CN108114010A - 八宝丹在制备预防早期肝癌术后复发的药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了八宝丹在制备八宝丹在制备预防肝癌术后复发的药物中的用途。药理学实验发现八宝丹预防肝癌术后复发效果显著。因此，八宝丹能用于制备预防肝癌术后复发的药物，具有良好的开发用途前景。

Description

八宝丹在制备预防早期肝癌术后复发的药物中的用途
技术领域
本发明属于药物新适应症领域，具体涉及八宝丹在制备预防肝癌术后复发的药物中的用途。
背景技术
肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高。目前早期肝癌的最佳治疗手段为根治性手术切除。但肝癌患者术后极易出现复发和转移，早期肝癌复发集中在术后两年内，其复发率超过50％。
作为目前研究热点的肿瘤微环境在肝癌的复发转移中起着不可或缺的作用。大量研究表明，作为与肿瘤密不可分的局部微环境，对肿瘤的发生、发展起着不容忽视的作用。根据“种子与土壤”理论，复发转移靶器官的微环境是影响复发转移是否发生的决定性因素之一。目前已认识到癌转移是肿瘤细胞和宿主微环境之间相互作用的过程，后者能影响肿瘤的生物学特性并促进或抑制肿瘤细胞在靶器官的定居。如能削弱有利于转移形成的靶器官炎症状态，当可降低转移的发生。而肝癌术后的转移复发多发生于术后残余肝脏，即其转移复发靶器官是肝脏本身，故肝脏的微环境，尤其是炎症免疫微环境状态可以直接影响肝癌术后病人的预后。肝癌术后复发是由于术后残余肝脏选择性地扩增播散的瘤细胞，形成复发灶，或者是选择性地扩增新变异的细胞，形成新的肝癌病灶。肝癌术后残余肝脏的炎症状态和它的再生能力成负相关，炎症反应越重，其再生能力越差，就越容易形成肿瘤复发病灶。而癌旁肝组织很好的代表了术后残余肝脏的状态。综上所述，针对肝脏炎症的治疗，当有助抑制肿瘤复发转移。
八宝丹主要是由牛黄、蛇胆、羚羊角、珍珠、三七、麝香等名贵药材组成，内含多种有效成分，如牛磺酸、麝香酮、牛磺胆酸、皂苷及黄酮类。君药天然牛黄，其性凉味苦，平肝定惊，清热解毒，主要有效成分为牛磺酸，含胆红素和胆汁酸，可扩张毛细血管和松弛胆道平滑肌，具有利肝利胆促肝炎恢复的功效；臣药蛇胆，性凉味略苦，清热解毒，止痛明目，含有12种以上的胆汁酸，主要含熊去氧胆酸，具有溶解胆盐结石的作用；佐药珍珠，性寒味咸，镇心定惊，收敛生肌，清肝除翳；佐药羚羊角，具有解热抗病毒和增强免疫功能的功效；使药天然麝香，性温味辛，活血散瘀，消肿止痛，主要成分为麝香酮及多肽，可减轻肝炎症状；使药三七，活性成分主要是三七总苷，具有清除自由基，激活巯基酶系，具有保护肝细胞膜稳定等保肝抗氧化作用。
药理学研究发现八宝丹具有很强的抗炎镇痛、保肝护胆等效用，临床上用于各种湿热证，包括湿热导致的黄疸、消化道症状、以及保肝护肝的治疗，然而还未见八宝丹在制备用于预防早期肝癌术后复发药物方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于根据中药组合物研究中发现的其具有预防早期肝癌术后复发效果的现状，提供了八宝丹在制备预防早期肝癌术后复发药物中的用途。
所述八宝丹为厦门中药厂有限公司生产的八宝丹胶囊，国药准字Z10940006，主要成分包括牛黄、蛇胆、羚羊角、珍珠粉、三七、麝香。
本发明涉及的八宝丹在制备用于预防早期肝癌术后复发药物中的用途属于首次公开。
有益效果：本发明临床前验证疗效确切、显著。药理学实验发现本药预防早期肝癌术后复发效果显著。因此，八宝丹是能用于制备预防早期肝癌术后复发药物，具有良好的开发用途前景。
附图说明
图1为大鼠二乙基亚硝胺(DEN)诱导原发性肝癌模型中八宝丹对肝癌发生的干预作用及肝功能检测和病理学切片染色图；图1A表示不同处理后大鼠肝脏大体标本(黑色箭头代表肿瘤组织)；图1B表示各组肝癌发生率；图1C表示每组大鼠血清白蛋白，谷丙转氨酶和谷草转氨酶的平均水平(student-t检验，**P<0.01)；图1D表示每组肝组织HE染色情况；
图2为六组大鼠脂多糖(LPS)处理的肝前体细胞成瘤发生发展及不同阶段以八宝丹处理后大鼠肝癌大小和数目的解剖图；
图3为大鼠解剖后肝脏癌组织和癌旁组织的病理学切片图；癌组织苏木精—伊红染色法(HE法)染色(上图)，癌旁组织HE染色(下图)(显微镜倍数为放大200倍)。
具体实施方式
以下实例用于说明本发明。
SD大鼠购于上海斯莱克实验动物有限公司，二乙基亚硝胺购于Sigma有限公司。
实施例1
八宝丹对二乙基亚硝胺(DEN水，DEN体积浓度为1:10000)引起的大鼠原发性肝癌发生发展的作用研究。
将30只SD大鼠适应性喂养一周后，随机分成4组，即正常组(Ctrl组，5只)、模型组(DEN组，10只)，受试药八宝丹组(BBD组，5只)及肝癌模型给药组(DEN+BBD组，10只)。
将这4组的SD大鼠分别处理如下：(1)正常组：喂养纯净水；(2)模型组：喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为0.1g/L)；(3)受试药八宝丹组：饮用纯净水，同时每周八宝丹灌胃给药两次，给药方式为将八宝丹胶囊中的八宝丹粉末溶于纯净水灌胃给药，每次给药剂量以八宝丹粉末计，为0.5g/kg；(4)肝癌模型给药组：喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)同时每周八宝丹灌胃给药两次，给药方式为将八宝丹胶囊中的八宝丹粉末溶于纯净水灌胃给药，每次给药剂量以八宝丹粉末计，为0.5g/kg，喂养12周。于实验处理开始12周后，予以麻醉下处死，同时取肝、取血用于进一步分析。
实验结果：
八宝丹可抑制肝癌的发生发展：大体解剖获取肝组织标本看到，肝癌模型给药组的大鼠肝脏肿瘤大小和数目明显小于模型组，表明八宝丹可抑制大鼠肝脏肿瘤的发生发展(图1A和1B)。
八宝丹可保护肝脏损伤：通过血清检测肝功能指标显示八宝丹能够明显降低谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的数值，验证了八宝丹可有效保护肝脏损伤(图1C)；肝脏病理切片HE染色结果显示，八宝丹可显著降低肝脏炎症反应(图1D)。
实施例2
八宝丹对LPS处理的肝前体细胞(hepatic progenitor cell,HPC)成瘤的作用研究(LPS处理的肝前体细胞简称为LPS-HPC)。
LPS-HPC生理盐水细胞悬液的配制方式：将大鼠肝前体细胞系WB-F344置于含10％胎牛血清的达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(Dulbecco's modified Eagle'smedium,DEME)的培养液中，在37℃、5％CO2培养箱中培养，2-3天更换一次培养液，细胞呈单层贴壁生长，0.5％胰蛋白酶消化传代，实验组细胞用含10μg/mL浓度的脂多糖(LPS)及含10％胎牛血清的DEME培养液培养，培养2周，以0.5％胰蛋白酶消化，以生理盐水按照5×106个细胞/mL浓度重悬用于后续实验。将60只SD大鼠适应性喂养一周后，随机分成正常对照组(Normal ctrl组，10只)、二乙基亚硝胺组(DEN组，10只)、术后复发模型组(DEN+LPS-HPC组，10只)、八宝丹给药前组(BBD前组，10只)、八宝丹给药后组(BBD后组，10只)、八宝丹给药全程组(BBD全程组，10只)6组。
其各组处理如下：
(1)正常对照组(Normal ctrl组)：予以喂养纯净水并于第4周予以脾内注射0.2mL的生理盐水；
(2)二乙基亚硝胺组(DEN组)：予以喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)并于第4周予以脾内注射0.2mL生理盐水；
(3)术后复发模型组(DEN+LPS-HPC组)：予以喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)第4周予以脾内注射0.2mL LPS-HPC生理盐水细胞悬液(含LPS-HPC1×106个)；
(4)八宝丹给药前组(BBD前组)：喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)同时予以含八宝丹的纯净水灌胃(以八宝丹0.5g/kg剂量灌胃，每周两次，共灌胃4周)，并于第4周予以脾内注射0.2mL LPS-HPC生理盐水细胞悬液(含LPS-HPC 1×106个)，接种细胞后停止八宝丹灌胃，继续喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)至第10周实验结束；
(5)八宝丹给药后组(BBD后组)：喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)并于第4周予以脾内注射0.2mL LPS-HPC生理盐水细胞悬液(含LPS-HPC 1×106个)，同时从第4周接种LPS-HPC后开始予以含八宝丹的纯净水灌胃(以八宝丹0.5g/kg剂量灌胃，每周两次，共灌胃6周)，同时继续喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)至第10周实验结束；
(6)八宝丹给药全程组(BBD全程组)：在实验过程中全程喂养含二乙基亚硝胺的纯净水(其中DEN体积浓度为1：10000)同时予以含八宝丹的纯净水灌胃(以八宝丹0.5g/kg剂量灌胃，每周两次，共灌胃10周)，并于第4周予以脾内注射0.2mL LPS-HPC生理盐水细胞悬液(含LPS-HPC 1×106个)。
本实验以DEN损伤肝脏4周后接种HPC模拟肝癌复发模型，观察八宝丹对肝癌形成的影响。以接种肝癌前体细胞时间为分割点，真实地模拟了八宝丹对临床肝癌术后复发患者群体的肝癌疾病特征情况。于实验处理开始10周后，麻醉下大体解剖取肝脏进行外观观察，病理切片观察肝细胞损伤程度。
实验结果：
八宝丹抑制LPS处理的前体细胞(HPC)成瘤能力：实验动物大体解剖初步观察到八宝丹的各个给药组均具有明显的抑癌作用。效果以全程给予八宝丹为最佳。仅接种HPC前给药(BBD前组)，和于接种HPC后给药(BBD后组)效果稍逊于全程给药，见图2BBD前组、BBD后组、BBD全程组。图2的结果显示：八宝丹药物可以非常明显地减少肝脏组织肿瘤的数量和体积，表明八宝丹药物对于肝癌复发具有显著抑制功效。
八宝丹减轻肝脏炎症反应，缓解肝细胞损伤：癌组织HE染色观察到全程使用八宝丹能明显降低癌组织周围炎症细胞的浸润和损伤程度。癌旁组织HE染色观察到全程使用八宝丹可以显著抑制癌旁组织炎症反应，减轻肝细胞损伤(图3)。
上述实验结果表明，八宝丹能够明显降低癌组织及癌旁组织炎症细胞浸润，减轻肝细胞损伤程度，抑制肝癌的发展。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭示的技术范围内，可不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.八宝丹在制备预防肝癌术后复发的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，所述八宝丹的主要成分包括牛黄、蛇胆、羚羊角、珍珠粉、三七、麝香。
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