CN107892684B

CN107892684B - 喹唑啉衍生物及其药物组合物，以及作为药物的用途

Info

Publication number: CN107892684B
Application number: CN201711273224.XA
Authority: CN
Inventors: 王为波; 赵兴东; 李同双; 田强; 陈岭; 周祖文; 李志福; 王宪龙; 容悦; 姜立花; 刘研新; 孙婧; 曾凡新
Original assignee: Shanghai Fochon Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Fochon Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-07-18
Filing date: 2014-07-17
Publication date: 2020-05-26
Anticipated expiration: 2034-07-17
Also published as: CN105705494B; EP3022186A1; US20160168129A1; WO2015007219A1; US20170267663A1; US10053449B2; EP3022186B1; US9714235B2; ES2784664T3; CN105705494A; CN107892684A; EP3022186A4

Abstract

本发明公开了一种蛋白酶抑制剂，尤其是公开了一类新型的喹唑啉衍生物及其药物组合物，以及它们的制备方法和用途。

Description

喹唑啉衍生物及其药物组合物，以及作为药物的用途

本申请是2014年7月17日提交的发明名称为“喹唑啉衍生物及其药物组合物，以及作为药物的用途”的第201480040698.8号中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一类新型喹唑啉化合物及其药学上可接受的盐。本发明所述化合物可抑制表皮生长因子受体激酶，从而抑制某些类型细胞的异常增殖。本发明所述化合物可用于治疗哺乳动物，特别是人类的异常增殖性疾病，如癌症。本发明还包括含有此类喹唑啉化合物的药物组合物，以及在癌症治疗中的用途。

背景技术

蛋白酪氨酸激酶可催化ATP上的一个磷酸基团转移至蛋白质底物酪氨酸残基上的羟基。蛋白激酶在细胞内多种生理活动中发挥重要作用，下调蛋白激酶活性可改变某些细胞性质，如癌细胞的增殖失控。

表皮生长因子受体是ErbB受体家族成员之一，该亚家族含有四个成员：EGFR(ErbB-1)、HER-2/c-neu(ErbB-2)、HER-3(ErbB-3)和HER-4(ErbB-4)。基因突变会影响EGFR的表达或活性，可能导致癌症。

研究表明肿瘤发生和癌症进展与表皮生长因子受体信号传导通路调节异常有关，因此可作为癌症临床治疗新型靶标。数个表皮生长因子受体信号通路传导抑制剂在癌症临床治疗中的有效性已被证实。小分子抑制剂如吉非替尼、厄洛替尼和拉帕替尼，以及抗EGFR抗体如西妥昔单抗、帕尼单抗和曲妥珠单抗，已被证实在EGFR过表达肺癌的治疗中是有效的。

由于表皮生长因子受体与疾病的相关性越来越多的被发现，对用于治疗对抑制表皮生长因子受体有响应的疾病的化合物的需求将越来越迫切，其在疗效、稳定性、选择性、安全性、药效学特征和药代动力学特征至少有一方面具有优势。鉴于此，本发明涉及一类新型表皮生长因子受体抑制剂。

发明内容

本发明涉及一类新型喹唑啉衍生物及其药物组合物，以及作为药物的用途。

在一方面，本发明提供至少一个式(I)的化合物：

和/或至少一个药学上可接受的盐，其中：

R¹和R²独立选自氢和C_1-6烷基，其中烷基是被至少1个独立地选自羟基和C_1-6烷氧基的取代基取代；

R³选自C_1-6烷氧基、C_3-6环烷氧基、四氢呋喃-3-基氧基、四氢呋喃-2-基甲氧基、四氢呋喃-3-基甲氧基、四氢呋喃-4-基氧基、四氢呋喃-4-基甲氧基、(1,4-二氧六环-2-基)甲氧基和(3-氧杂-二环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基，其中每个烷氧基和环烷氧基独立地是未被取代的或被至少一个(如一个、两个、三个或四个)取代基取代，该取代基独立地选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_3-6环烷氧基和C_1-6烷氧基；

Ar选自芳基，其中芳基是被至少一个(如一个、两个、三个或四个)取代基取代，该取代基独立选自卤素、羟基和氰基。

另一方面，本发明提供一种用于治疗哺乳动物增殖性疾病的药物组合物，其包括治疗有效量的一个式(I)化合物和一个药学上可接受的载体。

另一方面，本发明提供治疗哺乳动物增殖性疾病的方法，该方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的式(I)化合物。

在优选实施例中，治疗增殖性疾病包括，该增殖性疾病是癌症。

在另一优选实施例中，治疗增殖性疾病包括，该增殖性疾病不是癌症。

本发明进一步提供制备式(I)化合物或药学可接受的盐或其前药的方法。

附图说明

本发明包含的附图，作为专利文件的一部分，说明本发明的非限制实施例，结合说明书对本发明进行解释。

在附图中：

图1表示式(I)化合物的制备反应流程。

图2表示测试化合物的肿瘤抑制作用。

具体实施方式

此处所使用的术语定义如下：

“烷基”是指具有特定碳原子数的分支和直链饱和脂肪族烃基团。除另有注明外，“烷基”是指C_1-6烷基。例如，“C_1-6烷基”中的“C_1-6”指的是有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链的烷基。例如，“C_1-6烷基”包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基和己基。

“环烷基”是指具有特定碳原子数的饱和脂肪族环状烃基团。除另有注明外，“环烷基”是指C_3-6环烷基。例如，“环烷基”包括但不限于环丙基、甲基-环丙基、2,2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基和环己基等。

“烷氧基”是指通过氧桥连接的具有特定碳原子的环状或非环状烷基，因此，“烷氧基”包括了上述烷基和环烷基的定义。“环烷氧基”是指含特定碳原子的环烷基通过氧桥连接。

“芳基”包括：

-5元和6元芳香碳环，例如苯基；

-至少有一个芳香碳环的双环，例如萘基、茚满和1,2,3,4-四氢喹啉，和

-至少有一个芳香碳环的三环，例如芴。

若芳基取代基为二环或三环且其中至少有一环为非芳香环，那么应认为是通过芳环联接。

例如，芳基包括5元和6元芳香碳环，这些芳香碳环与含有一个或多个选自N、O和S的5-7元杂环稠合，条件是联接位点是芳香碳环。由取代的苯类衍生物形成的且在环原子上存在自由价电子的二价自由基，被命名为取代的亚苯基自由基。衍生自一价多环烃自由基的其名字以“-基”结尾的二价自由基，其是在含有自由价电子上的碳原子上再去掉一个氢原子而得到的，其名称为在单价自由基名字加上“-亚(-idene)”，例如，有两个连接位点的萘基就被称为亚萘基。然而芳基的定义不包含杂芳基，也不与之重叠，因此，如果一个或多个芳香碳环与杂环的芳环稠合，所形成的环系应被认为是此处定义的杂芳基，而不是芳基。

“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

“药学上可接受的盐”，是指与药学上可接受的无毒的碱或酸，包括无机碱或有机碱和无机酸或有机酸制成的盐。无机碱的盐可以选自，例如铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、二价锰、钾、钠、锌盐。进一步，药学上可接受的无机碱的盐可选自铵、钙、镁，钾、钠盐。在固体盐中可能存在一个或多个晶体结构，也有可能存在水合物的形式。药学上可接受的有机无毒碱的盐可选自，例如伯胺、仲胺和叔胺盐，取代胺包括自然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N,N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴明胺、异丙胺、赖氨酸、甲葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇。

当本专利所指化合物是碱时，需要与至少一种药学上可接受的无毒酸制备其盐，这些酸选自无机酸和有机酸。例如，选自醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烷磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸。在一些实施例中，可选择这些酸，例如柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸、富马酸、酒石酸。

“保护基”(Pg)是指一类用于与化合物上其它官能团反应而阻隔或保护特定官能团的取代基。例如，“氨基保护基”是指联接在氨基上阻隔或保护化合物上的氨基官能团的取代基。适合的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)，苄氧羰基(CBZ)和氯甲酸-9-芴基甲酯(Fmoc)。同样，“羟基保护基”是指一类羟基取代基可有效阻挡或保护羟基功能。适当的保护基包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基保护基”是指一类羧基取代基能有效阻挡或保护羧基的功能。常用羧基保护基包括-CH₂CH₂SO₂Ph、氰乙基、2-(三甲硅基)乙基、2-(三甲硅基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰胺)乙基、2-(对硝基苯硫基)乙基、2-(二苯基膦)-乙基、硝基乙基等。对于保护基的一般描述和使用说明，见参考文献：T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。

“给予”或“给药”至少一个化合物和/或至少一个药学上可接受的盐是指为需要治疗的个体提供本发明中的至少一个化合物和/或药学上可接受的盐。

“治疗有效量”是指至少一个化合物和/或至少一个药学上可接受的盐能够引起细胞、组织、系统、动物或人类出现可被研究人员、兽医、临床医生或其他临床人员观察到的生物学或医学反应的剂量。

本专利中所述“组合物”包括包含特定量的特定成分的产品，以及任何直接或间接这些特定量的特定成分的组合而成的产品。药学组合物，是指包含有效成分和作为载体的惰性成分的产品，以及任何两个或两个以上的成分直接或间接，通过组合、复合或聚集而制成的产品，或通过一个或更多的成分分解产生的产品，或通过一个或更多的成分发生其他类型反应或相互作用产生的产品。

“药学可接受”是指与制剂中的其它组分相容，并且对服用者无害。

在一个方面，本发明提供至少一个式(I)所示的化合物：

和/或其至少一个药学上可接受的盐，其中：

R¹和R²独立选自氢和C_1-6烷基，其中烷基是被至少1个独立选自羟基和C_1-6烷氧基的取代基取代；

R³选自C_1-6烷氧基、C_3-6环烷氧基、四氢呋喃-3-基氧基、四氢呋喃-2-基甲氧基、四氢呋喃-3-基甲氧基、四氢呋喃-4-基氧基、四氢呋喃-4-基甲氧基、(1,4-二氧六环-2-基)甲氧基和(3-氧杂-二环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基，其中每个烷氧基和环烷氧基独立地是未被取代的或被至少一个(如一个、两个、三个或四个)取代基取代，该取代基独立选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_3-6环烷氧基和C_1-6烷氧基；

Ar选自芳基，其中芳基是被至少一个(如一个、两个、三个或四个)取代基取代，取代基独立选自卤素，羟基和氰基。

在一些实施例中，R²是氢。

在一些实施例中，R¹是C_1-6烷基，其中烷基是被至少一个独立选自羟基和C_1-6烷氧基的取代基取代。在进一步的一些实施例中，R¹选自羟甲基，甲氧基甲基和乙氧基甲基。在进一步的一些实施例中，R¹选自羟甲基和甲氧基甲基。

在一些实施例中，R³选自甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙基甲氧基，四氢呋喃-3-基氧基、四氢呋喃-2-基甲氧基、四氢呋喃-3-基甲氧基、四氢呋喃-4-基氧基、四氢呋喃-4-基甲氧基、(1,4-二氧六环-2-基)甲氧基和(3-氧杂-二环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基。

在一些实施例中，Ar是芳基，其中芳基是被至少一个(如一个、两个、三个或四个)取代基取代，该取代基独立选自氟、氯、溴和碘。在一些实施例中，Ar是3-氯-4-氟苯基。

本发明提供至少一个化合物，其选自：

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((S)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-(((S)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-(((S)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-((1R,5S,6R)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-((1R,5S,6R)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；

(E)-N-(7-((1R,5S,6R)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((S)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺；和/或其药学可接受的盐。

式(I)中的一些化合物具有不对称碳原子。这些非对映异构体混合物可根据其物理化学性质的区别，通过已知方法分离得到单个非对映异构体，例如通过层析和/或分离结晶。对映异构体可通过与适当的光学活性化合物(例如醇类)反应，转化成为非对映异构体混合物，进而分离非对映异构体，将单个非对映异构体转化成相应的光学纯的对映异构体。所有的这种异构体，包括非对映异构体混合物和光学纯的对映异构体均包含在本发明中。

本发明的活性化合物是致癌和原癌蛋白酪氨酸激酶ErbB家族，例如表皮生长因子受体(EGFR)、ErbB2、ErbB3或ErbB4的抑制剂，因此可用做哺乳动物，特别是人的抗增殖药物(例如抗癌)。特别是，本发明化合物可作为治疗剂或预防剂治疗多种肿瘤(肾癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、肾上腺癌、甲状腺癌、肉瘤、胶质母细胞瘤、各种头颈部肿瘤)和其他增生性疾病例如皮肤或前列腺良性增生(牛皮癣或BPH)。此外，本发明的喹唑啉化合物还有望用于治疗多种白血病和淋巴肿瘤。

活性化合物还可用于治疗多种蛋白酪氨酸激酶相关的配体/受体作用异常表达、活化或信号转导，且其活性可被式I化合物抑制的疾病。

此类疾病可能包括神经元、神经胶质、下丘脑、和其他腺体、巨噬细胞、上皮、机制和囊胚腔疾病，这些疾病中ErbB酪氨酸激酶可能出现功能、表达、活化或信号异常。此外，式I化合物还可用于治疗炎症、血管生成疾病、免疫疾病，其中式I化合物可抑制已知的和未知的酪氨酸激酶活性。

如前所述，本发明涉及：

(1)本发明中的一个化合物作为药物使用；

(2)本发明中的一个化合物作为ErbB家族受体激酶抑制剂，例如，用于前文所述的特定适应症；

(3)一种药学组合物，例如，包含本发明中的至少一个化合物和一个或多个药学可接受的稀释剂或载体，用于前文所述的特定适应症；

(4)一种治疗前文所述特定适应症的方法，包含向有需要的个体给予有效剂量的至少一个本发明所述化合物或至少一个含有至少一个本发明所述化合物的药学组合物；

(5)本发明所述的一个化合物的用途，用于制造治疗或者预防疾病或病症的药物，ErbB家族受体激酶造成了该疾病或病症或有所涉及；

(6)在(4)中定义的方法包含合并服用，例如同时或先后给予治疗有效剂量的本发明所述化合物和一个或多个其他药物，该药物对上述特定适应症有效；

(7)一种组合物，含有治疗有效剂量的至少一种本发明所述化合物和至少一种其他药物，该药物对上述特定适应症有效；

(8)本发明所述的一个化合物的用途，用于制造治疗或者预防对抑制ErbB家族受体激酶响应的疾病的药物；

(9)根据(8)的用途，其中所治疗的疾病选自头颈癌、肺癌(例如非小细胞肺癌)、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、白血病、淋巴癌、食道癌、子宫癌或前列腺癌；

(10)根据(8)和(9)的用途，其中化合物为本发明所述任何一个实施例的药学可接受的盐；

(11)一种治疗对抑制ErbB家族受体激酶响应的疾病的方法，包括疾病选自头颈癌、肺癌(例如非小细胞肺癌)、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、白血病、淋巴癌、食道癌、子宫癌或前列腺癌，包括基于有效剂量的至少一种本发明所述化合物和/或药学可接受的盐。在一些实施例中，本发明中化合物可以单独使用或与化疗药物联用治疗细胞增殖性疾病，包括但不限于：淋巴瘤、骨肉瘤、黑色素瘤，或乳腺、肾、前列腺、结肠、甲状腺、卵巢、胰腺、脑、肺、子宫或胃肠道肿瘤。

给药和药学组合物

一般地，本发明所述化合物将以治疗有效量经由任何本领域已知的普通及可接受的方式，单独或与一个或多个治疗药物合用给药。治疗有效量可以广泛变化，取决于受试者的疾病严重性、年龄和相对健康状况，所用化合物的药效以及其他本领域已知的一般技能。例如，对于肿瘤性疾病和免疫系统疾病的治疗，所需剂量将根据给药模式，待治疗的具体病症和所需效果而异。

一般地，每日剂量为0.001-100mg/kg体重时可达到满意的结果，具体来说，从约0.03-2.5mg/kg体重。较大型哺乳动物的日剂量，如人类，可从约0.5mg-约2000mg，或更具体来说，从0.5mg-100mg，以方便的形式给药，例如，以分剂量最多每日四次或以缓释形式。合适的口服给药的单位剂量形式包含约1至50mg活性成分。

本发明所述化合物可以以药学组合物形式给药，通过任何常规途径给药；例如经肠，例如口服，例如以片剂或胶囊形式，肠胃外，例如以可注射溶液或混悬液形式；或局部给药，例如以洗剂，凝胶剂，软膏剂或乳膏剂，或者以鼻或栓剂形式。

含有本发明所述的以游离碱或药学可接受盐型的化合物与至少一种药学可接受的载体或稀释剂的药学组合物，可以常规方式通过混合、制粒、包衣、溶解或冷冻干燥流程来制造。例如，药学组合物包含一个本发明所述化合物与至少一个药学可接受载体或稀释剂组合，可以以常规方式通过与药学可接受载体或稀释剂混合制成。用于口服的单位剂量形式包含，例如，从约0.1mg-约500mg活性物质。

在一个实施例中，药学组合物为活性成分的溶液，包含混悬剂或分散物，如等张水溶液。在仅包含活性成分或与如甘露醇的载体混合的冻干组合物的情况下，分散体或悬浮液可在使用前进行补充。药学组合物可以被灭菌和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。合适的防腐剂包括但不仅限于抗氧化剂如抗坏血酸，杀微生物剂，如山梨酸或苯甲酸。溶液或悬浮液还可以包含增粘剂，包括但不仅限于羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、明胶，或增溶剂，例如吐温80(聚氧乙烯(20)失水山梨醇单油酸酯)。

悬浮液在油中可能包含作为油性成分的植物油，合成或半合成的油，常用于注射目的。实施例包括含有作为酸组分的具有8-22个碳原子，或在一些实施方案中，从12-22个碳原子的长链脂肪酸的液体脂肪酸酯。合适的液体脂肪酸酯包括但不限于月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸，山萮酸或相应的不饱和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、巴西烯酸和亚油酸，如果需要，可以含有抗氧化剂，例如维生素E、3-胡萝卜素或3,5-二-叔丁基-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分可以具有六个碳原子，并且可以是单价或多价的，例如单-、二-或三价的醇。合适的醇组分包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇，丁醇或戊醇或者其异构体，乙二醇和甘油。

其它合适的脂肪酸酯包括但不限于油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、

(聚氧乙烯甘油)、

CS(通过醇解杏仁油的不饱和聚乙二醇化甘油酯和含有甘油酯和聚乙二醇酯)、LABRASOL^TM(通过醇解TCM制备的饱和聚乙二醇化甘油酯和包含甘油酯和聚乙二醇酯；均可从法国GaKefosse公司获得)，和/或

(德国Hüls AG公司的链长为C8至C12的饱和脂肪酸甘油三酯)，以及植物油如棉子油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油或花生油。

用于口服给药的药物组合物可以通过，例如通过将活性成分与一种或多种固体载体混合，如果需要，颗粒化所得的混合物，并通过加入另外的赋形剂加工所述混合物或颗粒，以形式片剂或片芯。

合适的载体包括但不限于填充剂，例如糖，如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素制剂和/或磷酸钙(例如磷酸三钙或磷酸氢钙)和还粘合剂，例如淀粉，如玉米、小麦、大米或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或(如果需要的话)崩解剂，如上述淀粉、羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、藻酸或其盐，如藻酸钠。另外的赋形剂包括流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐(如硬脂酸镁或硬脂酸钙)和/或聚乙二醇，或其衍生物。

可以为片剂芯提供合适的、可选肠溶的包衣，通过使用特别是，浓缩的糖溶液，其可包括阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，或者溶于合适有机溶剂或溶剂混合物的涂层溶液，或者对于肠溶衣，合适的纤维素制品，如乙酰纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液的制备。染料或颜料可以加入片剂或片剂用于口服给药的药物组合物还可以包括硬胶囊，包括明胶或含有明胶和增塑剂，如甘油或山梨醇的软密封胶囊。硬胶囊剂可含有活性成分的颗粒的形式，例如与填充剂如玉米淀粉，粘合剂和/或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁，和任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性成分可以溶解或悬浮于合适的液体赋形剂如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或者乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，向其中稳定剂和洗涤剂，例如聚氧乙烯山梨糖醇的脂肪酸酯型，也可加入。

适用于直肠给药的药物组合物，例如栓剂，其包含活性成分和栓剂基质的组合。合适的栓剂基质是，例如天然或合成的甘油三酯、石蜡烃、聚乙二醇或高级链烷醇。

适于胃肠外给药的药物组合物可包含水溶性形式的活性成分，例如水溶性盐或包含增加粘度的物质的含水注射悬浮液，例如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇的水溶液和/或葡聚糖，和(如果需要)稳定剂。将活性成分，任选地与赋形剂，也可以是在一个冷冻干燥的形式，并且可在非肠道给药前通过加入合适的溶剂制成的溶液。使用的解决方案，例如用于胃肠外给药，也可以用作输注溶液。注射制剂的制备通常在无菌条件下，填充进例如安瓿或小瓶和密封的容器中。

本发明所述化合物可以作为唯一的活性成分，或与其它在免疫调节疗法有用的或抗肿瘤性疾病有用的药物一起给药。例如本发明所述化合物与对上述各种疾病有效的药学组合物一起使用，例如可以使用本发明所述化合物与环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨、顺铂、卡铂、长春新碱、长春碱、依托泊苷、伊立替康、紫杉醇、多西他赛、利妥昔单抗、多柔比星、吉非替尼或伊马替尼；或者也与环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素或它们的免疫抑制类似物，例如环孢菌素A、环孢菌素G、FK-506、西罗莫司和依维莫司、糖皮质激素，如泼尼松、环磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、金盐、柳氮磺吡啶、抗疟药、布喹那、来氟米特、咪唑立宾、麦考酚酸、麦考酚酸、酚酸酯、15-脱氧精胍菌素，免疫抑制单克隆抗体，例如单克隆抗体白细胞受体，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、I CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、ICOS、LFA-1、VLA-4或它们的配体，或其它免疫调节化合物，例如CTLA41g。

本发明还提供了药物组合，例如一种药盒，其包含a)是本发明所公开的化合物，可以为游离形式或药学可接受的盐形式，和b)至少一种共同药物。该药盒可以包含其使用说明书。

实施例

式(I)的至少一个化合物和/或其至少一个药学可接受的盐合成方法有多种，在本实例中列举出的是具有代表性的式(I)的至少一个化合物和/或其至少一个药学可接受的盐的合成方法。然而，需要指出的是，至少一个式(I)的化合物和/或其至少一个药学可接受的盐也可能通过其它合成路线的合成得到。

式(I)的某化合物中，原子与其它原子之间的连接可能导致存在特殊的立体异构体(如手性中心)。合成至少一个式(I)的化合物或其至少一个药学可接受的盐可能产生不同异构体(对映异构体、非对映异构体)的混合物。除非特别说明是某个特定的立体构型，所列举的化合物均包括了其可能存在的不同立体异构体。

至少一个式(I)的化合物也可以制成药学可接收的酸加成盐，例如通过将本发明化合物的游离碱形式与药学可接受的无机或有机酸反应。或者将至少一个式(I)的化合物的游离酸形式与药学可接受的无机或有机碱反应，将其制成药学可接受的碱加成盐。适宜于制备式(I)化合物的药学可接受盐的无机和有机的酸和碱已在本申请书的定义部分做了说明。此外，式(I)化合物盐形式也可以通过使用起始原料或中间体的盐进行制备。

式(I)化合物的游离酸或游离碱可以通过其相应的碱加成盐或者酸加成盐制备得到。式(I)化合物的酸加成盐形式可转化成相应的游离碱，例如通过用合适的碱(如氨水溶液，氢氧化钠等)处理。式(I)化合物的碱加成盐形式可转化为相应的游离酸，例如通过用合适的酸(如盐酸等)处理。

式(I)化合物的保护衍生物可以通过本领域人员熟知的方法制备得到。关于保护基团的加入和去除的详细技术描述参见：T.W.Greene,Protecting Groups in OrganicSynthesis,3rd edition,John Wiley&Sons,Inc.1999。

根据本发明化合物的发明过程，很容易制得至少一个式(I)化合物和/或其至少一个药学可接受的盐或其溶剂化物(如水合物)。至少一个式(I)化合物和/或其至少一个药学可接受的盐的水合物可采用重结晶方法容易制得，从水/有机溶剂重结晶，有机溶剂如二氧六环，四氢呋喃和/或甲醇等。

通过将本发明化合物的消旋体混合物与光学活性拆分剂反应，形成一对非对映异构体，进而分离非对映异构体，回收光学纯的异构体，从而制得式(I)化合物的单一立体异构体化合物。虽然化合物的共价非对映异构体衍生物能够分辨得到对映异构体，但最好选择可分离的混合物(如非对映异构体结晶盐)。非对映异构体的物理性质有显著的差别(如熔点、沸点、溶解度、反应性等)，可很容易通过这些差异将其分离。该对映异构体可以通过色谱分离，或者最好利用溶解度的不同，采用分离/分辨技术。光学纯的立体异构体随后被回收，得到纯化的光学对映体与拆解试剂不在一定的条件下并不会发生消旋。能从外消旋混合物中分离立体异构体技术的更详尽描述可参见：Jean Jacques Andre Collet,SamuelH.Wilen,Enantiomers,Racemates and Resolutions,John Wiley&Sons,Inc.(1981).。

这些反应中所使用的标志和常识，图表与实例均与现行的科学文献相一致，例如，美国化学协会杂志或生物化学杂志。除非另有说明，标准的单字母或三字母的缩写通常指L型氨基酸残基。除非另有说明，所有使用的起始原料均从市场供应商购买得到，使用时并未进一步纯化。例如，在实例及整个说明书中会用到以下缩写：g(克)、mg(毫克)、L(升)，mL(毫升)，μL(微升)、psi(磅每平方英寸)、M(摩尔)、mM(毫摩尔)、i.v.(静脉注射)、Hz(赫兹)、MHz(兆赫)、mol(摩尔)、mmol(毫摩尔)、RT(室温)、min(分钟)、h(小时)、mp(熔点)、TLC(薄层色谱法)、Tr(保留时间)、RP(反相)、MeOH(甲醇)、i-PrOH(异丙醇)、TEA(三乙胺)、TFA(三氟乙酸)、TFAA(三氟乙酸酐)、THF(四氢呋喃)、DMSO(二甲基亚砜)、EtOAc(乙酸乙酯)、DME(乙二醇二甲醚)、DCM(二氯甲烷)、DCE(1,2-二氯乙烷)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)、DMPU(N,N-dimethylpropyleneurea)、CDI(1,1-羰基二咪唑)、IBCF(异丁基氯)、HOAc(乙酸)、HOSu(N-羟基丁二酰亚胺)、HOBT(N-羟基苯并三氮唑)、Et2O(乙醚)、EDCI(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、BOC(叔丁氧羰基)、FMOC(芴甲氧羰基)、DCC(二环己基碳二亚胺)、CBZ(苄氧羰基)、Ac(乙酰基)、atm(大气压)、TMSE(2-(三甲硅基)乙基)、TMS(三甲硅基)、TIPS(三异丙基硅烷)、TBS(叔丁基二甲硅基)、DMAP(二甲基氨基吡啶)、Me(甲基)、OMe(甲氧基)、Et(乙基)、tBu(叔丁基)、HPLC(高效液相色谱法)、BOP(双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯)、TBAF(四丁基氟化铵)、mCPBA(间氯过氧苯甲酸)。

醚或Et₂O均是指乙醚；盐水则是指饱和NaCl水溶液。除非另有说明，所有的温度均是指℃温度(摄氏度)，所有的反应都是在室温下的惰性氛围中反应。

¹H NMR谱采用Bruker Avance 400核磁共振光谱仪记录。化学位移为以ppm表示。耦合常数均以赫兹为单位(Hz)。以分割模式描述表观多样性，并定为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(泛峰)。

低分辨质谱(MS)和化合物纯度数据来自Waters ZQ液质联用色谱的单极杆系统，该系统配备有电喷雾离子检测器(ESI)，紫外探测器(220和254nm)及蒸发光散射检测器(ELSD)。薄层层析法使用的是0.25mm E.Merck公司的硅胶板(60F-254)，通过紫外，5％的磷钼酸乙醇溶液，茚三酮或对甲氧基苯甲醛溶液进行显色观察。快速柱层析使用的是硅胶(230-400目，Merck公司)。

制备路线

至少一个式I化合物和/或其至少一个药学上可接受的盐可由不同方法合成，一些示例性方法提供如下和实施例。其他合成方法可由本领域技术人员根据本发明披露的信息容易地设计出。

在如下所述诸反应中有必要对活泼基团进行保护，以免这些活性基团参与其它不期望的反应：这些基团如羟基、氨基、亚胺基、含巯基或羧基，最终产物中含有这些基团。常用的保护基团可参考T.W.Greene and P.G.M.Wuts in"Protective Groups in OrganicChemistry"John Wiley and Sons,1991。

本发明中的化合物合成方法由以下路线和实施例加以说明。所用起始原料源于市售商品或可根据已有工艺方法或者此处例示的方法制备。

式(I)化合物的制备

式(I)化合物可通过将4-溴-烯酰胺(II)与适当取代的胺(III)在碱(如K₂CO₃)存在条件下，在极性溶剂如DMF中发生亲核取代反应制备得到。

中间体IIa的合成

中间体IIa的制备反应流程如图1所示。4-氯-7-氟-6-硝基喹唑啉(iii)可参考文献J.Med.Chem.1996,39,918-928中的类似方法制备。氟喹唑啉(i)通过硝化反应得到7-氟-6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮(ii)，然后用氯化亚砜处理得到4-氯-喹唑啉(iii)。4-氯-喹唑啉(iii)和适当的被取代的苯胺在溶剂(如异丙醇)中结合得到4-苯胺-喹唑啉(iv)。7-氟-喹唑啉(iv)经甲醇钠处理得到7-甲氧基-喹唑啉(v)。6-硝基化合物(v)在催化剂如雷尼镍存在条件下，发生氢化反应得到6-氨基化合物(vi)。6-氨基-喹唑啉(vi)与卤代烯酰氯再反应，例如4-溴-丁-2-烯酰氯(vii)，得到4-溴-烯酰胺IIa。卤代烯酰氯可通过已知方法得到，例如用卤化试剂如NBS与链烯酸反应，生成相应卤代烯酸，然后用草酰氯处理得到相应卤代烯酰氯。

以下方案1中的中间体可用中间体IIa相同的方法合成，将甲醇替换为相应的醇类，这些醇是市售的或可由已知方法得到。

方案1

最终，中间体II与市售或可通过已知方法合成得到的仲胺III反应，得到化合物I。

在某些情况下，为便于反应发生或避免副反应，上述反应方案的顺序可能不同。以下实施例的描述便于更全面的理解本发明。这些实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明。

中间体的制备

中间体A

7-氟喹唑啉-4-醇(A-1)

2-氨基-4-氟苯甲酸(3.00g，19.3mol)与甲酰胺(30mL)的混合物于150℃加热6小时。将混合物倾入冰水中(1/1)(250mL)。过滤收集固体物，用水洗涤，干燥得到标题化合物(A-1)，为白色固体。

MS-ESI(m/z):165[M+H]⁺。

7-氟-6-硝基喹唑啉-4-醇(A-2)

7-氟喹唑啉-4-醇(A-1)的浓硫酸(100mL)和发烟硝酸(100mL)溶液于100℃加热1小时。冷却后，将溶液倾入冰水中(1.5L)得到6-硝基喹唑啉-4-醇和8-硝基喹唑啉-4-醇的混合物。混合物于乙酸中重结晶得到标题化合物(A-2)，为黄色固体。

MS-ESI(m/z):210[M+H]⁺。

4-氯-7-氟-6-硝基喹唑啉(A-3)

7-氟-6-硝基喹唑啉-4-醇(A-2)(10.45g，50.00mmol)在SOCl₂(200mL)中的混悬液，在催化量DMF作用下，加热回流3小时得到澄清的溶液。真空除去SOCl₂得到标题化合物(A-3)粗品，直接用于下一步反应。

N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-6-硝基喹唑啉-4-胺(A-4)

向4-氯-7-氟-6-硝基喹唑啉(A-3)粗品的DCM溶液(100mL)中加入3-氯-4-氟苯胺(7.97g，54.8mmol)的i-PrOH(250mL)溶液。将最终的混合物在室温下搅拌15min。加入石油醚(800mL)以确保沉淀完全。过滤收集固体，得到标题化合物(A-4)。

MS-ESI(m/z):337[M+H]⁺。

N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉-4-胺(A-5)

在N₂保护及冷水浴条件下，向NaOMe(28.0g，518mmol)的无水MeOH溶液(1.5L)中加入N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-6-硝基喹唑啉-4-胺(A-4)(72.76g，219mmol)。除去冷水浴并将混合物加热回流1h。将反应物冷却至室温并加水直至产物沉淀。过滤收集固体，并用水和Et₂O洗涤，干燥得到标题化合物(A-5)，为黄色固体。

MS-ESI(m/z):349[M+H]⁺。

N⁴-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4,6-二胺(A-6)

向N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉-4-胺(A-5)(31.81g，91.22mmol)的THF溶液中加入雷尼镍(4g)。混合物在H₂气球条件下室温搅拌12h。过滤除去催化剂。将滤液浓缩至约50mL。缓慢加入HCl/EA后再加入MTBE。过滤收集沉淀物，干燥得到标题化合物(A-6)的盐酸盐。

MS-ESI(m/z):319[M+H]⁺。

(E)-4-溴-N-(4-(3-氯-4-氟苯胺)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)丁-2-烯酰胺(中间体 A)

向巴豆酸(10.0g，116mmol)的CCl₄溶液(100mL)中加入N-溴代琥珀酰亚胺(21.4g，120mmol)，随后加入过氧化苯甲酰(0.20g，0.83mmol)。将混合物回流4.5h后，冷却至室温。将混合物保存在冰箱中过夜。将晶体滤出并将滤液浓缩。残留物从己烷中重结晶得到(E)-4-溴丁-2-烯酸，为白色固体。

向(E)-4-溴丁-2-烯酸(0.825g,5.00mmol)的DCM溶液(10mL)中加入(COCl)₂(1.27g，10.0mmol)，随后加入DMF(约50μL)。混合物在室温下搅拌4.5h。浓缩溶剂，残留物重新溶解在5mL THF中(溶液A)。

在0℃下，向A-6(800mg，2.25mmol)的THF(10mL)，EtOAc(10mL)和饱和NaHCO₃(40mL)混合物中，搅拌下滴加溶液A。然后在室温下搅拌混合物30min。分离有机层，水层用EtOAc(40mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并旋蒸。残留物经柱层析纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc＝2:1)，得到标题化合物(中间体A)，为黄色固体。

MS-ESI(m/z):465[M+1]⁺。

中间体B

(E)-4-溴-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丁-2-烯酰胺 (中间体B)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为乙醇，制备中间体B。

中间体C

(E)-4-溴-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)丁-2- 烯酰胺(中间体C)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为环丙基甲醇，制备中间体C。

中间体D

(E)-4-溴-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丁- 2-烯酰胺(中间体D)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为2-甲氧基乙醇，制备中间体D。

中间体E

(S,E)-4-溴-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)喹唑啉- 6-基)丁-2-烯酰胺(中间体E)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为(S)-四氢呋喃-3-醇，制备中间体E。

中间体F

(R)-1-(2-溴乙氧基)-3-氯丙基-2-醇(F-1)

在45℃下，向2-溴乙醇(12.86mL，191.8mmol)和BF₃·Et₂O(0.45mL，3.2mmol)的溶液中滴加(R)-2-(氯甲基)环氧乙烷。反应混合物于45℃下加热2h。然后冷却至室温，将乙醚(100mL)加入混合物。该溶液用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并浓缩得到标题化合物(F-1)，为浅棕色液体。

(R)-2-((2-溴乙氧基)甲基)环氧乙烷(F-2)

于0℃下，向搅拌中的NaOH(6.36g，159mmol)水溶液(7.6mL)中滴加(R)-1-(2-溴乙氧基)-3-氯丙基-2-醇(F-1)(11g，64mmol)。该混合物于25℃下搅拌2h。然后加入乙醚和水。分离有机层，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并浓缩得到标题化合物(F-2)，为浅棕色液体。

(S)-(1,4-二氧六环-2-基)甲醇(F-3)

室温下，将(R)-2-((2-溴乙氧基)甲基)环氧乙烷(F-2)(5.5g，41mmol)加入NaOH水溶液(4.09g，102mmol，40mL)。混合物加热至90℃，并搅拌2h。在所得混合物中加入固体K₂CO₃至饱和，用DCM(6×40mL)萃取。合并的有机层用Na₂SO₄干燥并浓缩。残留物经柱层析分离，用EtOAc/石油醚(2:1～3:1)洗脱，得到标题化合物(F-3)，为澄清液体。

(R,E)-N-(7-((1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6- 基)-4-溴丁基-2-烯酰胺(中间体F)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为F-3，制备中间体F。MS-ESI(m/z):551(M+1)⁺。

中间体G

(S,E)-N-(7-((1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)喹唑啉- 6-基)-4-溴丁基-2-烯酰胺(中间体G)

参照中间体F的合成方法，将(R)-2-(氯甲基)环氧乙烷替换为(S)-2-(氯甲基)环氧乙烷，制备中间体G。

中间体H

(1R,5S,6R)-乙基3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-羧酸酯(H-1)

向2,5-二氢-呋喃(7.00g，100mmol)的DCM(100mL)溶液中一次性加入Rh₂(OAc)₄(0.22g，0.50mmol)。在2.5h内，向上述溶液中滴加重氮乙酸乙酯(12.0mL，0.1mol)的DCM(50mL)溶液。反应混合物室温下搅拌15h。然后在混合物中加入硅胶(20g)，剧烈搅拌5分钟后，真空浓缩混合物，经快速柱层析分离，用己烷/EtOAc(10:0～10:1)洗脱得到标题化合物H-1(6.0g)。

(1R,5S,6s)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲醇(H-2)

于0℃，向H-1(3.10g，20.0mmol)的THF(40mL)溶液中滴加LiAlH₄的THF溶液(15.0mL，2.0M，30.0mmol)。混合物升至室温并搅拌1h。重新降温至0℃后，在上述混合物中分3次小心加入NaSO₄·10H₂O(10g)，剧烈搅拌混合物1h，用MgSO₄干燥。过滤并真空浓缩得到标题化合物H-2(2.1g)。

(E)-N-(7-((1R,5S,6r)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-溴丁基-2-烯酰胺(中间体H)

参照中间体A的合成方法，将甲醇替换为H-2，制备中间体H。

实施例1

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(1)

氮杂环丁烷-2-基甲醇盐酸盐(1a)

参照J.Med.Chem.2008,51,948–956中描述的制备过程制备标题化合物。

在室温下，将氮杂环丁烷-3-基甲醇盐酸盐(1a)(50mg，0.4mmol)和Na₂CO₃(100mg，0.8mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌0.5h，然后加入中间体A(80mg，0.2mmol)。混合物在室温下搅拌1h。用水(30mL)淬灭反应，并用EtOAc(2×50mL)萃取。萃取液用水、饱和食盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物经柱层析纯化(洗脱剂:DCM/MeOH＝15:1)，得到40mg标题化合物(1)，为黄色固体。

MS-ESI(m/z):472[M+1]⁺。

实施例2

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基) 氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(2)

(R)-叔丁基2-(羟甲基)氮杂环丁基-1-羧酸酯(2a)

参照Tetrahedron:Asymmetry 1998,9,2791-2794中描述的制备过程，以市售的D-天冬氨酸二苄酯为起始原料制备标题化合物。

(R)-叔丁基2-(甲氧基甲基)氮杂环丁基-1-羧酸酯(2b)

在0℃下，向(R)-叔丁基2-(羟甲基)氮杂环丁基-1-羧酸酯(2a)(510mg，2.73mmol)的DMF(10mL)溶液中分批加入NaH(60％218mg，5.46mmol)，搅拌0.5h。向该混合物中加入MeI(581mg，4.09mmol)，并在2h内升温至室温。用冰水(50mL)淬灭反应，用EtOAc(35mL×3)萃取。萃取液用饱和食盐水洗涤(35mL×2)，经Na₂SO₄干燥并浓缩。残留物经柱层析纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc＝6:1)得到2b(260mg)，为无色油状物。

MS-ESI(m/z):202[M+1]⁺。

(R)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷三氟乙酸盐(2c)

向叔丁基2-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(260mg，1.29mmol)的DCM(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5mL)。该混合物在室温下搅拌1h。浓缩反应混合物得到2c粗品，直接用于下一步反应。

MS-ESI(m/z):102[M+1]⁺。

参照实施例1的制备过程，将1a替换为2c，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):486[M+1]⁺。

实施例3

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基) 氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(3)

参照实施例2的制备过程，将D-天冬氨酸二苄酯替换为L-天冬氨酸二苄酯，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):486[M+1]⁺。

实施例4

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基) 氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(4)

参照实施例2的制备过程，将中间体A替换为中间体B，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):500[M+H]⁺。

实施例5

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基) 氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(5)

参照实施例3的制备过程，将中间体A替换为中间体B，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):500[M+H]⁺。

实施例6

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2- (甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(6)

参照实施例2的制备过程，将中间体A替换为中间体D，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):530[M+H]⁺。

实施例7

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2- (甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(7)

参照实施例3的制备过程，将中间体A替换为中间体D，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):530[M+H]⁺。

实施例8

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(8)

参照实施例1的制备过程，将中间体A替换为中间体C，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):512[M+H]⁺。

实施例9

(R,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(9)

参照实施例2的制备过程，将中间体A替换为中间体C，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):526[M+H]⁺。

实施例10

(S,E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-(环丙基甲氧基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(10)

参照实施例3的制备过程，将中间体A替换为中间体C，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):526[M+H]⁺。

实施例11

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-4- (2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(11)

参照实施例1的制备过程，将中间体A替换为中间体E，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):528[M+H]⁺。

实施例12

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-4- (2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(12)

苄基1-苄基氮杂环丁烷-2-羧酸酯(12a)

2,4-二溴丁酸苄酯(8.50g，25.2mmol)、苄胺(4.05g，37.8mmol)和K₂CO₃(8.70g，63.1mmol)在乙腈(70mL)中的混合物于85℃加热过夜。混合物冷却至室温，并过滤。用EtOAc(30mL)清洗滤饼。减压浓缩合并的滤液。残留物经硅胶柱层析分离(洗脱剂:PE/EtOAc＝20:1～10:1)得到标题化合物12a(4.0g)，黄色油状物。

MS-ESI(m/z):282.0[M+1]⁺。

1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-2-羧酸(12b)

在氢气氛围下，12a(3.70g，13.2mmol)，二碳酸二叔丁酯(5.70g，26.3mmol)和Pd(OH)₂(0.90g，6.43mmol)在MeOH(100mL)中的混合物于50℃搅拌7h。反应混合物冷却至室温并过滤除去固体。滤液用2N NaOH(40mL)处理，并于室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物。残留物用EtOAc(50mL)萃取。水相用1N HCl调节至pH＝2，用DCM:i-PrOH＝4:1(150mL×3)萃取。合并有机相用水(100mL)洗涤，Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到标题化合物12b(2.50g)，为无色油状物。

MS-ESI(m/z):146.0[M+1-56]⁺。

叔丁基2-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(12c)

于0℃下，向12b(1.45g，7.21mmol)的无水THF(12mL)溶液中滴加硼烷二甲硫醚络合物(10M，3mL)。反应混合物升至室温维持3h。然后用MeOH(10mL)淬灭，DCM(100mL)稀释，用水(40mL×3)洗涤，Na₂SO₄干燥，减压浓缩得到标题化合物12c(1.25g)，无色油状物。

MS-ESI(m/z):132.0[M+1-56]⁺。

2-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷三氟乙酸盐(12d)

参照2c的制备过程，将2b替换为12c，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):102[M+H]⁺。

(E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-b-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(12)

参照实施例1的制备过程，由中间体E和12d制备得到标题化合物。

MS-ESI(m/z):542[M+H]⁺。

实施例13

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉- 6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(13)

参照实施例1的制备过程，将中间体A替换为中间体F，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):558[M+H]⁺.

实施例14

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉- 6-基)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(14)

参照实施例2的制备过程，将中间体A替换为中间体F，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):572[M+H]⁺。

实施例15

(E)-N-(7-(((R)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉- 6-基)-4-((S)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(15)

参照实施例3的制备过程，将中间体A替换为中间体F，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):572[M+H]⁺.

实施例16

(E)-N-(7-(((S)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉- 6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(16)

参照实施例1的制备过程，将中间体A替换为中间体G，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):558[M+H]⁺。

实施例17

(E)-N-(7-(((S)-1,4-二氧六环-2-基)甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉- 6-基)-4-(2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(17)

参照实施例12的制备过程，将中间体E替换为中间体G，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):572[M+H]⁺。

实施例18

(E)-N-(7-((1R,5S,6r)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-(2-(羟甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(18)

参照实施例1的制备过程，将中间体A替换为中间体H，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):554[M+H]⁺。

实施例19

(E)-N-(7-((1R,5S,6r)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(19)

参照实施例2的制备过程，将中间体A替换为中间体H，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):568[M+H]⁺。

实施例20

(E)-N-(7-((1R,5S,6r)-3-氧杂二环[3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-4-((S)-2-(甲氧基甲基)氮杂环丁-1-基)丁-2-烯酰胺(20)

参照实施例3的制备过程，将中间体A替换为中间体H，制备标题化合物。

MS-ESI(m/z):568[M+H]⁺。

细胞增殖抑制活性测试

材料和试剂：

MTS检测试剂盒购自Promega。RPMI-1640培养基、胎牛血清和青霉素-链霉素购自Gibco。二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma。

细胞增殖抑制活性

通过测定化合物对BT474(EGFR过表达)和N87(EGFR和ErbB过表达)细胞增殖的抑制作用，检测化合物对细胞EGFR和ErbB2的抑制作用。BT474细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中，单细胞层覆盖率40-80％。N87细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，单细胞层覆盖率40-80％。消化细胞，将细胞按相应浓度(BT474：1000/孔，N87：1000/孔)接种于96孔板。BT474细胞板于37℃，5％CO₂孵育48h；N87细胞板于37℃，5％CO₂孵育过夜。96孔板中加入不同浓度(终浓度1000、333.3、111.1、27.04、12.35、4.12、1.37、0.46和0.15nM)的化合物，BT474细胞板于37℃，5％CO₂孵育7天。N87细胞板于37℃，5％CO₂孵育72h。弃去培养基，每孔加入100μl培养基和20μl MTS。孵育2h后，用酶标仪测量490nm和650nm处的吸收。用GraphPad Prism 5.0计算IC₅₀。

根据本文中所述的生物学方法对上述制备的所选化合物进行试验。其结果如表1所示。

表1

N87肿瘤体内试验

雌性BALB/cA-nude裸小鼠皮下接种人胃癌NCI-N87细胞。每周测量两次肿瘤体积。待肿瘤生长至60-150mm³后，将动物随机分组(第0天)。每组6只小鼠。待测化合物经口给药，每天一次，给药21天。在第21天确定肿瘤抑制能力。

待测化合物的肿瘤抑制能力见图1和表2。肿瘤体积(V)计算方法为：V＝1/2×a×b，其中a和b分别表示肿瘤的长和宽。相对肿瘤增殖率计算方法为：T/C(％)＝(T-T₀)/(C-C₀)×100，其中T和C分别为测试化合物组和溶剂对照组第21天的肿瘤体积，T₀和C₀分别为测试化合物组和溶剂对照组第0天的肿瘤体积。

表2测试化合物肿瘤抑制活性

Claims

1.化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

2.药物组合物，包含权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗、改善或预防对抑制ErbB家族受体激酶有响应的病症的药物中的用途，其中所述药物任选地与另一治疗药物组合。

4.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗细胞增殖异常的药物中的用途。