CN107980058A - 植物生长促进微生物、组合物和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明申请涉及植物生长促进微生物(PGPM)、包含这些PGPM的组合物和使用这些PGPM的方法和/或用于增强植物健康、植物生长和/或植物产量,和/或用于预防、抑制、或治理植物病原体的发展或植物致病性病害的发展的组合物。本发明申请还提供采用本文所述的PGPM人为侵染的非天然存在的植物品种,以及种子、生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分、或它们的子代。
Description
技术领域
本专利申请涉及可用于增强植物生长或产量和/或用于抑制植物病原体和植物致病性病害发展的微生物菌株、组合物和方法。
对经由EFS-WEB作为文本文件提交的序列表的引用
据此依照37C.F.R.§1.52(e)(5)将创建于2015年8月18日的序列表作为110542字节大小的名称为“6824_Seq_List.txt”的文本文件以引用方式并入。
背景技术
植物生长促进微生物(PGPM),例如植物根际促生菌(PGPR)已在农业效益方面获得全世界的重视和认可。PGPM可通过不同的直接和间接机制影响植物生长。可在植物生长的相同或不同阶段同时或顺序地呈现活性的这些机制的一些示例包括(1)矿质营养素溶解和固氮增加(即,使营养素更易用于植物);(2)抑制土传病原体(例如,通过产生氰化氢、铁载体、抗生素、和/或对营养素的竞争);(3)改善植物对干旱、洪水、盐度和金属毒性的胁迫耐受性;以及(4)产生植物激素,例如吲哚-3-乙酸(IAA)。此外,一些PGPM产生酶1-氨基环丙烷-1-羧酸酯(ACC)脱氨酶,其水解1-氨基环丙烷-1-羧酸酯(ACC)即植物中乙烯的直接前体。通过降低幼苗中的乙烯浓度以及由此其抑制作用,这些PGPM刺激幼苗的根长度。PGPM的一些示例性类群可在以下门中发现:蓝细菌门(Cyanobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、以及变形菌门(Proteobacteria)。存在旨在认识PGPM的大量正在进行的科学研究,包括其适应、对植物生理和生长的影响、诱导系统抗性、植物病原体的生物防治、生物施肥、共接种的生存力、与植物微生物的相互作用,以及根部定殖机制方面。
由于其快速的根际定殖以及对植物生长和/或产量的刺激,目前开发PGPM来提高作物产量相当令人关注。事实上,用PGPM接种栽培植物目前被认为是一种有前景的农业方法。随着对环境关注的增加,例如关注地下水水质的过量肥料和食品中的杀虫剂暴露,生物替代方案很有前景并且变得有必要。因此,开发与肥料和杀虫剂相容的生物处理剂并且/或者甚至降低所使用的这些化合物的量可为农业产业的显著进步。
然而,缺乏有效的筛选和选择过程来获得具有促进植物健康/生长/产量能力的微生物菌株。还缺乏有效的选择方法来获得在促进植物健康、生长和/或产量方面协同地相互作用的微生物菌株的组合(或微生物聚生体)。令人遗憾地是,此类筛选和/或选择过程的缺乏减慢了植物-细菌共生的研究和农业中新PGPM的利用。因此,一直并迫切需要鉴定新的PGPM、PGPM合成聚生体,并且/或者测试其与现有可商购获得的作物管理产品的相容性。
发明内容
本专利申请的实施方案通过提供新的微生物菌株(PGPM)、分离株、培养物、组合物、合成聚生体、以及可用于增强植物的健康、生长和/或产量的方法解决前述需求。本发明实施方案的其它方面提供用于鉴定包含两种或更多种可用于促进植物健康、生长和/或产量的PGPM的微生物聚生体的方法。本发明还提供通过使用本文所公开的微生物菌株(PGPM)、分离株、培养物或组合物来处理植物种子的方法。本发明还提供用于预防、抑制、或治理植物病原体的发展或植物致病性病害的发展的方法。本专利申请还提供用本文所公开的至少一种微生物内生菌人为侵染的非天然存在的植物品种。其它实施方案提供非天然存在的植物品种的种子、生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分、或子代。其它实施方案还提供用于制备农业组合物的方法。
其它实施方案提供分离的微生物菌株(PGPM)、其分离的培养物、其生物纯培养物、以及其富集培养物。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16SrRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:113、123、126、131和149的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:133、134和138的核苷酸序列在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ IDNo:1-164中任一项所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%、或至少99.9%的序列同一性的核苷酸序列。一些实施方案提供包含上述任何DNA序列的微生物的属并且其如本文所述增强植物的健康、生长和/或产量。在一些实施方案中,微生物菌株为P0032_C7、P0048_B9、P0050_F5(也称为S2199、)、P0035_B2(也称为S2145,NRRL保藏号B-67091)、P0020_B1、P0047_A1(也称为S2284,NRRL保藏号B-67102)、P0033_E1(也称为S2177)、P0032_A8(也称为S2181,NRRL保藏号B-67099)、P0049_E7、P0042_A8(也称为S2167)、P0042_D5(也称为S2165)、P0042_B2(也称为S2168,NRRL保藏号B-67096)、P0042_B12(也称为S2189)、P0042_C2(也称为S2173,NRRL保藏号B-67098)、P0042_D10(也称为S2172,NRRL保藏号B-67097)、P0044_A3(也称为S2476)、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9(NRRL保藏号B-67092)、S2161_P0054_E8(NRRL保藏号B-67094)、S2164_P0054_F4、P0057_A3(也称为S2160,NRRL保藏号B-67093)、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12(NRRL保藏号B-67095)、P0147_D10(也称为S2291,NRRL保藏号B-67104)、P0147_G10(也称为S2292,NRRL保藏号B-67105)、P0160_F7(也称为S2351)、P0140_C10(也称为S2300,NRRL保藏号B-67107)、S2387、P0157_G5(也称为S2303,NRRL保藏号B-67108)、P0160_E1(也称为S2374)、P0134_G7(也称为S2280)、S2384(NRRL保藏号B-67112)、S2275(NRRL保藏号B-67101)、S2278、S2373(NRRL保藏号B-67109)、S2370、S2293(NRRL保藏号B-67106)S2382(NRRL保藏号B-67111)、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3(也称为S2404)、S2385(NRRL保藏号B-67113)、S2197(NRRL保藏号67100)、S2285(NRRL保藏号B-67103)、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423(NRRL保藏号B-67115)、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421(NRRL保藏号B-67114)、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112(NRRL保藏号B-67090)、S2375(NRRL保藏号B-67110)、和S2669(NRRL保藏号B-67117)、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644(NRRL保藏号B-67116)、S2328、S2646、或来源于这些菌株中任一项的菌株。
另一个实施方案提供微生物组合物,所述微生物组合物包含微生物菌株(PGPM)或其培养物,例如选自本文所述的那些的微生物菌株。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156、和159、的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158、的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,159,160,161,162,163和164的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:113、123、126、131和149的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:133、134和138的序列。任何以上微生物组合物任选地还可包含第二微生物菌株或其培养物,所述第二微生物菌株的16S rRNA基因序列包含选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163和164、的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种微生物菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,7576、77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163和164、的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,4,5,6,10,12,50,55,56、和57的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34,35,46,47,48,65,66,67,68,69,70,71,72,73、和74的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,21,22,23,24,25,26,30,31,32,33,41,42,62,63、和64的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18,19,36,37,75、和76的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11,13,58,59,60、和61的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27,38,39,40,43,44,45、和77的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,3,4,7,8,51,52,53,134、和135的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:14、16、78、79和80的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43,44,45,81,82,83,84,145和146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:24、86、87和88的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,81,82和83的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,75,76,81,82,83,84,145,146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
其它实施方案提供包含合成微生物聚生体的组合物。在一些实施方案中,合成聚生体包含a)第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;和b)第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使a)中第一微生物集合的竞争适应性增大的一种或多种微生物;其中将第一微生物集合和第二微生物集合组合成单一混合物作为合成聚生体。在一些实施方案中,合成聚生体或组合物促进或增强植物健康、生长和/或产量。在一些实施方案中,将根据本专利申请的合成聚生体或其组合物施用于植物(或其部分)、种子、或幼苗。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物组合物例如上文和下文所述的任何微生物组合物还包含农业有效量的化合物或组合物,其选自但不限于营养素、肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、和杀虫剂以及它们的组合。在本文所述的微生物组合物的一些实施方案中,微生物组合物还包含载体,例如(但不限于)有机或无机载体以及它们的组合。在一些实施方案中,适用于微生物组合物的载体包括但不限于粉土、泥炭、草皮、滑石、褐煤、高岭石、叶蜡石、沸石、蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑和蛭石以及它们的组合。在一些实施方案中,载体是植物种子。在一些实施方案中,微生物组合物被制成选自但不限于乳液、胶体、粉尘、颗粒、丸粒、粉末、喷雾和溶液的制剂。在一些实施方案中,本文所述的微生物组合物是种子包衣制剂。
其它实施方案提供具有包含如本文所述的微生物菌株(PGPM)或其培养物的包衣的植物种子处理剂。本发明还提供具有包含如本文所述的微生物组合物的包衣的植物。
其它实施方案中提供一种制备合成微生物聚生体的方法,该方法包括a)选择第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;b)选择第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使步骤a)中第一微生物集合的竞争适应性增大的一种或多种微生物;以及c)将这些微生物组合成单一混合物并且将该组合命名为合成聚生体。在一些实施方案中,所述方法包括将如本文所述的合成聚生体施用于植物(或其部分)、种子、或幼苗的另外步骤。本发明实施方案还提供如本文所述制备的合成微生物聚生体。本发明实施方案还提供一种促进植物健康、植物生长和/或植物产量的方法,该方法包括将如本文所述制备的合成微生物聚生体施用于植物、植物部分、或植物的周围环境。
其它实施方案提供用于处理植物种子或种子引发的方法。在一些实施方案中,所述方法包括使植物种子暴露于根据本发明实施方案的微生物菌株(PGPM)或其培养物或者与其接触。在一些实施方案中,方法包括使植物种子暴露于根据本发明实施方案的微生物组合物或与其接触。
其它实施方案提供用于增强植物的健康、生长和/或产量的方法。在一些实施方案中,此类方法包括将有效量的微生物菌株(PGPM)或其培养物施用于植物、植物部分、或施用于植物的周围环境。在一些实施方案中,此类方法包括将有效量的微生物组合物施用于植物或植物的周围环境。在一些实施方案中,方法包括在寄主植物于生长培养基或土壤中生长之前或同时,使一种或多种微生物菌株在所述寄主植物或植物部分的所述生长培养基或土壤中生长。在以上方法的一些实施方案中,将根据本发明实施方案的培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)分别以未经处理的对照植物、植物部分、或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x的浓度施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,在施用时或施用后,经处理的植物、植物部分、或植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)中微生物菌株(PGPM)的浓度为未经处理的对照植物、植物部分、或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x的浓度。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)以高于1×102CFU/mL的浓度施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,浓度范围为约1×102至约1×1010CFU/mL,例如在1×105至1×109CFU/mL范围内的浓度。在一些实施方案中,将培养物或组合物中的如本文所述的微生物菌株(PGPM)以至少1×106CFU/mL的浓度施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)导致经处理的植物、植物部分或植物的周围环境中微生物菌株的浓度为未经处理的植物或其周围环境中发现的菌株的至少2x的量。
在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在被施用于植物、植物部分,或被施用于植物的周围环境之后在植物上作为内生菌建立。在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在植物的生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分、和/或其子代中在植物上作为内生菌建立。在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在暴露于如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、或组合物或用其处理的植物的种子后代中作为内生菌建立。其它实施方案涉及用如本文所述的至少一种微生物菌株侵染的植物、植物部分、或种子。
其它实施方案提供用于预防、抑制、或治理植物的致病性病害的发展或者植物害虫、昆虫、或病原体的发展的方法。在一些实施方案中,此类方法包括将有效量的微生物菌株(PGPM)或其培养物施用于植物、植物部分、或施用于植物的周围环境。在一些实施方案中,此类方法包括将有效量的微生物组合物施用于植物、植物部分、或植物的周围环境。在一些实施方案中,方法包括在寄主植物于生长培养基或土壤中生长之前或同时,使一种或多种微生物菌株在所述寄主植物的所述生长培养基或土壤中生长。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)分别以未经处理的对照植物、植物部分、或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x浓度的浓度施用于植物(或其部分)或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,在施用时或施用后,经处理的植物(或其部分)或植物周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)中微生物菌株(PGPM)的浓度为未经处理的对照植物、植物部分、或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x的浓度。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)以高于1×102CFU/mL的浓度施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,浓度范围为约1×102至约1×1010CFU/mL,例如在1×105至1×109CFU/mL范围内的浓度。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)以至少1×106CFU/mL的浓度施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)导致经处理的植物、植物部分或植物的周围环境中微生物菌株的浓度为未经处理的植物或其周围环境中发现的菌株的至少2x的量。
在一些实施方案中,方法包括一种或多种微生物菌株在施用于植物、植物部分,或施用于植物的周围环境之后在植物上作为内生菌建立。在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在植物的生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分、和/或其子代中在植物上作为内生菌建立。在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在植物的花粉中作为内生菌建立。在一些实施方案中,一种或多种微生物菌株在暴露于如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、或组合物或用其处理的植物的种子后代中作为内生菌建立。在一些实施方案中,可通过根据本发明实施方案的微生物菌株、分离株、培养物、或组合物预防、抑制、或治理的植物、或植物部分的致病性病害的发展由选自但不限于以下项的植物病原体引起:毛盘孢属(Colletotrichum)、镰孢菌属(Fusarium)、赤霉属(Gibberella)、明梭孢属(Monographella)、青霉菌属(Penicillium)、腐霉属(Pythium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、罗尔斯通菌属(Ralstonia)和壳多孢属(Stagnospora)生物体。在一些实施方案中,其发展可由根据本发明实施方案的微生物菌株或其培养物、或微生物组合物预防、抑制或治理的病原体选自但不限于:毛盘孢属(Colletotrichum)、镰孢菌属(Fusarium)、赤霉属(Gibberella)、明梭孢属(Monographella)、青霉菌属(Penicillium)、腐霉属(Pythium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、罗尔斯通菌属(Ralstonia)和壳多孢属(Stagnospora)生物体。
其它实施方案提供非天然存在的植物。在一些实施方案中,非天然存在的植物用根据本发明实施方案的一种或多种微生物菌株(PGPM)人为侵染。该方面的一些实施方案中还提供非天然存在的植物的植物种子、生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分或子代。
其它实施方案提供用于制备农业组合物的方法。此类方法包括将根据本发明实施方案的微生物菌株、分离株或其培养物、或微生物组合物接种到基质之中或之上并使其生长。
特定实施方案包括:
1.一种分离的微生物菌株,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158、和159的序列。
2.一种微生物菌株的富集培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ IDNo:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158、和159的序列。
3.一种微生物菌株的分离的培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158和159的序列。
4.一种微生物菌株的生物纯培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158和159的序列。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158的序列。
6.根据实施方案1-4中任一项所述的培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159的序列。
7.一种分离的微生物菌株,其选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、以及S2646或来源于它们的菌株。
8.一种微生物菌株的分离的培养物,所述微生物菌株选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、以及S2646或来源于它们的菌株。
9.一种微生物菌株的富集培养物,所述微生物菌株选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、以及S2646或来源于它们的菌株。
10.一种微生物菌株的生物纯培养物,所述微生物菌株选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、以及S2646或来源于它们的菌株。
11.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156,158、和159的序列。
12.根据实施方案11所述的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158的序列。
13.根据实施方案11所述的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159的序列。
14.根据实施方案11-13中任一项所述的组合物,其还包含第二微生物菌株,所述第二微生物菌株的16S rRNA基因序列包含选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163和164的序列。
15.一种包含至少两种微生物菌株的组合物,其中所述微生物菌株中每种的16SrRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163和164的序列。
16.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:1,2,4,5,6,10,12,50,55,56、和57的序列。
17.根据实施方案16所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:6和57的序列。
18.根据实施方案16或17所述的组合物,其中所述组合物包含至少两种微生物菌株,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:6和57的序列。
19.根据实施方案16所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2,5,10,12,50,55、和56的序列。
20.根据实施方案16或19所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2,5,10,12,50,55、和56的序列。
21.根据实施方案16、19和20中任一项所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:5和56的序列,并且任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2、10、12、50和55的序列。
22.根据实施方案16和19-21中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少七种(7)微生物菌株,其中所述至少七种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:2,5,10,12,50,55、和56的序列。
23.根据实施方案16所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,4,9,11,49、和54的序列。
24.根据实施方案16或23所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,4,9,11,49、和54的序列。
25.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:34,35,46,47,48,65,66,67,68,69,70,71,72,73、和74的序列。
26.根据实施方案25所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:48、69和72的序列。
27.根据实施方案25或26所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:48、69和72的序列。
28.根据实施方案25-27中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少三种(3)微生物菌株,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因包含SEQ ID No:48、69和72的序列。
29.根据实施方案25所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。
30.根据实施方案25或29所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。
31.根据实施方案25、29和30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:47、68和71的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35、66、73和74的序列。
32.根据实施方案25和29-31中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少七种(7)微生物菌株,其中所述至少七种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。
33.根据实施方案25所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34、46、65、67和70的序列。
34.根据实施方案25或33所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34、46、65、67和70的序列。
35.根据实施方案25、33和34中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少五种(5)微生物菌株,其中所述至少五种菌株的16S rRNA基因包含SEQ ID No:34、46、65、67和70的序列。
36.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:20,21,22,23,24,25,26,30,31,32,33,41,42,62,63、和64的序列。
37.根据实施方案36所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:26和64的序列。
38.根据实施方案36或37所述的组合物,其中所述组合物包含至少两种(2)微生物菌株,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:26和64的序列。
39.根据实施方案36所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。
40.根据实施方案36或39所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。
41.根据实施方案36、39或40中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:25和63的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,31,33、和42的序列。
42.根据实施方案36和39-41中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少八种(8)微生物菌株,其中所述至少八种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。
43.根据实施方案36所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。
44.根据实施方案36或43所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。
45.根据实施方案36、43和44中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少六种(6)微生物菌株,其中所述至少六种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。
46.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:18,19,36,37,75、和76的序列。
47.根据实施方案46所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:19、37和76的序列。
48.根据实施方案46或47所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:19、37和76的序列。
49.根据实施方案46-48中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少三种(3)微生物菌株,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:19、37和76的序列。
50.根据实施方案46所述的组合物,其中所述组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18、36和75的序列。
51.根据实施方案46或50所述的组合物,其中所述组合物包含两种或更多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18、36和75的序列。
52.根据实施方案46、50和51中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含至少三种(3)微生物菌株,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:18、36和75的序列。
53.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11,13,58,59,60、和61的序列。
54.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:13、59和61的序列。
55.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:13、59和61的序列。
56.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:13、59和61的序列。
57.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11、58和60的序列。
58.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:11、58和60的序列。
59.根据实施方案53所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:11、58和60的序列。
60.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27,38,39,40,43,44,45、和77的序列。
61.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:40和45的序列。
62.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:40和45的序列。
63.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:39、44和77的序列。
64.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:39、44和77的序列。
65.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:39和44的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:77的序列,或它们的培养物。
66.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:39、44和77的序列。
67.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27、38和43的序列。
68.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:27、38和43的序列。
69.根据实施方案60所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:27、38和43的序列。
70.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,3,4,7,8,51,52,53,134、和135的序列。
71.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16SrRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:8、53和135的序列。
72.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:8、53和135的序列。
73.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:8、53和135的序列。
74.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:3、7、52和134的序列。
75.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:3、7、52和134的序列。
76.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:7、52和134的序列,并且其中所述组合物任选地还包含附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:3的序列,或它们的培养物。
77.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少四种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:3、7、52和134的序列。78.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:1、4和51的序列。
79.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:1、4和51的序列。
80.根据实施方案70所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:1、4和51的序列。
81.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:14、16、78、79和80的序列。
82.根据实施方案81所述的组合物,其中所述微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含SEQ ID No:79的序列。
83.根据实施方案81所述的组合物,所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:78和80的序列。
84根据实施方案81所述的组合物,所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:78和80的序列。
85.根据实施方案81所述的组合物,所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:14和16的序列。
86.根据实施方案81所述的组合物,所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:14和16的序列。
87.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43,44,45,81,82,83,84,145和146的序列。
88.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:45、83和146的序列。
89.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:45、83和146的序列。
90.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16SrRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:44、82和145的序列。
91.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:44、82和145的序列。
92.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:44和82的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:145的序列,或它们的培养物。
93.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:44、82和145的序列。
94.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43、81和84的序列。
95.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:43、81和84的序列。
96.根据实施方案87所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:43、81和84的序列。
97.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:24、86、87和88的序列。
98.根据实施方案97所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:87和88的序列。
99.根据实施方案97所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:87和88的序列。
100.根据实施方案97所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:24和86的序列。101.根据实施方案97所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:24和86的序列。
102一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,81,82、和83的序列。
103.根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:53和83的序列。104.
根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:53和83的序列。
105.根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:52和82的序列。
106.根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:52和82的序列。
107.根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51和81的序列。
108.根据实施方案102所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:51和81的序列。
109.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,75,76,81,82,83,84,145、和146的序列。
110.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:53、83和146的序列。
111.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:53、83和146的序列。
112.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:53、83和146的序列。
113.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:52、76、82和145的序列。
114.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:52、76、82和145的序列。
115.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52、82和145的序列,并且其中所述组合物任选地还包含附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:76的序列,或它们的培养物。
116.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少四种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:52、76、82和145的序列。
117.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51、75、81和84的序列。
118.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51、75、81和84的序列。
119.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含三种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51、75、81和84的序列。
120.根据实施方案109所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16SrRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51、75、81和84的序列。
121.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,75,76,81,82,83,84,145,146,86,87,160,161的序列。
122.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:53、83和146的序列。
123.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:53、83和146的序列。
124.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:53、83和146的序列。
125.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:52,76,82,145,87、和161的序列。
126.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:52,76,82,145,87、和161的序列。
127.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52、82和145的序列,并且其中所述组合物任选地还包含附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:76、87和161的序列,或它们的培养物。
128.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少六种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少六种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:52,76,82,145,87、和161的序列。
129.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51,75,81,84,86、和160的序列。
130.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51,75,81,84,86、和160的序列。
131.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含三种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ IDNo:51,75,81,84,86、和160的序列。
131.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,75,81,84,86、和160的序列。
132.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少五种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,75,81,84,86、和160的序列。
133.根据实施方案121所述的组合物,其中所述微生物组合物包含至少六种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,75,81,84,86、和160的序列。
134.一种组合物,其包含选自以下项的一种或多种微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
135.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
136.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
137.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、106_E8、P0018_A1、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
138.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
139.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0147_D10或S2291;P0147_G10或S2292;PS160_F7或S2351,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
140.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0140_C10或S2300;S2387;P0157_G5或S2303,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
141.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0160_E1或S2374;P0134_G7或S2280;S2384,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
142.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2275;S2278,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
143.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自P0157_G5或S230;S2373;S2375,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
144.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2293;S2382,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
145.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2385和S2373,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
146.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2385、S2669、S2373和S2375,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
147.根据实施方案134所述的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株选自S2385、S2669、S2373、S2375、S2293和S2644,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。
148.一种合成微生物聚生体,其包含
a)第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;以及
b)第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使a)中第一微生物集合的竞争适应性增大的一种或多种微生物;
其中将第一微生物集合和第二微生物集合组合成单一混合物作为合成聚生体。
149.根据实施方案148所述的合成微生物聚生体,其中第一微生物集合中的一种或多种微生物增强植物的营养可用性和/或营养摄取、调节植物激素水平、或者抑制或阻碍植物病原体(例如,作为生物杀虫剂)。
150.根据实施方案148所述的合成微生物聚生体,其中第一微生物集合中的一种或多种微生物展示出选自以下的活性中的一种或多种:固氮、IAA产生、ACC脱氨酶活性、磷酸盐增溶和/或铁增溶。
151.根据实施方案148所述的合成微生物聚生体,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中一种或多种微生物的竞争适应性增强的代谢物。
152.根据实施方案148所述的合成微生物聚生体,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中一种或多种微生物的铁获取增强的铁载体。
153.根据实施方案148所述的合成微生物聚生体,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生杀菌、抑菌或者以其它方式调节如下微生物的生长的代谢物,所述微生物不同于第一和第二微生物集合的微生物并对第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性有害。
154.根据实施方案148所述的合成聚生体,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生抑制对第一集合中的一种或多种微生物潜在有害的微生物的生长或适应性的铁载体。
155.一种组合物,其包含根据实施方案148-154中任一项所述的合成聚生体。
156.一种制备合成微生物聚生体以益于植物健康和生长性能的方法,该方法包括:
a)选择第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;
b)选择第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使第一微生物集合的竞争适应性增大的一种或多种微生物;以及
c)将这些微生物组合成单一混合物并且将该组合命名为合成聚生体。
157.根据实施方案156所述的方法,其中第一微生物集合中的一种或多种微生物增强植物的营养可用性和/或营养摄取、调节植物激素水平、或者抑制或阻碍植物病原体(例如,作为生物杀虫剂)。
158.根据实施方案156所述的方法,其中第一微生物集合中的一种或多种微生物展示出选自以下的活性中的一种或多种:固氮、IAA产生、ACC脱氨酶活性、磷酸盐增溶和/或铁增溶。
159.根据实施方案156所述的方法,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中一种或多种微生物的竞争适应性增强的代谢物。
160.根据实施方案159所述的方法,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中一种或多种微生物的铁获取增强的铁载体。
161.根据实施方案156所述的方法,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生杀菌、抑菌或者以其它方式调节如下微生物的生长的代谢物,所述微生物不同于第一和第二微生物集合的微生物并对第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性潜在有害。
162.根据实施方案161所述的方法,其中第二微生物集合中的一种或多种微生物产生的铁载体抑制对第一集合中的一种或多种微生物潜在有害的微生物的生长或适应性。
163.根据实施方案156-161中任一项所述的方法,其中步骤(b)中的微生物补充有惰性配方组分。
164.一种合成微生物聚生体,其通过根据实施方案156-163中任一项所述的方法制备。
165.一种组合物,其包含通过根据实施方案156-163中任一项所述的方法制备的合成微生物聚生体。
166.根据实施方案11-133、155和165中任一项所述的组合物,其还包含农业有效量的选自以下的化合物或组合物:营养素、肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂以及杀虫剂。
167.一种包含微生物菌株的组合物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:1-164的序列,并且还包含农业有效量的选自以下的化合物或组合物:营养素、肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂以及杀虫剂。
168.根据实施方案11-133、155和165-167中任一项所述的组合物,其还包含载体。
169.根据实施方案168所述的组合物,其中所述载体选自泥炭、草皮、滑石、褐煤、高岭石、叶蜡石、沸石、蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑和蛭石。
170.根据实施方案11-133、155和165-169中任一项所述的组合物,其中所述组合物被制成选自乳液、胶体、粉尘、颗粒、丸粒、粉末、喷雾和溶液的制剂。
171.根据实施方案168所述的组合物,其中所述载体是植物种子。
172.一种植物种子,其具有包含根据实施方案1-10中任一项所述的微生物菌株或培养物的包衣。
173.一种植物种子,其具有包含根据实施方案11-133、155和165-170中任一项所述的组合物的包衣。
174.一种用于处理植物种子或种子引发的方法,所述方法包括将所述植物种子暴露于根据实施方案1-10中任一项所述的微生物菌株或培养物或者与其接触的步骤。
175.一种用于处理植物种子或种子引发的方法,所述方法包括将所述植物种子暴露于根据实施方案11-133、155和165-170中任一项所述的组合物或与其接触的步骤。
176.一种用于增强植物的健康、生长或产量的方法,所述方法包括将有效量的根据实施方案1-10中任一项所述的微生物菌株或培养物施用于植物或施用于植物的周围环境。
177.一种用于增强植物的生长或产量的方法,所述方法包括将有效量的根据实施方案11-133、155和165-170中任一项所述的组合物施用于植物或施用于植物的周围环境。
178.根据实施方案176或177所述的方法,其还包括在将植物、植物种子或植物幼苗栽培到土壤中之前对所述土壤进行灭菌的步骤。
179.根据实施方案176-178中任一项所述的方法,其中在寄主植物于生长培养基或土壤中生长之前或同时,使所述微生物菌株在所述寄主植物的所述生长培养基或土壤中生长。
180.根据实施方案176-179中任一项所述的方法,其中所述微生物菌株在所述植物上作为内生菌建立。
181.一种用于预防、抑制或治理植物的致病性病害发展的方法,所述方法包括将有效量的根据实施方案1-10中任一项所述的微生物菌株或培养物施用于植物或施用于植物的周围环境。
182.一种用于预防、抑制或治理植物的致病性病害发展的方法,所述方法包括将有效量的根据实施方案11-133、155和165-170中任一项所述的组合物施用于植物或施用于植物的周围环境。
183.根据实施方案181或182所述的方法,其中在寄主植物于生长培养基或土壤中生长之前或同时,使所述微生物菌株在所述寄主植物的所述生长培养基或土壤中生长。
184.根据实施方案181-183中任一项所述的方法,其中所述致病性病害由选自以下的植物病原体引起:毛盘孢属、镰孢菌属、赤霉属、明梭孢属、青霉菌属、腐霉属和壳多孢属生物体。
185.根据实施方案176-184中任一项所述的方法,其中将微生物菌株施用于土壤、种子、根、花、叶、果实、植株的一部分或整个植株。
186.根据实施方案176-185中任一项所述的方法,其中所述植物为玉米植物、大豆植物或番茄植物。
187.一种植物,所述植物用根据实施方案1-10中任一项所述的微生物菌株或培养物人为侵染。
188.一种植物,所述植物用根据实施方案11-133、155和165-170中任一项所述的组合物人为侵染。
189.一种根据实施方案188所述的植物的植物种子、生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分或子代。
190.一种用于装配包含两种或更多种与植物健康、生长和/或产量相关联的微生物菌株的微生物聚生体的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)提供多个植物根际样品;
(2)从步骤(1)中提供的各个样品中分离多种基因组DNA;
(3)测定来自步骤(2)中分离的多种基因组DNA的每种的多个16S rRNA基因片段的序列;
(4)在其序列在步骤(3)中测定的多个16S rRNA基因片段的每一者中,测定每个所述16S rRNA基因片段的(绝对或相对)丰度;
(5)测定步骤(1)的根际样品从其采集的各个植物的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量;
(6)将步骤(4)中测定的各个16S rRNA基因片段的丰度与步骤(5)中测定的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联;
(7)选择其丰度与植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联的至少一个16S rRNA基因片段,如步骤(6)中所测定;
(8)在所述多个样品的范围内,将步骤(7)中选择的至少一个16S rRNA基因片段的丰度与其序列在步骤(3)中测定的其它多个16S rRNA基因片段的丰度相关联;
(9)在所述多个样品的范围内,鉴定其丰度与步骤(7)中选择的至少一个16S rRNA基因片段的丰度相关联的一个或多个16S rRNA基因片段;
(10)鉴定两种或更多种微生物菌株,所述微生物菌株分别包含在步骤(7)和(9)中鉴定的16S rRNA基因片段;以及
(11)通过将所述菌株组合为单一混合物,将在步骤(10)中鉴定的所述两种或更多种微生物菌株装配成微生物聚生体。
191.一种通过根据实施方案190所述的方法装配的微生物聚生体。
192.一种增强植物的健康、生长或产量的方法,所述方法包括将有效量的根据实施方案191所述的微生物聚生体施用于植物或施用于植物的周围环境。
193.一种组合物,其包含一种或多种微生物菌株,其中所述一种或多种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
194.根据实施方案193所述的组合物,其包含至少两种微生物菌株,其中所述至少两种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
195.根据实施方案193所述的组合物,其包含至少三种微生物菌株,其中所述至少三种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
196.根据实施方案193所述的组合物,其包含至少四种微生物菌株,其中所述至少四种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
197.一种组合物,其包含选自以下的微生物聚生体:
a)聚生体A:P0035_B2或S2145、P0032_C7、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0033_E1或S2177;
b)聚生体B:P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、P0042_D5或S2165;
c)聚生体C:P0038_D2或S2166、P0018_A11、P0047_E2、P0018_A1、P0047_C1、P0042_E1、P0047_E8;
d)聚生体D:S2142_P0061_E11、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2159_P0058_B9、S2163_P0019_A12;
e)聚生体E:P0147_D10或S2291、P0160_F7或S2351、P0147_G10或S2292;
f)聚生体F:P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303;
g)聚生体G:S2384、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280;
h)聚生体H:S2275、S2278;
i)聚生体I:S2373、S2375、P0157_G5或S2303;
j)聚生体J:S2293、S2382;
k)聚生体K:S2385和S2373;
l)聚生体N:S2327(或SEQ ID No:99或100)、S2329(或SEQ ID NO:97或98)、S2330(或SEQ ID NO:101或102)、S2332(或SEQ ID NO:113、114或115)、S2333(或SEQ ID NO:95或96)和S2328(或SEQ ID NO:162或163);
m)聚生体P:S2373(或SEQ ID No:81、82或83)以及P0042_B2或S2168(或SEQ IDNo:65或66);
n)聚生体R:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)以及P0042_B2或S2168(或SEQ IDNo:65或66);
o)聚生体S:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)和S2421(或SEQ ID NO:136或137);
p)聚生体T:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)和S2330(或SEQ ID NO:101或102);
q)聚生体AB:S2159_P0058_B9(或SEQ ID No:18或19)、S2161_P0054_E8(或SEQ IDNO:36或37)以及S2163_P0019_A12(或SEQ ID No.75或76);
r)聚生体AC:S2373(或SEQ ID No:81、82、或83)、S2385(或SEQ ID NO:51、52或53)以及P0147_D10或S2291(或SEQ ID No:11或13)、S2293(或SEQ ID NO:86或87)、S2382(或SEQ ID NO:24或88)、S2487(或SEQ ID NO:20或129)、S2644(或SEQ ID NO:160或161)、P0042_A8或S2167(或SEQ ID No:34或35)、P0038_D2或S2166(或SEQ ID No:30或31)、P0042_D10或S2172(或SEQ ID No:70、73或74)、S2159_P0058_B9(或SEQ ID NO:18或19)、S2161_P0054_E8(或SEQ ID NO:36或37)、以及S2163_P0019_A12(或SEQ ID No.75或76);或者
s)聚生体AF:S2373(或SEQ ID No:81、82、或83)、S2385(或SEQ ID NO:51、52或53)和S2646(或SEQ ID NO:16或164)。
198.根据权利要求134所述的组合物,其包含至少两种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
199.根据权利要求134所述的组合物,其包含至少三种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
200.根据权利要求134所述的组合物,其包含至少四种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
附图说明
图1A示出无菌土壤中经微生物聚生体A-D处理的甜玉米种子的各个处理(n=3;+/-标准偏差)的平均甜玉米植物生物量;图1B示出无菌土壤中经微生物聚生体A-D处理的甜玉米种子的各个处理(n=3;+/-标准偏差)的平均甜玉米根生物量。
图2示出在生长47天时无菌土壤对照和微生物聚生体B(P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、和P0042_D5或S2165)处理的甜玉米生长的照片,其中左侧的三个花盆是一式三份对照处理,并且右侧的三个花盆是一式三份聚生体B处理。
图3示出在收获并除去土壤之后无菌土壤对照和微生物聚生体B(P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、和P0042_D5或S2165)处理的甜玉米生长的照片,其中左侧的三个植株是一式三份对照处理,并且右侧的三个植株是一式三份聚生体B处理。
图4示出在生长10天后地表土壤中处理G(n=4)和缓冲液对照(n=3)的照片。
图5示出地表土壤中微生物处理和对照(Ctrl Buf(n=1)和Ctr NT,n=1)的根(n=3)和苗(n=4)的平均质量+/-均值标准误差。A.示出处理F、H和G以及Ctrl Buf和Ctr NT的平均根质量。B.示出处理F、H、E和S2376以及Ctrl Buf和Ctr NT的平均苗质量。
图6示出使用MS/植物凝胶培养基在PlantCon容器中的测试II幼苗生长。A)在第三天将已发芽的种子转移到PlantCon。B)第五天PlantCon容器中幼苗生长的示例。
图7示出幼苗测量。在第7天,从PlantCon容器中取出植株。记录每个植株的苗长度和根长度,并且计算各个处理的平均值。A)测试II中的对照(仅缓冲液)处理。B)测试II中的菌株S2330处理。
图8示出测试I幼苗生长结果。针对苗长度、根长度、以及苗+根长度绘制平均值。误差线为标准偏差(n=2-4)。星号指示相比于对照处理的显著性(p<0.05)。
图9示出测试II幼苗生长结果。针对苗长度、根长度(三个最长根的总和)、以及苗+根长度绘制平均值。误差线为标准偏差(n=5)。星号指示相比于对照处理的显著性(p<0.05)。
图10示出等于或大于商业产品处理(白色条:QR)和对照(条纹条:M9,盐水)的处理的平均植株质量。误差线为均值标准误差(SEM;n=3-10)。星号指示相比于对照处理的显著性(t检验;p<0.05)。
图11示出大于对照(条纹条:M9和盐水)、商业产品(白色条:QR)的平均值的处理的平均植株高度。误差线为均值标准误差(SEM;n=3-10)。星号指示相比于对照处理的显著性(t检验;p<0.05)。
图12示出大于对照(条纹条:M9,盐水)、商业产品(白色条:QR)的平均值的处理的平均植株V-阶段。误差线为均值标准误差(SEM;n=3-10)。星号指示相比于对照处理的显著性(t检验;p<0.05)。
图13示出在氮肥施用范围内(NH4Cl:2mM、0.2mM、0.02mM、0.002mM和0)两种处理(无微生物对照和S2421)的平均叶绿素含量(SPAD单位;+/-标准偏差;n=43-49)。星号指示对其对应未接种对照的显著性差异(p<0.001)。
图14示出对11种处理(聚生体E、F、G、H、I和J;单一菌株S2291、S2300、S2384、S2373和S2376)而言每个微生物处理的甜玉米植株相对于缓冲液对照的分蘖百分比。
图15示出处理S2376、S2300、E、J和缓冲液对照抽雄期的叶绿素平均值+/-均值标准误差(SEM)。
图16示出对单一菌株处理剂S2373和聚生体处理剂E、G、I和J而言每英亩的可销售穗的甜玉米产量增加百分比。
图17示出在无菌土壤中的饲料玉米生长实验中,对A)植物生物量,B)植株高度和C)最嫩真叶的叶绿素而言单一菌株处理效果相对于缓冲液对照的Z得分(标准偏差)。
图18示出在无菌土壤中的饲料玉米生长实验中,对A)植物生物量,B)植株高度和C)最嫩真叶的叶绿素而言单一菌株或聚生体处理效果相对于缓冲液对照的Z得分(标准偏差)。
图19示出在无菌土壤中的饲料玉米生长实验中,对A)植物生物量,B)植株高度和C)最嫩真叶的叶绿素而言聚生体处理效果相对于缓冲液对照的Z得分(标准偏差)。
图20示出经单一菌株S2373和聚生体K处理的第二幼苗的拟南芥属(Arabidopsis)生物量。在第20天修剪幼苗。星号表示显著性(t检验,p<0.05)。
图21示出经单一菌株S2373、S1112和聚生体K处理的第一幼苗的拟南芥属生物量。在第25天修剪幼苗。星号表示显著性(t检验,p<0.05)。
图22示出采用5种微生物处理剂(S2373、S1112、聚生体K、I和S)在对照(水/H2O)和病害(瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)/PA2)条件下6天后大豆幼苗的出苗百分比。
图23示出采用5种微生物处理剂(S2373、S1112、聚生体K、I和S)在对照(水/H2O)和病害(瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)/PA2)条件下6天后大豆幼苗的植物健康得分。12个平行测定植物中的每一者按0(病害)到3(健康)级评分,并且报告每种处理的总和(最大得分36)。
具体实施方式
A.定义
除非另有说明,否则本文所用的所有专门术语、符号和其它科学术语或专有名词旨在具有本专利申请所属的技术领域的技术人员通常理解的含义。在一些情况下,为清楚起见和/或易于参考,具有通常理解的含义的术语在此被定义,并且本文此类定义所包含的内容不应必须被解释为与本领域中一般理解的本质上不同。此处描述或参考的许多技术和方法是本领域的技术人员公知且普遍采用的。
除非上下文另外明确规定,单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个指代物。例如,“一个细胞”包括一个或多个细胞,包括它们的混合物。
如本文所用,分离的微生物菌株是已从其天然环境中移出的菌株。因此,术语“分离的”并不一定反映微生物纯化的程度。但是,在不同的实施方案中,“分离的”培养物已以至少2x或5x或10x或50x或100x从其所分离的原材料纯化。作为一个非限制性示例,如果培养物作为原材料从土壤分离,则生物体可分离至如下程度:其在给定量的纯化或部分纯化的材料(例如,土壤)中的浓度为在初始原材料中的至少2x或5x或10x或50x或100x。
微生物菌株的“基本上纯的培养物”是指基本上不包含除期望的一种或多种微生物菌株之外的其它微生物的培养物。换言之,微生物菌株的基本上纯的培养物基本上不含可包括微生物污染物以及不期望的化学污染物的其它污染物。
如本文所用,“生物纯的”菌株旨在表示从通常在天然状态下与其相关联的材料中分离的菌株。与通常不天然存在的其它菌株、或化合物或材料相关联的菌株仍被定义为“生物纯的”。特定菌株的单一培养物当然是“生物纯的”。在不同实施方案中,“生物纯的”培养物已以至少2x或5x或10x或50x或100x或1000x或更高(至本领域技术人员视为可行的程度)从通常在天然状态下与其相关联的材料纯化。作为一个非限制性示例,如果培养物通常与土壤相关联,则生物体可为如下程度的生物纯:其在给定量的通常与其相关联的纯化或部分纯化的材料(例如,土壤)中的浓度为在初始未纯化材料中的至少2x或5x或10x或50x或100x或1000x或更高(至本领域技术人员视为可行的程度)。
如本文所用,术语分离的微生物菌株的“富集培养物”是指其中培养物的总微生物群体包含多于50%、60%、70%、80%、90%或95%的分离的菌株的微生物培养物。
如本文所用,术语“培养”是指在各种类型培养基之上或之中繁殖生物体。合适的培养基是本领域普通技术人员已知的。
如本文所用,“组合物”意指活性剂(例如,本文所述的PGPM或微生物菌株)与至少一种其它化合物、载体、或组合物的组合,该其它化合物、载体、或组合物可为惰性的(例如,可检测试剂或标记或液体载体)或活性的,例如但不限于肥料、营养素或杀虫剂。微生物组合物是指包含至少一种微生物物种的组合物。
由多个核糖体蛋白和三个核糖体RNA(rRNA)分子构成的核糖体是蛋白质合成的关键组分。由16S rRNA基因编码的16S亚基rRNA已成为微生物系统发育研究关注的焦点。16SrRNA基因序列在分类群之间高度保守,但也具有高度多态性区域。此外,认为RNA序列的变化率在进化时间内相对恒定,从而使科学家能够确定不同生物体的相对亲缘关系。
如本文所用,“有效量”为足以实现有益和/或期望结果的量。有效量可以在一次或多次施用中施用。在治疗、抑制或保护方面,有效量为足以缓解、稳定、好转、减缓或延迟目标侵染、非生物胁迫或病害状态发展的量。在提及微生物时本文所用表达“有效微生物”旨在表示受试菌株表现出以统计上的显著水平超过未处理对照的促进植物健康、生长和/或产量的程度或者抑制致病性病害的程度。在一些情况下,表达“有效量”在本文用于指在如本文所述的合适处理条件下相对于在未处理对照中发生的结果获得有益或期望结果所需的微生物处理剂的量。例如,表达“农业有效量”在本文用于指在如本文所述的合适处理条件下相对于在未处理对照中发生的结果获得农业有益或期望结果所需的微生物处理剂的量。应当施用的农业制剂或组合物的有效量可经由结合应用领域的常识容易地确定,以改善植物健康、生长和/或产量,防治例如昆虫、植物病害、或杂草。
如本文所用,“营养素”意指能够为植物提供一种或多种营养元素的化合物或组合物。在一些实施方案中,营养素为植物提供选自以下的一种或多种应营养元素:氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)、铁(Fe)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、镍(Ni)、硼(B)和钼(Mo)。在一些实施方案中,如本文所用的营养素为植物提供氮(N)、磷(P)和钾(K)中的至少一种。在一些实施方案中,营养素为植物提供钙(Ca)、镁(Mg)和硫(S)中的至少一种。在一些实施方案中,本专利申请的实施方案的营养素为植物提供铁(Fe)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、镍(Ni)、硼(B)和钼(Mo)中的至少一种。在一些实施方案中,营养素为促进植物从土壤摄取选自以下的一种或多种营养元素的化合物或组合物:氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)、铁(Fe)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、镍(Ni)、硼(B)和钼(Mo)。
如本文所用,“肥料”意指添加至植物或土壤以改善植物健康、生长和/或产量的化合物或组合物。在一些实施方案中,肥料通过为植物提供营养素(例如本文所述的营养素)来改善植物健康、生长和/或产量。肥料包括但不限于无机肥料、有机(或天然)肥料、颗粒状肥料和液体肥料。颗粒状肥料为固体颗粒,而液体肥料则由与水混合以形成液体肥料溶液的水溶性粉末或液体浓缩物制成。在一些实施方案中,植物可快速吸收大部分水溶性肥料,而颗粒状肥料则可能在植物能够获得其营养素之前需要一段时间来溶解或分解。高技术的颗粒状肥料具有意指它们在一段时间内缓慢释放其营养素的“缓释”、“定时释放”或“控释”特性、同义术语。与合成来源相反,有机肥料来自有机来源,例如但不限于堆肥、粪肥、血粉、棉籽粉、羽毛粉、蟹粉或其它。还存在一些非有机的天然肥料,例如绿砂,其包含钾、铁、钙及其它营养素。这些被认为适用于有机园艺,因为它们不是合成的,但却来自于地表的天然富矿物质沉积物。有机肥料依赖于土壤中的微生物,以将它们分解成植物可消化的块。在一些实施方案中,有机肥料比合成肥料更有利于土壤微生物、蚯蚓、以及其它菌群,因为大多数有机肥料并未将过量盐和酸添加到土壤中。无机肥料也被称为合成或人工肥料。无机肥料是制造的。
“抑菌”化合物或试剂、或抑菌剂(缩写为Bstatic)是阻止细菌生长和繁殖而不必以其它方式伤害它们的生物或化学试剂。“杀螨剂”意指使不期望的螨(包括但不限于尘螨)的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀细菌剂”意指使不期望的细菌例如(但不限于)对植物生长不利的那些的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀真菌剂”是指使不期望的真菌例如(但不限于)对植物生长不利的那些的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀线虫剂”是指使不期望的线虫动物的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀昆虫剂”是指使不期望的昆虫例如(但不限于)对植物生长有害的那些的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀微生物剂”是指使不期望的微生物例如(但不限于)对植物生长有害的那些的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。“杀虫剂”是指使不期望的害虫例如(但不限于)对植物生长有害的那些的死亡率增加或极大抑制其生长、繁殖、或传播的化合物或组合物。
如本文所用,术语“载体”是指支撑存活的微生物的物质或组合物。此类载体可为有机或无机的。
“种子引发”或“种子的引发”意指控制种子内的水合程度以使得发芽所需的代谢活动可以发生但胚轴的延伸(即通常为萌动)却被抑制。种子内的不同生理活动可在不同水分含量下发生(Leopold和Vertucci,1989,Moisture as a regulator of physiologicalreactions in seeds.In:Seed Moisture,P.C.Stanwood和M.B.McDonald编辑.CSSASpecial Publication Number 14.Madison,WI:Crop Science Society of America,第51-69页;Taylor,1997,Seed storage,germination and quality.In:The Physiology ofVegetable Crops,H.C.Wien编辑,Wallingford,U.K.:CAB International,第1-36页)。发芽过程中的最后生理活动为萌动。萌动的引发需要较高的种子含水量。通过限制种子含水量,可以发生发芽所需的所有代谢步骤而没有不可逆的萌动行为。在萌动之前,认为种子是耐受干燥的,因此可通过干燥减少引发的种子的含水量。在干燥之后,可储存引发的种子直至播种期。例如,在一些实施方案中,在种子引发的水合处理期间,将植物种子暴露于根据本专利申请的实施方案的微生物菌株或其培养物、或组合物或者与其接触放置。在一些实施方案中,植物种子在引发过程期间暴露于根据本专利申请的实施方案的微生物菌株或其培养物或组合物或与其接触改善了种子发芽性能、随后的植物健康、植物生长、和/或最终植物产量。
如本文所用,“内生菌”是在植物内存活其寿命的至少一部分的内共生体。内生菌可垂直(直接从亲本到后代)或水平(从个体到不相关的个体)传递。在一些实施方案中,垂直传递的真菌内生菌是无性的并且经由渗入宿主种子的真菌菌丝从母本植物传递给后代。细菌内生菌还可从种子垂直传递至幼苗(Ferreira等人,FEMS Microbiol.Lett.287:8-14,2008)。在一些实施方案中,水平传递的内生菌通常是有性的,并且经由可通过风和/或昆虫媒介传播的孢子进行传递。作物的微生物内生菌已在其防治病害和昆虫侵染的能力以及其促进植物生长的潜力方面受到相当多的关注。例如,本文所述的一些微生物菌株能够在与其相接触的植物中作为内生菌建立。此类微生物菌株为微生物内生菌。
如本文所用,术语“病原体”是指能够在植物或动物中产生病害的生物体,诸如藻类、蛛形纲动物、细菌、真菌、昆虫、线虫类、寄生植物、原生动物、酵母或病毒。如本文所用,术语“植物病原体”是指侵染植物的病原生物体。“致病性病害”是由至少一种病原体引起的病害,例如植物病害。“植物致病性病害”是由至少一种植物病原体引起的病害,例如植物病害。可导致植物致病性病害的一些病原体可包括但不限于刺盘孢(Colletotrichum)、镰孢属(Fusarium)、赤霉菌属(Gibberella)、明梭孢属(Monographella)、青霉属(Penicillium)和壳多孢属(Stagnospora)生物体。
如本文所用,“序列同一性百分比”通过在两个序列之间局部比对的长度所限定的比较窗口中比较两个最佳局部排列的序列来确定。比较窗口中的氨基酸序列与参考序列(不包含添加或缺失)相比可包含添加或缺失(例如,空位或突出端),以便两个序列的最佳比对。两个序列之间的局部比对仅包括认为根据依赖于用来进行比对的算法(例如BLAST)的判据足够类似的各个序列的片段。通过以下方式计算所述序列同一性百分比:确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数目以得到匹配的位置的数目,将匹配的位置的数目除以比较窗口中位置的总数目,然后将结果乘以100。用于比较的最佳序列比对可通过以下方式进行:Smith和Waterman的局部同源性算法(Add.APL.Math.2:482,1981),Needleman和Wunsch的全局同源比对算法(J Mol.Biol.48:443,1970),Pearson和Lipman的相似性搜索方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444,1988),这些算法(NCBIBLAST、WU-BLAST、BLAT、SIM、BLASTZ)的启发式实施,或者检测。假设有两个经鉴定用于比较的序列,优选使用GAP和BESTFIT确定它们的最佳比对。通常,使用默认值缺口权重5.00和缺口权重长度0.30。术语多核苷酸或多肽序列之间的“实质序列同一性”是指利用程序与参考序列比较时,多核苷酸或多核包含具有至少50%的序列同一性,优选至少70%,优选至少80%>,优选至少85%,优选至少90%>,优选至少95%,并优选至少96%>、97%、98%或99%的序列同一性的序列。此外,如所用的成对序列同源性或序列相似性是指比对的两个序列之间相似的残基百分比。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中明确定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如,赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如,天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷极性侧链的氨基酸(例如,甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如,丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分枝侧链的氨基酸(例如,苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。可针对存在于公共或专有数据库中的主题核酸或氨基酸序列搜索查询核酸和氨基酸序列。此类搜索可使用National Center for Biotechnology InformationBasic Local Alignment Search Tool(NCBI BLAST v 2.18)程序进行。NCBI BLAST程序在国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)的互联网上获得。对于NCBI BLAST通常可使用以下参数:过滤选项设为“默认”,比较矩阵设为“BLOSUM62”,缺口成本设为“存在:11,延伸:1”,字长设为3,预期(E阀值)设为le-3,并且局部比对的最小长度设为查询序列长度的50%。序列同一性和相似性还可使用GenomeQuest(TM)软件(Gene-IT,Worcester Mass.USA)测定。
如本文所用,“子代”包括特定植物或植物品系的后代。本发明植物的子代包括F1、F2、F3、F4、F5、F6和后续世代植物形成的种子,或BC1、BC2、BC3和后续世代植物形成的种子,或F1BC1、F1BC2、F1BC3和后续世代植物形成的种子。名称F1是指遗传上不同的两个亲本间之间杂交的子代。名称F2、F3、F4、F5和F6是指F1植物的自花授粉或近缘授粉的子代的后续世代。回交是杂交体与其亲本之一或遗传上类似于其亲本的个体的杂交,从而实现具有更接近于亲本的遗传同一性的后代。其用于园艺、动物育种和基因敲除生物体的产生。回交的杂交体有时用缩写“BC”描述,例如,与其亲本之一(或遗传上类似的个体)杂交的F1杂交体可称为BC1杂交体,并且BC1杂交体与相同亲本(或遗传上类似的个体)的进一步杂交产生BC2杂交体。
如本文提及核酸和多肽所用的,本文术语“变体”用于表示合成产生的或天然多肽、蛋白质或多核苷酸分子相比于参考多肽或多核苷酸分别在其氨基酸或核酸序列中具有一些差异。例如,这些差异包括参考多肽或多肽中的置换、插入、缺失或此类变化的任何期望组合。多肽和蛋白质变体可进一步由电荷变化和/或翻译后修饰(例如糖基化、甲基化、磷酸化等)组成。
术语“变体”在本文用于提及微生物时为如下微生物菌株:具有其所属物种的鉴定特征,同时相对于亲本菌株具有至少一个核苷酸序列变异或可鉴定的不同性状,其中性状是基于遗传学的(可继承的)。
“PGPM”是指植物生长促进微生物体(或微生物)。在一些实施方案中,PGPM不仅可促进植物健康、生长和/或产量,还可在与根表面相关联的微生境中存活和繁殖,与其它微生物区竞争,并且/或者能够定殖于根至少表达其植物促进和/或保护活性所需的时间。在一些实施方案中,16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的核酸序列的微生物菌株是PGPM。
微生物菌株(PGPM)、分离株、培养物、组合物或合成聚生体促进或增强植物健康、生长或产量,或者具有植物生长促进活性。如本文所用,术语“植物生长促进活性”包括宽泛的改善的植物特性,包括但不限于例如,改善的固氮、改善的根发育、增大的叶面积、增加的植物产量、增加的种子发芽、提高的光合作用、或植物累积生物量的增加。在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、组合物或合成聚生体改善胁迫耐受性(例如,对干旱、洪水、盐度、热、害虫的耐受性),改善营养摄入、植物健康和活力,改善根发育,增大叶面积,增加植物产量,增加种子发芽,或增加植物的累积生物量。在一些实施方案中,相比于对照植物或其部分或者相比于预定标准,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、组合物或合成聚生体使植物或其部分的尺寸或质量增加。在一些实施方案中,相比于对照种子,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、组合物或合成聚生体通过促进种子发芽来促进植物生长。在一些实施方案中,相比于对照植物,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物、组合物或合成聚生体改善植物的健康、活力和产量。
如本文所用,术语“产量”是指可收获的植物材料或植物来源的产品的量,并且通常被定义为可测量产生的作物经济价值。就作物产量而言,“产量”还指每英亩或单位产生的收获物的量。产量可以量或质量定义。收获物可在作物与作物间有差别,例如,其可为种子,地上生物质、根、果实、棉纤维、以及植物的任何其它部分,或者任何有经济价值的植物来源的产物。
术语“产量”还包括为可最大获得的产量的产量潜力。产量可取决多个产量组分,其可通过某些参数监测。这些参数为本领域的技术人员所熟知并且在作物与作物间有差异。术语“产量”还包括收获指数,其为收获的生物量与总生物量之间的比率。
在一些实施方案中,根据本专利申请的实施方案的微生物菌株、分离株、培养物和组合物导致植物生长改善,即所测定性能的至少2%增加、至少5%增加、至少10%增加、至少25%增加、至少50%增加、至少75%增加、或至少100%增加。因此,作为非限制性示例,根据本专利申请的实施方案的微生物菌株、分离株、培养物和组合物可产生固氮的上述百分比增加,或总根重量、或叶面积或植物产品产量的上述增加(例如植物产品重量的上述百分比增加),或在10天或14天或30天内发芽的种子、或光合作用率(例如由CO2消耗测定)或植物的累积生物量(例如由植株的重量和/或高度测定)的百分比增加。植物产品为商品——通常但并非必须——由植物产生的食品。
如本文所用,“对照植物”提供用于测量受试植物表型变化的基准点,并且可为任何合适的植物细胞、植物组分、植物组织、植物器官或整个植株。对照植物可包括例如(但不限于)(a)野生型植物或细胞,即,具有与用于进行遗传改变的起始材料相同的基因型的植物或植物细胞,该遗传改变会得到受试植物或细胞;(b)具有如起始材料的基因型但已用无效构建体(即,对目的性状不具有已知效果的构建体,诸如包含报道基因的构建体)转化的植物或细胞;(c)为受试植物或细胞的子代中的非转化分离子的植物或细胞;(d)与受试植物或细胞遗传上相同但未暴露于与受试植物或细胞相同的处理(例如,菌剂处理)的植物或细胞;(e)处于目的基因不被表达的条件下的受试植物或细胞本身;或者(f)未暴露于特定处理例如菌剂或菌剂和/或其它化学品的组合的条件下的受试植物或细胞本身。
如本文所用,术语“菌剂”是指包含至少一种微生物的任何培养物或制剂。在一些实施方案中,菌剂(有时为微生物菌剂,或土壤菌剂)为使用有益微生物(包括但不限于内生菌)来促进植物健康、生长和/或产量的农业改良剂。适于以菌剂使用的许多微生物与目标作物形成其中双方均受益的共生关系(互利共生)。
竞争适应性是指微生物与其相邻微生物对空间和资源竞争的适应性。适应性意指给定基因型(例如,16S rRNA基因序列)在给定环境中存活和繁殖的能力或倾向。
生物肥料表示包含提供植物健康、生长和/或产量的直接和/或间接增益的微生物的生物产品。
生物反应器是指支持生物活性环境的任何装置或系统。如本文所述,生物反应器是其中可生长包括本专利申请的实施方案的微生物的微生物的容器。
如本文所用,温室是指典型的温室或生长室两者。生长室通常具有垂直的壁和顶篷,任选地具有窗口,具有垂直的户内式地板,任选地具有地面排水管,具有人工光源,并且具有用于除使植物生长之外的其它目的的基础结构。典型的温室具有允许光照穿透的壁和顶篷(例如,由玻璃塑料或其它类型的合适材料制成的壁/顶篷),具有混凝土、泥土、砂砾或类似类型的地板,具有自然/环境光,但是可具有附加的人工光。
将本专利申请中涉及的所有出版物、专利和公布的专利申请在此具体引入作为参考。
本文给出的一般方法的讨论仅旨在进行示意性的说明。对本领域技术人员而言通过查看本公开内容,其它备选的方法和实施方案将是显而易见的。
B.植物生长促进微生物
各种不同的植物相关联的微生物,包括但不限于许多根瘤菌物种可以多种方式积极地影响植物的健康和生理。这些有益微生物通常被称为PGPM,例如植物生长促进细菌(PGPB)或植物生长促进根际(PGPR)。迄今为止,超过二十四种微生物属的分离的菌株已被报道具有植物生长促进活性和/或生物防治活性,并且具有类似活性的新的属和物种仍在发现中。另外,在一些细菌属内,已鉴定出多个生物防治剂的物种和亚种,并且可在全球水平到农田水平并甚至在单个植株的多个空间尺度上发现。此外,已报告一些个体微生物分离株不仅可在获得它们的植物或作物上,而且还在其它作物上显示出生物防治和/或植物生长促进活性。这指示一些基因型尤其是具有广泛地理分布的那些的泛化性质(generalist nature)。如果在足够的持续时间内以足够的数目和活性引入,则单个微生物群体可对植物健康具有显著的影响。
公开的实施方案包括新的微生物菌株PGPM。在一些实施方案中,微生物菌株的16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株包含16S rRNA基因,所述16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:133、134和138的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:113、123、126、131和149的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134,138,141,143,145,150,155、和158中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:113、123、126、131和149中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:133,134和138中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。一些实施方案提供包含本文所述的任何DNA序列的植物生长促进微生物的属并且其增强植物的健康、生长和/或产量(如本文所述)。
在一些实施方案中,微生物菌株选自P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293,52382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、S2646、或来源于这些菌株中任一种的菌株。一些实施方案还提供如本文所述的微生物菌株的分离株和培养物,以及包含那些微生物菌株、分离株或培养物的各种组合的组合物和合成聚生体。
PGPM可展示植物生长促进活性,其包括宽泛的改善的植物特性,包括不限于例如,改善的固氮、改善的根发育、增大的叶面积、增加的植物产量、增加的营养素可用性或摄取、增加的种子发芽、提高的光合作用、或植物累积生物量的增加。在一些实施方案中,改善为所测量性能的至少2%增加、至少5%增加、至少10%增加、至少25%增加、至少50%增加、至少75%增加、或至少100%增加。因此,作为非限制性示例,本专利申请的实施方案的微生物菌株、分离株、培养物或组合物可产生固氮的上述百分比增加,或总根重量、或叶面积或植物产品产量的上述增加(例如植物产品重量的上述百分比增加),或在10天或14天或30天内发芽的种子、或光合作用率(例如由CO2消耗测定)或植物的累积生物量(例如由植株的重量测定)的百分比增加。植物产品为商品——通常但并非必须——由植物产生的食品。产量可使用任何便利的方法来测定,例如栽植的英每亩产生的植物产品的蒲式耳或磅。
在一些实施方案中,PGPM在施用于种子、植物表面、植物部分、或土壤时定殖于植物的根际和/或内部并促进寄主植物的生长。在一些实施方案中,PGPM是生物肥料。在一些实施方案中,PGPM是微生物肥料,其提供给植物营养素并从而可在不存在病原体压力情况下促进植物生长。在一些实施方案中,PGPM可通过以下机制直接促进植物生长和/产量:包括但不限于产生或改变植物激素的浓度;非共生固氮;和/或磷矿物以及其它营养素增溶的能力。
在一些实施方案中,PGPM可作为植物生长调节物质影响植物生长和发育。例如,本文所述的一些PGPM具有产生或改变植物激素浓度的能力,包括但不限于五种典型的植物激素,即生长素、乙烯、脱落酸、细胞分裂素、以及赤霉素。一些PGPM还可产生影响植物中植物激素产生的酶或第二代谢物。在一些实施方案中,PGPM可具有产生或改变其它激素以及某些挥发性有机化合物(VOC)和辅因子吡咯喹啉醌(PQQ)的浓度的能力,从而刺激植物生长和/或产量。
在一些实施方案中,PGPM可通过改变营养素可用性或摄取来影响植物生长和发育。PGPM可例如通过直接影响根,通过影响继而改变根行为的环境,以及通过直接对营养素竞争来改变营养素摄取率。本文所述的PGPM可通过其在改变土壤中营养素利用率中起作用的一些因素包括例如根几何结构,营养素溶解度,通过产生植物适度离子形式、在植物中分配营养素的营养素可用性和利用率。例如,低水平的可溶性磷酸盐可限制植物的生长。一些植物生长促进微生物能够增溶来自有机或无机的结合磷酸盐的磷酸盐,从而有利于植物生长。
在一些实施方案中,PGPM可作为植物胁迫控制剂影响植物生长和发育。例如,一些PGPM可控制和/或降低几种类型的植物胁迫,包括但不限于来自植物致病性细菌效应的胁迫、来自多环芳烃的胁迫、来自重金属诸如Ca2+和Ni2+的胁迫、以及来自盐和严苛的气候条件(例如干旱或洪水)的胁迫。
在一些实施方案中,PGPM可直接通过防治植物中的植物病原体或害虫来促进植物健康、生长和/或产量。在一些实施方案中,本文所述的PGPM表现出一种或多种生物病害防治机制,其大多数包括竞争和直接影响病原体的代谢物的产生。此类代谢物的示例包括抗生素、细胞壁降解酶、铁载体和HCN。值得注意的是,不同机制可存在于单一PGPM菌株中并同时起作用。在一些实施方案中,PGPM可通过产生细胞外铁载体来影响植物生长和发育。本文所述的一些PGPM可分泌低分子量、高亲和力的三价铁-螯合微生物辅因子,其具体通过与膜结合的铁载体受体结合来增强其铁获取。铁载体为结合Fe的较小的高亲和力螯合剂,使其更易(或不易)为天然微生物区系的某些成员获得。例如,铁载体可使Fe更易为具有识别并导入特定铁载体分子结构的能力的植物或微生物获得。对于不同的Fe-结合亲和力存在许多不同的铁载体类型和结构。此外,已知Fe可发生从Fe-结合亲和力较低的铁载体到Fe-结合亲和力较高的铁载体的交换,其可进一步影响Fe对于任何给定生物体的可用性。由一些假单胞菌属PGPM产生的一种铁载体被称为抑制胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia cartovora)(马铃薯的软腐病的病原生物)生长的假单胞菌素(参见例如Kloepper等人,CurrentMicrobiol.4:317-320,1980)。将假单胞菌素添加到生长培养基抑制软腐病侵染,并且还降低马铃薯植物中病原性真菌的数目并且马铃薯产量也显著增加。支持利用PGPM生物防治的铁载体理论的大多数证据来自脓菌素(pyoverdines)的作用,一类包含荧光假单胞菌属的荧光颜料的铁载体(Demange等人,in Iron Transport in Microbes,Plants andAnimals,第167-187页,1987)。根据铁载体理论,脓菌素展示某些功能性菌株特异性,这是由于外膜铁载体受体的选择性识别(Bakker等人,Soil Biology and Biochemistry 19:443-450,1989)。一种或多种铁载体的产生可调节其它菌株的适应性和/或生长。除抑制某些菌株(例如,欧文氏菌属(Erwinia))之外,一种或多种铁载体的产生还可支持具有给定铁载体的受体但本身不能合成分子的其它微生物菌株的适应性/生长。
在一些实施方案中,通过例如提供给第二微生物菌株营养素、代谢物和/或铁载体(并且/或者通过如本文所述的任何其它有益机制),PGPM可通过增大第二微生物菌株(例如,另一种PGPM)的竞争适应性而间接作用于植物。在一些实施方案中,通过例如提供给第二微生物菌株营养素、代谢物和/或铁载体(并且/或者通过如本文所述的任何其它有益机制),并且/或者通过降低对第二微生物菌株抑制、竞争、或排斥或以其它方式对第二微生物菌株的适应性有负面影响的第三微生物菌株的竞争适应性,PGPM可通过增大第二微生物菌株(例如,另一种PGPM)的竞争适应性而间接作用于植物。
在一些实施方案中,通过激活寄主植物的化学和/或物理防御,即诱导诱导性系统抗性(ISR)或系统获得性抗性(SAR),PGPM为植物病害的生物防治剂。在一些实施方案中,在与发病机理相关的蛋白质(PR-蛋白质)诱导的水杨酸途径或茉莉酸和乙烯途径中,由本发明实施方案的PGPM促进的抗性诱导是激活和信号化的。有时,当PGPM定殖于根系时,微生物细胞分子的组分充当生物化学信号,并且编码合成PR-蛋白质的基因被激活。除PR-蛋白质之外,植物还产生其它防御性酶,包括过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、以及多酚氧化酶(PPO)。过氧化物酶和PPO是木质素形成中的催化剂。PAL及其它酶参与植物抗毒素的形成。在一些实施方案中,本文所述的PGPM通过使过氧化物酶、PPO和/或PAL的产生增加来诱导植物对病害的抗性。
在一些实施方案中,本专利申请的实施方案的PGPM可经由如本文所述的一种或多种机制来促进植物健康、生长和/或产量。
在一些实施方案中,本专利申请的实施方案的PGPM是与有机农业相容的生物肥料或生物防治剂。
本发明实施方案的其它方面设想分离的和/或培养的PGPM。在一个方面,一个实施方案提供分离的微生物菌株(或PGPM)、其分离的培养物、其生物纯培养物、以及其富集培养物。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16SrRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:113、123、126、131和149的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:133、134和138的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155和158中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151、和159中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:113、123、126、131和149中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物分离株或培养物包含微生物菌株,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:133、134和138中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。
一些实施方案提供微生物分离株或其培养物,其包含选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、或来源于这些菌株中任一种的菌株。微生物分离株或培养物例如经由如本文所述的一种或多种机制来促进植物健康、生长和/或产量。
C.微生物组合物
本专利申请的实施方案提供微生物组合物,所述微生物组合物包含PGPM或微生物菌株或其培养物,例如选自本文所述的那些的微生物菌株。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:1-164的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,6,7,8,25,26,28,29,39,40,44,45,47,48,52,53,56,57,63,64,68,69,71,72,78,79,82,83,111,112,113,114,115,119,120,123,124,125,126,127,128,131,132,133,134,135,138,139,140,141,142,143,144,145,146,149,150,151,155,156、和159、的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155、和158、的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:113、123、126、131和149的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含选自SEQ ID No:133、134和138的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:5,7,25,28,39,44,47,52,56,63,68,71,78,82,111,114,119,124,127,133,134138、141,143,145,150,155、和158、中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:6,8,26,29,40,45,48,53,57,64,69,72,79,83,112,115,120,125,128,132,135,139,140,142,144,146,151,156、和159中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:113、123、126、131和149中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:133、134和138中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在以上组合物的一些实施方案中,微生物组合物任选地还包含第二微生物菌株或其培养物,所述第二微生物菌株的16S rRNA基因序列包含选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163、和164的序列。在以上组合物的一些实施方案中,微生物组合物还包含第二微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16SrRNA基因包含表现出与SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163和164中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述微生物菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163、和164的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中微生物菌株中每种的16S rRNA基因独立地包含表现出与SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,27,30,31,32,33,34,35,36,37,38,41,42,43,46,49,50,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,70,73,74,75,76,77,80,81,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,116,117,118,121,122,129,130,136,137,147,148,152,153,154,157,160,161,162,163、和164中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含至少一种微生物菌株或其培养物,其中所述微生物菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,14,15,16,17,18,20,21,24,27,30,31,33,34,35,38,41,42,43,46,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,77,81,84,85,86,87,88,92,95,96,106,107,109,110,116,117,118,122,130,136,137,147,148,153,154,157,160、和161的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述微生物菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,14,15,16,17,18,20,21,24,27,30,31,33,34,35,38,41,42,43,46,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,77,81,84,85,86,87,88,92,95,96,106,107,109,110,116,117,118,122,130,136,137,147,148,153,154,157,160、和161的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少一种微生物菌株或其培养物,其中微生物菌株的16S rRNA基因包含表现出与SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,14,15,16,17,18,20,21,24,27,30,31,33,34,35,38,41,42,43,46,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,77,81,84,85,86,87,88,92,95,96,106,107,109,110,116,117,118,122,130,136,137,147,148,153,154,157,160、和161中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中微生物菌株中每种的16S rRNA基因独立地包含表现出与SEQ ID No:1,2,3,4,9,10,11,12,14,15,16,17,18,20,21,24,27,30,31,33,34,35,38,41,42,43,46,51,54,55,58,59,60,61,62,65,66,67,77,81,84,85,86,87,88,92,95,96,106,107,109,110,116,117,118,122,130,136,137,147,148,153,154,157,160、和161中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述微生物菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:13,19,22,23,32,36,37,49,50,70,73,74,75,76,80,89,90,91,93,94,97,98,99,100,101,102,103,104,105,108,121,129,152,162,163和164的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中微生物菌株中每种的16S rRNA基因独立地包含表现出与SEQ ID No:13,19,22,23,32,36,37,49,50,70,73,74,75,76,80,89,90,91,93,94,97,98,99,100,101,102,103,104,105,108,121,129,152,162,163和164中所示的任一核苷酸序列至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或至少99.5%的序列同一性的核苷酸序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,2,4,5,6,10,12,50,55,56,57的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:6和57的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:6和57的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2,5,10,12,50,55、和56的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2,5,10,12,50,55、和56的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:5和56的序列,并且任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:2、10、12、50和55的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少七种(7)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少七种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ IDNo:2,5,10,12,50,55、和56的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,4,9,11,49、和54的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,4,9,11,49、和54的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少六种(6)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少六种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:1,4,9,11,49、和54的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34,35,46,47,48,65,66,67,68,69,70,71,72,73、和74的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:48、69和72的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:48、69和72的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:48、69和72的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:47、68和71的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:35、66、73和74的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少七种(7)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少七种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:35,47,66,68,71,73、和74的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34、46、65、67和70的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:34,46,65,67,70的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少五种(5)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少五种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:34、46、65、67和70的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,21,22,23,24,25,26,30,31,32,33,41,42,62,63、和64的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:26和64的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:26和64的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:25和63的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种或多种附加微生物菌株,其中所述附加菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:21,22,23,31,33、和42的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少八种(8)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少八种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:21,22,23,25,31,33,42、和63的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少六种(6)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少六种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:20,24,30,32,41、和62的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18,19,36,37,75、和76的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:19、37和76的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:19、37和76的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:19、37和76的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18、36和75的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:18、36和75的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:18、36和75的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11,13,58,59,60、和61的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:13、59和61的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:13、59和61的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:13、59和61的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11、58和60的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:11、58和60的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种(3)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:11、58和60的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27,38,39,40,43,44,45、和77的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:40和45的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:40和45的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:39、44和77的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:39、44和77的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:39和44的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:77的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:39、44和77的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27、38和43的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:27、38和43的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少八种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:27、38和43的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1,3,4,7,8,51,52,53,134、和135的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:8、53和135的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:8、53和135的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:8、53和135的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:3、7、52和134的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:3、7、52和134的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:7、52和134的序列,并且其中所述组合物任选地还包含附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:3的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少四种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:3、7、52和134的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1、4和51的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:1、4和51的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:1、4和51的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:14、16、78、79和80的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含微生物菌株或其培养物,其中所述菌株的16S rRNA基因包含SEQ ID No:79的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:78和80的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:78和80的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:14和16的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:14和16的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43,44,45,81,82,83,84,145和146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:45、83和146的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:45、83和146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:44、82和145的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:44、82和145的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:44和82的序列,并且其中所述组合物任选地还包含一种附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:85的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:44、82和145的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43、81和84的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:43、81和84的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少八种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:43、81和84的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:24、86、87和88的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:87和88的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:87和88的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:24和86的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:24和86的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,81,82、和83的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:53和83的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种(2)微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:53和83的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52和82的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:52和82的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51和81的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少两种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:51和81的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51,52,53,75,76,81,82,83,84,145和146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:53、83和146的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:53、83和146的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少三种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少三种菌株的16SrRNA基因分别包含SEQ ID No:53、83和146的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52、76、82和145的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52、76、82和145的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:52、82和145的序列,并且其中所述组合物任选地还包含附加微生物菌株,其中所述附加菌株的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:76的序列,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少四种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:52、76、82和145的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51、75、81和84的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含两种或更多种微生物菌株或它们的培养物,其中所述菌株中每种的16S rRNA基因包含独立地选自SEQ ID No:51、75、81和84的序列。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少四种微生物菌株或它们的培养物,其中所述至少四种菌株的16S rRNA基因分别包含SEQ ID No:51、75、81和84的序列。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293,S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328、S2646、和它们的任意组合、以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含至少两种本文所公开的菌株。在另一个实施方案中,微生物组合物包含多种本文所公开的菌株。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、以及P0042_D5或S2165、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0044_A5、P0038_D2或S2166、P0018_A11、P0047_E2、P0018_A1、P0047_C1、P0042_E1、以及P0047_E8、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11,S2163_P0019_A12、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2142_P0061_E11、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2159_P0058_B9、以及S2163_P0019_A12、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0147_D10或S2291;P0147_G10或S2292;PS160_F7或S2351,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0147_D10或S2291;P0147_G10或S2292;和PS160_F7或S2351,或来源于它们的菌株,或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0140_C10或S2300;S2387;P0157_G5或S2303,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0140_C10或S2300;S2387;和P0157_G5或S2303,或来源于它们的菌株,或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0160_E1或S2374;P0134_G7或S2280;S2384,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0160_E1或S2374;P0134_G7或S2280;和S2384,或来源于它们的菌株,或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:S2275;S2278,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2275和S2278、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0157_G5或S2303;S2373;S2375,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含P0157_G5或S2303;S2373;和S2375,或来源于它们的菌株,或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种选自以下的微生物菌株:S2293;S2382,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2293和S2382、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种独立地选自以下的微生物菌株:S2385和S2373,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2385和S2375、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种独立地选自以下的微生物菌株:S2385、S2669、S2373和S2375,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2385、S2669、S2373和S2375、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含一种或多种独立地选自以下的微生物菌株:S2385、S2669、S2373、S2375、S2293和S2644,以及来源于它们的菌株,或它们的培养物。在一些实施方案中,微生物组合物包含S2385、S2669、S2373、S2375、S2293和S2644、或来源于它们的菌株、或它们的培养物。
在另一个实施方案中,提供包含合成微生物聚生体的组合物。在一些实施方案中,合成聚生体包含:(a)第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;和(b)第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使步骤(a)中第一微生物集合的一种或多种微生物的竞争适应性(直接或间接)增大的一种或多种微生物;其中将第一微生物集合和第二微生物集合组合成单一混合物作为微生物聚生体。在一个实施方案中,合成聚生体还包含不一起天然存在的微生物菌株。在另一个实施方案中,合成聚生体包含不以相对于彼此得比相当的浓度天然存在的微生物菌株。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物增强植物的营养素可用性和/或营养素摄取。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物调节植物激素水平。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物展示选自以下的一种或多种活性:固氮、IAA产生、ACC脱氨酶活性、磷酸盐增溶和/或铁增溶(和/或可使植物健康、生长和/或产量受益的任何其它活性)。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物抑制或阻碍植物病原体(例如,作为生物杀虫剂,诸如选自本文所述的那些的生物杀虫剂)。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物直接增大(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物的竞争适应性。在一些实施方案中,第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中的一种或多种微生物的竞争适应性增强的代谢物。例如,第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中的一种或多种微生物的铁获取增强的铁载体。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物减小如下微生物的竞争适应性:该微生物不同于(以上(a)或(b))第一或第二微生物集合的微生物,并且(例如,通过抑制、与其竞争、排除、或以其它方式对其有负面影响)对(以上(a))第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性潜在地有害。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物产生杀菌、抑菌或以其它方式调节如下微生物的生长的代谢物,该微生物不同于第一和第二微生物集合的微生物,并且(例如,通过抑制、与其竞争、排除、或以其它方式对其有负面影响)对(以上(a))第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性有害。例如,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物产生抑制对(以上(a))第一集合中的一种或多种微生物潜在有害的微生物的生长或适应性的铁载体。因此,第二微生物集合的功能在于直接或间接增大第一微生物集合的适应性或竞争适应性。在合成聚生体的一些实施方案中,使第一和第二微生物集合组合并补充有惰性配方组分。在一些实施方案中,合成聚生体和其组合物促进或增强植物的健康、生长和/或产量。在一些实施方案中,将根据本专利申请的合成聚生体或其组合物施用于植物(或其部分)、种子、或幼苗。
在一些实施方案中,本文所述的微生物组合物,例如以上所述的任何微生物组合物还包含农业有效量的附加物质、化合物或组合物,例如但不限于营养素、肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、杀虫剂或它们的组合。
在一些实施方案中,组合物呈化学惰性;因此,它们基本上与按时施用的任何其它组分相容。组合物还可与植物生长影响物质例如肥料、植物生长调节剂等结合使用,只要此类化合物或物质是生物相容的。组合物还可与生物相容性杀虫活性剂,例如除草剂、杀线虫剂、杀真菌剂、杀昆虫剂等结合地使用。
在一些实施方案中,微生物菌株和组合物还可呈与增效剂的混合物形式。增效剂是通过其使活性组合物的活性增加的化合物而无需添加的增效剂本身呈活性。
在一些实施方案中,微生物菌株和组合物还可呈与抑制剂(例如防腐剂)的混合物形式,该抑制剂在植物生境中于植物部分的表面上或植物组织中施用后减少活性组合物的降解。
活性微生物菌株和组合物可作为与已知肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、杀虫剂、或任何它们的组合的混合物使用,例如为了拓宽作用谱或以该方式防止杀虫剂抗性的发展。在许多情况下,协同增强效应,即混合物的活性可超出单个组分的活性。还设想与其它已知活性化合物,例如生长调节剂、安全剂和/或化学信息素的混合物。
在一些实施方案中,组合物可包含至少一种化学或生物肥料。用于组合物中的至少一种化学或生物肥料的量可根据最终制剂以及待处理的植物和种子的尺寸变化。在一些实施方案中,所用的至少一种化学或生物肥料为基于整个制剂约0.1%重量/重量至约80%重量/重量。在一些实施方案中,所述至少一种化学或生物肥料以约1%重量/重量至约60%>重量/重量,并且在一些实施方案中约10%>重量/重量至约50%重量/重量的量存在。
微生物组合物任选地还包含至少一种生物肥料。适用于本文并且可包含在根据本专利申请的实施方案的微生物组合物之内以促进植物生长和/或产量的示例性生物肥料包括微生物、动物、细菌、真菌、遗传物质、植物、以及活生物体的天然产物。在这些组合物中,在用附加生物体配制之前使微生物分离。例如,诸如但不限于无色杆菌属(Achromobacter)、白粉寄生菌属(Ampelomyces)、出芽短梗霉(Aureobasidium)、固氮螺菌属(Azospirillum)、固氮菌属(Azotobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、白僵菌属(Beauveria)、慢生根瘤菌(Bradyrhizobium)、假丝酵母属(Candida)、毛壳菌属(Chaetomium)、冬虫夏草属(Cordyceps)、隐球菌(Cryptococcus)、德巴利酵母属(Dabaryomyces)、代尔夫特菌(Delftia)、欧文氏菌属(Erwinia)、Exophilia、粘帚霉属(Gliocladium)、草螺菌属(Herbaspirillum)、乳杆菌(Lactobacillus)、马利亚霉属新种(Mariannaea)、微球菌属(Microccocus)、拟青霉属(Paecilomyces)、类芽孢杆菌(Paenibacillus)、泛菌属(Pantoea)、毕赤酵母属(Pichia)、根瘤菌属(Rhizobium)、酵母属(Saccharomyces)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、踝节菌属(Talaromyces)和木霉属(Trichoderma)物种的微生物可提供为与微生物的组合物。还设想与美国专利申请公布US20030172588A1、US20030211119A1、US20130276493、US20140082770;美国专利7,084,331;7,097,830;7,842,494;PCT申请WO2010109436A1、WO2013158900和WO2013090628中公开的微生物结合使用的根据本发明实施方案的微生物组合物。
在一些实施方案中,组合物可包含至少一种化学或生物杀虫剂、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、或它们的组合。用于组合物中的至少一种化学或生物杀虫剂、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、或它们的组合的量可根据最终制剂以及待处理的植物和种子的尺寸变化。在一些实施方案中,所用的至少一种化学或生物杀虫剂、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、或它们的组合为基于整个制剂约0.1%重量/重量至约80%重量/重量。在一些实施方案中,所述至少一种化学或生物杀虫剂、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂、或它们的组合以约1%重量/重量至约60%>重量/重量并最优选约10%>重量/重量至约50%重量/重量的量存在。
多种化学杀虫剂对本领域技术人员来说是显而易见的并且可被使用。示例性化学杀虫剂包括氨基甲酸盐、有机磷酸盐、有机氯、以及拟除虫菊酯类之中的那些。还包括化学控制剂,例如但不限于苯菌灵、硼砂、敌菌丹、克菌丹、百菌清、包含铜的制剂;包含二氯萘醌、氯硝胺、碘、锌的制剂;杀真菌剂,例如但不限于杀稻瘟菌素、霜脲氰、氯苯嘧啶醇、氟硅唑、灭菌丹、抑霉唑、咪唑霉、代森锰、代森锰锌、甲霜灵、氧化萎锈灵、腈菌唑、土霉素、PCNB、五氯苯酚、咪鲜安、丙环唑、灭螨猛、亚砷酸钠、二硝基邻甲酚钠(sodium DNOC)、次氯酸钠、联苯酚钠、链霉素、硫磺、戊唑醇(tebuconazole)、戊唑醇(terbutrazole)、噻苯咪唑、甲基托布津、三唑酮、三环唑、嗪胺灵、有效霉素、农利灵、代森锌和福美锌。
在一些实施方案中,组合物包含至少一种生物杀虫剂。适用于本文并且可包括在微生物组合物之内以预防植物致病性病害的示例性生物杀虫剂包括微生物、动物、细菌、真菌、遗传物质、植物、以及活生物体的天然产物。在这些组合物中,在用附加生物体配制之前使微生物分离。例如,诸如但不限于节细菌属(Anthrobacter)、白粉寄生菌属(Ampelomyces)、出芽短梗霉(Aureobasidium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、白僵菌属(Beauveria)、假丝酵母属(Candida)、毛壳菌属(Chaetomium)、冬虫夏草属(Cordyceps)、隐球菌(Cryptococcus)、德巴利酵母属(Dabaryomyces)、欧文氏菌属(Erwinia)、Exophilia、粘帚霉属(Gliocladium)、马利亚霉属新种(Mariannaea)、拟青霉属(Paecilomyces)、类芽孢杆菌(Paenibacillus)、泛菌属(Pantoea)、毕赤酵母属(Pichia)、假单胞杆菌属(Pseudomonas)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)、链霉菌属(Streptomyces)、踝节菌属(Talaromyces)和木霉属(Trichoderma)物种的微生物可提供为与本文公开的微生物的组合物,并且Muscodor属的真菌菌株是优选的。还设想与美国专利7,518,040;美国专利7,601,346;以及美国专利6,312,940中公开的微生物拮抗剂结合使用的微生物组合物。
可在组合物中与微生物菌株和组合物结合的真菌的示例包括不限于Muscodor物种、粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)(“whitemuscarine”)、布氏白僵菌(Beauveria brongniartii)、多主枝孢(Chladosporiumherbarum)、棒形虫草(Cordyceps clavulata)、茂兰虫草(Cordyceps entomorrhiza)、Cordyceps facis、新疆产黑槌虫草(Cordyceps gracilis)、Cordyceps melolanthae、蛹虫草(Cordyceps militaris)、蚁虫草(Cordyceps myrmecophila)、Cordyceps ravenelii、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、蜂头虫草(Cordyceps sphecocephala)、Cordycepssubsessilis、单侧生虫草(Cordyceps unilateralis)、变形虫草(Cordycepsvariabilis)、Cordyceps washingtonensis、Culicinomyces clavosporus、蝗噬虫霉(Entomophaga grylli)、噬虫霉(Entomophaga maimaiga)、Entomophaga muscae、Entomophaga praxibulli、Entomophthora plutellae、砖红镰刀菌(Fusariumlateritium)、球囊霉属物种(Glomus species)、檬形被毛孢(Hirsutella citriformis)、汤普松多毛孢(Hirsutella thompsoni)、绿僵菌(Metarhizium anisopliae)(“greenmuscarine”)、黄绿绿僵菌(Metarhizium flaviride)、Muscodor albus、佛罗里达新接霉(Neozygitesfloridana)、莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)、粉拟青霉(Paecilomycesfarinosus)、玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)、新蚜虫疠霉(Pandoraneoaphidis)、Tolypocladium cylindrosporum、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)、根虫瘟霉(Zoophthora radicans)、以及菌根物种诸如双色蜡蘑(Laccaria bicolor)。其它mycopesticidal物种对本领域技术人员来说是显而易见的。
在另一个实施方案中。本文所公开的PGPM组合物、聚生体和方法可用于处理转基因种子。转基因种子是指包含允许表达不天然存在于植物中的多肽或蛋白质的至少一种异源性基因的植物的种子。转基因种子中的异源性基因可来源于例如芽孢杆菌属、根瘤菌属(Rhizobium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙雷氏菌(Serratia)、木霉属(Trichoderma)、棍状杆菌属(Clavibacter)、球囊霉属(Glomus)或粘帚霉属(Gliocladium)物种的微生物。
另一个实施方案涉及增大植物害虫组合物耐久性的方法:该方法包括为植物或种植面积提供植物保护组合物,并且为植物或种植面积提供本文所述的PGPM组合物、聚生体和方法,其中本文所述的PGPM组合物、聚生体和方法具有不同于植物保护组合物的作用模式。
本公开还提供包含至少一种分离的微生物菌株或其培养物(例如本文所述的那些中的任一者)和载体的组合物。载体可为多种载体中的任何一种或多种,所述载体赋予多种特性,例如增大的稳定性、可润湿性、分散性等。可为非离子或离子表面活性剂或它们的组合的润湿剂例如天然或合成表面活性剂可包含在实施方案的组合物之内。乳液例如油包水乳液也可用于配制包含本发明实施方案的至少一种分离的微生物的组合物(参见例如美国专利7,485,451,以引用方式并入本文)。可制备的合适制剂包括可润湿粉末、颗粒剂、凝胶、琼脂条或球剂、增稠剂等、微胶囊化颗粒等、液体诸如含水流动剂、含水悬浮液、油包水乳液等。制剂可包括谷物或豆类产品(例如,研磨的谷物或豆、源于谷物或豆的液体培养基或面粉)、淀粉、糖、或油。载体可为农业载体。在某些优选的实施方案中,载体为种子,并且可将组合物施用或包被到种子上或使种子饱和。
在一些实施方案中,农业载体可为土壤或植物生长培养基。可使用的其它农业载体包括水、肥料、植物基油、湿润剂、或它们的组合。另选地,农业载体可为固体,例如硅藻土、壤土、硅石、藻酸盐、粘土、膨润土、蛭石、果皮、其它植物和动物产品、或组合,包括颗粒剂、球剂或悬浮液。任何前述成分的混合物也被设想为载体,例如但不限于pesta(粉状物和高岭土)、琼脂或者壤土、砂或粘土中基于粉状物的球剂等。制剂可包括用于培养微生物的食物来源,例如大麦、稻、或其它生物材料如种子、植物部分、蔗渣、来自谷物加工的外壳或秸秆、研磨植物材料(“庭园废物”)、堆肥、或来自建筑工地废物的木材、来自回收的纸张、纤维或木材的锯屑或细小纤维。其它合适的农业载体对本领域技术人员来说是显而易见的。
在一些实施方案中,适用于本文所述的组合物的载体是有机载体。有机载体包括但不限于泥炭、草皮、滑石、褐煤、高岭石、叶蜡石、沸石、蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑、以及蛭石。滑石是被称为块滑石或皂石的天然矿物质,由与氯化物和碳酸盐结合的各种矿物质构成。其在化学上被称为硅酸镁并且可作为粉末形式从适于广泛应用的产业获得。滑石具有相对疏水性、较低的湿度平衡、化学惰性、降低的吸湿性并且其防止水合物桥形成,这使得贮藏期更长。泥炭(草皮)是在湿润条件下通过分解各种植物和藓类形成的碳化植物组织。泥炭通过水生和半水生植物例如莎草、芦苇、灯心草、和藓类的连续层缓慢腐烂形成。压滤泥浆是糖工业的副产物。蛭石是用于改善透气和保湿性的轻云母样矿物质。在一些实施方案中,具有如本文所述的有机载体的组合物适用于有机耕作。其它合适的有机载体对本领域技术人员来说是已知的。
包含分离的微生物菌株或其培养物的微生物组合物可为多种形式,包括但不限于原培养物(still cultures)、全培养物、细胞、菌丝体和/或菌丝的储存的原液(特别是甘油原液)、琼脂条、甘油/水中的储存琼脂棒、冻干原液、以及干燥的原液诸如冻干物或干燥到滤纸或谷物种子上的菌丝体。如本文所定义,如本公开和现有技术所用,“分离的培养物”或语法等同物应理解为意指提及的培养物是包含单一类型生物体的培养液、丸粒、刮屑、干燥的样品、冻干物、或切片(例如菌丝或菌丝体);或载体、容器、或培养基,例如板、纸材、过滤器、基质、秸杆、移液管或吸液头、纤维、针、凝胶、拭子、管件、小瓶、颗粒等。在不含其它生物体的情况下,微生物拮抗剂的分离的培养物是包含微生物的培养液或刮屑、丸粒、干燥制剂、冻干物、或微生物的切片、或载体、容器、或培养基。
在一些实施方案中,组合物呈液体形式。例如,可使本发明实施方案的液体形式(例如溶液或悬浮液)的微生物混合或悬浮于水或水性溶液中。合适的液体稀释剂或载体包括水、水性溶液、石油馏出物、或其它液体载体。
在一些实施方案中,组合物呈固体形式。例如,固体组合物可通过将实施方案的微生物分散于适当粉碎的固体载体之中和之上来制备,例如泥炭、小麦、糠、蛭石、粘土、滑石、膨润土、硅藻土、漂白土、消毒土壤等。当此类制剂用作可润湿粉末时,可使用生物相容性分散剂,例如非离子、阴离子、两性、或阳离子分散剂和乳化剂。
在一个实施方案中,微生物组合物可经由通过其使PGPM起作用的一种或多种机制来促进植物健康、生长和/或产量,如本文所述的那样。在一些实施方案中,本文设想的组合物通过充当微生物肥料、植物病害的生物防治剂、和/或植物抗性的诱导剂来增强作物的生长和产量。类似于其它生物肥料剂,组合物可具有较高的安全裕度,因为它们通常不灼伤或损伤植物。
如贯穿本专利申请所描述的,增强植物生长和植物产量可通过将一种或多种组合物施用于寄主植物或寄主植物的部分来影响。可将组合物以相对于未处理的对照有效增强植物生长或产量的量施用。活性组分以在施用于植物时足以增强目标植物生长的浓度使用。如将对本领域技术人员显而易见的,有效浓度可例如根据各种因素变化,诸如(a)植物或农产品的类型;(b)植物或农产品的生理条件;(c)影响植物或农产品的病原体的浓度;(d)植物或农产品的病害类型;(e)气候条件(例如,温度、湿度);和(f)植物病害的阶段。典型的浓度为高于1×102CFU/mL载体的那些。在一些实施方案中,浓度范围为约1×102至约1×1010CFU/mL,例如在1×105至1×109CFU/mL范围内的浓度。在一些实施方案中,浓度是每毫升载体(液体组合物)或每克载体(干制剂)约1至约100mg干细菌质量的那些。在一些实施方案中,浓度范围为1×102至约1×1010细胞/mL,例如在1×105至1×109细胞/mL组合物或载体范围内的浓度。
在一些实施方案中,组合物中的一种或多种微生物的量可根据最终制剂以及所利用的植物或种子的尺寸或类型变化。优选地,组合物中的一种或多种微生物以整个制剂的约0.01%重量/重量至约80%重量/重量存在。在一些实施方案中,组合物中采用的一种或多种微生物的干重量为按整个制剂的重量计约0.01%、0.1%、1%、5%重量/重量至约65%重量/重量并最优选约1%重量/重量至约60重量/重量。
可使用多种常规方法例如撒粉、涂覆、注入、擦涂、轧制、浸渍、喷涂、或刷涂、或不显著损伤待处理的目标植物的任何其它合适的技术,将微生物的组合物施用于目标植物(或其部分)。示例性方法包括但不限于用微生物细胞的悬浮液接种生长培养基或土壤和用微生物细胞和/或孢子对植物种子包衣。
本发明还提供了通过在栽植之前将任何多种常规制剂以有效量施用于土壤(即,垄沟中)、植物的部分(即,浇灌)或种子上(即,种子包衣或拌种)来处理植物的方法。常规制剂包括溶液、乳油、可润湿粉末、混悬剂浓缩物、可溶性粉末、颗粒剂、悬浮液-乳液浓缩物、浸渍有活性化合物的天然和合成材料、以及聚合物质中的极细控释胶囊。在某些实施方案中,微生物组合物被配制成以即用制剂获得或在使用时混合在一起的粉末。在任一实施方案中,可在栽植前或栽植时将粉末与土壤混合。在一个另选的实施方案中,植物生长促进剂或生物防治剂中的一者或两者为在处理时混合在一起的液体制剂。本领域普通技术人员应当理解,有效量的本发明组合物取决于组合物的最终制剂以及待处理的植物的尺寸或种子的尺寸。
根据最终制剂和应用方法,还可将一种或多种合适的添加剂引入组合物中。可将粘合剂例如羧甲基纤维素以及呈粉末、颗粒剂或胶乳形式的天然和合成聚合物,例如阿拉伯树胶、甲壳质、聚乙烯醇和聚乙酸乙烯酯,以及天然磷脂例如脑磷脂和卵磷脂、以及合成磷脂、海藻糖、甘露醇、山梨醇、肌醇、槐糖、麦芽三糖、葡萄糖、(+)-半乳糖、甲基-β-半乳糖苷添加至本发明的组合物中。
在一些实施方案中,组合物被配制为单一稳定的溶液、或乳液、或悬浮液。就溶液而言,通常在添加生物试剂之前将活性化合物溶解于溶剂中。合适的液体溶剂包括石油基芳族化合物,例如二甲苯、甲苯或烷基萘;脂族烃,例如环己烷或石蜡,例如石油馏分、矿物质和植物油;醇类,例如丁醇或乙二醇以及其醚和酯;酮,例如甲乙酮、甲基异丁基酮或环己酮;强极性溶剂,例如二甲基甲酰胺和二甲基亚砜。就乳液或悬浮液而言,液体介质为水。在一个实施方案中,将化学试剂和生物试剂在施用时悬浮于单独的液体中并混合在一起。在悬浮液的一个优选实施方案中,将化学试剂和生物试剂组合为表现出合理的较长储藏期限的即用型制剂。在使用中,可将液体作为雾化喷雾叶面喷涂或者可叶面施用或者在栽植作物时垄沟中施用。可将液体组合物以有效量引入种子上(即,种子包衣或拌种)或者在种子发芽之前引入土壤中(即,垄沟中)或者通过利用本领域中已知的多种技术(包括但不限于滴灌、喷淋装置、土壤注入或土壤浇灌)直接引入土壤中而与根接触。任选地,可添加稳定剂和缓冲剂,包括碱金属盐和碱土金属盐以及有机酸例如柠檬酸和抗坏血酸,无机酸例如盐酸或硫酸。还可添加生物杀灭剂并且可包括甲醛或甲醛释放剂和苯甲酸衍生物,诸如对羟基苯甲酸。
D.微生物聚生体
一个实施方案提供微生物聚生体,其包含两种或更多种微生物菌株,其中微生物聚生体促进或增强植物健康、生长和/或产量。
一个实施方案提供用于鉴定与植物健康、生长和/或产量相关联的至少一种微生物菌株的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)提供多个植物根际样品;
(2)从步骤(1)提供的各个样品中分离多种基因组DNA;
(3)测定来自步骤(2)中分离的多种基因组DNA的每种的多个16S rRNA基因片段的序列;
(4)在其序列在步骤(3)中测定的多个16S rRNA基因片段的每一者中,测定每个所述16S rRNA基因片段的(绝对或相对)丰度;
(5)测定步骤(1)的根际样品从其采集的各个植物的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量;
(6)将步骤(4)中测定的各个16S rRNA基因片段的丰度与步骤(5)中测定的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联;
(7)选择其丰度与植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联的至少一个16S rRNA基因片段,如步骤(6)中所测定;以及
(8)从步骤(1)中的多个植物根际样品中鉴定至少一种微生物菌株,所述植物根际样品包含步骤(7)中选择的至少一个16S rRNA基因片段。
还可使单独的微生物菌株基于其相容性和功能组合以产生聚生体。此类实施方案提供微生物聚生体,其包含由如本文所述的方法鉴定的两种或更多种微生物菌株。
此外,应当认识到,某些不同物种的微生物因其密切和长期的物理和/或生物化学相互作用而趋于同时或共同定域于自然界中。某些微生物菌株可作为聚生体共同起作用,以支持和/或(直接或间接)促进植物健康、生长和/或产量。例如,病害可抑制的土壤中植物病原体的生物防治是由于存在微生物拮抗剂的混合物。此外,由于物理和/或生物化学相互作用,当作为聚生体共同起作用时,一些共同定域的微生物菌株相比于其单独起作用通常展示出各种协同增强效应。
另一个实施方案提供一种用于装配包含两种或更多种与植物健康、生长和/或产量相关联的微生物菌株的微生物聚生体的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)提供多个植物根际样品;
(2)从步骤(1)中提供的各个样品中分离多种基因组DNA;
(3)测定来自步骤(2)中分离的多种基因组DNA的每种的多个16S rRNA基因片段的序列;
(4)在其序列在步骤(3)中测定的多个16S rRNA基因片段的每一者中,测定每个所述16S rRNA基因片段的(绝对或相对)丰度;
(5)测定步骤(1)的根际样品从其采集的各个植物的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量;
(6)将步骤(4)中测定的各个16S rRNA基因片段的丰度与步骤(5)中测定的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联;
(7)选择其丰度与植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量相关联的至少一个16S rRNA基因片段,如步骤(6)中所测定;
(8)在所述多个样品的范围内,将步骤(7)中选择的至少一个16S rRNA基因片段的丰度与其序列在步骤(3)中测定的其它多个16S rRNA基因片段的丰度相关联;
(9)在所述多个样品的范围内,鉴定其丰度与步骤(7)中选择的至少一个16S rRNA基因片段的丰度相关联的一个或多个16S rRNA基因片段;
(10)鉴定两种或更多种微生物菌株,其分别包含在步骤(7)和(9)中鉴定的16SrRNA基因片段;以及
(11)通过将所述菌株组合为单一混合物,将在步骤(10)中鉴定的所述两种或更多种微生物菌株装配成微生物聚生体。
一个实施方案提供用于鉴定包含两种或更多种基于16S rRNA表达谱促进植物健康、生长和/或产量的微生物菌株的微生物聚生体的方法。在该方法的一些实施方案中,首先采集植物和相关联的根际样品。然后使用已知方法(Patin等人,2013Microb.Ecol.65:709-719)测定各个植物根际样品的微生物16S rRNA序列标记。然后在来自植物田地的多个样品的范围内,测定各个16S rRNA序列标记的相对丰度或丰度百分比和对应植株的归一化重量(或高度)的皮尔逊相关值。然后鉴定出与植株重量或植株高度相关性最高的细菌16SrRNA序列标记。与植物性能(归一化植株高度或重量)相关性最高的16S rRNA序列标记被选择用于鉴定潜在共享功能性相互作用的其它微生物并因而鉴定构成的聚生体。为鉴定潜在的聚生体成员,将与植物性能最相关的16S rRNA序列标记的分配与数据集中的每个其它序列标记相比较以鉴定共分配的序列。创建这些比较的皮尔逊相关性的等级列表并且期望显示出候选聚生体成员。
在另一方面,一个实施方案提供制备合成微生物聚生体的方法,所述方法包括:
(a)选择第一微生物集合,所述第一微生物集合包含促进植物健康、生长和/或产量的一种或多种微生物;
(b)选择第二微生物集合,所述第二微生物集合包含使步骤(a)中第一微生物集合的一种或多种微生物的竞争适应性(直接或间接)增大的一种或多种微生物;以及
(c)将第一微生物集合和第二微生物集合组合成单一混合物作为合成聚生体。
在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物增强植物的营养素可用性和/或营养素摄取。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物调节植物激素水平。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物展示选自以下的一种或多种活性:固氮、IAA产生、ACC脱氨酶活性、磷酸盐增溶和/或铁增溶(和/或可使植物健康、生长和/或产量受益的任何其它活性)。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物抑制或阻碍植物病原体(例如,作为生物杀虫剂,诸如选自本文所述的那些的生物杀虫剂)。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物直接增大(以上(a))第一微生物集合中的一种或多种微生物的竞争适应性。在一些实施方案中,第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中的一种或多种微生物的竞争适应性增强的代谢物。例如,第二微生物集合中的一种或多种微生物产生使第一微生物集合中的一种或多种微生物的铁获取增强的铁载体。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物减小如下微生物的竞争适应性:该微生物不同于(以上(a)或(b))第一或第二微生物集合的微生物,并且(例如,通过抑制、与其竞争、排除、或以其它方式对其有负面影响)对(以上(a))第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性潜在地有害。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物产生杀菌、抑菌或以其它方式调节如下微生物的生长的代谢物:该微生物不同于第一和第二微生物集合的微生物,并且(例如,通过抑制、与其竞争、排除、或以其它方式对其有负面影响)对(以上(a))第一微生物集合中一种或多种微生物的适应性潜在有害。例如,(以上(b))第二微生物集合中的一种或多种微生物产生抑制对(以上(a))第一集合中的一种或多种微生物潜在有害的微生物的生长或适应性的铁载体。在合成聚生体的一些实施方案中,(以上(b))第二微生物集合补充有惰性配方组分。在一些实施方案中,合成聚生体和其组合物促进或增强植物健康、植物生长和/或植物产量。在一些实施方案中,将根据本专利申请的合成聚生体或其组合物施用于植物(或其部分)、种子、或幼苗。
另一个实施方案设想通过根据以上所述任一种方法的方法鉴定或制备的微生物聚生体。本发明实施方案还设想使用通过根据以上所述任一种方法的方法鉴定或构建的微生物聚生体促进植物健康、生长和/或产量的方法。
E.种子包衣制剂
在一个方面,本文所述的微生物菌株、培养物和/或组合物被配制为种子处理剂。在一些实施方案中,可通过使用被特别设计和制造成用于将种子处理产品精确、安全、以及有效地施用于种子的处理施用设备,利用包括但不限于混合、喷涂或它们的组合的常规方法,采用本文所公开的微生物菌株、培养物和/或组合物的一个或多个层部分地,或基本上均匀地对种子进行包衣。
在一些实施方案中,可使用例如但不限于旋转涂布机、转筒式涂布机、流化床技术、喷射床、旋转喷雾或它们的组合的包衣技术对种子进行包衣。可例如经由在其移动通过喷雾式样时将种子处理剂均匀分配到种子上的涡流“雾化器”盘或喷嘴来施用液体种子处理剂,例如本发明实施方案的那些。在某些实施方案,然后将种子混合或翻转持续附加时间段,以实现附加的处理分配和干燥。种子在用组合物包衣之前可被底涂或不被底涂以增大发芽和出苗的均匀度。在一个另选的实施方案中,可将干粉制剂定量供给到移动的种子上并使其混合直至完全分配。
其它方面提供用受试微生物组合物处理的种子。一个实施方案提供具有用根据本发明实施方案的微生物组合物包衣的至少部分表面区域的种子。在一个实施方案中,经微生物处理的种子具有约105至约109/种子的微生物孢子浓度或微生物细胞浓度。种子还可具有更多的孢子或微生物细胞/种子。微生物孢子和/或细胞能够被自由包衣到种子上,或者优选地,它们可在包衣到种子上之前被配制为液体或固体组合物。例如,可通过使固体载体与孢子的悬浮液混合直至固体载体浸渍有孢子或细胞悬浮液来制备包含微生物的固体组合物。然后可将该混合物干燥以获得期望的颗粒。
在一些其它实施方案中,微生物组合物包含能够使种子免受所选择除草剂例如活性炭、营养素(肥料)有害影响的功能性试剂,以及能够改善发芽和产品质量或它们的组合的其它试剂。
现有技术中已知的种子包衣方法和组合物在通过添加本文所公开的组合物之一对其进行改良时可尤其有用。用于其施用的此类包衣方法和设备公开于例如但不限于美国专利5,918,413;5,554,445;5,389,399;4,759,945;和4,465,017中。种子包衣组合物公开于例如美国专利申请US20100154299、美国专利5,939,356;5,876,739、5,849,320;5,791,084、5,661,103;5,580,544、5,328,942;4,735,015;4,634,587;4,372,080、4,339,456;和4,245,432,它们全部以引用方式并入本文。
多种添加剂均能够被添加到包含本文所公开的组合物的种子处理制剂中。可添加粘结剂并且包括优选地由可为天然或合成的粘合剂聚合物构成而对待包衣的种子无植物毒性影响的那些。粘结剂可选自聚乙酸乙烯酯;聚乙酸乙烯酯共聚物;乙烯-乙酸乙烯酯(EV)共聚物;聚乙烯醇;聚乙烯醇共聚物;纤维素,包括乙基纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素和羧甲基纤维素;聚乙烯基吡咯烷酮;多糖,包括淀粉、改性淀粉、糊精、麦芽糖糊精、藻酸盐和脱乙酰壳多糖;脂肪;油;蛋白质,包括明胶和玉米素;阿拉伯胶;紫胶;偏二氯乙烯和偏二氯乙烯共聚物;木质素磺酸钙;丙烯酸类共聚物;聚丙烯酸乙烯酯;聚环氧乙烷;丙烯酰胺聚合物和共聚物;聚丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酰胺单体;和聚氯丁二烯。
可采用任何多种着色剂,包括被分类为以下的有机发色团:亚硝基;硝基;偶氮,包括单偶氮、双偶氮和多偶氮;吖啶、蒽醌、吖嗪、二苯甲烷、吲达胺、靛酚、次甲基、噁嗪、酞菁、噻嗪、噻唑、三芳基甲烷、氧杂蒽。可添加的其它添加剂包括痕量营养素,例如铁、锰、硼、铜、钴、镍、钼和锌的盐。可施用聚合物或其它粉尘控制剂以使处理剂保留于种子表面上。
在一些具体的实施方案中,除微生物细胞或孢子之外,包衣还可包括粘合剂的层。粘合剂应当为无毒、可生物降解和粘着的。此类材料的示例包括但不限于聚乙酸乙烯酯;聚乙酸乙烯酯共聚物;聚乙烯醇;聚乙烯醇共聚物;纤维素,诸如甲基纤维素、羟甲基纤维素和羟甲基丙基纤维素;葡聚糖;藻酸盐;糖;糖蜜;聚乙烯基吡咯烷酮;多糖;蛋白质;脂肪;油;阿拉伯胶;明胶;糖浆;和淀粉。更多示例可见于例如美国专利7,213,367和美国专利申请US20100189693,这两者以引用方式并入本文。
各种添加剂例如粘合剂、分散剂、表面活性剂和营养素以及缓冲液成分也可包含于种子处理制剂之内。其它种子处理添加剂包括但不限于涂层剂、润湿剂、缓冲剂、以及多糖。可将至少一种农业上可接受的载体添加到种子处理制剂中,例如水、固体或干粉。干粉可来源于多种材料,例如碳酸钙、石膏、蛭石、滑石、腐殖质、活性炭、以及各种磷化合物。
在一些实施方案中,种子包衣组合物可包含至少一种填料,其为与活性组分结合以利于其施用到种子上的有机或无机、天然或合成的组分。在某些实施方案中,填料为惰性固体,例如粘土、天然或合成硅酸盐、硅石、树脂、蜡、固体肥料(例如铵盐),天然土壤矿物,例如高岭土、粘土、滑石、石灰、石英、绿坡缕石、蒙脱土、膨润土或硅藻土,或合成矿物质,例如硅石、矾土或硅酸盐,特别是硅酸铝或硅酸镁。
种子处理制剂还可包含以下成分中的一者或多者:其它杀虫剂,包括仅在地面下起作用的化合物;杀真菌剂,例如克菌丹、二硫四甲秋兰姆、甲霜灵、咯菌腈、恶霜灵和那些材料中每种的异构体,等等;除草剂,包括选自草甘膦、氨基甲酸盐、硫代氨基甲酸盐、乙酰胺、三嗪、二硝基苯胺、甘油醚、哒嗪酮、尿嘧啶、苯氧基、脲、以及苯甲酸的化合物;除草安全剂,例如苯并噁嗪、二苯甲基衍生物、N,N-二烯丙基二氯乙酰胺、各种二卤酰基、噁唑烷基和噻唑烷基化合物、乙酮、萘酐化合物、以及肟衍生物;化学肥料:生物肥料:以及生物防治剂,例如来自根瘤菌属(Rhizobium)、芽孢杆菌属、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙雷氏菌属(Serratia)、木霉属(Trichoderma)、球囊霉属(Glomus)、粘帚霉属和菌根真菌(mycorrhizal fungi)的其它天然存在或重组的细菌和真菌。这些成分可作为单独层添加于种子上,或者另选地可作为实施方案的种子包衣组合物的一部分添加。
在一些实施方案中,在种子处理剂中使用的组合物或其它成分的量不应当抑制种子发芽,或者导致对种子的植物性毒素损伤。
本专利申请的组合物中的用于处理种子的制剂可呈悬浮液;乳液;含水介质(例如水)中颗粒的浆液;可润湿性粉末;可润湿性颗粒剂(干燥流动);和干燥颗粒剂的形式。如果配制为悬浮液或浆液,则制剂中活性成分的浓度为按重量(w/w)计约0.5%至约99%、5%-40%或者如同本领域技术人员以其它方式配制的。
在一些实施方案中,可将其它常规的无活性或惰性成分掺入种子处理制剂中。此类惰性成分示例包括但不限于常规的粘着剂;分散剂诸如甲基纤维素,例如充当种子处理剂所用的组合的分散剂/粘着剂;聚乙烯醇;卵磷脂、聚合物分散剂(例如,聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯);增稠剂(例如,粘土增稠剂以改善粘度并降低颗粒悬浮液的沉降);乳液稳定剂;表面活性剂:防冻剂化合物(例如,脲)、染料、着色剂等等。可用于本专利申请实施方案的另外惰性成分可见于McCutcheon’s,第1卷,“Emulsifiers and Detergents,”MCPublishing Company,Glen Rock,N.J.,U.S.A.,1996。可用于本专利申请实施方案的另外惰性成分可见于McCutcheon’s,第2卷,“Functional Materials,”MC PublishingCompany,Glen Rock,N.J.,U.S.A.,1996。
可通过包括但不限于在容器(例如,瓶或袋)中混合、机械施用、翻滚、喷涂、以及浸没的多种方法将本专利申请的包衣制剂施用到种子。可使用多种活性或惰性材料使种子与微生物组合物接触,例如常规的包膜材料,包括但不限于水基包膜材料例如SEPIRETTM(Seppic,Inc.,N.J.)和OPACOATTM(Berwind Pharm.Services,P.A.)。
用于处理种子的根据本专利申请的实施方案的组合物的量将根据种子类型和活性成分类型变化,但是所述处理将包括使种子与农业有效量的本发明组合物接触,如本文所讨论,有效量意指足以影响有益或期望结果的发明组合物的量。有效量可以在一次或多次施用中施用。
除包衣层之外,还可用以下成分中的一者或多者处理种子:其它杀虫剂,包括杀真菌剂和除草剂;除草安全剂;肥料和/或生物防治剂。这些成分可作为单独层添加,或者另选地可添加到包衣层中。
可使用多种技术和机器,例如流化床技术、辊磨方法、旋转静态种子处理器、以及转筒式涂布机将本专利申请的实施方案的种子包衣制剂施用到种子。其它方法例如喷射床也是可用的。种子可在包衣之前被预先上浆。在一些实施方案中,在包衣之后,将种子干燥并然后转移到上浆机中进行上浆。此类过程对技术人员是已知的。
经微生物处理的种子还可用膜外覆层包膜以保护包衣。此类外覆层在本领域中是已知的并且可使用流化床和转筒膜包衣技术以及本领域已知的任何其它合适的方法施用。
在另一个实施方案中,还可通过使用固体基质填充将本专利申请的微生物菌株、分离株、培养物、和/或组合物引入种子上。例如,可将一定量的本发明组合物与固体基质材料混合,然后可将种子与固体基质材料接触放置一段时间以使得组合物能够被引入种子。然后可任选地从固体基质材料中分离种子并储存或使用,或者可直接储存或栽植固体基质材料和种子的混合物。其中可用的固体基质材料可包括聚丙烯酰胺、淀粉、粘土、硅石、矾土、土壤、砂、聚脲、聚丙烯酸酯、或能够吸收或吸附组合物一段时间并将该组合物释放到种子之中或之上的任何其它材料。确定组合物和固体基质材料彼此相容是有用的。例如,固体基质材料应当被选择成使得其可例如在数分、数小时、数天或数月内以适当的速率释放组合物。
在一些实施方案中,能够发芽以形成植物的任何植物种子可用本文设想的组合物处理。合适的种子包括但不限于谷类食物、咖啡、菜荚作物、纤维作物、花、果实、豆球蛋白、油料作物、树、块茎作物、蔬菜的那些、以及单子叶植物和双子叶植物物种的其它植物。在一些实施方案中,被包衣的作物种子包括但不限于菜豆、胡萝卜、玉米、棉花、草、生菜、花生、胡椒、马铃薯、油菜籽、稻、裸麦、高粱、大豆、糖用甜菜、向日葵、烟草属植物、以及番茄种子。在某些实施方案中,大麦或小麦(春小麦或冬小麦)种子用本发明的组合物包衣。
F.用于制备组合物的方法
可使用本领域已知的技术(包括但不限于标准静态干燥和液体发酵)制备微生物的培养物以用于本专利申请的组合物。通常在生物反应器中实现生长。生物反应器可为使微生物(PGPM)生长的任何合适的形状或尺寸。生物反应器的尺寸和尺度范围可为10mL至数升至数立方米并可由不锈钢或本领域已知和使用的任何其它合适的材料制成。生物反应器可为分批型生物反应器、补料分批型或连续型生物反应器(例如,连续搅拌的反应器)。例如,生物反应器可为如微生物学领域已知和使用的恒化器以用于微生物生长和收获。生物反应器可获自任何商业供应商(另参见Bioreactor System Design,Asenjo&Merchuk,CRCPress,1995)。对于小规模操作,分批生物反应器可被用于例如测试和开发新的方法,以及不能转化成连续操作的过程。
生物反应器中生长的微生物或PGPM可以是悬浮或固定的。生物反应器中的生长通常处于有氧条件和对生长合适的温度和pH下。细胞生长可在5至40℃的温度下实现,优选的温度在15至30℃、15至28℃、20至30℃、或15至25℃的范围内。营养培养基的pH可在4.0至9.0之间变化,但是优选的操作范围通常为pH 4.0至7.0、或4.5至6.5、或pH 5.0至6.0的微酸性到中性。通常,在接种后18-96小时获得最大细胞产量。
用于培养本专利申请的微生物的最佳条件可取决于具体菌株。然后,根据选择过程中应用的条件和大多数微生物的一般需求,本领域的普通技术人员将能够确定必需营养素和条件。在需氧液体培养中,微生物或PGPM将通常在包含能够被微生物吸收并支持高效细胞生长的碳源、氮源和无机盐的培养基上生长。示例性(但非限制性的)碳源是己糖,例如葡萄糖,但可被易于吸收的其它源诸如氨基酸替代。在生长过程中,可将多种无机和蛋白质性材料用作氮源。示例性(但非限制性的)氮源是氨基酸和脲,但是其它氮源包括气态氨、硝酸盐和铵的无机盐、维生素、嘌呤、嘧啶、酵母提取物、牛肉膏、蛋白胨、大豆粉、酪蛋白的水解物、酒糟可溶物等。在可被掺入营养培养基中的无机矿物质之中为能够得到钙、锌、铁、锰、镁、铜、钴、钾、钠、钼酸根、磷酸根、硫酸根、氯离子、硼酸根等离子的常规盐。在一些实施方案中,可使用用于真菌菌株的马铃薯右旋糖液体介质和用于细菌菌株的R2A液体培养基预混物。
G.使用微生物菌株、培养物和/或组合物的方法
其它方面提供用于处理植物种子的方法,所述方法包括将所述植物种子暴露于如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物和/或组合物或与其接触的步骤。
其它方面提供用于增强植物的生长或产量的方法,所述方法包括将有效量的如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物和/或组合物施用于植物或施用于植物的周围环境。另一个方面提供用于预防、抑制或治理植物致病性病害发展的方法,所述方法包括将有效量的如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物和/或组合物施用于植物或施用于植物的周围环境。在方法的一些实施方案中,在寄主植物于生长培养基或土壤中生长之前或同时,使所述微生物菌株在所述寄主植物的所述生长培养基或土壤中生长。在一些实施方案中,微生物菌株在所述植物上作为内生菌建立。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)分别以未经处理的对照植物(或其部分)或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x浓度的浓度施用于植物(或其部分)或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,在施用时或施用后,经处理的植物(或其部分)或植物周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)中微生物菌株(PGPM)的浓度为未经处理的对照植物(或其部分)或对照植物的周围环境中发现或检出的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x、或1000x的浓度。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)以高于1×102CFU/mL的浓度施用于植物(或其部分)或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)。在一些实施方案中,浓度范围为约1×102至约1×1010CFU/mL,例如在1×105至1×109CFU/mL范围内的浓度。在以上方法的一些实施方案中,将培养物或组合物中的微生物菌株(PGPM)以至少1×106CFU/mL的浓度施用于植物(或其部分)或施用于植物的周围环境(例如,紧靠土壤层或根际)导致经处理的植物、植物部分或植物的周围环境中微生物菌株的浓度为未经处理的植物或其周围环境中发现的菌株的至少2x的量。表1汇总了如在未经处理的对照玉米植物和对应的植物根际中发现的微生物菌株P0032_C7、P0160_E1或S2374、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0134_G7或S2280、P0020_B1、S2370、S2375、S2445、S2333、S2329、S2376、S2327、S2330、P0047_A1或S2284、P0147_D10或S2291、S2423、S2278、P0132_A12或S2420、P0132_C12、P0105_C5、P0154_H3、S1112、S2435、S2159_P0058_B9、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、S2487、S2488、P0047_C1、S2382、P0140_D9、S2387、S2158、P0038_D2或S2166、S2424、P0042_E1、P0042_A8或S2167、S2293、S2421、P0154_G3、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、P0140_C10或S2300、P0047_E8、P0157_G5或S2303、P0042_D5或S2165、S2373、S2473、P0033_E1或S2177、P0173_H3或S2404、S2384、S2385、S2521、P0032_A8或S2181、P0049_E7、S2197、S2477、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0018_A1、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、S2228、S2285、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、S2669、S2473、P00156_G2、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644和S2646的相对丰度的平均值和中值。在以上方法的一些实施方案中,施用于植物的PGPM浓度或在此类施用时/施用后检测出的PGPM浓度为如表1中所列的相同微生物菌株的至少2x、5x、10x、100x、500x或1000x的平均浓度。
表1.来自274个土壤样品的微生物菌株的相对丰度的平均值和中值汇总:
在以上方法的一些实施方案中,微生物菌株在施用后在植物和植物的种子后代中作为内生菌建立。在该方面的一些实施方案中,引入植物中的微生物内生菌可为具有植物生长促进活性、生物防治活性、或这两种活性的组合的内生菌微生物。先前发现有效的将微生物内生菌引入谷类植物物种的多种方法在本领域是已知的。此类方法的示例包括美国专利申请20030195117A1、美国专利申请20010032343A1和美国专利申请7,084,331中描述的那些,这些专利以引用方式并入本文。在一些实施方案中,将微生物菌株、分离株、培养物和/或组合物施用于选自以下的一个或多个位置:土壤、种子、根、花、叶、果实、植物的一部分或整个植株。在该方面中,可通过本文所述的任何递送体系将微生物菌株、培养物或组合物递送到植物。
适用于方法和材料应用的植物致病性病害的示例包括但不限于由广泛的病原性真菌引起的病害。将本发明实施方案的方法优选地应用到对农业、园艺、用于产生生物燃料分子及其它化学品的植物生物质、和/或林业很重要或所关注的病原性真菌。在一些实施方案中,病原性真菌是病原性假单胞菌属物种(例如,青枯假单胞菌(Pseudomonassolanacearum))、苛养木杆菌(Xylella fastidiosa);青枯菌(Ralstonia solanacearum)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)、梨火疫病菌(Erwinia amylovora)、镰孢属物种、疫霉属(Phytophthora)物种(例如致病疫霉菌(P.infestans))、灰霉菌属(Botrytis)物种、小球腔菌属(Leptosphaeria)物种、白粉菌(powdery mildews)(子囊菌门(Ascomycota))和锈菌(担子菌门(Basidiomycota))等。
所关注的植物病原体的非限制性示例包括例如,枝顶孢霉(Acremoniumstrictum)、根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、互隔交链孢霉菌(Alternariaalternata)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、根腐丝囊霉(Aphanomyces euteiches)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、白绢病菌(Athelia rolfsii)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、玉米生平脐蠕孢(Bipolaris zeicola)、灰色葡萄孢(Botrytis cinerea)、京都丽赤壳菌(Calonectria kyotensis)、玉蜀黍头孢霉(Cephalosporium maydis)、苜蓿尾孢(Cercospora medicaginis)、大豆灰斑病菌(Cercospora sojina)、马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)、草莓炭疽菌(Colletotrichum fragariae)、禾生炭疽菌(Colletotrichum graminicola)、葡萄白腐病菌(Coniella diplodiella)、Coprinopsis psychromorbida、多主棒孢霉(Corynesporacassiicola)、苍白弯孢菌(Curvularia pallescens)、柱枝双孢霉(Cylindrocladiumcrotalariae)、Diplocarpon earlianum、棉色二孢(Diplodia gossyina)、色二孢菌(Diplodia spp.)、黑附球菌(Epicoccum nigrum)、Erysiphe dehor acearum、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、尖孢镰刀菌f.sp.tuberosi、腐皮镰孢菌(Fusarium proliferatum var.proliferatum)、茄腐镰孢(Fusarium solani)、轮状镰刀霉菌(Fusarium verticillioides)、岛灵芝(Ganodermaboninense)、白地霉(Geotrichum candidum)、毛盘孢菌(Glomerella tucumanensis)、葡萄球座菌(Guignardia bidwellii)、玉米秋梗孢(Kabatiella zeae)、苜蓿小光壳(Leptosphaerulina briosiana)、黄斑病菌(Leptotrochila medicaginis)、壳球孢属(Macrophomina)、菜豆壳球孢(Macrophomina phaseolina)、稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、稻热病菌(Magnaporthe oryzae)、Microsphaera manshurica、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、香蕉黑条叶斑病菌(Mycosphaerella fijiensis)、草莓球腔菌(Mycosphaerella fragariae)、稻黑孢菌(Nigrospora oryzae)、榆树病菌(Ophiostomaulmi)、胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)、水稻纹枯病菌(Pelliculariasasakii)(立枯丝核菌(Rhizoctonia solani))、霜霉病菌(Peronospora manshurica)、豆薯层锈菌(Phakopsora pachyrhizi)、马铃薯坏疽病菌(Phoma foveata)、苜蓿茎点霉(Phoma medicaginis)、大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla)、樟疫霉(Phytophthora cinnamomi)、红腐疫霉(Phytophthora erythroseptica)、草莓疫莓(Phytophthora fragariae)、致病疫霉(Phytophthora infestans)、苜蓿猝倒病菌(Phytophthora medicaginis)、大雄疫霉(Phytophthora megasperma)、棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)、白叉丝单囊壳(Podosphaera leucotricha)、苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis)、小麦秆锈菌小种(Puccinia graminis subsp.Tritici)(UG99)、玉米锈病菌(Puccinia sorghi)、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、稻瘟霉(Pyricularia oryzae)、终极腐霉(Pythium ultimum)、瓜果腐霉(Pythiumaphanidermatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉蜀黍丝核菌(Rhizoctoniazeae)、座坚壳属(Rosellinia sp.)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、Sclerotininatrifoliorum、齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)、大豆壳针孢(Septoria glycines)、番茄壳针孢(Septoria lycopersici)、Setomelanomma turcica、斑点单囊壳(Sphaerothecamacularis)、马铃薯粉痂菌(Spongospora subterranea)、匍柄霉属(Stemphylium sp)、马铃薯癌肿病菌(Synchytrium endobioticum)、有鞘亚目(Thecaphora)(Angiosorus)、根串珠霉属(Thielaviopsis)、小麦印度腥黑穗病菌(Tilletia indica)、绿色木霉(Trichoderma viride)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、黄萎轮枝霉(Verticilliumalbo-atrum)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、大丽轮枝菌、地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)、或水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)。
在一些实施方案中,方法和材料可用于抑制病原体烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)、Cerpospora betae、刺盘孢属(Colletotrichum sp.)、弯孢属(Curvularia spp.)、镰孢属(Fusarium sp.)、岛灵芝(Ganoderma boninense)、白地霉(Geotrichum candidum)、赤霉菌属(Gibberella sp.)、明梭孢属(Monographella sp.)、香蕉黑条叶斑病菌(Mycosphaerella fijiensis)、棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)、栎树猝死病菌(Phytophthora ramorum)、青霉菌属(Penicillium sp.)、终极腐霉(Pythium ultimum)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、根霉菌属(Rhizopus spp.)、裂褶菌属(Schizophyllumspp.)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、壳多孢属(Stagnospora sp.)、大丽花轮枝孢(Verticillium dahliae)、或地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)的发展。在一些实施方案中,方法和材料可用于抑制几种商业重要的植物病原体的发展,包括禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)NRRL-5883、雪腐明梭孢(Monographella nivalis)ATCC MYA-3968、玉蜀黍赤霉(Gibberella zeae)ATCC-16106、颖枯壳针孢(Stagnospora nodurum)ATCC-26369、禾生炭疽菌(Colletotrichum graminicola)ATCC-34167、以及青霉菌属病原体。
在一些实施方案中,用于增强植物的生长或产量的方法(包括本文所述的任何此类方法)还包括在将植物、植物种子或植物幼苗栽植到所述土壤中之前对土壤进行处理的步骤。在一些实施方案中,在土壤处理步骤中将土壤完全或部分灭菌。在一些实施方案中,土壤处理方法包括使微波辐射器移入土壤中,然后将微波从微波辐射器发射到待处理的土壤。此类方法的示例可见于例如US 20060283364。在一些实施方案中,通过高压灭菌(例如,在121℃,1h或其它类似的条件)或通过伽玛(γ)-辐射(50kGy)将土壤完全或部分灭菌。在一些实施方案中,通过加热、用环氧乙烷蒸气处理或气体处理将土壤完全或部分灭菌。在一些实施方案中,通过土壤曝晒将土壤部分或完全灭菌。土壤曝晒是通过地膜覆盖土壤并用油布,通常用塑料(例如透明的聚乙烯)覆盖物对其覆盖而利用太阳能进行土壤处理(例如,灭菌)以诱捕太阳能的环境友好的方法。其它合适的土壤处理方法对本领域技术人员来说是已知的。
在一些实施方案中,用于增强植物的生长或产量的方法包括(a)在将植物、植物种子或其幼苗栽植到所述土壤中之前对土壤进行处理;(b)将植物、植物种子或其幼苗栽植到步骤(a)处理的土壤中;以及(3)将有效量的如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物和/或组合物施用于植物、植物种子或幼苗、或其周围环境。在一些实施方案中,土壤被完全灭菌。在一些实施方案中,土壤被部分灭菌。在一些实施方案中,通过在步骤(a)中高压灭菌来处理土壤。
H.递送体系
微生物菌株、分离株或其培养物、或微生物组合物可通过几种方式进行递送。在一些实施方案中,其可通过种子处理、种子引发、幼苗浸渍、土壤施用、叶喷涂、果实喷涂、蜂巢插入、根出条处理、铺石处理、以及多种递送体系进行递送。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、其培养物或包含其的组合物可通过直接暴露于植物种子或与植物种子接触来递送。在一些实施方案中,种子可用微生物菌株(或分离株或其培养物)或其组合物包衣。利用PGPM的种子处理可对几种植物病害有效。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物或组合物可在种子引发过程中通过直接暴露于植物种子或与植物种子接触来递送。利用PGPM引发可提高发芽并改善成苗。此类引发过程可诱导发芽的生理过程,但防止胚芽和胚根的出苗。已经认识到,生理过程的诱导有助于种子际上PGPM的建立和增殖。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、分离株、其培养物或包含其的组合物可通过幼苗浸渍来递送。植物病原体通常通过根进入寄主植物。在一些实施方案中,保护优先被PGPM定殖的根际区域防止寄主-寄生关系的建立。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物或组合物可通过直接施用于土壤来递送。土壤是有益微生物和病原性微生物两者的库。在一些实施方案中,将PGPM递送到土壤可抑制病原性微生物的建立。
在一些实施方案中,如本文所述的微生物菌株、分离株、培养物或组合物可通过叶喷涂或果实喷涂来递送。在一些实施方案中,将PGPM直接递送到植物叶或果实可抑制对各种叶病害或采后病害作贡献的病原性微生物。
在一些实施方案中,微生物菌株、分离株、培养物或组合物可通过蜂巢插入来递送。蜜蜂和大黄蜂充当使开花作物和水果作物病害的生物防治剂传播的载体。在一些实施方案中,分配器可被附接至蜂巢并装载有任选地与其它期望的试剂组合的PGPM。
在一些实施方案中,微生物菌株、分离株、培养物或组合物可通过根出条处理或铺石处理来递送。PGPM可在无性繁殖作物的土传病害的管理中起重要作用。PGPM的递送根据作物变化。对于作物例如香蕉,PGPM可通过根出条处理(例如,根出条浸渍)来递送。对于作物例如甘蔗,PGPM可通过铺石处理(例如,铺石浸渍)来递送。
在一些实施方案中,通过多个递送体系(包括如本文所述的两个或更多个递送体系)递送微生物菌株、分离株、培养物或组合物。
I.用微生物菌株侵染的植物品种和种子后代
在本发明实施方案的其它方面中还提供了通过将本文所公开的微生物内生菌人工引入植物中产生的人为侵染的植物。在该方面的一些实施方案中,引入植物中的微生物内生菌可为具有植物生长促进活性、生物防治活性、或这两种活性的组合的内生菌微生物。在一些实施方案中,微生物菌株在植物或其子代(例如种子后代)中作为内生菌建立,所述植物或其子代暴露于如本文所述的微生物(内生)菌株、分离株、其培养物或组合物或者用其处理。因此,另一个实施方案提供包含本文所公开的微生物内生菌的人为侵染的植物的种子。
先前发现有效的将微生物内生菌引入到谷类植物物种的多种方法在本领域是已知的。此类方法的示例包括美国专利申请20030195117A1、美国专利申请20010032343A1和美国专利申请7,084,331中描述的那些等等。
在一些实施方案中,在人为侵染之后,分离的内生菌微生物的DNA序列通过PCR扩增并且内生菌通过对扩增的DNA序列进行同源性检索加以确认。在一些实施方案中,将表达可鉴定方式的外来基因引入以上提及的内生菌微生物中,并且以上提及的影响植物的内生菌微生物的定殖的存在通过利用外来基因通过以上可鉴定方式加以确认。
J.合适的植物
原则上,本专利申请的方法和组合物可用于任何植物物种。单子叶植物以及双子叶植物物种是特别合适的。方法和组合物优选地与对农业、园艺、用于产生用于生产液体燃料分子及其它化学品的生物质、和/或林业很重要或所关注的植物一起使用。
在另一个实施方案中。本文所公开的PGPM组合物、聚生体和方法可用于处理转基因种子。转基因种子是指包含允许表达不天然存在于植物中的多肽或蛋白质的至少一种异源性基因的植物的种子。转基因种子中的异源性基因可来源于例如芽孢杆菌属、根瘤菌属(Rhizobium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙雷氏菌(Serratia)、木霉属(Trichoderma)、棍状杆菌属(Clavibacter)、球囊霉属(Glomus)或粘帚霉属(Gliocladium)物种的微生物。
因此,本专利申请的实施方案可应用于宽范围的植物,优选属于被子植物和裸子植物纲的高等植物。双子叶和单子叶亚纲的植物特别合适。双子叶植物属于Aristochiales、菊目(Asterales)、肉穗果目(Batales)、桔梗目(Campanulales)、白花菜目(Capparales)、石竹目(Caryophyllales)、木麻黄目(Casuarinales)、卫矛目(Celastrales)、山茱萸目(Cornales)、岩梅目(Diapensales)、五桠果目(Dilleniales)、川绿断目(Dipsacales)、柿树目(Ebenales)、杜鹃花目(Ericales)、杜仲目(Eucomiales)、大戟目(Euphorbiales)、豆目(Fabales)、壳斗目(Fagales)、龙胆目(Gentianales)、牻牛儿苗目(Geraniales)、小二仙草目(Haloragales)、金缕梅目(Hamamelidales)、Middles、胡桃目(Juglandales)、唇形目(Lamiales)、樟目(Laurales)、玉蕊目(Lecythidales)、莱脱纳目(Leitneriales)、木兰目(Magniolales)、锦葵目(Malvales)、杨梅目(Myricales)、桃金娘目(Myrtales)、睡莲目(Nymphaeales)、罂粟目(Papeverales)、胡椒目(Piperales)、车前目(Plantaginales)、蓝雪目(Plumb aginales)、河苔草目(Podostemales)、花葱目(Polemoniales)、远志目(Polygalales)、蓼目(Polygonales)、报春花目(Primulales)、山龙眼目(Proteales)、大花草目(Rafflesiales)、毛茛目(Ranunculales)、鼠李目(Rhamnales)、蔷薇目(Rosales)、茜草目(Rubiales)、杨柳目(Salicales)、檀香目(Santales)、无患子目(Sapindales)、瓶子草科(Sarraceniaceae)、玄参目(Scrophulariales)、山茶目(Theales)、昆栏树目(Trochodendrales)、伞形目(Umbellales)、荨麻目(Urticales)、以及Violates目。单子叶植物属于泽泻目(Alismatales)、天南星目(Arales)、槟榔目(Arecales)、凤梨目(Bromeliales)、鸭跖草目(Commelinales)、环花目(Cyclanthales)、莎草目(Cyperales)、谷精草目(Eriocaulales)、水鳖目(Hydrocharitales)、灯芯草目(Juncales)、百合目(Lilliales)、茨藻目(Najadales)、兰目(Orchidales)、露兜树目(Pandanales)、禾本目(Poales)、帚灯草目(Restionales)、霉草目(Triuridales)、香蒲目(Typhales)、以及姜目(Zingiberales)。属于裸子植物纲的植物是苏铁目(Cycadales)、银杏目(Ginkgoales)、买麻藤目(Gnetales)以及松目(Pinales)。
合适的物种可包括以下属的成员:秋葵属(Abelmoschus)、冷杉属(Abies)、槭属(Acer)、剪股颖属(Agrostis)、葱属(Allium)、六出花属(Alstroemeria)、凤梨属(Ananas)、穿心莲属(Andrographis)、须芒草属(Andropogon)、艾属(Artemisia)、芦竹属(Arundo)、颠茄属(Atropa)、小檗属(Berberis)、甜菜属(Beta)、红木属(Bixa)、芸苔属(Brassica)、金盏花属(Calendula)、山茶属(Camellia)、喜树属(Camptotheca)、大麻属(Cannabis)、辣椒属(Capsicum)、红花属(Carthamus)、长春花属(Catharanthus)、三尖杉属(Cephalotaxus)、菊属(Chrysanthemum)、金鸡纳属(Cinchona)、西瓜属(Citrullus)、咖啡属(Coffea)、秋水仙属(Colchicum)、锦紫苏属(Coleus)、黄瓜属(Cucumis)、南瓜属(Cucurbita)、狗牙根属(Cynodon)、曼陀罗属(Datura)、石竹类属(Dianthus)、毛地黄属(Digitalis)、薯蓣属(Dioscorea)、油棕属(Elaeis)、麻黄属(Ephedra)、蔗茅属(Erianthus)、古柯属(Erythroxylum)、桉属(Eucalyptus)、羊茅属(Festuca)、草莓属(Fragaria)、雪花莲属(Galanthus)、大豆属(Glycine)、棉属(Gossypium)、向日葵属(Helianthus)、橡胶树属(Hevea)、大麦属(Hordeum)、莨菪属(Hyoscyamus)、麻风树属(Jatropha)、莴苣属(Lactuca)、亚麻属(Linum)、黑麦草属(Lolium)、羽扇豆属(Lupinus)、番茄属(Lycopersicon)、石松属(Lycopodium)、木薯属(Manihot)、苜蓿属(Medicago)、薄荷属(Mentha)、芒属(Miscanthus)、芭蕉属(Musa)、烟草属(Nicotiana)、稻属(Oryza)、黍属(Panicum)、罂粟属(Papaver)、银胶菊属(Parthenium)、狼尾草属(Pennisetum)、矮牵牛属(Petunia)、蔌草属(Phalaris)、梯牧草属(Phleum)、松属(Pinus)、早熟禾属(Poa)、猩猩木(Poinsettia)属、杨属(Populus)、萝芙木属(Rauwolfia)、蓖麻属(Ricinus)、蔷薇属(Rosa)、甘蔗属(Saccharum)、柳属(Salix)、血根草属(Sanguinaria)、:赛茛菪属(Scopolia)、黑麦属(Secale)、茄属(Solanum)、高粱属(Sorghum)、大米草属(Spartina)、Spinacea、菊蒿属(Tanacetum)、紫杉属(Taxus)、可可属(Theobroma)、小黑麦属(Triticosecale)、小麦属(Triticum)、北美穗草属(Uniola)、藜芦属(Veratrum)、蔓长春花属(Vinca)、葡萄属(Vitis)和玉蜀黍属(Zea)。
方法和组合物可用于对农业、园艺、用于产生生物燃料分子及其它化学品的生物质、和/或林业很重要或所关注的植物。非限制性示例包括例如柳枝稷(Panicum virgatum)(switchgrass)、高粱(Sorghum bicolor)(sorghum,苏丹草)、巨芒草(Miscanthusgiganteus)(芒草)、甘蔗属(Saccharum sp.)(能源甘蔗)、香脂杨(Populus balsamifera)(杨树)、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、大豆(Glycine max)(大豆)、甘蓝型油菜(Brassicanapus)(坎诺拉)、普通小麦(Triticum aestivum)(小麦)、陆地棉(Gossypium hirsutum)(棉花)、水稻(Oryza sativa)(稻)、向日葵(Helianthus annuus)(葵花)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、甜菜(Beta vulgaris,sugarbeet)、珍珠粟(Pennisetumglaucum)(珍珠稷)、黍属(Panicum spp.)、高粱属(Sorghum spp.)、芒草属(Miscanthusspp.)、甘蔗属(Saccharum spp.)、蔗茅属(Erianthus spp.)、杨属(Populus spp.)、大须芒草(Andropogon gerardii)(大蓝须芒草)、矮象草(Pennisetum purpureum)(象草)、虉草(Phalaris arundinace)(利甘草)、狗牙根(Cynodon dactylon,bermudagrass)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、Spartina pectinata(草原网茅)、芦获(Arundo donax)(芦竹)、黑麦(Secale cereale)(裸麦)、柳属(Salix spp.)(柳树)、桉属(Eucalyptusspp.)(桉树)、小黑麦属(Triticosecale spp.)(小麦属-小麦X裸麦)、竹族(Bambuseae)(竹)、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻疯树(Jatropha curcas)(麻风树)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(油棕榈树)、海枣(Phoenixdactylifera)(枣椰树)、肯氏椰子(Archontophoenix cunninghamiana)(假槟榔)、金山葵(Syagrus romanzoffiana)(克利巴椰子)、亚麻子(Linum usitatissimum)(亚麻)、芥菜(Brassica juncea)、木薯(Manihot esculenta,cassaya)、番茄(Lycopersiconesculentum,tomato)、莴苣(Lactuca saliva)(生菜)、香蕉(Musa paradisiaca,banana)、马铃薯(Solanum tuberosum)(土豆)、甘蓝(Brassica oleracea)(花椰菜,菜花,小甘蓝)、野茶树(Camellia sinensis)(茶树)、草莓(Fragaria ananassa,strawberry)、可可(Theobroma cacao,cocoa)、咖啡树(Coffea arabica)(咖啡)、葡萄(Vitis vinifera,grape)、菠萝(Ananas comosus)(凤梨)、辣椒(Capsicum annum)(辣&甜椒)、洋葱(Alliumcepa,onion)、香瓜(Cucumis melo)(甜瓜)、黄瓜(Cucumis sativus)(胡瓜)、笋瓜(Cucurbita maxima)(西葫芦)、中国南瓜(Cucurbita moschata)(南瓜)、菠菜(Spinaceaoleracea,spinach)、西瓜(Citrullus lanatus,watermelon)、黄秋葵(Abelmoschusesculentus)(秋葵荚)、茄子(Solanum melongena,eggplant)、罂粟(Papaver somniferum,opium poppy)、鬼罂粟(Papaver orientale)、欧洲紫杉(Taxus baccata)、短叶红豆杉(Taxus brevifolia)、青蒿素(Artemisia annua)、大麻(Cannabis saliva)、喜树(Camptotheca acuminate)、长春花(Catharanthus roseus)、玫瑰红长春花(Vincarosea)、金鸡纳树(Cinchona officinalis)、秋水仙(Coichicum autumnale)、加州藜芦(Veratrum californica)、毛花洋地黄(Digitalis lanata)、毛地黄(Digitalispurpurea)、薯蓣属(Dioscorea spp.)、穿心莲(Andrographis paniculata)、颠茄(Atropabelladonna)、曼陀罗(Datura stomonium)、小檗属(Berberis spp.)、三尖杉属(Cephalotaxus spp.)、草麻黄(Ephedra sinica)、麻黄属(Ephedra spp.)、古柯(Erythroxylum coca)、Galanthus wornorii、东莨菪属(Scopolia spp.)、千层塔(Lycopodium serratum)(蛇足石杉)、石松属(Lycopodium spp.)、蛇根木(Rauwolfiaserpentina)、萝芙木属(Rauwolfia spp.)、血根草(Sanguinaria canadensis)、莨菪属(Hyoscyamus spp.)、金盏花(Calendula officinalis)、小白菊(Chrysanthemumparthenium)、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)、短舌匹菊(Tanacetum parthenium)、灰白银胶菊(Parthenium argentatum)(银胶菊)、橡胶属(Hevea spp.)(橡胶)、留兰香(Menthaspicata)(薄荷)、欧薄荷(Mentha piperita)(薄荷)、红木(Bixa orellana)、六出花属(Alstroemeria spp.)、蔷薇属(Rosa spp.)(玫瑰)、香石竹(Dianthus caryophyllus)(康乃馨)、矮牵牛属(Petunia spp.)(矮牵牛花)、一品红(Poinsettia pulcherrima,poinsettia)、烟草(Nicotiana tabacum,tobacco)、白羽扇豆(Lupinus albus)(羽扇豆)、海滨燕麦草(Uniola paniculata)(燕麦)、剪股颖属(Agrostis spp.)(本特草)、美洲山杨(Populus tremuloides)(白杨)、松属(Pinus spp.)(松树)、冷杉属(Abies spp.)(冷杉)、槭属(Acer spp.)(槭树)、多棱大麦(Hordeum vulgare)(大麦)、草地早熟禾(Poapratensis)(蓝草)、黑麦草属(Lolium spp.)(黑麦草),猫尾草(Phleum pratense)(梯牧草)、以及针叶。关注的是为产生能量而种植的植物(所谓的能源作物),例如纤维素基能源作物如柳枝稷(Panicum virgatum,switchgrass)、蜀黍(Sorghum bicolor)(高粱,苏丹草)、奇岗(Miscanthus giganteus)(芒草)、甘蔗属(Saccharum sp.)(能源甘蔗)、香脂杨(Populus balsamifera)(白杨)、大须芒草(Andropogon gerardii)(大蓝须芒草)、矮象草(Pennisetum purpureum)(象草)、虉草(Phalaris arundinace)(利甘草)、狗牙根(Cynodondactylon,bermudagrass)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、Spartina pectinata(草原网茅)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、芦获(Arundo donax)(芦竹)、黑麦(Secale cereale)(裸麦)、柳属(Salix spp.)(柳树)、桉属(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属(Triticosecale spp.)(小麦属-小麦X裸麦)、以及竹族(Bambuseae)(竹);和淀粉基能源作物,如玉蜀黍(Zea mays)(玉米)和木薯(Manihot esculenta,cassaya);和糖基能源作物,如甘蔗属(Saccharum sp.)(甘蔗)、甜菜(Beta vulgaris,sugarbeet)、和糖高粱(Sorghum bicolor(L.)Moench)(甜高粱);以及产生物燃料能源作物,如大豆(Glycinemax)(大豆)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(坎诺拉)、向日葵(Helianthus annuus)(葵花)、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻疯树(Jatropha curcas)(麻风树)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(非洲油棕)、美洲油棕(Elaeisoleifera)(美国油棕)、可可椰子(Cocos nucifera)(椰子)、亚麻荠(Camelina sativa)(野麻)、水黄皮(Pongamia pinnata,Pongam)、油橄榄(Olea europaea)(橄榄)、亚麻子(Linumusitatissimum)(亚麻)、海甘蓝(Crambe abyssinica)(Abyssinian-kale)、以及芥菜(Brassica juncea)。
在一些实施方案中,方法和组合物可用于玉米,包括但不限于,玉米面(软粒玉米(Zea mays var.amylacea))、爆花用玉米(Zea mays var.everta)、马齿种玉米(Zea maysvar.indentata)、硬粒玉米(Zea mays var.indurate)、甜玉米(Zea mays var.saccharata和Zea mays var.rugosa)、糯玉米(Zea mays var.ceratina)、链淀粉玉米(Zea mays)、有稃种玉米(Zea mays var.tunicataex A.St.Hil.)、以及striped maize(Zeamays var.japonica)。在一些实施方案中,将方法和组合物用于甜玉米。
根据如下的实施例将更好地理解本公开。然而,本领域技术人员将容易地理解,讨论的特定方法和结果仅仅用于解释在实施方案中更完整描述的本公开。
实施例
实施例1土壤样品的采集和土壤微生物的测序
从农田采集土壤样品。例如,从两个大洲的玉米和大豆田地采集土壤样品。2014年2月在澳大利亚昆士兰Victoria and Lowood的奥尔博斯特(Orbost,Victoria andLowood,Queensland,Australia),,2014年4月从美国加利福尼亚州布伦特伍德(Brentwood,California,USA)以及2014年6月从美国印第安纳州Lynn(Lynn,Indiana,USA)采集样品。本专利申请设想从任何合适类型的环境材料中鉴定和分离的PGPM,例如但不限于从土壤、岩石、植物、动物、有机岩屑、水、气溶胶等采集的样品。从各个田地选择V3-V5阶段的玉米植物,从土地中移除并收集土壤。记录各个植株高度和重量,采集附着到根的土壤以供培养和DNA提取,并且采集围绕根系结构的非根际土壤以供土壤化学分析和存档。
从玉米植物的根际一式三份采集根缔合的土壤样品(约0.5g)以供DNA提取和测序。将样品置入2-mL带螺口盖的离心管中,该离心管包含获自Cero Glass(Columbia,TN)的由一个4-mm玻璃珠(GSM-40)、1.0g的1.4-至1.6-mm硅酸锆珠(SLZ-15)和0.75g的0.070-至0.125-mm硅酸锆珠(BSLZ-1)组成的无菌陶瓷珠基体。使样品保持冷却并运送到实验室以进行DNA提取。
利用FastPrep FP 120仪器(Bio-101,Vista,CA)将样品在1ml磷酸盐缓冲液(200mM磷酸钠,200mM NaCl,20mM EDTA,pH 8.0)和10%SDS(十二烷基硫酸钠)中以6.5m/s机械裂解45s。使裂解的样品在4℃下以13,000xg离心5分钟,以分离具有DNA的上清液和颗粒物。将上清液转移到新的1.5-mL离心管中,并且通过添加500μl苯酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)并在室温下以13,200xg离心5分钟来进一步纯化。收集包含DNA的分离的水相,从而根据制造商的说明书在QIAprep Plasmid Spin柱(Qiagen,Valencia,CA)上最终纯化。
基因组DNA被制备用于对覆盖高变区5-8(V5-V8)的16S rRNA基因的600-bp部分进行焦磷酸测序(pyro-sequencing)。使用掺入通用引物对TX9/1391R、‘A’和‘B’454焦磷酸测序衔接子和样品特异性可变长度核苷酸条形码序列的通用融合引物(TX9-A-BCxx,5’-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGxxxxxxGGATTAGAWACCCBGGTAGT-3’;1391R-B-Adap,5’-[BioTEG]CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTCTCAGGACGGGCRGTGWGTRCA-3’)通过PCR来扩增样品。对所有样品进行PCR循环滴定以确定足够产物所需的最低循环数并降低PCR错误发生率。热循环条件如下:最初94℃进行1min,94℃的样品特异性循环数进行30s,55℃进行45s并且68℃进行1min,68℃的最终延伸进行1min。在滴定之后,制备包含以下的200μl反应物:40μl模板(1ng/μl)、20μl HiFi缓冲液(Invitrogen,Carlsbad,CA)、10μl 8mM TX9-A-BCxx、10μl8mM 1391R-B-Adap、10μl 4mM dNTP(NEB,Ipswich,MA)、8μl 50mM MgSO4(Invitrogen,Carlsbad,CA)、8μl 10mg/ml BSA(Invitrogen,Carlsbad,CA)、0.8μl HiFi Platinum Taq(Invitrogen,Carlsbad,CA)、以及93.2μl无菌milliQ水。每种反应物以4×50μl平行测定进行扩增以使PCR错误最小化并在纯化之前合并。在0.9%琼脂糖凝胶上纯化扩增子产物并采用QIAquick凝胶提取试剂盒(Qiagen,Valencia,CA)根据制造商的说明书进行回收。用SYBRgreen(Invitrogen,Carlsbad,CA)对最终产品定量。
将条形码扩增子产物复用到8个库中,以采用默认454鸟枪法处理流水线使用标准454Life Sciences Lib-L乳液PCR方案和Titanium chemistry(Margulies,M.等人,2005.Genome sequencing in microfabricated high-density picolitrereactors.Nature 437:376-380)进行测序。
通过样品修剪和质量控制(QC)过滤器,使被GS FLX仪器质量过滤器保留的所有序列经受附加的内部分选。利用一系列修剪规则在邻近16SrRNA基因V5V6区域的保守区域内修剪通过GS FLX信号处理步骤的序列。利用与引物端部位置(5’修剪点)和所限定的自5’修剪点起修剪区域第230-290碱基(V5V6的3’修剪点)相关的期望条形码位置来限定修剪目标。排除短于120个碱基对的序列。一旦修剪序列,就基于质量对其进行过滤。所有碱基必须具有最少20的Q-得分(Q20);如果序列具有得分小于Q20的碱基,则排除整个序列。另外,序列中90%的碱基必须具有Q25或更大的得分或者序列被排除。然后使用已通过质量过滤的经修剪序列产生数据表进行分析。
实施例2微生物聚生体的鉴定
用于采样的玉米植物处于V3-V5发育阶段,并且基于视觉检测和与相邻植株的比较根据表现不足或过度的植株来选择。表现不足的植株基于等于或小于相邻植株的尺寸来选择,其共同显示为尺寸小于跨越整个田间的植株的平均尺寸。表现过度的植株基于比跨越总区域或整个田间的植株的平均尺寸更大的尺寸来选择。用于选择表现过度的植株的另一个判据在于其近邻相对于总区域或整个田间的植株尺寸也是表现过度的。在各自包括彼此位于5米之内的表现不足植株和表现过度植株的对中收集植株。从各个田间收集介于6-18对之间的植株。
在采样之前,通过将上部叶子垂直延伸到最高点并测量该水平来确定各个植株的高度。通过移除整个土壤上方的植株部分并转移到密封的Ziploc夸脱大小的袋中在采样后测定植株的重量。密封袋用于使波动最小化,这是由于水从收获后植物中蒸发。在采集后约1小时内测定植株的重量。
通过用铲子挖出玉米植株并小心地用无菌不锈钢刮铲挖取根来实现玉米根缔合的土壤样品。将紧贴于根的土壤直接移除到包含小珠的2ml离心管中以进行细胞裂解。
DNA提取和表达谱如实施例1所述的那样进行。(参见Patin等人,Microb.Ecol.65:709-719,2013)。
为比较与来自不同田间的植株的玉米根相关联的微生物群落,将收集自同一田间的每个植株的高度和重量进行规一化。采用的多种不同归一化方法,包括Z得分、0-1之间值的内推和百分比排名。将值归一化的原因在于能够比较田间之间的植株,其在一些情况下由于不同的栽植期、土壤类型、天气等而为不同的尺寸。
对于每个样品,测定约100,000个V5V6 16S rRNA序列标记。在来自澳大利亚维多利亚州和昆士兰州(Victoria and Queensland)4个田地的约150个样品(包含甜玉米或饲料玉米)上,测定各个16S rRNA序列标记的丰度百分比和归一化玉米植株重量(或高度)的皮尔逊相关值。鉴定出与植株重量或高度相关性最高的细菌16S rRNA序列标记。与植物性能(归一化植株高度或重量)相关性最高的四个16S rRNA序列标记被选择用于鉴定潜在共享功能性相互作用的其它微生物并因而鉴定构成的聚生体。为鉴定潜在的聚生体成员,将与植物性能最相关的16S rRNA序列标记的分配与数据集中的每个其它序列标记相比较以鉴定共分配的序列。创建这些比较结果的皮尔逊相关性的等级列表并且显示出四个植物性能相关联的序列标记中每一者的候选聚生体成员。
还从由16S rRNA基因表达谱决定根缔合的微生物群落的相同样品中进行培养筛选。通过在七种不同的固体培养基制剂上培养来回收约20,000个分离株。分离株的身份通过对包含v5-v8可变区的16S rRNA基因的一部分进行PCR-扩增来确定。将序列修剪为如用于以上实施的16S rRNA基因表达谱的相同的V5V6区域。该步骤允许在培养与16S rRNA基因表达谱数据之间交叉索引。
回收对应于四种最佳植物性能关联的序列标记及其最佳的共分配序列标记的培养菌株并测试其提高植物性能的能力。
实施例3土壤微生物的分离
将根际土壤样品收集于无菌小瓶中并储存于冰上。一旦被运送回实验室,就将样品储存于4℃。就从土壤样品中分离微生物菌株而言,将0.5克的土壤转移到新的无菌小瓶,并且用25mL的VL55基础培养基稀释(Sait等人,2002)。在室温下将经稀释的土壤溶液在设定为180rpm的平板摇动器上摇动20分钟。然后使用设定为90%功率输出的探针超声波破碎仪(Fisher Scientific FB120110)对土壤溶液进行超声处理。在超声处理之后,使土壤微粒沉淀并且将上清液溶液(称为“土壤提取物”)收集并转移到一个或多个无菌小瓶。将土壤提取物连续稀释到VL55基础培养基中并铺板到固体培养基上以分离单个菌落。
将所有样品铺板到包含多种碳源的较大培养基面板上。大多数培养基使用具有附加生长底物的VL55基础培养基并用0.8%结冷胶固化。添加至VL55培养基的碳源和最终浓度包括木聚糖(0.05%)、果胶(0.05%)、藻酸盐(0.05%)、D-葡萄糖(0.5mM)、D-半乳糖(0.5mM)、D-木糖(0.5mM)、L-阿拉伯糖(0.5mM)、D-半乳糖醛酸酯(0.5mM)、D-葡糖醛酸酯(0.5mM)、L-抗坏血酸盐(0.5mM)、D-葡糖酸盐(0.5mM)、n-乙酰基-葡糖胺(2mM)、和氨基酸混合物(Hudson等人,1989;Joseph等人,2003)、以及5%-10%无菌瘤胃液。另外的培养基包括经0.8%结冷胶、M9葡糖琼脂(Teknova M1260)固化的稀释营养液体培养基(0.08g/L),以及包含0.2g/L KH2PO4、0.8g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO47H2O、0.1g/L NaCl、0.02g/L CaCl22H2O、0.005g/L FeSO47H2O、0.002g/L NaMoO42H2O、0.01MnCl24H2O、2.0g/L乳酸钠、2.0g/L柠檬酸钠、2.0g/L蔗糖、2.0g/L D-木糖和2.0g/L苹果酸的无氮培养基。所有形式的培养基也采用抗真菌化合物制霉菌素(100U/mL最终浓度)制备。
将分离培养基平板在26℃下孵育1至12周范围的时间,并用无菌牙签将单个菌落挑取到96孔阵列形式的新鲜平板上。将具有排列状菌落的培养基平板在26℃下再孵育3-14天。使用无菌96-针式转移工具将阵列平板菌落转移到深孔平板的液体培养基中。深孔平板包含1mL液体形式的上述培养基。孵育液体平板直至观察到可见的细胞生长。然后用96-孔微生物DNA分离试剂盒(MPBio#119696200或MoBio#10196)从液体培养物中提取DNA并随后将其用作用于PCR的模板以扩增16S rRNA基因。在试剂盒DNA提取之前,使用溶菌酶和蛋白酶K预处理步骤,从而增大细胞裂解效率。就菌株鉴定而言,对纯化的PCR产物进行测序。将目的分离菌株重新划线到新平板上并纯化菌落。再次从菌落纯化的菌株中提取DNA并确认同一性。
实施例4:植物内生菌微生物的分离
收获得到根据实施例7所述的方法生长的玉米植物并将其用于分离内生菌微生物。
采用无菌外科手术刀在无菌条件下切割通常位于土壤表面下方一英寸的玉米植物的根颈区域。在刚采样之后,将根颈外表面用漂白剂(20%)、吐温80(0.1%)和去离子水(79.9%)溶液洗涤并用无菌去离子水或Dulbecco磷酸盐缓冲的盐溶液(PBS)冲洗。将根颈洗涤和冲洗两次之后,用无菌外科手术刀将根颈底部的第一毫米移取到无菌培养皿中。然后在选择的来自实施例3所述的培养基面板的七种固体培养基平板上,通过冲压根颈(参见以下方法1)或者通过将根颈提取物铺板(参见以下方法2)来分离内生菌微生物。
方法1:根颈冲压
在移除根颈的第一毫米之后,将新暴露的区域直接压制(冲压)到面板中各固体培养基平板中一者的表面上。
方法2:根颈提取
在无菌条件下,采用无菌外科手术刀将根颈的中心部分切片并切成小片。将这些小片连同较小体积的PBS(1或2mL)添加到无菌Potter-Elvehjem组织研磨器中并采用最少20次冲击进行匀化。然后采用无菌玻璃珠或无菌一次性塑料涂布器铺板该根颈提取物的上清液(100μL溶液/平板)并使其均匀分布。
然后孵育平板并根据实施例3所述的方法分离微生物。
相同或类似于本文所述的方法可用于分离来自其它作物和植物类型的内生菌(Zinnel等人2002.Isolation and characterization of endophytic colonizingbacteria from agronomic crops and prairie plants.Applied and EnvironmentalMicrobiology 68(5):2198-2208)。相同或类似于本文所述的方法还可用于分离来自其它植物部分的内生菌,包括例如非天然存在的植物品种的种子、植物生殖组织、营养组织、再生组织、植物部分或子代。
实施例5微生物分离株的生化特征
进一步测试分离的微生物在其与植物的相互作用中较为重要的特性。所研究的特性包括IAA-生长素、铁载体和ACC-脱氨酶的产生、固氮和无机磷酸盐的增溶。这些细菌活性测定的结果在下文和表2中示出。
表2.五种生物化学测定的结果IAA:吲哚乙酸(Actic Acid)的产生由吸光度测量,其中值>0.082高于背景(参见粗体)。铁:铁载体的产生通过在最小到显著的1-3标度上观察颜色变化来测量。PO4:无机磷酸盐的增溶通过在最小到显著的1-3标度上观察晕轮来测量。N-固定:分子氮的固定通过在最小到显著的1-3标度上观察生长来测量。ACC:ACC脱氨酶的产生通过在最小到显著的1-3标度上观察生长来测量。
吲哚乙酸(IAA)的产生:
生长素是一类已示出以多种方式显著影响植物生长的植物激素。被确认为植物激素的主要生长素为吲哚3-乙酸“IAA”。IAA通常由色氨酸生物合成产生。该分析使用包含色氨酸的液体生长培养基以定量通过我们的微生物分离株产生的TAA的量。
该测定通常在如本文详述的标准96-孔平板形式中进行。采用标准96-通道移液管装置将包含80mg/L Difco营养液体培养基和100mg/L色氨酸的250μL培养基转移到96-孔细胞培养平板的各个孔。然后经由无菌96-针转移工具转移细菌分离株培养物,并且通常将所得的培养物在26℃储存2-4天。对培养物平板进行离心(20℃,4000rpm,10min),并随后从各个孔移除33μL的上清液溶液并转移到干净的96-孔分析平板。该分析平板的各个孔混合有200μL的改良Salkowsky试剂(Appl.Environmental Microbio.1995,61,793.),在室温下于黑暗中保持10分钟,并随后利用535nm波长辐射通过标准Beer-Lambert型吸光度-浓度分析进行分析。
以下分离株对IAA产生呈阳性:P0160_E1或S2374,P0132_A12、P0132_C12、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、P0157_G5或S2303、P0160_F7或S2351、P0147_G1或S2292、S2437、S2423、P0105_C5、S2653、S2656和2644。
无机磷酸盐的增溶:
使用由以下组分组成的改良PVK-琼脂糖-磷酸钙固体培养基(PikovskayaR.I.1948Mobilization of phosphorus in soil in conncetion with the vitalactivity of some microbial species.Microbiologia 17:362-370,以及NautiyalC.S.1999An effieicent microbiological growth medium for screening phosphatesolubilizing microogranisms FEMS Microbiology Letters 170:265-270)对能够增溶无机磷酸盐的微生物分离株进行筛选。
具有琼脂糖的PVK-磷酸钙培养基;每1L的成分:10g葡萄糖、5gCa3(PO4)2、0.5g(NH4)2SO4、0.2g NaCl、0.1g MgSO4·7H2O、0.2g KCl、0.5g酵母提取物、0.002g MnSO4·H2O、0.002g FeSO4·7H2O、7g琼脂糖。
最初,所得的培养基由于存在不溶性磷酸钙而呈不透明的白色。在将分离株转移到PVK-平板并随后在26℃下储存2-3周之后,透明、半透明的斑点或“晕轮”外观指示分离株增溶无机磷酸盐的能力。细菌的磷酸盐增溶活性根据1-3X系统评级,其中3X指示显著生长,而1X表明最小但可观测的磷酸盐增溶。
以下分离株对磷酸盐增溶呈阳性:P0132_A12、P0132_C12、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、P0047_E8、P0160_F7或S2351、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、S2278、S2275、S2487、P0154_H3和S2669。
铁载体的产生:
通过利用Schwynn和Neilands的铬天青S(CAS)测定法(Anal.Biochem.1987,160,47)筛选能够产生铁载体的微生物菌株。培养基由80mg/LDifco营养液体培养基、8g/L结冷胶粉末和CAS试剂染料溶液组成。蓝色的固体平板和CAS试剂溶液如Schwyn等人(参见前文)所述来制备。将分离株转移到蓝色平板,随后将其于26℃储存2-3周。铁载体的产生通过产铁载体微生物周围的环形或“晕轮”形状的蓝色到橙色的颜色变化来指示。细菌的铁载体产生活性根据1-3X系统评级,其中3X指示显著的铁载体产生,而1X表明最小但可观测的铁载体产生。
以下分离株对铁载体产生呈阳性:S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2161、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、S2278、S2275、S222、P0105_C5、和P0154_H3。
分子氮的固定:
经由96-针转移工具将微生物分离株转移到固体培养基平板上而不有意添加氮源。每升的培养基组分如下:0.2g MgSO4×7H2O、0.1g NaCl,0.2g KH2PO4、0.8g K2HPO4-3H20、结冷胶粉末8g、10mL 25%HCl、1.5g FeCl2×4H2O、0.19g CoCl2×6H2O、0.1g MnCl2×4H2O、0.07g ZnCl2、6mg H3BO3、36mg Na2MoO4×2H2O、24mg NiCl2×6H2O、2mg CuCl2×2H2O、20mg CaCl2-2H2O、5mg FeSO4-7H2O、2mg NaMoO4-2H2O、10mg MnCl2-4H2O、2g乳酸钠(60%w/w水溶液)、2g柠檬酸钠、2g蔗糖、2g木糖、2g苹果酸。在灭菌之后并将培养基分配到平板上之前添加CaCl2(10%,5mL)以助于平板培养基的固化。
通常,将平板在26℃下储存2-3周。分离株的任何生长外观指示其“固定”分子氮的能力。细菌的生长根据1-3X系统评级,其中3X指示显著的生长,而1X表明最小但可观测的生长。
以下分离株对氮固定呈阳性:P0160_E1或S2374,S2159_P0058_B9、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、P0173_H3或S2404、P0160_F7或S2351、S2164_P0061_E11、S2163_P0019_A12、S2161_P0054_E8、P0156_G2、P0156_G1、S2487、S2423、S2477、S2420、S2382、S2421、S2158、S2370、S2375、S2654、S2656和S2644。
ACC脱氨酶的产生:
使用随后用ACC涂覆的(上述用于固氮测定的)无氮培养基平板实现微生物分离株产生ACC-脱氨酶的能力。向各个平板添加1mL的30mM ACC水溶液,其在具有玻璃珠的平板表面各处均匀分布,并且在室温下干燥。将分离株转移到ACC-涂覆的平板并将所得的平板于26℃储存2-3周;分离株的任何生长外观指示其通过ACC脱氨酶代谢ACC的能力。细菌的生长根据1-3X系统评级,其中3X指示显著的生长,而1X表明最小但可观测的生长。
以下分离株对ACC脱氨酶的产生呈阳性:P0160_E1或S2374、P0173_H3或S2404、P0160_F7或S2351、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0156_G2、S2488、S2487、S2477、S2382、S2421、S2424、S2423、S2375、S2654、S2656和S2644。
实施例6发芽和幼苗早期生长测试
发芽
将玉米谷粒(测试I未经处理的甜玉米;测试II——Blue River未经处理的饲料玉米)在20%漂白剂溶液中灭菌5分钟。然后将经漂白的玉米在无菌pH 7.0磷酸盐缓冲液中洗涤10x。用无菌去离子水进行最终洗涤。然后将谷粒置于150mm培养皿(约75个谷粒/皿)内的预灭菌滤纸上。将五毫升灭菌的去离子水添加到各个培养皿中以弄湿滤纸。将培养皿在黑暗的生长室中储存三天。在第三天,分选已发芽的谷粒并将最大的已发芽新芽用于后续步骤的幼苗生长。在所有步骤中,使用无菌镊来转移谷粒并且所有工作均在生物安全柜中进行。
接种
使先前分离且序列确认的微生物菌株在摇瓶中于26℃生长至较高的细胞密度。在测试I中,将细胞离心并用无菌1x M9盐(Sigma-Aldrich M6030)洗涤沉淀物。然后使细胞以等于0.1的光密度的密度重悬于M9盐中。对于测试II,以类似的方式制备细胞但在无菌盐溶液(NaCl 3.0g/L、MgSO47H2O 0.197g/L、CaCl22H2O 0.176g/L)中洗涤并重悬至0.1的光密度。
使用无菌镊,将已发芽的种子转移到包含经3g/L植物凝胶(Sigma-AldrichP8169)固化的100mL的Murashige和Skoog(MS)培养基(MPBio#0926233)的无菌PlantCon容器(MPBio#0926722)(图6)。对于测试1,将四个种子转移到各个容器,并且对于测试II,将五个种子转移到各个容器。在将种子在PlantCon容器内均匀间隔开之后,将100μL的微生物菌株处理剂直接吸移到各个已发芽的种子的中心上。容器内的各个种子接受相同的处理剂。对照处理仅接受100μL的缓冲液。替代PlantCon盖并将容器转移到生长室,该生长室维持于26℃的恒定温度和分别为16和8小时的光照/黑暗循环。
测量
在第七天,从容器中移除幼苗并对其进行测量(图7)。记录各个幼苗的单个苗的长度。在测试I中,记录各个幼苗的单个根的长度。在测试II中,测量每个幼苗的三个最长根并计算总和。在(生长的容器之中)同一容器中,计算所有幼苗的平均苗长度值和根长度值。另外,计算各个植株的苗和根值的总和,并且计算接受相同处理剂的所有植株的平均值。对每种处理的苗长度、根长度、以及苗加根长度的平均值进行绘制(测试I和测试II分别为图8和9)。进行两侧t检验并且显著高于对照(p<0.05)的处理剂示出于曲线图上。
实施例7温室生长实验中玉米生物质产量的增强
(1)温室实验1
温室实验被设计成评估根据本发明实施方案的四种微生物聚生体是否可增强发育阶段(通过V3-V5)植物生长和性能。
使用实施例3的方法获得31个微生物分离株。在测试之前,使这些分离株在单独的培养物中生长。初始31个分离株之中的26个分离株用于温室实验。测试分离株的四种(4)微生物聚生体(A-D)(以下所示)。在每种聚生体中,添加分离株,从而使聚生体的各个成员的最终浓度为约1×109细胞/ml。
聚生体A:P0035_B2或S2145、P0032_C7、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0033_E1或S2177。
聚生体B:P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、P0042_D5或S2165
聚生体C:P0038_D2或S2166、P0018_A11、P0047_E2、P0018_A1、P0047_C1、P0042_E1、P0047_E8
聚生体D:S2142_P0061_E11、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2159_P0058_B9、S2163_P0019_A12
获取农业土壤(Brentwood,CA)并分成两部分。第一部分保持“生命力”,具有得自原样田间的自然微生物群落,并且氮(NO3和NH4)、磷(P)和钾(K)值如下:NO3 41ppm,NH44.7ppm,P 30.0ppm和K 244ppm。第二部分通过于121℃高压灭菌60分钟来灭菌,并且具有如下氮(NO3和NH4)、磷(P)和钾(K)值:NO3 75ppm,NH4 5.1ppm,P 39.2ppm和K 242ppm。将两种实验土壤类型(生命力和无菌)通过机械混合来匀化,添加以填充30个1-加仑盆到2/3充满(15个盆/土壤类型),加水至饱和并使其排出。在排出之后,对于全部30个盆,以均匀的深度在每个盆栽植一个甜玉米种子。一式三份设置处理剂(聚生体A-D)和对照(MS培养基),并且直接添加1ml到每个种子的顶部(浓度5×109-7×109细胞/ml)上。用无菌砂(ASTM GradedSand C778)覆盖经处理的种子并使其在16小时光照/8小时黑暗循环中生长47天。给植株浇水以在整个实验中维持约60%的饱和度。通过叶计数和每周照片比较对照和处理植株来评估生长(图2)。在生长实验结束时,测定植株和根生物量以评估性能(图1A、1B和3)。
以更大的标度使用相同或类似于本文所述的方法,包括户外田间试验以及采用以不同浓度施用于一定范围作物类型的分离株或各种聚生体。
(2)温室实验2
温室实验被设计成评估根据本发明实施方案的聚生体是否可增强发育阶段(通过V3-V5)植物生长和性能。使用本发明实施方案选择六种聚生体(E-J)和一种单一微生物处理剂(S2376)。
使用实施例3的方法获得微生物聚生体成员(15)。在组合入以下定义的六种聚生体中之前,使这些分离株在单独的培养物中生长。添加分离株,从而使各个成员的最终浓度为约1×109细胞/ml。
聚生体E:P0147_D10或S2291、P0160_F7或S2351、P0147_G10或S2292。
聚生体F:P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303。
聚生体G:S2384、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280。
聚生体H:S2275、S2278。
聚生体I:S2373、S2375、P0157_G5或S2303。
聚生体J:S2293、S2382。
获取农业土壤(Brentwood,CA)并使用其将两种甜玉米种子栽植到4″容器中。土壤的氮(NO3和NH4)、磷(P)和钾(K)值如下:NO373ppm,NH4 1.6ppm,P 34.3ppm和K 297ppm。一式三份设置处理剂(聚生体E-J)、单一菌株S2376和对照(MS培养基并无处理剂:“NT”),并且直接添加1ml处理剂到每个种子的顶部(浓度1×109细胞/ml)上。用土壤覆盖经处理的种子并使其在16小时光照/8小时黑暗循环中生长30天。给植株浇水以在整个实验中维持约60%的饱和度。通过叶计数和照片比较对照和处理植株来评估生长(图4)。在生长实验结束时,测定植株和根生物量以评估性能(图5)。
(3)温室实验3
进行生长实验以评估根据本发明实施方案的单一分离株是否可增强发育阶段(通过V3-V5)植物生长和性能。使用本发明的实施方案选择三十八个分离株以在3组实验中进行测试。
在施用各种微生物和/或营养处理剂之后,使玉米种子在土壤中生长。获取两种实验农业土壤(Brentwood,CA)并将其与购自本地建筑材料公司(Shamrock’s BuildingMaterials,San Rafael,CA)的30%w/w灰泥砂(plaster sand)混合。在混合之后,土壤-砂混合物通过以3kg批料于121℃高压灭菌4小时来灭菌,其氮(NO3和NH4)、磷(P)和钾(K)值如下:NO3 88-100ppm,NH4 0.5-0.6ppm,P 24-25.2ppm,和K 219-239ppm。对于第三实验,土壤为被蒸气处理灭菌的60%Cache Creek砂:20%粘土:20%泥炭混合物。在灭菌之后,添加较小量的田间土壤以形成具有自然田间微生物群落的土壤混合物。
在两个实验中,用来自四个不同批次的无菌土壤填充4″盆以用于匀化,然后用来自灌溉系统的过滤掉粗粒的经UV灭菌的水充分润湿。使用工作台顶的钻床在盆中产生深度均匀的孔并用镊子将一个Blue River未经处理的饲料玉米种子的柄向下置入孔的底部中以确保一致的种子取向。在第三实验中,用土壤混合物填充4″盆,并且将每个盆的一个种子(Blue River未经处理的饲料玉米)置于其侧面并用木销钉按压1.25″到干土壤中以使种子定位一致。
使利用实施例3或4的方法获得的38个微生物分离株在单独的培养物中生长至0.1的光密度(约1×108细胞/ml)并且用作单一处理剂。将1ml的处理剂直接分配到种子上。在一个实验中,一种处理剂为可商购获得的微生物产品(TJ TechnologiesInc.“QR”),其根据制造商说明书添加至8个盆中。在两个实验中,将各个处理剂添加到8个盆中,将对照缓冲液(M9培养基或盐水)添加到20个盆中,并且在处理剂施用之后,使用无菌刮铲用来自孔周围的土壤覆盖种子。在第三实验中,将处理剂添加至5组,每组50个盆中。各组的50个盆另外接受以1.5-2″圆圈在种子周围施用的1mL氮肥量(NH4Cl:2mM,0.2mM,0.02mM,0.002mM和0)。然后轻轻摇动盆以使种子覆盖有土壤并且用反渗透无菌水手动浇水。
在所有实验中,将盆分配于温室中的随机位置。在所有实验中,将桩柱灌水器(stake emitters)置于各个盆中以进行浇水。在前两个实验中,水源被过滤掉粗粒并UV灭菌,并且每个盆每天施用两次15-20ml。使用吊挂在盆上方约5英尺的1000瓦特灯维持16光照:8黑暗的光周期。继续实验直至下部叶中的衰老信号(约3周)。在第三实验中,通过反渗透对水源去离子,并且每天每个盆施用两次15-20ml。实验在2014年8月28日和9月12日之间于环境日光下进行。
在实验过程中通过从茎底部到最长叶子顶端的高度以及利用Minolta SPAD仪表测定叶绿素来评估生长。在两个实验结束时,拍摄利用处理剂的所有植物并且附加测量植株质量和V-阶段。绘制每种处理剂的植株质量、植株高度、V-阶段和叶绿素的平均值(分别为图10、11、12和13)。进行两侧t检验并且显著高于对照(p<0.05或p<0.001)的处理剂示出于曲线图上。
(4)田间试验1
0.8英亩田地以6行2200英尺长的形式被分为84块样地。田间的土壤被命名为Capay湿粘土。根据田间若干点的土壤分析,田间的氮水平为30-50ppm,磷为20-70ppm,并且钾为230-300ppm。在垄沟中播前施用肥料,并且当玉米为约V4时,进行第二施用。每块样地由间隔33″的6行组成,并且为25’长,每块样地之间为1’。使整个实验部分的两个外行不播种且不接受处理剂。剩余的四行播种经杀真菌剂处理的甜玉米品种3674并且处理。
首先耘锄四个内部行以制造垄沟,之后沿垄沟每7英寸用手播种放置一个谷粒。每块样地的每行播种42个种子,每块样地共168个种子。在共84块样地中,2块样地没有给予处理剂,4块样地给予对照缓冲液处理剂(无菌1x M9盐;Sigma-Aldrich M6030),并且78块样地接受含微生物处理剂的M9缓冲液。将一毫升液体处理剂(聚生体或单一菌株)直接施用到各个种子上并然后用手覆盖有土壤。在所有栽植完成之后,使用洒水装置给种子浇水。因为田间试验被生长物的田地围绕,所以试验在整个生长季如同剩余的田地那样处理,并且在10/14/14收获。为消除影响结果的边缘效应的可能性,仅收获(每块样地栽植和处理的4行中的)2个内部行。
液体处理剂由6种聚生体和5种单一菌株(P0147_D10或S2291、P0140_C10或S2300、S2384、S2373、S2376)组成,每种以三种不同的细胞浓度施用。使用实施例3的方法获得所有微生物分离株并在单独的培养物中生长。混合聚生体成员,以使得各个成员的最终浓度为:1×109,1×108或1×107细胞/ml。
聚生体E:P0147_D10或S2291、P0160_F7或S2351、P0147_G10或S2292。
聚生体F:P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303。
聚生体G:S2384、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280。
聚生体H:S2275、S2278。
聚生体I:S2373、S2375、P0157_G5或S2303。
聚生体J:S2293、S2382。
在栽植种子后一个月对每个玉米植株的分蘖进行计数。对于各个处理剂和单一菌株,每个植株的分蘖数以相对于缓冲液的百分比表示(图14)。在抽雄期开始时测量来自10块样地的叶绿素(图15)。示出四种处理剂和对照的平均叶绿素含量(SPAD单位)和均值标准误差(SEM)(图13)。就各个处理剂而言,在收获时对每英亩的可销售穗数进行计数。图16中示出相对于对照处理剂的产量增加百分比。
(5)温室实验4
使用实施例7.1-7.3中所述的方法进行附加生长实验。就在三组实验中增强植物生长和性能效应而言,评估二十一种单一分离株和23种合成聚生体。以下定义的19种单一分离株和11种聚生体的结果示于图17-19中。微生物处理剂数据示为对植物生物量、土壤上方的植株高度和收获期最嫩真叶(即,最高的具有叶颈的V-阶段叶)的叶绿素读数而言相对于对照处理剂的Z得分或标准偏差。
聚生体B:P0042_A8或S2167、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0042_B12或S2189、P0042_B2或S2168、P0042_D5或S2165。
聚生体D:S2142_P0061_E11、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2159_P0058_B9、S2163_P0019_A12。
聚生体K:S2385和S2373。
聚生体N:S2327(或SEQ ID No:99或100)、S2329(或SEQ ID NO:97或98)、S2330(或SEQ ID NO:101或102)、S2332(或SEQ ID NO:113、114或115)、S2333(或SEQ ID NO:95或96)和S2328(或SEQ ID NO:162或163)。
聚生体P:S2373(或SEQ ID No:81、82或83)以及P0042_B2或S2168(或SEQ ID No:65或66)。
聚生体R:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)以及P0042_B2或S2168(或SEQ ID No:65或66)。
聚生体S:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)和S2421(或SEQ ID NO:136或137)。
聚生体T:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)和S2330(或SEQ ID NO:101或102)。
聚生体AB:S2159_P0058_B9(或SEQ ID No:18或19)、S2161_P0054_E8(或SEQ IDNO:36或37)以及S2163_P0019_A12(或SEQ ID No.75或76)。
聚生体AC:S2373(或SEQ ID No:81、82、或83)、S2385(或SEQ ID NO:51、52或53)以及P0147_D10或S2291(或SEQ ID No:11或13)、S2293(或SEQ ID NO:86或87)、S2382(或SEQID NO:24或88)、S2487(或SEQ ID NO:20或129)、S2644(或SEQ ID NO:160或161)、P0042_A8或S2167(或SEQ ID No:34或35)、P0038_D2或S2166(或SEQ ID No:30或31)、P0042_D10或S2172(或SEQ ID No:70、73或74)、S2159_P0058_B9(或SEQ ID NO:18或19)、S2161_P0054_E8(或SEQ ID NO:36或37)、以及S2163_P0019_A12(或SEQ ID No.75或76)。
聚生体AF:S2373(或SEQ ID No:81、82、或83)、S2385(或SEQ ID NO:51、52或53)和S2646(或SEQ ID NO:16或164)。
实施例8实验室生长实验中拟南芥属(Arabidopsis)生物质产量的增强
(1)实验1——双子叶植物生长测试
使灭菌的拟南芥属Col-1种子在0.1%琼脂糖中于4℃冷分层7天。可商购获得的盆栽土经由高压釜灭菌并用于填充72穴盘。然后用经UV灭菌的自来水使盘饱和并使其排出。接着用无菌移液管将稀释的种子置于无菌盆栽土表面上。将约5-10个种子添加到各个穴中。使用实施例3的方法和如实施例7所述制备的处理剂获得微生物分离株。简而言之,使各个菌株在其优选的培养基中新鲜生长至高细胞密度,然后在VL55缓冲液中洗涤1x。接着,根据处理剂将菌株组合并使其以1OD、或约1×109细胞/mL的总浓度重悬于VL55缓冲液中。
处理剂包括2种单一菌株(S2373和S1112)和5种聚生体(以下定义)。将1mL各处理剂添加到各个穴中。对照穴仅接受1mL的VL55缓冲液。将穴盘置于26℃和16/8小时光照/黑暗循环的生长室中。使用底部浇水技术每周给植物浇水3次。
然后使拟南芥属幼苗生长20天。此时,剪除具有多于一个幼苗的穴以便保留最大的幼苗。较小的幼苗被称为“第二幼苗”。将新鲜修剪的第二幼苗称重以进行生物量测量。对于各个处理剂,计算每个穴的平均总生物量并与对照进行比较(图20)。在第25天,取样最后最大幼苗并称重(第一幼苗)。将单个植株的平均生物量与对照进行比较(图21)。
使用不等方差的二尾t检验用于估计统计显著性。对于显著的处理剂,第二和第一幼苗生物量相比于对照的结果示于图20和21(p<0.05;用星号表示)。
聚生体I:S2373、S2375、P0157_G5或S2303。
聚生体J:S2293、S2382。
聚生体K:S2385和S2373。
聚生体S:S2385(或SEQ ID No:51、52或53)和S2421(或SEQ ID NO:136或137)。
聚生体AB:S2159_P0058_B9(或SEQ ID No:18或19)、S2161_P0054_E8(或SEQ IDNO:36或37)以及S2163_P0019_A12(或SEQ ID No.75或76)。
(2)实验2——三元胁迫分析
在采用和不采用微生物处理剂的情况下,使拟南芥属植物在三种非生物胁迫的组合中生长。具体地,植物在同时发生的干旱胁迫、热胁迫和强光胁迫的条件下生长。针对如下所述的正生长和/或正衰退参数(即,对应激源增加的抗性),评估一种单一菌株处理剂(S2373)和三种聚生体(聚生体K、I和S)。
方法:
阶段1筛选:将野生型columbia品系拟南芥属种子浸泡于水中并在黑暗中于4℃温育3天。将冷休克的种子以受控的密度和间距栽植于土壤上。具体地,每5.5平方英寸的盆生长3×3网格的9个植株,每个浅箱8个盆。对于微生物处理剂测试,一个浅箱由4个处理的种子的盆和4个未处理的种子的盆组成。因此,将36个处理的植株与36个未处理的植株直接进行比较。
在14天内,使植物在包括如下的非胁迫条件下生长:(a)土壤:Metromix 360;(b)肥料:Osmocote和Peter’s;(c)光照方案:16小时光照/8小时黑暗;(d)光照强度:150μE;(e)温度方案:22C日间/20C夜间;以及(f)湿度:50%相对湿度。在非胁迫生长的最后一天,浅箱达到100%土壤含水量并使用LemnaTec Scanalyzer成像和分析以得到总绿色区域象素计数。
然后将浅箱转移到由以下组成的“三元胁迫”条件:(a)无附加的灌溉;(b)光照方案:16小时光照/8小时黑暗;(c)光照强度:350μE(d)温度方案:22℃日间,中午32℃脉冲4小时/20℃夜间;以及(f)湿度:50%相对湿度。每天对这些条件下的浅箱成像,进行14天。
从LemnaTec数据中,确定生长区、生长斜率和最大日间范围、衰退区和衰退斜率并与对照处理剂比较。具有可再现效果的微生物处理剂相对于对照处理剂的参数被视为“阳性趋势”并继续进一步测试。结果示于表3中,其中“+”指示处理剂对参数具有积极影响。
表3.LemnaTec生长分析的结果
参数 | S2373 | K | I | S |
生长区 | + | - | + | - |
生长斜率 | + | + | + | + |
最大日间范围 | + | - | + | - |
衰退区 | + | - | - | - |
衰退斜率 | + | - | - | - |
实施例9通过微生物处理抑制植物病原体
在大豆测定中,测试两种单一菌株(S2373和S1112)和三种聚生体(K、I和S)对植物病原体瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的抑制应答。在24孔圆底微板中进行测定(Whatman/GE,Cat#7701-5102)。在测定方案之前,各个孔用3ml砂∶土壤(1∶1)混合物填充并高压消毒。在用水连续洗涤之后,从5-7天龄的瓜果腐霉菌V8琼脂平板中收获游动孢子。释放的游动孢子用血球计计数并在无菌水中重悬至50个游动孢子/ml的最终浓度。每种处理剂进行十二次平行测定,并且每个孔递送的测定组分如下表4所示。
在测定建立之后,将每个平板密封到塑料袋中并在25℃下黑暗中温育过夜。此时,每个孔接受覆盖有附加的3ml砂/土壤混合物并经1.2ml无菌水洗涤的单个大豆种子。然后将平板置入包含润湿纸巾的托盘中,用塑料圆盖覆盖并置入25℃和16小时光照:8小时黑暗循环的植物生长室培养箱中。
在种子栽植后第6天,使用以下标度对植物的发芽或出苗百分比(图22)以及幼苗高度/活力进行评分,记录所有平行测定的总得分(图23;最大得分为36):
0:未出苗或出苗的子叶极度腐烂;
1:相对于无病原体对照<30%高度;v.相对于对照根质量较差;
2:相对于无病原体对照30-60%高度;相对于对照根质量较差;以及
3:相对于无病原体对照>60%高度;相对于对照根质量良好。
表4.每种处理剂的测定组成
序列表
<110> Taxon Biociences Inc.
Ashby, Matthew
Belnap, Christopher P.
Kuchta, Matthew Cornyn
Kunin, Victor
Kostecki, Caroline
Lidstrom, Ulrika
Shestakova, Natalya
Wood, Ladonna
<120> 植物生长促进微生物、组合物和用途
<130> 6824WOPCT
<150> 62/052765
<151> 2014-09-19
<150> 62/080143
<151> 2014-11-14
<150> 62/113107
<151> 2015-02-06
<160> 164
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
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<400> 1
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cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctaggtttg acatatacga gaagcctcta gagatagagg tctctttgga cactcgtata 240
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<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 2
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cctaggtttg acatatacga gaagcctcta gagatagagg tctctttgga cactcgtata 240
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acgcgttaag ttcgccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagtatgtgg tttaattcga tgcaacgcgc agaaccttac 180
ctggccttga catccacgga acccttgaga gatcgagggg tgccttcggg aaccgtgaga 240
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc ttgtccttag ttgccagcac gtaatggtgg gaactctaag gagaccgccg 360
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tacacacgta ctacaatggt ggggacagag ggctgcgatc ccgcgagggt gagccaatcc 480
cagaaacccc atctcagtcc ggatcggagt ctgcaactcg actccgtgaa gtcggaatcg 540
ctagtaatcg cagatcagca ttgctgcggt gaatacgttc ccgggcct 588
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<213> 未知
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<220>
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<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
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gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggatacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac cctcgccctt agttgccatc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 14
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga acattgagac 240
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<211> 586
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<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 15
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga acattgagac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga 300
gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg ttatggtggg cactctaagg agactgccgg 360
tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct 420
acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc 480
acaaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc 540
tagtaatcgc gaatcagaat gtcgcggtga atacgttccc gggcct 586
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<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 16
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga gcattgagac 240
aggtgctgc 249
<210> 17
<211> 574
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 17
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga gcattgagac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga 300
gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg ttatggtggg cactctaagg agactgccgg 360
tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct 420
acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc 480
acaaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc 540
tagtaatcgc gaatcagaat gtcgcggtga atac 574
<210> 18
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 18
cacgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gtgcccttga ggcgtggctt ccggagctaa 60
cgcgttaagt cgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc 180
tactcttgac atccagagaa ctttccagag atggattggt gccttcggga actctgagac 240
aggtgctgc 249
<210> 19
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 19
cacgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gtgcccttga ggcgtggctt ccggagctaa 60
cgcgttaagt cgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc 180
tactcttgac atccagagaa ctttccagag atggattggt gccttcggga actctgagac 240
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gcgcaaccct tatcctttgt tgccagcggt ccggccggga actcaaagga gactgccagt 360
gataaactgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat ggcccttacg agtagggcta 420
cacacgtgct acaatggcgc atacaaagag aagcgacctc gcgagagcaa gcggacctca 480
taaagtgcgt cgtagtccgg attggagtct gcaactcgac tccatgaagt cggaatcgct 540
agtaatcgta gatcagaatg ctacggtgaa tacgttcccg ggcct 585
<210> 20
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 20
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
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aggtggtgc 249
<210> 21
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 21
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
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<210> 22
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 22
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
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<210> 23
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 23
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
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<210> 24
<211> 249
<212> DNA
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<220>
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<400> 24
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aggtggtgc 249
<210> 25
<211> 594
<212> DNA
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<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 25
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<210> 26
<211> 303
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 26
caacgcgaag aaccttacca aggcttgaca tacgccggaa agcatcagag atggtgcccc 60
ccttgtggtc ggtgtacagg tggtgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 120
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tggggactca caggagaccg ccggggtcaa ctcggaggaa ggtggggacg acgtcaagtc 240
atcatgcccc ttatgtcttg ggctgcacac gtgctacaat ggccggtaca atgagctgcg 300
ata 303
<210> 27
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 27
cacgccgtaa acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacgtctg gagacaggcg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgc 249
<210> 28
<211> 581
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 28
cacgccgtaa acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacgtctg gagacaggcg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgtcccgtgt tgccagcaag cccttcgggg tgttggggac tcacgggaga 360
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tgggctgcac acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgataccgca aggtggagcg 480
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<210> 29
<211> 164
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 29
gcccccttgt ggtcggtgta caggtggtgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg 60
ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgtcccgtg ttgccagcaa gcccttcggg 120
gtgttgggga ctcacgggag accgccgggg tcaactcgga ggag 164
<210> 30
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 30
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
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ccaaggcttg acatgaaccg gaaagacctg gaaacaggtg ccccgcttgc ggtcggttta 240
caggtggtgc 250
<210> 31
<211> 569
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 31
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
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<210> 32
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 32
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gtaagacctg gaaacaggtc ccccacttgt ggtcggttta 240
caggtggtgc 250
<210> 33
<211> 576
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 33
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
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ctagtaatcg cagatcagca acgctgcggt gaatac 576
<210> 34
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 34
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gtaagacctg gaaacaggtc ccccgcttgc ggtcggttta 240
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<210> 35
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 35
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
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<210> 36
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 36
cacgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gttcccttga ggagtggctt ccggagctaa 60
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<210> 37
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 37
cacgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gttcccttga ggagtggctt ccggagctaa 60
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<210> 38
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 38
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
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ccaaggcttg acatacaccg gaaaaccctg gagacagggt cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgc 249
<210> 39
<211> 591
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 39
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
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gcgcaaccct tgttctgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacaggaga 360
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gagttgctag taatcgcaga tcagcattgc tgcggtgaat acgttcccgg g 591
<210> 40
<211> 259
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 40
accggaaaac cctggagaca gggtccccct tgtggtcggt gtacaggtgg tgcatggctg 60
tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgttct 120
gtgttgccag catgcccttc ggggtgatgg ggactcacag gagactgccg gggtcaactc 180
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<210> 41
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 41
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ccaaggcttg acatacaccg gaaagcatta gagatagtgc cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgc 249
<210> 42
<211> 593
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 42
cacgccgtaa acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaagcatta gagatagtgc cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgtcccgtgt tgccagcagg cccttgtggt gctggggact cacgggagac 360
cgccggggtc aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgtct 420
tgggctgcac acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgataccgtg aggtggagcg 480
aatctcaaaa agccggtctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc atgaagtcgg 540
agtcgctagt aatcgcagat cagcattgct gcggtgaata cgttcccggg cct 593
<210> 43
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 43
cacgccgtaa actatgagag ctagccgtcg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct ctccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggaaacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gc 252
<210> 44
<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 44
cacgccgtaa actatgagag ctagccgtcg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct ctccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggaaacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac cctcgccctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cagatcagca tgctgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
<210> 45
<211> 263
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 45
tccgcctggg gagtacggtc gcaagattaa aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca 60
agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgcaga accttaccag cccttgacat 120
cccggtcgcg gtttccagag atggaaacct tcagttcggc tggaccggtg acaggtgctg 180
catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 240
ctcgccctta gttgccagca ttc 263
<210> 46
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 46
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaaacgcctg gaaacaggtg ccccgcttgc ggtcggttta 240
caggtggtgc 250
<210> 47
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 47
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaaacgcctg gaaacaggtg ccccgcttgc ggtcggttta 240
caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc tcgttctatg ttgccagcac gtgatggtgg ggactcatag gagactgccg 360
gggtcaactc ggaggaaggt ggggacgacg tcaaatcatc atgcccctta tgtcttgggc 420
ttcacgcatg ctacaatggc cggtacaaag ggttgcgata ctgtgaggtg gagctaatcc 480
caaaaagccg gtctcagttc ggattggggt ctgcaactcg accccatgaa gtcggagtcg 540
ctagtaatcg cagatcagca acgctgcggt gaatacgttc ccgggcct 588
<210> 48
<211> 290
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 48
aaacgcctgg aaacaggtgc cccgcttgcg gtcggtttac aggtggtgca tggttgtcgt 60
cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct cgttctatgt 120
tgccagcacg tgatggtggg gactcatagg agactgccgg ggtcaactcg gaggaaggtg 180
gggacgacgt caaatcatca tgccccttat gtcttgggct tcacgcatgc tacaatggcc 240
ggtacaaagg gttgcgatac tgtgaggtgg agctaatccc aaaaagccgg 290
<210> 49
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 49
cacgccgtaa acgttgggcg ctagatgtgg ggaccattcc acggtttccg tgtcgcagct 60
aacgcattaa gcgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatatacga gaacgggcca gaaatggtca actctttgga cactcgtaaa 240
caggtggtgc 250
<210> 50
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 50
cacgccgtaa acgttgggcg ctagatgtgg ggaccattcc acggtttccg tgtcgcagct 60
aacgcattaa gcgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatatacga gaacgggcca gaaatggtca actctttgga cactcgtaaa 240
caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc tcgttctatg ttgccagcac gtaatggtgg gaactcatag gagactgccg 360
gggtcaactc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgtcttgggc 420
ttcacgcatg ctacaatggc cggtacaaag ggctgcaata ccgtaaggtg gagcgaatcc 480
caaaaagccg gtctcagttc ggattgaggt ctgcaactcg acctcatgaa gtcggagtcg 540
ctagtaatcg cagatcagca acgctgcggt gaatacgttc ccgggcct 588
<210> 51
<211> 248
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 51
cacaccgtaa acgttgggcg ctaggtgtgg gactcattcc acgagttccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gcgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctaggtttg acatataggg aaatctgcta gagatagcag gtccgtaagg gctctataca 240
ggtggtgc 248
<210> 52
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 52
cacaccgtaa acgttgggcg ctaggtgtgg gactcattcc acgagttccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gcgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctaggtttg acatataggg aaatctgcta gagatagcag gtccgtaagg gctctataca 240
ggtggtgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaaccctc gtcttatgtt gccagcacgt catggtgggg actcataaga gactgccggg 360
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cacgcatgct acaatggccg gtacaaaggg ctgcgaaatc gcaagatgga gcgaatccca 480
aaaagccggt ctcagttcgg attggggtct gcaactcgac cccatgaagt cggagtcgct 540
agtaatcgca gatcagcaac gctgcggtga atacgttccc gggcct 586
<210> 53
<211> 223
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 53
caggtccgta agggctctat acaggtggtg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 60
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc ctcgtcttat gttgccagca cgtcatggtg 120
gggactcata agagactgcc ggggtcaact cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcat 180
catgcccctt atgcctaggg cttcacgcat gctacaatgg ccg 223
<210> 54
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 54
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga aatggatacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gc 252
<210> 55
<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 55
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga aatggatacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
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cgagcgcaac cctcgccctt agttgccatc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
<210> 56
<211> 582
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 56
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
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tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaaatc gcggatcagc atgccgcggg gaatacgttc cc 582
<210> 57
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 57
cgagctaatc tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa 60
gttggaatcg ctagtaaa 78
<210> 58
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 58
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
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<210> 59
<211> 576
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 59
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggaaacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac cctcgccctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacg 576
<210> 60
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 60
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggaaatc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gc 252
<210> 61
<211> 577
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 61
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggaaatc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac cctcgccctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgt 577
<210> 62
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 62
cacgccgtaa acgttgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatataccg gaaacggcta gagatagtcg cccccttgtg gtcggtatac 240
aggtggtgc 249
<210> 63
<211> 593
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 63
cacgccgtaa acgttgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatataccg gaaacggcta gagatagtcg cccccttgtg gtcggtatac 240
aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgttctgtgt tgccagcatg cctttcgggg tgatggggac tcacaggaga 360
ctgccggggt caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa atcatcatgc cccttatgtc 420
ttgggctgca cacgtgctac aatggtcggt acaaagggct gcaatgccgc gaggcggagc 480
gaatcccaaa aagccggcct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagttg 540
gagttgctag taatcgcaga tcagcatgct gcggtgaata cgttcccggg cct 593
<210> 64
<211> 106
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 64
agactgccgg ggtcaactcg gaggaaggtg gggacgacgt caaatcatca tgccccttat 60
gtcttgggct gcacacgtgc tacaatggtc ggtacaaagg gctgca 106
<210> 65
<211> 251
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 65
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaccgccgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg c 251
<210> 66
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 66
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaccgccgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 300
gagcgcaacc ctcgttctat gttgccagca cgtgatggtg gggactcata ggagactgcc 360
ggggtcaact cggaggaagg tggggacgac gtcaaatcat catgcccctt atgtcttggg 420
cttcacgcat gctacaatgg ccggtacaaa gggttgcgat actgtgaggt ggagctaatc 480
ccaaaaagcc ggtctcagtt cggattgggg tctgcaactc gaccccatga agtcggagtc 540
gctagtaatc gcagatcagc aacgctgcgg tgaatacgtt cccgggcc 588
<210> 67
<211> 251
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 67
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatggaccg gaccgccgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg c 251
<210> 68
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 68
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatggaccg gaccgccgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 300
gagcgcaacc ctcgttctat gttgccagca cgtgatggtg gggactcata ggagactgcc 360
ggggtcaact cggaggaagg tggggacgac gtcaaatcat catgcccctt atgtcttggg 420
cttcacgcat gctacaatgg ccggtacaaa gggttgcgat actgtgaggt ggagctaatc 480
ccaaaaagcc ggtctcagtt cggattgggg tctgcaactc gaccccatga agtcggagtc 540
gctagtaatc gcagatcagc aacgctgcgg gaatacgttc ccgggcct 588
<210> 69
<211> 238
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 69
gatggtgggg actcatagga gactgccggg gtcaactcgg aggaaggtgg ggacgacgtc 60
aaatcatcat gccccttatg tcttgggctt cacgcatgct acaatggccg gtacaaaggg 120
ttgcgatact gtgaggtgga gctaatccca aaaagccggt ctcagttcgg attggggtct 180
gcaactcgac cccatgaagt cggagtcgct agtaatcgca gatcagcaac gctgcggg 238
<210> 70
<211> 251
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 70
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaccgctgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg c 251
<210> 71
<211> 591
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 71
catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaccgctgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 300
gagcgcaacc ctcgttctat gttgccagca cgtgatggtg gggactcata ggagactgcc 360
ggggtcaact cggaggaagg tggggacgac gtcaaatcat catgcccctt atgtcttggg 420
cttcacgcat gctacaatgg ccggtacaaa gggttgcgat actgtgaggt ggagctaatc 480
ccaaaaagcc ggtctcagtt cggattgggg tctgcaactc gaccccatga agtcggagtc 540
gctagtaatc gcagatcagc aacgctgccg gtgaatacgt tcccggggcc t 591
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<211> 94
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 72
taatcccaaa aagccggtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg 60
gagtcgctag taatcgcaga tcagcaacgc tgcc 94
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
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catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
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gagcgcaacc ctcgttctat gttgccagca cgtgatggtg gggactcata ggagactgcc 360
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cttcacgcat gctacaatgg ccggtacaaa gggttgcgat actgtgaggt ggagctaatc 480
ccaaaaagcc ggtctcagtt cggattgggg tctgcaactc gaccccatga agtcggagtc 540
gctagtaatc gcagatcagc aacgctgcgg tgaatacgtt cccgggcct 589
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<211> 589
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
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catgccgtaa acgttgggca ctaggtgtgg gggacattcc acgttttccg cgccgtagct 60
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatgaaccg gaccgctgca gaaatgtggt ttcccctttg gggctggttt 240
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 300
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<212> DNA
<213> 未知
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cacgccctaa acgatgtcaa ctagttgtcg ggtcttcatt gacttggtaa cgtagctaac 60
gcgtgaagtt gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
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cacgccgtaa acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct 60
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<212> DNA
<213> 未知
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<223> 16S DNA标记
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 89
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<212> DNA
<213> 未知
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
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cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
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<212> DNA
<213> 未知
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<400> 92
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ccaaggcttg acatgaaccg gaaagacctg gaaacaggtg ccccgcttgc ggtcggttta 240
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ttcacgcatg ctacaatggc cggtacaaag ggttgcgata ctgtgaggtg gagctaatcc 480
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<213> 未知
<220>
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<400> 93
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<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 94
cacgccgtaa acgatgaatg ccagctgttg gggtgcttgc accgcagtag cgcagctaac 60
gctttgagca ttccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
tcctttgaca tggcgtgtta cccagagaga tttggggtcc acttcggtgg cgcgcacaca 240
ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaacccac gtccttagtt gccatcattc agttgggcac tctagggaga ctgccggtga 360
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<212> DNA
<213> 未知
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<210> 97
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 97
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caaccctaga gatagggctt tccccttcgg gggacagagt 240
gacaggtggt gc 252
<210> 98
<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 98
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caaccctaga gatagggctt tccccttcgg gggacagagt 240
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac ccttgatctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gtgactgccg 360
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc 420
tacacacgtg ctacaatgga tggtacaaag ggctgcaaac ctgcgaaggt aagcgaatcc 480
cataaagcca ttctcagttc ggattgcagg ctgcaactcg cctgcatgaa gccggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
<210> 99
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 99
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caaccctaga gatagggctt tcccttcggg gacagagtga 240
caggtggtgc 250
<210> 100
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 100
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caaccctaga gatagggctt tcccttcggg gacagagtga 240
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cacacgtgct acaatggaca gaacaaaggg ctgcgagacc gcaaggttta gccaatccca 480
caaatctgtt ctcagttcgg atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagc tggaatcgct 540
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<210> 101
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 101
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 60
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<210> 102
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 102
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 60
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<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 103
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<210> 104
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
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<400> 104
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<210> 105
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
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<400> 107
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 108
catgccgtaa acgttgggaa ctaggtgtgg gtctcattcc acgagatccg tgccgcagct 60
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ggtggtgc 248
<210> 109
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 109
catgccgtaa acgttgggaa ctaggtgtgg gtctcattcc acgagatccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
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ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaaccctc gttctatgtt gccagcacgt catggtgggg actcatagga gactgccggg 360
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cacgcatgct acaatggccg gtacaaaggg ctgcgaaacc gcgaggtgga gcgaatccca 480
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agtaatcgca gatcagcaac gctgcggtga atacgttccc gggcct 586
<210> 110
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 110
cacgccctaa acgatgtcaa ctggttgttg ggaaggttcc ttctcagtaa cgtagctaac 60
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caggtgctgc 250
<210> 111
<211> 580
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 111
cacgccctaa acgatgtcaa ctggttgttg ggaaggttcc ttctcagtaa cgtagctaac 60
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<210> 112
<211> 93
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 112
ggtcgtagtc cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga agtcggaatc gctagtaatc 60
gcggatcagc ttgccgcggt gaatacgttc ccc 93
<210> 113
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 113
cacgccgtaa acgatgaatg ctaggtgtta ggggtttcga tacccttggt gccgaagtta 60
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<210> 114
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 114
cacgccgtaa acgatgaatg ctaggtgtta ggggtttcga tacccttggt gccgaagtta 60
acacattaag cattccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
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caagtcttga catccctctg aatcctctag agatagaggc ggccttcggg acagaggtga 240
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tataaaagcc agtctcagtt cggattgcag gctgcaactc gcctgcatga agtcggaatt 540
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<210> 115
<211> 84
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 115
ctgaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcagt ggagtatgtg gtttaattcg 60
aagcaacgcg aaaaacctta ccaa 84
<210> 116
<211> 247
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 116
cacgccctaa acgatggata ctcgacatac gcgatacaca gtgtgtgtct gagcgaaagc 60
attaagtatc ccacctggga agtacgaccg caaggttgaa actcaaagga attggcgggg 120
gtccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat acgcgaggaa ccttacctgg 180
gctagaatgc atattgaccg tgggtgaaag ctcactttgt agcaatacac aatttgtaag 240
gtgctgc 247
<210> 117
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 117
cacgccctaa acgatggata ctcgacatac gcgatacaca gtgtgtgtct gagcgaaagc 60
attaagtatc ccacctggga agtacgaccg caaggttgaa actcaaagga attggcgggg 120
gtccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat acgcgaggaa ccttacctgg 180
gctagaatgc atattgaccg tgggtgaaag ctcactttgt agcaatacac aatttgtaag 240
gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgccg tgaggtgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 300
gcaaccccca tcattagttg ccatcaggta aagctgggaa ctctaatgaa actgccgtcg 360
taagacgcga ggaaggaggg gatgatgtca agtcatcatg gcctttatgc ccagggctac 420
acacgtgcta caatggaagg gacaaagagc tgccacttgg cgacaaggcg ctaatctcaa 480
aaaccctttc tcagttcaga tcgcagtctg caactcgact gcgtgaagct ggaatcgcta 540
gtaatcgtat atcagcaatg atacggtgaa tacgttcccg gacct 585
<210> 118
<211> 247
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 118
cacaccgtaa acgttgggcg ctaggtgtgg gatccattcc acgggttccg tgccgcagct 60
aacgcattaa gcgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctgggtttg acatatgccg gaaagctcta gagatagagc cccttttagt cggtatacag 240
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<210> 119
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 119
cacaccgtaa acgttgggcg ctaggtgtgg gatccattcc acgggttccg tgccgcagct 60
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cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctgggtttg acatatgccg gaaagctcta gagatagagc cccttttagt cggtatacag 240
gtggtgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 300
gcaaccctcg tcctatgttg ccagcgggta atgccgggga ctcataggag actgccgggg 360
tcaactcgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcatcatg ccccttatgt ccagggcttc 420
acgcatgcta caatggccgg tacaaagggc tgcgatgctg taaggcggag cgaatcccaa 480
aaagccggtc tcagttcgga ttggggtctg caactcgacc ccatgaagtc ggagtcgcta 540
gtaatcgcag atcagcaacg ctgcggtgaa tacgttcccg ggcct 585
<210> 120
<211> 285
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 120
cgggttccgt gccgcagcta acgcattaag cgccccgcct ggggagtacg gccgcaaggc 60
taaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggcg gagcatgcgg attaattcga 120
tgcaacgcga agaaccttac ctgggtttga catatgccgg aaagctctag agatagagcc 180
ccttttagtc ggtatacagg tggtgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 240
gttaagtccc gcaacgagcg caaccctcgt cctatgttgc cagcg 285
<210> 121
<211> 248
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 121
cacgctgtaa acgatgattg ctagttgtca gccggcatgc cggttggtga cgcagctaac 60
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gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
ccttttgaca tgcctggaca tcatgggaga ccatgctttc tcttcggaga ctgggacaca 240
ggtgctgc 248
<210> 122
<211> 561
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 122
cacgctgtaa acgatgattg ctagttgtca gccggcatgc cggttggtga cgcagctaac 60
gcattaagca atccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
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ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaaccctc gctgttagtt gccatcattt agttgggaac tctaacagga ctgccggtgc 360
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cacgtgctac aatggcgact acagagggca aatccctaaa agtcgtctca gttcggatcg 480
tcctctgcaa ctcgagggcg tgaagttgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc 540
ggtgaatacg ttcccgggcc t 561
<210> 123
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 123
cacgccgtaa acgatggatg ctagctgtgg ggggtatcga ccccttccgt agcgaagcta 60
acgcgttaag catcccgcct gtggagtacg gccgcaaggc taaaacataa aggaattgac 120
ggggacccgc acaagtggtg gagcgtgttc tttaattcga tgataaacga aaaaccttac 180
cagggtttga catcccaaga attttgtcga aagacgagag tgctttattg aacttggtga 240
cagctgttgc 250
<210> 124
<211> 572
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 124
cacgccgtaa acgatggatg ctagctgtgg ggggtatcga ccccttccgt agcgaagcta 60
acgcgttaag catcccgcct gtggagtacg gccgcaaggc taaaacataa aggaattgac 120
ggggacccgc acaagtggtg gagcgtgttc tttaattcga tgataaacga aaaaccttac 180
cagggtttga catcccaaga attttgtcga aagacgagag tgctttattg aacttggtga 240
cagctgttgc atggccgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg tttggttaag tccatcaacg 300
agcgcaaccc ttatagttag ttggattttt ctagctagac tgccccggta acggggagga 360
aggaggggat gatgtcaggt cagtattacg cttacatcct gggctagaaa cgcgctacaa 420
tggccggtac aacgggcagc caagccgcaa ggcggagcaa atcccaacaa agccggtccc 480
agttcggatt ggaggctgaa actcgcctcc atgaagtcgg aatcactagt aatcgcaaat 540
cagcatgttg cggtgaatac gttcccgggt ct 572
<210> 125
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 125
ttccgtagcg aagctaacgc gttaagcatc ccgcctgtgg agtacggccg caaggctaaa 60
acataaagga attgacgggg acccgcacaa gt 92
<210> 126
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 126
cacgccgtaa acgatggata ctagctgttg gaggtatcga ccccttcagt agcgaagcta 60
acgcgttaag tatcccgcct gtggagtacg gtcgcaagac taaaacataa aggaattgac 120
ggggacccgc acaagcggtg gagcgtgttc tttaattcga tgataaacga agaaccttac 180
cagggcttga catcccttga attttgtcga aagacgagag tgctttattg agcaaggtga 240
caggtgttgc 250
<210> 127
<211> 572
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 127
cacgccgtaa acgatggata ctagctgttg gaggtatcga ccccttcagt agcgaagcta 60
acgcgttaag tatcccgcct gtggagtacg gtcgcaagac taaaacataa aggaattgac 120
ggggacccgc acaagcggtg gagcgtgttc tttaattcga tgataaacga agaaccttac 180
cagggcttga catcccttga attttgtcga aagacgagag tgctttattg agcaaggtga 240
caggtgttgc atggccgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg tttggttaag tccatcaacg 300
agcgcaaccc ttgtgattag ttgtattttt ctaatcaaac tgccccggta acggggagga 360
aggaggggat gatgtcaggt cagtattacc cttacaccct gggctagaaa cgcgctacaa 420
tggccagtac aatgggcagc gaagtcgcga gatggagcaa atcgcatcaa agctggtccc 480
agttcggata gtaggctgaa actcgcctgc ttgaagtggg aatcgctagt aatcgcaaat 540
cagcatgttg cggtgaatac gttcccgggt ct 572
<210> 128
<211> 185
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 128
gatggatact agctgttgga ggtatcgacc ccttcagtag cgaagctaac gcgttaagta 60
tcccgcctgt ggagtacggt cgcaagacta aaacataaag gaattgacgg ggacccgcac 120
aagcggtgga gcgtgttctt taattcgatg ataaacgaag aaccttacca gggcttgaca 180
tccct 185
<210> 129
<211> 594
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 129
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacggcca gagatggtcg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgttctgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacaggaga 360
ctgccggggt caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgc cccttatgtc 420
ttgggctgca cacgtgctac aatggccggt acaaagagct gcgaaaccgt gaggtggagc 480
gaatctcaaa aagccggtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg 540
gagttgctag taatcgcaga tcagcattgc tgcggtgaat acgttcccgg gcct 594
<210> 130
<211> 594
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 130
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacggcca gagatggtcg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgttctgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacaggaga 360
ctgccggggt caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgc cccttatgtc 420
ttgggctgca cacgtgctac aatggcaggt acaaagagct gcgaagccgt gaggcggagc 480
gaatctcaaa aagcctgtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg 540
gagttgctag taatcgcaga tcagcattgc tgcggtgaat acgttcccgg gcct 594
<210> 131
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 131
cacgccgtaa acgatggatg ctagctgtgg ggggtatcga ccccttccgt agcgaagcta 60
acgcgttaag catcccgcct gtggagtacg gccgcaaggc taaaacataa aggaattgac 120
ggggacccgc acaagtggag gagcgtgttc tttaattcga tgataaacga aaaaccttac 180
cagggtttga catcccaaga attttgtcga aagacgagag tgctttattg aacttggtga 240
cagctgttgc 250
<210> 132
<211> 92
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 132
ttccgtagcg aagctaacgc gttaagcatc ccgcctgtgg agtacggccg caaggctaaa 60
acataaagga attgacgggg acccgcacaa gt 92
<210> 133
<211> 1419
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 133
atggctcaga ttgaacgctg gcggcaggcc taacacatgc aagtcgagcg gtagagagaa 60
gcttgcttct cttgagagcg gcggacgggt gagtaatgcc taggaatctg cctggtagtg 120
ggggataacg ttcggaaacg gacgctaata ccgcatacgt cctacgggag aaagcagggg 180
accttcgggc cttgcgctat cagatgagcc taggtcggat tagctagttg gtgaggtaat 240
ggctcaccaa ggcgacgatc cgtaactggt ctgagaggat gatcagtcac actggaactg 300
agacacggtc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa tgggcgaaag 360
cctgatccag ccatgccgcg tgtgtgaaga aggtcttcgg attgtaaagc actttaagtt 420
gggaggaagg gcagttacct aatacgtgat tgttttgacg ttaccgacag aataagcacc 480
ggctaactct gtgccagcag ccgcggtaat acagagggtg caagcgttaa tcggaattac 540
tgggcgtaaa gcgcgcgtag gtggtttgtt aagttggatg tgaaatcccc gggctcaacc 600
tgggaactgc attcaaaact gactgactag agtgtggtag agggtggtgg aatttcctgt 660
gtagcggtga aatgcgtaga tataggaagg aacaccagtg gcgaaggcga ccacctggac 720
caacactgac actgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 780
ccacgccgta aacgatgtca actagccgtt gggagccttg agctcttagt ggcgcagcta 840
acgcattaag ttgaccgcct ggggagtacg gccgcaaggt taaaactcaa atgaattgac 900
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 960
caggccttga catccaatga actttctaga gatagattgg tgccttcggg aacattgaga 1020
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgtaacg 1080
agcgcaaccc ttgtccttag ttaccagcac gtaatggtgg gcactctaag gagactgccg 1140
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaagtcatc atggccctta cggcctgggc 1200
tacacacgtg ctacaatggt cggtacagag ggttgccaag ccgcgaggtg gagctaatcc 1260
cacaaaaccg atcgtagtcc ggatcgcagt ctgcaactcg actgcgtgaa gtcggaatcg 1320
ctagtaatcg cgaatcagaa tgtcgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc 1380
cgtcacacca tgggagtggg ttgcaccaga agtagctag 1419
<210> 134
<211> 1827
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 134
cggtaaggct ccttcgggag tacacgagcg gcgaacgggt gagtaacacg tgagcaatct 60
gcccttcaca tcgggataac tccgggaaac cgaagctaat accgaatacg accacttccg 120
gcatcggatg gtggtggaaa gttccggcgg tgaaggatga gctcgcggcc tatcagcttg 180
ttggtggggt aacggcccac caaggcttcg acgggtagcc ggcctgagag ggtgaccggc 240
cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga 300
caatgggcga aagcctgatc cagcaacgcc gcgtgaggga tgacggcctt cgggttgtaa 360
acctctttca gcagggacga agcgcaagtg acggtacctg cagaagaagc accggccaac 420
tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg gtgcgagcgt tgtccggaat tattgggcgt 480
aaagggctcg taggcggtct gtcgcgtcgg gagtgaaaac tcagggctta accctgagcc 540
tgcttccgat acgggcagac tagaggtatg caggggagaa cggaattcct ggtgtagcgg 600
tgaaatgcgc agatatcagg aggaacaccg gtggcgaagg cggttctctg ggcattacct 660
gacgctgagg agcgaaagtg tggggagcga acaggattag ataccctggt agtccacacc 720
gtaaacgttg ggcgctaggt gtgggactca ttccacgagt tccgtgccgc agctaacgca 780
ttaagcgccc cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 840
cccgcacaag cggcggagca tgcggattaa ttcgatgcaa cgcgaagaac cttacctagg 900
tttgacatat agggaaatct gctagagata gcaggtccgt aagggctcta tacaggtggt 960
gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac 1020
cctcgtctta tgttgccagc acgtcatggt ggggactcat aagagactgc cggggtcaac 1080
tcggaggaag gtggggatga cgtcaagtca tcatgcccct tatgcctagg gcttcacgca 1140
tgctacaatg gccggtacaa agggctgcga aatcgcaaga tggagcgaat cccaaaaagc 1200
cggtctcagt tcggattggg gtctgcaact cgaccccatg aagtcggagt cgctagtaat 1260
cgcagatcag caacgctgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcacg 1320
tcacgaaagt tggcaacacc cgaagccggt ggcccaaccc ttgtggaggg agccgtcgaa 1380
ggtggggcga gcgattggga cgaagtcgta acaaggtagc cgtaccggaa ggtgcggctg 1440
gatcacctcc tttctaagga gcatcactgg cagcctcgag ctgtccaggc ttccttgttt 1500
cgtggacaaa cgttccacgg caaggactgc tcactagtgg aacgtcgatt atttggtctg 1560
cgaccggaca acatctcgtc agtacttccg ccgtcctcgg acggatcacg gagtggaacc 1620
tcgagcgtcg cgaacggaag caaaccaggc acactgttgg gtcctgaggg atcgagtcac 1680
tcgacctctc cgggcctcca tcccctcgaa ctgccgacca ctggtcggca agcgaggatc 1740
cgatggcggc accgcccgta tcttgagaac tacacagtgg acgcgagcat ctttgtagca 1800
agacaagcta ctaaagggca catggtg 1827
<210> 135
<211> 312
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 135
atcgggataa ctccgggaaa ccgaagctaa taccgaatac gaccacttcc ggcatcggat 60
ggtggtggaa agttccggcg gtgaaggatg agctcgcggc ctatcagctt gttggtgggg 120
taacggccca ccaaggcttc gacgggtagc cggcctgaga gggtgaccgg ccacactggg 180
actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatgggcg 240
aaagcctgat ccagcaacgc cgcgtgaggg atgacggcct tcgggttgta aacctctttc 300
agcagggacg aa 312
<210> 136
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 136
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggagacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gc 252
<210> 137
<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 137
cacgccgtaa acgatggaag ctagccgttg gcaagtttac ttgtcggtgg cgcagctaac 60
gcattaagct tcccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca 180
gcccttgaca tcccggtcgc ggtttccaga gatggagacc ttcagttcgg ctggaccggt 240
gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac cctcgccctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gggactgccg 360
gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 420
ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag accgcgaggt cgagctaatc 480
tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
<210> 138
<211> 1406
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 138
aggggagcgg cagacgggtg agtaacgcgt gggaatctac ccatctctac ggaacaactc 60
cgggaaactg gagctaatac cgtatacgtc cttttggaga aagatttatc ggagatggat 120
gagcccgcgt tggattagct agttggtggg gtaatggcct accaaggcga cgatccatag 180
ctggtctgag aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga 240
ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggc gcaagcctga tccagccatg ccgcgtgagt 300
gatgaaggcc ctagggttgt aaagctcttt caacggtgaa gataatgacg gtaaccgtag 360
aagaagcccc ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg ctagcgttgt 420
tcggaattac tgggcgtaaa gcgcacgtag gcggatactt aagtcagggg tgaaatcccg 480
gggctcaacc ccggaactgc ctttgatact gggtatctcg agtccggaag aggtgagtgg 540
aattccgagt gtagaggtga aattcgtaga tattcggagg aacaccagtg gcgaaggcgg 600
ctcactggtc cggtactgac gctgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata 660
ccctggtagt ccacgccgta aacgatggaa gctagccgtt ggcaagttta cttgtcggtg 720
gcgcagctaa cgcattaagc ttcccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa 780
ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgca 840
gaaccttacc agcccttgac atcccggtcg cggtttccag agatggagac cttcagttcg 900
gctggaccgg tgacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 960
aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgccct tagttgccag cattcagttg ggcactctaa 1020
ggggactgcc ggtgataagc cgagaggaag gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct 1080
tacgggctgg gctacacacg tgctacaatg gtggtgacag tgggcagcga gaccgcgagg 1140
tcgagctaat ctccaaaagc catctcagtt cggattgcac tctgcaactc gagtgcatga 1200
agttggaatc gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg 1260
tacacaccgc ccgtcacacc atgggagttg gttttacccg aaggcgctgt gctaaccgca 1320
aggaggcagg cgaccacggt agggtcagcg actggggtga agtcgtaaca aggtagccgt 1380
aggggaacct gcggctggat cacctc 1406
<210> 139
<211> 279
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 139
ccggtactga cgctgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 60
tccacgccgt aaacgatgga agctagccgt tggcaagttt acttgtcggt ggcgcagcta 120
acgcattaag cttcccgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa aggaattgac 180
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcgc agaaccttac 240
cagcccttga catcccggtc gcggtttcca gagatggag 279
<210> 140
<211> 634
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 140
atggctcaga ttgaacgctg gcggcaggcc taacacatgc aagtcgagcg gtagagagaa 60
gcttgcttct cttgagagcg gcggacgggt gagtaatgcc taggaatctg cctggtagtg 120
ggggataacg ttcggaaacg gacgctaata ccgcatacgt cctacgggag aaagcagggg 180
accttcgggc cttgcgctat cagatgagcc taggtcggat tagctagttg gtgaggtaat 240
ggctcaccaa ggcgacgatc cgtaactggt ctgagaggat gatcagtcac actggaactg 300
agacacggtc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa tgggcgaaag 360
cctgatccag ccatgccgcg tgtgtgaaga aggtcttcgg attgtaaagc actttaagtt 420
gggaggaagg gcagttacct aatacgtgat tgttttgacg ttaccgacag aataagcacc 480
ggctaactct gtgccagcag ccgcggtaat acagagggtg caagcgttaa tcggaattac 540
tgggcgtaaa gcgcgcgtag gtggtttgtt aagttggatg tgaaatcccc gggctcaacc 600
tgggaactgc attcaaaact gactgactag agtg 634
<210> 141
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 141
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga gcattgagac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga 300
gcgcaaccct tgtccttagt taccagcaca ttaaggtggg cactctaagg agactgccgg 360
tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct 420
acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc 480
ataaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc 540
tagtaatcgc gaatcagaat gtcgcggtga atacgttccc gggcct 586
<210> 142
<211> 117
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 142
ggtgccttcg ggagcattga gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 60
tgttgggtta agtcccgtaa cgagcgcaac ccttgtcctt agttaccagc acattaa 117
<210> 143
<211> 585
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 143
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga gcattgagac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga 300
gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg tgatggtggg cactctaagg agactgccgg 360
tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct 420
acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc 480
ataaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc 540
tagtaatcgc gaatcagaat gtcgcggtga atacgtcccg ggcct 585
<210> 144
<211> 439
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 144
cttagtggcg cagctaacgc attaagttga ccgcctgggg agtacggccg caaggttaaa 60
actcaaatga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 120
acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatc caatgaactt tccagagatg gattggtgcc 180
ttcgggagca ttgagacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 240
gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtga tggtgggcac 300
tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg 360
cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc 420
gaggtggagc taatcccat 439
<210> 145
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 145
cacgccctaa acgatgcgaa ctggatgttg gtctcaactc ggagatcagt gtcgaagcta 60
acgcgttaag ttcgccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagtatgtgg tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac 180
ctggccttga catgtccgga atcctgcaga gatgcgggag tgccttcggg aatcggaaca 240
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc ttgtccttag ttgccagcac gtaatggtgg gaactctaag gagactgccg 360
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaagtcatc atggccctta cggccagggc 420
tacacacgta ctacaatggt cggtacagag ggttgcaata ccgcgaggtg gagccaatcc 480
cagaaagccg atcccagtcc ggatcgaagt ctgcaactcg acttcgtgaa gtcggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagct atgccgcggt gaatacgttc ccgggcct 588
<210> 146
<211> 337
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 146
gggagtgcct tcgggaatcg gaacacaggt gctgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg 60
agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgtc cttagttgcc agcacgtaat 120
ggtgggaact ctaaggagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag 180
tcatcatggc ccttacggcc agggctacac acgtactaca atggtcggta cagagggttg 240
caataccgcg aggtggagcc aatcccagaa agccgatccc agtccggatc gaagtctgca 300
actcgacttc gtgaagtcgg aatcgctagt aatcgcg 337
<210> 147
<211> 249
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 147
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacatcca gagatgggtg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgc 249
<210> 148
<211> 594
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 148
cacgccgtaa acggtgggaa ctaggtgttg gcgacattcc acgtcgtcgg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcagc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatacaccg gaaacatcca gagatgggtg cccccttgtg gtcggtgtac 240
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgtcccgtgt tgccagcatg cccttcgggg tgatggggac tcacgggaga 360
ccgccggggt caactcggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgc cccttatgtc 420
ttgggctgca cacgtgctac aatggccggt acaatgagct gcgataccgt gaggtggagc 480
gaatctcaaa aagccggtct cagttcggat tggggtctgc aactcgaccc catgaagtcg 540
gagttgctag taatcgcaga tcagcagtgc tgcggtgaat acgttcccgg gcct 594
<210> 149
<211> 248
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 149
catgccgtaa acgttgggaa ctagatgtgg ggaccattcc acggtctccg tgtcgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatatagag gaaaagtgca gaaatgtact ccccgcaagg tctctataca 240
ggtggtgc 248
<210> 150
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 150
catgccgtaa acgttgggaa ctagatgtgg ggaccattcc acggtctccg tgtcgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgcg gattaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
ccaaggcttg acatatagag gaaaagtgca gaaatgtact ccccgcaagg tctctataca 240
ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaaccctc gtcctatgtt gccagcacgt aatggtggga actcatggga tactgccggg 360
gtcaactcgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg tcttgggctt 420
cacgcatgct acaatggccg gtacaaaggg ctgcaatacc gtaaggtgga gcgaatccca 480
aaaagccggt ctcagttcgg attgaggtct gcaactcgac ctcatgaagt cggagtcgct 540
agtaatcgca gatcagcaac gctgcggtga atacgttccc gggcct 586
<210> 151
<211> 161
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 151
tctccgtgtc gcagctaacg cattaagttc cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa 60
aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggcggag catgcggatt aattcgatgc 120
aacgcgaaga accttaccaa ggcttgacat atagaggaaa a 161
<210> 152
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 152
cacgccctaa acgatgcgaa ctggatgttg ggtgcaacta ggcactcagt atcgaagcta 60
acgcgttaag ttcgccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagtatgtgg tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac 180
ctggccttga catccacgga actttccaga gatggattgg tgccttcggg aaccgtgaga 240
caggtgctgc 250
<210> 153
<211> 588
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 153
cacgccctaa acgatgcgaa ctggatgttg ggtgcaacta ggcactcagt atcgaagcta 60
acgcgttaag ttcgccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagtatgtgg tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac 180
ctggccttga catccacgga actttccaga gatggattgg tgccttcggg aaccgtgaga 240
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc ttgtccctag ttgccagcac gtaatggtgg gaactctagg gagaccgccg 360
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaagtcatc atggccctta cggccagggc 420
tacacacgta ctacaatgga aaggacagag ggctgcgatc ccgcgagggt gagccaatcc 480
cagaaacctt ttctcagtcc ggattggagt ctgcaactcg actccatgaa gtcggaatcg 540
ctagtaatcg cagatcagca ttgctgcggt gaatacgttc ccgggcct 588
<210> 154
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 154
cacgccctaa acgatgtcta ctagttgtcg ggtcttaatt gacttggtaa cgcagctaac 60
gcgtgaagta gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
ggacccgcac aagcggtgga tgatgtggat taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct 180
acccttgaca tgtcaggaac ctccgagaga tcggagggtg cccgaaaggg agcctgaaca 240
caggtgctgc 250
<210> 155
<211> 580
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 155
cacgccctaa acgatgtcta ctagttgtcg ggtcttaatt gacttggtaa cgcagctaac 60
gcgtgaagta gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
ggacccgcac aagcggtgga tgatgtggat taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct 180
acccttgaca tgtcaggaac ctccgagaga tcggagggtg cccgaaaggg agcctgaaca 240
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc ttgtcattag ttgctacgaa agggcactct aatgagactg ccggtgacaa 360
accggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc ctcatggccc ttatgggtag ggcttcacac 420
gtcatacaat ggtacataca gagggccgcc aacccgcgag ggggagctaa tcccagaaag 480
tgtatcgtag tccggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagttggaa tcgctagtaa 540
tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggtct 580
<210> 156
<211> 520
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 156
acgccctaaa cgatgtctac tagttgtcgg gtcttaattg acttggtaac gcagctaacg 60
cgtgaagtag accgcctggg gagtacggtc gcaagattaa aactcaaagg aattgacggg 120
gacccgcaca agcggtggat gatgtggatt aattcgatgc aacgcgaaaa accttaccta 180
cccttgacat gtcaggaacc tccgagagat cggagggtgc ccgaaaggga gcctgaacac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 300
gcgcaaccct tgtcattagt tgctacgaaa gggcactcta atgagactgc cggtgacaaa 360
ccggaggaag gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct tatgggtagg gcttcacacg 420
tcatacaatg gtacatacag agggccgcca acccgcgagg gggagctaat cccagaaagt 480
gtatcgtagt ccggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg 520
<210> 157
<211> 248
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 157
cacgccgtaa acgttgggaa ctaggtgtgg gccacattcc acgtggtctg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctgggtttg acatgcaggg aaatctcgta gagatacggg gtccgtaagg gccttgcaca 240
ggtggtgc 248
<210> 158
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 158
cacgccgtaa acgttgggaa ctaggtgtgg gccacattcc acgtggtctg tgccgcagct 60
aacgcattaa gttccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 120
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg atgcaacgcg aagaacctta 180
cctgggtttg acatgcaggg aaatctcgta gagatacggg gtccgtaagg gccttgcaca 240
ggtggtgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 300
cgcaaccctc gtcctatgtt gccagcgagt aatgtcgggg actcatagga gactgccggg 360
gtcaactcgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat gccccttata tccagggctg 420
cacacatgct acaatggccg gtacaaagag ctgcgatacc gcaaggtgga gcgaatctca 480
taaagccggt ctcagttcgg attggggtct gcaactcgac cccatgaagt cggagtcgct 540
agtaatcgca gatcagcaac gctgcggtga atacgttccc gggcct 586
<210> 159
<211> 196
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 159
tccccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 60
caagcggcgg agcatgtggc ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc tgggtttgac 120
atgcagggaa atctcgtaga gatacggggt ccgtaagggc cttgcacagg tggtgcatgg 180
ctgtcgtcag ctcgtg 196
<210> 160
<211> 250
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 160
cacgccctaa acgatgtcta ctagttgtcg ggtcttaatt gacttggtaa cgcagctaac 60
gcgtgaagta gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
ggacccgcac aagcggtgga tgatgtggat taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct 180
acccttgaca tgtcaggaac ctccgagaga ttggagggtg cccgaaaggg agcctgaaca 240
caggtgctgc 250
<210> 161
<211> 580
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 161
cacgccctaa acgatgtcta ctagttgtcg ggtcttaatt gacttggtaa cgcagctaac 60
gcgtgaagta gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg 120
ggacccgcac aagcggtgga tgatgtggat taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct 180
acccttgaca tgtcaggaac ctccgagaga ttggagggtg cccgaaaggg agcctgaaca 240
caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 300
agcgcaaccc ttgtcattag ttgctacgaa agggcactct aatgagactg ccggtgacaa 360
accggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc ctcatggccc ttatgggtag ggcttcacac 420
gtcatacaat ggtacataca gagggccgcc aacccgcgag ggggagctaa tcccagaaag 480
tgtatcgtag tccggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagttggaa tcgctagtaa 540
tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggtct 580
<210> 162
<211> 252
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 162
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caactctaga gatagagcgt tccccttcgg gggacagagt 240
gacaggtggt gc 252
<210> 163
<211> 587
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 163
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta 60
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 120
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 180
caggtcttga catcctctga caactctaga gatagagcgt tccccttcgg gggacagagt 240
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 300
cgagcgcaac ccttgatctt agttgccagc atttagttgg gcactctaag gtgactgccg 360
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc 420
tacacacgtg ctacaatgga tggtacaaag ggctgcaaga ccgcgaggtc aagccaatcc 480
cataaaacca ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg cctacatgaa gctggaatcg 540
ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggcct 587
<210> 164
<211> 586
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 16S DNA标记
<400> 164
cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa 60
cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 120
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 180
aggccttgac atccaatgaa ctttccagag atggattggt gccttcggga gcattgagac 240
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga 300
gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg ttatggtggg cactctaagg agactgccgg 360
tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct 420
acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc 480
ataaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc 540
tagtaatcgc gaatcagaat gtcgcggtga atacgttccc gggcct 586
Claims (17)
1.一种包含一种或多种微生物菌株的组合物,其中所述一种或多种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
2.根据权利要求1所述的组合物,其包含至少两种微生物菌株,其中所述至少两种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
3.根据权利要求1所述的组合物,其包含至少三种微生物菌株,其中所述至少三种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
4.根据权利要求1所述的组合物,其包含至少四种微生物菌株,其中所述至少四种微生物菌株的16S序列包含SEQ ID No:1-164中的任一项。
5.一种组合物,其包含一种或多种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
6.根据权利要求5所述的组合物,其包含至少两种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
7.根据权利要求5所述的组合物,其包含至少三种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
8.根据权利要求5所述的组合物,其包含至少四种选自以下的微生物菌株:P0032_C7、P0048_B9或S2198、P0050_F5或S2199、P0035_B2或S2145、P0020_B1、P0047_A1或S2284、P0033_E1或S2177、P0032_A8或S2181、P0049_E7、P0042_A8或S2167、P0042_D5或S2165、P0042_B2或S2168、P0042_B12或S2189、P0042_C2或S2173、P0042_D10或S2172、P0044_A3或S2476、P0018_A11、P0044_A5、P0047_E2、P0047_C1、P0038_D2或S2166、P0042_E1、P0047_E8、P0018_A1、S2159_P0058_B9、S2161_P0054_E8、S2164_P0054_F4、P0057_A3或S2160、S2142_P0061_E11、S2163_P0019_A12、P0147_D10或S2291、P0147_G10或S2292、P0160_F7或S2351、P0140_C10或S2300、S2387、P0157_G5或S2303、P0160_E1或S2374、P0134_G7或S2280、S2384、S2275、S2278、S2373、S2370、S2293、S2382、P0132_A12、P0132_C12、P0140_D9、P0173_H3或S2404、S2385、S2197、S2285、S2477、S2376、S2420、S2424、S2445、S2333、S2329、S2327、S2330、S2423、S2435、S2158、S2437、S2332、S2521、S2228、S2473、P0156_G2、P0154_G3、S2487、S2488、S2421、P0105_C5、P0154_H3、P0156_G1、S1112、S2669、S2375、S2651、S2652、S2653、S2654、S2655、S2656、S2668、S2644、S2328和S2646、以及来源于它们的菌株、或它们的培养物。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物,其还包含农业有效量的选自以下的化合物或组合物:营养素、肥料、杀螨剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、杀线虫剂以及杀虫剂。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物,其还包含载体。
11.根据权利要求10所述的组合物,其中所述载体选自泥炭、草皮、滑石、褐煤、高岭石、叶蜡石、沸石、蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑、珍珠岩、云母、硅石、石英粉、钙基膨润土、蛭石以及它们的混合物。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物,其中所述组合物被制成选自乳液、胶体、粉尘、颗粒、丸粒、粉末、喷雾、以及溶液的制剂。
13.根据权利要求10所述的组合物,其中所述载体是植物种子。
14.一种植物种子,其具有包含根据权利要求1-10中任一项所述的组合物的包衣。
15.一种用于装配包含两种或更多种与植物健康、植物生长和/或植物产量相关联的微生物菌株的微生物聚生体的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)提供多个植物根际样品;
(2)从步骤(1)中提供的各个所述样品中分离多种基因组DNA;
(3)测定来自步骤(2)中分离的多种基因组DNA的每种的多个16SrRNA基因片段的序列;
(4)在其序列在步骤(3)中测定的多个16S rRNA基因片段的每一者中,测定每个所述16S rRNA基因片段的(绝对或相对)丰度;
(5)测定步骤(1)的所述根际样品从其采集的各个植物的植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的丰度或植物产量;
(6)将步骤(4)中测定的各个16S rRNA基因片段的所述丰度与步骤(5)中测定的所述植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的所述丰度或所述植物产量相关联;
(7)选择其丰度与所述植物生物量或与其相关联的参数(例如,植株重量、植株高度、根尺寸/长度等)的所述丰度或所述植物产量相关联的至少一个16S rRNA基因片段,如步骤(6)中所测定;
(8)在所述多个样品的范围内,将步骤(7)中选择的所述至少一个16SrRNA基因片段的丰度与其序列在步骤(3)中测定的其它多个16SrRNA基因片段的丰度相关联;
(9)在所述多个样品的范围内,鉴定其丰度与步骤(7)中选择的所述至少一个16S rRNA基因片段的丰度相关联的一个或多个16S rRNA基因片段;
(10)鉴定两种或更多种微生物菌株,其包含分别在步骤(7)和(9)中鉴定的所述16SrRNA基因片段;以及
(11)通过将所述菌株组合为单一混合物,将在步骤(10)中鉴定的所述两种或更多种微生物菌株装配成微生物聚生体。
16.一种微生物聚生体,其通过根据权利要求15所述的方法进行装配。
17.一种增强植物的健康、生长或产量的方法,所述方法包括将有效量的根据权利要求15所述的微生物聚生体施用于所述植物或施用于所述植物的周围环境。
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