CN108047284A - 一种ase法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法 - Google Patents

一种ase法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，该方法萃取时间较短、重复性好，属于京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的提取领域。该方法将车前子样品粉碎，过二号筛，取1g与3g石英砂混合；将步骤1所得的混合物装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；用乙醇萃取，并用乙醇将萃取液定容至50ml。本发明可以替代药典方法对车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷进行提取，并进行含量测定。

Description

一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法
技术领域
本发明属于京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的提取领域，尤其是一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法。
背景技术
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用60％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
该方法回流时间长，对技术人员的专业水平要求较高。
发明内容
针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，该方法萃取时间较短、重复性好。
为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，依次包括下述步骤：
步骤1：将车前子样品粉碎，过二号筛，取1g与3g石英砂混合；
步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤3：用乙醇萃取，并用乙醇将萃取液定容至50ml。
优选地，步骤3所述的萃取条件为：萃取温度为80℃，萃取时间为8min；循环次数为3次；冲洗体积为60％；吹扫时间为60s。
优选地，步骤2所述的ASE萃取池的体积为10ml。
本发明与传统方法相比，具有下述优点：
本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用60％乙醇提取柚皮苷相对含量较高，杂质较少，故对使用乙醇和60％乙醇进行了溶剂考察，结果显示乙醇与60％乙醇提取车前子含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。
本发明对萃取温度进行了考察，并且对萃取时间也要考察，在上述实验基础上，我们采用3因素3水平正交实验方案L9(33)安排实验，考察了3个因素对加速溶剂萃取车前子中的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷过程的影响。本实验确定萃取温度、静态萃取时间、循环次数以及冲洗体积为考察因素，确定从车前子中的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷的最佳快速溶剂萃取工艺，从而确定最佳的萃取参数。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。
实施例1
1、仪器设备及试剂
1.1仪器：
电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000 UHPLC液相色谱仪
1.2试剂：
水：符合GB/T 6682规定的一级水；
乙醇(CH4O)：色谱纯；
醋酸(CH3COOH)：分析纯。
2、方法
2.1对照品溶液的制备：
对照品溶液的制备取京尼平苷酸对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加60％乙醇制成每lml各含0.1mg的混合溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用60％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，过二号筛，取1g，精密称定，与约1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好纤维滤膜的ASE 10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。萃取结束后，把萃取液转移至50ml容量瓶中，用少量乙醇清洗萃取瓶3次合并至容量瓶中，使用乙醇定容至刻度，即得。
2.3ASE萃取条件
萃取温度为80℃萃取时间为8min；循环次数为3次；冲洗体积为60％；吹扫时间为60s。
2.4色谱条件与系统适用性试验
a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)；
b)色谱柱：Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ，1.7μm，50×2.1mm；
c)柱温：40℃；
d)流速：0.3mL/min；
e)流动相：乙醇-醋酸-水(35:4:65)；
f)检测波长：283nm；
理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000。
2.5测定法
照高效液相色谱法(通则0512)测定；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.6标准限值要求
本品按干燥品计算，含京尼平苷酸(C16H22O10)不得少于0.50％，毛蕊花糖苷(C29H36O15)不得少于0.40％。
2.7计算(外标法)
式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；
AX——供试品的峰面积；
AR——对照品峰面积。
注意：
使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；
萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；
萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；
开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；
使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。
3、结果
3.1重现性试验
取相同批号的样品(批号：20151001)0.5g，共4份，精密称定，按上述ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行实验，测得样品中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量见表1，RSD为1.2％，实验表明ASE提取方法重复性良好。
表1ASE法萃取的京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量
重复性1 重复性2 重复性3 重复性4 RSD％
结果％ 2.082 2.064 2.074 2.027 1.2
3.2精密度和稳定性试验
取取京尼平苷酸对照品、毛蕊花糖苷对照品混合溶液，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.5％，表明仪器精密度良好。
取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，10h依法测定。结果黄芪甲苷峰面积的RSD为0.2％，表明供试品溶液在12h内稳定。
3.3样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(3批)
表2样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较
ASE1 ASE2 药典
150523 1.574 1.54 1.971
151001 1.698 1.581 1.902
1511024 0.964 1.095 1.713
20151001 2.073 1.626 2.139
4、讨论：
4.1 ASE提取溶剂的选择
本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用60％乙醇提取柚皮苷相对含量较高，杂质较少，故对使用乙醇和60％乙醇进行了溶剂考察，结果显示乙醇与60％乙醇提取车前子含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。
4.2 ASE提取条件的优化
对萃取温度进行考察，并且对萃取时间也要考察，在上述实验基础上，我们采用3因素3水平正交实验方案L9(33)安排实验，考察了3个因素对加速溶剂萃取车前子中的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷过程的影响。本实验确定萃取温度、静态萃取时间、循环次数以及冲洗体积为考察因素，详见表3。确定从车前子中的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷的最佳快速溶剂萃取工艺，结果见表4-6。
表3因素水平
表4京尼平苷酸的正交实验极差分析结果
因素 温度 时间 次数 实验结果
实验1 1 1 1 1 1.054
实验2 1 2 2 2 1.145
实验3 1 3 3 3 1.13
实验4 2 1 2 3 1.025
实验5 2 2 3 1 1.073
实验6 2 3 1 2 1.014
实验7 3 1 3 2 1.022
实验8 3 2 1 3 1.057
实验9 3 3 2 1 1.099
均值1 1.110 1.034 1.042 1.075
均值2 1.037 1.092 1.090 1.060
均值3 1.059 1.081 1.075 1.071
极差 0.073 0.058 0.048 0.015
表5毛蕊花糖苷的正交实验极差分析结果
表6京尼平苷酸和毛蕊花糖苷总量的正交实验极差分析结果
因素 温度 时间 次数 实验结果
实验1 1 1 1 1 1.875
实验2 1 2 2 2 2.03
实验3 1 3 3 3 2.02
实验4 2 1 2 3 1.86
实验5 2 2 3 1 1.93
实验6 2 3 1 2 1.848
实验7 3 1 3 2 1.832
实验8 3 2 1 3 1.866
实验9 3 3 2 1 1.926
均值1 1.975 1.856 1.863 1.910
均值2 1.879 1.942 1.939 1.903
均值3 1.875 1.931 1.927 1.915
极差 0.100 0.086 0.076 0.012
由极差分析可以看出，提取次数对京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量影响最大，其次是提取温度和提取时间。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度80℃，提取时间8min，提取次数3次。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：将车前子样品粉碎，过二号筛，取1g与3g石英砂混合；
步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤3：用乙醇萃取，并用乙醇将萃取液定容至50ml。
2.根据权利要求1所述的一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，其特征在于，步骤3所述的萃取条件为：萃取温度为80℃，萃取时间为8min；循环次数为3次；冲洗体积为60％；吹扫时间为60s。
3.根据权利要求1所述的一种ASE法萃取车前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的方法，其特征在于，步骤2所述的ASE萃取池的体积为10ml。
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