CN108018346A - 同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用 - Google Patents
同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用，试剂盒包含6个SNP位点基因座的引物，所述6个SNP位点基因座为：MC1R(rs1805007)，NQO1(rs1800566)，AQP3(rs17553719)，FGFR2(rs4752566)，EDAR(rs3827760)，MMP1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号。所述试剂盒通过引物优化，提高引物对SNP的识别能力，使引物能有效识别一个碱基的差异，扩大了最适退火温度范围，避免了因退火温度要求精确所导致检测结果的假阳性发生，提高了检测准确性和可靠性；本发明首次将ARMS技术与毛细管电泳方法结合，将4个女性皮肤基因和2个发质基因同时检测，是目前女性皮肤和发质检测位点最多的试剂盒；所述试剂盒使用方便，操作方法简单，检测时长缩短。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及一种分子标记及其应用，具体为一种同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用。
背景技术
护肤和美发一直是女性关注的焦点。消费者调查研究显示，随着经济水平的增长，女性在护肤和美发上的花费也越来越高。但越来越高的投入消费并没有真的为女性带来好的皮肤和发质，反而常常造成粗糙暗沉或者头发分叉打结等更严重的后果。
研究表明，人的基因差异性导致皮肤和发质属性在个体间有很大不同。MMP1(基质金属蛋白酶1)，又称间质性胶原酶，属基质金属蛋白酶家族，主要作用底物为纤维性胶原，可降解细胞外基质(EMC)中的胶原纤维和明胶及改变细胞的微环境。当MMP1过度表达时，会降解EMC的胶原蛋白，真皮层结构由于胶原蛋白的分解而遭到破坏，导致皮肤出现皱缩细纹等衰老症状。MC1R基因是黑素皮质素受体1基因，可调节皮肤中黑色素生成的量，控制黑色素细胞修复紫外线造成的DNA伤害，MC1R信号缺陷会延缓机体清除皮肤中已经存在的DNA损伤的能力，有助于黑色素的发展。当MC1R的SNP位点等位基因由C突变为T时对光更敏感，容易使色素沉着，雀斑发生的可能性更高。NQO1基因编码醌氧化还原酶1，可通过两种途径催化体内的醌类物质，其中一种途径会导致细胞内产生大量的自由基和活性氧基团，故该基因上的位点突变，会使不同基因携带者的抗氧化能力有所不同。AQP3水通道蛋白是一类在细胞膜上与水分子通透性相关的转运蛋白，可增加细胞膜的水通透性，在机体内水平衡和内环境维持中发挥重要作用。AQP3基因是编码水通道蛋白的基因之一，主要在皮肤中表达，该基因的多态位点造成不同基因型人群皮肤水合能力产生差异。研究发现，在亚洲人中，FGFR2和EDAR两个基因发生突变时，会导致毛囊生长增加生成较厚的毛发。
针对此，为帮助护肤美发的女性从基因层面更科学的了解自身特质，针对性的改善原有饮食习惯，选择具有合适成分的护肤美发产品，有必要对女性的皮肤发质基因进行检测。
目前市场上此类检测并不多，常见的有皮肤抗氧化、抗老化和保湿能力方面的检测，检测位点少，且使用检测方法为芯片检测，一次性检测成本高；关于发质基因的检测产品，还未出现。上述检测现状限制了基因检测在女性皮肤发质方面的应用价值。
发明内容
解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，获得一种检测位点涵盖全面，检测方法简单，检测成本低的产品，本发明提供了同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用。
技术方案：同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，试剂盒包含6个SNP位点基因座的引物，所述6个SNP位点基因座为：MC1R(rs1805007)，NQO1(rs1800566)，AQP3(rs17553719)，FGFR2(rs4752566)，EDAR(rs3827760)，MMP1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号。
优选的，所述引物包括针对各个SNP位点基因座的共用上游引物和特异性下游引物，特异性下游引物于3’末端第2位、第3位或第4位引入错配碱基。
优选的，所述引物及其序列如下：
用于检测位点MC1R rs1805007C/T/G/A的共用上游引物为：
SEQ1：5’-ATGAGCACCAGCATGGCTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ2：5’-TCTCCATCTTCTACGCATTGC-3’；
SEQ3：5’-TCTCCATCTTCTACGCACGGC-3’；
SEQ4：5’-TCTCCATCTTCTACGCACTTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ5：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ6：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACGGT-3’；
SEQ7：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点MC1R rs1805007G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ8：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCAGTGG-3’；
SEQ9：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACGGG-3’；
SEQ10：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACTTG-3’
用于检测位点MC1R rs1805007A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ11：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ12：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCACGAT-3’；
SEQ13：5’-attGGtCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点NQO1rs1800566C/T/A的共用上游引物为：
SEQ14：5’-GCATGGAAGCTGTTGACTTAC-3’；
用于检测位点NQO1rs1800566C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ15：5’-CAATGCTATATGTCAGTTCAGG-3’；
SEQ16：5’-CAATGCTATATGTCAGTTACGG-3’；
SEQ17：5’-CAATGCTATATGTCAGTTGATG-3’
用于检测位点NQO1rs1800566T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ18：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTCAGA-3’；
SEQ19：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGCGA-3’；
SEQ20：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGATA-3’
用于检测位点NQO1rs1800566A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ21：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTCAGT-3’；
SEQ22：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGTGT-3’；
SEQ23：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGATT-3’
用于检测位点AQP3rs17553719T/G/C的共用上游引物为：
SEQ24：5’-AGAGTTTGGGGAGTGCATCG-3’；
用于检测位点AQP3rs17553719T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ25：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCACCA-3’；
SEQ26：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTGCA-3’；
SEQ27：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTCGA-3’
用于检测位点AQP3rs17553719G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ28：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCACCG-3’；
SEQ29：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCTAGG-3’；
SEQ30：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCGCTG-3’
用于检测位点AQP3rs17553719C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ31：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCTAGC-3’；
SEQ32：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCACCC-3’；
SEQ33：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCGCAC-3’
用于检测位点FGFR2rs4752566T/G的共用上游引物为：
SEQ34：5’-CTGTGGGTTCCGCATTCAT-3’；
用于检测位点FGFR2rs4752566T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ35：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAAGA-3’；
SEQ36：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAGTA-3’；
SEQ37：5’-atattACAACCCCGAATATACGTAGATA-3’
用于检测位点FGFR2rs4752566G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ38：5’-ACAACCCCGAATATACCAAAAGC-3’；
SEQ39：5’-ACAACCCCGAATATACCAAATTC-3’；
SEQ40：5’-ACAACCCCGAATATACCAAGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760C/T/G的共用上游引物为：
SEQ41：5’-GTGCTGATGCGGTCAAAGAGT-3’；
用于检测位点EDAR rs3827760C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ42：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGCCTC-3’；
SEQ43：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGCAC-3’；
SEQ44：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ45：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGGCTT-3’；
SEQ46：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCCAT-3’；
SEQ47：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCATT-3’
用于检测位点EDAR rs3827760G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ48：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGGCTG-3’；
SEQ49：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCCAG-3’；
SEQ50：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCATG-3’
用于检测位点MMP1rs1799750G/-的上游引物为：
SEQ51：5’-TCCCACCTTTCCCACTGTATC-3’；
用于检测位点MMP1rs1799750G/-的下游引物为：
SEQ52：5’-TCTTCCCATTCTTCTTACC-3’；
其中，下划线标记的碱基为引入的错配碱基。
进一步的，检测位点为MC1R rs1805007C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ4；检测位点为MC1R rs1805007T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ5；检测位点为MC1R rs1805007G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ9；检测位点为MC1R rs1805007A时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ12；检测位点为NQO1rs1800566C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ16；检测位点为NQO1rs1800566T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ20；检测位点为NQO1rs1800566A时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ22；检测位点为AQP3rs17553719T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ27；检测位点为AQP3rs17553719G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ29；检测位点为AQP3rs17553719C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ31；检测位点为FGFR2rs4752566T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ34以及SEQ35；检测位点为FGFR2rs4752566G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ34以及SEQ38；检测位点为EDARrs3827760C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ44；检测位点为EDARrs3827760T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ46；检测位点为EDARrs3827760G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ48；检测位点MMP1rs1799750G/-时，使用引物组合为上游引物SEQ51及SEQ52。
优选的，所述引物通过荧光染料FAM标记。
优选的，所述试剂盒包含分子量内标，且通过荧光染料SIZ标记。
优选的，所述试剂盒包括反应混合物、热启动Taq酶、sdH2O；其中，反应混合物包括：MgCl2 7.5mM，Tris-HCl buffer 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM，BSA 2mg/mL。
以上所述试剂盒在同时检测女性皮肤和发质中的应用。
有益效果：(1)本发明所述试剂盒通过引物优化，提高引物对SNP的识别能力，使引物能有效识别一个碱基的差异，扩大了最适退火温度范围，避免了因退火温度要求精确所导致检测结果的假阳性发生，提高了检测准确性和可靠性；(2)本发明所述试剂盒首次将ARMS技术与毛细管电泳方法结合，将4个女性皮肤基因和2个发质基因同时检测，是目前女性皮肤和发质检测位点最多的试剂盒；(3)本发明所述试剂盒使用方便，操作方法简单，检测时长缩短。
附图说明
图1是本发明试剂盒对标准品9948分型结果图；
图2是本发明试剂盒对志愿者1分型结果图；
图3是本发明试剂盒对志愿者2分型结果图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
以下实施例中未作具体说明的分子生物学试验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)或者按照试剂盒和产品说明书进行；所述试剂盒生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例中，PCR仪购自德国Eppendorf公司，型号为Mastercycler nexus；ABI3130xl遗传分析仪购自美国ABI公司；C-Taq DNA聚合酶、Reaction mix、SIZ-500为本公司产品。
实施例1
同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，试剂盒包含6个SNP位点基因座的引物，所述6个SNP位点基因座为：MC1R(rs1805007)，NQO1(rs1800566)，AQP3(rs17553719)，FGFR2(rs4752566)，EDAR(rs3827760)，MMP1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号。
所述引物包括针对各个SNP位点基因座的共用上游引物和特异性下游引物，特异性下游引物于3’末端第2位、第3位或第4位引入错配碱基。
所述引物及其序列如下：
用于检测位点MC1R rs1805007C/T/G/A的共用上游引物为：
SEQ1：5’-ATGAGCACCAGCATGGCTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ2：5’-TCTCCATCTTCTACGCATTGC-3’；
SEQ3：5’-TCTCCATCTTCTACGCACGGC-3’；
SEQ4：5’-TCTCCATCTTCTACGCACTTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ5：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ6：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACGGT-3’；
SEQ7：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点MC1R rs1805007G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ8：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCAGTGG-3’；
SEQ9：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACGGG-3’；
SEQ10：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACTTG-3’
用于检测位点MC1R rs1805007A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ11：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ12：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCACGAT-3’；
SEQ13：5’-attGGtCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点NQO1rs1800566C/T/A的共用上游引物为：
SEQ14：5’-GCATGGAAGCTGTTGACTTAC-3’；
用于检测位点NQO1rs1800566C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ15：5’-CAATGCTATATGTCAGTTCAGG-3’；
SEQ16：5’-CAATGCTATATGTCAGTTACGG-3’；
SEQ17：5’-CAATGCTATATGTCAGTTGATG-3’
用于检测位点NQO1rs1800566T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ18：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTCAGA-3’；
SEQ19：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGCGA-3’；
SEQ20：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGATA-3’
用于检测位点NQO1rs1800566A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ21：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTCAGT-3’；
SEQ22：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGTGT-3’；
SEQ23：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGATT-3’
用于检测位点AQP3rs17553719T/G/C的共用上游引物为：
SEQ24：5’-AGAGTTTGGGGAGTGCATCG-3’；
用于检测位点AQP3rs17553719T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ25：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCACCA-3’；
SEQ26：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTGCA-3’；
SEQ27：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTCGA-3’
用于检测位点AQP3rs17553719G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ28：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCACCG-3’；
SEQ29：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCTAGG-3’；
SEQ30：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCGCTG-3’
用于检测位点AQP3rs17553719C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ31：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCTAGC-3’；
SEQ32：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCACCC-3’；
SEQ33：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCGCAC-3’
用于检测位点FGFR2rs4752566T/G的共用上游引物为：
SEQ34：5’-CTGTGGGTTCCGCATTCAT-3’；
用于检测位点FGFR2rs4752566T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ35：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAAGA-3’；
SEQ36：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAGTA-3’；
SEQ37：5’-atattACAACCCCGAATATACGTAGATA-3’
用于检测位点FGFR2rs4752566G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ38：5’-ACAACCCCGAATATACCAAAAGC-3’；
SEQ39：5’-ACAACCCCGAATATACCAAATTC-3’；
SEQ40：5’-ACAACCCCGAATATACCAAGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760C/T/G的共用上游引物为：
SEQ41：5’-GTGCTGATGCGGTCAAAGAGT-3’；
用于检测位点EDAR rs3827760C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ42：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGCCTC-3’；
SEQ43：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGCAC-3’；
SEQ44：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ45：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGGCTT-3’；
SEQ46：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCCAT-3’；
SEQ47：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCATT-3’
用于检测位点EDAR rs3827760G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ48：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGGCTG-3’；
SEQ49：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCCAG-3’；
SEQ50：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCATG-3’
用于检测位点MMP1rs1799750G/-的上游引物为：
SEQ51：5’-TCCCACCTTTCCCACTGTATC-3’；
用于检测位点MMP1rs1799750G/-的下游引物为：
SEQ52：5’-TCTTCCCATTCTTCTTACC-3’；
其中，下划线标记的碱基为引入的错配碱基。
所述引物通过荧光染料FAM标记。
所述试剂盒包含分子量内标，且通过荧光染料SIZ标记。
所述试剂盒包括反应混合物、热启动Taq酶、sdH2O；其中，反应混合物包括：MgCl27.5mM，Tris-HCl buffer 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM，BSA 2mg/mL。
实施例2
1、检材采集：检材为志愿者口腔拭字，共6份。
2、模板DNA提取：采用Chelex-100法从6份志愿者的口腔拭子检材中提取模板DNA。
3、PCR扩增：
(1)、使用的复扩检测引物为：
| MC1R rs1805007 | SEQ1：5’-ATGAGCACCAGCATGGCTC-3’ |
| C | SEQ4：5’-TCTCCATCTTCTACGCACTTC-3’ |
| T | SEQ5：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’ |
| G | SEQ9：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACGGG-3’ |
| A | SEQ12：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCACGAT-3’ |
| NQO1rs1800566 | SEQ14：5’-GCATGGAAGCTGTTGACTTAC-3’ |
| C | SEQ16：5’-CAATGCTATATGTCAGTTACGG-3’ |
| T | SEQ20：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGATA-3’ |
| A | SEQ22：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGTGT-3’ |
| AQP3rs17553719 | SEQ24：5’-AGAGTTTGGGGAGTGCATCG-3’ |
| T | SEQ27：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTCGA-3’ |
| G | SEQ29：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCTAGG-3’ |
| C | SEQ31：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCTAGC-3’ |
| FGFR2rs4752566 | SEQ34：5’-CTGTGGGTTCCGCATTCAT-3’ |
| T | SEQ35：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAAGA-3’ |
| G | SEQ38：5’-ACAACCCCGAATATACCAAAAGC-3’ |
| EDAR rs3827760 | SEQ41：5’-GTGCTGATGCGGTCAAAGAGT-3’ |
| C | SEQ44：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGATC-3’ |
| T | SEQ46：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCCAT-3’ |
| G | SEQ48：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGGCTG-3’ |
| MMP1rs1799750 | SEQ51：5’-TCCCACCTTTCCCACTGTATC-3’ |
| G/- | SEQ52：5’-TCTTCCCATTCTTCTTACC-3’ |
(2)、PCR扩增体系为：
采用上述复合扩增引物进行PCR扩增
10μL体系：
模板DNA 1μL
复合扩增引物 2μL
Reaction mix 4.0μL
C-Taq DNA聚合酶 0.4μL
dH2O 2.6μL
(3)、PCR扩增程序为：
95℃变性2min，然后94℃变性30s，60℃退火60s，72℃延伸1min，进行29个循环，最后72℃保温10min，10℃保存。
4、毛细管电泳检测：
以SIZ-500作为DNA分子量内标，将上述PCR扩增产物1μL、甲酰胺12μL内标SIZ-5001μL混合后加入96孔板中，95℃变性3min，立即冰浴3min，离心后放入ABI 3130xl遗传分析仪进行电泳检测，其中2份志愿者的基因座分型检测结果如图2、3所示。
5、检测结果及建议：
(1)志愿者1的基因检测结果及建议:
检测结果显示该志愿者皮肤的胶原蛋白分解速度较快，皮肤弹性下降风险中等；抗晒能力强，紫外线照射下色素不容易沉着；皮肤抗氧化能力中等；皮肤保湿能力弱。鉴于头发密度也会受环境及平时护理影响，该志愿者可能头发密度一般。该检测结果与志愿者实际情况接近。
饮食方面：建议多食用猪蹄、猪皮、牛蹄筋、鸡翅、甲鱼、鱼皮等富含胶原蛋白的食物；多食用蔬菜(菠菜、甘蓝、萝卜玉米等)、水果(蓝莓、樱桃等)、绿茶、香菇真菌类等，另外蜂蜜、西红柿、西兰花、胡萝卜、牛奶、大豆、猕猴桃、三文鱼、海带等可能有利于皮肤保湿。避免奶油、全脂牛奶、人造黄油和奶糖，避免饱和脂肪酸，避免吃进太多含胡萝卜素的蔬果如胡萝卜、木瓜等。
护肤品方面：优选含有透明质酸、吡咯烷酮羧酸钠(PCANA)、尿素、神经酰胺、角鲨烷、氨基酸类、脂肪酸类、植物油类(氢化蓖麻油、乳木果油、葡萄籽油等)等成分的护肤品。避免含有香料、酒精、色素等成分分护肤品。
(2)志愿者2的基因检测结果及建议:
检测结果显示该志愿者的皮肤胶原蛋白分解速度快，皮肤弹性下降风险高；抗晒能力强，紫外线照射下色素不容易沉着；皮肤抗氧化能力中等；皮肤保湿能力弱；在无病理等意外情况影响下，该志愿者头发浓密。该检测结果与志愿者实际情况接近。
饮食方面：多食用抗氧化类食物如蔬菜(菠菜、甘蓝、萝卜玉米等)、水果(蓝莓、樱桃等)、绿茶、香菇真菌类等；富含维生素E的食物如坚果类(腰果、核桃、榛子等)；富含胶原蛋白的食物如猪蹄、猪皮、牛蹄筋、鸡翅、甲鱼、鱼皮等。避免奶油、全脂牛奶、人造黄油和奶糖，避免饱和脂肪酸以及含胡萝卜素的蔬果如胡萝卜、木瓜等。蜂蜜、西红柿、西兰花、胡萝卜、牛奶、大豆、猕猴桃、三文鱼、海带等可能有利于皮肤保湿。
护肤品方面：优选含有辅酶Q10、艾地苯醌、维生素C及其衍生物(维生素C葡萄糖苷、维生素C磷酸镁、维生素C棕榈酸酯)、α-硫辛酸、葡萄籽浸液、番茄红素等成分的护肤品；避免含有皂基、椰油酰羟乙磺胺、椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂基硫酸铵(ALS)，月桂醇硫酸酯钠(SLS)，月桂醇聚醚硫酸酯钠(SLES)，月桂醇聚醚硫酸酯(MLES)等成分的护肤品。
序列表
<110> 无锡中德美联生物技术有限公司
南京迪康金诺生物技术有限公司
<120> 同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用
<160> 52
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgagcacca gcatggctc 19
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tctccatctt ctacgcattg c 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tctccatctt ctacgcacgg c 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tctccatctt ctacgcactt c 21
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
atttcatctc catcttctac gcattgt 27
<210> 6
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
atttcatctc catcttctac gcacggt 27
<210> 7
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
atttcatctc catcttctac gcacttt 27
<210> 8
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
atttctttct ccatcttcta cgcagtgg 28
<210> 9
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
atttctttct ccatcttcta cgcacggg 28
<210> 10
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
atttctttct ccatcttcta cgcacttg 28
<210> 11
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
atttggcatc tccatcttct acgcattgt 29
<210> 12
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
atttggcatc tccatcttct acgcacgat 29
<210> 13
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
attggtcatc tccatcttct acgcacttt 29
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gcatggaagc tgttgactta c 21
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
caatgctata tgtcagttca gg 22
<210> 16
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
caatgctata tgtcagttac gg 22
<210> 17
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
caatgctata tgtcagttga tg 22
<210> 18
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
atttcaatgc tatatgtcag ttcaga 26
<210> 19
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
atttcaatgc tatatgtcag ttgcga 26
<210> 20
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
atttcaatgc tatatgtcag ttgata 26
<210> 21
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
atttattcaa tgctatatgt cagttcagt 29
<210> 22
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
atttattcaa tgctatatgt cagttgtgt 29
<210> 23
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
atttattcaa tgctatatgt cagttgatt 29
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
agagtttggg gagtgcatcg 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
atccgctgct cgctgcacca 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
atccgctgct cgctgctgca 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
atccgctgct cgctgctcga 20
<210> 28
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
atttatccgc tgctcgctgc accg 24
<210> 29
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
atttatccgc tgctcgctgc tagg 24
<210> 30
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
atttatccgc tgctcgctgc gctg 24
<210> 31
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
ttatccgctg ctcgctgcta gc 22
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
ttatccgctg ctcgctgcac cc 22
<210> 33
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ttatccgctg ctcgctgcgc ac 22
<210> 34
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
ctgtgggttc cgcattcat 19
<210> 35
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
attacaaccc cgaatatacg taaaga 26
<210> 36
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
attacaaccc cgaatatacg taagta 26
<210> 37
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
atattacaac cccgaatata cgtagata 28
<210> 38
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
acaaccccga atataccaaa agc 23
<210> 39
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
acaaccccga atataccaaa ttc 23
<210> 40
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
acaaccccga atataccaag atc 23
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gtgctgatgc ggtcaaagag t 21
<210> 42
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
acgtacaact ctgagaagcc tc 22
<210> 43
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
acgtacaact ctgagaaggc ac 22
<210> 44
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
acgtacaact ctgagaagga tc 22
<210> 45
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
attacgtaca actctgagaa ggctt 25
<210> 46
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
attacgtaca actctgagaa gccat 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
attacgtaca actctgagaa gcatt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
attgttacgt acaactctga gaaggctg 28
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<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
attgttacgt acaactctga gaagccag 28
<210> 50
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
attgttacgt acaactctga gaagcatg 28
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
tcccaccttt cccactgtat c 21
<210> 52
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
tcttcccatt cttcttacc 19
Claims (8)
1.同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，试剂盒包含6个SNP位点基因座的引物，所述6个SNP位点基因座为：MC1R(rs1805007)，NQO1(rs1800566)，AQP3(rs17553719)，FGFR2(rs4752566)，EDAR(rs3827760)，MMP1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号。
2.根据权利要求1所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述引物包括针对各个SNP位点基因座的共用上游引物和特异性下游引物，特异性下游引物于3’末端第2位、第3位或第4位引入错配碱基。
3.根据权利要求1或2所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述引物及其序列如下：
用于检测位点MC1R rs1805007 C/T/G/A的共用上游引物为：
SEQ1：5’-ATGAGCACCAGCATGGCTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007 C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ2：5’-TCTCCATCTTCTACGCATTGC-3’；
SEQ3：5’-TCTCCATCTTCTACGCACGGC-3’；
SEQ4：5’-TCTCCATCTTCTACGCACTTC-3’；
用于检测位点MC1R rs1805007 T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ5：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ6：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACGGT-3’；
SEQ7：5’-atttCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点MC1R rs1805007 G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ8：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCAGTGG-3’；
SEQ9：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACGGG-3’；
SEQ10：5’-atttcttTCTCCATCTTCTACGCACTTG-3’
用于检测位点MC1R rs1805007 A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ11：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCATTGT-3’；
SEQ12：5’-atttGGCATCTCCATCTTCTACGCACGAT-3’；
SEQ13：5’-attGGtCATCTCCATCTTCTACGCACTTT-3’
用于检测位点NQO1 rs1800566 C/T/A的共用上游引物为：
SEQ14：5’-GCATGGAAGCTGTTGACTTAC-3’；
用于检测位点NQO1 rs1800566 C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ15：5’-CAATGCTATATGTCAGTTCAGG-3’；
SEQ16：5’-CAATGCTATATGTCAGTTACGG-3’；
SEQ17：5’-CAATGCTATATGTCAGTTGATG-3’
用于检测位点NQO1 rs1800566 T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ18：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTCAGA-3’；
SEQ19：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGCGA-3’；
SEQ20：5’-atttCAATGCTATATGTCAGTTGATA-3’
用于检测位点NQO1 rs1800566 A的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ21：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTCAGT-3’；
SEQ22：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGTGT-3’；
SEQ23：5’-atttattCAATGCTATATGTCAGTTGATT-3’
用于检测位点AQP3 rs17553719 T/G/C的共用上游引物为：
SEQ24：5’-AGAGTTTGGGGAGTGCATCG-3’；
用于检测位点AQP3 rs17553719 T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ25：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCACCA-3’；
SEQ26：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTGCA-3’；
SEQ27：5’-ATCCGCTGCTCGCTGCTCGA-3’
用于检测位点AQP3 rs17553719 G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ28：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCACCG-3’；
SEQ29：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCTAGG-3’；
SEQ30：5’-atttATCCGCTGCTCGCTGCGCTG-3’
用于检测位点AQP3 rs17553719 C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ31：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCTAGC-3’；
SEQ32：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCACCC-3’；
SEQ33：5’-ttATCCGCTGCTCGCTGCGCAC-3’
用于检测位点FGFR2 rs4752566 T/G的共用上游引物为：
SEQ34：5’-CTGTGGGTTCCGCATTCAT-3’；
用于检测位点FGFR2 rs4752566 T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ35：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAAGA-3’；
SEQ36：5’-attACAACCCCGAATATACGTAAGTA-3’；
SEQ37：5’-atattACAACCCCGAATATACGTAGATA-3’
用于检测位点FGFR2 rs4752566 G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ38：5’-ACAACCCCGAATATACCAAAAGC-3’；
SEQ39：5’-ACAACCCCGAATATACCAAATTC-3’；
SEQ40：5’-ACAACCCCGAATATACCAAGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760 C/T/G的共用上游引物为：
SEQ41：5’-GTGCTGATGCGGTCAAAGAGT-3’；
用于检测位点EDAR rs3827760 C的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ42：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGCCTC-3’；
SEQ43：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGCAC-3’；
SEQ44：5’-ACGTACAACTCTGAGAAGGATC-3’
用于检测位点EDAR rs3827760 T的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ45：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGGCTT-3’；
SEQ46：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCCAT-3’；
SEQ47：5’-attACGTACAACTCTGAGAAGCATT-3’
用于检测位点EDAR rs3827760 G的特异性引物为下列核苷酸序列之一：
SEQ48：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGGCTG-3’；
SEQ49：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCCAG-3’；
SEQ50：5’-attgttACGTACAACTCTGAGAAGCATG-3’
用于检测位点MMP1 rs1799750 G/-的上游引物为：
SEQ51：5’-TCCCACCTTTCCCACTGTATC-3’；
用于检测位点MMP1 rs1799750 G/-的下游引物为：
SEQ52：5’-TCTTCCCATTCTTCTTACC-3’；
其中，下划线标记的碱基为引入的错配碱基。
4.根据权利要求3所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，检测位点为MC1R rs1805007 C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ4；检测位点为MC1R rs1805007 T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ5；检测位点为MC1R rs1805007 G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ9；检测位点为MC1R rs1805007 A时，使用引物组合为共用上游引物SEQ1以及SEQ12；检测位点为NQO1rs1800566 C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ16；检测位点为NQO1rs1800566 T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ20；检测位点为NQO1rs1800566 A时，使用引物组合为共用上游引物SEQ14以及SEQ22；检测位点为AQP3rs17553719 T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ27；检测位点为AQP3rs17553719 G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ29；检测位点为AQP3rs17553719 C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ24以及SEQ31；检测位点为FGFR2rs4752566 T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ34以及SEQ35；检测位点为FGFR2rs4752566 G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ34以及SEQ38；检测位点为EDARrs3827760 C时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ44；检测位点为EDARrs3827760 T时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ46；检测位点为EDARrs3827760 G时，使用引物组合为共用上游引物SEQ41以及SEQ48；检测位点MMP1 rs1799750G/-时，使用引物组合为上游引物SEQ51及SEQ52。
5.根据权利要求1或2所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述引物通过荧光染料FAM标记。
6.根据权利要求1或2所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含分子量内标，且通过荧光染料SIZ标记。
7.根据权利要求1或2所述的同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括反应混合物、热启动Taq酶、sdH2O；其中，反应混合物包括：MgCl2 7.5mM，Tris-HCl buffer 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM，BSA 2mg/mL。
8.权利要求1或2所述试剂盒在同时检测女性皮肤和发质中的应用。
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