CN107912422A

CN107912422A - 一种用于猪精液的稀释液及其制备方法

Info

Publication number: CN107912422A
Application number: CN201711165717.1A
Authority: CN
Inventors: 刘志超; 刘剑锋; 叶更青; 张奎昌
Original assignee: Guangdong Zhongnonglian Biological Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Guangdong Zhongnonglian Biological Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-11-21
Filing date: 2017-11-21
Publication date: 2018-04-17

Abstract

本发明属于畜牧业繁殖技术领域，具体公开了一种用于猪精液的稀释液及制备方法。用于猪精液的稀释液是由重量一分子结晶水葡萄糖2.85‑3.15％、一分子结晶水枸橼酸0.4465‑0.4935％、二分子结晶水枸橼酸钠1.2635‑1.3965％、聚维酮碘0.02375‑0.02625％、余量为注射用水至100％组成；取配方量的葡萄糖、枸橼酸、枸橼酸钠依次溶于适量注射用水中，加入配制量重量0.25％针用活性炭，煮沸15min后，滤过除炭再加入配方量的聚维酮碘，使溶后，添加注射用水至100％，拌匀，测pH及含量合格后，过滤、灌封，以热压105℃‑108℃、30min灭菌制得。本发明为猪人工授精提供了一种具有对细菌、病毒、真菌、原虫和芽孢均具有杀灭作用的猪精液稀释液产品，能有效避免通过人工授精造成感染的风险，实用效果和经济效益非常显著。

Description

一种用于猪精液的稀释液及其制备方法

技术领域

本发明属于畜牧业繁殖技术领域，涉及一种用于猪精液的稀释液及该稀释液的制备方法。

背景技术

随时畜牧业的发展和进步，科学养殖和繁殖的技术也方兴未艾。为了优化和改良猪的品种和品系，依赖传统的公、母自然交配是难以实现的，为此，广大的畜牧工作者不断探索，开展有意义的技术研究，开拓将公猪的精液输入到发情母猪的生殖道内以达到母猪受胎的繁殖技术，亦称人工授精技术。该项技术的推广应用推动了生猪养殖业的集约化发展，如在养猪业较为发达的美国、丹麦、英国、瑞典、加拿大和法国等国家，在家蓄人工育种繁殖生产中已相继建立了人工授精技术平台且形成产业化，其经济效益显著提升。我国虽也是世界养猪大国，拥有年产生猪量超6亿多头，由于长期的家庭饲养方式，且缓慢地向工厂化、集约化养殖转变，加之对优良公猪利用性能的有效生物技术手段滞后，还未能适应就目前生猪养殖产业化和集约化的转变的需求，在我国养猪生产中大规模的应用人工授精技术、人工授精繁殖技术的普及尚有较大的需求，同时也蕴藏着巨大的发展空间，开发应用好商品化的精液稀释液将能更好的提升公猪精子的繁殖力，增强母猪繁殖效率和养猪业健康生产能力，有效提升我国养猪人工授精质量水平，助推我国养猪产业的进步和发展。

我国对养猪业人工授精技术也已具备多年实践经验，其技术手段也逐渐成熟，从将新鲜猪精液冷冻技术，到上世纪80年代采用稀释粉稀释技术，就该技术公开的专利中有“一种猪精液稀释粉及其制备方法”（200910012673.8）、“猪精液稀释和常温保存用粉及其制备方法和应用”（200910038350.6）、“冷水速溶性猪精液稀释配方及制作工艺和使用方法”（20110076201.6）、“一种长效猪精液稀释粉及其制备方法”（201210238501.4）等，可以看出这一段时期内其主要的猪精液稀释剂都是粉状的，其中也有一些液体状的猪精液稀释液在市场中应用，如中国专利就公开了“即开即用型猪精液稀释液”（200510007376.6）。2000年后，猪精液稀释液在我国养猪业繁殖中的应用已较为普遍，有些猪精液稀释液已形成商品性经营，技术性产业也得到较广泛的推广和普及，中国专利具体还公开了相关的技术方法，如“一种猪精液常温保存的稀释液及其制备方法”（201310207757.3）、“猪抗病毒精液稀释液的配方组成”（20140164618.1）、“一种猪抗病毒长效精液稀释液配方及制备方法”（201410527131.5）、“猪精液体外低温保存用稀释剂及其制备方法”（201610633712.6）体现了对猪精液稀释剂的发展趋势。就上述公开的发明专利技术方案中可以看出，不仅是开发具有维护猪精子结构的稳定性，增强精子抗氧化损伤，维护猪精子的质膜完整性以及顶体完整性，有效延长猪精子在低温保存期间的存活时间，提高优质种公猪精液使用效率，同时还就在人工授精过程中可能遇到的或避免细菌或病毒的侵入而采用抗菌剂和抗病毒药剂，从而减少或避免通过精液传播的病毒、细菌或其他病原体给母猪造成的感染，从上述公开的技术方案中，可以看出其选择的抗菌剂、抗病毒制剂，均存在不同的缺陷，如专利201610633712.6权利要求1所述的一种猪精液体外保存用稀释剂，所述的广谱抗生素抑菌剂，其中权利要求4对所述的广谱抗生素抑菌剂包括硫酸丁胺卡那霉素、阿莫西林、庆大霉素、青霉素、头孢类抗生素中的一种或几种。就上述所采用的抗生素，均不属于广谱抗生素，其抗菌范围不具有广谱性，特别是阿莫西林、青霉素、头孢类抗生素其在水溶液中的稳定性较差，特别是青霉素的水溶液失效很快，同时还会产生青霉素烯酸高致敏性物质，当然，这也就不具备能使制得的精液体外保存用稀释剂具有稳定性和安全性。还有如专利CN1349797A和专利CN104322483A均选用肌醇作为防腐剂，肌醇，也称环已六醇、肌糖、六羟基环已烷，为葡萄糖同分异构体，属维生素类药，能促进肝和其他组织中的脂肪代谢，防止脂肪在肝脏内积聚，降低血中胆固醇，作为制剂产品的应用可作为甜味剂、填充剂、增塑剂、稳定剂、助溶剂、分散剂、抗氧剂使用，作为防腐剂使用具有不确切性。专利CN105010304A公开的技术该方案中，其权利要求1中限定了50ml抗病毒剂，权利要求2进一步限定所述的抗病毒剂含有：利巴韦林、紫胡提取物、板蓝根提取物、地黄提取物、黄芩提取物、栀子提取物、连翅提取物和玄参提取物。其提取物的多种组合，对其强化抑或杀菌作用而言也不具备地黄和玄参提取物的体现效果，然而，作为抗病毒剂的组合，除利巴韦林和板蓝根外，其他均不具备抗病毒作用的确定性。从目前公开的文献中可以看出，具有稳定性和作用可靠性的猪精液稀释液的研究与开发，必须考虑到营养、渗透压、酸碱度和杀菌剂、抗病毒剂配伍的合理性、稳定性和杀菌剂与抗病毒剂效果的可靠性。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于猪精液的稀释液。

本发明的目的还在于，提供一种用于猪精液稀释液的制备方法。

为了实现本发明，具体采用了以下技术方案：

一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比一分子结晶水葡萄糖2.85-3.15％，一分子结晶水枸橼酸0.4465-0.4935％，二分子结晶水枸橼酸钠1.2635-1.3965％，聚维酮碘0.02375-0.02625％，余量为注射用水至100％。

本发明选择采用枸橼酸可与枸橼酸钠形成缓冲溶液,枸橼酸具有公知的调节PH值的作用，形成缓冲溶液和稳定的渗透压，能有效地稳定精子细胞骨架避免发生迁移，使精子处于一个适宜的渗透压的范围，选择的葡萄糖作为精子的营养基质，能够充分保持精子的营养补给，促进精子活动的旺盛，避免其营养不足而产生的衰竭现象。本发明中加葡萄糖不仅体现的主要营养作用，还具有调节其渗透压的作用效果，以降低精子在保存期间的损坏率，故可延长精子的保存期。根据实验证明，不加葡萄糖的枸橼酸钠溶液仅能保存4天左右，加葡萄糖的在1-2℃情况下，保存期可延长12-24天。本发明特别强调的是本发明采用的枸橼酸为含一分子结晶水，枸橼酸钠为含二分子结晶水产品，形成的缓冲溶液后，使PH维持在猪精液较为稳定的范围，同时使钾和类脂体的损失降低。这种溶液不仅能提高精子的保持性，并且授精入母猪体内后精子的寿命也可延长。若以其他品种代替时，应按分子量加以折算；本发明采用的葡萄糖为含一分子结晶水的产品，若以其他品种代替时，应按分子量加以折算。这些特定产品在国内市场均有销售，所以，对原料的选择无困难性。

本发明选择使用的聚维酮碘，又称聚乙烯吡咯烷酮碘，简称PVP-I，是由干燥的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）与碘经长时间相混合与加热反应后，碘完全与PVP形成的复合物。PVP-I对细菌、病毒、真菌均有较强的杀灭作用，是一种广谱新型消毒剂，对毛滴虫也有杀灭作用。在人医医疗中可作为皮肤、阴道的消毒剂，其0.1％PVP-I水溶液用于腹腔冲洗（张光杰主编，药用辅料应用技术，中国医药科技出版社，1991年12月第1版，612P）。具中华人民共和国药典.临床用药须知介绍：聚维酮碘是指元素碘和聚合物载体相结合的一种疏松复合物。这种载体不仅有助于增强碘的溶解度，而且为持续释放碘提供一个贮存库，其中80-90％的结合碘可解聚释放出游离碘，发挥杀菌作用。PVP-I在医学临床的医疗活动中用于皮肤消毒、粘膜冲洗，医务人员刷手、泡手，注射、手术部位皮肤消毒。用于治疗皮肤黏膜细菌性感染，如治疗烫伤、滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、化脓性皮肤炎、皮肤真菌感染等；也用于公共卫生和食品工业中消毒。其不良反应罕见。其药效学：PVP-I是碘以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为载体，经反应生成的聚维酮碘复合物，以干燥体计算含有效碘9-12％。PVP性质稳定，有极好的生理惰性和生物相容性，具有成膜、黏合、解毒、慢性释放以及水溶性强的特点，对微生物降解性特佳，是广谱杀菌药。碘可直接卤化菌体蛋白质，与蛋白质的氨基酸结合，而使菌体的蛋白质和酶受到破坏，微生物因代谢功能发生障碍而死亡。PVP-I为广谱强效杀菌药，对细菌、病毒、真菌、原虫和芽孢都有效，大多数微生物不会对元素碘耐药（国家药典委员会编.中华人民共和国药典.临床用药须知，化学药和生物药制品卷，中国医学科技出版社，2010年版1200-1201页）。

本发明中使用的溶媒为注射用水，根据中国药典规定，本品为纯化水经蒸馏所得的水。采用高纯度的注射用水可避免其他方法制取的水纯度不够，因其夹杂混有的阴、阳离子物质对精子造成损害。为了保证本产品可靠的稳定性，本发明优选的是一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖2.8％，一分子结晶水枸橼酸0.44％，二分子结晶水枸橼酸钠1.26％，聚维酮碘0.024％，余量为注射用至100％。

本发明进一步优选的是，一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖3.1％，一分子结晶水枸橼酸0.49％，二分子结晶水枸橼酸钠1.39％，聚维酮碘0.026％，余量为注射用水加至100％。

本发明更进一步优选的是，一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖3％，一分子结晶水枸橼酸0.47％，二分子结晶水枸橼酸钠1.33％，聚维酮碘0.025％，余量为注射用水加至100％。

本发明一种用于猪精液的稀释液的制备方法，其特征在于，其步骤如下：分别称取配方量的葡萄糖、枸橼酸、枸橼酸钠依次溶于适量注射用水中，加入配制量重量0.25％活性炭，加热煮沸15分钟后，滤过除炭，再加入配方量的聚维酮碘，搅拌使溶后，再添加注射用水使成至100％，搅匀，测PH及含量合格后，过滤，灌封，以热压为105℃-108℃30分钟灭菌，即得。

上述所述的过滤，采用0.42μm的膜过滤。

本发明的有益效果在于，采用枸橼酸调节PH值，加入枸橼酸钠形成稳定的缓冲溶液，使得制品有较好的稳定性，给精液提供了适宜的缓冲空间，对精子的稳定和免受损伤提供保障；制品中加入葡萄糖，不仅能使溶液的渗透压更接近精子的渗透压，同时给精子提供营养，以确保精子经稀释后的成活率，避免或减少精子的损失；本发明首次提供使用PVP-I作为杀菌剂，因PVP-I是一种罕有不良反应的广谱杀菌药，对精子无任何伤害性作用，且能对细菌、病毒、真菌、原虫和芽孢都有杀灭效果，其中还有用量小、制成品稳定等优点，经过实践中应用与现有市售的猪精液稀释液比较，具有显著性的优势：本发明产品对猪精液：稀释液按1:1、1:5、1:7、1:10、1:15、1:20、1:30、1:50不同比例进行稀释，分别按2℃-5℃低温贮藏18天后，检测精子存活平均达到96.4％，采用上述同样比例于15℃-22℃常温贮藏7天后，经检测精子的存活率平均在93.6％，贮藏14天，经检测精子的存活率平均在74.7％，从对比试验的结果可以看出，本发明的猪用精液稀释液比现有公开的技术方案对精液的贮藏环境和贮藏时间都有较大的进步，足以证明本发明产品的稳定性和对精子稀释后贮存期内的可靠性。本发明产品的外观颜色为浅红棕色，其外观颜色是由PVP-I中的游离碘形成的正常颜色，对精子无任何染色作用。

本发明为猪人工授精提供了一种具有对细菌、病毒、真菌、原虫和芽孢均具有杀灭作用的猪精液稀释液产品，能有效避免通过人工授精造成感染的风险，提高了繁殖母猪健康受孕的保障。本发明产品为延长猪精子低温保存时间、有效保持精子活力，推动养猪业的健康发展提供了有益的保障，其实用效果和经济效益都非常显著。本发明工艺简单，易于掌握，且节能环保，生产成本低，具有良好的经济和社会效益。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明做出进一步的说明，而非本发明的全部，其实施例所采用的原料和辅助性材料均为市场有售的符合药用级的原辅料，其设备均为本领域公知的常规设备；其制备方法除本发明有限定的特殊特征外，其他均为本领域公知的技术条件，其方法过程不受限制，其实施例也不构成对本发明的限制。

实施例1

分别称取一分子结晶水葡萄糖28g，一分子结晶水枸橼酸4.4g，二分子结晶水枸橼酸钠12.6g，依次加入800ml注射用水中，充分搅拌均匀，加入2g针用活性炭，搅匀，加热煮沸15min后，滤过除炭，得澄明滤液，滤液中再加入聚维酮碘0.24g，搅拌使溶解，然后再补加注射用水定溶至1000ml，搅匀，用孔径为0.42μm的微孔滤膜过滤，灌装，封口，以热压为108℃灭菌30min后，取出放冷即得。

实施例2

分别称取一分子结晶水葡萄糖31g，一分子结晶水枸橼酸4.9g，二分子结晶水枸橼酸钠13.9g，依次加入800ml注射用水中，充分搅拌均匀，加入2g针用活性炭，搅匀，加热煮沸15min后，滤过除炭，得澄明滤液，滤液中再加入聚维酮碘0.26g，搅拌使溶解，然后再补加注射用水定溶至1000ml，搅匀，用孔径为0.42μm的微孔滤膜过滤，灌装，封口，以热压为105℃灭菌30min后，取出放冷即得。

实施例3

分别称取一分子结晶水葡萄糖30g，一分子结晶水枸橼酸4.7g，二分子结晶水枸橼酸钠13.3g，依次加入800ml注射用水中，充分搅拌均匀，加入2.5g针用活性炭，搅匀，加热煮沸15min后，滤过除炭，得澄明滤液，滤液中再加入聚维酮碘0.25g，搅拌使溶解，然后再补加注射用水定溶至1000ml，搅匀，用孔径为0.42μm的微孔滤膜过滤，灌装，封口，以热压为106℃灭菌30min后，取出放冷即得。

实施例4

分别称取一分子结晶水葡萄糖28.5g，一分子结晶水枸橼酸4.465g，二分子结晶水枸橼酸钠12.64g，依次加入800ml注射用水中，充分搅拌均匀，加入2.5g针用活性炭，搅匀，加热煮沸15min后，滤过除炭，得澄明滤液，滤液中再加入聚维酮碘0.238g，搅拌使溶解，然后再补加注射用水定溶至1000ml，搅匀，用孔径为0.42μm的微孔滤膜过滤，灌装，封口，以热压为105℃灭菌30min后，取出放冷即得。

实施例5

分别称取一分子结晶水葡萄糖31.5g，一分子结晶水枸橼酸4.935g，二分子结晶水枸橼酸钠13.965g，依次加入800ml注射用水中，充分搅拌均匀，加入2.5g针用活性炭，搅匀，加热煮沸15min后，滤过除炭，得澄明滤液，滤液中再加入聚维酮碘0.263g，搅拌使溶解，然后再补加注射用水定溶至1000ml，搅匀，用孔径为0.42μm的微孔滤膜过滤，灌装，封口，以热压为105℃灭菌30min后，取出放冷即得。

Claims

1.一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比一分子结晶水葡萄糖2.85-3.15％，一分子结晶水枸橼酸0.4465-0.4935％，二分子结晶水枸橼酸钠1.2635-1.3965％，聚维酮碘0.02375-0.02625％，余量为注射用水至100％。

2.一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖2.8％，一分子结晶水枸橼酸0.44％，二分子结晶水枸橼酸钠1.26％，聚维酮碘0.024％，余量为注射用至100％。

3.一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖3.1％，一分子结晶水枸橼酸0.49％，二分子结晶水枸橼酸钠1.39％，聚维酮碘0.026％，余量为注射用水加至100％。

4.一种用于猪精液的稀释液，其特征是由重量百分比的一分子结晶水葡萄糖3％，一分子结晶水枸橼酸0.47％，二分子结晶水枸橼酸钠1.33％，聚维酮碘0.025％，余量为注射用水加至100％。

5.如权利要求1-4所述一种用于猪精液的稀释液的制备方法，其特征在于，步骤如下：分别称取配方量的一分子结晶水葡萄糖、一分子结晶水枸橼酸、二分子结晶水枸橼酸钠依次溶于适量注射用水中，加入配制量重量0.25％活性炭，加热煮沸15分钟后，滤过除炭，再加入配方量的聚维酮碘，搅拌使溶后，再添加注射用水使成至100％，搅匀，测PH及含量合格后，过滤，灌封，以热压为105℃-108℃30分钟灭菌，即得。

6.如权利要求5所述用于猪精液的稀释液的制备方法，其特征在于，所述的过滤，采用0.42μm的膜过滤。