CN108129474A

CN108129474A - 一种(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物及其在治疗血小板减少症中的用途

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Publication number: CN108129474A
Application number: CN201810136973.6A
Authority: CN
Inventors: 窦玉玲; 范铭强
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-02-09
Filing date: 2018-02-09
Publication date: 2018-06-08

Abstract

本发明公开了一种(4‑苯基哌啶‑1‑基)苯甲酰胺类化合物，其结构式为

Description

一种(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物及其在治疗血小板减少症中的用途

技术领域

本发明属于药物设计及合成领域，涉及一种(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物及其在治疗血小板减少症中的用途。

技术背景

免疫性血小板减少症（immune thrombocytope-nia，ITP），也被称为特发性血小板减少性紫癜（idio-pathic thrombocytopenic purpura，ITP），或自身免疫性血小板减少性紫癜（autoimmune thrombocytopenic purpura，AITP），是一种获得性自身免疫性疾病，发病率约占出血性疾病的1/3，为临床上最常见的出血性疾病之一。

ITP 的治疗旨在提高外周血小板水平，降低血小板处于危象的时间和出血发生率，进而降低病死率，但并不强调将血小板计数调整到正常水平，且尚无根治的疗法。临床一线药物包括糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin，IVIg）、抗RhD免疫球蛋白（anti-dimmunoglobulin，anti-D），这些药物治疗周期长、不良反应多、多数患者易复发且部分患者易产生耐药性。二线药物主要有TRAs类、抗体类和免疫抑制剂类药物。

近年，血小板生成素受体激动剂（thrombopoietin receptor ago-nists，TPO-RAs，TRAs）作为一类新的治疗ITP的药物，通过促进巨核细胞的增殖分化和成熟，进而促进血小板生成，部分药物已经应用于临床。这类药物疗效稳定，不良反应少，患者耐受性好，停药后持续缓解率高，被认为是继传统的一、二线药物治疗ITP无效后安全有效的药物。

TPO在体内的作用受体是血小板生成素受体（thrombopoietin receptor，TPO-R，c-mpl，CD110）。TPO主要在肝脏中被合成，在脾脏中由单核-巨噬细胞介导的途径被清除，并通过与血小板、巨核细胞及其前体细胞上的TPO-R结合，促进巨核细胞集落形成单位（megakaryocytic colony-forming units，CFU-Meg）的形成，染色体倍数增加，从而促进巨核细胞成熟、分化，调节血小板生成。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物，其结构式如下：

。

本发明的另一目的在于提供一种所述化合物在制备TPO受体激动剂中的用途。

进一步地，所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防和/或辅助治疗哺乳动物的与血小板减少相关的疾病或病症的药物中的用途。

进一步地，所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病，或者由如下疾病导致或引起：特发性血小板减少性紫癜、化疗或放疗后的骨髓抑制、器官移植、骨髓移植、肝或干细胞移植、骨髓异常增生综合征、再生障碍性贫血或白血病。

本发明的另一目的在于提供一种所述化合物的合成路线为：

。

进一步的，其具体合成步骤为：

1)1-(5-乙基苯并呋喃-2-基)乙-1-酮(化合物1)与溴水发生溴代反应生成2-溴-1-(5-乙基苯并呋喃-2-基)乙-1-酮(化合物2)；

2)化合物2与硫脲加热条件下反应生成4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)噻唑-2-胺(化合物3)；

3)化合物3与哌啶发生反应生成4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-胺(化合物4)；

4)化合物4与4-氯苯甲酸在吡啶中发生酰化反应后用HCl-EtOAc溶液酸化处理生成4-氯-N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)苯甲酰胺(化合物5)；

5)化合物5与4-苯基哌啶加热回流反应生成N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)-4-(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺(化合物6)。

进一步地，合成步骤2)中的温度范围是60-100℃，优选80℃。

进一步地，合成步骤4)中HCl-EtOAc溶液范围是0.1~0.5mol/L，优选0.1mol/L。

进一步地，合成步骤5)中回流时间为8-20小时，优选12小时。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。

具体实施方式

实施例1：2-溴-1-(5-乙基苯并呋喃-2-基)乙-1-酮的合成：

将1-(5-乙基苯并呋喃-2-基)乙-1-酮(化合物1)(4.18g，22.21mmol)溶于乙醚(30mL)中，然后在冰水浴条件下将溴水(1.5mL)加入到以上溶液中，加入完成后，将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，加水搅拌，分层，分离有机相。用盐水洗涤有机层后再用无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏溶剂即可得2-溴-1-(5-乙基苯并呋喃-2-基)乙-1-酮(化合物2)，5.05g，产率85.1%。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1.18(t, 3H), 2.72(q, 2H), 4.59(s, 2H), 7.13(d, 1H), 7.29(s, 1H), 7.50(d, 1H), 7.53(s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz,CDCl₃) δ: 13.19, 28.44, 32.01, 112.58, 112.86, 122.31, 126.10, 127.46,136.67, 154.56, 158.66,187.05.LC-MS(ESI, pos, ion) m/z: 267[M+1]。

实施例2：4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)噻唑-2-胺的合成：

将化合物2(5.05g，18.91mmol)溶于乙醇(30mL)中，然后在室温下加入硫脲(2.1g，27.59mmol)，将反应混合物在80℃下搅拌过夜。反应完成后加水，过滤沉淀，将得到的溶液减压浓缩，然后加入氯仿，分层，有机层依次用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，然后再用硫酸钠干燥。将得到的粗品用环己烷：EtOAc=1:1的溶液重结晶，得到4.17g淡黄色固体4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)噻唑-2-胺(化合物3)，产率90.3%。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1.18(t,3H), 2.72(q, 2H), 7.03(s, 1H), 7.11(s, 1H), 7.34(d, 1H), 7.50(d, 1H), 7.63(s,2H), 7.67(s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 13.19, 28.44, 97.75, 106.56,112.58, 122.31, 126.10, 127.46, 136.67, 144.06, 154.56, 159.74,170.83.LC-MS(ESI, pos, ion) m/z: 245[M+1]。

实施例3：4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-胺的合成：

将化合物3(4.17g，17.07mmol)溶于50mL的DMF中，然后在冰水浴条件下下加入NBS(4.00g，22.47mmol)，将混合物在0℃下搅拌1小时，然后向此反应混合物中依次加入哌啶(2.91g，34.14mmol)和三乙胺(6mL)，将混合物在70℃下搅拌3天。待反应完成后，减压蒸除溶剂，加入氯仿溶解，然后依次用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥。将得到的粗品通过硅胶柱色谱纯化(洗脱剂是环己烷：EtOAc=1:1)，得到类白色4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-胺(化合物4)的粉末，5.18g，产率92.6%。¹H-NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 1.18(t, 3H), 1.52-1.67(m, 6H), 2.72(q, 2H), 3.36(m, 4H), 6.75(s,1H), 7.27(d, 1H), 7.50(d, 1H), 7.55(s, 2H), 7.58(s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz,CDCl₃) δ: 13.19, 23.43, 24.89, 28.44, 50.10, 102.77, 112.58, 122.31, 126.10,127.46, 136.67, 136.69, 142.57, 147.41, 154.56,167.20.LC-MS(ESI, pos, ion) m/z: 328[M+1]。

实施例4：4-氯-N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)苯甲酰胺的合成：

将化合物4(5.18g，15.82mmol)溶于吡啶(28mL)中，然后加入4-氯苯甲酸(2.60g，16.58mmol)，体系降温至-25℃，加入三氯氧化磷(1.39mL)，然后将温度升温至室温，搅拌混合物3小时。待反应完成后，减压浓缩溶剂，加入水和碳酸钾形成混合物后，用氯仿进行萃取。用盐水洗涤有机层，硫酸钠干燥。将粗品通过硅胶柱色谱纯化(氯仿-乙醇=200:1~100:1)，然后将得到的化合物溶解在乙酸乙酯中，加入0.1mol/L的HCl-EtOAc溶液，过滤收集生成的沉淀，得到6.54g黄色固体4-氯-N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)苯甲酰胺(化合物5)，产率88.7%。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1.18(t, 3H), 1.52-1.68(m, 6H), 2.72(q, 2H), 3.36(m, 4H), 6.77(s, 1H), 7.30(d, 1H), 7.50(d, 1H),7.55(d, 2H), 7.60(s, 1H), 7.90(d, 2H). ¹³C-NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 13.19,23.43, 24.89, 28.44, 50.10, 102.77, 112.58, 122.31, 126.10, 127.46, 128.61,129.09, 133.21, 136.67, 138.09, 139.41, 141.86, 147.41, 154.56, 155.68,167.15.LC-MS(ESI, pos, ion) m/z: 466[M+1]。

实施例5：N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)-4-(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺的合成：

将化合物5(6.54g，14.03mmol)，无水二恶烷(200mL)，4-苯基哌啶(4.52g，28.06mmol)和磷酸氢钾K₂HPO₄(5.23g，30.00mol)加入到500mL的四口圆底烧瓶中，然后将反应混合物加热回流，搅拌过夜。待反应冷却后，将反应混合物过滤，除去大部分钾盐，然后将滤液浓缩。通过快速柱色谱(使用2-10％甲醇/CHCl₃洗脱剂)进行纯化，得到7.29g的白色粉末状N-(4-(5-乙基苯并呋喃-2-基)-5-(哌啶-1-基)噻唑-2-基)-4-(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺(化合物6)，产率87.9%。¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 1.18(t, 3H), 1.42-1.80(m, 10H),2.68(m, 1H), 2.72(q, 2H), 3.09-3.18(m, 2H), 3.34-3.46(m, 6H), 6.69(s, 1H),7.00(d, 2H), 7.17-7.36(m, 6H), 7.50(d, 1H), 7.51(d, 2H), 7.59 (s, 1H). ¹³C-NMR(125 MHz, CDCl₃) δ: 13.19, 23.43, 24.89, 28.44, 31.55, 43.25, 49.03, 50.10,102.77, 110.38, 112.58, 122.31, 125.95, 126.10, 126.38, 127.46, 128.37,129.01, 129.85, 136.67, 139.41, 141.86, 146.43, 147.41, 151.68, 154.56,155.68,167.15.LC-MS(ESI, pos, ion) m/z: 591[M+1]。

试验例1：本发明化合物对体内外32D-MPL细胞促增殖作用

一、体外对稳定转录TPO受体的32D-MPL细胞促增殖作用

该试验参考Takanori Nakamura等描述的方法进行（Takanori Nakamura , YoshitakaMiyakawa ,et al .A novel non peptidyl human c-Mpl activator stimulates humanmegakaryopoiesis and thrombopoiesis .BLOOD 2006,107(11):4300- 4307）。

鼠骨髓32D细胞（山东大学齐鲁医院赠送）稳定转录表达TPO受体（c-MPL）的质粒pcDNA3.1，得到稳定转录细胞株32D-MPL，细胞培养条件是RPMI-1640培养基（含1.5g/L碳酸氢钠，2mM L-谷氨酰胺，4.5g/L葡萄糖，10mM HEPES，1.0mM丙酮酸钠，2.5ng/mL重组鼠IL-3），添加10%胎牛血清，在37℃含5%二氧化碳的饱和湿度培养箱中培养。在体外细胞增殖活性分析中，32D-MPL细胞接种96孔板，然后用不同浓度的阳性对照药物（eltrombopag）和本发明化合物作用72h。随后用MTT方法检测细胞增殖情况，用GraghPad Prism软件的4-参数回归方程计算EC₅₀。结果见表1。

二、对裸鼠体内32D-MPL细胞促增殖作用

从山东实验动物中心购买5-6周龄的BALB/C nu/nu雌性裸鼠；聚偏氟乙烯中空纤维管购自美国Spectrumlabs公司，中空管参数为外部直径1.2mm，内部直径1.0mm，阻隔分子量为大于500kDa。将32D-MPL细胞悬液（1*10⁷个/ml细胞密度）注入中空纤维管中，然后再通过热融封的方法将中空纤维管封成2cm长的短管。这些短管再接种到裸鼠皮下，接种好的裸鼠随机分组，每组6只，对照组给予溶剂，阳性对照组给予阳性对照药物（eltrombopag），试验组给予本发明化合物，口服，每天1次。第3天试验结束时将裸鼠处死，将纤维管内的细胞收集起来，用培养液重悬，随后用MTT方法检测细胞增殖情况，用GraghPad Prism软件的4-参数回归方程计算EC₅₀。结果见表1。

表1：化合物对体外和体内32D-MPL细胞促增殖作用

化合物	体外活性EC₅₀	体内活性EC₅₀
			eltrombopag	52 nM	47 mg/kg
试验组化合物6	22 nM	38 mg/kg

由上表的体内外实验数据可以得出，本发明(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物对含TPO受体32D-MPL细胞具有较好的增殖作用，而且体内外活性均优于阳性药物eltrombopag。可以推断本发明化合物具有TPO受体激动剂的作用，可以作为TPO受体激动剂进一步开发。

本领域公知，TPO受体激动剂可以用于治疗血小板减少相关疾病，所述血小板减少相关疾病是如下疾病，或者由如下疾病导致或引起：特发性血小板减少性紫癜(ITP)、化疗或放疗后的骨髓抑制、器官移植、骨髓移植、肝或干细胞移植、骨髓异常增生综合征、再生障碍性贫血或白血病。

试验例2：对失血小鼠外周血血小板浓度的影响

方法：Balb/c小鼠6~8周龄，18-22g雄性，购自山东实验动物中心，按体重分为若干组，每只小鼠从眼眶静脉放血0.5ml（表2眼眶血），24h后割尾取血20ul（表2给药前），然后连续灌胃给药，试验组给予本发明化合物6的剂量为5mg/kg（5mg溶于10ml 0.5% CMC-Na溶液），模型组给予等体积的0.5% CMC-Na溶液。于给药后7天、14天割尾取血20ul（表2给药后），采用日本SysmexCorporation公司的XT-1800i全自动五分类血细胞分析仪检测。

表2对失血小鼠外周血血小板浓度的影响

由上表可知，在眼眶取血的24h后，发现尾部血液中血小板浓度显著降低，在给予本发明所述的化合物后，7天、14天尾部血液分析发现失血小鼠血小板浓度逐步提高，而且经数据分析发现试验组化合物6相对于模型组7天、14天数据均具有显著性，而且在第14天尾部血液中血小板浓度高于眼眶血血小板浓度，说明本发明(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物具有增加失血小鼠血小板浓度的作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明所涵盖的内容。

Claims

1.一种(4-苯基哌啶-1-基)苯甲酰胺类化合物，其特征在于，其结构式为如下所示：

。

2.如权利要求1所述的化合物在制备TPO受体激动剂中的用途。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防和/或辅助治疗哺乳动物的与血小板减少相关的疾病或病症的药物中的用途。

4.如权利要求3所述的用途，其中，所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病，或者由如下疾病导致或引起：特发性血小板减少性紫癜、化疗或放疗后的骨髓抑制、器官移植、骨髓移植、肝或干细胞移植、骨髓异常增生综合征、再生障碍性贫血或白血病。