温处理。
4)统一播种于育苗基质中进行培养，自然光周期下观察统计种子春化后幼苗的
开花情况。
(二)幼苗春化
1)二色补血草种子播种于育苗基质中进行培养，待幼苗长至6片真叶。
2)将幼苗分别放在10℃培养箱中培养。
3)分别放置15、20、25、30、35、40、45、50、60天，同一天到达处理时间。4)取出后放于温室中进行培养，自然光周期下观察统计种子春化后幼苗的开花
情况。
(三)光周期
1)二色补血草种子播种于育苗基质中进行培养，待幼苗长至6片真叶。分别将生长至六叶期的二色补血草幼苗取50粒二色补血草种子均匀放于盛有滤纸的培养皿中。
2)将幼苗分别放在光照时间为13、13.5、14、14.5、15、15.5和16h的条件下进行培养。
3)观察并统计二色补血草的开花情况。
通过分析不同处理条件下的二色补血草植株的开花情况，将萌动的种子放在3℃条件下13天，部分幼苗即可完成春化过程，但随着时间的延长，植株开花率逐渐增加，当春化时间达到25天时，绝大多数种子都可以完成春化作用，其幼苗开花率可以达到95％以上，30天时，二色补血草幼苗开花率达到100％(图1、图2)。而采用幼苗春化时发现，10℃条件下45天可以满足二色补血草的春化要求(图3)。给予二色补血草不同的光照时间时，发现光照时长为14h时，可以促进二色补血草植株开花(图4)。
由此可知，促进二色补血草快速开花结实的最佳方案为：以种子为材料，春化温度3℃时，30天左右二色补血草植株的开花率可达100％。而以二色补血草幼苗为材料，10℃时45天可以满足二色补血草的幼苗春化要求。将幼苗分别放置在不同的光照时间的培养条件下，发现每天的光照时间为14h时，二色补血草幼苗则可以进入花期。
本发明对二色补血草开花所需要的低温和光照条件进行了探究，分析了使二色补血草植株提前进入开花结实阶段所需的最佳温度、最佳时间、和最佳光照时间。填补了二色补血草人为花诱导方面的空白，找到一种最佳的促进二色补血草提前进入花期的有效方法，快速且有效的获得二色补血草后代种子，为探讨二色补血草的相关基因功能分析研究奠定基础并提供实验支持。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域的技术人员可以对本发明做各种修改或改动，但这些改动或修改的等价形式同样落在本发明所限定的范围内。
Claims (7)
1.一种促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，所述方法为：将二色补血草种子在低温环境中处理1～34天；或将二色补血草种子培育至长成幼苗，将幼苗在低温环境中放置15～60天后，取出后放于温室中进行培养，并进行光照处理。
2.根据权利要求1所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，所述二色补血草种子在2～5℃低温环境中处理13～34天。
3.根据权利要求2所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，所述二色补血草种子在3℃低温环境中处理30天。
4.根据权利要求1所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，将幼苗在8～12℃低温环境中放置30～55天。
5.根据权利要求4所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，将幼苗在10℃低温环境中放置45天。
6.根据权利要求1所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，光照处理时间为13～16h。
7.根据权利要求6所述促进二色补血草快速开花结实的方法，其特征在于，光照处理时间为14h。
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