CN107898785B - 氧化苦参碱在制备抗破骨细胞介导的骨丢失药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了氧化苦参碱在制备抗破骨细胞介导的骨丢失药物中的应用。本发明创新性的运用氧化苦参碱治疗破骨细胞介导的溶骨性疾病，在细胞层面首次解释了氧化苦参碱对于破骨细胞分化的抑制作用。同时，我们运用前叉韧带切断制造骨关节不稳模型，此模型小鼠膝关节软骨下骨丢失，而行使骨溶解作用的细胞正是破骨细胞，我们的动物实验结果显示，氧化苦参碱腹腔注射可以显著减轻破骨细胞分化所介导的软骨下骨丢失，对小鼠关节具有明显的保护作用。最后我们在体条件下证实了氧化苦参碱无明显的全身脏器毒性，为溶骨性疾病的治疗提供了一种理想的新的选择。

Description

氧化苦参碱在制备抗破骨细胞介导的骨丢失药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及氧化苦参碱在制备抗破骨细胞介导的骨丢失药物中的应用。
背景技术
成骨细胞和破骨细胞是骨重建中维持骨量最主要的两种细胞。破骨细胞是人体内唯一吸收骨质的细胞，在生理情况下，与成骨细胞一起维持正常骨纽织的代谢平衡。当破骨细胞数量增加或者骨吸收功能增强时，可引起包括骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤骨转移和人工假体松动在内的多种由于骨量过度丢失而导致的常见疾病。在我国，约2亿多人存在骨质疏松症，且其发病率随我国社会老龄化而迅速上升。而导致骨质疏松症的主要病理过程，是破骨细胞数量增多或者骨吸收功能增强。同样，骨性关节炎是一种以关节软骨退变、软骨下骨硬化、关节滑膜炎症而导致关节功能障碍的慢性疾病。在骨关节炎的发生发展过程中，软骨下骨中的破骨细胞被激活，引起软骨下骨代谢失衡，造成骨软骨生物力学支撑结构不稳，引起关节病变。第三，人工关节置换手术已被公认为治疗骨关节疾病、重建关节功能的一种有效手段，尽管人工关节置换早期效果令人满意，但随着置换病例数量的增加和使用时间的延长，晚期假体松动问题日益突出。研究表明，人工关节置换10年后，约10％的患者因关节假体松动需要接受翻修手术，而破骨细胞介导的假体周围骨溶解则是导致假体松动最主要的原因。
目前用于预防与治疗破骨细胞相关骨溶解疾病的临床药物，根据其化学结构和作用机制主要包括传统的二礎酸盐类、降钙素、雌激素和选择性雌激素受体调节剂。此外，随着对破骨细胞生物学研究的深入，针对破骨细胞的中和抗体进入医药市场成为抗破骨细胞新药，主要包括抗RANKL抗体和选择性组织蛋白酶-K抑制剂等。在这些药物中，二磷酸盐类药物是至今最广泛应用的骨吸收抑制剂，二磷酸盐类药物通过其化学结构中的PO4基团，与骨质的羟基磷灰石上的钙离子结合，并在酸性环境下释放出来，抑制破骨细胞的活性。
苦参碱是由豆科植物苦参的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的，是一种生物碱。苦参总碱是苦参所有生物碱的统称，其主要成分以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。其他来源为苦豆子果实，山豆根及山豆根地上部分，纯品外观为类白色至白色粉末。氧化苦参碱，又名苦参素，透明颗粒结晶，熔点207℃-208℃，易溶于水、甲醇、氯仿、苯，难溶于乙醚，其分子式为C15H24N2O2，结构式如式I所示。中国专利201610000529.2公开了氧化苦参碱在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，氧化苦参碱具有增加肿瘤多药耐药细胞对抗肿瘤药物敏感性的作用，可以作为化疗增敏剂使用。中国专利201410396882.8公开了氧化苦参碱注射液抗心绞痛药物的应用，氧化苦参碱注射液是由2mg/ml氧化苦参碱用5％葡萄糖100ml稀释，配制成的静脉注射液；并采取坐位给药，其疗效比对比组硝酸甘油、硝酸异山梨醇酯提高10％。中国专利201510128920.6公开了氧化苦参碱作为治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤药物的用途，实验结果表明氧化苦参碱剂量为120mg/kg体重时可以降低缺血区域脑梗死体积以及神经元凋亡率，减轻脑组织病理损伤，提高脑组织中抗氧化酶活性，降低丙二醛含量，氧化苦参碱具有预防新生儿缺氧缺血性脑损伤后致伤亡和促进神经功能恢复的作用。然而现有技术中，关于氧化苦参碱在制备抗破骨细胞介导的骨丢失药物中的应用，目前还未见报道。
Figure BDA0001510311570000021
发明内容
本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供氧化苦参碱的制药用途。
本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗破骨细胞介导的骨丢失的药物。
本发明的第三个目的是针对现有技术中的不足，氧化苦参碱在制备试剂中的用途。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
氧化苦参碱的用途，用于制备抗破骨细胞介导的骨丢失的药物。
作为本发明的一个优选实施方案，所述药物抑制破骨细胞的分化，抑制破骨细胞的大小和数量，抑制破骨细胞分化F-Actin环的形成，抑制破骨细胞分化调控因子NFATc1和c-fos的表达水平，抑制破骨细胞分化所介导的骨溶解丢失。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种抗破骨细胞介导的骨丢失的药物，所述药物由氧化苦参碱和药学上可接受的载体或赋形剂组成。
所述药学上可接受的载体或赋形剂包括但并不限于：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂与给药方式相匹配。本发明的氧化苦参碱可以被制成注射剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
氧化苦参碱在制备试剂中的用途，所述的试剂用于：
(1)抑制破骨细胞的分化；
(2)抑制破骨细胞分化所介导的关节软骨下骨丢失。
本发明优点在于：
本发明创新性的运用氧化苦参碱治疗破骨细胞介导的溶骨性疾病，在细胞层面首次解释了氧化苦参碱对于破骨细胞分化的抑制作用。同时，我们运用前叉韧带切断制造骨关节不稳模型，此模型小鼠膝关节软骨下骨丢失，而行使骨溶解作用的细胞正是破骨细胞，我们的动物实验结果显示，氧化苦参碱腹腔注射可以显著减轻破骨细胞分化所介导的软骨下骨丢失，对小鼠关节具有明显的保护作用。最后我们在体条件下证实了氧化苦参碱无明显的全身脏器毒性，为溶骨性疾病的治疗提供了一种理想的新的选择。
附图说明
附图1为TRAP染色显示氧化苦参碱可以抑制破骨细胞的分化成熟。
附图2为对破骨分化的中破骨细胞的数量和面积进行了统计。
附图3为氧化苦参碱对破骨前体细胞毒性实验，western blot检测了凋亡相关蛋白表达水平。
附图4为破骨细胞分化F-Actin环形成实验。
附图5为破骨细胞F-Actin环的数量进行了统计分析。
附图6为real time PCR检测了破骨细胞分化标致基因的表达水平。
附图7为western blot检测了破骨分化标致基因的蛋白水平表达。
附图8为氧化苦参碱抑制破骨细胞中的NF-KB和MAPK信号通路的激活。
附图9为运用免疫荧光和核质分离研究了氧化苦参碱对破骨细胞内NF-KB信号通路激活的抑制作用。
附图10为Micro CT检测小鼠骨微结构变化。
附图11为对小鼠骨微结构参数进行了统计分析。
附图12为TRAP染色检测了小鼠关节软骨下骨中破骨细胞的活跃程度。
附图13为TRAP染色的结果进行了统计，分析了破骨细胞的数量。
附图14为氧化苦参碱对小鼠全身的毒性作用，结果显示氧化苦参碱腹腔注射对于小鼠的生长和重要脏器没有明显的毒性作用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1氧化苦参碱对破骨细胞介导的骨溶解作用及其机制
(一)材料和方法
1.小鼠骨髓巨噬细胞的提取及培养
取2-4周龄的C57小鼠，颈椎脱臼处死，取双侧股骨与胫骨，转移至超净台。仔细分离肌肉等组织，完整暴露骨质，完整取下小鼠的全长胫骨和股骨，PBS冲洗3遍，每次3分钟，用无菌剪刀离断长骨两端，1ml针头冲洗骨髓至装有含10％胎牛血清的α-MEM培养基中，冲洗过程中，上下移动针头刮扫骨髓腔。每根骨头使用大约5ml培养液，冲洗完全后丢弃骨头。将细胞悬液离心(1000转/3分钟)。丢弃上清，加入培养液(添加10ng/ml的M-CSF)，混匀细胞悬液，置于37摄氏度、5％二氧化碳培养箱内培养4天。每日在倒置显微镜下观察软骨细胞生长情况，视细胞贴壁情况更换培养液。至第5天，使用PBS洗一遍培养皿，使用细胞刮轻轻刮下贴壁细胞，转移入离心管，1000转离心3分钟。进行后续实验。
2.CCK-8检测细胞活力
将离体小鼠巨噬细胞以适当的密度接种于96孔板中，将培养板在培养箱预培养过夜，待细胞贴壁后，向培养板加入不同浓度的氧化苦参碱，浓度梯度分别为0.25，0.5，1，2mg/ml，将培养板在培养箱孵育48小时后，向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在加的过程中生成气泡，否则会影响O.D值的读数)。将培养板在培养箱内孵育1-4小时后用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
活力计算：细胞活力(％)＝[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100％。具体：A(加药)：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度；A(空白)：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度；A(0加药)：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度。
3.小鼠骨髓巨噬细胞破骨分化
将骨髓巨噬细胞以适当密度接种于96孔板中，加入M-CSF(30ng/ml)和RANKL(100ng/ml)诱导其向破骨细胞方向分化。同时加入不同浓度的氧化苦参碱(0，0.25，0.5，1mg/ml)，每2天更换一次培养液，并加入相应浓度的氧化苦参碱，至分化的第6天，吸尽培养基，用4％多聚甲醛固定细胞，TRAP染色液适量置于孔内染色15分钟，显微镜下拍照，计数每孔破骨细胞数量和所占面积，其中大于3个细胞核的细胞视为破骨细胞。统计分析氧化苦参碱对于破骨细胞分化成熟的影响。
进一步为了证明氧化苦参碱对骨髓巨噬细胞破骨分化的抑制作用不是通过促进其细胞凋亡，我们运用western blot检测技术，发现氧化苦参碱对于骨髓巨噬细胞无明显的促凋亡作用。
4.实时荧光定量PCR检测破骨细胞分化标致基因表达水平
研究氧化苦参碱对于RANKL所诱导的破骨细胞分化标致基因表达的影响。本部分，我们先将破骨前体巨噬细胞接种于6孔板中，待细胞贴壁时，以不同浓度梯度的氧化苦参碱(0.5，1，2mg/ml)联合RANKL处理3天。Trizol法抽提样品总RNA。将6孔板中的培养基洗掉，PBS洗一遍，每孔加入Trizol裂解液，充分裂解后吸入EP管中，置于-80度冰箱保存，后续的抽提时，取出冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。小心将上层水相转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇，此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。移去上清液，每1ml Trizol试剂裂解的样品中加入至少1ml的75％乙醇(75％乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7500rpm离心5分钟。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5分钟。加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
取1ug总RNA进行反转录，加入2ul MIX，其余用DEPC水补齐。总体系放入PCR仪进行反转录，取反转录后的cDNA进行后续的定量分析，反应体系为cDNA：2ul；SYBR Green：10ul；上下游引物分别为0.8ul，ROX：0.4ul；双蒸水：6ul。反应结束后，运用2-ΔΔct法分析基因表达差异。分析基因包括TRAP，CTR，CTSK，DC-STAMP，NFATc1等，内参基因为β-Actin。
5.F-Actin环形成实验
破骨细胞是体内唯一具有骨吸收活性的细胞，其细胞骨架在细胞迁移及骨吸收过程中发挥重要作用。破骨细胞的细胞骨架肌动蛋白环是其发挥骨吸收作用不可缺少的部分，破骨细胞在矿化基质上能形成一个富含肌动蛋白的结构，即封闭带。封闭带锚定在矿化的基质上，形成一个骨吸收腔，破骨细胞在腔内行使骨吸收功能。这一封闭带即位F-Actin环。
本实验在行破骨分化后，用4％多聚甲醛固定细胞后，用千分之一的Triton X 100透化处理5分钟，PBS洗3遍，每次3分钟，随后用罗代明标记的鬼笔环肽染液，室温30染分钟，PBS洗3遍，每次3分钟，DAPI染色液复染细胞核3分钟后，PBS洗遍，每次3分钟，加入适量PBS后荧光显微镜下检测F-Actin环的形成情况，排照后统计每孔内F-Actin环的数量，统计分析。
6.Western blot
检测氧化苦参碱对于破骨分化关键调控因子NFATc和c-fos的表达水平的影响，以及氧化苦参碱对于nf-kb和MAPK信号通路的影响。第一部分中破骨前体细胞接种于6cm皿中，待细胞贴壁汇合后，加入RANKL和氧化苦参碱，具体分组为：第一组为空白对照，第二组为RANKL(100ng/ml)刺激，第三组为RANKL(100ng/ml)联合氧化苦参碱(1mg/ml)。诱导分化3天后，提取总蛋白行western blot检测。本节第二部分，先将破骨前体细胞接种于6孔板中，待细胞汇合至80％左右时，先用1mg/ml的氧化苦参碱预处理细胞2小时，再以RANKL刺激5，10,15,30,60分钟，在每个时间点收集蛋白样品，收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，用BCA检测试剂盒测定每个蛋白样品的蛋白浓度。在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。100℃或沸水浴加热10分钟，以充分变性蛋白。冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内进行蛋白电泳。本部分检测指标包括：NFATc1，c-fos，p65，p-p65，IKBα，JNK，P-JNK，ERK，P-ERK，P38，P-P38，GAPDH等。
7.免疫荧光
进一步研究，我们运用免疫荧光检测了NF-KB信号通路中P65核转位情况，以判断NF-KB信号通路的激活情况。将破骨前体细胞以适当密度接种于四格皿中，加入RANKL和氧化苦参碱处理，具体分组为：第一组为空白对照，第二组为RANKL(100ng/ml)刺激，第三组先用1mg/ml的氧化苦参碱预处理细胞2小时，再以RANKL刺激，刺激30分钟后，吸尽培养基，PBS洗3遍后，用4％多聚甲醛室温固定20分钟后，PBS浸洗3次，每次3min，用0.5％Triton X-100(PBS配制)室温通透20min，PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min，吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜。第二天加荧光二抗：PBST浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min。滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST5min×4次洗去多余的DAPI，加入PBS即可上机观察。从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。共聚焦显微镜下检测P65入核情况。
8.机械破坏造小鼠骨关节炎模型，研究动物模型中氧化苦参碱对关节软骨下骨丢失的保护作用
本部分我们运用前叉韧带离断的方法进行C57小鼠骨性关节炎造模，小鼠麻醉后，备皮，消毒，膝关节屈曲后于前方置入一细针，左右摆动离断小鼠的前交叉韧带，术后3天开始腹腔注射氧化苦参碱。本实验分为四组，第一组假手术组，改组小鼠不做前叉韧带离断，小鼠作为空白对照；第二组小鼠行前叉韧带离断术造骨性关节炎模型；第三组行骨性关节炎造模，同时腹腔注射低剂量氧化苦参碱(25mg/kg)；第四组行骨性关节炎造模，同时腹腔注射高剂量氧化苦参碱(50mg/kg)。
术后第6周取材，小鼠关节标本用4％多聚甲醛固定后，行Micro CT检测，另一部分膝关节脱钙，脱水包埋，切片，行后续染色处理。
我们根据小鼠关节Micro CT参数对小鼠膝关节进行了三维重建，同时对骨微结构参数BV/TV,Tb.Sp,Tb.Th,Tb.N,SMI等进行了统计分析。
同时，我们对几组小鼠的膝关节切片行TRAP染色，分析了破骨细胞的数量。
综合判断在体情况下，腹腔注射氧化苦参碱对于前叉韧带离断所导致的软骨下骨丢失的延缓作用。
(二)实验结果
(1)附图1是TRAP染色显示氧化苦参碱可以抑制破骨细胞的分化成熟。破骨细胞分化后，行TRAP染色显示：氧化苦参碱可以显著抑制破骨细胞的分化成熟，表现为多核巨型破骨细胞的数量减少，破骨细胞的形态变小。
(2)附图2是对破骨分化的中破骨细胞的数量和面积进行了统计。进一步，我们对TRAP染色结果进行了统计，发现破骨细胞的大小和数量均可以被氧化苦参碱所抑制，差异具有统计学意义。
(3)附图3是氧化苦参碱对破骨前体细胞毒性实验，western blot检测了凋亡相关蛋白表达水平。氧化苦参碱抑制破骨细胞分化成熟是否是通过抑制破骨细胞的活性，我们的研究发现，在我们所使用的浓度下，氧化苦参碱对于破骨前体细胞无明显的毒性作用。CCK-8证实了细胞活力没有受到明显的影响，同时细胞凋亡相关蛋白的表达水平也没有发生改变。
(4)附图4是破骨细胞分化F-Actin环形成实验。F-Actin环形成实验中，我们发现氧化苦参碱可以显著抑制破骨细胞分化F-Actin环的形成。
(5)附图5是破骨细胞F-Actin环的数量进行了统计分析。我们对每孔中完整的F-Actin环进行了计数，并对结果进行了统计，发现组间差异具有统计学意义。
(6)附图6是real time PCR检测了破骨细胞分化标致基因的表达水平。在此基础之上，我们分析了破骨细胞分化标致基因的表达变化，结果显示氧化苦参碱显著破骨分化标致基因的表达。
(7)附图7是氧化苦参碱抑制破骨细胞中的NF-KB和MAPK信号通路的激活。我们运用western blot计数对破骨分化关键调控因子NFATc1和c-fos的表达水平进行了检测。结果显示，在RANKL的刺激下，NFATc1和c-fos的表达水平升高，而在氧化苦参碱的处理下，NFATc1和c-fos的表达水平受到了明显的抑制。运用Image J软件对蛋白条带的灰度值进行了分析，发现组件差异具有统计学意义。
(8)附图8是氧化苦参碱抑制破骨细胞中的NF-KB和MAPK信号通路的激活。我们对氧化苦参碱抑制破骨细胞分化的机制进行了进一步的研究，我们发现，在破骨细胞中，氧化苦参碱可以明显抑制NF-KB信号通路的激活，同时MAPK信号通路的激活也可以被氧化苦参碱显著抑制。这些炎症损伤相关信号通过激活所引起的破骨细胞分化成熟加速了破骨细胞介导的骨溶解丢失，氧化苦参碱抑制了这些信号通路的激活，进而抑制了破骨细胞所介导的骨溶解丢失。
(9)进一步，我们运用核质分离和免疫荧光进一步验证了NF-KB信号通路中P65的入核情况，如图9所示，结果均与western blot结果一致，说明氧化苦参碱可以通过抑制NF-KB和MAPK信号通路的激活，进而抑制破骨细胞的分化成熟。
(10)进一步，我们在动物实验中对我们的结果进行了进一步的验证，如图10所示，Micro CT结果显示，在前叉韧带切断组中，小鼠膝关节软骨下骨较对照组小鼠明显丢失，而腹腔注射氧化苦参碱可以显著延缓关节软骨下骨的丢失。我们对骨微结构参数进行了统计学分析，发现各组数据之间具有统计学差异(图11)。
(11)附图12是TRAP染色检测了小鼠关节软骨下骨中破骨细胞的活跃程度。我们对小鼠软骨下骨进行了破骨细胞TRAP染色，并对软骨下骨板(subchondral plate,SCP)和软骨下骨小梁(subchondral trabecuar bone,STB)两个区域进行了分析，发现在前叉韧带切断组中，小鼠软骨下骨中破骨细胞极度活跃，其数量较对照组明显升高；而氧化苦参碱注射组中，破骨细胞的数量逐渐减少。我们对破骨细胞的数量进行了统计，发现差异具有统计学意义(图13)。
(12)附图14是氧化苦参碱对小鼠全身的毒性作用，结果显示氧化苦参碱腹腔注射对于小鼠的生长和重要脏器没有明显的毒性作用。在研究氧化苦参碱的全身毒性中，我们分析了氧化苦参碱注射组与对照组小鼠的体重、重要脏器的重量，并对小鼠重要脏器进行切片行H&E染色，分析了氧化苦参碱的全身毒性，结果显示，氧化苦参碱无明显系统脏器毒性，是一种理想的治疗药物的选择。
结论：本实施例中，我们创新性的运用氧化苦参碱治疗破骨细胞介导的溶骨性疾病，在细胞层面首次解释了氧化苦参碱对于破骨细胞分化的抑制作用，同时，我们运用前叉韧带切断制造骨关节不稳模型，此类型小鼠膝关节软骨下骨丢失，而行使骨溶解作用的细胞正是破骨细胞，我们的动物实验结果显示，氧化苦参碱腹腔注射可以显著减轻破骨细胞分化所介导的软骨下骨丢失。对小鼠关节具有明显的保护作用。最后我们在体条件下证实了氧化苦参碱无明显的全身脏器毒性，为溶骨性疾病的治疗提供了一种理想的新的选择。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.氧化苦参碱的用途，其特征在于，用于制备治疗骨性关节炎中破骨细胞介导的骨丢失的药物。
2.根据权利要求1 所述的用途，其特征在于，所述药物抑制破骨细胞的分化，抑制破骨细胞的大小和数量，抑制破骨细胞分化F-Actin环的形成，抑制破骨细胞分化调控因子NFATc1和c-fos的表达水平，抑制破骨细胞分化所介导的骨溶解丢失。
3.氧化苦参碱在制备试剂中的用途，其特征在于，所述的试剂用于：
（1）抑制骨性关节炎疾病中破骨细胞的分化；
（2）抑制骨性关节炎疾病中破骨细胞分化所介导的关节软骨下骨丢失。
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