CN108169359A - 一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法 - Google Patents

一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，该方法萃取时间短、检测精度高。属于化学检测领域，本发明提供的技术方案采用ASE法萃取蓖麻子粉末，并收集甲醇萃取液；采用HPLC法测定甲醇萃取液中的蓖麻碱的含量。本发明可以替换药典方法对蓖麻子中蓖麻碱进行提取以及含量测定。

Description

一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法
技术领域
本发明属于化学检测领域，尤其是一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法。
背景技术
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末(过二号筛)约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流提取4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
该方法耗时长，对技术人员的专业水平要求较高。
发明内容
针对上述不足，本发明旨在提供一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，该方法萃取时间短、检测精度高。
为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE法萃取蓖麻子粉末，并收集甲醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的蓖麻碱的含量。
优选地，所述的步骤1依次包括下述子步骤：
步骤S1：将蓖麻子样品粉碎，过二号筛，取1g与0.3g石英砂混合；
步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用正己烷萃取除杂，再用85％乙醇萃取，结束后，用甲醇将其定容至25ml。
优选地，步骤S3所述的除杂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
优选地，步骤S3所述的提取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数如下：色谱柱为Thermo SyncronisDim.AQ；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为水-乙腈；检测波长为307nm。
优选地，所述的色谱柱的规格为1.7μm，50×2.1mm。
优选地，所述的流动相为体积比等于90：10的水-乙腈。
优选地，所述的ASE萃取池的体积为10ml。
本发明与传统方法相比，具有以下优点：
1、本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用石油醚加热回流1h除酯后，采用85％乙醇加热回流1h，杂质较少。而石油醚易挥发，易燃，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、85％乙醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，85％乙醇提取后蓖麻碱含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。
2、在除杂过程中，药典方法加入石油醚加热回流4h，时间相对较长，石油醚易挥发，易燃，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，3次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数3次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取2次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
1、仪器设备及试剂
1.1仪器：
电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪
1.2水：符合GB/T 6682规定的一级水。
2、方法
2.1对照品溶液的制备：取蓖麻碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柚皮苷0.17mg的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备
2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：
取本品粉末(过二号筛)约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流提取4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：
样品经粉碎机粉碎，过二号筛，取1.0g，精密称定，与约1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好纤维滤膜的ASE 10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。萃取结束后，把萃取液转移至25ml容量瓶中，用少量甲醇清洗萃取瓶3次合并至容量瓶中，使用甲醇定容至刻度，即得。
2.3 ASE萃取条件
除杂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
提取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
2.4色谱条件与系统适用性试验
a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)；
b)色谱柱：Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ，1.7μm，50×2.1mm；
c)柱温：40℃；
d)流速：0.3mL/min；
e)流动相：水：乙腈(90：10)；
f)检测波长：307nm；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
2.5测定法
照高效液相色谱法(通则0512)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.6标准限值要求
本品按干燥品计算，含蓖麻碱不得过0.32％。
2.7计算(外标法)
式中CR—对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；
AX—供试品的峰面积；
AR—对照品峰面积。
注意：
使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；
萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；
萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；
开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；
使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。
3、结果
3.1线性关系
取蓖麻碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.7mg的溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.3μl、0.5μl、1.0μl、1.2μl、1.5μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果见表1。
以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：柚皮苷y＝7708.7x-28.51，R2＝1,蓖麻碱在0.015～0.233mg/ml围内呈良好的线性关系。
表1线性实验结果
3.2重现性实验
取相同批号的样品(批号：蓖麻子2)1.0g，共4份，精密称定，按上述ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中蓖麻碱的含量见表2，RSD为0.01％，试验表明ASE提取方法重复性良好。
表2重现性实验结果
3.3精密度和稳定性试验
取蓖麻碱对照品溶液(0.1553mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.30％，表明仪器精密度良好。
取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，10h依法测定。结果蓖麻碱峰面积的RSD为0.32％，表明供试品溶液在12h内稳定。
3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(2批)
表3不同ASE仪的提取含量结果
表4ASE与药典方法提取的样品含量结果
4、讨论
4.1 ASE提取溶剂的选择：
试验中曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用石油醚加热回流1h除酯后，采用70％甲醇加热回流1h，杂质较少。而石油醚易挥发，易燃，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、70％甲醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，70％甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。
4.2 ASE提取条件的优化
在除杂过程中，药典方法加入石油醚加热回流4h，时间相对较长，石油醚易挥发，易燃，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，3次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数3次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取2次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE法萃取蓖麻子粉末，并收集甲醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的蓖麻碱的含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，所述的步骤1依次包括下述子步骤：
步骤S1：将蓖麻子样品粉碎，过二号筛，取1g与0.3g石英砂混合；
步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用正己烷萃取除杂，再用85％乙醇萃取，结束后，用甲醇将其定容至25ml。
3.根据权利要求2所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的除杂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
4.根据权利要求2所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的提取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。
5.根据权利要求1所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，步骤2所述的HPLC法的检测参数如下：色谱柱为Thermo Syncronis Dim.AQ；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为水-乙腈；检测波长为307nm。
6.根据权利要求5所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，所述的色谱柱的规格为1.7μm，50×2.1mm。
7.根据权利要求5所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，所述的流动相为体积比等于90：10的水-乙腈。
8.根据权利要求2所述的一种测定蓖麻子中蓖麻碱含量的方法，其特征在于，所述的ASE萃取池的体积为10ml。
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