CN108142283A - 一种梓叶槭的组培快繁方法 - Google Patents

一种梓叶槭的组培快繁方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108142283A
CN108142283A CN201611109845.XA CN201611109845A CN108142283A CN 108142283 A CN108142283 A CN 108142283A CN 201611109845 A CN201611109845 A CN 201611109845A CN 108142283 A CN108142283 A CN 108142283A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
acer
catalpifolium
agar
sucrose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611109845.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108142283B (zh
Inventor
曹亚琼
栗丹
李飞
邓亨宁
刘少奎
曾俊
罗琳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Lide Seedling Technology Co ltd
Original Assignee
Sichuan Qicai Forestry Industry Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Qicai Forestry Industry Development Co Ltd filed Critical Sichuan Qicai Forestry Industry Development Co Ltd
Priority to CN201611109845.XA priority Critical patent/CN108142283B/zh
Publication of CN108142283A publication Critical patent/CN108142283A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108142283B publication Critical patent/CN108142283B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/10—Aromatic or araliphatic carboxylic acids, or thio analogues thereof; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A01N43/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/28—Ureas or thioureas containing the groups >N—CO—N< or >N—CS—N<
    • A01N47/36—Ureas or thioureas containing the groups >N—CO—N< or >N—CS—N< containing the group >N—CO—N< directly attached to at least one heterocyclic ring; Thio analogues thereof

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开一种梓叶槭的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)外植体选取及灭菌：取梓叶槭枝条清洗，灭菌，切取带芽茎段得到外植体；(2)初代培养：将所述步骤(1)得到的外植体接种到初代培养基中进行初代培养，诱导生成腋芽；(3)继代培养：将所述步骤(2)得到的腋芽接种到到增殖培养基中进行继代培养，诱导分化出丛生芽；(4)生根培养：将所述步骤(3)得到的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，得到生根苗。所用培养基配方简单，组培流程简便，培养时间短，增殖率高，降低了人工成本，易于操作，可进行产业化生产。

Description

一种梓叶槭的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种梓叶槭的组培快繁方法。
背景技术
梓叶槭(Acer catalpifolium)为槭树科槭属的落叶乔木，其树形优美，树干高大，材质坚硬、致密，是城市理想的行道树或城市绿化庭园树种，为我国特有珍稀濒危树种，国家二级重点保护植物，零星分布于四川中部平原。同时，梓叶槭是研究槭树科植物遗传资源的重要材料，是槭树遗传育种不可多得的资源。
目前，对梓叶槭的繁育方式研究主要为种子繁殖育苗技术。该方法繁殖周期较长，材料成本较高，大量繁殖存在一定的局限性。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种梓叶槭的组培快繁方法，所用培养基配方简单，组培流程简便，培养周期短，增殖率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理，能保证所繁育出的植株在形状上的一致性，易于操作，可进行产业化生产。
一种梓叶槭的组培快繁方法，包括以下步骤：
(1)外植体选取及灭菌：取梓叶槭枝条清洗，灭菌，切取带芽茎段得到外植体；
(2)初代培养：将所述步骤(1)得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，诱导出腋芽，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.005～0.05mg/L TDZ，0.05～0.5mg/L NAA，20～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂；
(3)继代培养：将所述步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，诱导分化出丛生芽，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.005～0.05mg/L TDZ，0.05～0.5mg/L 6-BA，0.05～0.5mg/L NAA，20～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂；
(4)生根培养：将所述步骤(3)得到的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，得到生根苗，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.05～0.5mg/LIBA，10～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂。
优选的，所述外植体选取及灭菌过程具体：取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到所述外植体。
优选的，所述酒精体积百分数为70～75％。
优选的，所述升汞质量百分数为0.1％。
优选的，所述初代培养过程、所述继代培养过程和所述生根培养过程光照强度为1800～2200lx，光照时间为14h/d.。
优选的，光照强度为2000lx。
优选的，所述初代培养过程、所述继代培养过程和所述生根培养过程培养温度为23～27℃。
优选的，所述初代培养过程、所述继代培养过程和所述生根培养过程培养温度为25℃。优选的，所述初代培养时间为4～5周。
优选的，所述初代培养时间为4周。
优选的，所述继代培养时间为4～5周。
优选的，所述初代培养时间为4周。
优选的，所述生根培养时间为3～4周。
优选的，所述生根培养时间为3周。
优选的，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.005～0.03mg/LTDZ，0.05～0.3mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
优选的，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
优选的，所述初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5。
优选的，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.005～0.04mg/LTDZ，0.05～0.3mg/L 6-BA，0.05～0.3mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
优选的，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.05～0.4mg/L IBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/L IBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂。
MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适。
本申请所述1/2MS基本培养基是MS基本培养基大量元素减半，其它成分不变。具有无机盐浓度较低，但能够保证组织生长所需的矿质营养，满足植物细胞的营养和生理需要，最主要是能促进植物组织生根，因而在植物组织培养快速繁殖时，常用它作为生根培养基的基本培养基。
所述NN69基本培养基为Nitsch&Nitsch(1969)培养基，无机盐浓度适中，其它营养成分充足。能够满足植物细胞生长的营养和生理需要，适用于木本植物的组培快繁。
所述6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，是一种植物生长调节剂，其主要作用是促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物体内物质的积累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中最常用的一种细胞分裂素。
所述NAA为萘乙酸，是一种植物生长调节剂，在植物使用扦插法繁殖时使用，也可用于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
所述TDZ是一种植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性，可以促进植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眼，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，延缓植物衰老等，可以对其它的植物激素和生理活性物质的作用来调节植物的生长发育过程，可用作植物组织培养。
所述IBA为吲哚丁酸，是一种植物生长调节剂，主要用于插条生根，可诱导根原体的形成，促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进插条不定根的形成。
本申请所述TDZ的强细胞分裂能力打破腋芽的休眠，与一定浓度的具有促进细胞分裂与生长作用的NAA联合使用，加快梓叶槭腋芽萌发、生长；TDZ和6-BA，诱导腋芽基部愈伤分化，结合一定浓度可促进细胞分裂分化的NAA，诱导腋芽分化形成丛生芽；最后再利用IBA可提高促进根原基形成能力，快速诱导梓叶槭幼芽生根。
本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
本申请技术方案提供了一种梓叶槭的组培快繁方法，包括外植体的选取及灭菌、初代培养、继代培养、生根培养的步骤，通过对初代培养基、增殖培养基、生根培养基的筛选，得到最佳的培养基组分和配比，采用前述附加植物生长调节剂的培养基，配方简单，培养基成本低，配合各阶段的培养条件，得到的幼苗繁殖周期短，培养流程简便，提高了梓叶槭繁殖的效率，增殖系数可达4～5，成活率高，能快速获得遗传性状一致的梓叶槭幼苗，利用组织培养技术，进行外植体培养，可不受季节气候变化、自然灾害的影响，可进行大规模的工厂化育苗及深加工。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为1800lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为1800lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
将丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为1800lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为14天，28天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为15天，28天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，14天开始生根，23天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为85％。
实施例2
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
将丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为14天，28天时初代培养结束，腋芽生长至2～3cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为14天，28天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，14天开始生根，21天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为86.7％。
实施例3
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2200lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2200lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2200lx，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为18天，30天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为14天，30天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，13天开始生根，21天时根生长至3～4cm，生根率为85％。
实施例4
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为23℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为23℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为16天，28天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为18天，30天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4.0；生根培养过程中，14天开始生根，24天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为80％。
实施例5
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为27℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为27℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为27℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为16天，30天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为18天，28天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，13天开始生根，25天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为85％。
实施例6
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，10g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为17天，30天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为18天，32天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，18天开始生根，28天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为80％。
实施例7
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，40g/L蔗糖，6g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，40g/L蔗糖，6g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，40g/L蔗糖，6g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为15天，30天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为19天，32天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4.0；生根培养过程中，18天开始生根，27天时根生长至3.5～4.5cm，生根率为83.3％。
实施例8
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，5g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，5g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，5g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为14天，31天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为16天，31天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4～5；生根培养过程中，14天开始生根，25天时根生长至3～4cm，生根率为85％。
实施例9
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
将得到的所述外植体接种到初代培养基中进行初代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.01mg/L TDZ，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，7g/L琼脂，初代培养基灭菌前pH为5.5～6.5，诱导生成腋芽；
将得到的所述腋芽接种到增殖培养基中进行继代培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.02mg/L TDZ，0.1mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖，7g/L琼脂，诱导分化出丛生芽。
丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，培养过程光照强度为2000Lux，光照时间为14h/d，培养温度为25℃，所述生根培养基组包括：1/2MS基本培养基，附加0.2mg/LIBA，20g/L蔗糖，7g/L琼脂，得到生根苗，进行炼苗移栽。
本实施例中，初代培养过程中，第一个腋芽生成的时间为17天，30天时初代培养结束，腋芽生长至1.5～2.5cm；继代培养过程中，第一个丛生芽生成的时间为21天，32天时继代培养结束时，丛生芽生长至2～3cm，增殖系数为4.0；生根培养过程中，15天开始生根，27天时根生长至3.5～4.5cm，炼苗移栽生根率为85％。
实施例10
初代培养基中植物生长调节剂成分和浓度对梓叶槭腋芽生长的影响
取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片，用体积百分数为75％的酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用质量百分数为0.1％的升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到外植体。
取生长情况一致的外植体若干，经过灭菌晾干后接种到初代培养基上，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d培养，温度为23～27℃。其中初代培养基采用1/2MS基本培养基，附加TDZ，NAA，蔗糖，琼脂。在1/2MS基本培养基，附加的蔗糖、琼脂均相同的条件下，根据植物生长调节剂的成分和浓度进行分组，观察并记录培养基中外植体的培养情况，具体分组及培养结果见表1。
表1初代培养基中植物生长调节剂成分和浓度对梓叶槭腋芽生长的影响结果
分组 TDZ(mg/L) NAA(mg/L) 接种数(个) 分化(个) 分化率(％)
1 0.005 0.05 30 17 57.67
2 0.005 0.1 30 19 63.33
3 0.005 0.5 30 16 53.33
4 0.01 0.05 30 19 63.33
5 0.01 0.1 30 22 73.33
6 0.01 0.5 30 18 60.00
7 0.05 0.05 30 19 63.33
8 0.05 0.1 30 17 57.67
9 0.05 0.5 30 15 50.00
从上表可以看出，当TDZ为0.01mg/L、NAA为0.1mg/L时，诱导率最高，为初代培养基的最适合的植物生长调节剂组成条件。
实施例11
增殖培养基中植物生长调节剂成分和浓度对梓叶槭增殖的影响
取生长情况一致的腋芽若干，接种到增殖培养基上培养4—5周，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，培养温度为23～27℃。其中增殖培养基采用NN69基本培养基，附加TDZ，6-BA，NAA，蔗糖，琼脂，在NN69基本培养基，附加的蔗糖，琼脂均相同的条件下，根据植物生长调节剂的成分和浓度进行分组，观察并记录培养基中腋芽的培养情况，具体分组及培养结果见表2。
表2增殖培养基中植物生长调节剂成分和浓度对增殖的影响结果
从上表可以看出，TDZ、6-BA、NAA同时使用的增殖系数普遍比三者任两种使用时高，平均株高也更高；当TDZ为0.02mg/L，6-BA为0.1mg/L，NAA为0.1mg/L时，其增殖率最高，为增殖培养基的最适合的植物生长调节剂组成条件。
实施例12
生根培养基中IBA浓度对生根的影响
取生长情况一致的丛生芽若干，接种到生根培养基上培养3～5周，培养过程光照强度为2000lx，光照时间为14h/d培养温度为23～27℃。其中生根培养基采用1/2MS基本培养基，附加IBA，蔗糖，琼脂。在1/2MS基本培养基，附加的蔗糖，琼脂均相同的条件下，根据IBA浓度进行分组，观察并记录培养基中丛生芽的生根情况，记录生根率，具体分组、培养结果和生根率见表3。丛生芽生根培养得到的生根苗进行炼苗移栽。
表3生根培养基中IBA浓度对生根的影响结果
分组 IBA(mg/L) 接种数(个) 生根数(个) 平均生根数(根/株) 平均根长(cm) 生根率(％)
1 0.05 30 20 3 2.2 66.67
2 0.2 30 26 4 3.8 86.67
3 0.4 30 23 3 2.0 76.67
4 0.5 30 15 2 2.2 50.00
从上表可以看出，IBA浓度为0.05～0.5mg/L时，能有效生根；IBA浓度为0.2mg/L时，其生根率达到86.67％，且长势较好，平均生根数和平均根长均较高，为生根培养基的最适合的植物生长调节剂条件。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体选取及灭菌：取梓叶槭枝条清洗，灭菌，切取带芽茎段得到外植体；
(2)初代培养：将所述步骤(1)得到的外植体接种到初代培养基中进行初代培养，诱导出腋芽，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.005～0.05mg/L TDZ，0.05～0.5mg/LNAA，20～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂；
(3)继代培养：将所述步骤(2)得到的腋芽接种到到增殖培养基中进行继代培养，诱导分化出丛生芽，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.005～0.05mg/L TDZ，0.05～0.5mg/L 6-BA，0.05～0.5mg/L NAA，20～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂；
(4)生根培养：将所述步骤(3)得到的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，得到生根苗，所述生根培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.05～0.5mg/LIBA，10～40g/L蔗糖，5～7g/L琼脂。
2.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体选取及灭菌过程具体为：取梓叶槭幼嫩枝条，去除叶片,用酒精处理30s，无菌水清洗1次，再用升汞处理6～10min，无菌水清洗3～5次，无菌滤纸吸去水分，剪切成1～2cm的带芽茎段得到所述外植体。
3.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述初代培养过程、所述继代培养过程和所述生根培养过程光照强度为1800～2200lx，光照时间为14h/d.。
4.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述初代培养过程、所述继代培养过程和所述生根培养过程培养温度为23～27℃。
5.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述初代培养时间为4～5周。
6.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述继代培养时间为4～5周。
7.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养时间为3～4周。
8.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述初代培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.005～0.03mg/L TDZ，0.05～0.3mg/LNAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
9.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述增殖培养基组成包括：NN69基本培养基，附加0.005～0.04mg/L TDZ，0.05～0.3mg/L 6-BA，0.05～0.3mg/L NAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂。
10.根据权利要求1所述的一种梓叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养基组成包括：1/2MS基本培养基，附加0.05～0.4mg/L IBA，20g/L蔗糖，6g/L琼脂。
CN201611109845.XA 2016-12-06 2016-12-06 一种梓叶槭的组培快繁方法 Active CN108142283B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611109845.XA CN108142283B (zh) 2016-12-06 2016-12-06 一种梓叶槭的组培快繁方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611109845.XA CN108142283B (zh) 2016-12-06 2016-12-06 一种梓叶槭的组培快繁方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108142283A true CN108142283A (zh) 2018-06-12
CN108142283B CN108142283B (zh) 2020-06-02

Family

ID=62467883

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611109845.XA Active CN108142283B (zh) 2016-12-06 2016-12-06 一种梓叶槭的组培快繁方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108142283B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112806264A (zh) * 2021-01-26 2021-05-18 中国科学院华南植物园 一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法
CN113545291A (zh) * 2021-08-12 2021-10-26 福建省中科生物股份有限公司 一种生蚝叶组培芽繁殖方法
CN114711143A (zh) * 2022-04-21 2022-07-08 东北林业大学 一种通过组织培养无性快繁拧筋槭苗木的方法
CN115918536A (zh) * 2022-12-09 2023-04-07 广西壮族自治区林业科学研究院 减少褐化并有效提高生根率的闽楠快繁方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101849506A (zh) * 2010-02-26 2010-10-06 江苏省农业科学院 鸡爪槭的组织培养快速繁殖方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101849506A (zh) * 2010-02-26 2010-10-06 江苏省农业科学院 鸡爪槭的组织培养快速繁殖方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李倩中等: "鸡爪槭新品种金陵黄枫组培技术初探", 《江苏农业科学》 *
王艳辉等: "金叶复叶槭组培技术研究", 《辽宁林业科技》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112806264A (zh) * 2021-01-26 2021-05-18 中国科学院华南植物园 一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法
CN113545291A (zh) * 2021-08-12 2021-10-26 福建省中科生物股份有限公司 一种生蚝叶组培芽繁殖方法
CN114711143A (zh) * 2022-04-21 2022-07-08 东北林业大学 一种通过组织培养无性快繁拧筋槭苗木的方法
CN114711143B (zh) * 2022-04-21 2023-08-08 东北林业大学 一种通过组织培养无性快繁拧筋槭苗木的方法
CN115918536A (zh) * 2022-12-09 2023-04-07 广西壮族自治区林业科学研究院 减少褐化并有效提高生根率的闽楠快繁方法
CN115918536B (zh) * 2022-12-09 2024-01-26 广西壮族自治区林业科学研究院 减少褐化并有效提高生根率的闽楠快繁方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108142283B (zh) 2020-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104737914A (zh) 一种龙脑樟组织培养方法
CN104855292B (zh) 一种牛樟茎段组培快繁的方法
CN108142283A (zh) 一种梓叶槭的组培快繁方法
CN103960133A (zh) 一种食用玫瑰组培快繁的方法
CN103688855A (zh) 一种小叶红豆离体胚培养及植株再生方法
CN104737912B (zh) 一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法
CN102715092A (zh) 利用原叶体增殖途径快速繁育鸟巢蕨种苗的方法
CN105613288B (zh) 一种金边黄杨快繁体系的构建方法
CN104686351A (zh) 一种连香树离体快速繁殖方法
CN108077070A (zh) 一种槭树组织培养用培养基及培养方法
CN108142284A (zh) 一种五小叶槭的组培快繁方法
CN105746352A (zh) 多肉植物巨大赤线ho1的组织培养法
CN105379621B (zh) 一种大岛樱成年优良单株“小乔”樱的高效离体植株再生方法
CN106577280A (zh) 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗
CN103535279B (zh) 一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法
CN103782906B (zh) 一种香樟品种涌金植株再生的方法
CN106605596B (zh) 一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法
KR101439618B1 (ko) 상록성 진달래의 조직배양에 의한 대량 증식방법
CN105454048B (zh) 一种美国红枫的组培快繁方法
CN108112479A (zh) 一种番木瓜组培苗分化芽的茎段悬空植叶促根方法
CN104115751A (zh) 一种利用大白菜球叶获得再生植株的培养方法
CN104488709A (zh) 一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法
CN107801636B (zh) 一种霸王离体培养的方法
CN104938336B (zh) 一种促进土沉香离体芽生芽的快速增殖方法
Sinha et al. In vitro mass clonal propagation of Spathoglottis plicata Blume

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: 636600 Tissue Culture Workshop Building of Rare and Colorful Leaf Plant Varieties in Guangwu Mountain, Sanshe, Changtan Village, Zhengzheng Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province

Applicant after: Sichuan Qicai Forestry Co.,Ltd.

Address before: 636611 six Huai Shu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong, Sichuan

Applicant before: SICHUAN COLORFUL FORESTRY DEVELOPMENT CO.,LTD.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220822

Address after: No. 358, Kejin Road, Wenjiang District, Chengdu, Sichuan 611100

Patentee after: Sichuan Lide Seedling Technology Co.,Ltd.

Address before: 636600 Guangwu mountain rare color leaf plant variety tissue culture workshop building, sanshe, Changtan village, Zhengzheng Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province

Patentee before: Sichuan Qicai Forestry Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right