CN107929219A - 一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法 - Google Patents

一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法，属于口腔护理技术领域。本发明通过利用糯米粉将乳酸菌挤压包埋制成益生菌菌粉，并向牙膏中添加益生菌菌粉，使乳酸菌在牙膏中的稳定性提高，在不改变牙膏性状的前提下增强了益生菌在牙膏中的存活率，从而赋予牙膏抑制口腔致病菌增殖的益生作用。本发明的益生菌菌粉与牙膏混合后存放6周时菌株存活率达到平稳期，存活率比直接在牙膏中混合加入乳酸菌粉提高了100‑1000倍，继续存放存活率不再降低，有效增强牙膏中的益生菌存活率，并且长期保藏牙膏中的活菌数较高。

Description

一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法
技术领域
本发明涉及一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法，属于口腔护理技术领域。
背景技术
据世界卫生组织最新统计，口腔疾病已被列为继癌症和脑血管疾病之后的第三大疾病。最新口腔流行病调查报告显示，我国蛀牙、牙周病等口腔病患病率高达97.6％，而研究显示，口腔疾病还会引发一系列如肠道疾病、心脏疾病、心脑血管疾病、呼吸道疾病等，现代口腔预防医学证明，只有做好口腔预防，维护良好的口腔健康，才能提高生命质量。
益生菌是一类具有抑制致病菌生长、降低炎症因子或对人体健康有益的微生物。很多口腔疾病如龋齿、牙周炎等都与有害微生物有关。现代医学认为80％的口臭是由口腔厌氧菌过度繁殖，分解消化口腔内食物残渣、有机物和血液，产生挥发性的硫化物。口腔益生菌对厌氧菌的繁殖产生很大的抑制作用，具有抑制这类微生物生长的能力，能够有效预防牙周病、口腔复发性溃疡，直接针对口臭的根源进行治疗。目前益生菌的载体通常为以乳制品或冲剂等为主的食品，主要针对肠道益生菌，不适于口腔益生菌发挥作用。牙膏虽然是承载口腔益生菌的适宜载体，但是对微生物具有抑制作用，不利于活菌长期保存。因此，提高口腔益生菌在牙膏中的稳定性和存活率具有重要的应用价值。
现有中方法中，通常是将灭活的益生菌添加至牙膏中，但灭活菌在牙膏中发挥的益生作用有限；现有技术中也有采用微胶囊等包埋技术，先保护菌株之后再添加至牙膏中，但依然存在益生菌在牙膏中稳定性低的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明采用挤压包埋的技术保护菌株，以提高口腔益生菌在牙膏中的稳定性和存活率。
本发明的第一个目的是提供一种益生菌菌粉，所述益生菌菌粉是以乳酸菌粉和淀粉包埋制备而成。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸菌粉与淀粉的比例为1:50～150。
在本发明的一种实施方式中，所述益生菌菌粉通过如下方法制备：(1)将乳酸菌粉与淀粉按照1:50～150的比例进行混匀；(2)将上述混合粉末采用螺旋杆挤压膨化机进行挤压膨化，按照6～8kg/h的进样量，进样口温度为35～40oC，螺杆挤压膨化温度为65～75oC，出样口温度为55～65oC；(3)将上述挤压膨化后的样品烘干粉碎。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸菌粉是由发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、乳酸足球菌(Pediococcusacidilactici)、棒状乳杆菌(Lactobacilluscoryniformis)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)中的一种或一种以上的组合后制备得到。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)的保藏编号为CCTCCM2016424，已于公开号CN106497835A的发明专利中公开。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸菌粉的制备方法为：(1)按脱脂奶粉100～200g/L、海藻糖20～40g/L、蔗糖10～20g/L溶于水中，调pH至5～7后灭菌制备保护剂；(2)向(1)中制备的保护剂中添加乳酸菌菌泥，混匀后冻干，得到乳酸菌粉。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸菌菌泥是将乳酸菌接种至MRS培养基35～38oC静置培养24～36h后，按5～15％接种量转接三级扩培所得发酵液离心后收集获得。
在本发明的一种实施方式中，所述冻干是将乳酸菌菌泥和保护剂混合均匀后，-70～90oC过夜预冷，-40～60oC，0.01～0.1Mpa真空冷冻2～4d。
在本发明的一种实施方式中，所述脱脂奶粉、海藻糖、蔗糖、淀粉均是食品级原料。
本发明的第二个目的是提供一种含口腔益生菌的牙膏，所述牙膏是在牙膏制备过程中添加上述益生菌菌粉。
本发明的第三个目的是提供一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法，所述方法是将乳酸菌制备成所述的益生菌菌粉，再添加到牙膏中。
本发明的第四个目的是提供所述益生菌菌粉在口腔护理中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述应用是将所述益生菌菌粉添加至牙膏中。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法，通过利用淀粉将乳酸菌包埋制成益生菌菌粉，并向牙膏中添加益生菌菌粉，使乳酸菌在牙膏中的稳定性提高，在不改变牙膏性状的前提下增强益生菌在牙膏中的存活率，从而赋予牙膏抑制口腔致病菌增殖的益生作用。本发明的益生菌菌粉与牙膏混合后存放6周时菌株存活率达到平稳期，存活率比直接在牙膏中混合加入乳酸菌粉提高了100-1000倍，继续存放存活率不再降低，有效增强牙膏中的益生菌存活率，并且长期保藏牙膏中的活菌数较高。
附图说明
图1为菌株包埋后在1号牙膏中的稳定性；
图2为菌株包埋后在2号牙膏中的稳定性；
图3为粉碎后菌株在1号牙膏中的稳定性；
图4为粉碎后菌株在2号牙膏中的稳定性；
图5为保护剂对菌株在牙膏中稳定性的影响；
图6为乳酸菌菌粉与糯米粉比例对菌株在牙膏中稳定性的影响。
具体实施方式
实施例1：
(1)将保存在-80oC甘油管中的发酵乳杆菌Y29划线接种于MRS固体培养基，置于37oC恒温培养箱中培养24h获得单菌落。
(2)挑取固体培养基上的单菌落接种于10mLMRS液体培养基，在37oC静置培养36h得到种子液，取500μL菌液保存至甘油管，-80oC保存。
(3)将步骤2中获得的种子液按10％的接种量接种于100mL二级发酵培养基中，然后在37℃静置培养36h得到二级种子液。
(4)将步骤3中获得的二级种子液按10％的接种量接种于1500mL三级发酵培养基中，然后在37℃静置培养36h得到菌液。
(5)将得到的菌液，7000rpm离心15min弃上清，将得到的菌体用无菌的生理盐水重悬后，离心弃上清，重复洗涤两次。
(6)保护剂的制备按脱脂奶粉150g/L、海藻糖30g/L、蔗糖15g/L溶于蒸馏水中，调pH至6.5±0.1，105oC灭菌10min。
(7)将步骤5中获得的菌泥与150mL保护剂重悬混匀，置于-80oC，24h后。冷冻抽真空干燥3-4天得乳酸菌粉。
实施例2：
以糯米粉为原料，按10g菌粉/1000g糯米粉的比例将实施例1制得的乳酸菌粉与糯米粉混匀，加入螺旋杆挤压膨化机，按7.0kg/h的进样量，进样口的温度36±1oC，71±1oC进行螺杆挤压膨化，出口处为粒状，出样口的温度59±1oC；将挤压成型的样品放入30oC烘箱2h，收取烘干的样品备用。
取膨化保护的益生菌菌粉(活菌数为107～109CFU/g)和对照菌粉(活菌数为107～109CFU/g)各10g加到100g某品牌1号牙膏中充分混匀，灌装至铝箔管，热塑封口，分别在室温和40℃烘箱避光放置，取样用无菌水十倍稀释样品涂布于MRS培养基，37℃静置培养25～30h，计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
将室温和40℃放置的益生菌牙膏样品，按0、1、2、3、4、6、8、10周取样，涂布计算包埋后颗粒中的活菌数。结果如图1所示，结果显示，第6周时添加有包埋益生菌菌粉的牙膏中的活菌数达到平稳期，且挤压包埋菌株比菌粉在1号牙膏中的存活率提高了194倍，挤压包埋对菌株具有良好的保护作用，可提高发酵乳菌在牙膏中的存活率。
实施例3：
采用膨化保护的益生菌菌粉和对照菌粉各10g和100g某品牌2号牙膏，其他条件参数与实施例2保持一致计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
将室温和40℃放置的益生菌牙膏样品，按0、1、2、3、4、6、8、10周取样，涂布计算包埋后颗粒中的活菌数。结果如图2所示，结果显示，第6周时添加有包埋益生菌菌粉的牙膏中的活菌数达到平稳期，且包埋的菌株比对照菌粉在2号牙膏中的存活率提高了近317倍。包埋对菌株具有良好的保护作用，可提高发酵乳杆菌在牙膏中的存活率。
实施例4：
采用膨化保护的益生菌粉碎菌粉和对照菌粉各10g和100g某品牌1号牙膏，其他条件参数与实施例2保持一致，计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
将室温和40℃放置的益生菌牙膏样品，按0、1、2、3、4、6、8、10周取样，涂布计算包埋后颗粒中的活菌数。结果图3所示，结果显示，第6周时添加有包埋粉碎后益生菌菌粉的牙膏中的活菌数达到平稳期，且包埋粉碎后样品的菌株比对照菌粉在1号牙膏中的存活率提高了182倍，包埋对菌株具有良好的保护作用，可提高发酵乳杆菌在牙膏中的存活率。
实施例5：
采用膨化保护的益生菌菌粉碎菌粉和对照菌粉各10g和100g某品牌2号牙膏，其他条件参数与实施例2保持一致，计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
将室温和40℃放置的益生菌牙膏样品，按0、1、2、3、4、6、8、10周取样，涂布计算包埋后颗粒中的活菌数。结果如图4所示，结果显示，第6周时添加有包埋粉碎后益生菌菌粉的牙膏中的活菌数达到平稳期，且挤压包埋粉碎后样品的菌株比菌粉在2号牙膏中的存活率提高了225倍。挤压包埋对菌株具有良好的保护作用，可提高发酵乳杆菌在牙膏中的存活率。
对照例1：
采用脱脂奶粉，海藻糖和蔗糖分别作为保护剂制作乳酸菌粉，再按照实施例2的条件制作益生菌菌粉，将益生菌菌粉加到100g某品牌牙膏中充分混匀，灌装至铝箔管，热塑封口，在避光室温放置，其他条件参数与实施例2保持一致，计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
结果如图5所示，结果表明，脱脂奶粉，海藻糖和蔗糖对菌株有一定的保护作用，但是采用混合保护剂最终制备的益生菌菌粉比采用单一保护剂制备得到的益生菌菌粉在牙膏中存活稳定性提高了10-18倍。
对照例2：
以糯米粉为原料，按乳酸菌粉:糯米粉＝(1:10)的比例混匀，加入螺旋杆挤压膨化机，其他条件均与实施例2保持一致。
以糯米粉为原料，按乳酸菌粉:糯米粉＝(1:1000)的比例混匀，加入螺旋杆挤压膨化机，其他条件均与实施例2保持一致。
取膨化保护的乳酸菌加到某品牌牙膏中充分混匀，灌装至铝箔管，热塑封口，在避光室温放置，其他条件参数与实施例2保持一致，计算样品中乳酸菌的活菌数以考察菌株在牙膏中的稳定性。
结果如图6所示，结果表明，淀粉挤压包埋对菌株有一定的保护作用，当乳酸菌粉:糯米粉＝(1:100)时菌株在牙膏中的存活率最高。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种益生菌菌粉，其特征在于，所述益生菌菌粉是以乳酸菌粉和淀粉挤压包埋制备而成。
2.根据权利要求1所述的益生菌菌粉，其特征在于，所述乳酸菌粉与淀粉的比例为1:50～150。
3.根据权利要求1所述的益生菌菌粉，其特征在于，所述益生菌菌粉通过如下方法制备：(1)将乳酸菌粉与淀粉按照1:50～150的比例进行混匀；(2)将上述混合粉末采用螺旋杆挤压膨化机进行挤压膨化，按照6～8kg/h的进样量，进样口温度为35～40℃，螺杆挤压膨化温度为65～75℃，出样口温度为55～65℃；(3)将上述挤压膨化后的样品烘干粉碎。
4.根据权利要求1～3任一所述的益生菌菌粉，其特征在于，所述乳酸菌粉的制备方法为：(1)按脱脂奶粉100～200g/L、海藻糖20～40g/L、蔗糖10～20g/L溶于水中，调pH至5～7后灭菌制备保护剂；(2)向(1)中制备的保护剂中添加乳酸菌菌泥，混匀后冻干，得到乳酸菌粉。
5.根据权利要求4所述的益生菌菌粉，其特征在于，所述乳酸菌菌泥是由发酵乳杆菌、短乳杆菌、乳酸足球菌、棒状乳杆菌、副干酪乳杆菌中的一种或一种以上的组合后制备得到。
6.根据权利要求4所述的益生菌菌粉，其特征在于，所述乳酸菌菌泥是将乳酸菌接种至MRS培养基35～38℃静置培养24～36h后，按5～15％接种量转接三级扩培所得发酵液离心后收集获得。
7.一种含口腔益生菌的牙膏，其特征在于，所述牙膏是在牙膏制备过程中添加权利要求1所述的益生菌菌粉。
8.一种提高乳酸菌在牙膏中稳定性的方法，其特征在于，所述方法是将乳酸菌制备成权利要求1所述的益生菌菌粉，再添加到牙膏中。
9.权利要求1所述的益生菌菌粉在口腔护理中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用是将所述益生菌菌粉添加至牙膏中。
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