CN107969423A - 一种极细链格孢菌株可湿性粉剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种极细链格孢菌株可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂主要由以下质量百分比组分构成：HZ‑1菌粉30％‑40％，载体45％‑55％、保护剂3％‑8％、分散剂4％‑8％、稳定剂0.5％‑1.5％和润湿剂1％‑5％，以上质量百分比总量为100％。本发明的可湿性粉剂对薄朔草、藜和密花香薷致病效果突出。

Description

一种极细链格孢菌株可湿性粉剂及其制备方法

技术领域

本发明属于除草剂的开发技术领域，具体地说，涉及一种极细链 格孢菌株可湿性粉剂及其制备方法。

背景技术

当今，农田杂草控制还是以化学除草剂为主体。随着农业现代化 水平的提高，全球范围内的除草剂使用量将继续增加，微生物除草剂 的开发应用比化学农药的开发存在更大的难度侵染活力至关重要，是 生物农药开发成功与否的关键。有望协调运用其他环境友好型防治技 术，构建田间杂草生物防治技术体系，从而有效替代部分高毒化学农 药，缓，其药效受外界环境影响很大，选择合适的剂型及载体助剂保 持菌剂的稳定性和解和减轻农业生产中长期和大量依赖化学除草剂 施用所造成的能源和环境问题。杂草生防菌应具备对靶标杂草强致病 力的同时，又得保证其稳定性。因此，市场需求开始面向广谱、高效、 低毒的新型除草剂的研制，发展生物除草技术已逐渐成为全球的共识。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种极细链格孢菌株可湿性粉剂及其制 备方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种极细链格孢菌株可湿 性粉剂，主要由以下质量百分比组分构成：HZ-1菌粉30％-40％，载 体45％-55％、保护剂3％-8％、分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％和润 湿剂1％-5％，以上质量百分比总量为100％。

进一步地，HZ-1菌粉由极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)HZ-1菌株 制备而成，由青海省农科院植保所有害生物防治综合实验室提供保存，已于 2016年01月11日保藏在中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11992。

进一步地，载体为高岭土、硅藻土、拉开粉、石灰石、炉渣、沙 子或黏土中的一种或几种。

进一步地，保护剂为腐殖酸、糊精、海藻酸钠或可溶性淀粉中的 一种或几种。

进一步地，分散剂为羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、 十二烷基硫酸钠、吐温或木质素磺酸钠中的一种或几种。

进一步地，稳定剂为膨润土、轻质碳酸钙或白炭黑中的一种或几 种。

进一步地，润湿剂为SDS或/和拉开粉。

本发明还公开了一种极细链格孢菌株可湿性粉剂的制备方法，包 括以下步骤：

步骤1、制备HZ-1菌粉；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉30％-40％， 载体45％-55％、保护剂3％-8％、分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％ 和润湿剂1％-5％，以上质量百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，制备得到极细链格孢菌株可湿性粉剂。

进一步地，步骤1中的制备HZ-1菌粉具体为：菌株HZ-1固态培 养时选用40mg/g的葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为 发酵底物，加入300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为 0.3mL/g；该菌株在底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢 子、菌丝体与固态基质的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状。

进一步地，步骤3中的粉碎的细度指标为99.5％通过200号筛目， 粉粒平均直径为25μm。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明的极细链格孢菌株可湿性粉剂对对薄朔草、藜和密花 香薷致病效果突出。

2)本发明的极细链格孢菌株可湿性粉剂有效替代部分高毒化学 农药，缓解和减轻农业生产中长期和大量依赖化学除草剂施用所造成 的能源和环境问题。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的 所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明 的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构 成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明HZ-1可湿性粉剂对冬葵、密花香薷、薄蒴草、野 燕麦、酸模叶蓼、萹蓄和藜的离体致病效果；其中，图(a)中1代 表不添加HZ-1可湿性粉剂对冬葵的影响，2-4代表添加HZ-1可湿性 粉剂对冬葵的影响；图(b)中1代表不添加HZ-1可湿性粉剂对密 花香薷的影响，2-4代表添加HZ-1可湿性粉剂对密花香薷的影响； 图(c)中不添加HZ-1可湿性粉剂对薄蒴草的影响，2-4代表添加 HZ-1可湿性粉剂对薄蒴草的影响；图(d)1中不添加HZ-1可湿性 粉剂对野燕麦的影响，2-4代表添加HZ-1可湿性粉剂对野燕麦的影 响；图(e)中1代表不添加HZ-1可湿性粉剂对酸模叶蓼的影响，2-4 代表添加HZ-1可湿性粉剂对酸模叶蓼的影响；图(f)中1代表不添 加HZ-1可湿性粉剂对萹蓄的影响，2-4代表添加HZ-1可湿性粉剂对萹蓄的影响；图(g)中1代表不添加HZ-1可湿性粉剂对藜的影响， 2-4代表添加HZ-1可湿性粉剂对藜的影响；

图2是本发明HZ-1可湿性粉剂对薄蒴草、藜、密花香薷、冬葵、 酸模叶蓼的盆栽防效；

图3是本发明本发明HZ-1可湿性粉剂对密花香薷、繁缕、藜、 灰藜的田间防效，其中，图(a)中1代表不添加HZ-1对密花香薷的 影响，2代表添加HZ-1对密花香薷的影响；图(b)代表1添加HZ-1 对繁缕的影响，2代表不添加HZ-1对繁缕的影响；图(c)中1代表 不添加HZ-1对藜的影响，2代表添加HZ-1对藜的影响；图(d)中 1代表不添加HZ-1对灰藜的影响，2代表添加HZ-1对灰藜的影响。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明 如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充 分理解并据以实施。

本发明公开了一种极细链格孢菌株可湿性粉剂，主要由以下质量 百分比组分构成：HZ-1菌粉30％-40％，载体45％-55％、保护剂3％-8％、 分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％和润湿剂1％-5％，以上质量百分 比总量为100％。

其中，HZ-1菌粉由极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)HZ-1菌 株制备而成，由青海省农科院植保所有害生物防治综合实验室提供保 存(4℃冰箱试管斜面保存)。

载体为高岭土、硅藻土、拉开粉、石灰石、炉渣、沙子或黏土中 的一种或几种。

保护剂为腐殖酸、糊精、海藻酸钠或可溶性淀粉中的一种或几种。

分散剂为羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、十二烷基 硫酸钠(SDS，Sodium dodecyl sulfate)、吐温或木质素磺酸钠中的 一种或几种。

稳定剂为膨润土、轻质碳酸钙或白炭黑中的一种或几种。

润湿剂为SDS或/和拉开粉。

本发明还提供一种极细链格孢菌株可湿性粉剂的制备方法，包括 以下步骤：

步骤1、制备HZ-1菌粉：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的 葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入 300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在 底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质 的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉30％-40％， 载体45％-55％、保护剂3％-8％、分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％ 和润湿剂1％-5％，以上质量百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径 为25μm，制成可湿性粉剂。

实施例1

步骤1、制备HZ-1菌粉：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的 葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入 300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在 底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质 的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉35％，载体 50％、保护剂5％、分散剂6％、稳定剂1％和润湿剂3％，以上质量 百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径 为25μm，制成可湿性粉剂。

实施例2

步骤1、制备HZ-1菌粉：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的 葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入 300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在 底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质 的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉30％，载体 55％、保护剂3％、分散剂8％、稳定剂0.5％和润湿剂3.5％，以上质 量百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径 为25μm，制成可湿性粉剂。

实施例3

步骤1、制备HZ-1菌粉：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的 葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入 300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在 底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质 的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉36.5％，载体 45％、保护剂8％、分散剂4％、稳定剂1.5％和润湿剂5％，以上质量 百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径 为25μm，制成可湿性粉剂。

实施例4

步骤1、制备HZ-1菌粉：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的 葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入 300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在 底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质 的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉40％，载体47％、保护剂5％、分散剂6％、稳定剂1％和润湿剂1％，以上质量 百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高 速粉碎机中粉碎，细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径 为25μm，制成可湿性粉剂。

下面结合具体的实验数据来说明本发明的技术效果：

一、载体、保护剂、分散剂、稳定剂和润湿剂对菌株HZ-1的影 响

将所有载体按照2％的比例分别加入对应最适培养基，将8mm直径 的菌饼置于平板培养，测菌落直径和菌落数。菌株HZ-1在含不同载 体的培养基上，菌落直径和菌落LgCUF结果如下：

表1HZ-1在不同载体上菌落数量及直径记录

由表1可以看出，HZ-1在各种载体及助剂上生长状态总体较好， 且多数相差不大。

二、HZ-1可湿性粉剂对杂草离体叶片的致病性

采集新鲜的杂草叶片，叶表用无菌水清洗后自然晾干，将叶片正 放于垫有无菌滤纸和竹签的培养皿中，加无菌水使滤纸浸湿；将制备 的HZ-1的可湿性粉剂溶解，吸一滴溶解后的可湿性粉剂进行离体叶 片接种试验，以只接种清水的叶片为对照，每处理重复三次。置于 25℃光照培养箱中保湿培养，观察叶片发病情况。供试杂草叶片为： 薄蒴草、藜、野燕麦、萹蓄、密花香薷、酸模叶蓼、冬葵。

极细链格孢菌株可湿性粉剂溶解后，接种到薄蒴草、藜、野燕麦、 萹蓄、密花香薷、酸模叶蓼、冬葵离体叶片上，各种杂草叶片可见不 同程度的病斑，并逐渐开始向四周扩展，接种7d后，酸模叶蓼、藜、 萹蓄叶片失绿、发黄，卷曲；薄蒴草叶片黄化，褐色斑纹逐渐扩展；野燕麦、密花香薷和冬葵叶片变褐、开始发黑腐烂，叶片上出现大量 白色菌丝，90％叶片腐烂坏死。极细链格孢菌株可湿性粉剂对不同杂 草离体叶片敏感性表现为：冬葵＞密花香薷＞薄蒴草＞野燕麦＞酸模 叶蓼＞萹蓄＞藜(如图1)。

三、HZ-1可湿性粉剂对盆栽杂草的致病效果

将田间生长7-12叶期，叶色正常的薄蒴草、藜、密花香薷、冬 葵、酸模叶蓼、萹蓄移栽于花盆(Φ＝15cm)中，于实验室内培养； 将HZ-1可湿性粉剂溶解后喷雾接种到移栽的健康杂草植株上。以接 种清水的植株作为空白对照，设3次重复。接种后的杂草植株置于室温，7d后调查杂草发病程度，称鲜重，计算发病率、鲜重效，所有 数据采用DPS统计软件进行差异显著性分析。同时将HZ-1可湿性 粉剂溶解后喷雾接种到非耕地4-6叶期杂草植株上，观察其控制效果。

表2极细链格孢菌株可湿性粉剂对不同杂草致病力

注:同列不同小写字母表示在0.05水平上差异显著。

如图2所示，喷施极细链格孢菌株可湿性粉剂后，除萹蓄之外， 其余5种杂草均表现出受害症状，不同程度的出现萎蔫，褪绿变黄， 甚至枯萎症状。结合发病率、鲜重效综合分析(见表2)，HZ-1可 湿性粉剂对薄朔草、藜和密花香薷致病效果突出，对冬葵和酸模叶蓼次之，对萹蓄无效。表2结果显示，接种后7d，HZ-1可湿性粉剂对 藜的发病率和鲜重效分别是63.2％和59.0％，对薄蒴草和密花香薷的 发病率和鲜重效分别是55.1％、53.5％和55.7％、50.6％。因此，HZ-1 可作为防除薄朔草、藜和密花香薷等农田杂草的生物除草剂。

同时将HZ-1可湿性粉剂溶解后喷雾接种到非耕地4-6叶期杂草 植株上，发现该菌株对非耕地田密花香薷、繁缕、藜、灰藜具有除草 活性，其中，对繁缕和灰藜致病效果突出(图3)。

将HZ-1菌粉与筛选出的适宜载体、助剂按照一定比例混合，初 步制备了HZ-1可湿性粉剂，并进行盆栽除草试验。可湿性粉剂对薄 朔草、藜和密花香薷致病效果突出。有望协调运用其他环境友好型防 治技术，构建田间杂草生物防治技术体系，从而有效替代部分高毒化 学农药，缓解和减轻农业生产中长期和大量依赖化学除草剂施用所造 成的能源和环境问题。杂草生防菌应具备对靶标杂草强致病力的同时， 又得保证其稳定性。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应 当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例 的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发 明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而 本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在 发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，主要由以下质量百分比组分构成：HZ-1菌粉30％-40％，载体45％-55％、保护剂3％-8％、分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％和润湿剂1％-5％，以上质量百分比总量为100％。

2.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，HZ-1菌粉由极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)HZ-1菌株制备而成，由青海省农科院植保所有害生物防治综合实验室提供保存，已于2016年01月11日保藏在中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11992。

3.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，载体为高岭土、硅藻土、拉开粉、石灰石、炉渣、沙子或黏土中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，保护剂为腐殖酸、糊精、海藻酸钠或可溶性淀粉中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，分散剂为羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠、吐温或木质素磺酸钠中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，稳定剂为膨润土、轻质碳酸钙或白炭黑中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的极细链格孢菌株可湿性粉剂，其特征在于，润湿剂为SDS或/和拉开粉。

8.一种极细链格孢菌株可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、制备HZ-1菌粉；

步骤2、按照质量百分比称量以下组分：HZ-1菌粉30％-40％，载体45％-55％、保护剂3％-8％、分散剂4％-8％、稳定剂0.5％-1.5％和润湿剂1％-5％，以上质量百分比总量为100％；

步骤3、将称量好的各组分进行初步磨细、混匀，然后于小型高速粉碎机中粉碎，制备得到极细链格孢菌株可湿性粉剂。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤1中的制备HZ-1菌粉具体为：菌株HZ-1固态培养时选用40mg/g的葡萄糖为碳源，50mg/g的蛋白胨为氮源，麦麸为发酵底物，加入300mg/g蒸馏水；培养温度为24.3℃，接种量为0.3mL/g；该菌株在底物基质的培养基中发酵后，产生大量白色菌丝体；培养至充分产孢，将其混匀，粉碎；获得的菌粉是发酵产生的孢子、菌丝体与固态基质的混合物，颗粒大小均匀，细腻，呈粉状。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤3中的粉碎的细度指标为99.5％通过200号筛目，粉粒平均直径为25μm。