CN108148765A - 一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用 - Google Patents

一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用，其中，该耐酸拟康宁木霉分类命名为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.14878。本发明的有益之处在于：(1)具有更强的耐酸性，可耐受pH3.0以上的酸化，在酸化土壤中引进该耐酸拟康宁木霉后，通过生物防治可以有效的防治立枯丝核菌，并可以有效的改善农业生产环境，维持农田生态系统平衡；(2)在农田中使用时，可以抑制立枯丝核菌的生长；(3)对多种土传病害病原菌在酸性条件和中性条件下都有较好的抑制作用，因此施用到土壤中除了防治目标菌株，还可以预防多种土传病害，维持土壤微生物群落的稳定性。

Description

一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用
技术领域
本发明涉及一株霉菌及其应用，具体涉及一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用，属于微生物技术领域。
背景技术
立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)在自然界中分布广泛，寄主广、腐生性强，可引起多种蔬菜瓜果和农作物病害。主要引起植物的根腐、烂种、苗期猝倒和立枯病，也会引起禾谷类作物的纹枯病，还可侵染玉米、大豆、花生、甘蔗、棉花等。该菌通常以菌丝和菌核的形态习居于土壤，在土壤中存活时间长，连作、轮作都能使病原菌数量大量积累，在育苗中后期发病严重，造成大量死苗甚至毁床，被认为是最具破坏力的土传植物病原物之一。长期以来，农业上多采用恶霉灵、多菌灵等化学农药对立枯丝核菌进行防治，连续长期用药不仅导致病原菌产生抗药性，防效逐年降低，农药残留也给环境和社会带来众多负面影响。
目前已报道的立枯丝核菌的生防真菌主要是木霉属(Trichoderma spp.)和粘帚霉属(Gliocladium spp.)。Lewis等人使用了变绿胶霉(现称绿木霉T.virens)TRI-4菌株以及钩状木霉(T.hamatum)GL-3、GL-21或GL-32菌株的制剂用于防治由立枯丝核菌引起的茄子猝倒病，取得防效的同时还抑制了立枯丝核菌的腐生生长。
木霉属真菌为世界性分布，其物种多样性丰富，是子囊菌的重要类群，主要存在于森林、沟坡、农田、草地等潮湿的生境中，土壤、枯枝落叶腐木等植物残体以及其他真菌的子实体都可以是木霉的生长基物，从植物根围、叶围及种子、球茎表面也经常可以分离到木霉。自1932年Weindling发现木霉菌对几种土壤真菌具有拮抗作用以来，在农业领域，国际上已经有50余种木霉生防制剂或菌肥产品注册登记，并进行商业化生产，被广泛用于各种植物真菌病害的防治，在农业生产中发挥着重要作用。
木霉菌的生物防治机制已经得到了较为深入和广泛的研究，重寄生作用是木霉生防机制中最重要的作用之一。Lifshitz等的研究表明木霉在重寄生于寄主真菌上时，寄主真菌细胞表面的特定外源凝集素决定了木霉与真菌之间的转化关系，许多研究者观察到移除寄生菌丝后，病原菌菌丝上都有溶解位点和穿刺孔。
木霉生防机制中的另外几个比较重要的作用是：抗生作用、竞争作用。
抗生作用是指木霉在代谢过程中产生抗生素和一些酶类化学物质，这些物质可以毒害植物病原真菌，Metcal和Wilson在研究中发现，康宁木霉Tr-5菌株可以通过产生内、外几丁质酶来破坏洋葱根部白腐小核菌的细胞壁。
竞争作用是指木霉与病原菌争夺生长空间和营养，吕黎等认为哈茨木霉能够分泌的大量孢外降解酶来酶解土壤中的纤维素、葡聚糖、几丁质等，以获得能量来源，从而在恶劣环境中相对于其他病原菌的适应性更强。
除此以外，木霉的生物防治机制还有协同拮抗作用、诱导植物产生抗性等。
木霉在防治立枯丝核菌中发挥着重要的作用，但是目前对木霉耐酸性的研究还鲜见报道，这使得木霉在酸化环境中的使用受到限制，诸多研究表明，在酸性条件下，植物土传病害的发生率要高于中性条件下的发生率，因此筛选耐酸木霉并研究其在酸性条件下对病原菌的抑制作用具有重要意义。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一株耐酸拟康宁木霉，其特征在于，分类命名为拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.14878。
前述的耐酸拟康宁木霉，其特征在于，前述耐酸拟康宁木霉能够耐受pH3.0以上的酸化。
前述的耐酸拟康宁木霉，其特征在于，前述耐酸拟康宁木霉以分生孢子、菌丝体、含有分生孢子和菌丝体三种形式之一存在。
前述的耐酸拟康宁木霉在抑制立枯丝核菌上的应用，其特征在于，将前述耐酸拟康宁木霉制成液剂、乳剂或悬浮剂使用。
前述的应用，其特征在于，前述液剂、乳剂或悬浮剂的用量为5×105cfu/株～10×105cfu/株。
前述的应用，其特征在于，将前述耐酸拟康宁木霉制成粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂使用。
前述的应用，其特征在于，前述粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂的用量为2×103cfu/株～10×105cfu/株。
本发明的有益之处在于：
(1)从贵州偏酸性的农田土壤中分离到该菌株，并经过强酸性条件的筛选，所以具有更强的耐酸性，可耐受pH3.0以上的酸化(在pH3.0条件下对棉花立枯丝核菌的抑制效果达到70％以上)，在酸化土壤中引进该耐酸拟康宁木霉后，通过生物防治可以有效的防治立枯丝核菌，并可以有效的改善农业生产环境，维持农田生态系统平衡；
(2)编号为MN12373的拟康宁木霉菌株的挥发性代谢产物对立枯丝核菌也有很好的抑制作用(抑菌率达到44.31％)，因此在农田中使用时，可以抑制立枯丝核菌的生长；
(3)编号为MN12373的拟康宁木霉菌株对多种土传病害病原菌在酸性条件和中性条件下都有较好的抑制作用，因此施用到土壤中除了防治目标菌株，还可以预防多种土传病害，维持土壤微生物群落的稳定性。
附图说明
图1(a)是编号为A0001的木霉在不同pH条件下的生长曲线；
图1(b)是编号为MN12373的木霉在不同pH条件下的生长曲线；
图1(c)是编号为MN12379的木霉在不同pH条件下的生长曲线；
图1(d)是编号为MN12721的木霉在不同pH条件下的生长曲线；
图2(a)至图2(d)是在pH3.0条件下，编号为MN12373的菌株分别与病原菌R.solani、Fusarium commune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图2(e)至图2(h)是在pH3.0条件下，T22菌株分别与病原菌R.solani、Fusariumcommune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图3(a)至图3(d)是在pH5.0条件下，编号为MN12373的菌株分别与病原菌R.solani、Fusarium commune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图3(e)至图3(h)是在pH5.0条件下，T22菌株分别与病原菌R.solani、Fusariumcommune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图4(a)至图4(d)是在pH7.0条件下，编号为MN12373的菌株分别与病原菌R.solani、Fusarium commune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图4(e)至图4(h)是在pH7.0条件下，T22菌株分别与病原菌R.solani、Fusariumcommune、Colletotrichum gloeosporioides、Fusarium oxysporum对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况，其中，培养皿上方是木霉菌株，下方是病原菌；
图5(a)是对照组的立枯丝核菌菌落形态；
图5(b)是编号为MN12373的木霉的挥发性物质对立枯丝核菌的抑菌效果图；
图6(a)至图6(e)分别是编号为MN12373的菌株的孢子、分生孢子梗、产孢结构、分生孢子和菌丝形态；
图7是编号为MN12373的菌株在PDA平板上28℃恒温培养4d后的形态。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
第一部分：分离筛选得到耐酸拟康宁木霉
1、培养基
木霉选择性固体培养基：MgSO4·7H2O 0.2g/L，K2HPO4 0.9g/L，KCl 0.15g/L，NH4NO3 1.0g/L，葡萄糖3.0g/L，氯霉素0.25g/L，敌磺钠0.3g/L，五氯硝基苯0.2g/L，玫瑰红0.15g/L，琼脂15g/L，混合均匀后于120℃下灭菌20min，温度降至50℃～60℃时分装，晾凉晾干备用。
耐酸木霉选择性固体培养基：向每升PDA培养基中加入2.5mg浓度为20％的盐酸得到pH3.0的耐酸木霉选择性固体培养基，于120℃下灭菌20min，温度降至50℃～60℃时分装至90mm平板上，晾凉晾干备用。
2、分离筛选
分离筛选的过程为：首先，我们在全国范围内广泛采集农业土壤和农作物根系土壤；然后，采用稀释涂布法，从木霉选择性固体培养基上分离出木霉菌株，并挑取不同形态的木霉菌落进行纯化，之后25％甘油管保存至-80℃冰箱中；接下来，将冷冻保存的菌种活化，将活化后的菌株接种到耐酸木霉选择性固体培养基上，并从该培养基上分离得到耐酸木霉。
分离筛选的结果：我们筛选得到了18株可耐受pH3.0的耐酸木霉。
3、观察不同pH值下菌株形态学特征
向每升PDA培养基中分别加入2.5mg、1.5mg、0mg浓度为20％的盐酸，分别得到pH3.0、pH5.0、pH7.0的耐酸木霉选择性固体培养基，于120℃下灭菌20min，温度降至50℃～60℃时分装至90mm平板上，晾凉晾干备用。
将筛选出来的18株木霉分别转接到pH值分别为3.0、5.0和7.0的耐酸木霉选择性固体培养基中，28℃恒温培养箱培养7d，观察菌株产孢情况并测量菌落直径，每处理重复3次，每个重复设3个平板。
结果表明：培养基中HCl的存在对菌株的生长速度、产孢量都有较大影响，随着酸性增强，菌株生长受到抑制，生长速率下降，产孢量下降，但不同菌株受到的抑制程度不完全相同，在所测试的18株木霉菌株中，有6株木霉对酸性环境的耐受能力较强，其中，编号为A0001、MN12373、MN12721、MN12379的4株木霉的耐酸能力更强一些，它们的来源信息如表1所示。
表1木霉来源信息
编号 土样(来源)信息 土壤类型
A0001 灵芝 -
MN12373 贵州省农田 农业土壤
MN12721 广东江门市新基里村 农业土壤
MN12379 贵州省农田 农业土壤
这4株木霉的生长曲线见图1(a)至图1(d)。由图可知：在培养4d时，在pH3.0、5.0和7.0下，这4株木霉的菌落直径都达到了8.5cm。
第二部分：菌株抗病效果分析
1、木霉与病原菌对峙培养
平板对峙培养分别以棉花立枯丝核菌(R.solani)(下文简写为R.s)、分离自草莓病株的镰刀菌(Fusarium commune)(下文简写为Fo.s)、分离自西瓜病株的镰刀菌(Fusarium oxysporum)(下文简写为Fo.v)和分离自草莓病株的胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)(下文简写为C.g)单独作为病原菌，分别以编号为A0001、MN12373、MN12721、MN12379这4株木霉菌单独作为待测木霉菌，以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)T22菌株(分离自biowork哈茨木霉菌产品)作为对照，参照文献《木霉的分离鉴定及对辣椒白绢病抑制效果和机制研究》(湖南农业大学，2010年，冯俊清)中记载的方法进行测试：
(1)从活化3d的病原菌菌落边缘打取菌饼(直径5mm)，将其置于PDA平板一侧中央，对侧中央放置直径5mmPDA琼脂块，28℃恒温培养7d～10d，pH3.0、pH5.0、pH7.0的PDA平板各5个重复作为空白对照；
(2)从活化3d的病原菌菌落边缘打取菌饼(直径5mm)，将其置于pH3.0、pH5.0、pH7.0的PDA平板一侧中央，从活化3d的T22菌株菌落打取直径5mm菌饼，将其置于pH3.0、pH5.0、pH7.0的PDA平板另一侧中央，使病原菌和T22菌株的中心连线穿过平板中央，28℃恒温培养7d～10d，各5个重复作为对照；
(3)从活化3d的病原菌菌落边缘打取菌饼(直径5mm)，将其置于pH3.0、pH5.0、pH7.0的PDA平板一侧中央，从活化3d的木霉菌株(5株)菌落打取直径5mm菌饼，将其置于pH3.0、pH5.0、pH7.0的PDA平板另一侧中央，使病原菌和木霉的中心连线穿过平板中央，28℃恒温培养7d～10d，各5个重复；
(4)接种后，平板倒置培养，每隔24h测量一次病原菌直径，并根据以下公式计算抑菌率：
(5)当两菌接触后，观察记录木霉菌对病原菌的抑制、包围、侵入情形，及其占领病原菌生长空间的过程。
结果表明，这4株菌株在不同pH值下对4种病原菌均有不同程度的抑制作用。
经综合评价，编号为MN12373的菌株的抑制作用最强。
在不同pH条件下，编号为MN12373的菌株和T22菌株与不同病原菌对峙培养10d后，培养基上菌株的生长情况见图2(a)至图2(h)、图3(a)至图3(h)、图4(a)至图4(h)。
由图2(a)至图2(h)可知，在pH3.0条件下，生长10d后，编号为MN12373的菌株对R.solani、F.commune、F.oxysporum和C.gloeosporioides的抑制作用均显著高于T22菌株。经计算，编号为MN12373的菌株对R.solani、F.commune、F.oxysporum和C.gloeosporioides的抑制率分别达到了72％、60％、63％和63％。
由图3(a)至图3(h)可知，在pH5.0条件下，生长10d后，编号为MN12373的菌株对R.solani和F.oxysporum的抑制作用均显著高于T22菌株。经计算，编号为MN12373的菌株对R.solani和F.oxysporum的抑制率分别达到了55％和65％。
由图4(a)至图4(h)可知，在pH7.0条件下，生长10d后，编号为MN12373的菌株对R.solani的抑制率显著高于T22菌株。经计算，编号为MN12373的菌株对R.solan的抑制率达到了38％。
由此可见，相对于T22菌株，编号为MN12373的菌株在不同pH条件下对R.solani、F.commune、F.oxysporum和C.gloeosporioides这4株病原菌，尤其是对R.solani具有较好的抑制作用。
2、木霉挥发性物质的抑菌活性
在编号为MN12373的木霉菌落边缘取直径为5mm的菌块接种于PDA平板上，待菌落直径为35mm时，将其与已培养2d的立枯丝核菌对扣培养(立枯丝核菌在上，木霉在下)，以不接种木霉的PDA平板与接种同等条件的立枯丝核菌PDA平板对口培养作为对照，每个处理重复3次，28℃恒温培养。
待对照立枯丝核菌菌落长满培养皿时，采用十字交叉法测量并记录立枯丝核菌的对照生长量(菌落直径)和处理生长量(菌落直径)，计算抑菌率：
对照立枯丝核菌菌落的生长情况见图5(a)。
编号为MN12373的木霉对立枯丝核菌菌落生长抑制情况见图5(b)。
由此可见，编号为MN12373的菌株的挥发性物质对R.solani的抑制效果显著高于T22菌株。经计算，编号为MN12373的菌株的挥发性物质对R.solani的抑制率达到了44.31％，而T22菌株的抑制率仅为27.06％。
由此可见，编号为MN12373的菌株的挥发性物质对立枯丝核菌生长具有较好的抑制作用。
第三部分：菌株鉴定及保藏
1、菌株鉴定
菌落形态观察：
(1)将编号为MN12373的菌株接于PDA平板上，23℃标准培养架上培养7d，观察菌落形态并镜检其产孢结构和孢子形态；
(2)将编号为MN12373的菌株在PDA平板上28℃恒温培养4d，观察菌落形态。
其中，23℃标准培养架上培养7d，孢子的形态见图6(a)，分生孢子梗的形态见图6(b)，产孢结构见图6(c)，分生孢子的形态见图6(d)，木霉菌丝的形态见图6(e)。
28℃恒温培养4d后，菌落的形态见图7。
分子生物学鉴定(DNA序列测定)：
(1)采用裂解法提取编号为MN12373的菌株的基因组；
(2)对编号为MN12373的菌株的ITS、tef1和rpb2基因片段进行扩增及测序。
PCR扩增引物和测序引物见表2(ITS基因的测序引物与扩增引物相同)。
表2PCR扩增引物和测序引物
PCR反应体系和反应条件见表3。
表3PCR反应体系和反应条件
编号为MN12373的菌株的ITS基因片段的测序结果见序列表SEQNO.11。
编号为MN12373的菌株的tef1基因片段的测序结果见序列表SEQ NO.12。
编号为MN12373的菌株的rpb2基因片段的测序结果见序列表SEQ NO.13。
经鉴定，编号为MN12373的菌株为拟康宁木霉，拉丁名Trichodermakoningiopsis。
2、菌株保藏
2017年11月14日，我们将编号为MN12373的菌株保藏在了中国普通微生物菌种保藏中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.14878，分类命名：拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)。
第四部分：盆栽防治试验
根据平板对峙和菌株挥发性物质抑菌活性分析，我们以立枯丝核菌单独作为病原菌，以编号为MN12373的菌株单独做生防菌，以T22菌株作为对照，进行盆栽防治试验。
1、培养土
将土与草炭按照3：1的体积比混匀，过筛，在121℃高压下灭菌1h，然后加入无菌水混匀，调至棉花生长所需的适宜湿度18％～22％。
2、木霉菌悬浮液
制备木霉菌悬浮液：取在PDA培养基培养好的拟康宁木霉菌株和T22菌株培养皿，用接种环刮取孢子，加入20mL无菌水，并加入1mL的1％吐温80，将孢子悬液倾入装有石英砂玻璃珠的孢子分散瓶内，振荡20min～30min，将孢子悬液经过灭菌的纱布过滤，用血球计数板测定孢子数，用无菌水将滤液调至105cfu·mL-1，得到拟康宁木霉菌株的菌悬浮液。
3、立枯丝核菌接种物
称取定量病原菌接种物(小米)装在50mL三角瓶中，用温水浸泡3h，倒掉水，然后在121℃高压灭菌30min。立枯丝核菌在PDA培养基25℃培养3d～5d，待立枯丝核菌茵丝长满整个培养皿时，在超净台中采用无菌操作技术用打孔器(内径d＝5mm)在立枯丝核菌菌盘边缘打孔制成菌饼，再用接种针将5块病原菌菌饼接种到三角瓶中，恒温培养箱中25℃培养7d，前3d需轻轻振荡混匀病原菌接种物，后4d静置培养，待立枯丝核菌菌丝长满病原菌接种物后进行接种。
4、盆栽试验
将棉花种子保湿培养，露白后播种，待棉花长出第2片或第3片真叶后开始接种。
将小米培养一周的立枯丝核菌接种1粒于根围土壤中，病原菌接种前用剪刀破坏根系。
空白对照：伤根处理，浇无菌水5mL/株。
对照：伤根处理，接种立枯丝核菌，浇无菌水5mL/株。
处理一：伤根处理，接种立枯丝核菌，浇拟康宁木霉MN12373菌株105cfu·mL-1悬浮液5mL/株。
处理二：伤根处理，接种立枯丝核菌，浇T22菌株105cfu·mL-1悬浮液5mL/株。
以上每个处理3个重复，每个重复种植8株植物。种植14d后，统计棉花发病情况，并计算病情指数和相对防效。
棉花立枯病病级分类见表4。
表4棉花立枯病病级分类
0级 无病状
1级 下胚轴有小的锈斑或有1至数个小的稍凹陷褐斑
2级 下胚轴锈斑或凹陷褐斑小于下胚轴直径的1/2
3级 下胚轴锈斑或凹陷褐斑大于下胚轴直径的1/2或下胚轴缢缩
4级 棉苗枯死
病情指数计算公式：
相对防效计算公式：
经计算，棉花立枯病的病情指数和相对防效见表5。
表5病情指数和相对防效
处理 病情指数 相对防效
空白对照 0 -
对照 80.3％ -
处理一 22.2％ 72.4％
处理二 38.1％ 52.6％
结果表明，编号为MN12373的菌株的孢子悬浮液能够显著降低棉花幼苗立枯病的发病率，且效果优于T22菌株，具有良好的应用前景。
因此，本发明提供的编号为MN12373的耐酸康宁木霉可以应用在用于防治立枯丝核菌的微生物制剂上。
第五部分：剂型
以本发明提供的编号为MN12373的耐酸拟康宁木霉和/或其代谢产物为有效成分，添加农药领域常用的并且在生物学上是惰性的载体，即可将其制成不同的制剂，例如：液体制剂、固体制剂。
1、液体制剂
将本发明提供的编号为MN12373的耐酸拟康宁木霉和/或其代谢产物与液体载体混合，即可制成液剂、乳剂或悬浮剂。
液体载体：有机溶剂(癸烷和/或十二烷)、植物油、矿物油、水等。
液剂、乳剂、悬浮剂的用量均为5×105cfu/株～10×105cfu/株。
2、固体制剂
将本发明提供的编号为MN12373的耐酸拟康宁木霉和/或其代谢产物与固体载体混合，即可制成粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂。
固体载体：矿物材料、植物材料、高分子化合物。
矿物材料：粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白炭、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。
植物材料：玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。
高分子化合物：聚乙烯醇和聚二醇中的至少一种。
粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂的用量为2×103cfu/株～10×105cfu/株。
无论是液体制剂，还是固体制剂，除了有效成分和载体外，根据需要，还可以添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 广州菌落生物科技有限公司
<120> 一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用
<160> 13
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggaagtaaaa gtcgtaacaa gg 22
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tcctccgctt attgatatgc 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
catcgagaag ttcgagaagg 20
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aacttgcagg caatgtgg 18
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gaygaymgwg atcayttygg 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cccatrgctt gyttrcccat 20
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gatcaaymga ggyatggarg t 21
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
garaagattt traaytcytg rt 22
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ccgtgayttc atcaagaaca tg 22
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ttggcagtgt ccatcttgtt g 21
<210> 11
<211> 595
<212> DNA
<213> 拟康宁木霉(trichodermakoningiopsis)
<400> 11
acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattacc gagtttacaa ctcccaaacc 60
caatgtgaac cataccaaac tgttgcctcg gcggggtcac gccccgggtg cgtcgcagcc 120
ccggaaccag gcgcccgccg gagggaccaa ccaaactctt tctgtagtcc cctcgcggac 180
gttatttctt acagctctga gcaaaaattc aaaatgaatc aaaactttca acaacggatc 240
tcttggttct ggcatcgatg aagaacgcag cgaaatgcga taagtaatgt gaattgcaga 300
attcagtgaa tcatcgaatc tttgaacgca cattgcgccc gccagtattc tggcgggcat 360
gcctgtccga gcgtcatttc aaccctcgaa cccctccggg gggtcggcgt tggggatcgg 420
gaacccctaa gacgggatcc cggccccgaa atacagtggc ggtctcgccg cagcctctcc 480
tgcgcagtag tttgcacaac tcgcaccggg agcgcggcgc gtccacgtcc gtaaaacacc 540
caacttctga aatgttgacc tcggatcagg taggaatacc cgctgaactt aagca 595
<210> 12
<211> 1339
<212> DNA
<213> 拟康宁木霉(trichodermakoningiopsis)
<400> 12
gagaagttcg agaaggtaag ctcatttcac tgctttttcc accacgcttg gcacaatcgt 60
gtccgacaat tctgttctca gtcttgtctg ttttcctcgc agcgtcacac cccgcttggc 120
ctgtctaccc ctcctttggc agcaaatttt tctgctgcct cgtttgactt tagtggggtg 180
ccaatttttt ttggcaaccc cgctattgcc actgtccctc atccatcgtc ccaacaaaat 240
gcactcgttc aatcgcatcg tcttttgact cgatttctct atgattcatt gtgctaatca 300
tgcttcaatc aataggaagc cgccgaactc ggcaagggtt ccttcaagta tgcgtgggtt 360
cttgacaagc tcaaggccga gcgtgagcgt ggtatcacca tcgacattgc cctgtggaag 420
ttcgagactc ccaagtacta tgtcaccgtc attggtatgt tattcctgac tcttgacgtg 480
tcgaaatcat cattctaacg tgccactaca gacgctcccg gccaccgtga tttcatcaag 540
aacatgatca ctggtacctc ccaggctgac tgcgctatcc tgattatcgc tgccggtact 600
ggtgagttcg aggctggtat ctccaaggat ggccagaccc gtgagcacgc tctgctcgcc 660
tacaccctgg gtgtcaagca gctcatcgtt gccatcaaca agatggacac tgccaactgg 720
gccgaggctc gttaccttga gatcatcaag gagacctcca acttcatcaa gaaggtcggc 780
ttcaacccca agaccgttgc cttcgtcccc atctccggct tcaacggcga caacatgctc 840
caggcctcca ccaactgccc ctggtacaag ggctgggaga aggagaccaa ggctggcaag 900
tccaccggca agacccttct cgaggccatt gacgccattg agccccccaa gcgtcccaca 960
gacaagcccc tccgtctgcc ccttcaggac gtttacaaga tcggtggtat cggaacagtc 1020
cctgtcggcc gtatcgagac tggtgtcctc aagcccggta tggtcgttac cttcgctccc 1080
tccaacgtca ccactgaagt caagtccgtc gagatgcacc acgagcagct ctctgagggt 1140
gtccccggtg acaacgttgg attcaacgtc aagaacgtct ccgtcaagga tatccgccgt 1200
ggtaacgttg ccggtgactc caagaacgac ccccccatgg gcgccgcttc tttcaacgcc 1260
caggtcatcg tcatgaacca ccctggccag gtcggtgccg gatacgctcc cgtcctcgat 1320
tgccacactg cccacattg 1339
<210> 13
<211> 1266
<212> DNA
<213> 拟康宁木霉(trichodermakoningiopsis)
<400> 13
tcccataggc ttcttgccca tggcagattg gtaggtgtta cggggggact gtatagcatc 60
aattagcgat ctggacgtag gatacagaaa aaattgggca aaatggaaaa ggacagcctc 120
tcgggtggac atacctggtt gtgatcgggg aaagggataa tactggcaca gatacccaag 180
atcatactcg ggtgaatctc gcaatgtgta tacatgtgag ttgttggatt tgtcttggtc 240
ttcagacgct ggttcggatt atctcctatg tcttcgtccg tggcaatacc cgccttttga 300
agacgataaa gctcaagatc ttccggtgtc atgcaaatca tagacgtttc ttcttcctcg 360
gcgtcgagat attccaccgc accagccctg atcaatcctt cccatccaag cttctggctt 420
gggtcttcag gaggttcagc ctgctcttta gccaatctat tgacgaggtc tttggtcaaa 480
accaggtggc ccttgttgat gcccgtttcc gggtcatctt cctgctgtac agtgaagaca 540
ggacgcataa cacgtccggc atcagagaag attttgaact cttggtctcg aatttctcta 600
atcagagaga cttcgtactg aagataggat ttgcgacgag tatccaaaac ttggtttacc 660
agatgcttgg gatcttggtg gattccaacc cagacaccgt tcacaaagat ctttgtagca 720
tggggatatc tcagtggctc gtactcctca acgacttcca tgcctctgtt gatcataaac 780
tcaatcaaag gctcagaagg agatccaaca ctgacgtagc acatcagaga caagttcttg 840
accagaccac aagcctgtcc ttcaggggtc tcagccgggc acaccaagcc ccagtgtgtg 900
ttgtggagct gtcgaggctt cgccagctta ccatctcttc caatgggtgt attggtacga 960
cgcaaatgag atagtgtaga agcaaaagtg taacggttaa gcacctgtga tacacctgcg 1020
gtcgagctca ttgccttctt ctggtcaccc cagtttccag tggcgagtga gtacttcaat 1080
ccgttagaaa gcgtgccagg cttgatgcca acagcaagat tgaagtggcg gttgccctca 1140
acacatcgtc tcaggtagtt tgccagctca gtattcattc tgcgcatgat accacggaac 1200
aacttggcca gcaatggacc cgccagatcc agacgcttct ttacgaagtg ataccctggt 1260
catcaa 1266

Claims (8)

1.一株耐酸拟康宁木霉，其特征在于，分类命名为拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.14878。
2.根据权利要求1所述的耐酸拟康宁木霉，其特征在于，所述耐酸拟康宁木霉能够耐受pH3.0以上的酸化。
3.根据权利要求1所述的耐酸拟康宁木霉，其特征在于，所述耐酸拟康宁木霉以分生孢子、菌丝体、含有分生孢子和菌丝体三种形式之一存在。
4.权利要求1所述的耐酸拟康宁木霉在抑制立枯丝核菌上的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将所述耐酸拟康宁木霉制成液剂、乳剂或悬浮剂使用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述液剂、乳剂或悬浮剂的用量为5×105cfu/株～10×105cfu/株。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将所述耐酸拟康宁木霉制成粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂使用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂或种子包衣剂的用量为2×103cfu/株～10×105cfu/株。
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