CN108138218B - 使用噬菌体的细菌检测 - Google Patents
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Abstract
一种检测一个种类、菌株或类型的细菌的方法，包括将标记噬菌体与细菌培养物混合，所述标记噬菌体包含可通过检测系统检测的标记，所述细菌培养物包含与标记噬菌体选择性结合的所述种类、菌株或类型的细菌，并使用检测系统来检测与所述种类、菌株或类型的细菌结合的标记噬菌体。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年7月31日提交的美国临时专利申请序列号62/199,472的权益，所述申请以引用的方式整体并入本文。
背景技术
提供以下信息以帮助读者理解下文公开的技术以及典型地使用这些技术的环境。除非在本文中另有明确说明，否则本文使用的术语不旨在限于任何特定的狭义解释。本文列出的参考文献有助于理解这些技术或其背景。本文引用的所有参考文献的公开内容通过引用并入。
目前用于从例如体液(例如血液)中分离细菌的方法在医院、实验室或其他环境中需要48小时或更长时间以确定存在的细菌的确切种类、菌株或类型。而且，这些方法不能精确量化任何检测到的细菌，且限于容易在琼脂平板上生长的那些。更快速的定量测定或测试将是非常有益的。
发明简述
在一个方面，用于检测或确定一个种类、菌株或类型的细菌的方法包括：将标记噬菌体与细菌培养物混合，所述标记噬菌体包含可通过检测系统检测的标记，所述细菌培养物包含与标记噬菌体选择性结合的所述种类、菌株或类型的细菌，并使用检测系统来检测与所述种类、菌株或类型的细菌结合的标记噬菌体。例如，所述方法可以进一步包括在将标记噬菌体与细菌培养物混合之后去除未结合的标记噬菌体。在许多实施方案中，检测系统包括光声池。检测系统可以例如包括光声流量测量系统。可以鉴定并定量所述种类、菌株或类型的细菌。在许多实施方案中，光声系统(或包括光声池的系统)中使用的能量水平足够低以减少、最小化或消除对未结合的标记噬菌体的检测。对此，通过与靶细菌结合，噬菌体在空间上被隔离，从而增强其标签产生的信号。
在许多实施方案中，可以将多个标记噬菌体与样品混合。多个噬菌体中的每一个与不同种类、菌株或类型的细菌选择性结合。多个噬菌体中的每一个均包含可通过检测系统单独检测的不同标记。检测系统用于确定与至少一种不同种类、菌株或类型的细菌结合的标记噬菌体的存在。噬菌体可以例如用可在不同能量波长下检测的不同标记来标记。
在另一个方面，用于确定样品是否包含至少一个种类、菌株或类型的细菌的系统包括多个噬菌体。多个噬菌体中的每一个与不同种类、菌株或类型的细菌选择性结合。多个噬菌体中的每一个包括可通过检测系统单独检测的不同标记。
还在另一个方面，用于检测一个种类、菌株或类型的细菌的系统包括标记噬菌体，其选择性地结合所述种类、菌株或类型的细菌，并且包括附着于其上的标记，和适于检测与所述种类、菌株或类型的细菌结合的标记噬菌体的系统。检测系统可以例如包括光声池。在许多实施方案中，检测系统包括光声流量测量系统。如上所述，可以鉴定并定量所述种类、菌株或类型的细菌。
在进一步的方面，噬菌体包括附着于其上的标记，其中所述标记选择为可通过检测系统检测。例如，可以使用光声池检测标记。在许多实施方案中，可以使用光声流量测量系统检测标记。
鉴于以下详细描述和附图，本装置、系统、方法和组合物以及其属性和伴随的优点将得到最好的理解。
附图说明
图1示出了用包含异硫氰酸酯部分(异硫氰酸荧光素)的标签来标记或标签噬菌体的代表性方案。
图2示出了光声流量测量系统的一个实施方案。
图3示出了使用光声流量测量系统，使用标记的或标签的噬菌体来检测特定细菌的研究，表明未标记的细菌不提供光声信号，而标记的细菌(通过标记噬菌体)提供光声信号。
图4示出了使用两相流分离靶标细菌细胞的示意图。
图5示出了使用两相流分离靶标细菌细胞的另一个示意图。
图6A示出了以每个脉冲约2.12毫焦耳(mJ)激光照射噬菌体产生的波形。
图6B示出了以每个脉冲约3.96mJ激光照射噬菌体产生的波形。
发明详述
容易理解，除了本文所描述的代表性实施方案之外，如本文附图中一般地描述和示出的实施方案的组件可以以各种不同的构造来布置和设计。因此，如附图所示，以下代表性实施方案的更详细的描述并不意欲限制所要求保护的实施方案的范围，而仅仅是对代表性实施方案的说明。
贯穿本说明书对“一个实施例”或“实施例”(或类似)的引用意味着结合该实施方案描述的具体特征、结构或特性包括在至少一个实施方案中。因此，贯穿本说明书各处出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”等不一定都是指同一实施方案。
此外，所描述的特征、结构或特性可以以任何合适的方式在一个或多个实施方案中组合。在以下描述中，提供了许多具体细节以给出对实施例的透彻理解。然而，相关领域的技术人员将认识到，可以在没有一个或多个所述具体细节的情况下，或者利用其他方法、组件、材料等来实施各个实施方案。在其他情况下，未详细示出或描述公知的结构、材料或操作以避免混淆。
如本文和所附权利要求书中所使用的，除非上下文另有明确说明，否则单数形式的“一个”、“一”和“所述”包括复数形式。因此，例如，提及“噬菌体”包括多个这样的噬菌体以及本领域技术人员已知的等同物等等，并且提及“所述噬菌体”是指一个或多个这样的噬菌体和本领域技术人员已知的等同物等等。本文对数值范围的记载仅仅是用作单独指代落入该范围内的每个单独数值的速记方法。除非本文另有说明，每个单独的数值以及中间范围都被结合到说明书中，如同在本文中单独记载一样。本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另有说明或者文本明确禁止。
噬菌体(有时也称为噬体)是通过区分性结合其靶标细菌宿主外部呈递的表面抗原来感染细菌的病毒。在许多实施方案中，本文的装置、系统和方法使用感测系统(例如，光声感测系统)和标记噬菌体提供快速的细菌分型测定。术语“标记”和“标签”在本文中可互换使用，是指可与噬菌体相关并且可通过检测系统检测的实体或部分。对此，噬菌体或噬体使用可检测的标记或标签(例如，光声不稳定的标记或标签)进行标记或贴标签，然后将其添加到例如靶标和非靶标细菌的细菌混合物或培养物中。如本文所用，术语“不稳定的”是指容易改变的标记或标签，和/或相同的标记或标签可与各种噬菌体一起使用。例如，噬菌体吸收后，可以使用洗涤步骤去除过量的和未结合的噬体。然后通过检测系统(如光声池)处理标记或标签噬体/细菌混合物，其中通过附着的标记或标签噬体检测靶标细菌。
光声学是指通过快速脉冲激光瞄准吸收光的物体将光子转换成机械能。例如，可以通过热弹性膨胀产生光声波，即激光诱导加热，导致体积膨胀和收缩。
使用例如信噪比超过5/1的加标培养物，本文的多个实施方案的研究已经表明了本方法的可行性。本文的研究表明，噬菌体可以有效用于确定混合培养物中的细菌污染。此外，本文的研究通过使用具有不同宿主范围(例如靶向革兰氏阴性和革兰氏阳性人病原体)的额外噬菌体表明了扩大检测能力的价值。本文的装置、系统和方法提供临床上可行的方法以确定细菌污染，并将获得结果所需的时间减少(与现有检测方法相比)至少一个数量级(例如3-4小时内而不是3-4天得到结果)。具有这种能力的测定在例如医院和医学实验室中是非常有利的。例如，结合本文的测定允许医生使用例如靶向抗生素更早地治疗感染。检测技术上的这种进步的影响可能会支持未来定制的噬菌体治疗，并具有显著的全球的救命潜力。
之前已经确定了各种噬菌体的宿主范围。另外，已经表明，细菌宿主范围主要由与细菌O-抗原和细菌呈递的其他表面蛋白结合的噬菌体确定。如上所述，噬菌体是感染细菌的病毒。噬菌体的宿主范围由噬菌体能够感染和裂解的细菌属、种类和菌株或类型来定义。噬菌体的宿主范围是特定细菌病毒的定义生物学特征之一。生产性噬菌体感染需要：1.成功的宿主附着，2.宿主外膜和/或细胞壁的初始穿透，3.转移噬菌体DNA通过内膜，导致合成噬菌体编码的蛋白质和核酸，以及4.后代噬菌体从死亡宿主细胞中逃逸(裂解)。宿主附着由有尾噬菌体后部尖端呈现的称为尾刺和尾丝的特殊蛋白质介导。这些蛋白质附着于宿主细菌外表面上的特定结构。脂多糖(O-抗原)、鞭毛蛋白、磷壁酸、荚膜多糖(K-抗原)和特定的膜蛋白如营养转运蛋白可用作附着位点。噬菌体附着于特定细胞表面分子的能力被认为是宿主范围的主要决定因素。细胞的其他生理或遗传特性影响某些噬菌体在其中复制的能力，例如限制酶或CRISPR系统的存在，并且这些原则上可以影响宿主范围。例如，Hyman P1,Abedon ST,Adv Appl Microbiol.m 2010；70:217-48.doi:10.1016/S0065-2164(10)70007-1.Epub 2010Mar 6；和Kutter,E.Methods Mol Biol.,2009；501:141-9.doi:10.1007/978-1-60327-164-6_14讨论了噬菌体宿主范围和细菌耐药性。
通过使用例如光声池或其他检测系统，可以使用噬菌体的区分性或选择性结合能力来进一步区分细菌。对此，标记的或有标签的(例如，光声标记的或标签的)噬菌体允许检测或鉴定所述标记噬菌体选择性结合的特定细菌。除了光声检测系统(诸如流式细胞仪，使用荧光标记或标签)之外的标记和相关的检测系统，或电子显微镜可用于本文的多个实施方案中。在流式细胞仪中，噬菌体可以具有例如使用中间结合剂(例如，结合噬菌体的单克隆抗体，和结合抗体的绿色荧光蛋白或GFP)与噬菌体结合的荧光分子。例如，可以使用电子显微镜，其中纳米金颗粒可附着于噬菌体、靶向细菌、染色并使用电子显微镜计数。通常，光声感测或检测系统可以以降低的成本提供比许多其他检测系统(例如流式细胞仪和/或电子显微镜)更高的检测速率和特异性。
在本文的大量研究中，首先将光声兼容性或光声标记/标签与噬菌体结合。本文所用的光声标签或标记是指提供光声信号的任何化合物或部分。这些化合物可以通过文献、实验或理论来确定。在许多实施方案中，适用于本文的光声标签或标记容易并入或结合噬菌体，并且不显著干扰噬菌体的结合活性。合适的光声标签或标记的实例包括但不限于：异硫氰酸荧光素(FITC；例如可从Sigma-Aldrich of St.Louis，Missouri USA获得)、伊文思蓝染料(EB；具有式C34H24N6Na4O14S4的偶氮染料；可从例如Sigma-Aldrich获得)、IR775S、Blue(花青染料衍生物)和蛋白质染料直接红81(C29H19N5Na2O8S2；可从例如Sigma-Aldrich获得)。直接红81和许多其他标签或标记可以与许多不同的噬菌体一起使用，并且不干扰噬菌体的活性，用于本文的研究。通常，实际上任何标签或标记(例如，通过光声信号可检测的标签或标记)都可以用于任何噬菌体。也可以使用几乎无限多种标签。由于这些标记的化学性质，标记噬菌体可以就像将噬菌体与标记混合一样简单。
本领域技术人员已知的许多技术适于将标记或标签附着于噬菌体上。异硫氰酸荧光素与氨基形成共价加合物。用蛋白质，赖氨酸残基的ε-氨基可以提供氨基。噬菌体的衣壳蛋白提供赖氨酸残基进行反应。图1示出了氨基与异硫氰酸酯反应的反应方案的实例。图1也示出了异硫氰酸荧光素的化学结构。在图1的方案中，R'是荧光素部分，R”是靶标蛋白质，其中NH2是该蛋白质的赖氨酸残基的ε胺。此外，适合用作本文标记的许多染料化合物含有磺酸(SO3)基团。这些磺酸基团的pKa足够低，使得它们与蛋白质中的赖氨酸和精氨酸残基提供的碱性基团能够非常紧密的结合，特别是在本文的测试(测定)中使用的相对中性的pH和离子强度下。
在许多实施方案中，滴定具有已知宿主范围的单一噬菌体的制备物以特异地且准确地确定感染性颗粒/ml的数量。通过将噬菌体与过量的标记孵育将光声标记结合到噬菌体上。然后，使用台式离心机将标记噬菌体沉淀，并将其重悬于新鲜缓冲液中以除去任何未结合的标记。滴定标记噬菌体以确定感染性颗粒/ml的数量。标记前后的感染性颗粒/ml的数量难以区分，表明噬菌体颗粒的标记没有降低或改变其感染率。在本文的几个代表性实施方案中，标记的Det7噬菌体与LT2沙门氏菌结合，标记的HK97与LE392大肠杆菌结合，D29噬菌体与k12大肠杆菌组合使用作为阴性对照(D29是分枝杆菌噬菌体并且不附着至大肠杆菌)，且标记的T4噬菌体与大肠杆菌B和K12大肠杆菌和沙雷氏菌(Serratia)结合。
如上所述，在许多研究中，使用光声标记或标签来检测标记噬菌体。在这方面，将来自先前研究的具有已知滴度的标记噬菌体收集在新鲜缓冲液中。使用台式离心机将噬菌体沉淀，并将其重新悬浮于没有光吸收的新鲜缓冲液中。将噬菌体重悬以得到已知数量的标记的颗粒/ml。然后通过光声池滴定噬菌体缓冲液混合物以确定检测所需的标记噬菌体的数量。检测标记噬菌体，表明光声池可以检测来自标记的未结合噬菌体的信号。
然后用靶标细菌测试标记噬菌体。在许多研究中，滴定标记噬菌体的宿主细菌以测定菌落形成单位/ml。加入来自先前研究的已知滴度的标记噬菌体，噬菌体与靶标细菌的比例为10比1。将噬菌体/细菌混合物一起孵育一段时间以使噬菌体与细菌结合。然后使用台式离心机沉淀噬菌体/细菌混合物，并将其重悬于等体积的新鲜缓冲液中以去除任何未结合的标记噬菌体。然后将结合有标记噬菌体的细菌通过光声池运行并检测信号。单独的未结合细菌作为阴性对照。
图2示出了光声流量测量系统的代表性实施方案。在一项研究中，本文的快速细菌分型测定法使用光声流式细胞仪或激光诱导的超声，其中532nm激光在含有光稳定发色团的噬菌体中产生超声波。使用光声不稳定的标签标记噬菌体，然后将其加入如上所述的靶标细菌和非靶标细菌的细菌培养物中。细菌吸收后，再次使用离心去除过量的未结合的噬菌体。然后将标记噬菌体/细菌混合物通过微流体系统处理，其中由于染料颗粒中的热弹性膨胀，5ns脉冲激光在靶标细菌细胞中产生高频超声波。光声流量计包含聚焦超声换能器，其检测靶标细菌中产生的超声波。使用自动化软件界面处理该信号(例如参见图3)，并将其存储在计算机中。将提供阳性信号的细菌细胞针对处理的细胞总数作图，以获得培养物中每个靶标细菌细胞的绝对数量。例如，使用大肠杆菌，实现了超过5:1的信噪比。本文的研究表明，与光声学等检测方案偶联的噬菌体可有效用于定量混合培养物中的特定细菌。
图4示出了在光声检测期间由每个液滴内的激光脉冲引起的热弹性膨胀的进展。图5示出了使用两相流的光声池的视图。样品以每次一个液滴流过光声池。每个液滴都受到来自激光器的光的影响，并且由声音传感器检测信号(未示出，但是可以例如直接置于光声池的下方)。
图6A和图6B示出了照射的自由漂浮或未结合噬菌体的光声波形的两幅图。图6A的波形由每个脉冲约2.12毫焦耳(mJ)的激光照射噬菌体产生。图6B的波形由每个脉冲3.96毫焦耳(mJ)的噬菌体照射产生。这些结果表明，在本文的检测算法的实施方案中，使用足够低的能量(例如，约2mJ)照射产生低于预定检测阈值的波形。本领域技术人员容易确定合适的照射能量水平。与细菌结合的噬菌体会更集中，且会产生更大的振幅信号。有利地，在能量足够低的检测方案中不会检测到任何自由漂浮的噬菌体。
对于临床医生而言，严峻的挑战是正确鉴定最有可能从广谱抗生素经验性治疗中获益的患者，这些抗生素具有针对多重耐药性病原体的活性。这些抗生素比标准方案更昂贵，毒性更大。此外，对可以使用较窄谱药物治疗的患者使用广谱抗生素会导致社区出现耐药性，并使管理进一步复杂化。排除具有耐药风险的生物体的能力将允许现在用经验广谱疗法治疗的许多患者使用更便宜、更安全的抗生素。
两种情况混淆了细菌感染的诊断。首先，一些细菌很难甚至不可能在培养物中生长。例如，肺炎中的常见病原体(如肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae))不能在培养物中生长。其次，即使是常规培养的生物在抗生素(这可能是凭经验给予患者)的存在下也不会生长。可从样品中去除抗生素的树脂有时是有效的，但是通常所有的治疗必须停止一段时间，然后可以培养患者的血液或其他流体。这延误了管理，并可能使患者处于风险中。
当培养非无菌流体(例如痰)时，通常需要估计存在的细菌数量以区分菌群与病原体。通常的做法是使用连续稀释来“板上析出(plate out)”生物体并计数菌落。这是一个缓慢的过程，可能需要几天才能获得结果。如本文所述的基于噬菌体的检测具有在单个步骤中估计样品中生物体数量的能力，例如，需要几小时而不是几天。
在一个代表性的临床实例中，患者出现咳嗽、高烧和显示肺叶浸润的胸部X光片。标准的管理方法将是使用广谱抗生素来覆盖各种病原体，并送血液和痰的样品用于培养。这种方法的缺点包括：(1)需要多种抗生素或“超级抗生素”，导致成本较高，副作用的风险较大；(ii)仅“覆盖”大约85-90％的能力，因此在10-15％的病例中治疗可能是无效的，导致足够抗生素的延迟并增加死亡风险；和(iii)最初的培养仅在约50％的病例(或更少)中是阳性的，随后的培养可能会失败，因为抗生素已经在使用且将会在样品中，导致诊断变化和不良结果的风险增加。
相反，下表1中示出了本方法的代表性实施方案的方法。在表1中，NA表示不适用，BSA是广谱抗生素(例如哌拉西林他唑巴坦)。在表1的例子中，不同的标记噬菌体(即，包括具有不同的/单独可检测或可测量的检测特征/波长的标记)可以同时应用于样品。
表1
在表1的实例中，显示来自430nm激发激光波长的光声信号的样品将被解释为肺炎球菌性肺炎(最常见的病原体)阳性，并且将允许使用低成本、低毒性的单药方案(氨苄青霉素)。相反，来自532nm激发激光波长的光声信号将导致诊断为葡萄球菌。这种微生物通常对氨苄青霉素(和其他青霉素类药物)有耐药性，因此可以使用万古霉素。用抗生素治疗病毒性或真菌性肺炎实际上可能会造成伤害。尽早认识到“罕见原因”的存在，将有助于对包括结核病在内的罕见病因进行进一步的检查。“空”的结果将导致临床医生怀疑罕见细菌或(更常见的)病毒感染。重要的是，本文测试结果为空，并且培养物结果为“无生长”(24小时内可获得)将导致极有可能的病毒诊断，并且停止使用抗生素。表1中列出的噬菌体仅是每种细菌的代表性噬菌体。如本领域技术人员所知，有许多其他噬菌体可以与每种列出的细菌结合使用。
具体实施方案
实验
用于噬菌体结合的代表性方案。在一个代表性实例中，噬菌体是HK97，以每毫升1010个噬斑形成单位(pfu/ml)表示。细菌是Ymel大肠杆菌，以每毫升109个菌落形成单位(cfu/ml)表示。培养物可以在4℃储存大约1周。为了孵育，向每个细菌细胞加入10-100个噬菌体。将混合物在37℃下振荡孵育5-10分钟。也可以接受用37℃的水孵育，并轻微搅拌。将细胞/噬菌体混合物置于eppindorf管中并以10,000xg旋转1-2分钟。将上清液(含有未结合的噬菌体)倒出。将沉淀重悬于等体积的冷冻磷酸盐缓冲液(PBS)、luria肉汤(LB)或无菌水中。在裂解开始发生之前，感染的细胞将有20-60分钟。
标记噬菌体和未结合噬菌体研究的代表性方案。将100μl纯化的噬菌体(终浓度为1011pfu/ml)加入到900μl浓度为100μg/ml的直接红溶液中。涡旋后，将噬菌体在室温下孵育30分钟。然后用冷冻离心机沉淀噬菌体(例如4℃，14,800×g，3小时)、去除上清液，用pH7.2的PBS洗涤沉淀(1011pfu/ml)。
在2.12mJ的噬菌体的光声学研究中(参见图6A)，将1ml样品通过具有2.12mJ激光能量的光声系统运行。在23次检测中，11次大于阈值水平。恒定的低水平检测刚刚低于阈值。当水随后通过系统运行时，来自低水平检测的信号消失。收集样品，并用于下一个实验。滴定回收的样品，发现仍然是1011pfu/ml。少数高于阈值的检测可能是噬菌体聚集的结果。
在3.96mJ的噬菌体的光声学研究中，激光能量增加到3.96mJ(参见图6B)。水通过系统运行以测试背景。在通过系统运行噬菌体样品时，实现了高于阈值的恒定检测。检测噬菌体后，水直接通过系统运行，信号完全消失。
这些结果表明，可以以较低的能量水平(例如，约2mJ)检测聚集的噬菌体。噬菌体将使用靶标细菌聚集。然而，在如此低的能量水平下，未结合的噬菌体将不被检测到。
以上描述和附图阐述了当前的许多代表性实施方案。在不脱离本发明的范围的情况下，根据上述教导对本发明进行各种改变、添加和替代设计对本领域技术人员而言是显而易见的，这由以下权利要求而不是前文描述所示。落在权利要求的等同物的含义和范围内的所有改变和变化都被包括在其范围内。
Claims (11)
1.一种非诊断目的的用于确定收集的样品是否包含一个种类、菌株或类型的细菌的方法，包括：将包含可以通过包括光声池的检测系统检测的标记的标记噬菌体与样品混合，所述标记噬菌体具有活性以选择性结合所述种类、菌株或类型的细菌，使得多个标记噬菌体与所述种类、菌株或类型的细菌的细胞结合，并使用所述检测系统的所述光声池确定与所述种类、菌株或类型的细菌结合的所述标记噬菌体的存在，其中所述样品中未结合的标记噬菌体可与具有结合的标记噬菌体的所述种类、菌株或类型的细菌的细胞区分开。
2.权利要求1所述的方法，进一步包括将所述标记噬菌体与所述样品混合后，去除未结合的标记噬菌体。
3.权利要求1所述的方法，其中所述标记选自下组：异硫氰酸荧光素、偶氮染料、花青染料或蛋白质染料。
4.权利要求1所述的方法，其中所述光声池是光声流量测量系统的组成部分。
5.权利要求1所述的方法，其中在检测时定量所述种类、菌株或类型的细菌。
6.权利要求1所述的方法，其中所述光声池中所用的能量水平足够低以减少对未结合的标记噬菌体的检测。
7.权利要求1-6任一项所述的方法，其中将多个不同类型的标记噬菌体与样品混合，所述多个不同类型的标记噬菌体的每一个类型与不同种类、菌株或类型的细菌选择性结合，所述多个不同类型的标记噬菌体的每一个类型包括可以通过所述检测系统单独检测的不同标记，并使用所述检测系统确定与至少一种所述不同种类、菌株或类型的细菌结合的所述多个不同类型的标记噬菌体的至少一个的存在。
8.用于鉴定收集的样品中至少一个种类、菌株或类型的细菌的系统，包括：至少一个标记噬菌体，其与所述种类、菌株或类型的细菌选择性结合，所述至少一个标记噬菌体包含附着于其上的在施加光能时产生光声波的标记，所述系统进一步包括适于检测与所述种类的细菌结合的标记噬菌体的检测系统，其中多个标记噬菌体与所述种类、菌株或类型的细菌的细胞结合，使得具有结合的标记噬菌体的所述种类、菌株或类型的细菌的细胞与未结合的标记噬菌体区分开，其中所述样品与所述检测系统可操作地连接，使得光能通过所述检测系统适用于所述样品以产生可通过所述检测系统测量的光声波。
9.权利要求8所述的系统，其中所述检测系统包括光声池。
10.权利要求8所述的系统，其中所述检测系统包括光声流量测量系统。
11.权利要求8所述的系统，其中所述检测系统被配置为定量种类、菌株或类型的细菌。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562199472P | 2015-07-31 | 2015-07-31 | |
| US62/199,472 | 2015-07-31 | ||
| PCT/US2016/044621 WO2017023721A1 (en) | 2015-07-31 | 2016-07-29 | Detection of bacteria using bacteriophage |
Publications (2)
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