CN108096221B - 一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，它涉及一种药物的制备方法，本发明的目的是为了解决中药有效单体成分抗乙型肝炎病毒药物丁香苦苷肝细胞内肝靶向效果差，生物利用度低，半衰期短的问题。本发明通过取单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷与无水乙醇混合成油相，将F68溶液作为水相，将油相与水相搅拌混合浓缩后，加入稀释相继续搅拌，即制得本发明产品。本发明制备的丁香苦苷固体脂质纳米粒能够提高丁香苦苷靶向性，延长药物对肝脏的作用时间，降低药物对其他器官的毒副作用。本发明制备的丁香苦苷固体脂质纳米粒在储存和体内转运过程稳定，且在体内滞留时间长，具有一定缓释效果。本发明制备步骤简单，重复性好，易应用于工业化生产。

Description

一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法
技术领域
本发明涉及一种药物的制备方法，特别涉及丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法。
背景技术
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种传染性疾病，其治疗周期长、治愈难、愈后差，严重危害患者的身心健康。而迄今依然没有特效的乙型肝炎治疗药物，其重要原因是HBV核心抗原存在于肝细胞内，而治疗药物很难进入肝细胞，或能进入肝细胞的量不足以抑制HBV，疗效难以达到令人满意的程度。
丁香叶来源于木犀科丁香属植物紫丁香、朝鲜丁香、洋丁香的干燥叶，是一种具有广谱抗菌、抗病毒、免疫增强、抗耐药性作用的中药。丁香苦苷(Syringopicroside，SYR)是从丁香叶(Folium syringae)中分离得到的单体成分，属于环烯醚萜苷类化合物，经药理作用实验表明丁香苦苷对四氯化碳引起的肝损伤有保护作用，且具有很强的抗菌、抗病毒、保肝利胆等作用，尤其是对乙型肝炎病毒作用显著。但由于其在体内消除快，半衰期短等原因，导致其生物利用度不高，限制了临床应用。因此，改善丁香苦苷体内药动学动态，探索延长半衰期的制剂形式迫在眉睫。
固体脂质纳米粒(Solid Lipid Nanoparticle，SLN)可结合亲脂性及亲水性药物，控制药物释放和药物靶向；增加药物的稳定性，载体载药量高且无生物毒性；可大批量生产；有利于提高药物在储存和体内转运过程中的稳定性，延长药物作用时间，进而提高生物利用度。同时也是一种具有良好靶向性的新型脂质载体，能够起到定位肝靶向的作用。
申请公布号为CN 103356491A的“一种丁香苦苷PLGA纳米粒的制备方法”，其虽然公开了丁香苦苷的纳米粒制备方法，但是其与本申请的药物载体存在较大差异，制备工艺也有明显的不同，因此，在肝脏靶向摄取率等方面效果差，如何提高该治疗效果，该专利并没有给出具体的措施。
申请公布号为CN 102475711B的“丁香苦苷制药新用途”，但是其只是丁香苦苷在体内具有抗乙肝病毒的作用和对于DHBV引起的肝损伤具有保护作用，但是如何最大化的发挥其作用效果，该专利并没有给出解决方案。本发明是“丁香苦苷制药新用途”研究的延续，提高丁香苦苷抗乙肝病毒的能力。
发明内容
本发明的目的是为了解决丁香苦苷纳米粒肝靶向效果差，生物利用度低，药物半衰期短的问题。
本发明以SLN作为药物载体，将丁香苦苷研制成固体脂质纳米制剂，旨在构建一种适用于亲水性强的环烯醚萜苷类药物入肝的递释系统，提高药物肝靶向和缓释作用，降低药物在其他器官的毒副作用，延长对肝脏的作用时间，提高生物利用度，为丁香苦苷的临床应用提供科学依据。
为达到上述目的，本发明采用的技术方法是：
一、称取单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷，加入到无水乙醇中，加热溶解，形成油相；
二、取质量百分含量为0.2％～1.6％F68的水溶液作为水相；
三、按体积比为1:2～6的比例，在60～70℃水浴中，600～1400r·min-1的搅拌速度下，将油相加入到水相中，并持续搅拌，直至体积浓缩至原体积的七分之一至三分之一，得半透明纳米乳剂；
四、将所得的半透明纳米乳剂在搅拌状态下，分散于0～2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒胶体溶液；
其中，无水乙醇与单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷的体积质量比为1mL：8～20mg：20～60mg：0.8～2.8mg。
本发明包含以下有益效果：
⑴本发明制备的丁香苦苷固体脂质纳米粒能够提高丁香苦苷靶向性，延长药物对肝脏的作用时间，降低药物对其他器官的毒副作用，提高生物利用度。
⑵本发明制备的丁香苦苷固体脂质纳米粒在储存和体内转运过程稳定，且在体内滞留时间长，释药平稳，具有一定缓释效果。
⑶本发明制备步骤简单，重复性好，易应用于工业化生产。
⑷本发明制备的纳米粒稳定性好，在4℃条件下存放15天，包封率几乎没有变化，外观均匀，基本无絮凝和沉淀产生。
附图说明
图1单独使用表面活性剂卵磷脂所得纳米粒示意图；
图2单独使用Poloxamer 188所得纳米粒示意图；
图3卵磷脂和Poloxamer 188合用所得纳米粒示意图；
图4搅拌速度为400r·min-1对包封率的影响图；
图5搅拌速度为600r·min-1对包封率的影响图；
图6搅拌速度为1000r·min-1对包封率的影响图；
图7透射电镜下的粒子形态图；
图8为申请公布号为CN 102475711B的丁香苦苷单体给药肝脏病理组织图；
图9为本发明的丁香苦苷固体脂质纳米粒给药肝脏病理组织图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，它是按照以下步骤进行的：
一、称取单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷，加入到无水乙醇中，加热溶解，形成油相；
二、取质量百分含量为0.2％～1.6％F68的水溶液作为水相；
三、按体积比为1:2～6的比例，在60～70℃水浴中，600～1400r·min-1的搅拌速度下，将油相加入到水相中，并持续搅拌，直至体积浓缩至原体积的七分之一至三分之一，得半透明纳米乳剂；
四、将所得的半透明纳米乳剂在搅拌状态下，分散于0～2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒胶体溶液；
其中，无水乙醇与单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷的体积质量比为1mL：8～20mg：20～60mg：0.8～2.8mg。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的稀释相为适当浓度F68的水溶液。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：在油相加入到水相前，需要将水相加热至与油相相同的温度。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是：无水乙醇与单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷的体积质量比为1mL：16mg：60mg：1.6mg。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是：无水乙醇与单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷的体积质量比为1mL：12mg：40mg：1.2mg。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一不同的是：无水乙醇与单甘酯、卵磷脂和丁香苦苷的体积质量比为1mL：8mg：20mg：0.8mg。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一不同的是：按体积比为1:2～5的比例，在65～70℃水浴中，600～1000r·min-1的搅拌速度下，将油相加入到水相中，并持续搅拌，直至体积浓缩至原体积的五分之一，得半透明纳米乳剂。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一不同的是：按体积比为1:2～4的比例，在65～70℃水浴中，600～1000r·min-1的搅拌速度下，将油相加入到水相中，并持续搅拌，直至体积浓缩至原体积的五分之一，得半透明纳米乳剂。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一不同的是：取质量百分含量为0.2％～0.8％F68的水溶液作为水相。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一不同的是：取质量百分含量为0.2％～0.6％F68的水溶液作为水相。其它与具体实施方式一相同。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
通过以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例1
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯40mg、卵磷脂100mg、丁香苦苷4mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取0.2％F68的水溶液10mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:2的比例，在60℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例2
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯60mg、卵磷脂200mg、丁香苦苷6mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续水相的加入)；另取0.4％F68的水溶液15mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:3的比例，在65℃水浴中，1000r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例3
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯80mg、卵磷脂300mg、丁香苦苷8mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取0.8％F68的水溶液20mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:4的比例，在70℃水浴中，1400r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例4
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯100mg、卵磷脂200mg、丁香苦苷10mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取1.6％F68的水溶液25mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:5的比例，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例5
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯100mg、卵磷脂200mg、丁香苦苷12mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取0.4％F68的水溶液30mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:6的比例，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例6
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
精密称取单甘酯100mg、卵磷脂200mg、丁香苦苷14mg，加入5mL的无水乙醇中，加热使溶解，构成油相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取0.4％F68的水溶液10mL，加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:2的比例，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，搅拌1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于0-2℃的稀释相中，继续搅拌2h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
实施例7
本实施例的一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，包含以下内容：
称取80mg的单甘酯、240mg卵磷脂、10mg丁香苦苷，加入5mL无水乙醇中，加热使之完全溶解，构成有机相(油相需一直加热使上述物质在无水乙醇中始终处于溶解状态，便于后续加入水相)；另取浓度是0.4％的F68的水溶液10mL，水浴加热至与油相相同温度，构成水相，按油相与水相体积比为1:3的比例，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将油相注入水相中，乳化1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于5mL的0-2℃的稀释相中，继续搅拌1.5h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
纳米粒的制备工艺:
纳米粒在制备过程中受到多种因素的影响，这些因素共同影响纳米粒的质量，所以选择具有代表性的指标尤为重要。以包封率和载药量作为纳米粒质量评价的指标，对所制得的固体脂质纳米粒进行影响因素的考察。
选择以单甘酯为载体，对乳化剂种类、水相浓度、单甘酯的用量、有机相与水相的比例、卵磷脂与单甘酯的比例、药物的投药量等因素进行考察，以包封率为主要考察指标，同时观察外观形态、均匀性、放置是否分层来初选处方。
1、乳化剂的选择
以F68浓度、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，考察不同乳化剂对包封率的影响。
表1考察不同乳化剂的各因素及水平
Figure BDA0001534378200000061
Figure BDA0001534378200000071
乳化剂的选择对包封率的影响见表2和图1-3。
表2乳化剂的选择对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000072
由表2直观的显示出，虽然单独使用卵磷脂的包封率稍高，但是稳定性不好，很快分层。Poloxamer 188是一种亲水性表面活性剂，与卵磷脂组成混合乳化剂能得到较小的粒径和较高稳定性。因此，乳化剂选用卵磷脂和Poloxamer 188合用来制备丁香苦苷固体脂质纳米粒。
由图1-3亦可知，单独使用表面活性剂卵磷脂所得纳米粒，粘连、大小不均匀、粒径偏大，且包封率较低；单独使用Poloxamer 188所得纳米粒大小均匀，粒径小，但有粘连包封率较低；卵磷脂和Poloxamer 188两者合用效果最佳，大小均匀，无粘连。因此选择表面活性剂Poloxamer 188和卵磷脂联用。
2、水相F68浓度对包封率的影响
以乳化剂种类、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，考察水相F68浓度对包封率的影响。各因素和水平见表3。
表3考察水相F68浓度的各因素及水平
因素 水平
F68水溶液浓度％ 0.2％、0.4％、0.8％、1.6％
乳化剂种类 卵磷脂+Poloxamer 188
单甘酯的用量(mg) 100
卵磷脂与单甘酯的比例 2：1
有机相与水相的比例 1：2
丁香苦苷的投药量(mg) 10
乳化剂Poloxamer 188浓度对包封率的影响见表4。
表4水相F68浓度对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000081
表4较直观的反映出，包封率随着F68的浓度增加而增大，但当浓度为0.8％时反而下降，当Poloxamer 188的浓度为0.4％时最为合适。
3、载体材料用量对包封率的影响
当以单甘酯为载体材料，用量对包封率的影响较大。以乳化剂种类、水相F68浓度、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，考察单甘脂用量对包封率的影响。
表5考察单甘脂用量的各因素及水平
因素 水平
单甘酯的用量(mg) 40、60、80、100
乳化剂种类 卵磷脂+Poloxamer 188
F68水溶液浓度％ 0.4％
有机相与水相的比例 1：2
丁香苦苷的投药量(mg) 10
单甘脂用量对包封率的影响见表6
表6单甘脂用量对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000082
由表6可知，随着单甘酯用量的增加，包封率增大，当单甘酯用量为100mg的时包封率最高，但其粒径较大，且乳化时间长，这是由于有机溶剂的用量是一定的，有机相在溶解和注入到水相时难度较大，直接影响粒径和稳定性。因此，综合考虑将单甘酯的用量确定在80mg最佳。
4、乳化剂与载体材料比例对包封率的影响
以乳化剂种类、水相F68浓度、单甘酯的用量、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，考察不同卵磷脂与单甘酯的比例比例对包封率的影响。
表7卵磷脂与单甘酯比例的各因素及水平
因素 水平
卵磷脂与单甘酯的比例 1：1 2:1 3:1
乳化剂种类 卵磷脂+Poloxamer 188
F68水溶液浓度％ 0.4％
单甘酯的用量(mg) 100
有机相与水相的比例 1：2
丁香苦苷的投药量(mg) 10
卵磷脂与单甘酯比对包封率的影响见表8
表8卵磷脂与单甘酯比例对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000091
表8表明，不同的卵磷脂与单甘酯的比对丁香苦苷固体脂质纳米粒的包封率有一定影响，当卵磷脂与单甘酯的比例为3：1时，包封率最好。
5、有机相与水相比例对包封率的影响
有机相与水相的体积比例直接影响丁香苦苷固体脂质纳米粒粒径、包封率及稳定性。以乳化剂种类、水相F68浓度、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、药物的投药量为固定因素，考察不同有机相与水相比例对包封率的影响。
表9有机相与水相比例的各因素及水平
Figure BDA0001534378200000092
Figure BDA0001534378200000101
不同有机相与水相比例对包封率的影响见表10。
表10有机相与水相比例对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000102
表10结果表明，有机相与水相的比对丁香苦苷固体脂质纳米粒的包封率有一定影响，比例是1：2的时候包封率最高，可能是因为水相体积的增大使得乳化时间延长，从而降低了包封率。
6、药物投药量对包封率的影响
药物添加量直接影响丁香苦苷固体脂质纳米粒粒径、包封率及稳定性。以乳化剂种类、水相F68浓度、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、有机相与水相的比例为固定因素，考察药物的投药量对包封率的影响。
表11药物投药量的各因素及水平
因素 水平
丁香苦苷的投药量(mg) 4、6、8、10、12、14
乳化剂种类 卵磷脂+F68
F68水溶液浓度％ 0.4％
单甘酯的用量(mg) 100
卵磷脂与单甘酯的比例 2：1
有机相与水相的比例 1：2
药物的投药量对包封率的影响见表12。
表12药物的投药量对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000103
Figure BDA0001534378200000111
表12结果表明，包封率随着投药量的增加呈现先增大后降低的趋势，对于一定量的载体材料所能承载的药物量是有限的，考虑到载药量的大小，当药物量在10mg时能得到较高的包封率。
7、乳化条件的考察
丁香苦苷固体脂质纳米粒粒径、包封率及稳定性也受到乳化条件的影响，因此选择乳化温度60℃、65℃、70℃做单因素考察。以乳化剂种类、水相F68浓度、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，以观察乳化条件对丁香苦苷固体脂质纳米粒的包封率的影响。
表13乳化温度条件各因素及水平
因素 水平
乳化温度 60℃、65℃、70℃
乳化剂种类 卵磷脂+F68
F68水溶液浓度％ 0.4％
单甘酯的用量(mg) 100
卵磷脂与单甘酯的比例 2：1
有机相与水相的比例 1：2
丁香苦苷的投药量(mg) 10
乳化条件对包封率的影响见表14。
表14乳化条件对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000112
由表14结果表明，乳化温度在65℃时包封率最高，这主要是因为该温度比单甘酯的熔点略高，有利于提高SYR的包封率，如果温度过低使载体材料还未完全包裹住药物，就冷却成固体而影响包封率，如果温度过高容易使乳化剂变质。因此，确定乳化温度为65℃.
8、搅拌速度的考察
丁香苦苷固体脂质纳米粒粒径、包封率及稳定性也受到搅拌速度的影响。因此，以乳化剂种类、水相F68浓度、单甘酯的用量、卵磷脂与单甘酯的比例、有机相与水相的比例、药物的投药量为固定因素，选择磁力搅拌器的速度定为600r·min-1，1000r·min-1，1400r·min-1进行考察，实验重复3次，以观察乳化条件对丁香苦苷固体脂质纳米粒的包封率的影响。
表15不同搅拌速度的各因素及水平
因素 水平
搅拌速度(r·min-1) 600、1000、1400
乳化剂种类 卵磷脂+F68
F68水溶液浓度％ 0.4％
单甘酯的用量(mg) 100
卵磷脂与单甘酯的比例 2：1
有机相与水相的比例 1：2
丁香苦苷的投药量(mg) 10
不同搅拌速度对包封率的影响见表16。
表16搅拌速度对包封率的影响
Figure BDA0001534378200000121
由表16和图4-6表明，当转速为400丁香苦苷固体脂质纳米粒粒径较大，且易出现粘连，稳定性和包封率都不好，当转速为1000r·min-1，使已经成型的纳米粒相互剧烈的碰撞而破裂。因此，转速过高或高低都会影响丁香苦苷固体脂质纳米粒的包封，600r·min-1包封条件较为适宜。
考虑到诸多因素影响丁香苦苷固体脂质体纳米粒的质量，在预实验的基础上，选择影响固体脂质体纳米粒性质较显著的4个因素作为考察因素，即(A)卵磷脂与单甘酯比，(B)有机相与水相体积比，(C)F68浓度，(D)投药量，每个因素取三个水平进行实验，以包封率为指标，通过L9(34)的正交设计试验优选出最佳工艺条件。
表17因素和水平表
Figure BDA0001534378200000131
正交设计处方优化丁香苦苷固体脂质纳米粒：见表18。
表18丁香苦苷固体脂质纳米粒纳米粒处方正交实验结果
Figure BDA0001534378200000132
小结：极差R反应各因素对指标影响的程度，极差R越大，影响程度越大，本实验四个因素R值排列顺序为A＞B＞C＞D，即卵磷脂与单甘酯比对包封率的影响最大，有机相与水相体积比、F68浓度和投药量对包封率的影响程度依次减小。其中，各因素水平分析结果为：A：3＞2＞1，B：1＞3＞2，C：2＞1＞3，D：2＞3＞1。综上所述，最优处方是A3B1C2D2，即：卵磷脂与单甘酯的比是3：1，有机相与水相比是1：2，F68浓度是0.4％，投药量是10mg。
最佳工艺验证
最佳处方工艺丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备及质量分析
通过正交分析，选择最佳的丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备工艺，制备3批固体脂质纳米粒，制备工艺如下：
称取80mg的单甘酯、240mg卵磷脂、10mgSYR，加入5mL无水乙醇中，加热使之完全溶解，构成有机相；另取浓度是0.4％的F68水溶液10mL，水浴加热至与有机相相同温度，构成水相，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将有机相注入水相中，乳化1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于5mL0-2℃的稀释相中，继续搅拌1.5h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
吸取制得的丁香苦苷固体脂质纳米粒胶体溶液加入到Sephadex G-50凝胶柱顶部，用蒸馏水洗脱，分离纳米粒和游离药物，接取游离药部分，HPLC法测定游离的药物浓度。丁香苦苷固体脂质体纳米粒的包封率和载药量计算公式如下：
Figure BDA0001534378200000141
式中，ER——包封率；DL——载药量；W总——胶体溶液中总药物量；W游离——游离的药物量；WP——载体材料的总量。
所制得的3批丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液呈现均一稳定的透明略带乳光的澄清液体，无沉淀及粒子存在，其包封率和载药量见表19
表19 3批丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液的包封率和载药量
Figure BDA0001534378200000142
由表19直观反映出，此制备工艺可行，能制备出包封率比较稳定的固体脂质纳米粒溶液，重现性较好。
根据最佳工艺制备的3批纳米粒溶液均具有较高的包封率和载药量，纳米粒粒径小且均匀，与透射镜下观察呈类球形的实体粒子，外观较圆整，分布比较均匀，见图7。
实施例8
将本发明制备的丁香苦苷固体脂质纳米粒与申请公布号为CN 103356491A的“一种丁香苦苷PLGA纳米粒的制备方法”制备的纳米粒进行比较分析，比较二者的性能，尤其是肝脏靶向摄取率性能。
表20丁香苦苷固体脂质纳米粒在组织脏器靶向效率表
Figure BDA0001534378200000151
表21丁香苦苷PLGA纳米粒在组织脏器靶向效率表
Figure BDA0001534378200000152
通过表20和21比较分析可知，本发明的丁香苦苷固体脂质纳米粒，肝脏靶向摄取率与CN 103356491A的丁香苦苷PLGA纳米粒的制备方法相比，提高了近100％，增加了丁香苦苷在肝脏病变部位药物的有效浓度，进一步提高了该药物治疗乙型肝炎病毒疾病的能力。
表22丁香苦苷单体、PLGA纳米粒和固体脂质纳米粒和的体外释放结果比较
Figure BDA0001534378200000153
Figure BDA0001534378200000161
由表22结果可知，丁香苦苷不同制备方法体外释放率为，丁香苦苷固体纳米粒<丁香苦苷PLGA纳米粒<丁香苦苷单体。药物释放率越小缓释效果越好，即不同剂型缓释能力为丁香苦苷固体纳米粒<丁香苦苷PLGA纳米粒<丁香苦苷单体，进一步说明丁香苦苷固体纳米粒具有很好的缓释效果，进而提高了药物的半衰期。
表23丁香苦苷单体、PLGA纳米粒和固体脂质纳米粒和的体外释放结果比较
Figure BDA0001534378200000162
由表23结果可知：
空白对照组：用药第15天和停药后5天，空白对照组的ALT和AST水平都相对很高。
拉米夫定组：与空白对照组相比，用药第15天ALT和AST水平都明显下降，但是停药5天后有再度升高的趋势。
丁香苦苷单体组(丁单体)：与空白对照组相比，丁香苦苷单体高、中剂量组的ALT和AST水平都明显下降，下降的程度与给药剂量相关。停药5天以后各组ALT和AST水平未出现明显的反跳现象。低剂量组不明显。
丁香苦苷固体脂质纳米粒组(丁固纳米粒)：与空白对照组相比，S-SLN高、中剂量组的ALT和AST水平都明显下降，下降的程度与给药剂量相关。停药5天以后各组ALT和AST水平未出现明显的反跳现象。低剂量组不明显；与香苦苷单体组相比，丁香苦苷固体脂质纳米粒高、中剂量组的ALT和AST水平都明显下降，证明该制备方法由于单体给药治疗效果。

Claims (1)

1.一种丁香苦苷固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：
称取80mg的单甘酯、240mg卵磷脂、10mgSYR，加入5mL无水乙醇中，加热使之完全溶解，构成有机相；另取浓度是0.4％的F68水溶液10mL，水浴加热至与有机相相同温度，构成水相，在65℃水浴中，600r·min-1的搅拌速度下，将有机相注入水相中，乳化1h，挥发有机溶剂，体积浓缩至5mL左右，可得半透明纳米乳剂，将所得纳米乳剂在搅拌下快速分散于5mL0-2℃的稀释相中，继续搅拌1.5h，即得丁香苦苷固体脂质纳米粒的胶体溶液。
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