CN108026164A - 通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链 - Google Patents

通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链 Download PDF

Info

Publication number
CN108026164A
CN108026164A CN201680055665.XA CN201680055665A CN108026164A CN 108026164 A CN108026164 A CN 108026164A CN 201680055665 A CN201680055665 A CN 201680055665A CN 108026164 A CN108026164 A CN 108026164A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
light chain
immunoglobulin
mass
free
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680055665.XA
Other languages
English (en)
Inventor
D·R·巴尼奇
D·L·穆雷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mayo Foundation for Medical Education and Research
Original Assignee
Mayo Foundation for Medical Education and Research
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mayo Foundation for Medical Education and Research filed Critical Mayo Foundation for Medical Education and Research
Publication of CN108026164A publication Critical patent/CN108026164A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/6857—Antibody fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7047—Fibrils-Filaments-Plaque formation

Abstract

本文涉及使用质谱鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法。例如，本文涉及用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法，包括(a)提供样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(c)鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链的存在。

Description

通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链
相关申请的交叉参考
本申请要求2015年9月24日提交的美国临时申请序列号62/232,182的优先权，该文的全部内容通过引用纳入本文。
技术领域
本文涉及使用质谱鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法。
背景技术
免疫球蛋白(Ig)具有两重对称性，每个完整Ig包含两个重链和两个轻链。根据它们在C末端恒定区的氨基酸序列，轻链被细分为两种主要类型(κ和λ)。浆细胞负责合成重链和轻链，产生完整的Ig。
人免疫球蛋白轻链的氨基酸序列由三个区域组成：N-末端V区(对于κ约107个氨基酸和对于λ约110个氨基酸)，J区(12个氨基酸)和C-末端C区(106个氨基酸)。每个区域从仅在B细胞中表达的基因的特定组翻译而来，所述B细胞产生和分泌轻链作为完整免疫球蛋白的一部分或作为游离轻链。B-细胞还能够通过体细胞超突变过程随机突变轻链的V和J区域基因，导致大量不同的基因组合(仅对于κ约为1.3×103)(参见例如Lefranc,MP.ColdSpring Harb Protoc 2011；2011:595-603)。由于轻链V和J区基因序列是随机产生的，所以中心极限定理(Mukhopadhyay,N和Chattopadhyay,B.Sequential Anal 2012；31:265-77)预测表达的轻链库(repertoire)的氨基酸序列应具有正态分布的分子量概况。
发明概述
本文提供了用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法。该方法包括(a)提供样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；并鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链的存在。
在一些实施方式中，怀疑样品包含免疫球蛋白游离轻链。
在一些实施方式中，一种或多种免疫球蛋白游离轻链选自游离κ轻链和游离λ轻链及其混合物。例如，免疫球蛋白游离轻链可以是游离κ轻链。另外，该方法可以包括鉴定至少两个游离κ轻链。在一些实施方式中，免疫球蛋白游离轻链是游离的λ轻链。例如，该方法可以包括鉴定至少两个游离λ轻链。
在一些实施方式中，所述一种或多种免疫球蛋白游离轻链包括糖基化免疫球蛋白游离轻链，半胱氨酸化免疫球蛋白游离轻链和谷胱甘肽化免疫球蛋白游离轻链中的至少一种。
在一些实施方式中，鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链发生在多克隆背景存在下。
在一些实施方式中，该方法还包括测量样品中一种或多种免疫球蛋白游离轻链的浓度。
在一些实施方式中，当测量样品中至少一种免疫球蛋白游离轻链的浓度5至15次时，所述方法具有小于约15％的峰面积百分比变化。例如，当测量样品中至少一种免疫球蛋白游离轻链的浓度5至15次时，所述方法可具有小于约10％的峰面积百分比变化。
在一些实施方式中，该方法还包括鉴定至少一种免疫球蛋白游离轻链二聚体。
在一些实施方式中，该方法还包括在使样品经历质谱技术之前使样品与还原剂接触。还原剂可选自二硫苏糖醇(DTT)，还原型谷胱甘肽，β-巯基乙醇，三(2-羧乙基)膦盐酸盐，半胱氨酸，2-巯基乙胺，3-巯基丙酸及其混合物。在一些实施方式中，还原剂是二硫苏糖醇。
在一些实施方式中，该方法不包括使样品与还原剂接触。
在一些实施方式中，该方法不包括纯化样品。
在一些实施方式中，质谱技术是LC-MS/MS。LC-MS/MS技术可以包括四极飞行时间质谱仪。在一些实施方式中，质谱技术是自顶向下(top-down)质谱技术。
在一些实施方式中，样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血。
在一些实施方式中，样品来自单一对象并且该方法还包括诊断对象中的病症，其中该病症是浆细胞恶病质(dyscrasia)。例如，样品可以来自单个对象，并且该方法可以进一步包括诊断多发性骨髓瘤或轻链淀粉样变性病中的至少一种。
在一些实施方式中，所述样品来自对象并且所述方法还包括诊断所述对象中的病症，其中所述病症是下述的至少一种：多发性骨髓瘤，意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉样蛋白轻链淀粉样变性，或非分泌性骨髓瘤。
在一些实施方式中，样品来自对象，并且该方法还包括区分对象中的自身免疫应答与单克隆丙种球蛋白病。
本文还提供了用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法，其包括(a)提供样品；(b)使样品与还原剂接触；(c)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(d)鉴定是否存在一种或多种免疫球蛋白游离轻链。
另外，本文提供了用于诊断对象病症的方法。该方法包括(a)提供来自对象的样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(c)鉴定是否存在一种或多种免疫球蛋白游离轻链。
在一些实施方式中，病症选自：多发性骨髓瘤，意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞性白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉状蛋白轻链淀粉样变性，非分泌性骨髓瘤及其组合。
在一些实施方式中，样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血。
在一些实施方式中，在将对象诊断为患有病症之后，该方法还包括向对象给予治疗有效量的治疗剂以治疗该病症。治疗剂可以包括下述的一种或多种：苯丁酸氮芥，氟达拉滨，环磷酰胺，利妥昔单抗，苯达莫司汀，卡非佐米，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，苯丁酸氮芥，阿托珠单抗，奥法木单抗，喷司他丁，阿仑单抗，氟达拉滨，硼替佐米，沙利度胺，地塞米松，多柔比星，依鲁替尼，美法仑，阿霉素，来那度胺，泊马多胺(pomalidomide)，双膦酸盐，葡糖胺聚糖，嘌呤核苷类似物，和单克隆抗体。
在一些实施方式中，所述病症是意义未明的单克隆丙种球蛋白病，且所述治疗剂是双膦酸盐。
在一些实施方式中，所述病症是B细胞慢性淋巴细胞白血病并且治疗剂选自：苯丁酸氮芥，氟达拉滨，环磷酰胺，利妥昔单抗，苯达莫司汀，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，苯丁酸氮芥，阿托珠单抗或奥法木单抗，喷司他丁，阿仑单抗，氟达拉滨，单克隆抗体及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症并且治疗剂选自硼替佐米，沙利度胺，氟达拉滨，地塞米松，苯丁酸氮芥，利妥昔单抗，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，单克隆抗体，嘌呤核苷类似物，依鲁替尼及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是淀粉样蛋白轻链淀粉样变性并且所述治疗剂选自美法仑，泼尼松，长春新碱，阿霉素，地塞米松，苯达莫司汀，沙利度胺，环磷酰胺，来那度胺，泊马多胺，硼替佐米，糖胺聚糖及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是非分泌性骨髓瘤，并且所述治疗剂选自沙利度胺，硼替佐米，来那度胺，卡非佐米，泊马度胺及其组合。
而且，本文提供了用于诊断对象中的单克隆丙种球蛋白病的方法。其中包括：(a)提供来自对象的样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(c)基于一种或多种游离λ免疫球蛋白轻链或一种或多种游离κ免疫球蛋白轻链的鉴定来诊断对象中的单克隆丙种球蛋白病。
在一些实施方式中，该方法还包括在使样品经历质谱技术之前使包含免疫球蛋白游离轻链的样品与还原剂接触。
另外，本文提供了用于监测对象中单克隆丙种球蛋白病的治疗的方法。所述方法包括：(a)提供在治疗之前获得的对象的第一样品；(b)提供在治疗期间或之后获得的对象的第二样品；(c)使第一和第二样品经历质谱技术以获得第一和第二样品的质谱图；(d)确定第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度；和(e)比较第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度。
在一些实施方式中，该方法还包括在使第一和第二样品经历质谱技术之前使包含免疫球蛋白游离轻链的第一和第二样品与还原剂接触。
除非另外定义，否则，本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的同样含义。本文所述方法和材料用于本发明；本领域已知的其他合适的方法和材料也可使用。材料、方法和实施例都仅是说明性的，并不意在构成限制。本文中述及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献都通过引用全文纳入本文。在抵触的情况下，以本说明书(包括定义在内)为准。
从下文的详述和附图，以及所附权利要求中能够很容易地了解本发明的其他特征和优点。
附图说明
图1显示掺有(修美乐)的正常血清的LC-MS/MS光谱(非解卷积，图1A，和解卷积，图1B)。图1A显示掺有的正常血清的非解卷积LC-MS/MS谱图。图1B显示掺有的正常血清的解卷积LC-MS/MS谱图。
图2显示掺有κ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS谱图。图2A显示掺有κ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS谱图的保留时间。图2B显示掺有κ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS图谱的加和谱图。
图3显示掺有λ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS谱图。图3A显示掺有的正常血清的LC-MS/MS谱图。图3B显示掺有λ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS谱图。
图4显示掺有λ游离轻链和的正常血清的LC-MS/MS谱图，并显示免疫球蛋白游离轻链二聚体的存在。图4A显示掺有λ游离轻链和的正常血清的加和谱图。图4B显示掺有λ游离轻链和的正常血清的谱图，其已解卷积以显示分子量。
图5显示连续稀释的κ免疫球蛋白游离轻链和λ游离轻链的LC-MS/MS结果。
图6显示已从被诊断患有意义未明的单克隆丙种球蛋白病的患者获得的血清(已用二硫苏糖醇处理(图6A)或未用二硫苏糖醇处理(图6B))的LC-MS/MS谱图。
图7显示来自诊断患有意义未明的单克隆丙种球蛋白病的患者的血清的自顶向下(top down)质谱图。图7A显示了取自诊断患有意义未明的单克隆丙种球蛋白病的患者的未经二硫苏糖醇处理的血清的自顶向下质谱图。图7B显示了取自诊断患有意义未明的单克隆丙种球蛋白病的患者的经二硫苏糖醇处理的血清的自顶向下质谱图。
图8显示诊断为郁积型骨髓瘤(smoldering myeloma)的患者的血清的LC-MS/MS谱图。图8A显示取自诊断为郁积型骨髓瘤的患者的血清的加和质谱图。图8B显示取自诊断患有郁积型骨髓瘤的患者的血清的谱图，其已经解卷积以显示分子量。
图9显示掺有阿达木单抗(500mg/L)和纯化的κFLC(100mg/L)的汇集血清的质谱图。谱图如下：(i)图9A显示了来自κFLC单体的多电荷离子以及由质谱图解卷积所确定的其分子量和保留时间；(ii)图9B显示来自κFLC二聚体的多电荷离子以及由质谱图解卷积所确定的其分子量和保留时间；和(iii)图9C显示来自阿达木单抗(重链和轻链完整)的多电荷离子以及由质谱图解卷积所确定的其分子量和保留时间。
图10显示使用MELONTM GEL富集后血清的总离子色谱图(TIC)。图10A来自健康供体的对照血清。图10B来自AL患者。经编号的峰代表来自高丰度蛋白质的信号，这些蛋白质没有被MELONTM GEL完全去除，推测它们是1-(α-1-抗胰蛋白酶)，2(转铁蛋白)和3未知的61kDa蛋白质。推测来自AL患者血清中的FLC二聚体的信号在TIC B中标记。
图11显示在图10中显示的FLC二聚体峰的保留时间上加和谱图后观察到的质谱图。将多电荷离子解卷积以确定插图中显示的二聚体的分子量。
图12显示FLC单体的质谱以及显示在质谱图解卷积后发现的分子量的插图。该谱图还显示了与λ单体共同洗脱的来自AlAT的多电荷离子。
图13显示来自相同AL患者的MELONTM GEL富集的血清样品的总离子色谱图(TIC)，其用DTT(黑色痕迹)还原和非还原(无DTT)红色痕迹；与图10B相同。TIC显示，由于在质谱仪中观察到的由多克隆轻链的响应随着他们从其相应的重链被还原而显著增加，在非还原样品中的单克隆FLC的响应不如还原的样品中那样显著。
图14显示质谱图，显示还原形式的来自AL病人血清的FLCλ单体多电荷离子。插图显示解卷积后的还原的单克隆λ轻链的分子量。质谱图还显示在m/z＝2100处多克隆λ和κ+11电荷状态，在λ多克隆分布中清楚地观察到的λ单克隆轻链。
图15显示自顶向下的MS碎片离子质谱图，其显示来自非还原形式的半胱氨酸化的κFLC(顶部)和还原形式的非半胱氨酸化κ轻链(底部)的C端y离子。用箭头标记y7+半胱氨酸化碎片离子和y7碎片离子以显示由于C端半胱氨酸残基的半胱氨酸化引起的质量差异。
图16显示AL患者FLC的线性回归分析。由比浊法测量的FLC浓度针对质谱仪中观察到的FLC的峰面积绘制图。就κ和λFLC列出了R2相关系数，去除了异常值。
图17显示质谱图，显示来自包括糖基化FLC的患者样品(顶部)的FLCλ单体多电荷离子。插图显示解卷积后糖基化轻链的分子量。
图18显示自顶向下的MS碎片离子质谱图，显示FLC糖基化的检测和确认。
具体实施方式
正常的浆细胞产生过量的κ和轻链，将其分泌到血清中(游离轻链，FLC)。人类产生约两倍于λ的κ轻链。每个FLC分子含有大约220个氨基酸，每个分子由含有可变(VL)区的N端结构域和含有恒定(CL)区的C端结构域组成。本文描述的这种方法利用VL区的独特质量作为浆细胞克隆性的标志。
浆细胞免疫球蛋白的生产涉及轻链(LC)与重链(HC)通过二硫键的匹配。然后HC-LC二聚体通过另外的二硫键与另一HC-LC二聚体偶联以形成从细胞分泌的免疫球蛋白。在正常免疫球蛋白产生期间，浆细胞产生分泌到循环中的过量多克隆游离轻链(FLC)，并且在健康个体中，这些过量的FLC在肾中被重新吸收并代谢。然而，具有血浆增殖性疾病的个体具有克隆浆细胞群，其将单克隆FLC以比正常多克隆LC库更高的浓度分泌进入循环。血清FLC测量的临床应用用于单克隆丙种球蛋白病患者。在这些疾病中，与正常多克隆背景相比，一个或多个失调的或恶性的浆细胞克隆过量生成Ig和FLC，其可以通过倾斜的κ/λFLC比例检测或通过对超出多克隆背景的Ig进行定量来检测。
目前在临床医学中，通过依赖特异性抗体的免疫测定来测量FLC比率，所述特异性抗体结合FLC中的抗原位点。然而，目前的方法对于单独的κ和λFLC并不是特异性的，因此这些组的定量包括多克隆背景。因此，必须从κ/λ比例推断单克隆性。不幸的是，对κ/λ比例的依赖可能会受到患者中发生的其他情况的影响。例如，患有自身免疫疾病的患者可能具有与单克隆丙种球蛋白病无关或除其之外的倾斜的多克隆κ和λ比例。
本文描述的方法利用高质量准确度来测量血清、尿液、脑脊髓液(CSF)和其他体液中的FLC。质量准确度允许直接定量每个κ和λ轻链。因此，仅依赖κ和λ比例就不需要推断单克隆性。
本文提供了用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法。该方法包括(a)提供样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；并鉴定是否存在一种或多种免疫球蛋白游离轻链。
如本文所用，术语“免疫球蛋白游离轻链”是指从浆细胞分泌入血清的过量κ和λ轻链(游离轻链，FLC)。免疫球蛋白游离轻链也可以指免疫球蛋白游离轻链的二聚体。
在一些实施方式中，怀疑样品包含免疫球蛋白游离轻链。
在一些实施方式中，一种或多种免疫球蛋白游离轻链选自游离κ轻链，游离λ轻链及其混合物。例如，免疫球蛋白游离轻链可以是游离κ轻链。另外，该方法可以包括鉴定至少两种游离κ轻链(即具有不同质量或质荷比的κ轻链)。在一些实施方式中，免疫球蛋白游离轻链是游离λ轻链。另外，该方法可以包括鉴定至少两种游离λ轻链(即具有不同质量或质荷比的λ轻链)。
在一些实施方式中，所述一种或多种免疫球蛋白游离轻链包括糖基化免疫球蛋白游离轻链，半胱氨酸化免疫球蛋白游离轻链和谷胱甘肽化免疫球蛋白游离轻链中的至少一种。例如，一种或多种免疫球蛋白游离轻链可以包括糖基化的免疫球蛋白游离轻链和半胱氨酸化的免疫球蛋白游离轻链中的至少一种。基于所观察到的免疫球蛋白游离轻链的质量与所计算的免疫球蛋白游离轻链的质量之间的差异可以鉴定半胱氨酸化的免疫球蛋白游离轻链。例如，观察到的免疫球蛋白游离轻链的质量与计算的免疫球蛋白游离轻链的质量之间约119道尔顿(Da)的差异可以指示存在半胱氨酸化的免疫球蛋白游离轻链。类似地，如果所观察到的免疫球蛋白游离轻链的质量与所计算的免疫球蛋白游离轻链的质量之间的差异可以鉴定谷胱甘肽化的免疫球蛋白游离轻链。例如，观察到的免疫球蛋白游离轻链质量与计算的免疫球蛋白游离轻链质量之间的差异为约305Da，其等于谷胱甘肽加入半胱氨酸残基的质量，可以指示存在谷胱甘肽化的免疫球蛋白游离轻链。
使用本文描述的方法的含有糖基化免疫球蛋白游离轻链的样品的示例性扫描显示在图17和18中。
在一些实施方式中，鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链发生在多克隆背景存在下。
在一些实施方式中，该方法还包括测量样品中一种或多种免疫球蛋白游离轻链的浓度。例如，一种或多种免疫球蛋白游离轻链的浓度可以通过检查所得质谱图的峰面积并将其与标准化曲线进行比较来测量。在一些实施方式中，可以将内部样品包含在样品中或添加到样品中。
在一些实施方式中，当测量样品中至少一种免疫球蛋白游离轻链的浓度5至15次时，所述方法具有小于约15％的峰面积百分比变化。例如，当测量样品中至少一种免疫球蛋白游离轻链的浓度5至15次时，所述方法可具有小于约10％的峰面积百分比变化。
在一些实施例中，该方法还包括鉴定至少一种免疫球蛋白游离轻链二聚体。例如，κ游离轻链二聚体或λ游离轻链二聚体。
在一些实施方式中，该方法还包括在使样品经历质谱技术之前使样品与还原剂接触。免疫球蛋白轻链可以通过切割轻链和重链之间的二硫键而与免疫球蛋白重链解偶联。另外，还原剂可通过还原二硫键将免疫球蛋白游离轻链二聚体解偶联。还原剂可选自二硫苏糖醇(DTT)，还原型谷胱甘肽，β-巯基乙醇，三(2-羧乙基)膦盐酸盐，半胱氨酸，2-巯基乙胺，3-巯基丙酸及其混合物。在一些实施方式中，还原剂是二硫苏糖醇。
在一些实施方式中，该方法不包括使样品与还原剂接触。
在一些实施方式中，该方法不包括在使样品经历质谱技术之前纯化样品。例如，在一些实施方式中，该方法不包括在使样品经历质谱技术之前对样品进行免疫纯化。类似地，在一些实施方式中，该方法不包括在使样品经历质谱技术之前对样品进行色谱分析。在一些实施方式中，所述方法不包括在使样品经历质谱技术之前纯化样品(例如免疫纯化)，但包括在将样品经历质谱技术之前离心样品。在一些实施方式中，该方法不包括在将样品经历质谱技术之前进行免疫纯化。在一些实施方式中，该方法包括用抗体(例如，免疫球蛋白游离轻链的特异性抗体)进行免疫纯化。在一些实施方式中，该方法包括使用MELONTM GEL纯化。
在一些实施方式中，在使样品经历质谱技术之前，可以通过亲和纯化(例如MELONTMGEL纯化，例如将样品与MELONTM GEL珠混合)来纯化样品。此外，该方法可以包括在使样品经历质谱分析技术之前使样品与非还原性缓冲液(例如碳酸氢铵)接触。
在一些实施方式中，质谱技术是LC-MS/MS。LC-MS/MS技术可以包括四极飞行时间质谱仪。四极质量分析仪(Q)由四个圆柱形棒组成，彼此平行。在四极质谱仪中，四极是用于根据样品离子的质荷比(m/z)而过滤样品离子的仪器的组件。飞行时间(TOF)分析仪使用电场通过相同的电势加速离子，然后测量它们到达检测器的时间。如果粒子都具有相同的电荷，那么动能是相同的，并且它们的速度仅取决于它们的质量。较轻的离子首先到达检测器。可以使用任何ESI-Q-TOF质谱仪，例如ABSciex TripleTOF 5600四极飞行时间质谱仪。可以分析质谱图(例如多电荷完整轻链或重链多肽离子的质谱)以在链的预期的适当质量/电荷下鉴定一个或多个峰。例如，对于轻链，峰可以在约600–2700m/z,700–2400m/z,800–2100m/z,900–1800m/z,1000–1600m/z,或约1000–1500m/z处发生。在一些实施方式中，峰可以在约600–2500m/z处发生。可以在250-2000的m/z范围内检测碎片离子峰。在一些实施方式中，+11和+18电荷状态中的至少一个用于免疫球蛋白游离轻链单体。例如，就免疫球蛋白游离轻链单体使用+18电荷状态产生的提取离子色谱图(EIC)的峰面积可用于计算％CV值。在一些实施方式中，+33和+36电荷状态中的至少一个用于免疫球蛋白游离轻链二聚体。例如，就免疫球蛋白游离轻链二聚体使用+36电荷状态产生的提取离子色谱图(EIC)的峰面积可用于计算％CV值。
在一些实施方式中，源条件包括约4500伏特(V)至约6500V或约5000V至6000V或约4500V，5000V，5500V，6000V或约6500V的IS(离子喷雾电压)。例如，源条件可以包括约5500V的IS。
在一些实施方式中，源条件包括约350℃至约650℃，约400℃至约600℃，约450℃至约550℃，或约475℃至约525℃，或约350℃，400℃，450℃，475℃，500℃，525℃，550℃，600℃或约650℃的温度。例如，源条件可以包括约500℃的温度。
在一些实施方式中，源条件包括约35至约55，或约40至约50，或约35,40,45,50或约55的帘气流(curtain gas flow)(CUR)。例如，源条件可以包括约45的帘压力(CUR)。
在一些实施方式中，源条件包括约25至约45或约30至约40，或约25,30,35,40或约45的离子源气体1(GS1)。例如，源条件可以包括约35的离子源气体1(GS1)。
在一些实施方式中，源条件包括约20至约40或约25至约35，或约20,25,30,35或约40的离子源气体2(GS2)。例如，源条件可以包括约30的离子源气体2(GS2)。
在一些实施方式中，源条件包括30±5,40±5,50±5,60±5或70 50±5的碰撞能量(CE)(例如，穿过碰撞室的电势降)。例如，源条件可以包括50±5的CE。
在一些实施方式中，源条件包括约5500的IS，约500℃的温度，约45psi的CUR，约35psi的GS1，约30psi的GS2和50±5的CE。
在一些实施方式中，质谱技术是自顶向下质谱技术。例如，当使用自顶向下质谱技术时，方法可以包括鉴定免疫球蛋白游离轻链的同种型。
在PCT/US2015/24379和PCT/US2014/022475中描述了其他质谱技术，各文献均全文纳入本文作参考。
在一些实施方式中，样品来自单一对象并且该方法还包括诊断对象中的病症，其中该病症是浆细胞恶病质。例如，样品可以来自单个对象，并且该方法可以进一步包括诊断多发性骨髓瘤或轻链淀粉样变性病中的至少一种。
在一些实施方式中，样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血样品。
在一些实施方式中，所述样品来自单一对象并且所述方法还包括诊断所述对象中的病症，其中所述病症是下述的至少一种：意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉样蛋白轻链淀粉样变性，或非分泌性骨髓瘤。
在正常血清样品中，游离κ轻链可以具有3.3-19.4mg/L的范围，并且游离λ轻链可以具有5.7-26.3mg/L的范围。参见例如Clin Chem.2002 9月；48(9)1437-44页。
在一些实施方式中，样品来自单一对象，并且该方法还包括区分对象中的自身免疫应答与单克隆丙种球蛋白病。
本文还提供了用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法，其包括(a)提供样品；(b)使样品与还原剂接触；(c)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(d)鉴定是否存在一种或多种免疫球蛋白游离轻链。
另外，本文提供了用于诊断对象病症的方法。该方法包括(a)提供来自对象的样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(c)鉴定是否存在一种或多种免疫球蛋白游离轻链。
在一些实施方式中，所述病症是单克隆丙种球蛋白病。在一些实施方式中，病症选自：多发性骨髓瘤，意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞性白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉状蛋白轻链淀粉样变性，非分泌性骨髓瘤及其组合。
在一些实施方式中，样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血样品。
在一些实施方式中，在将对象诊断为患有病症之后，该方法还包括向对象给予(例如治疗有效量的)治疗剂以治疗该病症。治疗剂可以包括下述的一种或多种：苯丁酸氮芥，氟达拉滨，环磷酰胺，苯达莫司汀，卡非佐米，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，苯丁酸氮芥，喷司他丁，氟达拉滨，硼替佐米，沙利度胺，地塞米松，多柔比星，依鲁替尼，美法仑，阿霉素，来那度胺，泊马多胺，双膦酸盐，葡糖胺聚糖，嘌呤核苷类似物，和单克隆抗体(例如利妥昔单抗，阿托珠单抗和阿仑单抗)。
在一些实施方式中，所述病症是意义未明的单克隆丙种球蛋白病，且所述治疗剂是双膦酸盐。双膦酸盐的非限制性实例包括阿仑膦酸盐(例如 )，利塞膦酸盐(例如)，伊班膦酸盐(例如)和唑来膦酸(例如，)。
在一些实施方式中，所述病症是B细胞慢性淋巴细胞白血病并且所述治疗剂选自苯丁酸氮芥，氟达拉滨(例如)，环磷酰胺(例如)，苯达莫司汀，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱(例如)，泼尼松，苯丁酸氮芥，阿托珠单抗，奥法木单抗，喷司他丁(例如)，阿仑单抗(例如)，氟达拉滨，单克隆抗体(例如利妥昔单抗)及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症并且治疗剂选自硼替佐米，沙利度胺，氟达拉滨，地塞米松，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，单克隆抗体(例如利妥昔单抗)，嘌呤核苷类似物(例如克拉屈滨)，依鲁替尼及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是淀粉样蛋白轻链淀粉样变性并且所述治疗剂选自美法仑，泼尼松，长春新碱，阿霉素，地塞米松，苯达莫司汀，沙利度胺，环磷酰胺，来那度胺，泊马多胺，硼替佐米，糖胺聚糖(例如伊罗地塞(eprodisate))及其组合。
在一些实施方式中，所述病症是非分泌性骨髓瘤，并且所述治疗剂选自沙利度胺，硼替佐米，来那度胺，卡非佐米，泊马度胺及其组合。
在一些实施方式中，在将对象诊断为患有病症之后，方法还包括进行例如血浆交换或干细胞移植(例如自体外周血干细胞移植)的治疗。
在一些实施方式中，在将对象诊断为患有病症之后，方法还包括向对象给予治疗有效量的治疗剂以治疗该病症以及一种或多种血浆交换和干细胞移植。
而且，本文提供了用于诊断对象中的单克隆丙种球蛋白病的方法。所述方法包括：(a)提供来自对象的样品；(b)使样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和(c)基于一种或多种游离λ免疫球蛋白轻链或一种或多种游离κ免疫球蛋白轻链的鉴定来诊断对象中的单克隆丙种球蛋白病。
在一些实施方式中，该方法还包括在使样品经历质谱技术之前使包含免疫球蛋白游离轻链的样品与还原剂接触。
另外，本文提供了用于监测对象中单克隆丙种球蛋白病的治疗的方法。所述方法包括：(a)提供在治疗之前获得的对象的第一样品；(b)提供在治疗期间或之后获得的对象的第二样品；(c)使第一和第二样品经历质谱技术以获得第一和第二样品的质谱图；(d)确定第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度；和(e)比较第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度。治疗前获得的第一样品可以在任何治疗开始之前、在特定给药方案开始之前或单次给药之前获得。在监测治疗期间，鉴定的免疫球蛋白游离轻链的峰面积或峰高的减少可以表明治疗正在积极进展。同样，在监测治疗期间，鉴定的免疫球蛋白游离轻链的浓度降低可以表明治疗正在积极进展。在监测治疗期间，鉴定的免疫球蛋白游离轻链的峰面积或峰高的增加可以表明治疗剂的剂量应该增加。同样，监测治疗期间，鉴定的免疫球蛋白游离轻链的浓度增加可以表明治疗剂的剂量应该增加。
在一些实施方式中，该方法还包括在使第一和第二样品经历质谱技术之前使包含免疫球蛋白游离轻链的第一和第二样品与还原剂接触。
实施例
实施例1.在掺入的样品中检测κFLC。
使用正常汇集血清制成两个掺入的样品。样品A掺有0.5g/dL (单克隆IgGκ治疗性抗体)，而样品B掺有0.125g/dL的市售κ轻链和接下来，用450μL的MELONTM Gel缓冲液稀释50μL各掺入的血清并加入旋转柱并混合5分钟。
离心后，将2μL纯化的样品注入到1.0x 75mm Poroshell 300SB‐C3，5μm柱上，以25μL/分钟流动。在80％A/20％B下开始15分钟梯度，保持0.5分钟，在1分钟内渐变至70％A/30％B，然后在4分钟内渐变至60％A/40％B，然后在5分钟内渐变至5％A/95％B，保持2.5分钟，然后在1分钟内渐变至80％A/20％，然后在80％A/20％平衡1分钟。
在具有自动校准物输送系统(CDS)的Turbo V双离子源的ESI正模式下，在ABSciexTripleTOF 5600四极飞行时间质谱仪(ABSciex公司，加利福尼亚州沃汉)上收集谱图。源条件为：IS:5500,温度:500,CUR:45,GS1:35,GS2:30,CE:50±5。从m/z 600-2500采集TOF MS扫描，采集时间为100ms。从m/z 350-2000采集碎片离子扫描，采集时间为100ms。使用制造商提供的校准溶液，通过CDS每5次注射校准仪器。
得到的质量分布证明了该方法从完整单克隆检测游离κ轻链(FLC)而不依赖于κ/λFLC比例的能力。图1显示了仅掺有的正常血清的结果(未解卷积和解卷积)，并证明了检测到完整Ig。图2显示掺有κFLC和的正常血清的结果，并证明了方法在存在完整Ig时检测FLC的能力。
实施例2.在掺入的样品中检测κFLC。
使用正常汇集血清制成两个掺入的样品。样品A掺有0.5g/dL (单克隆IgGκ治疗性抗体)，而样品B掺有0.125g/dL的市售λ轻链和样品如实施例1所述经历分析程序。
得到的质量分布证明了该方法从完整单克隆检测游离λ轻链(FLC)而不依赖于κ/λFLC比例的能力。图3显示掺有λFLC和的正常血清的结果，并证明了在存在完整Ig时检测FLC的能力。在本实施例中，如图4所示，该方法不仅可以确认FLC的存在，而且还可以证明轻链是作为二聚体循环的。
实施例3.测量血清中的FLC量。
通过稀释掺有κ和λ游离轻链的正常人血清，制备κ和λFLC的连续稀释液。使用实施例中描述的程序进行游离轻链量的定量。图5显示FLC的峰面积与血清中FLC的浓度直接成正比。
实施例4.FLC测量的精度。
人血清中掺入0.125g/dL κFLC并使用实施例1中所述的程序重复测量12次。峰面积百分比变化被确定为8.8％。这种变化量在临床实践中是可以接受的。
实施例5.检测单克隆丙种球蛋白病患者的FLC。
使用实施例1中描述的程序对来自77岁的MGUS(意义未明的单克隆丙种球蛋白病)患者(A)的血清进行检查，该患者患有相关异常κ/λFLC比例为3.81(通过比浊法)的IgGκ单克隆丙种球蛋白病。来自相同患者的第二个样品用DTT(二硫苏糖醇)还原剂处理以在Ig分离和测量之前分离轻链和重链。
所得谱图显示在图6A和6B中，证明了κFLC具有和与完整IgGκ相关的κ克隆略微不同的质量。图7显示通过使用自顶向下质谱法，碎裂模式揭示每个离子的κ恒定区。
实施例6.
使用实施例1中所述的程序检查70岁的郁积型骨髓瘤患者(A)的血清，该患者患有相关异常κ/λFLC比例为0.483(通过比浊法)的IgGλ单克隆丙种球蛋白病。所得到的谱图如图8所示，证明了存在基于λ的多个克隆。检测多个FLC的能力对于这种方法来说是独特的。
实施例7
材料
血清样品：来自AL患者的15个血清样品在患者知情同意下获得，关联明尼苏达州罗彻斯特梅奥诊所的淀粉样蛋白生物库IRB方案521-93。来自AL患者的另外15个血清样品在患者知情同意下获得，与意大利帕维亚的附属圣马窦医院(IRCCS Policlinico SanMatteo)的淀粉样蛋白生物样品库(吉安帕奥罗(Giampaolo)，请填写IRB编号)相关。
试剂：碳酸氢铵，二硫苏糖醇(DTT)和甲酸购自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(密苏里州圣路易斯)。水、乙腈和2-丙醇购自霍尼韦尔伯迪克和杰克逊公司(Honeywell Burdick and Jackson)(密歇根州马斯基根)。
单克隆免疫球蛋白：治疗性单克隆免疫球蛋白阿达木单抗(Humira)购自雅培公司(Abbott Laboratories)(伊利诺伊州芝加哥)。λ和κ免疫球蛋白轻链标准品购自拜森实验室(Bethyl Laboratories)(德克萨斯州蒙哥马利)。该标准品是从患有多发性骨髓瘤的患者的尿液中纯化出来的，这些患者同意将其尿用作单克隆免疫球蛋白轻链标准的来源。使用结合位点(Binding Site)FLC比浊法测定来确认每个标准品的浓度。Bradwell AR,Carr-Smith HD,Mead GP,等“对血清和尿液中免疫球蛋白游离轻链的高灵敏度，自动化免疫测定(Highly sensitive,automated immunoassay for immunoglobulin free light chainsin serum and urine.)”Clinical chemistry.2001；47(4):673-680。
血清FLC制备：将20μL体积的血清于1.5mL微量离心管(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)，马萨诸塞州沃尔瑟姆)中与200μL MELONTM GEL珠浆液混合。在室温下将血清和珠在振荡器上混合5分钟，之后使珠沉降。将含有FLC的20μL MELONTM GEL上清液移出并与20μL的50mM碳酸氢铵混合，然后通过微LC-ESI-Q-TOF MS分析。还在用DTT还原后分析MELONTM GEL纯化的样品。在这种情况下，将20μL的MELONTM GEL上清液与20μL的50mM碳酸氢铵10μL的200mM DTT混合并且在55℃下还原15分钟，然后通过微LC-ESI-Q-TOFMS分析。
LC条件：使用Eksigent Ekspert 200微LC(加利福尼亚州都柏林)进行分离；流动相A为水+0.1％FA，流动相B为90％乙腈+10％2-丙醇+0.1％FA。将2μL注入到1.0x 75mmPoroshell 300SB‐C3，5μm柱上加热至60并以25μL/分钟流动。在80％A/20％B下开始25分钟梯度，保持1分钟，在1分钟内渐变至75％A/25％B，然后在10分钟内渐变至65％A/35％B，然后在4分钟内渐变至50％A/50％B，然后在2分钟内渐变至95％A/5％B，保持5分钟，然后在1分钟内渐变至80％A/20％，然后在80％A/20％平衡1分钟。
ESI-Q-TOF MS:在具有自动校准物输送系统的Turbo V双离子源的ESI正模式下，在ABSciex TripleTOF 5600四极飞行时间质谱仪(ABSciex公司，加利福尼亚州沃汉)上收集谱图。源条件为：IS:5500,温度:500,CUR:45,GS1:35,GS2:30,CE:50±5。从m/z 600-2500采集TOF MS扫描，采集时间为100ms。使用制造商提供的校准溶液，通过CDS每5次注射校准仪器。
MS数据分析：Analyst TF v1.6用于仪器控制。使用Analyst TF v1.6和PeakViewv1.2.0.3查看数据。通过Analyst TF公司提供的BioAnalys软件，使用多重带电离子峰质心计算平均分子量和用于定量的峰面积值。使用BioAnalyst中的Bayesian ProteinReconstruct软件包进行多重离子解卷积。使用以下设置：开始质量(Da)＝22,000,停止质量(Da)＝65,000Da,步进质量(Da)＝1,S/N阈值＝20,最小强度％＝0,迭代＝20,加合物:氢。所有质量均以平均分子量报道。
结果。
在正常血清中纯化的FLC和阿达木单抗作为模型系统
先前已经表明，治疗性mAb阿达木单抗作为模拟血清中单克隆免疫球蛋白的标准效果良好。在这里展示的实验组中，将阿达木单抗和纯化的κFLC掺入从健康个体汇集的血清中。图9显示了从掺有浓度为500mg/L的阿达木单抗和浓度为100mg/L的纯化的κFLC的混合血清获得的三个质谱图。标记A的质谱图通过在6.0至6.5分钟的保留时间内对质谱图进行加和而产生，并且清楚地显示m/z＝1,000至1,500Da之间的单体形式的κFLC的多电荷状态。还在m/z＝1,500以上观察到的其他多电荷离子的异质组。最丰富的离子与分子量为45,056.5Da的蛋白质相关，这可能是α-1-抗胰蛋白酶(AlAT)的最常见糖型。这些峰也在正常汇集血清中发现。标记B的质谱图通过在6.8至7.3分钟的保留时间内对质谱图进行加和而产生，并且清楚地显示m/z＝1,000至1,500Da之间的二聚体形式的κFLC。标记C的质谱图显示保留时间为7.4至8.0分钟时的完整阿达木单抗，其中来自mAb的多电荷离子位于m/z＝2,500至3,500Da之间。在m/z＝1,800至2,200之间观察到的其他多电荷离子具有79,551.9Da的计算分子量，并且可能是存在于没有κFLC的正常汇集血清中的转铁蛋白(Tf)。已知MELONTMGEL不会从血清中完全消耗转铁蛋白。方法的微LC-ESI-Q-TOF MS部分中的不精确性通过从掺入正常汇集血清中的100mg/LκFLC的相同孔进行20次重复注射来检查。对单体使用+18电荷状态(图9A，m/z＝1,316.78Da)和对二聚体使用+36电荷状态(图9B，m/z＝1,310.11Da)产生的提取离子色谱图(EIC)的峰面积用于计算％CV值。％CV是：对于单体为5.6，对于二聚体为3.5，对于二聚体与单体的比例为6.6。还制备连续稀释物(100,50,25,12.5,6.25.3.12)，从用正常血清稀释的掺入正常汇集血清中的100mg/LκFLC开始。使用EIC峰面积进行单体和二聚体的线性回归分析。连续稀释物的单体线性回归分析具有R2＝0.996，而二聚体线性回归分析具有R2＝0.993。单体检出量为6.25mg/L-100mg/L，二聚体检出量为3.12mg/L-100mg/L。图9中还列出了κFLC单体和二聚体以及阿达木单抗的分子量。通过将二聚体除以2并加上质子的质量而得到的单体的计算分子量为23,565.3Da。观察到的单体质量与计算的单体质量之间的质量差(23,684.3-23,565.3)等于119.0Da。该质量匹配半胱氨酸化的半胱氨酸残基的分子量。在向样品中加入DTT后，不再观察到二聚体，并且单体的分子量为23,565.3Da。根据掺入正常汇集血清中的100mg/L纯化的λFLC的相同孔的20次重复注射检查不精确性。在这些谱图中只观察到λFLC的二聚体。为了产生EIC，使用二聚体的+33电荷状态(m/z＝1,373.56Da)，并且发现来自重复注射的峰面积的％CV为6.9。
AL患者组比较
在证实使用MELONTM GEL可从血清中富集FLC后，检查了一组30例确诊为淀粉样变性病例的患者(来自帕维亚生物库的15例和来自梅约生物库的15例)。使用与模型FLC制备所述相同的方法，对所有患者样品的非还原形式(无DTT；存在FLC)和还原形式(有DTT；观察到所有轻链)进行检查。以下呈现针对具有已知λFLC的AL患者确定患者样品中的FLC和非FLC轻链的过程。
图10显示了来自非还原血清的总离子色谱图(TIC)的示例，其中正常血清TIC标记为A并且AL患者血清TIC标记为B。TIC具有标记为1、2和3的三个峰，推测分别是α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)，转铁蛋白(Trf)和未知的61kDa蛋白质。然而，来自AL患者的TIC在6.3分钟的保留时间显示在对照中未观察到的峰。图11显示了在该峰的保留时间内对质谱图加和之后观察到的质谱图。质谱图清楚地显示一系列带多个电荷的离子，插图显示了这些离子的解卷积谱图，计算出的分子量为45,388.4Da。假定这些离子是包含两种FLCλ单体的二聚体，所述单体各具有单体分子量22,699.2Da(45,388.4/2+1H(形成二聚体的还原半胱氨酸)+4H(还原的内部二硫键)。通过单独观察TIC，FLC的单体形式并不明显。为了鉴定单体，质谱图在30秒的保留时间窗口内加和并手动搜索。发现FLC单体与峰1共洗脱，保留时间为5.5至6.6分钟。使用自顶向下MS确认FLC的同种型为λ。图12显示了在该保留时间内产生的质谱图，其显示峰包含两个不同的多电荷离子组。在m/z＝1,000至1,600范围内的离子的解卷积产生了分子量为22,813.9Da的单个峰，如图12的插图所示。在m/z＝1,700至2,400范围内的离子的解卷积产生了与在正常对照血清中观察到的A1AT同种型相匹配的多重离子。
由于单体的计算分子量与观察到的单体质量不匹配，所以样品用DTT还原。这个实验的目的是：1)确定二聚体是否会被还原成两个单体；和2)确定所得单体的分子量是否与FLC单体的分子量相匹配。图13显示了添加DTT之前(红色迹线)和之后(黑色迹线)来自相同样品的TIC的叠加。来自图13中还原的样品的TIC的强度比未还原的样品中的图10所示的TIC高两倍多。这是由于由多克隆κ和λ轻链及其相应重链对总离子流的贡献，因为它们处于其还原形式，来自这些物质的多电荷离子现在处于本实验的m/z扫描范围窗口内，所以现在可由质谱仪观察到它们。在30秒的保留时间间隔内手动加和质谱图后观察到FLC单体，发现其保留时间为6.2至6.7分钟。在这个保留时间窗口中发现的多电荷离子如图14所示。发现这些多电荷离子的分子量计算值为22,698.9Da，如插图所示。通过自顶向下的MS 4确认单克隆轻链的同种型为λ。λ轻链单体的计算分子量和图14中观察到的分子量仅有0.3Da的质量差。
非还原样品中单体的分子量比还原样品中观察到的单体分子量大116Da，这接近于由于C末端半胱氨酸的半胱氨酸化(加入+119Da)引起的已知翻译后修饰，如他处先前所述。使用本文公开的方法(例如，单克隆免疫球蛋白快速准确质量测量-miRAMM)检查的组中数个AL患者具有κFLC。自顶向下MS是在非还原和还原的κFLC单体上进行的，显示质量差异为+119Da，指示半胱氨酸化。图15显示了来自非还原(顶部)和还原(底部)的κFLC单体的自顶向下MS质谱图。单克隆κ轻链通过自顶向下的MS 4主要产生C-末端y-离子，并且因此，来自非还原的FLC的每个C-末端碎片离子的质量比还原的FLC的大+119Da，因为半胱氨酸化发生在C-末端半胱氨酸处。这一观察证实了κFLC单体中的半胱氨酸化的位置，并且是首次报道使用自上而下MS来表征单克隆轻链中的半胱氨酸化。
表1列出了使用本文公开的方法检查的AL患者组的结果。该表列出了未还原的FLC的分子量，单体和/或二聚体的发生，观察到的翻译后修饰(PTM)，还原的FLC的分子量和FLC同种型。该表突出了本文公开的用于鉴定血清中FLC的方法的非凡特异性，如通过精确分子量数据所显示的。然而，本文公开的方法还在相同分析中提供PTM和二聚体和/或单体的存在的信息。例如，样品帕维亚7具有两个单体和两个二聚体FLC同种型以及PTM的半胱氨酸化和谷胱甘肽化。推测存在谷胱甘肽化，因为非还原样品中两种不同单体和二聚体之间的质量差异为305Da，其等于向半胱氨酸残基21添加谷胱甘肽的质量。在还原样品中的单体中也观察到这种质量差异，这表明PTM在使用的还原条件下是稳定的22。推测半胱氨酸化PTM，因为观察到未还原样品和还原样品中FLC单体之间质量差为117Da，这等于半胱氨酸化(+119Da)的损失，随后是二硫化物间的键重建之后2个氢的损失。在非还原样品和还原样品之间显示-116至-119Da范围内的损失的患者被标记为具有半胱氨酸化的证据。一些患者具有显示糖基化的FLC，如由FLC的分子量增加以及差异为己糖(162Da)的LC质量峰的寡克隆性质(2至4个糖型)所证实，这在非还原和还原样品中均是保守的，表1中仅列出最丰富的糖型。
表1
表2显示了每个患者的FLC，列出了同种型(κ首先接着λ)以及κ/λ比例，同种型特异性FLC浓度(mg/L)和质谱仪中观察到的每个单克隆FLC的相应峰面积(每秒计数)。使用与用于确定掺入正常血清的纯化FLC的线性和精确度相同的方法获得表中列出的峰面积。该表显示，帕维亚患者组中的同种型特异性FLC浓度与梅约组相比高得多，并且FLC浓度在数个数量级中显示。进行线性回归分析以确定使用本文公开的方法获得的每个患者的单克隆FLC的峰面积与使用比浊法测定的FLC浓度之间的相关性，结果显示在图16中。标记κFLC的线性回归在总共8个中除去了2个异常值：患者帕维亚4和梅约10。标记为λFLC的线性回归在总共15个中除去了4个患者异常值：帕维亚7，帕维亚13，帕维亚14和帕维亚15。
表2
讨论
实施例7证明微LC-ESI-Q-TOF质谱可以提供完整FLC的准确分子量信息和特定单克隆FLC的定量信息。此外，还可以使用质谱法定义翻译后修饰的信息。这种强大分析特征的结合使质谱成为监测单克隆FLC的综合平台。此外，实施例7表明，本文公开的方法可以容易地从多克隆背景鉴定单克隆FLC，并通过自顶向下MS鉴定轻链的同种型，从而消除了对参考范围的需求以确定是否存在单克隆FLC。此外，实施例7表明，本文公开的方法可用于监测二聚体/单体比例以及PTM。
其他实施方式
应理解虽然本发明已结合其详述进行描述，但以上描述意在说明而不是限制本发明的范围，该范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优势和修改在以下权利要求的范围内。

Claims (39)

1.一种用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法，所述方法包括：
a.提供样品；
b.使所述样品经历质谱技术以获得样品的质谱图；和
c.鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链的存在。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述样品被怀疑包含免疫球蛋白游离轻链。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种免疫球蛋白游离轻链选自游离κ轻链，游离λ轻链及其混合物。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白游离轻链是游离κ轻链。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括鉴定至少两种类型的游离κ轻链。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白游离轻链是游离λ轻链。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括鉴定至少两种类型的游离λ轻链。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种免疫球蛋白游离轻链包括糖基化免疫球蛋白游离轻链，半胱氨酸化免疫球蛋白游离轻链和谷胱甘肽化免疫球蛋白游离轻链中的至少一种。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链在多克隆背景存在下进行。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括测量样品中所述一种或多种免疫球蛋白游离轻链的浓度。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括鉴定至少一种免疫球蛋白游离轻链二聚体。
12.如权利要求1所述的方法，还包括在使所述样品经历质谱技术之前使所述样品与还原剂接触。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述还原剂选自二硫苏糖醇(DTT)，还原型谷胱甘肽，β-巯基乙醇，三(2-羧乙基)膦盐酸盐，半胱氨酸，2-巯基乙胺，3-巯基丙酸及其混合物。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述还原剂是二硫苏糖醇。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述方法不包括使所述样品与还原剂接触。
16.如权利要求1所述的方法，其中所述方法不包括纯化所述样品。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述质谱技术是LC-MS/MS。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述LC-MS/MS技术包括四极飞行时间质谱仪。
19.如权利要求1所述的方法，其中所述质谱技术是自顶向下质谱技术。
20.如权利要求1所述的方法，其中所述样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血样品。
21.如权利要求1所述的方法，其中所述样品来自单一对象并且所述方法还包括诊断对象中的病症，其中所述病症是浆细胞恶病质。
22.如权利要求1所述的方法，其中所述样品来自单个对象，并且所述方法还包括诊断所述对象中的病症，其中所述病症是多发性骨髓瘤或轻链淀粉样变性中的至少一种。
23.如权利要求1所述的方法，其中所述样品来自单一对象并且所述方法还包括诊断所述对象中的病症，其中所述病症是下述的至少一种：多发性骨髓瘤，意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉样蛋白轻链淀粉样变性，或非分泌性骨髓瘤。
24.如权利要求1所述的方法，其中所述样品来自单一对象，并且所述方法还包括区分对象中的自身免疫应答与单克隆丙种球蛋白病。
25.一种用于鉴定样品中的一种或多种免疫球蛋白游离轻链的方法，所述方法包括：
a.提供样品；
b.使所述样品与还原剂接触；
c.使所述样品经历质谱技术以获得所述样品的质谱图；和
d.鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链的存在。
26.用于诊断对象中病症的方法，所述方法包括：
a.提供来自所述对象的样品；
b.使所述样品经历质谱技术以获得所述样品的质谱图；和
c.鉴定一种或多种免疫球蛋白游离轻链的存在。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述病症选自：多发性骨髓瘤，意义未明的单克隆丙种球蛋白病，B细胞慢性淋巴细胞性白血病，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，淀粉样蛋白轻链淀粉样变性，非分泌性骨髓瘤及其组合。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述样品是血清样品，尿液样品，脑脊髓液样品或全血样品。
29.如权利要求26所述的方法，其中在将所述对象诊断为患有病症之后，还包括向所述对象给予治疗剂以治疗所述病症。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述治疗剂包括下述的一种或多种：双膦酸盐，苯丁酸氮芥，氟达拉滨，环磷酰胺，利妥昔单抗，苯达莫司汀，卡非佐米，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，苯丁酸氮芥，阿托珠单抗，奥法木单抗，喷司他丁，阿仑单抗，氟达拉滨，硼替佐米，沙利度胺，地塞米松，多柔比星，依鲁替尼，美法仑，阿霉素，来那度胺，泊马多胺，葡糖胺聚糖，嘌呤核苷类似物，和单克隆抗体。
31.如权利要求29所述的方法，其中所述病症是意义未明的单克隆丙种球蛋白病，且所述治疗剂是双膦酸盐。
32.如权利要求29所述的方法，其中所述病症是B细胞慢性淋巴细胞白血病并且所述治疗剂选自：苯丁酸氮芥，氟达拉滨，环磷酰胺，利妥昔单抗，苯达莫司汀，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，苯丁酸氮芥，阿托珠单抗，奥法木单抗，喷司他丁，阿仑单抗，氟达拉滨，单克隆抗体及其组合。
33.如权利要求29所述的方法，其中所述病症是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症并且所述治疗剂选自硼替佐米，沙利度胺，氟达拉滨，地塞米松，苯丁酸氮芥，利妥昔单抗，环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，泼尼松，单克隆抗体，嘌呤核苷类似物，依鲁替尼及其组合。
34.如权利要求29所述的方法，其中所述病症是淀粉样蛋白轻链淀粉样变性并且所述治疗剂选自美法仑，泼尼松，长春新碱，阿霉素，地塞米松，苯达莫司汀，沙利度胺，环磷酰胺，来那度胺，泊马多胺，硼替佐米，糖胺聚糖及其组合。
35.如权利要求29所述的方法，其中所述病症是非分泌性骨髓瘤，并且所述治疗剂选自沙利度胺，硼替佐米，来那度胺，卡非佐米，泊马度胺及其组合。
36.用于诊断对象中单克隆丙种球蛋白病的方法，所述方法包括：
a.提供来自所述对象的样品；
b.使所述样品经历质谱技术以获得所述样品的质谱图；和
c.基于一种或多种游离κ免疫球蛋白轻链或一种或多种游离λ免疫球蛋白轻链的鉴定来诊断对象中的单克隆丙种球蛋白病。
37.如权利要求36所述的方法，还包括在使包含免疫球蛋白游离轻链的样品经历质谱技术之前使所述样品与还原剂接触。
38.监测对象中单克隆丙种球蛋白病的治疗的方法，包括：
a.提供在所述治疗之前获得的所述对象的第一样品；
b.提供在所述治疗期间或之后获得的所述对象的第二样品；
c.使所述第一和第二样品经历质谱技术以获得所述第一和第二样品的质谱图；
d.确定所述第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度；和
e.比较所述第一和第二样品中至少一种游离λ免疫球蛋白轻链或至少一种游离κ免疫球蛋白轻链的浓度。
39.如权利要求38所述的方法，还包括在使包含免疫球蛋白游离轻链的第一和第二样品经历质谱技术之前使所述第一和第二样品与还原剂接触。
CN201680055665.XA 2015-09-24 2016-09-26 通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链 Pending CN108026164A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562232182P 2015-09-24 2015-09-24
US62/232,182 2015-09-24
PCT/US2016/053675 WO2017053932A1 (en) 2015-09-24 2016-09-26 Identification of immunoglobulin free light chains by mass spectrometry

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108026164A true CN108026164A (zh) 2018-05-11

Family

ID=58387446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680055665.XA Pending CN108026164A (zh) 2015-09-24 2016-09-26 通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11209439B2 (zh)
EP (1) EP3353200A4 (zh)
JP (1) JP6968058B2 (zh)
CN (1) CN108026164A (zh)
AU (1) AU2016326757B2 (zh)
WO (1) WO2017053932A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113454460A (zh) * 2019-01-30 2021-09-28 瑞泽恩制药公司 表征生物制剂中的可见和/或亚可见粒子的方法
CN113720900A (zh) * 2021-09-14 2021-11-30 首都医科大学附属北京朝阳医院 一种基于madli-tof ms技术检测血清中m蛋白的方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10267806B2 (en) 2014-04-04 2019-04-23 Mayo Foundation For Medical Education And Research Isotyping immunoglobulins using accurate molecular mass
EP3175242A4 (en) 2014-07-29 2017-12-27 Mayo Foundation for Medical Education and Research Quantifying monoclonal antibody therapeutics by lc-ms/ms
WO2018049001A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Mayo Foundation For Medical Education And Research Identification and monitoring of cleaved immunoglobulins by molecular mass
GB201708262D0 (en) * 2017-05-23 2017-07-05 Binding Site Group Ltd Assay for plasma cell associated disease
EP3681528A4 (en) 2017-09-13 2021-07-21 Mayo Foundation for Medical Education and Research IDENTIFICATION AND MONITORING OF THE APOPTOSIS INHIBITOR OF MACROPHAGES
CN109830426B (zh) * 2017-11-23 2021-04-02 株式会社岛津制作所 质谱数据采集方法
GB201808529D0 (en) * 2018-05-24 2018-07-11 Binding Site Group Ltd Identification of immunoglobulins usong mass spectrometry
GB201916030D0 (en) * 2019-11-04 2019-12-18 Binding Site Group Ltd Method of detecting or monitoring minimal residual disease

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030027216A1 (en) 2001-07-02 2003-02-06 Kiernan Urban A. Analysis of proteins from biological fluids using mass spectrometric immunoassay
WO2002027328A1 (fr) 2000-09-29 2002-04-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Procede pour analyser la structure moleculaire d'un anticorps
CA2436503A1 (en) 2001-02-01 2002-08-08 Huw A. Davies Improved methods for protein identification, characterization and sequencing by tandem mass spectrometry
BR0210094A (pt) 2001-06-06 2004-04-13 Canag Diagnostics Ab Método para medir a proporção de expressão de um gene da classe de genes padrões
DE02784674T1 (de) 2001-11-29 2005-05-04 Thermo Finnigan Llc San Jose Quantifizierung von polypeptiden
WO2003054549A2 (en) 2001-12-08 2003-07-03 Micromass Uk Limited Method of mass spectrometry
US7267942B2 (en) 2003-03-24 2007-09-11 The University Of Hong Kong Diagnostic assay for the human virus causing severe acute respiratory syndrome (SARS)
US7709610B2 (en) 2003-05-08 2010-05-04 Facet Biotech Corporation Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
EP1740954B1 (en) 2004-04-07 2015-08-19 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
EP2927322A1 (en) 2004-06-10 2015-10-07 Viventia Bio Inc. Tumor specific antibody
US20070105181A1 (en) 2005-05-04 2007-05-10 Invitrogen Corporation Identification of cancer biomarkers and phosphorylated pdroteins
CA2611728A1 (en) 2005-06-08 2006-12-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the identification, assessment, and treatment of patients with cancer therapy
JP2008547005A (ja) 2005-06-16 2008-12-25 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー マススペクトルを用いた化学的に架橋された細胞サンプルの分類方法
JP2007024631A (ja) 2005-07-14 2007-02-01 Human Science Shinko Zaidan 同位体標識法
TWI338779B (en) 2005-07-21 2011-03-11 Academia Sinica Methods,compositions and systems for assaying at least one target analyte in a sample
EP2013618B1 (en) 2006-04-28 2013-04-10 Singapore Health Services Pte Ltd Investigation of mucosa dryness conditions
AU2007248253B2 (en) 2006-05-02 2010-12-23 Genentech, Inc. Microwave assisted deglycosylation of proteins for molecular weight determination by mass spectrometry
CA2655685A1 (en) 2006-06-28 2008-01-03 Lineagen, Inc. Apparatus, compositions, and methods for assessment of chronic obstructive pulmonary disease progression among rapid and slow decline conditions
AU2007284724B2 (en) 2006-08-10 2014-03-13 Millennium Pharmaceuticals, Inc. For the identification, assessment, and treatment of patients with cancer therapy
US20090203602A1 (en) 2006-09-01 2009-08-13 Cohava Gelber Compositions and methods for diagnosis and treatment of type 2 diabetes
WO2008033571A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods of diagnosing, treating, or preventing plasma cell disorders
WO2008057083A1 (en) 2006-11-09 2008-05-15 Wyeth Methods of analyzing glycomolecules
US7462489B2 (en) 2006-11-09 2008-12-09 Ley Klaus F Methods for identifying and analyzing biomarkers from plasma-derived microparticles
ATE529752T1 (de) 2006-12-21 2011-11-15 Novartis Ag Antikörperquantifizierung
GB0704764D0 (en) 2007-03-12 2007-04-18 Electrophoretics Ltd Isobarically labelled reagents and methods of their use
FI20075278A0 (fi) 2007-04-20 2007-04-20 Biotie Therapies Corp Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet
BRPI0814355A2 (pt) 2007-08-10 2015-01-27 Centocor Ortho Biotech Inc Fragmentos de clivagem de imunoglobulina como indicadores de doença e composições para detecção e ligação dos mesmos
US8501907B2 (en) 2007-08-10 2013-08-06 Janssen Biotech, Inc. Immunoglobulin cleavage fragments as disease indicators and compositions for detecting and binding such
NZ584684A (en) 2007-11-22 2012-10-26 Symphogen As A method for characterization of a recombinant polyclonal protein
WO2009100390A2 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Classifying amyloidosis
US20100086922A1 (en) 2008-05-30 2010-04-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Assessment of chromosomal alterations to predict clinical outcome of bortezomib treatment
US20110151494A1 (en) 2008-06-30 2011-06-23 H. Lee Moffit Cancer & Research Institute Methods and materials for monitoring myeloma using quantitative mass spectrometry
CN102334033A (zh) 2009-01-27 2012-01-25 霍洛吉克股份有限公司 生物学流体中供检测新生儿败血病用的生物标志
SG173589A1 (en) 2009-02-09 2011-09-29 Roche Glycart Ag Immunoglobulin glycosylation pattern analysis
EP2419731A1 (en) 2009-04-16 2012-02-22 Cambridge Enterprise Ltd. Biomarkers
JP5379616B2 (ja) 2009-09-09 2013-12-25 株式会社日立製作所 粥状硬化性動脈硬化のマーカー因子と用途
WO2011072197A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Purdue Research Foundation Detection of oxidized polypeptides
GB0922240D0 (en) 2009-12-21 2010-02-03 Cambridge Entpr Ltd Biomarkers
EP2521916A4 (en) 2010-01-04 2013-12-04 Lineagen Inc BIOMARKER FOR THE LUNGS FUNCTION
US8643274B2 (en) 2010-01-26 2014-02-04 Scinopharm Taiwan, Ltd. Methods for Chemical Equivalence in characterizing of complex molecules
JP5337096B2 (ja) 2010-04-28 2013-11-06 株式会社日立製作所 動脈硬化の評価法
US9146241B2 (en) 2011-11-23 2015-09-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Proteomic identification of antibodies
GB201008340D0 (en) 2010-05-19 2010-07-07 Cambridge Entpr Ltd Biomarkers
US20130177544A1 (en) 2010-09-21 2013-07-11 The University Of Western Australia Biomarkers associated with pre-diabetes, diabetes and diabetes related conditions
GB201018056D0 (en) 2010-10-26 2010-12-08 Cambridge Entpr Ltd Biomarkers
DK2676137T3 (en) 2011-02-17 2015-01-19 Nestec Sa TESTS TO DETECT AUTO ANTIBODIES FOR ANTI-TNF PHARMACEUTICALS
CN103688176A (zh) * 2011-04-29 2014-03-26 细胞基因公司 利用cereblon作为预报因子治疗癌和炎性疾病的方法
KR101992502B1 (ko) 2011-05-12 2019-06-24 제넨테크, 인크. 프레임워크 시그너처 펩티드를 사용하여 동물 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 다중 반응 모니터링 lc-ms/ms 방법
KR102003660B1 (ko) 2011-07-13 2019-07-24 더 멀티플 마이얼로머 리서치 파운데이션, 인크. 데이터 수집 및 분배 방법
GB2495113A (en) 2011-09-29 2013-04-03 Bioinvent Int Ab Anti-ICAM-1 antibody for treating multiple-myeloma-related disorders
EP2764351B1 (en) 2011-09-29 2018-11-07 Seattle Genetics, Inc. Intact mass determination of protein conjugated agent compounds
AU2012359020B2 (en) 2011-12-19 2017-04-13 The Washington University Methods for diagnosing Alzheimer's disease
US20130336973A1 (en) 2012-05-10 2013-12-19 Zymeworks Inc. Heteromultimer Constructs of Immunoglobulin Heavy Chains with Mutations in the Fc Domain
US20150204884A1 (en) 2012-06-01 2015-07-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of evaluating and making biologics
WO2013185180A1 (en) 2012-06-14 2013-12-19 Central Adelaide Local Health Network Inc. Method for identifying a diagnostic biomarker for an antibody of interest
WO2013191908A1 (en) 2012-06-20 2013-12-27 The University Of North Carolina At Chapel Hill Integrated sample processing for electrospray ionization devices
WO2014037924A2 (en) 2012-09-10 2014-03-13 Koninklijke Philips N.V. Analysis of saliva proteome for biomarkers of gingivitis and periodontitis using ft-icr-ms/ms
US20140170146A1 (en) 2012-11-13 2014-06-19 Presage Biosciences, Inc. Methods for multiplexed drug evaluation
US20140186332A1 (en) 2012-12-28 2014-07-03 NX Pharmagen Biomarkers of preterm birth
WO2014109927A1 (en) 2013-01-11 2014-07-17 The Regents Of The University Of Michigan Synthesis and isolation of dendrimer based imaging systems
CN103217489B (zh) * 2013-01-15 2016-03-09 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 一种测定蛋白纯化工艺过程中样品的糖基化和末端修饰情况的方法
WO2014121031A1 (en) 2013-01-31 2014-08-07 Excelimmune, Inc. Characterization of antibody mixtures by mass spectrometry
WO2014160499A2 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Creatics Llc Methods and compositions for detecting pancreatic cancer
WO2014140995A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Alfa Wassermann S.P.A. Method for diagnosing vaginal infections
DK3387898T3 (da) 2013-03-15 2020-08-03 Mayo Found Medical Education & Res Identificering og monitorering af monoklonale immunglobuliner ved hjælp af molekylvægt
WO2015038665A1 (en) 2013-09-11 2015-03-19 University Of Southern California A composition of stem cells having highly expressed fas ligand
GB201316744D0 (en) 2013-09-20 2013-11-06 Genovis Ab Method
WO2015120036A1 (en) 2014-02-04 2015-08-13 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for analysis of protein sequences and post-translational modifications
US10175242B2 (en) 2014-02-28 2019-01-08 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Personalized myeloma detection
US9618524B2 (en) 2014-03-26 2017-04-11 Plaxgen Inc. Method, composition, isolation and identification of a plaque particle and related biomarker
US10267806B2 (en) 2014-04-04 2019-04-23 Mayo Foundation For Medical Education And Research Isotyping immunoglobulins using accurate molecular mass
EP2975401B1 (en) 2014-07-18 2019-12-25 Hexal AG Improved method of mapping glycans of glycoproteins in serum samples
EP3175242A4 (en) 2014-07-29 2017-12-27 Mayo Foundation for Medical Education and Research Quantifying monoclonal antibody therapeutics by lc-ms/ms
US11041865B2 (en) 2015-02-20 2021-06-22 The Johns Hopkins University Biomarkers of myocardial injury
EP3270154B1 (en) 2015-03-09 2020-03-04 Shimadzu Corporation Method for detecting a monoclonal antibody using mass spectrometry
MX2017013482A (es) 2015-04-24 2018-03-01 Genentech Inc Proteinas multiespecificas de union al antigeno.
US20170044608A1 (en) 2015-07-17 2017-02-16 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods of selecting antibodies and antibody fragments
WO2017022315A1 (ja) 2015-08-06 2017-02-09 エーディア株式会社 腎疾患の検査方法
WO2017134274A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Ulrich Von Pawel-Rammingen New streptococcal proteases
AU2017222402B2 (en) 2016-02-25 2024-02-01 The Binding Site Group Limited Antibodies
WO2017180735A1 (en) 2016-04-12 2017-10-19 Biocrypton Inc. Compositions and methods for screening, monitoring and treating gastrointestinal diseases
US10309968B2 (en) 2016-05-18 2019-06-04 Bioinformatics Solutions Inc. Methods and systems for assembly of protein sequences
US11067583B2 (en) 2016-05-25 2021-07-20 University Of Maryland, Baltimore Methods of making active antibodies from biological fluids
WO2018049001A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Mayo Foundation For Medical Education And Research Identification and monitoring of cleaved immunoglobulins by molecular mass

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAVID R. BARNIDGE: "Using Mass Spectrometry to Monitor Monoclonal Immunoglobulins in Patients with a Monoclonal Gammopathy", 《J. PROTEOME RES.》 *
FRANCESCA LAVATELLI: "A novel approach for the purification and proteomic analysis of pathogenic immunoglobulin free light chains from serum", 《BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113454460A (zh) * 2019-01-30 2021-09-28 瑞泽恩制药公司 表征生物制剂中的可见和/或亚可见粒子的方法
CN113720900A (zh) * 2021-09-14 2021-11-30 首都医科大学附属北京朝阳医院 一种基于madli-tof ms技术检测血清中m蛋白的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017053932A1 (en) 2017-03-30
JP2018536147A (ja) 2018-12-06
JP6968058B2 (ja) 2021-11-17
US20180267057A1 (en) 2018-09-20
EP3353200A4 (en) 2019-06-26
AU2016326757A1 (en) 2018-04-05
US11209439B2 (en) 2021-12-28
AU2016326757B2 (en) 2022-09-01
EP3353200A1 (en) 2018-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108026164A (zh) 通过质谱鉴定免疫球蛋白游离轻链
AU2019268150B2 (en) Isotyping immunoglobulins using accurate molecular mass
Bondt et al. Human plasma IgG1 repertoires are simple, unique, and dynamic
EP2966985B1 (en) Identification and monitoring of monoclonal immunoglobulins by molecular mass
JP2021517239A (ja) 神経変性を検出するためのアッセイ
AU2018211064A1 (en) Idiotypic antibodies against anti-PD-L1 antibodies and uses thereof
US20200284800A1 (en) Identification and monitoring of immunoglobulin j chains
Davern et al. Immunodiagnostic capabilities of anti–free immunoglobulin light chain monoclonal antibodies
WO2019055631A1 (en) IDENTIFICATION AND MONITORING OF ACID HYDROLYSIS PRODUCTS OF IMMUNOGLOBULIN HEAVY CHAINS
Šegulja et al. Verification study of free light chains assays on reagent-optimized analysers
US20230228763A1 (en) Process for direct readout of immunoglobulins
de Graaf Computational Approaches for Mass Spectrometry-based Characterization of Antibody Repertoires
Wiegand Molecular epitope and affinity determination of protein-protein interactions by a combination of biosensor and mass spectrometric methods
WO2023111018A1 (en) Antibodies against coagulation factor x and uses thereof
Cremer et al. Human plasma IgG1 repertoires are simple, unique, and dynamic
van Rijswijck et al. Human plasma IgG1 repertoires are simple, unique, and dynamic
WO2005063335A2 (en) MONOCLONAL DES-LYS58-β2-MICROGLOBULIN ANTIBODIES FOR MEASUREMENT AND MANAGEMENT OF HEMODIALYSIS COMPLICATIONS

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination