CN108042498A - 一种abt-199纳米乳分散剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种ABT‑199纳米乳分散剂，按质量百分比由以下原料组成：ABT‑199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％，以上各组分的质量百分比之和为100％，包裹材料为大豆磷脂、卵磷脂和胆固醇中的其中一种或多种的混合物，表面活性剂为非离子型表面活性剂，包括吐温80、泊洛沙姆188、聚乙二醇‑聚乳酸PEG‑PLGA中的其中一种或者多种的混合物，冻干保护剂为甘露醇、葡萄糖中的其中一种或者两种的混合物，本发明还公开了一种ABT‑199纳米乳分散剂的制备方法，本发明解决了现有技术中存在该化合物水溶性差、生物利用度低及体内毒副作用强的问题。

Description

一种ABT-199纳米乳分散剂及其制备方法
技术领域
本发明属于纳米生物技术领域，具体涉及一种ABT-199纳米乳分散剂，本发明还涉及一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法。
背景技术
Bcl-2(B-cell lymphoma-2)蛋白具有抑制细胞凋亡的效果，其与肿瘤的发生和发展具有重要的关联，很多研究均已证明其作用机制。在治疗方面，Bcl-2蛋白也是一个非常热门的肿瘤抑制靶点，已有很多针对性的先导药物化合物被开发出来。其中ABT-199就是AbbVie研发的一种Bcl-2抑制剂，目前已进入了临床试验阶段，其I期试验入组84例复发型/难治型CLL/SLL患者和44例复发型/难治型非霍奇金淋巴瘤患者，经过ABT-199治疗，CLL/SLL的应答率为79％，其中完全应答率为22％，中位持续应答时间为20.5个月；针对非霍奇金淋巴瘤的应答率为48％，其中完全应答率为7.5％。ABT-199的疗效能够与obinutuzumab、idelalisib、ibrutinib等新的抗肿瘤药物媲美，有望成为第一个上市的Bcl-2抑制剂，目前ABT-199正在进行III期临床研究。但是ABT-199的水溶性非常差。此外，作为Bcl-2抑制剂，还存在一定的毒副作用，这些问题都严重的阻碍了它的进一步开发和应用。
纳米制剂是利用包装材料将药物或者生物活性分子等集成在纳米尺度的颗粒内部，可起到提高药物稳定性，延长药物体内循环时间和增加生物利用度等功效，对克服传统化疗药物存在的各种缺陷有着重要的意义。其中，纳米乳剂是当前最为常见的一类纳米药物制剂，其优点在于粒径小，循环时间长，体内稳定，组织吸收和释放性好等。
为了达到这一系列功能，首先需要对纳米乳剂进行合理的设计，再根据需求选择合适的包裹材料，表面活性剂和稳定剂，再通过合理的工艺安排最终制备获得所需的纳米乳制剂。
其中，乳化剂是整个乳剂制备的核心，它能吸附在相界面上形成界面膜包裹疏水性药物内核，使乳状液稳定。选用乳化剂时不仅要考虑其使纳米乳稳定的乳化性能，而且要考虑毒性、稳定性和价格等。天然乳化剂生物相容性好，易形成高分子膜而使乳滴稳定，但是降低界面张力的能力不强。可通过加入一些合成型的表面活性剂来解性能上的不足。此外，为了长效保存，乳剂在制备完成后，应进行脱水。脱水过程需保证纳米乳颗粒的完整性和再分散性，所以需要加入相应的稳定剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种ABT-199纳米乳分散剂，解决了该化合物水溶性差、生物利用度低及体内毒副作用强的问题。
本发明的另一目的是提供一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法。
本发明所采用的第一技术方案是，一种ABT-199纳米乳分散剂，按质量百分比由以下原料的有效组分组成：ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％，以上各组分的质量百分比之和为100％。
本发明第一技术方案的特点还在于，
包裹材料为大豆磷脂、卵磷脂和胆固醇中的其中一种或多种的混合物。
表面活性剂为非离子型表面活性剂，包括吐温80、泊洛沙姆188、聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA中的其中一种或者多种的混合物。
冻干保护剂为甘露醇、葡萄糖中的其中一种或者两种的混合物。
本发明所采用的第二技术方案是，一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％；
步骤2、将ABT-199溶解于乙醇中，再将包裹材料和表面活性剂一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去离子水中，进行搅拌，之后进行超声处理，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去乳剂中的乙醇和其他可溶性杂质；
步骤5、将称取的冻干保护剂缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉。
本发明第二技术方案的特点还在于，
步骤2中ABT-199与乙醇的体积比为1：20，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行。
步骤3中混合溶液与去离子水的体积比为1:10，加入速度控制为10～20ml/min，搅拌速度为300-500rpm，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为400～800W，每次循环超声处理时间为6～8s，间隔时间为3～4s，总循环次数为50～100次。
步骤4中透析具体为：将纳米药载颗粒分散液装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为12～24小时，期间更换外液3～5次。
步骤5中搅拌速度为200～400rpm，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜。
步骤6中预冻在-70～-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为12～24小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
本发明的有益效果是，一种ABT-199纳米乳分散剂，粒径小于200纳米，包裹效率高，稳定性好，具有缓释效果等优势，能有效保证药物在体内的长效循环，用于纳米乳剂的制备方法简单，所建立的工艺体系实用，各步骤均可进行精密的质量控制，获得的纳米乳剂具有非常高的包裹率和载药量，冻干后的制剂干粉可以稳定存放一年以上。
附图说明
图1是本发明一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法的流程示意图；
图2是本发明一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法中实施例1所制备纳米乳剂粒径分布图；
图3是本发明一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法中实施例1所制备的纳米乳剂重溶后透射电子显微镜照片；
图4是本发明一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法中实施例1所制备纳米乳剂粒径稳定性测试结果图；
图5是本发明一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法中实施例1所制备纳米乳剂体外释放测试结果图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明一种ABT-199纳米乳分散剂，按质量百分比由以下原料的有效组分组成：ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％，以上各组分的质量百分比之和为100％。
其中，包裹材料为大豆磷脂、卵磷脂和胆固醇中的其中一种或多种的混合物。表面活性剂为非离子型表面活性剂，包括吐温80、泊洛沙姆188、聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA中的其中一种或者多种的混合物。冻干保护剂为甘露醇、葡萄糖中的其中一种或者两种的混合物。
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，如图1所示，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％；
步骤2、将ABT-199溶解于乙醇中，ABT-199与乙醇的体积比为1：20，再将包裹材料和表面活性剂一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去离子水中，加入速度控制为10～20ml/min，混合溶液与去离子水的体积比为1:10，进行搅拌，搅拌速度为300-500rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为400～800W，每次循环超声处理时间为6～8s，间隔时间为3～4s，总循环次数为50～100次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米药载颗粒分散液；
步骤4、将步骤3获得的纳米药载颗粒分散液进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米药载颗粒分散液装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为12～24小时，期间更换外液3～5次；
步骤5、将称取的冻干保护剂缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为200～400rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-70～-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为12～24小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
实施例1
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 4％，包裹材料32％，表面活性剂28％，冻干保护剂36％；
步骤2、将4g ABT-199溶解于80ml乙醇中，包裹材料选用大豆磷脂，表面活性剂选用吐温-80，将32g大豆磷脂和28g吐温80一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去800离子水中，加入速度控制为10ml/min，进行搅拌，搅拌速度为300rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为400W，每次循环超声处理时间为6s，间隔时间为3s，总循环次数为50次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为12小时，期间更换外液3次；
步骤5、冻干保护剂选用甘露醇，将称取的36g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为200rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-70℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为12小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例所获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能，本实施例所得纳米制剂，平均粒径为173±14.4nm，包裹率为96.3±5.1％。
实施例2
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 5％，包裹材料30％，表面活性剂29％，冻干保护剂36％；
步骤2、将5g ABT-199溶解于100ml乙醇中，包裹材料选用卵磷脂，表面活性剂选用泊洛沙姆188，将30g卵磷脂和29g泊洛沙姆188一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1000离子水中，加入速度控制为12ml/min，进行搅拌，搅拌速度为400rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为600W，每次循环超声处理时间为7s，间隔时间为3s，总循环次数为60次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为16小时，期间更换外液4次；
步骤5、冻干保护剂选用甘露醇，将称取的36g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为300rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-75℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为14小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例所获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为178±17.1nm，包裹率为85.8±6.2％。
实施例3
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 6％，包裹材料34％，表面活性剂22％，冻干保护剂38％；
步骤2、将6g ABT-199溶解于120ml乙醇中，包裹材料选用胆固醇，表面活性剂选用聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA，将34g胆固醇和22g聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1200离子水中，加入速度控制为8ml/min，进行搅拌，搅拌速度为500rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为800W，每次循环超声处理时间为8s，间隔时间为4s，总循环次数为80次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为24小时，期间更换外液5次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖，将称取的38g葡萄糖缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为400rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为24小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为178±13.8nm，包裹率为93±2.7％。
实施例4
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 7％，包裹材料35％，表面活性剂20％，冻干保护剂38％；
步骤2、将7g ABT-199溶解于140ml乙醇中，包裹材料选用大豆磷脂和卵磷脂的混合物，表面活性剂选用吐温-80，将15g大豆磷脂、20g卵磷脂和20g吐温80一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1400离子水中，加入速度控制为7ml/min，进行搅拌，搅拌速度为450rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为700W，每次循环超声处理时间为7s，间隔时间为4s，总循环次数为90次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为20小时，期间更换外液5次；
步骤5、冻干保护剂选用甘露醇和葡萄糖的混合物，将称取的20g甘露醇和18g葡萄糖缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为400rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-70℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为18小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为181±13.7nm，包裹率为91±3.6％。
实施例5
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 8％，包裹材料40％，表面活性剂21％，冻干保护剂31％；
步骤2、将8g ABT-199溶解于160ml乙醇中，包裹材料选用大豆磷脂和卵磷脂的混合物，表面活性剂选用吐温-80和泊洛沙姆188的混合物，将20g大豆磷脂、20g卵磷脂和11g吐温-80、10g泊洛沙姆188一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1600离子水中，加入速度控制为8ml/min，进行搅拌，搅拌速度为500rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为8400W，每次循环超声处理时间为8s，间隔时间为4s，总循环次数为100次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为20小时，期间更换外液5次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖和甘露醇的混合物，将称取的20g葡萄糖和11g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为350rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-75℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为24小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为176±17.8nm，包裹率为93±6.4％。
实施例6
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 7％，包裹材料38％，表面活性剂26％，冻干保护剂29％；
步骤2、将7g ABT-199溶解于140ml乙醇中，包裹材料选用卵磷脂和胆固醇的混合物，表面活性剂选用吐温-80和聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA的混合物，将19g卵磷脂、19g胆固醇、10g吐温-80及16g聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1400离子水中，加入速度控制为6ml/min，进行搅拌，搅拌速度为350rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为600W，每次循环超声处理时间为6s，间隔时间为3s，总循环次数为80次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为18小时，期间更换外液4次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖，将称取的29g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为250rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-72℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为15小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为179±16.2nm，包裹率为95±5.2％。
实施例7
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 6％，包裹材料35％，表面活性剂24％，冻干保护剂35％；
步骤2、将6g ABT-199溶解于120ml乙醇中，包裹材料选用大豆磷脂和胆固醇的混合物，表面活性剂选用泊洛沙姆188及聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA的混合物，将17g大豆磷脂、18g胆固醇、12g泊洛沙姆188及12g聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1200离子水中，加入速度控制为5ml/min，进行搅拌，搅拌速度为300rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为500W，每次循环超声处理时间为7s，间隔时间为4s，总循环次数为75次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为18小时，期间更换外液4次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖和甘露醇的混合物，将称取的15g葡萄糖和20g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为360rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为20小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为183±11.9nm，包裹率为92±3.3％。
实施例8
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 5％，包裹材料33％，表面活性剂25％，冻干保护剂37％；
步骤2、将5g ABT-199溶解于100ml乙醇中，包裹材料选用大豆磷脂、卵磷脂、胆固醇的混合物，表面活性剂吐温-80、泊洛沙姆188及聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA的混合物，将11g大豆磷脂、11g卵磷脂、11g胆固醇、10g吐温-80、10g泊洛沙姆188及5g聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去1000离子水中，加入速度控制为10ml/min，进行搅拌，搅拌速度为500rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为600W，每次循环超声处理时间为6s，间隔时间为4s，总循环次数为60次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为14小时，期间更换外液3次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖和甘露醇的混合物，将称取的17g葡萄糖和20g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为300rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为18小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例所获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为188±15.6nm，包裹率为94±2.9％。
实施例9
一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 4％，包裹材料29％，表面活性剂34％，冻干保护剂33％；
步骤2、将4g ABT-199溶解于80ml乙醇中，包裹材料选用胆固醇，表面活性剂选用聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA，将29g胆固醇和34g聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去800离子水中，加入速度控制为4ml/min，进行搅拌，搅拌速度为400rpm，之后进行超声处理，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为500W，每次循环超声处理时间为6s，间隔时间为3s，总循环次数为80次，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质，透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为14小时，期间更换外液4次；
步骤5、冻干保护剂选用葡萄糖，将称取的33g甘露醇缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，搅拌速度为300rpm，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉，其中，预冻在-70℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为15小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
将本实施例所获得的部分纳米制剂干粉用灭菌纯水溶解，利用马尔文粒度仪测定其粒径，分析其性能。本实施例所得纳米制剂，平均粒径为176±16.1nm，包裹率为95±2.1％。
对实施例1所制备的ABT-199纳米乳剂的粒径分布及稳定性进行测定，并通过透射电子显微镜观察其形态特征。所得结果表明：该纳米制剂具形态特征均一，单分散性良好，稳定性高，药物包裹能力强，参见图2、图3及图4。从释放性实验结果可以看出，纳米制剂具有很好的缓释效果，可保证ABT-199在体循环内持续释放，参见图5(注：由于ABT-199不溶于水，无法直接从外液测得，所以释放测定是根据透析袋内液通过冷冻干燥重溶后测得的)。
前期预实验发现，单独使用磷脂或其他天然乳化剂效果较差，首先粒径过大，放置后絮凝沉淀明显，加大量可保证一定程度的稳定，但是干燥后再分散效果非常差。直接使用非离子型表面活性剂，如吐温80等效果要强于天然乳化剂，但是用量依然非常大，因为低浓度也无法形成稳定的ABT-199纳米乳剂，而过高的表面活性剂剂量在体内会引起溶血的危险。只用单一组分另一个重要的问题是产品重复性差，不能对制剂工艺进行质量控制。而本发明所使用的多种包材和表面活性剂混合使用可有效克服ABT-199纳米乳剂制备中存在的不足。中间所使用的超声乳化法，在保证产品质量的情况下，免于使用高压匀浆机等大型设备，可有效降低工艺操作难度，虽有不少相关的技术方案被公布，然而经过一系列预备实验发现，直接参考其他相关文件的工艺参数无法获得所需的纳米乳。本发明依托前期经验，通过大量实验对试剂配比，制备工艺及辅料使用等关键参数进行反复测试修改，克服了其在制备过程中存在的稳定性不足和重复性较差的缺点，最终获得最优的制备工艺。保证了制剂的质量控制。

Claims (10)

1.一种ABT-199纳米乳分散剂，其特征在于，按质量百分比由以下原料的有效组分组成：ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％，以上各组分的质量百分比之和为100％。
2.根据权利要求1所述的一种ABT-199纳米乳分散剂，其特征在于，所述包裹材料为大豆磷脂、卵磷脂和胆固醇中的其中一种或多种的混合物。
3.根据权利要求1所述的一种ABT-199纳米乳分散剂，其特征在于，所述表面活性剂为非离子型表面活性剂，包括吐温80、泊洛沙姆188、聚乙二醇-聚乳酸PEG-PLGA中的其中一种或者多种的混合物。
4.根据权利要求1所述的一种ABT-199纳米乳分散剂，其特征在于，所述冻干保护剂为甘露醇、葡萄糖中的其中一种或者两种的混合物。
5.一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1、称量原料：按质量百分比称取ABT-199 4％～8％，包裹材料28％～40％，表面活性剂20％～34％，冻干保护剂29％～38％；
步骤2、将ABT-199溶解于乙醇中，再将包裹材料和表面活性剂一起混合加入乙醇溶液中，待充分溶解后，过滤除去杂质，获得混合溶液；
步骤3、将步骤2得到的混合溶液缓慢加入到去离子水中，进行搅拌，之后进行超声处理，处理过程中一直保持冰浴，获得纳米乳剂；
步骤4、将步骤3获得的纳米乳剂进行透析，除去分散液中的乙醇和其他可溶性杂质；
步骤5、将称取的冻干保护剂缓慢加入步骤4得到的快速搅拌状态下的纳米乳剂中，待完全溶解之后过滤去除其他非可溶性杂质及微生物，获得纳米乳剂；
步骤6、将步骤5得到的纳米乳剂等量分装，然后预冻、干燥、去除水分获得最终纳米制剂干粉。
6.根据权利要求5所述的一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2中ABT-199与乙醇的体积比为1：20，过滤采用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜进行。
7.根据权利要求5所述的一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3中混合溶液与去离子水的体积比为1:10，加入速度控制为10～20ml/min，搅拌速度为300-500rpm，超声处理利用探头式超声破碎仪，功率为400～800W，每次循环超声处理时间为6～8s，间隔时间为3～4s，总循环次数为50～100次。
8.根据权利要求5所述的一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4中透析具体为：将纳米乳剂装入截留分子量为100kDa的透析袋内，以去离子水为外液，透析时间为12～24小时，期间更换外液3～5次。
9.根据权利要求5所述的一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，所述步骤5中搅拌速度为200～400rpm，过滤利用孔径为0.22μm的无菌水溶性滤膜。
10.根据权利要求5所述的一种ABT-199纳米乳分散剂的制备方法，其特征在于，所述步骤6中预冻在-70～-80℃超低温度下进行，使用异丙醇程序降温盒，降温速度为1℃/分钟，预冻总时间为12～24小时，干燥利用冷冻干燥机，控制压力低于0.1帕斯卡。
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