CN107951861B - 一种脂质纳米粒膜材料组合物 - Google Patents

一种脂质纳米粒膜材料组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN107951861B
CN107951861B CN201610902492.2A CN201610902492A CN107951861B CN 107951861 B CN107951861 B CN 107951861B CN 201610902492 A CN201610902492 A CN 201610902492A CN 107951861 B CN107951861 B CN 107951861B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tween
material composition
membrane material
cholesterol
lipid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610902492.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107951861A (zh
Inventor
程光
陈文忠
秦利利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Aisaike Nano Bio Pharmaceutical Co ltd
Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Aisaike Nano Bio Pharmaceutical Co ltd
Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Aisaike Nano Bio Pharmaceutical Co ltd, Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Nanjing Aisaike Nano Bio Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201610902492.2A priority Critical patent/CN107951861B/zh
Priority to US16/342,804 priority patent/US20200237678A1/en
Priority to JP2019541840A priority patent/JP6893245B2/ja
Priority to EP17863062.0A priority patent/EP3527201B1/en
Priority to PCT/CN2017/106032 priority patent/WO2018072644A1/zh
Publication of CN107951861A publication Critical patent/CN107951861A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107951861B publication Critical patent/CN107951861B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192—Processes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种脂质纳米粒膜材料组合物，所述的膜材料组合物包括阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物，所述的膜材料组合物比例为的摩尔比为（25‑35）:（40‑50）:（15‑25）：（1‑5）:（1‑5）。同时公开了由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法。本发明提供了一种能够提高纳米微粒本身稳定性，从而促进药物在肿瘤组织的释放并且减小被降解的可能性的脂质纳米粒膜材料组合物。

Description

一种脂质纳米粒膜材料组合物
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种脂质纳米粒膜材料组合物。
背景技术
现有技术中的脂质纳米粒膜材料并没有将吐温和聚乙二醇衍生物例如TPGS结合的情形，例如单独使用Tween：具有较短的PEG，这样短链的PEG可以增加纳米粒之间的排斥性，以防止其聚集而降低稳定性。另一方面，由于缺少了长链PEG嵌合在纳米粒表面，这种纳米制剂容易被吞噬细胞吞噬而失去作用，因为吐温很容易在全身循环中丧失。
再例如单独使用聚乙二醇衍生物TPGS：虽然有着较长的PEG链，可以在一定程度上躲避吞噬系统的识别，不被吞噬细胞吞噬而失去作用，增加长循环时间。然而，如果有很多的TPGS，纳米粒会很难有效的被靶肿瘤细胞摄取，因为存在空间位阻效应。
发明内容
1.发明要解决的技术问题
本发明的目的在于克服上述技术不足，提供了一种能够提高纳米微粒本身稳定性，从而促进药物在肿瘤组织的释放并且减小被降解的可能性的脂质纳米粒膜材料组合物。
2.技术方案
为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
一种脂质纳米粒膜材料组合物，所述的膜材料组合物包括阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物，所述的膜材料组合物比例为的摩尔比为(25‐35):(40‐50):(15‐25)：(1‐5):(1‐5)。
进一步的技术方案，所述的阳离子类脂包括：DOTAP、DOTMA、DDAB、DODMA；
所述的中性磷脂包括：Egg PC、DOPC、DSPC、DPPC、DMPC；
所述的吐温包括：吐温20、吐温40、吐温60、吐温80；
所述的聚乙二醇衍生物包括：mPEG-DPPE、mPEG-DMPE、mPEG-DSPE、mPEG-DMG、TPGS、mPEG-cholesterol。
进一步的技术方案，所述的聚乙二醇衍生物中PEG包括单甲基聚乙二醇，其分子量为550-5000。
进一步的技术方案，所述的聚乙二醇衍生物中PEG包括单甲基聚乙二醇，其分子量为550、750、1000、2000、3000、5000。
进一步的技术方案，所述的聚乙二醇衍生物是亲水的聚乙二醇链或甲基化聚乙二醇链连接到一个可以嵌入磷脂双分子层的疏水结构上所形成的物质；所述的疏水结构为胆固醇，维生素E，二棕榈酸磷脂酰乙醇胺,二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺,二肉豆蔻酰甘油或结构类似物。
进一步的技术方案，所述的吐温为吐温80。
由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，包括以下步骤：
(1)将阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物按照一定的摩尔比溶解于80％的乙醇中，得混合乙醇溶液；将内容物溶解在PBS缓冲液中，得到内容物混合溶液；
(2)将得到的混合乙醇溶液和内容物溶液等体积进行混合以得到40％的终乙醇浓度混合液；
(3)将步骤(2)所得的40％的终乙醇浓度混合液进一步用PBS溶液等体积稀释；重复将终乙醇浓度混合液用PBS溶液等体积稀释，直至得到乙醇终浓度低于5％的制剂混合液；
(4)向步骤(3)得到的制剂混合液加入高盐溶液，得到含有高盐的混合液；
(5)将步骤(4)得到的混合液用超滤或透析装置去除乙醇和游离未包裹的内容物；
(6)将步骤(5)得到的产品通过孔径小于或等于0.22微米的滤膜或滤芯进行过滤除菌，即得脂质纳米粒。
进一步的技术方案，所述的PBS缓冲液不含有DNA酶和RNA酶，所述的步骤(1)中的PBS缓冲液的规格为1X pH＝7，所述的步骤(3)中的PBS缓冲液的规格为1X pH＝7.4。
进一步的技术方案，所述的高盐溶液为NaCl溶液，步骤(4)中的混合液NaCl浓度为0.1-1M。
进一步的技术方案，所述的混合液NaCl浓度为0.3-0.4M，优选0.3M。
进一步的技术方案，所述的内容物是核酸。
进一步的技术方案，所述的核酸是寡聚核酸。
进一步的技术方案，所述的超滤或透析装置的截留量分子量为10,000-100，000道尔顿。
进一步的技术方案，所述的膜材料组合物为摩尔比为25:45:20:5:5的DOTAP、EggPC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
进一步的技术方案，所述的膜材料组合物为摩尔比为30:45:20:5:5的DOTMA、EggPC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
进一步的技术方案，所述的膜材料组合物为摩尔比为30:50:20:5:5的DOTAP、DSPC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
进一步的技术方案，所述的膜材料组合物为摩尔比为30:45:20:5:5的DOTAP、EggPC、胆固醇、Tween 80、mPEG2000-DPPE。
DOTAP：1,2-二油氧基-3-三甲基胺基丙烷氯化盐
DOTMA：1,2-二氧基十八碳烯-3-三甲基胺基丙烷氯化盐
DDAB：双十二烷基二甲基溴化胺
DODMA：1,2-二氧基十八碳烯-3-二甲基胺基丙烷
Egg PC：蛋黄卵磷脂酰胆碱
DOPC：二油酰磷脂酰胆碱
DSPC：二硬脂酰磷脂酰胆碱
DPPC：二棕榈酸磷脂酰胆碱
DMPC：二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱
DPPE:二棕榈酸磷脂酰乙醇胺
DMPE:二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺
TPGS：琥珀酸酯
3.有益效果
与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
1、本发明的纳米微粒膜材料首次使用双重聚乙二醇化试剂(吐温和聚乙二醇衍生物)，可以在一定程度提高纳米粒本身的稳定性，促进药物在肿瘤组织的释放和减小被降解的可能性。
吐温作为聚乙二醇化试剂常常被利用到纳米制剂的制备中，吐温系列具有短链的PEG，吐温系列例如吐温20/40/60/80在纳米制剂中可提高纳米粒之间的排斥作用，使它们不易于聚集，可以在一定程度上提高纳米制剂的稳定性，长期存放粒径增长较小。
聚乙二醇衍生物的试剂包括mPEG2000-DSPE和TPGS，可以作为另一种常用的纳米制剂的组分，有着较长的PEG链可以促进纳米粒在血液中的循环，躲避被网状内皮细胞或吞噬细胞摄取而失去作用，可以在一定程度上躲避免疫系统的识别，提高长循环时间，较长的PEG链又会在一定程度影响细胞的摄取。
本发明将两者结合，较长的PEG链和较短的吐温相结合，这两种聚乙二醇化试剂的组合物，我们发现可以有效的提高反义寡聚核酸包裹的纳米粒在血浆中的稳定性、长循环时间、靶细胞释放以及对靶细胞内基因的降解效力。
2、本发明中吐温系列与TPGS组合物在27天4度的稳定性测试，如图1所示，在一个月的周期中，纳米制剂的粒径变化较小，说明了吐温能够保持制剂整体稳定性。
具体实验数据如下：吐温80在27天4度的稳定性测试中，纳米制剂的粒径由126nm变为181nm，稳定性最为明显；
吐温20在27天4度的稳定性测试中，纳米制剂的粒径由99.8nm变为274.2nm，稳定性较好；
吐温40在27天4度的稳定性测试中，纳米制剂的粒径由138.5nm变为305.9nm，稳定性较好；
吐温60在27天4度的稳定性测试中，纳米制剂的粒径由76.7nm变为218.6nm，稳定性较好。
3、本发明中纳米脂质体膜材料组合物包括阳离子类脂、磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物并按照一定比例结合起来，使得制备成的纳米脂质体能够有效减少成本，稳定性好，细胞接受度高，是一种很好的纳米载体。
4、本发明的制备过程中加入高盐溶液可以解离吸附在纳米粒表面的游离内容物比如寡聚核酸，减小了由于内容物的吸附作用所产生的较大粒径，而被沉降下来的内容物以在后一步的透析中除去。
5、本发明中脂质纳米粒的制备方法采用乙醇逐级稀释法，而现有技术中采用的不等体积在线混合的方法比较复杂，需要用两个泵及不同型号的储液罐，不适合工业化生产。本发明相较于现有技术从动力学的角度来说，比较利于两体系达到动态平衡，促进之后混悬体系的稳定性。
附图说明
图1为本发明的吐温系列与TPGS组合物在27天4度的稳定性测试图。
具体实施方式
下面示意性的对本发明及其实施方式进行了描述，该描述没有限制性，附图中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的结构并不局限于此。所以，如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。
实施例1
一种脂质纳米粒膜材料组合物，所述的膜材料组合物包括DOTAP、Egg PC、胆固醇、Tween 80、TPGS，所述的膜材料比例为的摩尔比为25:45:20:5:5。
由上述脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，包括以下步骤：
(1)将上述物质比溶解于80％的乙醇中，得混合乙醇溶液；将寡聚核酸G3139溶解在PBS缓冲液(1X pH＝7)中，得到寡聚核酸的PBS溶液；G3139是一段由18个核苷酸组成的反义寡聚核酸，核苷酸序列为5’-TCT CCC AGC GTG CGC CAT-3’；
(2)将得到的混合乙醇溶液和寡聚核酸G3139的PBS溶液等体积进行混合以得到40％的终乙醇浓度混合液；
(3)将步骤(2)所得的40％的终乙醇浓度混合液进一步用PBS溶液等体积稀释；重复将终乙醇浓度混合液用PBS溶液(1X pH＝7.4)等体积稀释，直至得到乙醇终浓度低于5％的制剂混合液；
(4)向步骤(3)得到的制剂混合液将加入高盐溶液，得到终浓度为0.1M的混合液；
(5)将步骤(4)得到的混合液通过截留分子量为10000道尔顿的超滤装置去除乙醇和游离的反义寡聚核酸。
(6)将步骤(5)得到的产品通过孔径为0.22微米的滤膜进行过滤灭菌，即得纳米微粒。
实施例2
一种脂质纳米粒膜材料组合物，所述的膜材料包括所述的膜材料包括DOTMA、DOPC、胆固醇、Tween 40、mPEG550-DPPE，所述的膜材料比例为的摩尔比为35:40：15：1:1。
由上述脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，包括以下步骤：
(1)将上述物质比溶解于80％的乙醇中，得混合乙醇溶液；将反义寡聚核酸G3139溶解在PBS缓冲液(1X pH＝7)中，得到反义寡聚核酸G3139的PBS溶液；
(2)将得到的混合乙醇溶液和反义寡聚核酸G3139的PBS溶液等体积进行混合以得到40％的终乙醇浓度混合液；
(3)将步骤(2)所得的40％的终乙醇浓度混合液进一步用PBS溶液等体积稀释；重复将终乙醇浓度混合液用PBS溶液(1X pH＝7.4)等体积稀释，直至得到乙醇终浓度低于5％的制剂混合液；
(4)向步骤(3)得到的制剂混合液将加入高盐NaCl溶液，得到终浓度为0.3M的混合液；
(5)将步骤(4)得到的混合液通过截留分子量为50000道尔顿的超滤装置去除乙醇和游离的反义寡聚核酸；
(6)将步骤(5)得到的产品通过孔径为0.20微米的滤膜进行过滤灭菌，即得纳米微粒。
实施例3
一种脂质纳米粒膜材料组合物，所述的膜材料包括DDAB、DSPC、胆固醇、Tween 60、mPEG3000-DMPE，所述的膜材料比例为的摩尔比为30:50:25:3:3。
由上述脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，包括以下步骤：
(1)将上述物质比溶解于80％的乙醇中，得混合乙醇溶液；将反义核酸溶解在PBS缓冲液(1X pH＝7)中，得到反义核酸G3139的PBS溶液；
(2)将得到的混合乙醇溶液和反义核酸的PBS溶液等体积进行混合以得到40％的终乙醇浓度混合液；
(3)将步骤(2)所得的40％的终乙醇浓度混合液进一步用PBS溶液等体积稀释；重复将终乙醇浓度混合液用PBS溶液(1X pH＝7.4)等体积稀释，直至得到乙醇终浓度低于5％的制剂混合液；
(4)向步骤(3)得到的制剂混合液将加入高盐溶液，得到终浓度为1M的混合液；
(5)将步骤(4)得到的混合液用截留分子量为100000道尔顿的超滤装置去除乙醇和未包裹的反义核酸G3139；
(6)将步骤(5)得到的产品通过孔径为0.22微米的滤膜进行过滤灭菌，即得纳米微粒。
实施例4
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:50:20:5:5
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:50:20:5:5
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝35:50:20:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 123.4 7.45 89.2％
2 132.5 7.96 83.8％
3 128.1 8.55 84.9％
通过调整DOTAP阳性磷脂的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第一组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第一组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:40:20:5:5
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:5:5
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:50:20:5:5
Figure BDA0001131752940000071
Figure BDA0001131752940000081
通过调整Egg PC磷脂的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第二组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第二组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:15:5:5
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:5:5
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:25:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 120.4 7.78 80.4％
2 123.4 7.45 89.2％
3 143.4 7.03 86.2％
通过调整胆固醇的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第二组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第二组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:15:1:5
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:3:5
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:25:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 135.4 9.23 78.4％
2 128.0 8.53 84.7％
3 123.4 7.45 89.2％
通过调整Tween 80的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第三组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第三组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:15:5:1
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:5:3
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:25:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 129.2 8.53 82.6％
2 124.6 7.91 79.3％
3 123.4 7.45 89.2％
通过调整TPGS的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第三组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第三组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTMA/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:5:5
(2)DOTMA/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:45:20:5:5
(3)DOTMA/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝35:45:20:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 131.4 5.76 88.4％
2 127.2 6.66 91.9％
3 126.4 6.75 84.6％
除此之外，我们还筛选了其他潜在的磷脂，通过调整DOTMA阳性磷脂的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第二组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第二组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/DSPC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:40:20:5:5
(2)DOTAP/DSPC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:45:20:5:5
(3)DOTAP/DSPC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:50:20:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) G3139包封率(％)
1 124.4 7.12 82.8％
2 126.0 8.04 87.1％
3 131.8 7.71 89.9％
通过调整DSPC磷脂的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第三组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致，进而我们选定第三组为最优处方进行以下的筛选。
(1)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/DPPE-mPEG2000＝30:45:20:5:1
(2)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/DPPE-mPEG2000＝30:45:20:5:3
(3)DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/DPPE-mPEG2000＝30:45:20:5:5
制剂 粒径(nm) 电位(mV) 包封率(％)
1 142.6 7.68 85.2％
2 134.5 6.63 87.3％
3 135.8 7.90 91.4％
通过调整DPPE-mPEG2000的摩尔比例，进行单因素实验，我们发现在其他组分不变的条件下第三组的粒径和包封率都明显优于另外两组，电位基本保持一致。
经过以上各处方的组成以及比例的筛选，我们可以得出结论以DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝25:45:20:5:5此处方组成及比例有着较小和稳定粒径以及包封率，正电位也是比较适中的。另外，DOTMA/Egg PC/胆固醇/Tween80/TPGS＝30:45:20:5:5，DOTAP/DSPC/胆固醇/Tween 80/TPGS＝30:50:20:5:5，DOTAP/Egg PC/胆固醇/Tween 80/DPPE-mPEG2000＝30:45:20:5:5也是其他组分组成中在粒径，电位，包封率，稳定性上较为优选的比例。
本发明中吐温系列与TPGS组合物在27天4度的稳定性测试，如图1所示，在一个月的周期中，纳米制剂的粒径变化较小，说明了吐温能够保持制剂整体稳定性。
具体实验数据如下：吐温80在27天4度的稳定性测试中，G3139-GAP纳米制剂的粒径由126nm变为181nm，稳定性最为明显；
吐温20在27天4度的稳定性测试中，G3139-GAP纳米制剂的粒径由99.8nm变为274.2nm，稳定性较好；
吐温40在27天4度的稳定性测试中，G3139-GAP纳米制剂的粒径由138.5nm变为305.9nm，稳定性较好；
吐温60在27天4度的稳定性测试中，G3139-GAP纳米制剂的粒径由76.7nm变为218.6nm，稳定性较好。

Claims (14)

1.一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于：所述的膜材料组合物包括阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物，所述的膜材料组合物的摩尔比为（25-35）:（40-50）:（15-25）：（1-5）:（1-5）；
所述的阳离子类脂是DOTAP、 DOTMA、DDAB、DODMA中的一种 ；
所述的中性磷脂是Egg PC、 DOPC、DSPC、DPPC、DMPC中的一种；
所述的吐温是吐温20、吐温40、吐温60、吐温80中的一种；
所述的聚乙二醇衍生物是mPEG-DPPE、mPEG-DMPE、mPEG-DSPE、mPEG-DMG、TPGS、mPEG-cholesterol中的一种。
2.根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的聚乙二醇衍生物中PEG包括单甲基聚乙二醇， 其分子量为550-5000。
3.根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的吐温为吐温80。
4.根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的膜材料组合物为摩尔比为25:45:20:5:5的DOTAP、Egg PC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
5. 根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的膜材料组合物为摩尔比为30:45:20:5:5的DOTMA、Egg PC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
6.根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的
膜材料组合物为摩尔比为30:50:20:5:5的DOTAP、DSPC、胆固醇、Tween 80、TPGS。
7.根据权利要求1所述的一种脂质纳米粒膜材料组合物，其特征在于，所述的膜材料组合物为摩尔比为30:45:20:5:5的DOTAP、Egg PC、胆固醇、Tween 80、mPEG2000-DPPE。
8.一种由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物按照一定的摩尔比溶解于80%的乙醇中，得混合乙醇溶液；将内容物溶解在PBS缓冲液中，得到内容物混合溶液；
（2）将得到的混合乙醇溶液和内容物溶液等体积进行混合以得到40%的终乙醇浓度混合液；
（3）将步骤（2）所得的40%的终乙醇浓度混合液进一步用PBS溶液等体积稀释；重复将终乙醇浓度混合液用PBS溶液等体积稀释，直至得到乙醇终浓度低于5%的制剂混合液；
（4）向步骤（3）得到的制剂混合液加入高盐溶液，得到含有高盐的混合液；
（5）将步骤（4）得到的混合液用超滤或透析装置去除乙醇和游离未包裹的内容物；
（6）将步骤（5）得到的产品通过孔径小于或等于0.22微米的滤膜或滤芯进行过滤除菌，即得脂质纳米粒；
所述的阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物的摩尔比为（25-35）:（40-50）:（15-25）：（1-5）:（1-5）；所述的阳离子类脂是DOTAP、 DOTMA、DDAB、DODMA中的一种；
所述的中性磷脂是：Egg PC、 DOPC、DSPC、DPPC、DMPC中的一种；
所述的吐温是吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的一种；
所述的聚乙二醇衍生物是mPEG-DPPE、mPEG-DMPE、mPEG-DSPE、TPGS、mPEG-cholesterol中的一种。
9.根据权利要求8中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的PBS缓冲液不含有DNA酶和RNA酶，所述的步骤（1）中的PBS缓冲液的规格为1X pH=7，所述的步骤（3）中的PBS缓冲液的规格为1X pH=7.4。
10.根据权利要求8中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的高盐溶液为NaCl溶液，步骤（4）中的混合液NaCl浓度为0.1-1M。
11.根据权利要求10中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的混合液NaCl浓度为0.3-0.4M。
12.根据权利要求8中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的内容物是核酸。
13.根据权利要求12中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的核酸是寡聚核酸。
14.根据权利要求8中所述的由脂质纳米微粒膜材料组合物制备的脂质纳米粒的方法，其特征在于，所述的超滤或透析装置的截留量分子量为10,000 - 100，000道尔顿。
CN201610902492.2A 2016-10-17 2016-10-17 一种脂质纳米粒膜材料组合物 Active CN107951861B (zh)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610902492.2A CN107951861B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 一种脂质纳米粒膜材料组合物
US16/342,804 US20200237678A1 (en) 2016-10-17 2017-10-13 Lipid nanoparticle membrane composition
JP2019541840A JP6893245B2 (ja) 2016-10-17 2017-10-13 脂質ナノ粒子用膜材料組成物
EP17863062.0A EP3527201B1 (en) 2016-10-17 2017-10-13 Lipid nanoparticle film material composition
PCT/CN2017/106032 WO2018072644A1 (zh) 2016-10-17 2017-10-13 一种脂质纳米粒膜材料组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610902492.2A CN107951861B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 一种脂质纳米粒膜材料组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107951861A CN107951861A (zh) 2018-04-24
CN107951861B true CN107951861B (zh) 2020-12-01

Family

ID=61953463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610902492.2A Active CN107951861B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 一种脂质纳米粒膜材料组合物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20200237678A1 (zh)
EP (1) EP3527201B1 (zh)
JP (1) JP6893245B2 (zh)
CN (1) CN107951861B (zh)
WO (1) WO2018072644A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111544317B (zh) * 2020-04-29 2022-01-14 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用
CN112336853A (zh) * 2020-10-21 2021-02-09 中南大学湘雅三医院 一种脂质体纳米疫苗、制备方法及应用
CN117491546A (zh) * 2023-06-30 2024-02-02 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种聚乙二醇化脂质含量的检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101538303A (zh) * 2007-12-25 2009-09-23 沈阳药科大学 一种葫芦素族单体天然脂肪酸单酯的衍生物
CN102215820A (zh) * 2008-11-17 2011-10-12 安龙制药公司 用于核酸输送系统的可释放融合脂质
CN102670510A (zh) * 2012-05-02 2012-09-19 江苏省中医药研究院 穿膜肽修饰的雷公藤红素纳米结构脂质载体及在制备治疗前列腺癌、肺癌、乳腺癌药的应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009120247A2 (en) * 2007-12-27 2009-10-01 The Ohio State University Research Foundation Lipid nanoparticle compositions and methods of making and using the same
CN101732349B (zh) * 2008-11-14 2012-05-23 上海医药工业研究院 一种蟾酥纳米长循环脂质体及其制备方法
WO2012026608A1 (en) * 2010-08-24 2012-03-01 Canon Kabushiki Kaisha Polymeric particle and hydrophilic dye having a sulfonate group encapsulated within the particle
BR112015022819A8 (pt) * 2013-03-13 2019-11-26 Mallinckrodt Llc método para a preparação de um taxano lipossomal, composição compreendendo um lipossoma e taxano lipossomal
JP2016529284A (ja) * 2013-08-27 2016-09-23 ノースイースタン ユニバーシティ ナノ粒子薬物デリバリシステムおよび、癌および神経外傷の治療方法
AU2014365888B2 (en) * 2013-12-16 2018-12-06 Merck Patent Gmbh Survivin-directed cancer vaccine therapy

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101538303A (zh) * 2007-12-25 2009-09-23 沈阳药科大学 一种葫芦素族单体天然脂肪酸单酯的衍生物
CN102215820A (zh) * 2008-11-17 2011-10-12 安龙制药公司 用于核酸输送系统的可释放融合脂质
CN102670510A (zh) * 2012-05-02 2012-09-19 江苏省中医药研究院 穿膜肽修饰的雷公藤红素纳米结构脂质载体及在制备治疗前列腺癌、肺癌、乳腺癌药的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The role of helper lipids in lipid nanoparticles (LNPs) designed for oligonucleotide delivery;Xinwei Cheng等;《Advanced Drug Delivery Reviews》;20160218;第99卷;全文，特别是摘要，第133页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107951861A (zh) 2018-04-24
EP3527201A4 (en) 2020-05-27
JP2019534899A (ja) 2019-12-05
EP3527201A1 (en) 2019-08-21
JP6893245B2 (ja) 2021-06-23
EP3527201B1 (en) 2021-08-18
WO2018072644A1 (zh) 2018-04-26
US20200237678A1 (en) 2020-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lujan et al. Synthesis and characterization of nanometer-sized liposomes for encapsulation and microRNA transfer to breast cancer cells
Grijalvo et al. Cationic niosomes as non-viral vehicles for nucleic acids: Challenges and opportunities in gene delivery
Douliez et al. Catanionic coacervate droplets as a surfactant‐based membrane‐free protocell model
CN107951861B (zh) 一种脂质纳米粒膜材料组合物
EP3391875B1 (en) Method for preparing polymeric micelle containing anionic drug
Haghiralsadat et al. Preparation of PEGylated cationic nanoliposome-siRNA complexes for cancer therapy
EP2502617B1 (en) Process for production of w/o/w emulsion, process for production of liposome employing the process, and porous membrane for use in the methods
CN101903018A (zh) 用于递送核酸基因的ldl样阳离子纳米微粒、其制备方法以及使用其递送核酸基因的方法
JP6986563B2 (ja) ｂｃｌ−２を抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチドの脂質ナノ粒子及びその調製方法
Rahman et al. Nucleic acid-loaded lipid-polymer nanohybrids as novel nanotherapeutics in anticancer therapy
CN105287382A (zh) 叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法
JP5494054B2 (ja) 二段階乳化によるリポソーム製造方法
US8598138B2 (en) Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same
CN103565744A (zh) 大分子磷脂酰甘油纳米脂质体、制备方法及应用
CN102485213A (zh) 伊立替康脂质体及其制备方法
CN116327979A (zh) 一种过渡金属基介孔纳米催化药物、制备方法及用途
JP2012102043A (ja) 単胞リポソームの製造方法、単胞リポソームの分散液とその乾燥粉末及びそれらの製造方法
Tsichlis et al. Development of Liposomal and Liquid Crystalline Lipidic Nanoparticles with Non-Ionic Surfactants for Quercetin Incorporation
Yau et al. In-Space Fabrication of Janus Base Nano-Matrix for Improved Assembly and Bioactivities
KR20230130538A (ko) mRNA 전달 효율 증대를 위한 mRNA 전달체용 지질 나노입자의 제조방법
CN117982460A (zh) 一种球棍状脂质纳米颗粒的制备及应用
CN102525931A (zh) 一种戊铂脂质体制剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant