CN107952082A - 一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物及其构建方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物。这类药物组合物通过将具有共轭结构的天然疏水小分子共价偶联于多糖骨架形成抗血管生成药物，与经共轭结构修饰的线粒体损伤肽衍生物以及阿霉素物理混合，借助多种超分子驱动力组装成具有纳米尺寸的药物组合物。该药物组合物具有同时调控肿瘤微环境和肿瘤细胞，逆转肿瘤细胞抗凋亡的特性，最大化阿霉素的抗肿瘤效果。此外，具有阿霉素高荷载、高稳定性、强靶向性的优势。该基于阿霉素的多功能协同药物组合物与相应的药用辅料配伍可制备成用于注射、口服或外用的抗肿瘤药物制剂。本发明通过多组分药物超分子组合构建的方法制备，操作简单及容易实现工业化生产。

Description

一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物及其构建方法
技术领域
本发明属于药物制剂和超分子化学领域，涉及一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物及其构建方法。
背景技术
传统化疗药物阿霉素临床应用时常面临疗效差、毒副作用大的窘境，其中单独应用阿霉素疗效差主要与肿瘤生理复杂性有关。肿瘤细胞能持续产生增殖信号、抗生长抑制信号，启动抵抗凋亡机制，同时诱导血管新生和促进组织侵袭和转移等(Hanahan D，Weinberg R A.The hallmarks of cancer.[J].Cell，2000，100(1)：57.)。肿瘤抗凋亡主要与线粒体有关。线粒体本是“自杀式武器库”，但是肿瘤细胞线粒体结构和功能发生变化，无法及时释放凋亡信号，不能启动细胞死亡程序。同时，肿瘤细胞诱导血管新生，依靠丰富血管提供生长所需氧气和养分，并借助血管新生侵袭和转移。因此，尽管阿霉素可通过损伤DNA等途径诱导肿瘤细胞的凋亡，但因肿瘤线粒体的抵抗凋亡及充足养分供应使得肿瘤细胞容易耐受阿霉素。为了多种途径更全面地遏制肿瘤发生发展，将不同作用机制的多种药物联用以产生协同治疗效果的方法成为新型而有效的肿瘤治疗手段。
阿霉素毒副作用大，主要与其非靶向分布有关。临床上应用阿霉素的盐酸盐，静脉注射后全身分布，因而毒副作用较强，其中心肾毒性尤为显著。纳米药物传递技术应运而生，不仅能解决难溶性药物溶解性问题，更能达到靶向精准递药、减少脱靶效应、提高药物靶区蓄积浓度、增强疗效和降低毒副作用的目的。目前，将阿霉素共价偶联于载体，或者物理包载制成纳米制剂能改善阿霉素溶解性、靶向性，提高生物利用度等，但是共价偶联常面临合成工艺挑战、药理活性基团改变以及释药困难等问题；而脂质体、纳米粒等物理包载同样面临着制备工艺复杂、载药量低、药物易渗漏等问题。
为了应用上述多功能药物联用策略以增强阿霉素抗瘤效果，同时解决阿霉素纳米制剂存在的问题，本发明提出了一种全新的多组分药物超分子组合构建方式。
肝素是生命有机体的重要组分，研究表明，肝素具有良好的生物相容性、生物可降解性，同时具有抑制肿瘤血管新生的生物活性；肝素羧基经疏水衍生化后，其抗血管生成活性大大提高，而出血风险则大大降低。KLAKLAKKLAKLAK(KLA)是正电性的线粒体损伤肽，其选择性地作用于线粒体膜，使线粒体膜电位去极化，进而不可逆地触发线粒体依赖性的细胞凋亡(Han K，Lei Q，Wang S，et al.Dual-Stage-Light-Guided Tumor Inhibition byMitochondria-Targeted Photodynamic Therapy[J].Advanced Functional Materials，2015，25(20)：2961-2971.)。如果将上述两种药物与阿霉素联合应用，则肝素及其衍生物抑制肿瘤血管新生，切断肿瘤养分供应，减缓肿瘤生长；KLA损伤肿瘤细胞线粒体，启动细胞凋亡“开关”；加之阿霉素嵌入肿瘤细胞DNA抑制核酸合成来抑制肿瘤细胞增殖，三管齐下全面遏制肿瘤的发生发展，阻断肿瘤逃避化疗的多条通路，最终增强阿霉素的抗瘤效果。
阿霉素是具有平面共轭结构的疏水性抗肿瘤药物。阿霉素与DNA具有天然的亲和性，这种亲和性主要来源于阿霉素与DNA碱基对间的π-π相互作用。根据仿生策略，基于DNA的结构，本发明精心设计了肝素的类DNA衍生物。肝素骨架上具有大量羧基，提供了多种多样的衍生可能性。白杨素、姜黄素、槲皮素、黄芩素、陈皮素、葛根素等是疏水性天然产物，具有广泛的药理活性，如抗肿瘤、抗炎等，同时结构上均具有多环共轭平面结构，与阿霉素存在π-π相互作用。肝素经这类化合物共价修饰，可形成与阿霉素存在亲和性的两亲性物质，进而以这种亲和力作为载药驱动力提高阿霉素负载量。改性后肝素衍生物不仅成为阿霉素的高效载体，其本身的抗血管新生活性亦显著提高，出血风险降低，成为一种更优良的抗血管新生药物。然后，为了使KLA与上述两种药物进行超分子组合构建形成稳定纳米复合物，本发明首次将KLA衍生成含共轭结构的两亲性肽段。共轭结构的引入使得KLA肽与阿霉素、肝素衍生物产生相互作用，不仅能增强KLA肽的稳定吸附，还能提供额外的π-π相互作用进一步增强阿霉素的负载量。依据超分子化学理论，在阿霉素的“引发”下，肝素衍生物和KLA衍生肽的疏水部分与阿霉素在疏水和π-π相互作用的驱动下自发聚集，而带异性电荷的肝素衍生物与KLA衍生肽的亲水部分在静电作用下进一步结合。疏水作用、π-π作用、静电作用这三种作用力协同驱动药物组装成纳米级复合物；同时作为物理交联力，将纳米粒的核和壳层分别紧密交联，导致纳米粒的粒径大幅下降，有效控制于50～500nm，从而充分借助EPR效应，靶向精准蓄积于肿瘤组织，减少非靶区分布，降低阿霉素的全身毒副作用；还使阿霉素稳定包裹在内核中，减轻了递送过程中药物渗漏问题；同时物理交联赋与纳米粒良好的稳定性，保证贮存，甚至体内穿透各种生理屏障时结构完整性。
综上所述，本发明将抗血管新生、线粒体损伤与传统化疗结合起来，同时调控肿瘤微环境和肿瘤细胞，逆转肿瘤细胞抗凋亡机制，最大化抗肿瘤效果。其优势在于：(1)本发明通过宏观层面上肿瘤微环境及肿瘤细胞的双重调控，以及微观层面上肿瘤细胞线粒体和细胞核的双重损伤来最大化阿霉素的抗肿瘤效果，为临床上解决阿霉素疗效差提供了治疗新策略。该纳米药物组合物通过肝素衍生物抑制肿瘤微环境中血管新生，一方面切断肿瘤细胞的养分供应，减缓肿瘤细胞的生长，一方面阻断其迁移和逃逸，将肿瘤细胞阻滞于癌巢中，有助于随后阿霉素和线粒体损伤肽协同杀伤更多的肿瘤细胞；线粒体损伤肽启动肿瘤细胞的凋亡级联反应，辅助阿霉素最大化杀伤肿瘤细胞。此外，该协同药物组合物在应用时可以降低阿霉素给药剂量或给药频次来获得同等甚至更好的治疗效果，从而降低阿霉素的毒副作用。(2)本发明将阿霉素以纳米药物组合物的剂型应用，解决了其水溶性及稳定性问题，尤其是体内分布性问题。水溶性盐酸阿霉素直接静脉注射时，药物全身分布，损伤正常脏器。而将疏水性阿霉素置于纳米粒的微储库中，不仅避免了药物在血液循环中被降解失活，而且可以充分借助纳米药物的剂型优势，靶向蓄积于肿瘤组织，进一步降低其全身毒副作用。(3)本发明显著提高了阿霉素的负载量。目前一般阿霉素纳米制剂进行剂型设计时未考虑阿霉素结构特殊性，存在载药量低，载体利用率低，药物易渗漏等问题。本发明依据阿霉素的结构进行肝素衍生物和KLA肽衍生物的仿生设计，借助π-π相互作用作为载药驱动力，驱使大量阿霉素“主动”载入纳米粒的内核，使得最终制剂载药量最高达20％，比一般阿霉素纳米制剂载药量提高了两至三倍。值得注意的是，本发明所用的阿霉素载体肝素衍生物及KLA肽衍生物本身具有药理活性，实现了载体100％利用率。同时，阿霉素在内核中与肝素衍生物及KLA肽衍生物的疏水部分依靠π-π作用交联得以稳定；而亲水层依靠肝素衍生物和线粒体损伤肽衍生物的静电作用交联得更为紧密，足以抵御体内各种生理屏障的干扰而保持原有结构，对阿霉素形成二级保护，从而避免了阿霉素制剂药物易渗漏的问题，保证更多的药物可以到达靶部位发挥作用。(4)该阿霉素复合纳米制剂中各药物剂量灵活可调，适合多种肿瘤治疗，应用范围更为广泛。本发明可以从不同肿瘤的生理特性及治疗目的出发，灵活调节肝素衍生物、KLA肽衍生物及阿霉素的比例，进而针对特定肿瘤的治疗，达到最佳的治疗效果。(5)本发明主要依据物理混合方式进行多组分药物超分子组合构建，未改变原有药物药理活性基团及特定构象，从根本上避免了化学偶联药物可能造成的药物失活问题。同时，本发明制备工艺简单，重现性好，且避免了复杂的合成工艺，也减少了有机溶剂使用、不可控杂质的引入，适合工业化生产。(6)本发明采用了一种简单且高效的合成策略进行肝素衍生物的合成，拓展了含酚羟基的共轭疏水小分子的衍生可能性。不仅解决了酚羟基反应活性差的问题，也避免了羧酸酚酯不稳定的问题。一般而言，酚羟基活性差，这大大限制了含酚羟基共轭疏水小分子化合物的优化及应用。为此，本发明将酚羟基活化成反应活性更高的醇羟基或氨基，以通过温和的酯化或酰胺反应制备肝素衍生物，避免了酚羟基直接反应活性低、效率差、形成的羧酸酚酯稳定性差的问题。采用这种合成策略制备的衍生物取代度高达30％。此外，将酚羟基衍生成醇羟基或氨基的反应简单、产率高，亦可拓展应用于其他酚羟基酯化或酰胺化反应来提高反应效率。
发明内容
本发明的目的是针对肿瘤生理的复杂性，提供一种全新的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，该组合物由抗血管新生的肝素衍生物，衍生化线粒体损伤肽KLA和化疗药物阿霉素组成。一方面，肝素衍生物调控肿瘤微环境，通过抑制生长因子VEGF，FGF-2等与肿瘤组织血管内皮细胞或细胞外间质上的受体结合，减少内皮细胞的增殖和迁移，从而抑制肿瘤血管新生，切断肿瘤能量供应，减缓肿瘤生长，同时抑制肿瘤侵袭和转移。另一方面，KLA肽衍生物和阿霉素直接靶向损伤肿瘤细胞线粒体和细胞核，双管齐下逆转肿瘤细胞抗凋亡机制，触发肿瘤细胞死亡程序。
本发明的另一目的是针对上述多功能抗肿瘤策略，提供一种全新的药物组合物的超分子构建思路。利用仿生策略，根据阿霉素与DNA的天然亲和机理(π-π相互作用)，构建了类DNA的肝素衍生物。一方面提高了肝素本身的抗肿瘤血管新生活性，降低了肝素的出血风险，使其自身成为一种良好的抗血管新生药物，另一方面类DNA的结构特性使其能与阿霉素具有较好的亲和性，进而提高阿霉素的载药量，解决目前阿霉素纳米制剂普遍存在的载药量低的问题。另外，设计构建了同样具有共轭结构疏水氨基酸改性的线粒体损伤肽KLA衍生物，以进一步增加阿霉素的负载量，同时增强肽与肝素衍生物的相互作用，解决物理吸附肽易脱落的问题。在水性环境中，肝素衍生物、衍生肽、阿霉素在静电作用、疏水作用、π-π相互作用的协同驱动下，自组装形成纳米药物复合物。更重要的是，三种作用力分别作为物理交联力将纳米结构的核和壳层紧密交联、压缩，使得纳米粒的粒径更小，稳定性良好。
本发明的另一目的是提供上述基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备方法。
本发明的最后一个目的是提供上述基于阿霉素的多功能协同药物组合物在抗肿瘤治疗中的应用。
为了达到上述目的，本发明提供一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物，该组合物首先是在多糖骨架的羧基上，通过化学偶联的方法，接枝含共轭结构的疏水小分子，形成两亲性小分子-多糖聚合物。然后，对线粒体损伤肽KLA进行衍生化，共价偶联含共轭结构的疏水氨基酸。通过简单物理混合的方式，结合阿霉素，形成基于阿霉素的多功能协同药物组合物。该药物组合物避免了繁杂的化学合成，制备方法简单，重现性好；各药物的比例灵活可调；各药物依靠多种作用力紧密结合，能抵御体内复杂的生理屏障，稳定性更好；且具有适宜的粒度，充分利用EPR效应蓄积于肿瘤组织，协同发挥抗肿瘤作用。
所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其中多糖选自未分级肝素、低分子量肝素和脱硫酸化肝素。
所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其中含共轭结构的疏水小分子选自白杨素、姜黄素、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、陈皮素、葛根素、甘草素、大豆素、芹菜素、大黄素、白藜芦醇。
所述的线粒体损伤肽序列为KLAKLAKKLAKLAK，含共轭结构的疏水氨基酸包括LFF、LYY、LWW、IFF、IYY、IWW；疏水氨基酸与线粒体损伤肽通过2～3个G的甘桥连接。
所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备方法，其中共轭结构的天然疏水小分子通过连接臂共价修饰到负电性的多糖骨架的方法如下：
将具有共轭结构的天然疏水小分子溶于适当有机溶剂，将两端分别具有溴和醇羟基或氨基的连接臂与天然疏水小分子发生亲核取代反应，得到酚羟基活化为醇羟基或氨基的疏水小分子中间体1或4。将负电性的肝素或其衍生物溶于反应溶剂中，加入适当羧基活化剂活化主链上的部分羧基，再加入一端游离羟基或氨基的疏水小分子中间体1或4，两者发生酯化或酰胺反应，即得经共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物。
所述的制备方法中，适当有机溶剂指丙酮、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合溶剂。
所述的制备方法中，连接臂指碳原子数为2～12的亚烷基溴醇或2～6的亚烷基溴胺及其氢溴酸盐或盐酸盐。
所述的制备方法中，反应溶剂指甲酰胺，或甲酰胺与N，N-二甲基甲酰胺、甲酰胺与二甲基亚砜的混合溶剂。
所述的制备方法中，羧基活化剂是指N，N’-羰基二咪唑、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺和N，N-二甲基-4-吡啶胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑。
所述的共轭结构的天然疏水小分子共价修饰的负电性多糖，可单独作为良好的抗血管新生药物，也可物理包载其他疏水药理活性分子制得聚合物纳米粒。所述的疏水药理活性分子选自抗肿瘤药物阿霉素。
该基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备方法操作步骤如下：将共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物、衍生化肽、阿霉素混合制备药物组合物方法有四种，(1)可先将共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物、衍生化肽分别与水按一定比例混合，再将衍生化肽溶液滴入共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物溶液，充分混合后，再加入适当有机溶剂溶解的阿霉素，经超声处理，透析法除去有机溶剂，即制得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。(2)先将共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物、衍生化肽以粉末状态充分混合后，以一定量水溶解搅拌，再加入适当有机溶剂溶解的阿霉素，经超声处理，透析除去有机溶剂，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。(3)先将共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物、衍生化肽分别与水按一定比例混合，再将衍生化肽溶液滴入共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物溶液，充分混合后，再加入适当有机溶剂溶解的阿霉素，经超声处理，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，即制得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。(4)先将共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物、衍生化肽以粉末状态充分混合后，以一定量水溶解搅拌，再加入适当有机溶剂溶解的阿霉素，经超声处理，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。得到的基于阿霉素的多功能协同药物组合物可直接应用，也可经冷冻干燥或喷雾干燥制成固体制剂。
所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物制备方法中(1)、(2)、(3)、(4)所述的有机溶剂指N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、乙醇。
具体方案如下：
在含羧基的肝素及其衍生物的骨架分子上引入含有共轭结构的天然疏水小分子，使其具有两亲性，一方面提高抗血管生成活性，一方面降低出血风险，使其成为优良的抗血管生成药物。其还能通过物理方式与衍生化线粒体损伤肽KLA以及阿霉素混合形成基于阿霉素的多功能协同药物组合物。该基于阿霉素的多功能协同药物组合物的粒径在50～500nm可控，表面光滑，均匀度好，再分散性好。由多糖分子形成的高度亲水性外壳，不仅能遮蔽KLA衍生肽的亲水性部分，避免KLA衍生肽被体内蛋白酶降解，同时还能避免纳米药物组合物被网状内皮系统的吞噬，延长纳米药物组合物的体内循环时间，增加药物在靶部位的蓄积浓度。同时，由三组分之间的静电作用、疏水作用、π-π相互作用形成物理交联力，分别紧密交联纳米药物组合物的核和壳层，使得纳米药物组合物的结构压缩，粒径较小，稳定性提高。该基于阿霉素的多功能协同药物组合物单独或与药剂学可接受辅料配伍用于注射、口服、外用。
所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物的具体制备方法如下：
一.含羧基的肝素及其衍生物的骨架分子上引入含有共轭结构的天然疏水小分子
(1)具有共轭结构的天然疏水小分子的活化
①将具有共轭结构的天然疏水小分子活化为末端为醇羟基的化合物
将具有共轭结构的天然疏水小分子溶于适当有机溶剂，加入适量活化剂，滴加适量连接臂，控制条件至反应完全，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干，得到一端游离羟基的共轭化合物中间体1。
合成路线如下：
(R1-OH：白杨素、姜黄素、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、陈皮素、葛根素、甘草素、大豆素、芹菜素、大黄素、白藜芦醇；Br-R2-OH为碳原子数为2～12的亚烷基溴醇)
②将具有共轭结构的天然疏水小分子活化为末端为氨基的化合物
a.将含有游离氨基的溴化物连接臂溶于适当有机溶剂，加入适量氨基保护剂，随后加入适量的活化剂和适量三乙胺，控制反应条件至反应完全，分别用酸性洗液、碱性洗液和饱和氯化钠溶液洗涤或通过硅胶柱色谱分离，旋干有机溶剂后得到无色粘稠液体，即为中间体2。
合成路线如下：
(Boc-R3：二碳酸二叔丁酯、氯甲酸苄酯；Br-R2-NH2：碳原子数为2-6的亚烷基溴胺；活化剂：N，N-二甲基-4-吡啶胺、4-吡咯烷基吡啶、1-羟基苯并三唑)
b.将具有共轭结构的天然疏水小分子溶于适当有机溶剂，加入适量活化剂，再加入适量中间体2，控制条件至反应完全，加入大量水使沉淀析出，适当有机溶剂萃取、洗涤、干燥，旋干后得到中间体3。
合成路线如下：
(R1-OH：白杨素、姜黄素、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、陈皮素、葛根素、甘草素、大豆素、芹菜素、大黄素、白藜芦醇；活化剂：碳酸钾、碳酸钠)
c.将中间体3溶于适当有机溶剂，加入适量氨基脱保护剂，控制条件至反应完全，加入沉淀剂，所得沉淀洗涤，旋干或挥干，得到中间体4。
合成路线如下：
(氨基脱保护剂：三氟乙酸、盐酸、氢溴酸中一种或几种的混合体系)
(2)将负电性的肝素或其衍生物溶于反应溶剂中，在惰性气体保护、冰浴条件下，加入适量羧基活化剂，再加入一定比例的一端游离羟基或氨基的共轭化合物中间体1或4，控制反应条件至反应完全，用适当沉淀剂沉淀，过滤得沉淀物，复溶，超声，透析，干燥，即得经共轭疏水小分子修饰的多糖衍生物；根据共轭疏水小分子对光的敏感性，选择是否避光反应。
合成路线如下：
(R3-COOH：未分级肝素、低分子量肝素、脱硫酸化肝素；羧基活化剂指N，N’-羰基二咪唑、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺和N，N-二甲基-4-吡啶胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑)
上述步骤①中所述的适当有机溶剂为丙酮、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合体系；所述的适量活化剂指活化剂与疏水共轭小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的适量连接臂指连接臂与疏水小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的反应条件指35～100℃加热反应。
上述步骤a中所述的适当有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯；所述的适量氨基保护剂与含有游离氨基的溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶1；所述的适量活化剂与溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶5；所述的适量三乙胺与溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶1；所述的酸性洗液为0.01～0.5mol/L的稀盐酸或稀硫酸；所述的碱性洗液为碳酸氢钠饱和溶液；所述的反应条件为10～30℃。
上述步骤b中所述的适当有机溶剂为甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合体系；所述的适量中间体2与疏水共轭小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的适量活化剂与疏水共轭小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的反应条件为35～100℃；所述的用于萃取的有机溶剂为乙酸乙酯。
上述步骤c中所述的适当溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、二氧六环；所述的反应条件为10～30℃；所述的适量氨基脱保护剂与中间体3的摩尔比为5～50∶1；所述的沉淀剂为乙醚或无水乙醚。
上述步骤(2)中所述的反应溶剂为甲酰胺，N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合溶剂；所述的适量羧基活化剂指羧基活化剂与肝素羧基的摩尔比为1～10∶1；所述的一定比例的一端游离羟基或氨基的共轭化合物中间体1或4指中间体1或4与肝素羧基的摩尔比为1～8∶1；所述的控制反应为冰浴条件下滴加羧基活化剂，活化羧基0.5～4h后，再加入一端游离羟基或氨基的共轭化合物中间体1或4，室温反应6～72h；所述的适当沉淀剂为冰丙酮，冰乙醇；所述的干燥包括真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
二.基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备
工艺I：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与水按重量比3～50∶1000的比例溶解，多肽与水按重量比1～50∶1000的比例溶解，将多肽溶液缓慢滴加到多糖溶液中，室温搅拌0.5～2h，滴加一定比例溶于适量有机溶剂的阿霉素，超声20～40min，透析8～72h，0.8μm微孔滤膜过滤，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺II：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与改性线粒体损伤肽按重量比1∶50～50∶1比例混合，用蒸馏水溶解，室温搅拌0.5～2h，滴加一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，透析8～72h，0.8μm微孔滤膜过滤，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺III：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与水按重量比3～50∶1000的比例溶解，改性线粒体损伤肽与水按重量比1～50∶1000的比例溶解，将多肽溶液缓慢滴加到多糖溶液中，室温搅拌0.5～2h，加入一定比例溶于适当有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺IV：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与改性线粒体损伤肽按重量比1∶50～50∶1比例混合，用蒸馏水溶解，室温搅拌0.5～2h，滴加一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺I、II、III、IV所述的一定比例指脱盐阿霉素与衍生化多糖和衍生化肽质量和的比例为1∶50～50∶1；所述的适量有机溶剂指N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、乙醇，使得阿霉素浓度为0.5～50mg/mL。
制备得到的基于阿霉素的多功能协同药物组合物可直接应用，也可通过冷冻干燥或喷雾干燥制成固体制剂。固体产品与水按3～50∶1000的比例溶解，得到基于阿霉素的多功能协同药物组合物溶液，粒径为50～500nm可控。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明利用简单的亲核反应，将含共轭结构的天然疏水小分子活化为含醇羟基或氨基的物质，进而通过温和的酯化反应或酰胺反应偶联于肝素主链上，反应效率高，制备过程简单，容易实现工业化。同时本发明提供了一种将酚羟基衍生成醇羟基或氨基的一般方法，解决了酚羟基亲核性差，反应活性低的问题，扩大了含酚羟基的共轭疏水小分子进一步衍生和优化的可能性，也避免了酚羟基形成羧酸酚酯稳定性差的问题。
(2)本发明针对现有阿霉素纳米制剂普遍存在的载药量低的问题，利用仿生策略选取含共轭结构的疏水小分子对肝素进行衍生形成类DNA的物质，使得阿霉素借助π-π相互作用和疏水相互作用的驱动主动载入纳米粒的疏水内核，显著提高了阿霉素的载药量。此外，借助和纳米粒内核之间的π-π相互作用和疏水相互作用阿霉素得以稳定，保证了阿霉素制剂贮存和体内递送过程的稳定性。从剂型角度出发，肝素形成的亲水遮蔽层有效保护阿霉素免受体内酶的降解，同时逃逸网状内皮系统的吞噬，延长其体内循环时间，从而使更多的药物有机会蓄积于肿瘤部位发挥作用。对于肝素而言，衍生化不仅使其成为优良的阿霉素载体，更使其抗血管新生活性大大提高，出血风险降低，成为优于肝素的抗血管新生药物。
(3)本发明将KLA衍生化，使其能够与衍生化肝素、阿霉素通过静电作用、疏水作用和π-π相互作用的协同进行超分子组合构建，相比于仅通过单一相互作用形成的复合物具有更好的稳定性，保证在贮存以及体内穿透各种生理屏障的结构完整性。同时，KLA经共轭衍生化后，将提供额外的π-π相互作用进一步提高阿霉素的荷载量。
(4)肝素衍生物，KLA肽衍生物和阿霉素通过超分子作用力协同组装形成的复合物粒径较小，能借助多种作用力将药物组合物的核和壳层分别压缩得更为致密，使得其能充分利用EPR效应，更多地蓄积在肿瘤部位发挥作用，同时减少对正常脏器的损害，达到增效减毒的效果。
(5)本发明充分考虑到肿瘤生理的复杂性，采用了将抗血管新生、线粒体靶向损伤、传统化疗有机结合的多途径全方位抗肿瘤策略，相比于单一途径的抗肿瘤治疗，效果更加显著。本发明提供的基于阿霉素的多功能协同药物组合物通过肝素衍生物抑制肿瘤微环境中的血管新生，切断肿瘤养分供应，减缓肿瘤生长，同时阻断肿瘤细胞侵袭和迁移途径，将肿瘤细胞阻滞于癌巢中有待消灭；线粒体损伤肽KLA衍生物和化疗药物阿霉素协同损伤肿瘤细胞的线粒体和细胞核，最大程度逆转肿瘤细胞抗凋亡，更多地杀死肿瘤细胞，从而遏制肿瘤的进程。并且能通过降低给药频次和给药剂量达到相同甚至更好的治疗效果，既降低了毒副作用，又能提高患者的顺应性。
(6)本发明提供的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
(7)本发明提供的基于阿霉素的多功能协同药物组合物可与其他药剂学可接受辅料配伍，制备成注射、口服、外用等多途径给药的剂型，具有良好的应用空间。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明加以进一步说明，但下述实施例并不限制本专利的权利范围。
实施例1：姜黄素-未分级肝素聚合物的合成
称取6-溴己胺盐酸盐适量于茄形瓶中，加入二氯甲烷溶解，随后加入二碳酸二叔丁酯。二碳酸二叔丁酯与6-溴己胺盐酸盐的摩尔比为1.5∶1。另称取1-羟基苯并三唑、三乙胺，溶于适量二氯甲烷，缓慢滴入上述茄形瓶中。1-羟基苯并三唑与6-溴己胺盐酸盐的摩尔比为1∶5，三乙胺与6-溴己胺氢溴酸盐的摩尔比为1.05∶1。室温反应40min后，分别用0.5mol/L稀硫酸、碳酸氢钠饱和溶液和饱和氯化钠溶液洗涤三次。洗涤完毕后，将有机相用无水硫酸钠干燥2h。抽滤，滤液旋蒸除去二氯甲烷，得中间体1。
称取姜黄素和5倍摩尔量的碳酸钾于茄形瓶，加入N，N-二甲基甲酰胺，50℃加热回流60min。中间体1溶于N，N-二甲基甲酰胺，逐滴加入上述茄形瓶，50℃加热回流下继续反应。姜黄素与中间体1的摩尔比为1∶1.05。5h后，加入大量水使产物析出。乙酸乙酯多次萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥2h，抽滤，旋蒸除去乙酸乙酯，得中间体2。
称取中间体2装入茄形瓶，加入二氯甲烷作溶剂，按三氟乙酸与中间体2的摩尔比为20∶1逐滴加入三氟乙酸，继续室温搅拌40min。反应结束后，将反应液倾入乙醚中，冰浴30min沉淀产物。离心(4000rpm，2min)得沉淀，无水乙醚洗涤三次，沉淀物转移至圆底烧瓶，旋蒸除去残留乙醚，得到中间体3。
称取适量未分级肝素溶于甲酰胺，加热至60℃完全溶解后，冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑与未分级肝素羧基的摩尔比为2∶2∶1。冰浴活化60min后，将中间体3的二甲基亚砜溶液加入活化的未分级肝素溶液中，加入摩尔量5倍于中间体3的三乙胺，室温反应24h。反应结束后，离心除去不溶物，上清液倾入5倍体积的冰丙酮。蒸馏水复溶，透析48h，0.8μm微孔滤膜，喷雾干燥，即得姜黄素-未分级肝素聚合物。反应全程避光。
实施例2：姜黄素-低分子量肝素聚合物的合成
称取姜黄素适量置于茄型瓶中，加入适量丙酮溶解，姜黄素的摩尔浓度为0.05mmol/mL，加入1.1摩尔量的碳酸钠，再逐滴加入1.05摩尔量的3-溴-1-丙醇，60℃加热回流反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的姜黄素衍生物中间体1。称取适量低分子量肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解2h，氮气保护、冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺活化，低分子量肝素羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1∶2∶2。冰浴活化45min后，将中间体1，N，N二甲基-4-吡啶胺的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的低分子量肝素溶液中，室温反应24h。中间体1与低分子量肝素羧基的摩尔比为4∶1。N，N二甲基-4-吡啶胺的质量为中间体1与低分子量肝素质量和的10％。反应结束后，加入3倍体积的冰乙醇沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析1d，过0.8μm微孔滤膜，冷冻干燥，即得姜黄素-低分子量肝素聚合物。反应全程避光。
实施例3：白杨素-低分子量肝素聚合物的合成
称取白杨素适量置于茄型瓶中，加入适量丙酮溶解，白杨素的摩尔浓度为0.05mmol/mL，加入1.3摩尔量的碳酸钾，再逐滴加入1.1摩尔量的3-溴-1-丙醇，60℃加热回流反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的白杨素衍生物中间体1。称取适量低分子量肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解2h，氮气保护，冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺活化，低分子量肝素羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1∶4∶4。冰浴活化45min后，将中间体1，N，N二甲基-4-吡啶胺的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的低分子量肝素溶液中，室温反应24h。中间体1与低分子量肝素羧基的摩尔比为8∶1。N，N二甲基-4-吡啶胺的质量为中间体1与低分子量肝素质量和的10％。反应结束后，加入3倍体积的冰丙酮沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析1d，过0.8μm微孔滤膜，冷冻干燥，即得白杨素-低分子量肝素聚合物。反应全程避光。
实施例4：槲皮素-低分子量肝素聚合物的合成
称取槲皮素适量置于茄型瓶中，加入适量丙酮溶解，槲皮素的摩尔浓度为0.05mmol/mL，加入1.3摩尔量的碳酸钾，再逐滴加入1.1摩尔量的8-溴-1-辛醇，70℃加热反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的槲皮素衍生物中间体1。称取适量低分子量肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解2h，氮气保护、冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑活化，低分子量肝素羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的摩尔比为1∶3∶3。冰浴活化45min后，将中间体1的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的低分子量肝素溶液中，室温反应48h。中间体1与低分子量肝素羧基的摩尔比为5∶1。反应结束后，加入3倍体积的冰丙酮沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析1d，过0.8μm微孔滤膜，冷冻干燥，即得疏松的槲皮素-低分子量肝素聚合物。反应全程避光。
实施例5：白藜芦醇-低分子量肝素聚合物的合成
称取白藜芦醇适量置于茄型瓶中，加入适量丙酮溶解，白藜芦醇的摩尔浓度为0.08mmol/mL，加入1.2摩尔量的碳酸钠，再逐滴加入1.05摩尔量的6-溴-1-己醇，60℃加热反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的白藜芦醇衍生物中间体1。称取适量低分子量肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解1h，氮气保护、冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑活化，低分子量肝素羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑的摩尔比为1∶4∶4。冰浴活化3h后，将中间体1的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的脱硫酸化肝素溶液中，室温反应24h。中间体1与低分子量肝素羧基的摩尔比为2∶1。反应结束后，加入3倍体积的冰丙酮沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析48h，过0.8μm微孔滤膜，喷雾干燥，即得疏松的白藜芦醇-低分子量肝素聚合物。反应全程避光。
实施例6：黄芩素-低分子量肝素聚合物的合成
称取黄芩素适量置于茄型瓶中，加入适量丙酮溶解，黄芩素的摩尔浓度为0.08mmol/mL，加入1.3摩尔量的碳酸钾，再逐滴加入1.05摩尔量的3-溴-1-丙醇，60℃加热反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的黄芩素衍生物中间体1。称取适量低分子量肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解1h，氮气保护、冰浴条件下加入N，N’-羰基二咪唑活化，低分子量肝素羧基与N，N’-羰基二咪唑的摩尔比为1∶1。冰浴活化2h后，将中间体1的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的低分子量肝素溶液中，室温反应24h。中间体1与低分子量肝素羧基的摩尔比为5∶1。反应结束后，加入3倍体积的冰丙酮沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析48h，过0.8μm微孔滤膜，喷雾干燥，即得疏松的黄芩素-低分子量肝素聚合物。反应全程避光。
实施例7：槲皮素-脱硫酸化肝素聚合物的合成
称取槲皮素适量置于茄型瓶中，加入适量N，N-二甲基甲酰胺溶解，槲皮素的摩尔浓度为0.05mmol/mL，加入1.3摩尔量的碳酸钾，再逐滴加入1.1摩尔量的5-溴-1-戊醇，70℃加热反应至原料消失，反应完全后，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干即得一端游离羟基的槲皮素衍生物中间体1。称取适量脱硫酸化肝素溶于甲酰胺，60℃加热溶解2h，氮气保护、冰浴条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑活化，脱硫酸化肝素与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑的摩尔比为1∶4∶4。冰浴活化45min后，将中间体1的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到活化的脱硫酸化肝素溶液中，室温反应24h。中间体1与脱硫酸化肝素的羧基摩尔比为2∶1。反应结束后，加入3倍体积的冰丙酮沉淀，抽滤，滤渣即为产物。用适量蒸馏水复溶，在蒸馏水中透析1d，过0.8μm微孔滤膜，冷冻干燥，即得疏松的槲皮素-脱硫酸化肝素聚合物。反应全程避光。
实施例8：肝素衍生物纳米溶液的制备和表征
1.肝素衍生物纳米溶液的制备：根据含共轭结构的疏水小分子的性质，选择是否需要避光，称取肝素衍生物18mg溶解于3mL双蒸水中，室温搅拌30min，然后冰浴条件下超声或高压均质后，过0.8μm滤膜，即得。
2.粒径：将1制备得到的肝素衍生物纳米溶液，取2mL用马尔文激光粒径仪进行测定，结果见下表。
3.取代度(DS)：采用紫外-可见分光光度法，于含共轭结构疏水小分子最大吸收波长处测定含共轭结构疏水小分子的含量，以公式(1)计算取代度。在此公式中，ms为含共轭结构的疏水小分子的含量(g)，由标准曲线计算得到；mt为称取的肝素衍生物的质量(g)，Ms为含共轭结构的疏水小分子的平均分子量，Mhep为未分级肝素、低分子量肝素或脱硫酸化肝素的平均分子量。
4.临界胶束浓度(CMC)：采用芘荧光光谱法测定CMC。芘是一种疏水性芳香化合物，对所处化学环境的极性极敏感。当两亲性分子的浓度低于CMC时，芘溶解在水中；随着两亲性分子浓度增加，当高于CMC时形成胶束，芘向胶束内核的疏水部分分配，从而所处环境的极性变化，继而其荧光光谱发生变化。以芘的激发光谱中的I338/I333比值对两亲性分子的浓度作图即可得到两亲性分子的CMC，结果见下表。
表1肝素衍生物纳米溶液的制备和表征
实施例9：相对血红蛋白含量(Rhb)测定评价肝素衍生物抗血管生成活性
将基质胶与生长因子bFGF、不同的肝素衍生物混合，分别皮下注射于雄性小鼠腋下，10天后处死小鼠，分离出基质胶，用低渗裂解液匀浆，离心，取上清液加入Drabkin’s试剂，于540nm下测定吸光度，按下列公式(2)计算Rhb含量。在此公式中，阴性对照组的吸光度为A0％，阳性对照组的吸光度为A100％。各肝素衍生物组的Rhb含量测定结果如下表2。由表2结果看出，肝素类多糖经含共轭结构的疏水小分子修饰后抗血管生成活性显著提高。
表2相对血红蛋白含量(Rhb)测定评价肝素衍生物抗血管生成活性
实施例10：肝素衍生物抗凝活性检测
采用活化部分凝血活酶时间(APTT)法检测各肝素衍生物的抗凝活性。兔耳缘静脉取血，置于含有1/10体积0.109M的枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管中，轻轻颠倒混匀，3000rpm离心15min，收集上层液(血浆)。将0.1mL样品溶液(20μg/mL)加入0.4mL枸橼酸钠血浆中，再加入37℃预温的APTT试剂0.1mL，37℃孵育5min。同时以空白血浆作为对照。然后，加入37℃预温的0.025mol/L氯化钙溶液0.1mL，启动秒表，记录血浆凝固时间，每个样品做3个复管测定，取平均值。结果见下表3。由表3可以看出，经共轭疏水小分子修饰的肝素衍生物的抗凝活性显著降低，从而减小了肝素衍生物潜在的出血风险。
表3肝素衍生物的抗凝活性
实施例11：线粒体损伤肽衍生物诱导线粒体损伤检测
采用线粒体肿胀度检测实验评价线粒体损伤肽衍生物诱导线粒体损伤程度。当线粒体受到损伤时，线粒体的形态结构发生变化，表现为530nm处吸光度下降。采用组织线粒体提取试剂盒提取健康小鼠肝脏线粒体，用线粒体重悬液稀释至线粒体浓度为0.4mg/mL，与线粒体损伤肽衍生物(0.5mg/mL)室温孵育10min，移取200μL加入96孔板，于10min内连续扫描530nm的吸光度，采用下列公式(3)计算吸光度变化(ΔOD)。结果见表4。由表4可以看出，各线粒体损伤肽衍生物引起OD值变化较对白对照组大，说明各线粒体损伤肽经衍生化后仍具有线粒体损伤功能，适合作为线粒体损伤肽应用。
ΔOD＝OD0min-OD10min (3)
表4线粒体损伤肽衍生物诱导线粒体损伤检测
实施例12：基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备
1.制备工艺
工艺I：称取肝素衍生物适量溶于蒸馏水，搅拌30min后，逐滴加入溶于蒸馏水的衍生肽溶液，混合搅拌30min。肝素衍生物与衍生肽两者质量之和与水的质量比为6∶1000。混合完全后，加入脱盐阿霉素的N，N-二甲基甲酰胺(二甲基亚砜、二氯甲烷)溶液(过量三乙胺脱盐)。滴加速率为每分钟2-3滴。滴加完毕，冰浴条件下探头超声30min，转入透析袋，透析8h，过0.8μm微孔滤膜，冻干，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺II：称取一定比例的肝素衍生物、衍生肽适量溶于蒸馏水，肝素衍生物与衍生肽两者质量之和与水的质量比为6∶1000。搅拌1h后，加入脱盐阿霉素的N，N-二甲基甲酰胺(二甲基亚砜、二氯甲烷)溶液(过量三乙胺脱盐)。滴加速度为每分钟2-3滴。滴加完毕，冰浴条件下探头超声30min，转入透析袋，透析8h，过0.8μm微孔滤膜，冻干，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
工艺III：称取肝素衍生物适量溶于蒸馏水，搅拌30min后，逐滴加入溶于蒸馏水的衍生肽溶液，混合搅拌30min。肝素衍生物与衍生肽两者质量之和与水的质量比为6∶1000。加入溶于二氯甲烷(乙醇)的脱盐阿霉素溶液(过量三乙胺脱盐)，超声30min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，冻干，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物；
工艺IV：称取一定比例的肝素衍生物、衍生肽适量溶于蒸馏水，肝素衍生物与衍生肽两者质量之和与水的质量比为6∶1000。搅拌1h后，加入溶于二氯甲烷(乙醇)的脱盐阿霉素溶液(过量三乙胺脱盐)，超声30min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，冻干，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
2.基于阿霉素的多功能协同药物组合物中阿霉素的含量测定
用紫外-可见分光光度法，于481nm处测定阿霉素含量。以公式(4)计算阿霉素含量。
采用各工艺制备的基于阿霉素的多功能协同药物组合物的载药量见表5。
表5基于阿霉素的多功能协同药物组合物的载药量
A：姜黄素-未分级肝素衍生物；B：白杨素-低分子量肝素衍生物；C：槲皮素-脱硫酸化肝素衍生物；D：黄芩素-未分级肝素衍生物；E：大豆素-低分子量肝素衍生物；F：葛根素-脱硫酸化肝素衍生物；G：陈皮素-低分子量肝素衍生物；H：甘草素-低分子量肝素衍生物；
a：IYYGGKLAKLAKKLAKLAK；b：LFFGGKLAKLAKKLAKLAK；
c：LWWGGGKLAKLAKKLAKLAK；d：IYYGGGKLAKLAKKLAKLAK。
实施例13：基于阿霉素的多功能协同药物组合物的放置稳定性
称取实施例12中基于阿霉素的多功能协同药物组合物适量，溶于适量蒸馏水，制成浓度为1mg/mL的纳米溶液，室温放置48h，测定不同时间纳米溶液的粒径，PDI变化，评价基于阿霉素的多功能协同药物组合物的放置稳定性。结果显示，实施例12中各组基于阿霉素的多功能协同药物组合物的溶液48h内粒径，PDI变化幅度小，说明基于阿霉素的多功能协同药物组合物在贮存和使用过程中具有较好的稳定性。
表6基于阿霉素的多功能协同药物组合物的放置稳定性
实施例14：基于阿霉素的多功能协同药物组合物的稀释稳定性
纳米溶液注射给药后，需经过血浆高度稀释。考察纳米粒的稀释稳定性，能初步探究纳米粒经注射给药的结构完整性。测定实施例12中基于阿霉素的多功能协同药物组合物由1mg/mL稀释至0.2mg/mL前后的粒径，PDI变化情况，结果见表7。结果显示，基于阿霉素的多功能协同药物组合物经稀释后粒径，PDI变化幅度小，初步说明药物组合物稳定性较好，能耐受血浆稀释。
表7基于阿霉素的多功能协同药物组合物的稀释稳定性
实施例15：MTT法测定基于阿霉素的多功能协同药物组合物对HepG2细胞的抑制作用
采用MTT法考察实施例12中基于阿霉素的多功能协同药物组合物对HepG2细胞的细胞毒性。取HepG2细胞以5×103个/孔接种于96孔板中，37℃孵育24h，吸去培养液，分别加入含不同浓度上述药物的培养基溶液200μL，37℃孵育48h后，加入40μL四甲基偶氮唑蓝(MTT，2.5mg/mL)，继续孵育4h，吸弃孔内上清液，各孔加入150μLDMSO，振摇10min使结晶充分溶解。于570nm下用酶标仪测定样品吸光度值(ODsample)。并以相同方法测定空白对照组的吸光度(ODcontrol)，按公式(5)计算受试细胞株存活率，并根据结果计算各药物对HepG2细胞的半数抑制率IC50，结果见表8。结果表明，基于阿霉素的多功能协同药物组合物具有较强的细胞毒性。
表8基于阿霉素的多功能协同药物组合物对HepG2细胞的半数抑制率IC50值

Claims (9)

1.一种基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于该基于阿霉素的多功能协同药物组合物是通过下列方法制备：将具有共轭结构的天然疏水小分子经连接臂共价修饰到负电性的多糖骨架上形成抗血管生成药物，与经共轭结构疏水氨基酸改性的正电性线粒体损伤肽衍生物以及阿霉素物理混合，通过静电作用、疏水作用和π-π作用介导的协同超分子驱动力组装成稳定的纳米复合物。
2.根据权利要求书1所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于：所述的具有共轭结构的天然疏水小分子选自白杨素、姜黄素、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素、陈皮素、葛根素、甘草素、大豆素、芹菜素、大黄素、白藜芦醇；所述的多糖包括未分级肝素、低分子量肝素及脱硫酸化肝素；所述的连接臂为碳原子数为2～12的亚烷基溴醇或2～6的亚烷基溴胺及其氢溴酸盐或盐酸盐。
3.根据权利要求书1所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于：所述的正电性线粒体损伤肽序列为KLAKLAKKLAKLAK，共轭结构疏水氨基酸包括LFF、LYY、LWW、IFF、IYY、IWW；共轭结构疏水氨基酸与线粒体损伤肽通过2～3个G的甘桥相连，最终序列为共轭结构疏水氨基酸-甘桥-线粒体损伤肽。
4.根据权利要求书1所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于具有共轭结构的天然疏水小分子通过连接臂共价修饰到负电性的多糖骨架的制备方法如下：
(1)具有共轭结构的天然疏水小分子的活化
①将具有共轭结构的天然疏水小分子活化为末端为醇羟基的化合物
将具有共轭结构的天然疏水小分子溶于适当有机溶剂，加入适量活化剂，滴加适量连接臂，控制条件至反应完全，趁热过滤，将滤液滴入大量冰水中，静置析晶，抽滤，烘干，得到一端游离羟基的共轭化合物中间体1；
②将具有共轭结构的天然疏水小分子活化为末端为氨基的化合物
a.将含有游离氨基的溴化物连接臂溶于适当有机溶剂，加入适量氨基保护剂，随后加入适量的活化剂和适量三乙胺，控制反应条件至反应完全，分别用酸性洗液、碱性洗液和饱和氯化钠溶液洗涤或通过硅胶柱色谱分离，旋干有机溶剂后得到无色粘稠液体，即为中间体2；
b.将具有共轭结构的天然疏水小分子溶于适当有机溶剂，加入适量活化剂，再加入适量中间体2，控制反应条件至反应完全，加入大量水使沉淀析出，适当有机溶剂萃取、洗涤、干燥，旋干后得到中间体3；
c.将中间体3溶于适当有机溶剂，加入适量氨基脱保护试剂，控制反应条件至反应完全，加入沉淀剂，所得沉淀洗涤、旋干或挥干，得到中间体4；
(2)将负电性的肝素或其衍生物溶于反应溶剂中，在惰性气体保护、冰浴条件下，加入适当羧基活化剂，再加入一端游离羟基或氨基的共轭化合物中间体1或4，控制反应条件至反应完全，用适当沉淀剂沉淀，过滤得沉淀物，复溶，超声，透析，干燥除水，即得经共轭疏水小分子修饰的多糖衍生物；根据共轭疏水小分子对光的敏感性，选择是否避光反应。
5.根据权利要求书4所述的共轭结构的天然疏水小分子通过连接臂共价修饰到负电性的多糖骨架的制备方法，其中(1)的特征在于：
步骤①中所述的适当溶剂为丙酮、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合体系；所述的活化剂指碳酸钾、碳酸钠；所述的适量活化剂指活化剂与共轭疏水小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的连接臂指连接臂为碳原子数为2～12的亚烷基溴醇，所述的适量连接臂指连接臂与疏水小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的控制条件指35～100℃；
步骤a中所述的含有游离氨基的溴化物连接臂指碳原子数为2～6的亚烷基溴胺及其氢溴酸盐或盐酸盐；所述的适当有机溶剂指二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯；所述的氨基保护剂指二碳酸二叔丁酯、氯甲酸苄酯；所述的适量氨基保护剂指氨基保护剂与含有游离氨基的溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶1；所述的适量活化剂指N，N-二甲基-4-吡啶胺、4-吡咯烷基吡啶、1-羟基苯并三唑，活化剂与溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶5；所述的适量三乙胺与溴化物连接臂的摩尔比为1～5∶1；所述的酸性洗液为0.01～0.5mol/L的稀盐酸或稀硫酸；所述的碱性洗液为碳酸氢钠饱和溶液；所述的反应条件为10～30℃；
步骤b中所述的适当溶剂为甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜中一种或几种的混合体系；所述的适量中间体2与疏水共轭小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的活化剂指碳酸钾、碳酸钠；所述的适量活化剂指活化剂与疏水共轭小分子的摩尔比为1～5∶1；所述的反应条件为35～100℃；所述的用于萃取的有机溶剂为乙酸乙酯；
步骤c中所述的适当有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、二氧六环；所述的反应条件为10～30℃；所述的氨基脱保护剂指三氟乙酸、盐酸、氢溴酸中一种或几种的混合体系；所述的适量氨基脱保护剂指氨基脱保护剂与中间体3的摩尔比为5～50∶1；所述的沉淀剂为乙醚或无水乙醚。
6.根据权利要求书4所述的共轭结构的天然疏水小分子通过连接臂共价修饰到负电性的多糖骨架的制备方法，其中(2)的特征在于：
步骤(2)中所述的反应溶剂为甲酰胺，或甲酰胺与N，N-二甲基甲酰胺、甲酰胺与二甲基亚砜的混合溶剂；所述的羧基活化剂是指N，N’-羰基二咪唑、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺、或者1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺和N，N-二甲基-4-吡啶胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑；所述的适当羧基活化剂指羧基活化剂与肝素羧基的摩尔比为1～10∶1；所述的控制反应为冰浴条件下滴加羧基活化剂，活化羧基0.5～4h后，再加入一端游离羟基或氨基的共轭化合物中间体1或4，室温反应6～72h；所述的适当沉淀剂为冰丙酮、冰乙醇；所述的干燥除水指真空干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。
7.根据权利要求书1所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于采用下列方法制备：
工艺I：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与水按重量比3～50∶1000的比例溶解，改性线粒体损伤肽与水按重量比1～50∶1000的比例溶解，将多肽溶液缓慢滴加到多糖溶液中，室温搅拌0.5～2h，滴加一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，透析8～72h，0.8μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物；
工艺II：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与改性线粒体损伤肽按重量比1∶50～50∶1比例混合，用蒸馏水溶解，室温搅拌0.5～2h，滴加一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，透析8～72h，0.8μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物；
工艺III：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与水按重量比3～50∶1000的比例溶解，改性线粒体损伤肽与水按重量比1～50∶1000的比例溶解，将多肽溶液缓慢滴加到多糖溶液中，室温搅拌0.5～2h，加入一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物；
工艺IV：将共轭结构疏水小分子修饰的多糖与改性线粒体损伤肽按重量比1∶50～50∶1比例混合，用蒸馏水溶解，室温搅拌0.5～2h，加入一定比例溶于适量有机溶剂的脱盐阿霉素，超声20～40min，敞口挥干或旋转蒸发除去有机溶剂，0.8μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥或喷雾干燥，即得基于阿霉素的多功能协同药物组合物。
8.根据权利要求书7所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物的制备，其特征在于：工艺I、工艺II、工艺III、工艺IV所述的一定比例指脱盐阿霉素与共轭结构疏水小分子修饰的多糖与改性线粒体损伤肽质量和的比例为1∶50～50∶1；所述的有机溶剂指N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、乙醇；所述的适量有机溶剂指有机溶剂得脱盐阿霉素的浓度为0.5～50mg/mL。
9.根据权利要求书1所述的基于阿霉素的多功能协同药物组合物，其特征在于：所述的天然疏水小分子共价修饰的负电性的多糖，单独可以作为高分子抗肿瘤血管新生药物，或者作为纳米载体增溶疏水性药物；与正电性的改性线粒体损伤肽、阿霉素形成的多功能协同药物组合物单独或与药剂学认可的辅料制成供注射、口服、外用的抗肿瘤药物制剂。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109675052A (zh) * 2019-01-29 2019-04-26 中国药科大学 生物点击触发的高效靶向偶联物及其多元组合物、制备方法和应用
CN109999181A (zh) * 2019-03-13 2019-07-12 北京化工大学 一种胰岛素的修饰改性方法
CN111378049A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 中国药科大学 抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途
CN112138169A (zh) * 2020-09-14 2020-12-29 广东药科大学 天然多糖在增加难溶性药物溶解度中的应用
CN116019780A (zh) * 2021-10-26 2023-04-28 成都拂尔医药科技有限公司 一种双黄纳米颗粒及其制备与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105797169A (zh) * 2016-04-22 2016-07-27 中国药科大学 一种抗肿瘤大分子前药复合物及其制备方法和应用
CN106729748A (zh) * 2017-01-16 2017-05-31 中国药科大学 一种新型抗血栓聚合物纳米药物的制备及其应用
CN107050465A (zh) * 2017-01-17 2017-08-18 中国药科大学 一种用于脑部疾病诊疗的功能性姜黄素纳米药物及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105797169A (zh) * 2016-04-22 2016-07-27 中国药科大学 一种抗肿瘤大分子前药复合物及其制备方法和应用
CN106729748A (zh) * 2017-01-16 2017-05-31 中国药科大学 一种新型抗血栓聚合物纳米药物的制备及其应用
CN107050465A (zh) * 2017-01-17 2017-08-18 中国药科大学 一种用于脑部疾病诊疗的功能性姜黄素纳米药物及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELŻBIETA KAMYSZ ETAL: "Antitumor activity of opiorphin, sialorphin and", 《J. PEPT. SCI》 *
HENSBERGEN ETAL: "A doxorubin-CNGRC-peptide conjugate with prodrug properties", 《BIOCHEMICAL PHARMACOLOGY》 *
WEI-HAI CHEN ET AL: ""Bioinspired Nano-Prodrug with Enhanced Tumor Targeting and Increased Therapeutic Efficiency"", 《SMALL》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378049A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 中国药科大学 抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途
CN111378049B (zh) * 2018-12-29 2022-03-22 中国药科大学 抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途
CN109675052A (zh) * 2019-01-29 2019-04-26 中国药科大学 生物点击触发的高效靶向偶联物及其多元组合物、制备方法和应用
CN109999181A (zh) * 2019-03-13 2019-07-12 北京化工大学 一种胰岛素的修饰改性方法
CN112138169A (zh) * 2020-09-14 2020-12-29 广东药科大学 天然多糖在增加难溶性药物溶解度中的应用
CN116019780A (zh) * 2021-10-26 2023-04-28 成都拂尔医药科技有限公司 一种双黄纳米颗粒及其制备与应用

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