CN108042544B - 一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，包括甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖，三者的质量比为1：(0.1～2)：(0.5～10)。本发明提供的组合物以甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖三者协同作用，不仅优于甲苯胺蓝单组份在相同条件下的杀菌效果，而且所得产品对于光波长范围变化不敏感，波长的变化并不影响其杀菌效果，从而在应用中不会因光波长范围的变化导致其杀菌效果降低，同时，所述组合物具有良好的促进创面愈合效果。且本发明提供的组合物具有良好的稳定性，便于储藏以及应用。

Description

一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物及其应用
技术领域
本发明涉及医药卫生领域，具体涉及一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物。
背景技术
光动力疗法是利用物质的光学特性，通过结合光敏剂与一定波长光波的产生活性氧(ROS)，从而杀死细菌的无/微创的治疗方法。该法广泛应用于多种癌症的综合治疗、皮肤病治疗、口腔疾病的控制和治疗等多个领域，该方法具有见效快、对大量细菌都有效果、无免疫反应、无副作用、可重复使用的优点。甲苯胺蓝凝胶为光敏剂凝胶，具有以下几大优势：凝胶制剂具有一定的粘性和附着性，可以使药物停留在患病部位提高治疗效果。另一方面甲苯胺蓝是一种核酸倾向的嗜酸性染料，停留在细胞核成分较多的组织中。在组织中具有较好的穿透深度，可有效的分布于感染的靶组织，但不能穿透正常组织，这样避免了正常组织受到光动力对其的杀伤，所以甲苯胺蓝对病变区域、细菌具有较好的选择性。最重要的一点是，甲苯胺蓝光敏剂无明显的毒副作用，这样减少了对人类健康系统的危害，有利于光动力疗法的推广与应用。
专利文献CN106822894A公开了一种配合光动力治疗牙周炎的光敏凝胶制剂产品及其制备方法，这种凝胶产品以甲苯胺蓝为主要的光敏物质，主要由以下组分按重量百分比配制而成：0.001～1％的甲苯胺蓝，0.05～3％的亲水性凝胶剂，0.01～0.4％的氢氧化钠或0.07～2％三乙醇胺，余量为水；所述亲水性凝胶剂优选为卡波姆。该专利同时公开了所述凝胶制剂的制备方法，具体为：将卡波姆溶于水中，搅匀，使之充分溶胀；将甲苯胺蓝加在溶胀的卡波姆中汇总；再加入氢氧化钠或者三乙醇胺，补足水，充分搅拌充分溶胀后得到所述光敏凝胶制剂。本发明涉及的光动力治疗牙周炎方法可以替代抗生素疗法，防止抗生素滥用问题，该制剂用于治疗牙周炎等感染引起的口腔疾病，一次照射治疗的抑菌率达到99.99％，严重病人可以间隔反复治疗，对正常器官组织无毒副作用，具有非常广泛的市场前景和应用价值。然而该方案提供的凝胶在使用时对于光的波长范围敏感，波长的变化会导致其杀菌效果明显下降，从而影响其应用效果；同时，该方案提供的产品在促进手术创面愈合以及长效稳定方面均不够理想。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物。
具体而言，本发明提供的组合物中包括甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖，三者的质量比为1：(0.1～2)：(0.5～10)。
本发明提供的方案中，甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖对于杀菌效果有协同效果。本发明通过大量实践发现，当上述三者以质量比1：(0.1～2)：(0.5～10)混合使用时，不仅优于甲苯胺蓝单组份在相同条件下的杀菌效果，而且所得产品对于光波长范围变化不敏感，波长的变化并不影响其杀菌效果，从而在应用中不会因光波长范围的变化导致其杀菌效果降低。同时，由于透明质酸钠和壳聚糖组分的存在，所述组合物对于创面修复具有良好的效果。另外，本发明通过大量实践发现，将甲苯胺蓝与透明质酸钠和壳聚糖以特定比例混合后，可以确保所得凝胶剂在较长时间放置后仍均匀稳定，不会出现变色或分层。
为了同时促进所述杀菌、促进创面愈合效果以及稳定性，本发明进一步优选所述甲苯胺蓝和亚甲基蓝的质量比为1：(1～3)：(2～8)或1：(0.3～0.9)：(0.5～1.5)。
本发明提供的组合物优选为水剂或凝胶剂，并以pH 6.5～9的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液为溶剂制备，继而可以确保所得组合物具有良好的稳定性，同时保持良好的杀菌效果。
本发明提供的组合物可以用于口腔保健以及修复，为了提高患者使用感受，所述组合物中可以适量加入口腔调味剂。
本发明进一步发现，当所述组合物的浓度控制在特定范围内时，更有利于其长期稳定性，且能确保其杀菌效果的同时减少皮肤刺激性。具体而言，组合物的浓度以甲苯胺蓝计，甲苯胺蓝的质量体积浓度优选为0.00001g/ml～0.1g/ml，更优选为0.001g/ml～0.015g/ml。如果组合物浓度过高，尤其是透明质酸钠和壳聚糖浓度过高时，会使体系粘度增加，在离子作用下生团聚而分层，稳定性下降。
作为本发明的一种优选方案，所述组合物为凝胶剂时，其制备方法包括以下步骤：将甲苯胺蓝充分溶于磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，加入透明质酸钠充分分散，再加入壳聚糖配制成凝胶，即可。
本发明提供的组合物可以应用于各种手术前后的创面杀菌及促进愈合，可有效杀灭多种致病菌、预防术后感染的同时促进创面愈合，并有指示某些癌变细胞的作用，尤其适用于口腔手术后的创面杀菌及促进愈合。
本发明提供的组合物还可以应用于口腔科牙周病的预防与治疗。
在实际使用时，将所述组合物涂抹于创面或患处后光照即可。所述光照波长优选为630nm～670nm，光照时间优选为0.5～1.5min。
本发明提供的组合物以甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖三者协同作用，不仅优于甲苯胺蓝单组份在相同条件下的杀菌效果，而且所得产品对于光波长范围变化不敏感，波长的变化并不影响其杀菌效果，从而在应用中不会因光波长范围的变化导致其杀菌效果降低，同时，所述组合物具有良好的促进创面愈合效果。且本发明提供的组合物具有良好的稳定性，便于储藏以及应用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：取pH值为7.5的磷酸盐缓冲液100mL，首先加入0.1g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.2g透明质酸钠，充分分散后加入0.4g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例2
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：取pH值为7.8的磷酸盐缓冲液100mL，首先加入0.12g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.1g透明质酸钠，充分分散后加入0.8g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例3
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：取pH值为7.0的磷酸盐缓冲液100mL，首先加入0.05g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.5g透明质酸钠，充分分散后加入1g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例4
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：取pH值为6.5的磷酸盐缓冲液100mL，首先加入2g甲苯胺蓝，充分分散后加入1g透明质酸钠，充分分散后加入1.5g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例5
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：用pH值为8.0的Tris缓冲液100mL，首先加入0.15g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.2g透明质酸钠，充分分散后加入0.4g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例6
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：用pH值为8.5的Tris缓冲液100mL，首先加入0.10g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.1g透明质酸钠，充分分散后加入0.8g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例7
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：用pH值为8.5的Tris缓冲液100mL，首先加入1g甲苯胺蓝，充分分散后加入0.8g透明质酸钠，充分分散后加入1.5g壳聚糖，充分分散，即可。
实施例8
本实施例提供了一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其为凝胶剂，采用如下方法制备而成：用pH值为9的Tris缓冲液100mL，首先加入0.03g甲苯胺蓝，充分分散后加入1g透明质酸钠，充分分散后加入2g壳聚糖，充分分散，即可。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于：用卡波姆代替所述透明质酸钠。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于：用卡波姆代替所述透壳聚糖。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于：用0.1％的氢氧化钠溶液代替所述磷酸盐缓冲液。
对比例4
用浓度为0.05g/ml的卡波姆凝胶配置浓度为0.005g/ml的甲苯胺蓝凝胶。
对比例5
浓度为0.002g/ml的甲苯胺蓝水溶液。
实验例1：杀菌效果
将孵育16-24h的菌种分别接种在营养肉汤培养基试管中，校正菌液浓度为1.0×108CFU/mL。用移液管取0.5ml菌液，将菌液平铺在直径为8mm的不锈钢片中间，用抑菌环控制平铺面积不超过5mm。分别取各实施例或对比例的液体0.5ml或者凝胶0.5g，放到所述菌液上，充分铺展使试样覆盖菌液，每个实施例或对比例分别检测用635nm、660nm的光照射1min条件下对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的杀菌效果。然后将不锈钢片用10ml无菌水冲洗超声脱出细菌并离心分离取得菌液，将取得的菌液37℃培养24h，观察细菌生长情况，通过CFU计算杀菌效果，结果如表1所示。
表1：杀菌率
Figure BDA0001476778600000061
表1结果显示，本发明提供的凝胶对于杀菌效果有协同效果，对于光波长范围变化不敏感，在应用中不受光波长范围的变化导致其杀菌效果降低。
实验例2：稳定性实验
取各实施例和对比例所得凝胶各100ml，放于密封透明玻璃瓶中，放在恒温恒湿箱中避光保存，设置温度为55℃，湿度为95％进行加速老化实验，定期观察凝胶状态。
结果如表2所示。
表2：凝胶稳定性
Figure BDA0001476778600000071
Figure BDA0001476778600000081
由表2结果可知，本发明提供的凝胶具有良好的稳定性，长期放置后仍然均匀稳定，未出现分层或变色。
实验例3：创面抗炎修复实验
模型的制备：将兔耳局部剃毛，对皮肤进行破损处理，用粗金刚砂纸打磨兔耳皮肤，破坏表皮层，造成5cm2的皮肤缺损出血，用10微升浓度为1.0×106CFU/mL的金黄色葡萄球菌菌液涂抹感染。
治疗及检测方法：将各实施例和对比例提供的凝胶在兔耳破损皮肤上均匀涂敷，660nm光照射1.5min，每天早晚两次进行涂抹样品和光照处理，分别观察连续涂抹3天、5天时兔耳皮肤愈合情况。
空白对照组不进行菌液感染，用生理盐水冲洗。
实验结果如表3所示。
表3：对兔耳皮肤创伤的愈合效果
Figure BDA0001476778600000091
由表3结果可知，本发明提供的凝胶具有良好的创面修复效果。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (11)

1.一种甲苯胺蓝光动力杀菌及促进愈合组合物，其特征在于，包括甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖，所述甲苯胺蓝、透明质酸钠和壳聚糖的质量比为1：（1~3）：（2~8）或1：（0.3~0.9）：（0.5~1.5）；
所述组合物为水剂或凝胶剂，所述组合物以pH 6.5~9的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液为溶剂。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中还包括口腔调味剂。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为水剂或凝胶剂时，其中甲苯胺蓝的质量体积浓度为0.00001g/ml ~0.1g/ml。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物为水剂或凝胶剂时，其中甲苯胺蓝的质量体积浓度为0.001g/ml~0.015 g/ml。
5.根据权利要求1或2或4所述的组合物，其特征在于，所述组合物为凝胶剂，其制备方法包括以下步骤：将甲苯胺蓝充分溶于磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，加入透明质酸钠充分分散，再加入壳聚糖配制成凝胶，即可。
6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物为凝胶剂，其制备方法包括以下步骤：将甲苯胺蓝充分溶于磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，加入透明质酸钠充分分散，再加入壳聚糖配制成凝胶，即可。
7.权利要求1~6任意一项所述组合物在制备指示癌变细胞、手术前和/或手术后的创面杀菌、手术前和/或手术后的创面愈合的药物中的应用。
8.权利要求1~6任意一项所述组合物在制备口腔手术后的创面杀菌及促进愈合的药物中的应用。
9.权利要求1~6任意一项所述组合物在制备口腔科牙周病防治的药物中的应用。
10.根据权利要求7~9任意一项所述的应用，其特征在于，涂抹所述组合物后光照，即可。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述光照波长为630nm~670nm，光照时间为0.5~3min。
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