CN108096138A - 一种抗衰老皮肤修复液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于护肤品领域，具体涉及一种抗衰老皮肤修复液及其制备方法。所述修复液由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子5.0×10^‑3～1.0×10^‑2％、表皮细胞生长因子5.0×10^‑3～1.0×10^‑2％、经电场处理的植物提取物10～20％、胶原蛋白3～6％、九肽‑10.01～0.05％、熊果苷1～3％、稳定剂1～3％、维生素C 0.1～1％、甘露醇2～6％、透明质酸0.05～1.5％以及水余量。使用了本发明皮肤修复液后，皮肤的弹性度、光泽度以及湿润度能够得到极显著的提升，具有显著的抗衰老作用，且其质量稳定，功效持久，特别适合敏感皮肤使用。

Description

一种抗衰老皮肤修复液及其制备方法

技术领域

本发明属于护肤品领域，具体涉及一种抗衰老皮肤修复液及其制备方法。

背景技术

随着年龄的增长和生活压力的增加，人皮肤新陈代谢减慢，真皮内的保湿因子减少，使得真皮内弹力纤维和胶原纤维功能减退，造成皮肤张力、弹力减弱，使皮肤出现皱纹、肌肤晦暗等衰老特征。

有研究表明，认为皮肤的衰老与端粒衰老有关。生物的遗传基因通过端粒程序决定细胞分裂的次数，随着细胞分裂端粒逐渐缩短，短至一定程度则启动停止分裂信号，正常的体细胞即开始衰老死亡。通过促进细胞分化增殖延缓端粒衰老是目前常用的方法，一般常用的抗衰老活性成分有：①生物制剂类：如表皮生长因子、胎盘提取液、低聚多肽(如缩氨酸、肌肽、胸腺五肽)等；②天然植物制剂类，如何首乌、罗布麻、黄精、珍珠、玉竹、银耳等；③化学合成、半合成制剂类：如维甲酸及其衍生物、多不饱和脂肪酸(DHA、EPA)等。如在中国专利申请CN106109362A中，发明人将车前草籽提取物、羽扇豆提取物以及荷花提取物复配使用，从而能够有效预防和改善皮肤老化，并能够紧致皮肤，并起到抗皮肤衰老的作用；如在中国专利申请CN103948535A中，发明人将熊果、山毛榉果实、虎杖根、迷迭香和甘草制备成植物馏出液，然后加入小分子胶原蛋白、辅酶Q10、表皮生长因子、六胜肽和的乳化剂充分混合，形成以抗衰老乳液。

诸如此类抗衰老组合物还有许多，但是该类组合物均存在一些共性、难以被克服的问题：一是含有多种活性成分，如生物类和天然植物类活性成分的复合制剂，活性成分难以长期保持活性，导致生长因子无法真正发挥其作用；二是，虽然植物提取物具有天然，效果好的优点，但是大多数天然植物，特别是一些不常见的植物对皮肤的刺激性是不容忽视的，如芦荟汁液，在显微镜下观察其晶体呈锐利的结晶体，故在使用时会对皮肤造成一定的刺激，多数拥有敏感皮肤的消费者反映在使用了含多种植物提取物的抗衰老制剂时皮肤会存在轻微的局部的刺痛感，特别若是当皮肤表面存在伤口时，刺激痛强烈，而上述两个问题，目前尚未得到有效的解决。

因此，针对上述现有技术中存在的技术问题，有必要提出一种抗衰老效果显著，同时质量稳定，功效持久，敏感皮肤使用时不存在刺痛感的修复液。

发明内容

本发明旨在提供了一种抗衰老皮肤修复液及其制备方法，具体地说，该修复液具有质量稳定，功效持久的特点，且敏感皮肤使用时不会感觉刺痛感和不适感。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种抗衰老皮肤修复液，由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子5.0×10^-3～1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子5.0×10^-3～1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物10～20％、胶原蛋白3～6％、九肽-10.01～0.05％、熊果苷1～3％、稳定剂1～3％、维生素C0.1～1％、甘露醇2～6％、透明质酸0.05～1.5％以及水余量。

进一步地，所述修复液由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3～1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子8.0×10^-3～1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物15～20％、胶原蛋白3～6％、九肽-10.02～0.05％、熊果苷1～3％、稳定剂1～3％、维生素C0.5～1％、甘露醇3～6％、透明质酸0.5～1.5％以及水余量。

进一步地，所述修复液由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3、表皮细胞生长因子8.0×10^-3、经电场处理的植物提取物15％、胶原蛋白4％、九肽-10.03％、熊果苷1.5％、稳定剂2％、维生素C0.5％、甘露醇5％、透明质酸1.0％以及水余量。

进一步地，所述修复液由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物20％、胶原蛋白6％、九肽-10.05％、熊果苷3％、稳定剂3％、维生素C1％、甘露醇6％、透明质酸1.5％以及水余量。

进一步地，所述经电场处理的植物提取物由以下步骤制得：

S1、芦荟提取物的制备：取新鲜芦荟，洗净，晾干，榨汁，过滤，得芦荟提取物；

S2、红石榴皮提取物的制备：取红石榴皮，烘干，粉碎，加入其质量10～20倍量的水，45～65℃超声波辅助浸提1～3h，超声功率为60～100W，离心，过滤，减压浓缩，得红石榴皮提取物；

S3、甘草提取物的制备：取甘草，洗净，荫干，粉碎成粗粉，加入粗粉质量5～10倍量的水，煎煮1～3次，每次40～60min，过滤，合并滤液，得甘草提取物；

S4、不同强度的电场处理：将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后，暴露在电压10～20V，电场强度8～10v/m的电场中1～3min后，将电场强度调节至3～8v/m，继续处理20～35s，即得。

进一步地，，所述步骤S4中将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后暴露在10～16V，电场强度8～10v/m的电场中1～3min后，将电场强度调节至5～8v/m，处理20～30s。

进一步地，所述步骤S4中将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后暴露在13V，电场强度8v/m的电场中1.5min后，将电场强度调节至6v/m，处理22s。

进一步地，所述稳定剂为包含300～1000ppm聚山梨酯-80初级降解物和20～100ppmL-谷氨酰胺的水溶液。

进一步地，所述稳定剂为包含600ppm聚山梨酯-80初级降解物和50ppmL-谷氨酰胺的水溶液。

进一步地，所述聚山梨酯-80初级降解物由以下步骤制得：

往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种1～5wt％浓度为800～1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30～45℃，转速为120r/min，培养至培养液pH检测为2.0～3.0，离心，取上清；依次对上清进行微滤、阳离子交换和灭菌，制得聚山梨酯-80初级降解物。

相应地，本发明还提供了一种制备上述的皮肤修复液的方法，包括以下步骤：

将甘露醇、熊果苷和稳定剂混合，涡旋混匀后，加入重组角化细胞生长因子、表皮细胞生长因子、经电场处理的植物提取物、胶原蛋白、九肽-1、维生素C、透明质酸和水，不断涡旋使其形成均一稳定的溶液，灭菌，包装，即得。

为了降低植物提取物对敏感皮肤的刺激性，降低使用时产生刺痛感的可能，发明人经过大量的试验和创造性劳动，终于发现，若对植物提取物进行电场处理能够显著降低其对皮肤的刺激性。而令人惊奇地是，如果进行不同强度的电场处理，还可以显著提高植物提取物的长期稳定性。而取得上述效果的机制，尚未清楚，发明人认为可能是，电场的处理使某些具备锐利晶体结构的植物提取物的晶体结构发生了一定的变化，结晶体的锐利程度较处理前显著降低，因此，对皮肤的刺激性降低。值得说明的是，电场的电压和电流强度对处理效果也有较大的影响，并且这种影响是毫无规律的，因此，发明人经过大量试验终于得出，先在电压为10～20V，电场强度为8～10v/m处理后再置于3～8v/m强度下处理，在该范围内，电场的处理带来的都是好的影响，如降低了植物提取物对敏感皮肤的刺激性，且不会对其有效成分造成影响，申请人认为取得了意料不到的技术效果。

本发明提供的修复液除植物提取物、生长因子外还含有胶原蛋白和多肽等，虽然各组成分协同具有抗衰老作用，但是多肽的相互聚集现象以及生长因子的活性下降在目前仍然是个难以克服的困难。由此，本发明还提供了一种新的稳定剂，其为包含300～1000ppm聚山梨酯-80初级降解物和20～100ppmL-谷氨酰胺的水溶液。实验证明，本发明稳定剂不仅能够抑制多肽的相互聚集，还具有稳定生长因子的作用。这一点从本发明试验例二可以看出，加入本发明稳定剂的皮肤修复液在4℃、-20℃以及常温的条件下储存30d后，两种生长因子的含量与空白对照组(不含有稳定剂)相比均有极显著的上升，同时，该皮肤修复液在温度25±2℃、相对湿度60±10％的条件下保存12个月后仍然澄清。

本发明具有以下优点：

1)本发明提供了一种抗衰老皮肤修复液，其包含植物提取物、生长因子外还含有胶原蛋白和多肽等多种活性成分，各活性成分相辅相成，达到了协同增效的作用，具有显著的抗衰老效果，且其质量稳定，功效持久。

2)本发明对植物提取物进行不同强度电场处理，显著降低了植物提取物对敏感皮肤的刺激，降低了使用时存在轻微刺激痛的可能，提升了消费者的使用体验。

3)本发明还提供了一种新的稳定剂，该稳定剂的存在克服了蛋白质和多肽的相互聚集、生长因子难以长久保持活性的问题，使各活性成分能够真正发挥作用，取得了显著的进步。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。

实施例1、聚山梨酯-80初级降解物的制备

往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种3wt％浓度为1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为35℃，转速为120r/min，培养至培养液pH检测为2.0，离心，取上清；依次对上清进行微滤、732型阳离子交换树脂进行阳离子交换和灭菌，制得聚山梨酯-80初级降解物。

实施例2、一种抗衰老皮肤修复液

由以下质量分数的组分组成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3、表皮细胞生长因子8.0×10^-3、经电场处理的植物提取物15％、胶原蛋白4％、九肽-10.03％、熊果苷1.5％、稳定剂2％、维生素C0.5％、甘露醇5％、透明质酸1.0％以及水余量，其中稳定剂为包含600ppm聚山梨酯-80初级降解物和50ppmL-谷氨酰胺的水溶液。

制备方法：

A)植物提取物的制备：

S1、芦荟提取物的制备：取新鲜芦荟，洗净，晾干，榨汁，过滤，得芦荟提取物；

S2、红石榴皮提取物的制备：取红石榴皮，烘干，粉碎，加入其质量15倍量的水，55℃超声波辅助浸提2h，超声功率为60W，离心，过滤，减压浓缩，得红石榴皮提取物；

S3、甘草提取物的制备：取甘草，洗净，荫干，粉碎成粗粉，加入粗粉质量10倍量的水，煎煮2次，每次45min，过滤，合并滤液，得甘草提取物；

S4、不同强度的电场处理：将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后，暴露在电压13V，电场强度8v/m的电场中1.5min后，将电场强度调节至6v/m，继续处理22s，即得；

B)将甘露醇、熊果苷和稳定剂混合，涡旋混匀后，加入重组角化细胞生长因子、表皮细胞生长因子、经电场处理的植物提取物、胶原蛋白、九肽-1、维生素C、透明质酸和水，不断涡旋使其形成均一稳定的溶液，灭菌，包装，即得。

实施例3、一种抗衰老皮肤修复液

由以下质量分数的组分组成：重组角化细胞生长因子1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物20％、胶原蛋白6％、九肽-10.05％、熊果苷3％、稳定剂3％、维生素C1％、甘露醇2％、透明质酸1.5％以及水余量，其中稳定剂为含有1000ppm实施例1所述的聚山梨酯-80初级降解物和100ppm L-谷氨酰胺的水溶液。

制备方法中，步骤S4为：将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后，暴露在电压10V，电场强度10v/m的电场中1.5min后，将电场强度调节至5v/m，继续处理25s。

实施例4、一种抗衰老皮肤修复液

由以下质量分数的组分组成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3％、表皮细胞生长因子8.0×10^-3％、经电场处理的植物提取物15％、胶原蛋白3％、九肽-10.02％、熊果苷1％、稳定剂1％、维生素C0.5％、甘露醇6％、透明质酸0.5％以及水余量，其中稳定剂为含有300ppm实施例1所述的聚山梨酯-80初级降解物和20ppm L-谷氨酰胺的水溶液。

制备方法中，步骤S4为：将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后，暴露在电压16V，电场强度8v/m的电场中1.5min后，将电场强度调节至8v/m，继续处理25s，

对比例1、一种抗衰老皮肤修复液

与实施例2的区别在于，去掉步骤S4，其余参数及操作如实施例2。

对比例2、一种抗衰老皮肤修复液

与实施例2的区别在于，步骤S4为将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后暴露在电压13V，电场强度8v/m的电场中1min52s(去掉低强度电场处理步骤)。

对比例3、一种抗衰老皮肤修复液

与实施例2的区别在于，稳定剂为包含650ppm聚山梨酯-80初级降解物的水溶液。

对比例4、一种抗衰老皮肤修复液

与实施例2的区别在于，稳定剂为包含650ppmL-谷氨酰胺的水溶液。

对比例5、一种抗衰老皮肤修复液

与实施例2的区别在于，稳定剂为包含650ppm聚山梨酯-80的水溶液。

试验例一、抗衰老试验

1.1弹性度、光泽度和湿润度评价：将敏感皮肤试用人群随机分为5组，每组25人，试用人群对产品成分不了解，排除心理因素对产品整体评价的影响。5组受试者每日早晚于脸颊的相同区域分别涂抹实施例2～4以及对比例1～2所制备的修复液，连续使用30天后对产品效果按下表1评价标准进行评价，评价结果如表2所示。

1.2使用感评价：按表3评价标准对使用时的刺痛感程度进行评价，评价结果如表4所示。

2.试验结果。

2.1弹性度、光泽度和湿润度评价

表1评价标准

表2评价结果

2.2使用感评价

表3评价标准

指标	0～3分	4～7分	8～10分
				刺痛感	存在强烈的刺痛感	存在轻微刺痛感	无刺激痛

表4评价结果

组别	分数
		实施例2	9.85
实施例3	9.64
		实施例4	9.72
对比例1	5.03
		对比例2	6.83

2.结果分析

2.1疗效观察：由表2可知，受试者均认为使用了本发明实施例2～4所述皮肤修复液后，皮肤的弹性度、光泽度以及湿润度得到了极显著地提高，这说明，本发明皮肤修复液具有显著的抗衰老效果，其中以实施例2的效果最为显著，为本发明最佳实施例。

2.2使用感评价：从表4可知，受试者均认为在使用本发明实施例2～4所述皮肤修复液时不存在刺痛感；而需要说明的是，与实施例2相比，对比例1(与实施例2相比，省略了电场处理步骤)评分为5.03分，这说明，使用了对比例1所述皮肤修复液后，大部分敏感皮肤消费者感觉存在轻微的刺激痛感，这表明示电场处理有利于降低植物提取物对皮肤的刺激性；大部分敏感皮肤消费者使用了对比例2(与实施例2相比，省略了低强度电场处理步骤)所述皮肤修复液后，刺激痛感评分虽然较对比例2有所升高(6.83分)，但从评分来看，仍有部分患者感觉使用时存在轻微的刺激痛。

试验例二、稳定性评价

2.1稳定剂组成对两种生长因子活性的考察

取实施例2～4以及对比例3～5所述皮肤修复液，并以不加入稳定剂作为空白对照组，设置各组皮肤修复液中的两种生长因子的初始浓度为5μg/L，将各组置于4℃、-20℃以及常温的条件下储存30d后，采用ELASA方法检测表皮生长因子的含量(试剂盒购自美国RapidBio公司，实验操作按试剂盒说明进行)试验结果如下表5所示。

表5稳定剂组成对重组角化细胞生长因子含量的影响

注：与空白对照组同项相比，^**P＜0.01，^*P＜0.05；与实施例2组同项相比，^##P＜0.01，^#P＜0.05。

表6稳定剂组成对表皮细胞生长因子含量的影响

由表5、6可知，各组样品在-20℃下储藏30d后，两种生长因子的含量无明显差异，不具有统计学意义。

与空白对照组(不加入稳定剂)相比，本发明实施例2～4皮肤修复液在4℃以及常温的条件下储藏30d后两种生长因子的含量均有显著升高，具有极显著的差异(P＜0.01)。

而令人意外的是，与实施例2组相比，对比例3(与实施例2相比，稳定剂为聚山梨酯-80初级降解物)皮肤修复液在4℃及常温的条件下储藏30d，两种生长因子含量有显著下降(P＜0.05)；对比例4(与实施例2相比，稳定剂为L-谷氨酰)皮肤修复液在4℃及常温的条件储存30d后，两种生长因子含量均有极显著下降(P＜0.01)。对比例5(与实施例2相比，稳定剂为聚山梨酯-80)皮肤修复液在4℃及常温的条件下储藏30d，两种生长因子含量与实施例2相比亦有显著下降(P＜0.05)，这说明，与加入完整的聚山梨酯-80相比，加入聚山梨酯-80初级降解物协同L-谷氨酰胺能够取得更好的稳定效果。

2.2稳定剂组成对各组抗衰老皮肤修复液澄清度的影响

取上述2.1各组抗衰老皮肤修复液，将其置于为温度25±2℃、相对湿60±10％的条件下储存3、6、9、12个月后，观察各抗衰老皮肤修复液澄清情况，并记录，试验结果如表7所示。

表7稳定剂对各组皮肤修复组合物澄清度的影响

由表7可知，本发明2～4所述抗衰老皮肤修复液在温度25±2℃、相对湿度60±10％的条件下储存12个月后仍然澄清，其与加入完整的聚山梨酯-80(对比例5)取得的效果无明显差别，这说明，本发明稳定剂在防止蛋白质和多肽相互聚集方面能够取得与聚山梨酯-80同等的效果。

而不加入稳定剂的抗衰老皮肤修复液在相同条件下储存6个月后即有少许浑浊产生，在12个月后有沉淀形成，推测是胶原蛋白和多肽发生了小范围的相互聚集导致。

而值得注意的是，对比例4(仅仅加入了L-谷氨酰胺)和对比例3(仅仅加入了聚山梨酯-80初级降解物)所述皮肤修复液，其在相同的条件下储存9个月后出现了浑浊，这说明，聚山梨酯-80初级降解物以及L-谷氨酰胺对蛋白质的相互聚集具有一定的抑制作用，但作用均不显著。而两者联合使这种抑制作用变得更加显著，这说明，L-谷氨酰胺和聚山梨酯-80初级降解物两者在防止蛋白质和多肽聚集方面取得了协同增效的作用。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种抗衰老皮肤修复液，其特征在于，由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子5.0×10^-3～1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子5.0×10^-3～1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物10～20％、胶原蛋白3～6％、九肽-10.01～0.05％、熊果苷1～3％、稳定剂1～3％、维生素C 0.1～1％、甘露醇2～6％、透明质酸0.05～1.5％以及水余量。

2.如权利要求1所述的修复液，其特征在于，由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3～1.0×10^-2％、表皮细胞生长因子8.0×10^-3～1.0×10^-2％、经电场处理的植物提取物15～20％、胶原蛋白3～6％、九肽-10.02～0.05％、熊果苷1～3％、稳定剂1～3％、维生素C 0.5～1％、甘露醇3～6％、透明质酸0.5～1.5％以及水余量。

3.如权利要求2所述的修复液，其特征在于，由以下质量分数的组分制成：重组角化细胞生长因子8.0×10^-3、表皮细胞生长因子8.0×10^-3、经电场处理的植物提取物15％、胶原蛋白4％、九肽-10.03％、熊果苷1.5％、稳定剂2％、维生素C 0.5％、甘露醇5％、透明质酸1.0％以及水余量。

4.如权利要求1～3任一所述的修复液，其特征在于，所述经电场处理的植物提取物由以下步骤制得：

S1、芦荟提取物的制备：取新鲜芦荟，洗净，晾干，榨汁，过滤，得芦荟提取物；

S2、红石榴皮提取物的制备：取红石榴皮，烘干，粉碎，加入其质量10～20倍量的水，45～65℃超声波辅助浸提1～3h，超声功率为60～100W，离心，过滤，减压浓缩，得红石榴皮提取物；

S3、甘草提取物的制备：取甘草，洗净，荫干，粉碎成粗粉，加入粗粉质量5～10倍量的水，煎煮1～3次，每次40～60min，过滤，合并滤液，得甘草提取物；

S4、不同强度的电场处理：将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后，暴露在电压10～20V，电场强度8～10v/m的电场中1～3min后，将电场强度调节至3～8v/m，继续处理20～35s，即得。

5.如权利要求4所述的修复液，其特征在于，所述步骤S4中将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后暴露在10～16V，电场强度8～10v/m的电场中1～3min后，将电场强度调节至5～8v/m，处理20～30s。

6.如权利要求5所述的修复液，其特征在于，所述步骤S4中将上述芦荟提取物、红石榴皮提取物以及甘草提取物混合后暴露在13V，电场强度8v/m的电场中1.5min后，将电场强度调节至6v/m，处理22s。

7.如权利要求1～3任一所述的修复液，其特征在于，所述稳定剂为包含300～1000ppm聚山梨酯-80初级降解物和20～100ppm L-谷氨酰胺的水溶液。

8.如权利要求7所述的修复液，其特征在于，所述稳定剂为包含600ppm聚山梨酯-80初级降解物和50ppm L-谷氨酰胺的水溶液。

9.如权利要求7所述的修复液，其特征在于，所述聚山梨酯-80初级降解物由以下步骤制得：

往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种1～5wt％浓度为800～1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30～45℃，转速为120r/min，培养至培养液pH检测为2.0～3.0，离心，取上清；依次对上清进行微滤、阳离子交换和灭菌，制得聚山梨酯-80初级降解物。

10.一种制备如权利要求1～9任一所述的皮肤修复液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将甘露醇、熊果苷和稳定剂混合，涡旋混匀后，加入重组角化细胞生长因子、表皮细胞生长因子、经电场处理的植物提取物、胶原蛋白、九肽-1、维生素C、透明质酸和水，不断涡旋使其形成均一稳定的溶液，灭菌，包装，即得。