CN107923919B - 筛查胎儿三体性的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及筛查并识别胎儿三体性的方法。本公开的具体实施例提供了筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法。所述方法包括检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中一种或多种脂质标记物表示对象体内胎儿三体性的风险；以及基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性的风险。

Description

筛查胎儿三体性的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年6月2日提交的申请号为2015902036的澳大利亚临时专利申请以及于2015年12月21日提交的国际专利申请PCT/AU2015/050823的优先权，其内容均通过引用纳入本文。
技术领域
本公开涉及筛查并识别胎儿三体性的方法。
背景技术
产前筛查在大多数发达国家中为常规检查。产前筛查经常包括颈项透明层超声检测、测试母体血液以诊断染色体畸形和/或其他畸形，绒毛膜绒毛取样(CVS)来测试可影响胎儿的多个身体和智力状况，羊膜穿刺术和脐带穿刺术。部分情况下，如果产前筛查表示具有异常的胎儿的风险增加，则产前诊断测试还可用来更好地确定胎儿是否可能受到影响。
有些产前筛查对胎儿和/或母体造成不良后果的风险增加。例如，由于测试为侵入式，羊膜穿刺术和绒毛膜绒毛取样造成流产的风险增加。因此，由于不具有此类风险，产前筛查，如涉及母体血液测试的产前筛查优势显著。
当前进行的多数产前筛查包括对于胎儿的染色体畸形的产前筛查，其原因是这种畸形发生的频率较高。例如，在美国，每150例妊娠中便有一例发生染色体畸形。
染色体异常的一种普遍形式是三体性。这类染色体异常包括一个或多个额外染色体(或染色体的一部分)，并包括染色体21，18，13，9，8和22的三体性。例如，唐氏综合症发病的原因是具有一个额外的染色体21。
唐氏综合症是产前诊断检测的最常见的染色体异常形式。其普遍性与母体年龄高度相关，使用羊膜腔穿刺术或CVS获取的胎儿细胞样品来评估胎儿染色体组型，从而完成权威性的产前诊断。但是，当前侵入性的产前诊断与较高的流产风险(～1％)相关。与之类似，染色体18的三体性(爱德华综合征)通过对胎儿染色体组型进行评估来诊断。
当前对胎儿非整倍性的产前筛查测试和产前诊断具有一个或多个缺点。例如，多个当前测试为侵入式、耗时、需要高度的技能才能执行，缺乏足够的针对性和/或敏感性，具有高的假阴性率，要求将母体和胎儿DNA或RNA分离，或要求检索胎元细胞。
因此，需要新的方法以对胎儿三体性进行产前筛查和/或产前诊断，具体而言，需要新的方法进行产前筛查和/或产前诊断，以解决一个或多个问题和/或提供一个或多个优点。
发明内容
本公开涉及用于筛查、识别或评估胎儿三体性风险的方法，产品和试剂盒，还涉及识别表示胎儿三体性风险的标记物的方法。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示该对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许通过质谱法检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种质谱筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；
使用计算机处理器装置处理与所检测的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险；以及
基于所生成的可能性和/或风险，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的风险。
本公开的某些实施例提供了一种计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许计算机处理器装置接收与表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，并处理该数据，以生成对象体内胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险。
本公开的某些实施例提供了一种质谱仪的用于检测来自怀孕女性对象的生物样品一种或多种脂质标记物的用途，其中所述一种或多种脂质标记物表示怀孕女性体内胎儿三体性的风险。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，所述方法包括：
检测来自所述对象的一种或多种脂质标记物，其中所述一种或多种脂质标记物表示所述对象体内胎儿三体性的风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别所述怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示所述对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许通过质谱法检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示所述对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的质谱方法，所述方法包括：
处理来自所述对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示所述对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别所述怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
检测来自所述对象的一种或多种脂质标记物，其中所述一种或多种脂质标记物表示所述对象体内胎儿三体性的风险；以及
使用计算机处理器装置，处理与所述一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险；以及
基于所生成的可能性和/或风险，识别所述怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种确定怀孕女性对象怀有三体性胎儿风险的方法，所述方法包括：
检测来自所述对象的一种或多种脂质标记物，其中所述一种或多种标记物表示所述对象体内胎儿三体性的风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定所述对象怀有三体性胎儿的风险。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括：
识别一种或多种脂质标记物，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别所述一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括：
识别一种或多种脂质标记物，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别所述一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的方法，所述方法包括识别经组合表示胎儿三体性风险的多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种执行本文所述方法的试剂盒。
本文还公开了其他实施例。
附图说明
下图说明了某些实施例。应该理解，下列描述仅为了描述具体实施例，而非使用该描述进行限制。
图1示出了对三体性21和未感染的对照例进行t-测试的结果。1代表未感染的对照例，2代表三体性21。其使用p-值排序(未完全示出)。这些特征将三体性21与正常未感染的妊娠区别开。
图2示出了显示相对差异的前20个最为显著的单个m/z离子中所选的单个离子的轮廓图(profile plots)。
图3表示示出上调(3A)或下调响应(3B)的各个特征的MoM图。计算MoM时将各个特征响应除以未感染总体的中值响应。3A的特征为，索引#19，m/z 367.3，索引#26，m/z369.3，索引#42，m/z 429.4，索引#43，m/z 429.4，索引#46，m/z 445.4，索引#186，m/z680.6，索引#213，m/z 703.6，索引#222，m/z 711.6，索引#241，m/z 727.6，以及索引510，m/z 890.8。3B的特征为，索引#44，m/z 431.4，索引#175，m/z 670.6，以及索引#196，m/z688.6。
图4示出了T21与对照例之间特征质量618.5444的数据。
图5示出了T21与对照例之间特征质量481.3239的数据。
图6示出了T21与对照例之间特征质量626.4976的数据。
图7示出了T21与对照例之间特征质量555.5448的数据。
具体实施方式
本公开涉及用于筛查或识别胎儿三体性的方法、产品和试剂盒，以及用于识别表示胎儿三体性风险的标记物的方法。
本公开来自下列认知：非靶向整体代谢物分析法(non-targeted globalmetabolite profiling approach)可用于识别可能与胎儿畸形有关的标记物。使用该方法已识别了表示胎儿三体性存在与否的特定种类的脂质标记物。
公开的某些实施例具有一个或多个优点组合。作为示例，本文所公开实施例的部分优点包括一个或多个下列优点：改进了筛查和/或识别胎儿三体性的方法；评估胎儿三体性的可能性或风险的方法；筛查和/或识别胎儿三体性，或评估胎儿三体性的可能性或风险的新的标记物的使用；当需要时，可使用质/荷(m/z)分析执行筛查和/或识别胎儿三体性的方法；不会使得对母亲和/或胎儿的不良风险大幅增加的筛查和/或识别胎儿三体性的方法；用于筛查和/或识别胎儿三体性的一个或多个非核酸标记物的使用；用于筛查和/或识别胎儿三体性的一个或多个非蛋白质/非多元多肽标记物的使用；识别用于筛查胎儿三体性存在与否的新标记物的方法；可使用质谱分析筛查和/或识别胎儿三体性的方法；识别某一类别和/或质量的特定脂质，该脂质单独或组合起来表示胎儿三体性风险；解决了现有技术中的一个或多个问题；提供了现有技术中的一个或多个优点；或提供了具利用价值的商业选择。本文还公开了某些实施例的其他优点。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中一种或多种标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
某些实施例中，该方法用于产前筛查。某些实施例中，该方法用于产前诊断。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物表示胎儿三体性存在与否。某些实施例中，一种或多种脂质标记物表示胎儿三体性的存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物表示胎儿三体性不存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物表示胎儿三体性的可能性或风险。
某些实施例中，一种或多种标记物表示胎儿三体性的风险增加、胎儿三体性风险低或正常、和/或胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中一种或多种标记物表示对象体内胎儿三体性存在与否；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
某些实施例中，该筛查方法用于筛查胎儿三体性存在与否、识别怀孕女性对象体内的胎儿三体性、识别怀孕女性对象体内胎儿三体性不存在、排除怀孕女性对象体内的异常妊娠、识别胎儿三体性的可能性和/或风险、评估三体性的可能性或风险、用于产前筛查、用于产前测试和用于产前诊断。
本公开的某些实施例提供了一种识别对象体内胎儿三体性存在的方法。
本公开的某些实施例提供了一种排除对象体内胎儿三体性存在的方法。
本公开的某些实施例提供了一种确定怀孕女性对象怀有三体性胎儿的风险的方法。
术语“脂质”指的是疏水性或两亲性的分子。生物脂质的示例包括脂肪酸、甘油酯、甘油磷脂、神经鞘脂质、固醇脂质、孕烯醇酮脂、糖脂(saccharolipids)、聚酮、蜡质、类二十烷酸、单酸甘油脂、二酸甘油酯、三酸甘油脂、磷脂、神经鞘脂质、萜烯以及脂溶性维生素。脂质的大类和子类在脂质图大全资源中描述，详见http://www.lipid maps.org/，其在FahyE.etal(2009)Journal of Lipid ResearchApr；50Suppl:S9-14中有所描述。
术语“脂质”还包括脂质和/或脂质离子(正离子和/或负离子)的碎片，例如通过质谱法产生和/或检测的碎片(通常质量公差为+/-20ppm)，还包括形成后测量或检测到的任何脂质加合物。例如，可对样品进行处理以形成对脂质的加合物，随后检测脂质加合物。在这方面，本文提到的任何分子量或m/z值指的是没有加合物的脂质，可以理解，若将脂质作为加合物进行测量或检测，则会考虑加合物的分子量。
三体性通常是多体性的一种形式，其含有三条特定染色体(或染色体的一部分)而非正常的两条染色体。但应该理解，术语三体性还指易位三体性和/或嵌合三体性。三体性的示例包括染色体21的三体性(唐氏综合症)、染色体18的三体性(爱德华氏症)、染色体13的三体性(巴陶氏症)、染色体9的三体性、染色体8的三体性(Warkany综合症2)以及染色体22的三体性。
某些实施例中，胎儿三体性包括三体性21。某些实施例中，胎儿三体性包括三体性18。
某些实施例中，三体性包含一条额外的染色体。某些实施例中，三体性为嵌合三体性。某些实施例中，三体性为易位三体性。某些实施例中，三体性为含有一条额外染色体的三体性21。某些实施例中，三体性为嵌合三体性21。某些实施例中，三体性为易位三体性21(例如易位至第13、14或15条染色体上)。
某些实施例中，对象为人类对象。
某些实施例中，对象为哺乳动物对象。某些实施例中，对象为动物。某些实施例中，对象为家畜动物(如马、奶牛、绵羊、山羊、猪)，家养动物(如狗或猫)或其他类型的动物，如灵长类动物、兔子、大鼠、小鼠、鸟和实验动物。还考虑将筛查胎儿三体性应用在动物身上，并考虑识别标记物的动物模型。
某些实施例中，对象为怀孕女性对象或疑似怀孕对象。
某些实施例中，怀孕的人类女性对象为处于妊娠第一阶段的对象。某些实施例中，该方法包括检测妊娠第一阶段的一种或多种脂质标记物。
某些实施例中，怀孕女性对象为处于妊娠第二阶段的对象。某些实施例中，该方法包括检测妊娠第二阶段的一种或多种脂质标记物。
某些实施例中，对象遭受或容易发生胎儿三体性的风险或可能性增加。某些实施例中，对象年龄为大于或等于30岁，大于或等于35岁，或大于或等于40岁。
某些实施例中，该方法包括检测单一标记物。某些实施例中，该方法包括检测多种标记物。某些实施例中，该方法包括检测2种或更多标记物、3种或更多标记物、4种或更多标记物、或5种或更多标记物。某些实施例中，该方法包括检测至少2种标记物，至少3种标记物，至少4种标记物，或至少5种标记物。某些实施例中，该方法包括检测多种标记物。某些实施例中，该方法包括检测标记物组合。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括单一标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括多种标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括2种或更多标记物，3种或更多标记物，4种或更多标记物，或5种或更多标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括至少2种标记物，至少3种标记物，至少4种标记物，或至少5种标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括标记物组合。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括至少两种标记物。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物被同时检测和/或从同一样品中检测。例如，质谱分析可用于同时检测样品的多种脂质标记物。
某些实施例中，该方法包括检测一种或多种脂质标记物以及一种或多种其他非脂质标记物。某些实施例中，该方法包括检测一种或多种额外的标记物以及一种或多种脂质标记物。标记物可同时或不同时检测，并可使用相同或不同的检测方法。非脂质标记物的示例包括PAPP-A，β-hCG，AFP，uE3，以及抑制素。
例如，进行三体性21和18筛查时，额外的标记物包括-hCG，PAPP-A，AFP，uE3，以及抑制素A。现有技术中已知使用此类标记物的筛查方法。
例如，妊娠第14周之前PAPP-A水平降低通常与三体性21和三体性18的风险增加相关。β-hCG的水平升高通常与三体性21唐氏综合症的风险增加相关。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物分子量的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、500至3000、500至2000、以及500至1000道尔顿。某些实施例中，一种或多种标记物大小的范围为3000道尔顿或更小、2000道尔顿或更小、1000道尔顿或更小、500道尔顿或更小、400道尔顿或更小、300道尔顿或更小、200道尔顿或更小。可考虑其他范围或大小。
某些实施例中，一种或多种标记物分子量的范围为100至3000道尔顿。某些实施例中，一种或多种标记物分子量的范围为200至3000道尔顿。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的分子量为3000道尔顿或更小、2000道尔顿或更小、1500道尔顿或更小、1400道尔顿或更小、1300道尔顿或更小、1200道尔顿或更小、1100道尔顿或更小、1000道尔顿或更小、900道尔顿或更小、800道尔顿或更小、700道尔顿或更小、600道尔顿或500道尔顿或更小、400道尔顿或更小、300道尔顿或更小、或200道尔顿或更小。可考虑其他大小。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物分子量的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、500至2000、以及500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物分子量的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至300、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、200至300、300至3000、300至2000、300至1000、300至500、500至3000、500至2000以及500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物分子量的范围为300至1500、300至1400、300至1300、300至1200、300至1100、300至1000、300至900、300至800、300至700、300至600、300至500、300至400、400至1500、400至1400、400至1300、400至1200、400至1100、400至1000、400至900、400至800、400至700、400至600、400至500、500至1500、500至1400、500至1300、500至1200、500至1100、500至1000、500至900、500至800、500至700、500至600、600至1500、600至1400、600至1300、600至1200、600至1100、600至1000、600至900、600至800、600至700、700至1500、700至1400、700至1300、700至1200、700至1100、700至1000、700至900、700至800、800至1500、800至1400、800至1300、800至1200、800至1100、800至1000、800至900、900至1500、900至1400、900至1300、900至1200、900至1100、900至1000、1000至1500、1000至1400、1000至1300、1000至1200、1000至1100、1100至1500、1100至1400、1100至1300、1100至1200、1200至1500、1200至1400、1200至1300、1300至1500、1300至1400以及1400至1500道尔顿。可考虑其他范围。
对一种或多种脂质标记物的检测可通过现有技术中已知的一种或多种合适的方法实现。检测方法的示例包括质谱法、免疫法、电泳法、结合配对法、色谱法、显色法、化学反应法、吸收法、光谱法、亲和法及其组合。例如，Lipid Analysis in Oils and Fats(1997)edited by R.J.Hamilton,Springer Science&Business Media描述了脂质检测和/或分析。
例如，检测脂质标记物的方法包括质谱法，和/或高压液相色谱法。
某些实施例中，该方法包括质谱法检测一种或多种脂质标记物。某些实施例中，该方法包括通过质谱法检测一种或多种脂质标记物。某些实施例中，质谱法包括使用正离子质谱法。某些实施例中质谱法包括使用负离子质谱法。
某些实施例中，检测一种或多种脂质标记物包括质量测定。某些实施例中，检测包括质谱分析。质谱分析的示例包括电喷雾电离、基质辅助激光解吸电离、飞行时间质谱法、大气化学电离、大气光喷雾电离、液体提取表面分析、解吸电喷雾电离、三重四极杆(triplequadruple)质谱法、四重离子陷阱质谱法、微分迁移率质谱法。例如，Robert C.Murphy“Mass Spectrometry of Lipids”Springer-Verlag New York,LLC(1993)和Isaac G,etal(2007)“New mass-spectrometry-based strategies for lipids”Genet Eng(N Y).28:129-57描述了脂质的质谱检测和分析。
例如，确定胎儿三体性风险的质谱分析通常包括一个或多个下列步骤：从对象采集生物样品；处理生物样品以形成处理的样品使其可被质谱仪分析；在质谱仪中分析所处理的样品，以对与胎儿三体性存在与否或表示胎儿三体性可能性或风险的一种或多种标记物进行识别和/或量化；将女性对象的标记物水平与被确定为具有胎儿三体性的怀孕女性群体的标记物水平对比，和/或与被确定为不具有胎儿三体性的怀孕女性群体的标记物水平对比；并确定怀孕女性怀有或未怀有胎儿三体性胎儿的可能性或风险。
本公开的某些实施例提供了：使用质谱仪，以确定与胎儿三体性存在与否相关的脂质标记物，和/或表示胎儿三体性的可能性或风险的脂质标记物在女性生物样品中是否存在。
某些实施例中，该方法包括确定一种或多种脂质标记物的存在和/或水平。某些实施例中，检测一种或多种脂质标记物包括检测一种或多种脂质标记物的存在和/或水平。例如，一种或多种脂质标记物的浓度可用于对三体性进行风险评估，和/或在某一丰度的一种或多种脂质标记物的存在可用于对三体性进行风险评估。
某些实施例中，该方法包括确定一种或多种脂质标记物的质量和/或确定一种或多种脂质标记物的一个或多个碎片的质量。
某些实施例中，该方法包括通过质谱法检测一种或多种脂质标记物。
某些实施例中，该方法包括检测一种或多种脂质标记物，其分子量的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、500至2000以及500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，该方法包括检测一种或多种脂质标记物，其分子量的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至300、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、200至300、300至3000、300至2000、300至1000、300至500、500至3000、500至2000、以及500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，该方法包括检测一种或多种脂质标记物，其分子量的范围为300至1500、300至1400、300至1300、300至1200、300至1100、300至1000、300至900、300至800、300至700、300至600、300至500、300至400、400至1500、400至1400、400至1300、400至1200、400至1100、400至1000、400至900、400至800、400至700、400至600、400至500、500至1500、500至1400、500至1300、500至1200、500至1100、500至1000、500至900、500至800、500至700、500至600、600至1500、600至1400、600至1300、600至1200、600至1100、600至1000、600至900、600至800、600至700、700至1500、700至1400、700至1300、700至1200、700至1100、700至1000、700至900、700至800、800至1500、800至1400、800至1300、800至1200、800至1100、800至1000、800至900、900至1500、900至1400、900至1300、900至1200、900至1100、900至1000、1000至1500、1000至1400、1000至1300、1000至1200、1000至1100、1100至1500、1100至1400、1100至1300、1100至1200、1200至1500、1200至1400、1200至1300、1300至1500、1300至1400、以及1400至1500道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，该方法包括检测一种或多种脂质标记物，其大小为3000道尔顿或更小、2000道尔顿或更小、1500道尔顿或更小、1400道尔顿或更小、1300道尔顿或更小、1200道尔顿或更小、1100道尔顿或更小、1000道尔顿或更小、900道尔顿或更小、800道尔顿或更小、700道尔顿或更小、600道尔顿或500道尔顿或更小、400道尔顿或更小、300道尔顿或更小、或200道尔顿或更小。可考虑其他大小。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z为3000或更小。某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z为2000或更小。某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z为1000或更小。某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z为1700或更小。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z为3000道尔顿或更小、2000道尔顿或更小、1500道尔顿或更小、1400道尔顿或更小、1300道尔顿或更小、1200道尔顿或更小、1100道尔顿或更小、1000道尔顿或更小、900道尔顿或更小、800道尔顿或更小、700道尔顿或更小、600道尔顿或500道尔顿或更小、400道尔顿或更小、300道尔顿或更小、或200道尔顿或更小。可考虑其他大小。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、500至2000和500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的质荷比m/z的范围为100至3000、100至2000、100至1000、100至500、100至300、100至200、200至3000、200至2000、200至1000、200至500、200至300、300至3000、300至2000、300至1000、300至500、500至3000、500至2000、以及500至1000道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中、一种或多种脂质标记物的质荷比m/z的范围为300至1500、300至1400、300至1300、300至1200、300至1100、300至1000、300至900、300至800、300至700、300至600、300至500、300至400、400至1500、400至1400、400至1300、400至1200、400至1100、400至1000、400至900、400至800、400至700、400至600、400至500、500至1500、500至1400、500至1300、500至1200、500至1100、500至1000、500至900、500至800、500至700、500至600、600至1500、600至1400、600至1300、600至1200、600至1100、600至1000、600至900、600至800、600至700、700至1500、700至1400、700至1300、700至1200、700至1100、700至1000、700至900、700至800、800至1500、800至1400、800至1300、800至1200、800至1100、800至1000、800至900、900至1500、900至1400、900至1300、900至1200、900至1100、900至1000、1000至1500、1000至1400、1000至1300、1000至1200、1000至1100、1100至1500、1100至1400、1100至1300、1100至1200、1200至1500、1200至1400、1200至1300、1300至1500、1300至1400、以及1400至1500道尔顿。可考虑其他范围。
某些实施例中，脂质标记物的质量公差为+/-5ppm，+/-10ppm，+/-20ppm，+/-50ppm或+/-100ppm。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括具有一个或多个离子的脂质，该离子具有下列指定m/z：703.5580、369.3491、367.3312、680.5953；687.5651、445.3648、445.3633、727.5567、429.3706、1202.3250、431.3875、429.3726、844.6007、688.5950、890.7703、1276.3440、711.5619、1128.3140、670.6080，和/或一个或多个具有+/-20ppm质量公差，和/或基本类似m/z和/或保留时间的上述脂质标记物。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括具有一个或多个离子的脂质，该离子具有下列指定m/z：340.3576、355.2511、363.2531、390.7783、399.3453、404.7929、407.2269、408.3136、427.3771、429.2121、447.3448、447.3460、461.3620、469.3597、471.4063、473.3184；478.3545、481.3239；489.4134、506.4412、530.5135、544.5071、551.5172、555.4646、558.5448、568.4784、579.4305、603.4949、604.5660、607.5640、618.5444、626.4976、640.5345、640.5699、647.5577、676.4879、684.5594、700.5542、728.5875、740.5176、744.5807、772.6135、780.5458、788.6118、798.5637、817.5510、816.6401、820.5947、826.5947、832.6303、834.5978、850.5523、860.6632、864.5363、876.6591、902.5855、904.6889、904.6932、920.6888、928.5873、948.7143、964.7115、992.7408、1008.7339、1036.7696、1052.7680、1078.9686、670.6080、和/或一个或多个具有+/-20ppm的质量公差，和/或基本类似m/z的上述脂质标记物。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括具有一个或多个离子的脂质，该离子具有图1所示的指定m/z和/或保留时间，和/或基本类似的m/z和/或保留时间，和/或一种或多种脂质标记物包括具有一个或多个离子的脂质，该离子具有表2或3所示的指定m/z和/或基本类似的m/z。
本公开的某些实施例提供了使用质谱仪检测来自怀孕女性对象的生物样品的一种或多种脂质标记物，其中一种或多种脂质标记物表示怀孕女性体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种质谱筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法。
本公开的某些实施例提供了一种质谱筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种质谱筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内的胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个或多个脂肪酸或脂肪酰基。
脂肪酸的示例包括直链饱和脂肪酸，支链脂肪酸，含有一个或多个双键和/或炔键的脂肪酸、杂原子脂肪酸、环状脂肪酸、硫代脂肪酸、十八烷酸、类二十烷酸、类花生酸(docosanoids)、脂肪酸酯、如蜡酯、二酯和内酯、脂肪醇、脂肪醛、脂肪胺、以及脂肪酯。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个、两个、三个或四个链脂肪酸基团。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个、两个、三个或四个长链脂肪酸基团。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个或多个长链脂肪酸基团。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括两种长链脂肪酸基团。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个或多个长链多不饱和脂肪酸基团。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括两种长多元不饱和链脂肪酸基团。某些实施例中，一个或多个长链脂肪酸基团包括长链多不饱和脂肪酸基团。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括链长为14至30个碳原子的一个或多个长链脂肪酸基团。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括链长为16至22个碳原子的一个或多个长链脂肪酸基团。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括磷脂、甘油酯、甘油磷脂、神经鞘脂质、神经酰胺、固醇、鞘糖脂、多萜醇、血溶性脂、脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、单甘酯、类异戊二烯、类前列腺素、类二十烷酸、固醇衍生物、孕烯醇酮脂、糖脂、饱和脂肪酸、长链饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、长链多不饱和脂肪酸、胆固醇及其异构体、脱氢胆固醇及其异构体、胆固醇酯及其异构体、脱氢胆固醇酯及其异构体、任何上述脂质标记物的溶血性(lyso)衍生物和/或任何上述脂质标记物的碎片和/或离子中的一个或多个。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括一个或多个磷脂。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括胆固醇及其异构体、脱氢胆固醇及其异构体、胆固醇酯及其异构体、脱氢胆固醇酯及其异构体，和/或任何上述脂质的碎片和/或离子。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括C22：3的胆固醇酯、C20：5的二羟酯胆固醇酯、胆固醇以及7-脱氢胆固醇中的一个或多个。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括脂质的一个或多个离子，其具有下列指定的m/z和/或保留时间：
Figure GDA0003372010410000111
和/或一个或多个具有+/-20ppm的质量公差和/或基本类似m/z和/或保留时间，和/或碎片和/或其离子的上述脂质标记物。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括具有一个或多个离子的脂质，该离子具有图1所示的指定m/z和/或保留时间，和/或基本类似的m/z和/或保留时间，和/或所述脂质具有碎片和/或其离子。
某些实施例中，对于上述或图1所示的一个或多个各个指定m/z和/或保留时间，一种或多种脂质标记物包括胆固醇及其异构体，脱氢胆固醇及其异构体，胆固醇酯及其异构体，脱氢胆固醇酯及其异构体，和/或碎片和/或其离子。
某些实施例中，该方法包括确定一种或多种脂质标记物的一个或多个特征。一个或多个特征的示例包括标记物的存在和/或水平、标记物的改性、标记物的定位、或标记物与另一分子的关联、脂质的质谱分析图案(或轮廓)、脂质质谱分析的碎片化图案、浓度、以及丰度。还考虑其他特征类型。
某些实施例中，一个或多个特征包括一种或多种脂质标记物的存在和/或水平。
某些实施例中，一个或多个特征表示对象体内胎儿三体性的存在与否。某些实施例中，一个或多个特征表示对象体的内胎儿三体性的可能性和/或风险。例如，一种或多种标记物变化的水平和/或浓度可表示对象体内胎儿三体性存在与否，和/或表示对象体内胎儿三体性的可能性和/或风险。
某些实施例中，检测一种或多种脂质标记物包括检测一种或多种脂质标记物和/或碎片和/或其离子的存在和/或水平。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物的水平发生变化。某些实施例中，一种或多种标记物的水平升高。某些实施例中，一种或多种标记物的水平降低。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高升高表示胎儿三体性的风险增加。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平降低表示胎儿三体性的风险增加。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高升高表示胎儿三体性风险降低。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平降低表示胎儿三体性风险降低。
某些实施例中，一个或多个脂质标记物水平升高与一种或多种其他脂质标记物水平降低结合表示胎儿三体性的风险增加。某些实施例中，一个或多个脂质标记物水平升高与一种或多种其他脂质标记物水平降低结合表示胎儿三体性风险降低。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高表示胎儿三体性的存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平降低表示胎儿三体性的存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高表示胎儿三体性不存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平降低表示胎儿三体性不存在。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高以及一种或多种其他脂质标记物水平降低表示胎儿三体性的存在。某些实施例中，一种或多种脂质标记物水平升高以及一种或多种其他脂质标记物水平降低表示胎儿三体性不存在。
某些实施例中，一种或多种标记物的变化的水平为变化1.1倍或更多、1.2倍或更多、1.3倍或更多、1.4倍或更多、1.5倍或更多、1.6倍或更多、1.7倍或更多、1.8倍或更多、1.9倍或更多、2倍或更多、3倍或更多、4倍或更多、5倍或更多、10倍或更多、20倍或更多、50倍或更多、或100倍或更多。变化可以为一种或多种标记物的上调和/或下调。例如，一种或多种标记物的水平可增加2倍大于或更多、3倍或更多、4倍或更多、5倍或更多、10倍或更多、20倍或更多、50倍或更多、或100倍、或降低2倍或更多、3倍或更多、4倍或更多、5倍或更多、10倍或更多、20倍或更多、50倍或更多、或100倍或更多。
某些实施例中，该方法包括将一种或多种标记物的一个或多个特征与其他标记物或其他标记物的特征进行比较。某些实施例中，该方法包括将一种或多种标记物的一个或多个特征与标记物的一组参考标记物或特征相比较。通常情况下，此类标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象体内和不具有胎儿三体性的怀孕女性对象体内存在差异。
某些实施例中，该方法包括将一种或多种脂质标记物的一个或多个特征与下列中的一个或多个进行比较：(i)已知用于表示胎儿三体性的风险增加的一种或多种其他标记物的一个或多个特征；(ii)已知用于表示胎儿三体性风险降低的一种或多种其他标记物的一个或多个特征；(iii)已知用于表示胎儿三体性存在的一种或多种其他标记物的一个或多个特征；以及(iv)已知用于表示胎儿三体性不存在的一种或多种其他标记物的一个或多个特征。如本文所述，某些实施例中一个或多个特征包括一种或多种标记物的存在和/或水平。表示风险存在或胎儿三体性不存在的其他标记物已为人所知或可被识别。
某些实施例中，该方法包括将一种或多种脂质标记物与下列中的一个或多个进行比较：(i)已知用于表示胎儿三体性风险增加的一种或多种标记物；(ii)已知用于表示胎儿三体性风险降低的一种或多种标记物；(iii)已知用于表示怀孕女性对象体内存在具有胎儿三体性胎儿的一种或多种标记物；(iv)已知用于表示怀孕女性对象体内不具有胎儿三体性胎儿的一种或多种标记物。
某些实施例中，该方法包括将一种或多种脂质标记物与下列中的一个或多个进行比较：(i)已知用于表示胎儿三体性风险增加的一种或多种标记物；(ii)已知用于表示胎儿三体性风险降低的一种或多种标记物；(iii)已知用于表示胎儿三体性存在的一种或多种标记物；(iv)已知用于表示胎儿三体性不存在的一种或多种标记物。
某些实施例中，该方法包括将一种或多种脂质标记物或一种或多种脂质标记物的特征与一种或多种对照标记物和/或一种或多种参考标记物比较。例如，对照标记物可用于对不同样品或用于对比目的的标记物水平进行标准化。某些实施例中，一种或多种对照标记物包括来自其妊娠未受感染的对象的一种或多种标记物和/或来自其妊娠受到感染的对象的一种或多种标记物。
某些实施例中，可使用一种或多种参考标记物，例如，以对标记物的大小和/或检测进行校验，和/或监测样品处理。某些实施例中，一种或多种参考标记物被可检测地标记。例如，一种或多种参考标记物可被标记，如使用同位素标记。
某些实施例中，该方法包括使用脂质作为参考标记物以通过质谱法检测一种或多种脂质标记物。某些实施例中，该方法包括使用同位素标记的脂质作为参考标记物，以对一种或多种脂质标记物的相对量进行量化。
某些实施例中，该方法包括确定一种或多种标记物相对一个或多个其他标记物的比值。例如，可确定一种或多种脂质标记物相对一种或多种其他脂质标记物的比值，该比值可表示胎儿三体性风险，和/或可确定一种或多种脂质标记物相对一种或多种非脂质标记物的比值，该比值可表示胎儿三体性风险。
某些实施例中，该方法包括检测妊娠第一阶段对象体内的一种或多种脂质标记物。某些实施例中，该方法包括检测妊娠第二阶段对象体内的一种或多种标记物。
某些实施例中，该方法包括获取来自对象的生物样品。术语“样品”指的是从对象获取的样品，或其任何衍生物，提取物，浓缩物，混合物，或处理过的其他形式的样品。
现有技术中已知获取生物样品的方法。生物样品的示例包括生物液体、血液样品、血浆样品、血清样品、尿样、眼泪样品、唾液样品、棉签擦拭样品、毛发样品、皮肤样品、干燥血液样品、载体上的干燥样品(dried samples on a matrix)、活体切片、以及粪便样品。现有技术中已知收集生物样品的方法。例如，可使用标准技术，如向收集管中抽血、针刺后用滤纸吸收(如Guthrie卡)，和使用真空抽血设备(例如塔索公司(Tasso Inc.)的Hemolink设备)收集血液样品。
某些实施例中，生物样品为生物液体。某些实施例中，生物液体包括血液、血浆和血清中的一种或多种。某些实施例中，生物液体包括母体血液，母体血浆和母体血清中的一种或多种。
某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括生物液体中的一种或多种标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物包括血液标记物、血浆标记物和/或血清标记物中的一种或多种。
某些实施例中，该方法包括获取来自对象妊娠第一阶段的生物样品。某些实施例中，该方法包括获取来自对象妊娠第二阶段的生物样品。
某些实施例中，该方法包括处理生物样品，以允许检测一种或多种标记物。某些实施例中，该方法包括处理从对象获取的生物样品并检测一种或多种标记物。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物通过质谱法；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许通过质谱法检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
某些实施例中，该方法包括处理生物样品，以允许检测生物样品中的一种或多种脂质标记物。例如，以允许检测脂质标记物，该样品可置于基本为有机的溶剂中，以将分子分离为有机/无机组分/极性和非极性组分。溶剂的示例包括甲醇、正丁醇、丙醇、乙腈、氯仿及其混合物(包括具有水基溶剂的混合物)，提取技术如Folch技术(Folch Jetal(1957)JBiol Chem.226(1):497-509.)。如果需要，样品可进一步处理，以允许使用所需的方法检测一种或多种标记物。
某些实施例中，该方法包括将生物样品，和/或其处理过的形式、提取物、衍生物、成分或组分置于基本为有机的溶剂中并分离有机组分。
某些实施例中，使用有机溶剂提取之前和/或之后添加参考脂质。某些实施例中，使用有机溶剂提取之前和/或之后添加同位素标记的脂质。某些实施例中，所述同位素标记的脂质为同位素标记的天然存在的脂质。
某些实施例中，该方法包括将生物样品(和/或其提取物、衍生物、成分或组分)置于溶剂中并分离有机组分。某些实施例中，该方法包括将生物样品(和/或其提取物、衍生物、成分或组分)置于基本为非极性的溶剂并分离非极性组分。某些实施例中，该方法包括使用基本为非极性的溶剂处理生物样品。某些实施例中，该方法包括使用有机溶剂处理生物样品。还可添加缓冲液，例如用以维持pH的缓冲液，例如氢氧化铵或碳酸氢铵。
某些实施例中，方法包括使用可检测的参考化合物示踪(spiking)生物样品(和/或其提取物、衍生物、成分或组分)。例如，可检测的参考化合物可为同位素标记、放射性标记、或荧光标记或化学模拟的单一物质或混合物。还可考虑其他形式的标记。还考虑了生物样品的衍生物或其一部分，以增强信号检测或简化异构体或同量异位(isobaric)的复杂性。
某些实施例中，该方法包括色谱分离步骤。某些实施例中，该方法包括液相色谱分离步骤，如HPLC。
某些实施例中，为进行质谱分析，该方法包括电离样品，根据其质量和电荷分拣并分离产生的离子，以及测量所述离子。某些实施例中，该方法包括使用液相色谱-质谱法(例如HPLC-MS)。
某些实施例中，该方法包括使用计算机处理器装置处理与一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成或确定胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险。
某些实施例中，产生或确定上述可能性和/或风险包括对一个或多个脂质标记物进行多次均值分析，以确定的/生成风险的可能性比值。还考虑确定所述可能性和/或风险的其他方法。
某些实施例中，该方法包括通过互联网将数据/信息传输至计算机处理装置。
某些实施例中，该方法包括通过互联网将与一个或多个特征相关的传输数据传输至计算机处理装置，以生成胎儿三体性发生的可能性或风险，如胎儿三体性存在与否的可能性或风险。
例如，基于网络的统计软件可用于评估胎儿三体性风险，并提供了胎儿三体性发生的风险可能性。
某些实施例中，该方法包括处理数据/信息，以将对象体内的风险归类为具有增加的风险、高风险、适中风险、低风险、正常风险或降低的风险。某些实施例中，该方法包括处理数据/信息以识别胎儿三体性存在与否。某些实施例中，该方法包括处理数据/信息以排除胎儿三体性的存在。
计算机处理装置已为现有技术所知。现有技术中已知发送和/或接收数据/信息的方法。
本公开的某些实施例提供了使用计算机处理器确定胎儿三体性的可能性或风险的系统。现有技术中已知使用计算机处理器的系统。其示例见本文描述。
本公开的某些实施例提供了一种使用配置为处理本文所述方法的计算机处理器来确定胎儿三体性风险的系统。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；
使用计算机处理器装置，处理与所检测的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险；以及
基于所生成的可能性和/或风险，确定怀孕女性对象体内的胎儿三体性风险。
本公开的某些实施例提供了一种筛查怀孕女性对象体内胎儿三体性的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；
使用计算机处理器装置处理与所检测的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险；以及
基于所生成的可能性和/或风险，确定怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了计算机可读介质。
本公开的某些实施例提供了计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许所述计算机处理器装置接收数据——其与表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关，并处理所述数据，以生成对象体内胎儿三体性的可能性和/或风险。
本公开的某些实施例提供了计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许所述计算机处理器装置接收数据——其与表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关，并处理所述数据，以生成对象体内胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险。
本公开的某些实施例提供了计算机处理器装置，其包括本文所述的计算机可读介质。
本公开的某些实施例提供了质谱仪，其具有计算机处理器装置，包括本文所述的计算机可读介质。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，使用了本文所述的方法。
胎儿三体性见本文的描述。某些实施例中，胎儿三体性包括三体性21。
脂质标记物以及检测脂质标记物的方法如本文所述。确定风险的方法如本文所述。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许检测脂质标记物；
检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
处理来自对象的生物样品，以允许通过质谱法检测脂质标记物；
通过质谱法检测所处理的样品中表示对象体内胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
使用计算机处理器装置处理与一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险；以及
基于所生成的可能性和/或风险，识别怀孕女性对象体内胎儿三体性存在与否。
本公开的某些实施例提供了一种使用本文所述的方法，以识别胎儿三体性风险增加的怀孕女性对象的方法。
本公开的某些实施例提供了一种识别胎儿三体性风险增加的怀孕女性对象的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中该一种或多种脂质标记物表示对象体内的胎儿三体性风险增加；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，识别胎儿三体性风险增加的对象。
本公开的某些实施例提供了一种使用本文所述的方法来确定胎儿三体性风险的方法。
本公开的某些实施例提供了一种确定怀孕女性对象怀有三体性胎儿的风险的方法，该方法包括：
检测来自对象的一种或多种脂质标记物，其中一种或多种标记物表示对象体内的胎儿三体性风险；以及
基于所检测的一种或多种脂质标记物，确定对象怀有三体性胎儿的风险。
胎儿三体性如本文所述。某些实施例中，胎儿三体性包括三体性21。
脂质标记物以及检测脂质标记物的方法如本文所述。确定风险的方法如本文所述。
某些实施例中，所述确定风险包括计算机处理器装置处理与一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关的数据。计算机处理器装置如本文所述。
某些实施例中，所述确定风险包括对一个或多个脂质标记物进行多次均值分析，以确定风险的可能性或比值。
本公开的某些实施例提供了一种用于实施本文所述方法的试剂盒。
某些实施例中，所述试剂盒为质谱分析试剂盒。
某些实施例中，所述试剂盒包括一个或多个试剂和/或指令以实施本文所述的方法。
某些实施例中，所述试剂盒包括处理用于分析生物样品的一个或多个试剂，和/或用于检测一种或多种标记物的一个或多个试剂。生物样品和试剂的示例如本文所述。
试剂盒使用的溶剂示例包括甲醇、丁醇、丙醇、乙腈、氯仿及其混合物(包括含有水基溶剂的混合物)，提取技术的示例如Folch技术(Folch Jetal(1957)J Biol Chem.226(1):497-509.)。
某些实施例中，所述试剂盒包括一种或多种隔离的和/或以可检测的方式标记的标记物。
术语“隔离”指的是实体，如分子，其至少部分地与其他分子分离。标记物的示例如本文所述。某些实施例中，一种或多种隔离的和/或以可检测的方式标记的标记物包括一种或多种表示胎儿三体性存在与否的标记物。某些实施例中，一种或多种隔离的和/或以可检测的方式标记的标记物包括一种或多种脂质标记物。某些实施例中，一种或多种标记大小的范围为200至3000道尔顿。其他大小如本文所述。某些实施例中，使用质谱法测定时，一种或多种标记物的质荷比，即m/z比值为1700或更少。可检测的标记如本文所述。可检测式标记的方法是已知的。例如，可检测的标记可包括抗原，酶，荧光基团，猝灭剂，染料，同位素，放射性同位素，或发光基元(luminescent moiety)。某些实施例中，所述隔离的和可检测的被标记的一种或多种标记物包括同位素标记(如2H，18O，13C或15N)。
某些实施例中，所述试剂盒包括一种或多种对照标记物。某些实施例中，一种或多种对照标记物包括来自其妊娠未感染的对象的一种或多种标记物和/或来自其妊娠被感染的对象的一种或多种标记物。
某些实施例中，所述试剂盒包括对生物样品进行示踪的化合物。某些实施例中，该化合物包括非生理性化合物，如血液中没有的脂质标记物。
某些实施例中，所述试剂盒包括一种或多种参考标记物。例如，参考标记物可用于对不同样品或用于比较目的的标记物的水平进行标准化。某些实施例中，参考标记物可用于验证标记物的大小和/或对其进行检测，和/或监测样品处理。某些实施例中，一种或多种参考标记物以可检测的方式标记。例如，一种或多种参考标记物可被标记，如用同位素标记，如用含氘合物的脂质标记。
某些实施例中，所述试剂盒包括处理生物样品的指令和/或检测生物样品中一种或多种标记物的存在和/或水平的指令。某些实施例中，所述试剂盒包括处理血液样品的指令和/或使用质谱分析检测一种或多种脂质标记物的存在和/或水平的指令。
某些实施例中，所述试剂盒包括用于确定是否一种或多种脂质标记物表示具有胎儿三体性的胎儿或不具有胎儿三体性的胎儿的指令和/或信息。某些实施例中，该信息包括与胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险相关的数据。
某些实施例中，所述试剂盒包括计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许所述计算机处理器装置接收数据——其与一种或多种标记物的一个或多个特征的数据相关，并处理所述数据，以生成胎儿三体性存在与否的可能性和/或风险。
某些实施例中，所述试剂盒用于筛查胎儿三体性，以识别怀孕女性对象体内的胎儿三体性，识别怀孕女性对象体内不存在胎儿三体性，排除怀孕女性对象体内的异常妊娠，识别胎儿三体性的可能性和/或风险，用于产前筛查、产前检测和产前诊断。实施上述试剂盒用途的方法如本文所述。
某些实施例中提供了试剂盒，其包括分析柱和/或分离标记物时使用的流动流动相。某些实施例中，所述试剂盒包括表示对象体内胎儿三体性存在与否的标记物的标准。
本公开的某些实施例提供了一种识别本文所述的表示胎儿三体性风险和/或表示胎儿三体性存在与否的一种或多种标记物的方法。
以这种方法识别的标记物为备选标记物，例如，用于产前筛查和产前诊断检测。
胎儿三体性如本文所述。某些实施例中，胎儿三体性包括三体性21。
脂质标记物以及检测脂质标记物的方法如本文所述。确定风险的方法如本文所述。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括：
识别一种或多种脂质标记物，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别所述一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物的方法，所述方法包括：
识别一种或多种脂质标记物，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别所述一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括识别经组合表示胎儿三体性风险的多种脂质标记物。
某些实施例中，该方法包括质谱分析。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括：
确定一种或多种脂质标记物存在，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性风险的一种或多种脂质标记物。
本公开的某些实施例提供了一种识别表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物的方法，该方法包括：
确定一种或多种脂质标记物存在，该脂质标记物在具有胎儿三体性的怀孕女性对象与没有胎儿三体性的怀孕女性对象体内的存在具有差异；以及
识别所述一种或多种脂质标记物，将其作为表示胎儿三体性存在与否的一种或多种脂质标记物。
确定标记物的存在是否具有差异的方法如本文所述。某些实施例中，该方法包括使用质谱分析。对标记物的存在和/或水平进行比较的方法如本文所述。
参考示例，识别新的备选标记物的方法也大致如本文所述。
本公开的某些实施例提供了使用本文所述的方法进行识别的一种或多种脂质标记物。某些实施例中，一种或多种脂质标记物表示胎儿三体性存在与否，或表示胎儿三体性风险。
特定示例性实施例由部分下列示例描述。应该理解，下列描述仅用于说明具体实施例而不限于上述描述。
实施例1-代谢组学LC/MS实验条件
一实验中，如下所述，将一组三体性21样品与对照例组相区别。
从未感染妊娠和三体性21感染妊娠选择血清样品。根据福尔茨(Folch)法(FolchJetal(1957)J Biol Chem.226(1):497-509.)，将这些血清样品提取为一式两份。血清(25L)加入25L去离子水提取1小时(最小值)，并加入在具有聚四氟乙烯内衬螺旋盖的1.5mL玻璃管中的1000μL氯仿：甲醇(2：1，v/v)，并在前10分钟进行剧烈搅拌。该阶段加入内标物(氘化(d4)血溶性磷脂酰胆碱，0.125μg/样品，由Avanti Polar Lipids Inc.生产)。加入200L 0.1M的氯化钾溶液并剧烈搅拌5分钟，产生相分离，并离心以辅助相分离。在对蛋白质界面的扰动尽量小的情况下，小心吸出上层水相并弃之。使用玻璃巴氏吸管将含有有机溶剂的下层脂质相移入新的(fresh)玻璃取样管(其具有500μL的玻璃插头)，注意避开在界面的变性蛋白质。将取样管的温度维持在40℃，使用氮气流使有机溶剂蒸发，以干燥各个取样管中的物质。使用200L的氯仿：甲醇(1：2，v/v)来恢复干燥的样品，并在-20℃储存，准备用于质谱分析。
在Agilent Technologies Inc.的Poroshell 120,C18,2.1x100mm,2.7m柱上分离脂质提取物，该柱连接至Shimadzu Nexera自动取样器/液相色谱系统。使用双溶剂系统，其中流动相A由甲醇：水(3：1，v/v)和7.5mM的甲酸铵组成，流动相B由2-丙醇和7.5mM的甲酸铵组成。溶剂为质谱级别。HPLC程序：0-5分钟，10％B；5-15分钟，B梯度为10％至80％；15-20分钟，80％B；20-25分钟，B梯度为80％至10％；25-30分钟，10％B。流率为300μL/分钟。样品盘保持在4℃，柱温保持在50℃。使用具有
Figure GDA0003372010410000201
TF 1.5.1软件的AB SCIEX三
Figure GDA0003372010410000202
5600QTOF(AB SCIEX，Concord，ON)，分析UHPLC的洗脱液。将色谱溶剂通过ESI探针导入离子源。
使用ESI电离在正离子极性中分析各个样品。应该注意，虽然此处提供的细节与正离子分析相关，对于某些脂质而言，由于其仅在负离子极性中电离，需进行负离子分析。离子源参数包括45的雾化气体GS1，45的雾化气体GS2，30的气帘气，喷雾电压为5400，去簇电压为70V，ESI源的操作温度为500℃。使用的实验设置为MS扫描，用DDA标准-3充电状态启动MS/MS，超过150cps，排除3秒，重复2次后排除之前的离子，排除4Da以内的同位素，并使用动态背景减法。使用的扫描范围为m/z 50-2000，其使用0.1秒累积TOF MS，其后0.05秒累积各个TOF MS/MS。CID的碰撞能为45。
使用应用生物系统(Framingham)的标记物视图软件v1.2.1.1执行t-测试和主成分分析(PCA)，以识别表示三体性的离子。
标记物视图方法：使用下列参数，通过File<import<LC/MS_data_from-wiff命令，将对照例和受感染样品的数据输入标记物视图：
周期：1
实验：1
最小保留时间：10.00min
最大保留时间：24.00min
减法抵消(Subtraction Offset)：10次扫描
减法乘法因数(Subtraction Mult.Factor)：1.3
噪声阈：1000
最小光谱峰宽：20ppm
最小RT峰宽：3次扫描
保留时间公差：0.50min
质量公差：20.0ppm
使用整体排除列表：False
所需样品数：18
最大峰数：5000
利用原数据区域：True
未感染的对照例：SP 3、7、10、13、14、17、19、22、23、27、34、37、38。三体性21：SP 1、16、26、29、33。使用可用的t-测试选项和默认设置执行t测试。
图1示出了对三体性21和未感染对照例进行t-测试的结果。特征将三体性21与正常未感染的妊娠相区别。P-值被发现对于直到85m/z的离子显著(<0.05)。某些分子中，通过平均值1(未感染的)响应/平均值2(感染三体性21)响应计算的倍数变化还显示为增加和降低。例如，部分脂质标记物增加，某些情况下，增加至8倍(369.3/16.0(索引#26))，而其他标记物减少超过2倍，(688.6/15.6(索引#196))。这些标记物，单独地、以特定组合、或共同提供了一组可用标记物，其可用作识别三体性妊娠的轮廓线(profile)。
图2示出了显示相对差异的前20个最为显著的单个m/z离子中所选的单个m/z离子的轮廓图。图2示出了单个m/z离子的响应(曲线下的强度面积)，当图可以区分未感染的对照例与来自三体性的样品[未感染的对照例-SP 3，7，10，13，14，17，19，22，23，27，34，37，38；三体性21-SP 1，16，26，29，33]时。这些标记物，单独地、以特定组合、或共同提供了一组可用标记物，其可用作识别三体性妊娠的轮廓线。
另一种统计工具经常用于报告临床分析，尤其是单项测试变化较大时，，为中值倍数(MoM)。这用于描述单个测试如何偏离(deviate)未感染患者的中值。将MoM分析应用于基于p-值的最显著特征提供了可替代的区别技术，以区别疑似三体性的妊娠。图3A和B表示显示上调或下调响应的各个特征的MoM框图。计算MoM时，将特征的各个响应除以未感染总体的各自中值响应。一示例中，对于特征索引#26，使用4.368e6个未感染总体的中值响应除以所有单个例子响应，以得到MoM值。各个情况下的MoM值用于生成框图，其中各个框表示四分位间距。3A特征：索引#19，367.3；索引#26，369.3；索引#42，429.4；索引#43，429.4；索引#46，445.4；索引#186，680.6；索引#213，703.6；索引#222，711.6；索引#241，727.6；以及索引#510，890.8。3B特征：索引#44，431.4；索引#175，670.6以及索引#196，688.6。
为识别目的，使用下列链接的脂质图大全提供的在线数据基本搜索工具：http://www.lipidmaps.org/tools/ms/LMSD_search_mass_options.php，以对MS伪分子离子进行比较，从而为以ppm度量的最接近的公差分配标识。在某些情况下，当碎片图(数据未示出)不匹配时，手动指定结构。
MoM中描述了最为显著的分子的标识，该标识暂时示于表1。基于精确的质量组合，碎片化机制和参考文献，对各个脂质代谢物进行标识。
表1-识别与MOM分析有关的最显著化合物
Figure GDA0003372010410000221
根据所进行的分析，具有下列指定m/z(+/-20ppm质量公差)和/或保留时间的脂质标记物表示可用于单独、以特定组合或共同识别感染三体性胚胎的一组标记物，其如表2所示：
表2
Figure GDA0003372010410000222
实施例2-试剂盒
通常情况下，用于本文所述方法的试剂盒包括一个或多个标准物，校准物，试剂和指令/方法，用于从生物样品，如血清中提取脂质和/或对其进行分析。
还可包括软件，其包含统计方法，以预测样品在未感染范围内或可能被感染。
样品提取通常在存在多个标准物，如由稳定同位素和/或非生理性脂质(如氘化(d4)溶血性磷脂酰胆碱，0.125μg/20uL血清样品，由Avanti polar lipids Inc.生产)组成的混合物存在的情况下进行。提取可使用稳定同位素稀释法进行，以确定各类脂质的相对量，和使用本文所述的Folch提取(如示例1所述)法。
通常情况下，对化合物——其在未感染和存在三体性两种情况下存在差异——进行定量分析可使用精确质量的母体脂质，其具有<20ppm的小误差公差。或者，可使用较低分辨率的仪器代替以将母体和其碎片作为MRM对(多反应模式)进行监测。各类脂质的相对浓度水平的确定，若要求更为精确的浓度，使用单点校准仪或标准曲线，以MS或MS/MS模式与指定标准对比。
实施例3–基于可能性比值，对三体性21进行风险评估
通过确定由以下形式的算法计算的可能性比值(LR)，从而确定妊娠风险增加：
LR＝i[ln(MoM脂质i)]+j[ln(MoM脂质j)]+k[ln(MoM脂质k)]+…n[ln(MoM脂质n)]+n+1[ln(n+1MoM脂质n+1)]。
LR可用于修正与年龄有关的风险(使用已公开的年龄-风险公式，之前的可能性(prior odds)通常来自母体年龄)或作为单一作用点。
一示例中，这种使用判别分析以生成标准化典型判别函数系数-11.6(lnMoMindex#19)+9.931
(lnMoMindex#26)-0.972(lnMoMindex#42)-0.191(lnMoMindex#43)-0.176(lnMoMindex#44)+4.524
(lnMoMindex#45)+1.605(lnMoMindex#46)-1.777(lnMoMindex#175)+1.679(lnMoMindex#186)-2.12
(lnMoMindex#195)+0.669lnMoMindex#196)+5.00(lnMoMindex#213)+2.55(lnMoMindex#222)-8.137
(lnMoMindex#241)-0.641(lnMoMindex#510)-0.415(lnMoMindex#592)+0.202(lnMoMindex#593)+0.428(lnMoMindex#595)+0.238(lnMoMindex#596)。这种判别分析给出了图3所示的值。
另外，可使用与未感染的妊娠相比上调或下调的脂质特定图案的脂质轮廓，确定三体性21妊娠的增加的风险。一个轮廓示例在图3A和3B示出，其中对各类脂质对中值倍数(MoM)的信号响应(峰面积或高度)进行统计换算。未感染总体的中值信号响应被用于生成MoM，其表示为[脂质响应面积]/[未感染总体的各个脂质的脂质中值响应面积未感染的]。
可使用合适的软件，在计算机处理装置上运行算法。例如，软件可用R或Java写出，但基于网络的应用可使用其他软件，如JavaScript或PHP。软件系统可包括基于主机/服务器的组件，如SQL。
总之，我们已证明，母体血清中可存在用于区别三体性(21)胎儿妊娠和未感染正常妊娠的脂质化合物。通过使用标准统计程序，例如多变量分析，中值倍数和/或PCA，这些特征可用于区别感染的和正常的妊娠，例如，脂质化合物被认定为胆固醇和胆固醇酯及其异构体，。
实施例4-使用+ve TOFMS的进一步分析，其结果相对SM(d18：1/12：0)和PC(17：0)/14：1)进行标准化。
使用Folch提取或同时使用MTBE提取患者样品(T21阳性或年龄与对照例匹配)。MTBE指的是9：3的MTBE：甲醇提取溶剂，其他溶剂为本文所述的Folch试剂。
所用的程序如下所述：使用1ml 10：3的MTBE：甲醇或2：1的CHCl3：甲醇提取25μl血清，25uL水和25μl大约1000ng/ml的标准混合物。将溶剂加入示踪血清中，并在以机械方式剧烈摇晃10分钟后，将样品在4℃下放置过夜。然后加入200ul 0.1M的KCl，以4000RPM对样品离心5分钟，对层进行分离，并在40℃下在5ml的玻璃测试管中蒸发。恢复先在100ul MP-B(100％IPA，7.5mM NH4FA)中，之后在200ul MP-A(3：1甲醇：水，7.5mM NH4FA)中进行。进样4ul，随后进行基本如本文先前所述的HPLC。
图4示出了特征质量618.5444的数据。图5示出了特征质量481.3239的数据。图6示出了特征质量626.4976的数据。图7示出了特征质量555.5448的数据。数据验证了这些脂质在T21和对照例的表现不同。
实施例5–被识别的额外脂质标记物
一组额外的脂质标记物从10个年龄与对照例匹配的T21患者中识别出来，并基本如实施例4所述，对该脂质标记物进行两次分析。
数据示于表3。
表3
Figure GDA0003372010410000241
Figure GDA0003372010410000251
可以看到，T21中多个脂质标记物(并具有质量公差+/-20ppm)被上调或下调。
除非特别说明，否则本文使用的单数形式“一个”、“一”、“所述”可指复数形式。
整篇说明书中，除非上下文特别要求，“包括”或其变形如“包含”或“含有”的表述应理解为暗含包括所述的元素或整数或元素或整数的集合，但不排除任何其他元素或整数或元素或整数的集合。
本文所述的所有方法可以任何合适的顺序执行，除非本文另有说明或根据上下文有明显矛盾。使用的任何及所有示例或本文提供的示例性语言(例如，"比如")，除非特别说明，仅用于更好的描述示例性实施例，并不对本发明的范围进行限制。说明书中的任何语言都不应被理解为表示任何未要求保护的元素的必要性。
这里提供的描述与若干实施例有关，所述实施例可具有共同特征和特征。要理解的是，一个实施例的一个或多个特征可与其他实施例的一个或多个特征组合。此外，实施例的单一特征或特征组合可构成额外的实施例。
所用的对象标题仅用于方便读者参考，不应用于限制本公开或权利要求的对象主题。对象标题不应用于解释权利要求的范围或对权利要求进行限制。
虽然已参考具体示例对本公开进行描述，本领域的技术人员应该理解，本公开可体现为多种其他形式。
未来的专利申请可基于本申请提出，例如要求本申请的优先权，要求分案申请和/或要求继续申请。应该理解，下列权利要求仅以示例形式提供，不对将来任何此类申请可要求保护的范围进行限制。权利要求也不应被认为对本公开的理解做出限制(或排除其他理解)。此后可向示例性权利要求添加或从中删除特征。

Claims (11)

1.一种或多种试剂在制备用于在妊娠第一阶段筛查胎儿染色体21的三体性的试剂盒中的应用，其中所述一种或多种试剂用于通过质谱法确定来自在妊娠第一阶段的怀孕女性对象的含血清的样品中一种或多种脂质标记物的水平，所述一种或多种脂质标记物选自胆固醇、胆固醇酯，和/或质量为568.4784的脂质，并且所述一种或多种脂质标记物的水平表示所述在妊娠第一阶段的对象体内胎儿染色体21的三体性的风险。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述一种或多种标记物表示胎儿染色体21的三体性风险增加、胎儿染色体21的三体性风险低或正常、和/或胎儿染色体21的三体性存在与否。
3.根据权利要求1或2所述的应用，所述应用包括使用同位素标记的脂质作为参考标记物，以对所述一种或多种脂质标记物的相对量进行量化。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述一种或多种试剂包括以下的一种或多种：
(i)已知用于表示胎儿染色体21的三体性风险增加的一种或多种标记物；
(ii)已知用于表示胎儿染色体21的三体性风险降低的一种或多种标记物；
(iii)已知用于表示怀孕女性对象体内存在具有胎儿染色体21的三体性胎儿的一种或多种标记物；以及
(iv)已知用于表示怀孕女性对象体内的胎儿不具有胎儿染色体21的三体性的一种或多种标记物。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述一种或多种脂质标记物包括至少两种标记物。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述一种或多种试剂用于确定其他脂质标记物和/或非脂质标记物的水平。
7.一种计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许所述计算机处理器装置接收数据——其与表示在妊娠第一阶段的对象体内胎儿染色体21的三体性风险的通过质谱法识别的含血清的样品中一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关，所述一种或多种脂质标记物选自胆固醇、胆固醇酯，和/或质量为568.4784的脂质，并处理所述数据，以生成所述在妊娠第一阶段的对象体内胎儿染色体21的三体性的可能性和/或风险。
8.一种计算机处理器装置，包括根据权利要求7所述的计算机可读介质。
9.一种用于确定在妊娠第一阶段的对象体内胎儿染色体21的三体性风险的系统，所述系统包括计算机处理器装置，具有计算机可读介质，其由计算机处理器装置可执行的编程指令进行编码，以允许所述计算机处理器装置接收数据——其与表示对象体内胎儿染色体21的三体性风险的含血清的样品中通过质谱法识别的一种或多种脂质标记物的存在和/或水平相关，所述一种或多种脂质标记物选自胆固醇、胆固醇酯，和/或质量为568.4784的脂质，并处理所述数据，以生成所述在妊娠第一阶段的对象体内胎儿染色体21的三体性存在与否的可能性和/或风险。
10.根据权利要求9所述的系统，其中所述数据通过网络传输到所述计算机处理装置。
11.根据权利于要求9或10所述的系统，其中所述系统包括质谱仪。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101454488A (zh) * 2006-05-26 2009-06-10 阿普里拉股份有限公司 用于羟基化化合物的标签试剂和方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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CA2739315A1 (en) 2011-05-09 2012-11-09 University Health Network Biomarkers for the dectection and screening of down syndrome
WO2016191793A1 (en) 2015-06-02 2016-12-08 Medvet Science Pty Ltd Methods for screening for fetal trisomies

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101454488A (zh) * 2006-05-26 2009-06-10 阿普里拉股份有限公司 用于羟基化化合物的标签试剂和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Karol Charkiewicz, et al.;Karol Charkiewicz, et al.;《Plos One》;20150522;第1-10页 *

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