CN107860860A - 一种高效薄层色谱‑气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法 - Google Patents

一种高效薄层色谱‑气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107860860A
CN107860860A CN201710971281.9A CN201710971281A CN107860860A CN 107860860 A CN107860860 A CN 107860860A CN 201710971281 A CN201710971281 A CN 201710971281A CN 107860860 A CN107860860 A CN 107860860A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
folic acid
layer chromatography
thin layer
oxidation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710971281.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107860860B (zh
Inventor
陈益胜
徐学明
王萍
谢正军
杨哪
吴凤凤
金亚美
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201710971281.9A priority Critical patent/CN107860860B/zh
Publication of CN107860860A publication Critical patent/CN107860860A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107860860B publication Critical patent/CN107860860B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种高效薄层色谱‑气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法，属于食品检测技术领域。根据叶酸本身不带荧光的特点，建立了一种原位气体氧化荧光衍生的方法，对待测样品进行衍生化反应，并利用HPTLC作为开放的色谱分离载体，再使用薄层色谱扫描仪进行扫描定量。本发明的方法检测周期短，准确性好，单次筛检过程从样品准备到获得最终结果仅需1‑2h，检测限可达到20～50μg/kg，检测方法可实现重复性RSD<10％，检测结果基本与HPLC检测结果一致。

Description

一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法
技术领域
本发明涉及一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法，属于食品检测技术领域。
背景技术
叶酸(也称维生素B9)，分子结构由蝶啶对氨基苯甲酸和L－谷氨酸两部分组成，是一种具有重要生理功能的B族维生素，对人体健康和畜禽养殖具有重要的营养价值。目前，市场上的叶酸补充剂及功能性食品，种类繁多、质量参差不齐，叶酸含量标注不实等问题也多有存在。因此，研究一种快速定量叶酸的方法成为食品药品中对叶酸补充剂及相关食品药品监控急需解决的问题。
目前，食品药品中叶酸常用检测方法为高效液相色谱法，此方法样品的前处理复杂，需要将样品中大多数杂质去除，且检测时间较长，实验前需要进行长时间的系统平衡，测定过程只能逐一进行样品检测。
由于叶酸分子结构本身不具备荧光特性，因此，多采用紫外或者质谱对其色谱分离结构进行检测。但是前者灵敏度和特异性低，而后者对分析设备要求高，制样步骤复杂，分析成本昂贵。叶酸分子的氧化产物可以发射强烈的荧光，这一衍生过程可以在色谱展开后的薄层板上原位实施，极其有利于薄层光密度扫描定量。目前叶酸氧化方法多为在溶液中氧化，例如高锰酸钾、过氧化氢氧化法。溶液氧化法不利于在平面薄层色谱中应用，因此，急需建立一种适用于高效薄层色谱的氧化前处理方法以实现叶酸在薄层色谱上的高效快速检测。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种用于薄层色谱检测的原位气相氧化荧光衍生方法，所述方法是待测样品至于氧化环境中，氧化3～15min。
在本发明的一种实施方式中，所述氧化环境是含有氧化剂的密闭气体环境。
在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂包括氧气、氯气、溴气的至少一种。
在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂的用量为10-40cm3/m3。
本发明的第二个目的是提供一种筛检叶酸的方法，所述方法是将待测样品经过所述原位气相氧化荧光衍生方法进行氧化荧光衍生处理，再经过薄层色谱扫描定量。
在本发明的一种实施方式中，所述方法是将待测样品先在薄层色谱上展开，再进行氧化荧光衍生，最后薄层色谱扫描定量。
在本发明的一种实施方式中，所述待测样品包括复合维生素药片、早餐谷物或动物饲料。
在本发明的一种实施方式中，所述维生素药片磨粉后用0.1～5％的氨水溶解，超声10～20min取出，离心，膜过滤后进行氧化荧光衍生。
在本发明的一种实施方式中，将所述谷物或饲料磨粉后，按1:4的质量比加入至0.05～0.2mol/L的盐酸，放入高压灭菌锅中121℃加热15min调pH至6.8-7.2，加入淀粉酶置于37-55℃中反应4h。反应结束后，用甲醇定容至25或50mL，离心后取上清液过膜得到谷物/饲料样品。
在本发明的一种实施方式中，所述薄层色谱的分离为：将2-8μL样品点样，点样后用体积比为6：4：1：1的甲醇/乙酸乙酯/三乙胺/水展开，上行展开开至硅胶板的3/5处，取出后硅胶板置于50℃平板加热器上充分干燥3min。
在本发明的一种实施方式，经氧化荧光衍生后的样品置于366nm紫外灯下照射，具有清晰条带的样品中含有叶酸。
在本发明的一种实施方式中，将经过高效薄层色谱板分离氧化后所得的胶板置于薄层扫描仪中进行扫描定量，通过制标准曲线，计算样品叶酸含量。
本发明的有益效果：本发明建立了一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速定量筛检叶酸的方法，可实现单次实验同时检测多种样品，实现高通量筛检。单次筛检过程从样品准备到获得最终结果仅需1-2h，检测限可达到20～50μg/kg，检测方法可实现重复性RSD<10％，此方法具有快速、准确、经济的优点；同时基于气相氧化荧光衍生方法的建立为平面高效薄层色谱分析开辟了新的视野。
附图说明
图1为实施例1叶酸标准溶液展开图(A)、薄层色谱扫描定量图(B)及标准曲线(C)；
图2是叶酸氧化前后荧光衍生对比图；
图3是实施例3复合维生素样品、早餐谷物样品、饲料样品展开图(A)及薄层扫描定量图(B)；其中。A～E为叶酸标准品，F～H为复合维生素药片，I～K为饲料，L～N为早餐谷物
图4是实施例4复合维生素样品、早餐谷物样品、饲料样品及燕麦样品展开图。
具体实施方式
实施例1
(1)叶酸标准液的制备：用1％的氨水为溶剂，用甲醇稀释制备浓度为0.01mg/mL的叶酸标准溶液；
(2)高效薄层色谱分离：将2-8μL叶酸的标准品和复合维生素片/早餐谷物/饲料样品用Linomat 5进行精确点样，点样完成后用展开液(甲醇/乙酸乙酯/三乙胺/水＝6/4/1/1(v/v))展开，上行展开60mm取出硅胶板置于50℃平板加热器上充分干燥3min；
(3)叶酸氧化荧光：将硅胶板置于常温常压下、含有20-22cm3/m3溴气、其余为空气的密闭环境中氧化一定时间生成荧光产物，取出硅胶板，置于366nm紫外灯的照射下获取硅胶板图像。(如图1A)
(4)薄层扫描仪扫描定量：将步骤(4)高效薄层色谱板氧化后所得的胶板置于薄层扫描仪中进行扫描定量，光源为氘灯或钨灯，扫描波长为300-400nm。扫描结束后，以扫描面积为y轴，叶酸质量为x轴，制作标准曲线。结果如图1B、1C所示。通过标准曲线计算样品叶酸含量。
实施例2
具体实施方式同实施例1，区别在于，氧化时间分别为0min,3min，5min，10min，15min，结果如图2所示。氧化3min、5min时荧光条带较强，10min、15min荧光条带较弱。
实施例3
(1)分别对符合维生素药片、早餐谷物和饲料中的叶酸进行检测。
复合维生素药片的预处理：将药片磨粉，称取0.5g溶于10ml 1％的氨水中，超声20min后取出，3500r/min离心10min，过0.45μm水膜得到药片样品，4℃中冷藏。
早餐谷物的预处理：分别将谷物磨粉，称取2.5g，加入10ml 0.1mol/L的盐酸，放入高压灭菌锅中121℃加热15min。取出冷却至室温，用1mol/L的氢氧化钠调pH至6.8-7.2之间，加入1mL高峰淀粉酶置于37℃中反应4h。结束后，用甲醇定容至50mL。离心后取上清液过膜得到谷物样品，4℃中冷藏。
饲料的预处理与早餐谷物的处理方法相同。
(2)采用0.5MPa氮气为载体，用100μl注射器(CAMAG)将样品和叶酸标准品用Linomat5进行精确点样于20×10cm的薄层板上，点样的条带长6mm，条带距离底部8mm，距离左端12mm，条带间距1.7mm。点样完成后用ADC-2(CAMAG)展开仪展开，展开前，通过在另一槽注入10mL的流动相使缸内达到饱和状态。取10mL优化后的展开液(甲醇/乙酸乙酯/三乙胺/水＝6/4/1/1(v/v))，上行展开60mm取出，置于50℃平板加热器上充分干燥3min。随后置于充满饱和氧化性气体的环境中进行氧化，置于DD70成像系统(Biostep)上，在366nm的照明下获取硅胶板的图像，然后用薄层色谱扫描仪进行扫描定量，扫描条件与实施例1中(4)相同。结果如图3A所示，含有叶酸的不同样品均能够获得清晰的成像，图3-B结果显示，根据A-E的检测结果可计算获得叶酸的标准曲线(与图1C相同)，将维生素药片、早餐谷物和饲料的色谱峰值代入标准曲线，经计算，各样品中叶酸含量分别为0.35mg/ml，0.043mg/ml，0.67mg/ml，与HPLC检测结果一致。
实施例4
(1)分别对含有叶酸的复合维生素药片、早餐谷物和饲料，以及不含叶酸的麦片进行检测。
复合维生素药片样品处理同实施例3。
早餐谷物、饲料和麦片的预处理与实施例2中早餐谷物的处理方法相同。
(2)测定方法同实施例3中(2)。结果如图4所示。含有叶酸的样品氧化后具有荧光条带，不含叶酸的样品氧化后不具有荧光条带，从而可以检测出样品是否含有叶酸成分。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种用于薄层色谱检测的原位气相氧化荧光衍生方法，其特征在于，将待测样品至于氧化环境中，氧化3～15min；所述氧化环境是含有氧化剂的密闭气体环境。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化剂包括氧气、氯气、溴气中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述氧化剂的用量为10～40cm3/m3。
4.一种筛检叶酸的方法，所述方法是将待测样品经过权利要求1所述的原位气相氧化荧光衍生方法进行氧化荧光衍生处理，再经过薄层色谱扫描。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法是将待测样品先在薄层色谱上展开，再进行氧化荧光衍生，最后薄层色谱扫描。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述在薄层色谱上展开是按2-8μL在硅胶板上点样，点样后用体积比为5～6：4～5：0.5～1：1的甲醇/乙酸乙酯/三乙胺/水展开，展开后将硅胶板干燥2～5min。
7.根据权利要求4-6任一所述的方法，其特征在于，经氧化荧光衍生后的样品置于366nm紫外灯下照射，具有荧光条带的样品中含有叶酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将经过高效薄层色谱板分离氧化后所得的胶板置于薄层扫描仪中进行扫描定量，薄层色谱扫描条件为汞灯、氘灯或钨灯，其测定波长为300-400nm；通过标准曲线y＝102.916x+502.602，计算样品叶酸含量；其中，y为色谱峰面积，单位Abs；x为叶酸含量，单位ng。
9.根据权利要求4-6,8任一所述的方法，其特征在于，待测样品为食品或药品。
10.权利要求1或2所述原位气相氧化荧光衍生方法在化合物检测领域的应用。
CN201710971281.9A 2017-10-18 2017-10-18 一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法 Active CN107860860B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710971281.9A CN107860860B (zh) 2017-10-18 2017-10-18 一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710971281.9A CN107860860B (zh) 2017-10-18 2017-10-18 一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107860860A true CN107860860A (zh) 2018-03-30
CN107860860B CN107860860B (zh) 2019-07-02

Family

ID=61697504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710971281.9A Active CN107860860B (zh) 2017-10-18 2017-10-18 一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107860860B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109061027A (zh) * 2018-05-07 2018-12-21 江南大学 Hptlc-生物显影筛检油脂合成酚类抗氧化剂的方法
CN112986424A (zh) * 2021-02-09 2021-06-18 赣州市全标生物科技有限公司 一种婴幼儿辅食营养包中叶酸含量均衡稳定性的快速检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1743842A (zh) * 2004-09-03 2006-03-08 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种薄层层析显色方法
CN104597199A (zh) * 2015-02-03 2015-05-06 江南大学 一种一步薄层层析快速检测生物胺的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1743842A (zh) * 2004-09-03 2006-03-08 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种薄层层析显色方法
CN104597199A (zh) * 2015-02-03 2015-05-06 江南大学 一种一步薄层层析快速检测生物胺的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
V.G. DONGRE 等: "New HPTLC Method for Identification and Quantification of Folic Acid from Pharmaceutical Dosage Preparations", 《JOURNAL OF PLANAR CHROMATOGRAPHY》 *
刘欣 等: "过氧化氢氧化-荧光分光光度法测定片剂中叶酸含量", 《分析化学》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109061027A (zh) * 2018-05-07 2018-12-21 江南大学 Hptlc-生物显影筛检油脂合成酚类抗氧化剂的方法
CN109061027B (zh) * 2018-05-07 2020-10-09 江南大学 Hptlc-生物显影筛检油脂合成酚类抗氧化剂的方法
CN112986424A (zh) * 2021-02-09 2021-06-18 赣州市全标生物科技有限公司 一种婴幼儿辅食营养包中叶酸含量均衡稳定性的快速检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107860860B (zh) 2019-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Medina et al. Current role of modern chromatography and mass spectrometry in the analysis of mycotoxins in food
Çevikkalp et al. A simplified HPLC method for determination of tryptophan in some cereals and legumes
CN106855545B (zh) 同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法
Wang et al. Simultaneous determination of nitroimidazoles, benzimidazoles, and chloramphenicol components in bovine milk by ultra-high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry
Jackson et al. Simultaneous multiple mycotoxin quantification in feed samples using three isotopically labeled internal standards applied for isotopic dilution and data normalization through ultra‐performance liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry
CN107632091B (zh) 一种同时检测小麦中多种真菌毒素的方法
Shin et al. Investigation of isotope dilution mass spectrometric (ID-MS) method to determine niacin in infant formula, breakfast cereals and multivitamins
CN107860860A (zh) 一种高效薄层色谱‑气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法
CN101726533B (zh) 一种快速、灵敏的检测三聚氰胺的方法
CN110824065B (zh) 一种包埋后的番茄红素的检测方法
Zhao et al. Sample preparation and mass spectrometry for determining mycotoxins, hazardous fungi, and their metabolites in the environment, food, and healthcare
Tsagkaris et al. Critical comparison of direct analysis in real time orbitrap mass spectrometry (DART-Orbitrap MS) towards liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) for mycotoxin detection in cereal matrices
CN109884212A (zh) 基于化学衍生化与hplc-ms的不饱和脂肪酸定量方法
Sander et al. Certification of standard reference materials containing bitter orange
Wang et al. Non-lethal microsampling and rapid identification of multi-residue veterinary drugs in aquacultured fish by direct analysis in real time coupled with quadrupole-Orbitrap high-resolution mass spectrometry
Wu et al. Determination of 63 mycotoxins in grain products by ultrahigh-performance liquid chromatography coupled with quadrupole-Orbitrap mass spectrometry
CN112129845B (zh) 快速检测猪肠道内容物/粪便中b族维生素含量的方法
Zhang et al. Suspect and nontarget screening of mycotoxins and their modified forms in wheat products based on ultrahigh-performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry
WO2020125532A1 (zh) 一种高效薄层色谱和表面增强拉曼光谱联用筛检食品药品中核黄素的方法
CN109444320B (zh) 一种高效薄层色谱-质谱联用快速筛检米面制品中荧光增白剂的方法
CN115508483A (zh) 一种快速检测血清样本中甲基丙二酸的lc-ms/ms方法
Patil et al. Identifying challenges and risks associated with the analysis of major mycotoxins in feed and botanicals
CN108982716A (zh) 一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法
CN113376280A (zh) 一种同时检测尿液样本中94种氨基酸的方法
Xu et al. Simultaneous determination of major type‐B trichothecenes and the de‐epoxy metabolite of deoxynivalenol in chicken tissues by HPLC–MS/MS

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant