CN107860829B - 一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法 - Google Patents

一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别；高效液相色谱含量测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.2%冰乙酸－甲醇（85:15）为流动相。检测波长为280nm，理论板数按5‑羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；取5‑羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1ml含10μg的对照品溶液，即得；取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本发明操作简便、分离效果好、专属性强、重复性好，可有效控制该制剂的质量。

Description

一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法
技术领域
本发明属于中药制剂的质量检测领域，具体来说涉及一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法。
背景技术
对蒲桃壳的促胃动力活性成分筛选，提取分离纯化得到5-羟甲基糠醛，并经过促胃动力药理实验，证实该成分具有显著的促胃动力作用。根据中药5类新药注册要求，将蒲桃壳制成含有效成分(5—羟甲基糠醛)大于50％的蒲桃益胃颗粒，可用于治疗胃排空延缓、胃肠动力不足引起的消化不良症。因此需要对蒲桃益胃颗粒进行了质量控制方法的研究，有效控制了该制剂的内在质量，保证其临床用药安全有效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简便、分离效果好、专属性强、重复性好，可有效控制该蒲桃益胃颗粒质量的控制方法。
本发明的一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
(1)蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别：本品研细后，取粗粉0.5g，先用0.5ml 1％NaOH溶液润湿，再加入25ml乙酸乙酯，超声提取30min，过滤，滤液挥干，加入1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。另取蒲桃壳药材1g，同法制成药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照《中国药典》2015年版四部的薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3 种溶液各2μl，分别点于同一荧光(GF254)板上，以石油醚－乙酸乙酯(1﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黑色斑点。
(2)高效液相色谱含量测定：
A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.2％冰乙酸－甲醇(85:15)为流动相。检测波长为280nm，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；
B、对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10％乙醇制成每1ml含 10μg的对照品溶液，即得；
C、供试品溶液的制备：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声(功率260w，频率40KHz)10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明的优点在于方法简单、准确。
本发明根据国家对“中药新药研究的技术要求”，采用了专属性强、灵敏度高的高效液相色谱法测定颗粒中蒲桃壳有效成分的含量，建立的样品处理方法简单易行，可操作性强，重现性好；采用的流动相对5-羟甲基糠醛与其他组分的分离度、重现性、精密度、加样回收率都较好；采用薄层色谱法定性鉴别颗粒剂中的有效成分，进一步保证了检测方法的准确性。
本发明在蒲桃益胃颗粒含量测定中，供试品溶液处理采用直接加水超声溶解、放冷后再定容的方法，减少了系列操作误差和能耗；在蒲桃益胃颗粒薄层色谱鉴定方法中，供试品的提取及展开剂均采用无毒试剂，绿色环保。建立的质量控制方法能有效控制该制剂的内在质量，保证用药安全，从而确保其临床疗效。
具体实施方式
以下通过试验例和实施例来进一步说明本发明方法的有益效果。
试验例：
制备：取有效成分5—羟甲基糠醛大于50％的蒲桃壳提取物加蔗糖制成，每1g/袋(含有效成分10mg)，即得。
用法用量：开水冲服，一次1袋，一日3次。
性状：本品为颗粒剂，内容物为淡黄色颗粒；味甜。
鉴别：取本品研细，取粉末0.5g，先用0.5ml 1％NaOH溶液润湿，再加25ml乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，加1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。取蒲桃药材 1g，同法药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照《中国药典》2015年版四部(0502) 薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光 (GF254)板上，以石油醚－乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯 (254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的黑色斑点。
检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2015年版四部0104)。
含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部0512)测定。
(1)仪器与试剂
岛津LC-10AT型输液泵、岛津SPD-10A型紫外检测器、WML-2006C-4型威玛龙色谱数据工作站、HT-230A色谱柱恒温箱。分析天平：LIBROR AEL-160型万分之一电子分析天平，TG332A型十万分之一分析天平。HS10260D(功率260w，频率40KHz)型超声清洗仪。5- 羟甲基糠醛对照品(批号：111626-201308)。对照品购于中国食品药品检定研究院，甲醇为色谱纯，其它试剂均为国产分析纯。供试品由贵州省生物技术研究开发基地提供。
(2)系统适应性试验
色谱柱为依利特Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，0.2％冰乙酸-甲醇(85∶15)为流动相。检测波长为280nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/min。理论板数按5- 羟甲基糠醛峰计算应不低于5000。
(3)控制波长选择
取5-羟甲基糠醛对照品溶液进行UV扫描，在280nm处有最大吸收波长，故选择280nm作为控制波长。
(4)色谱条件的筛选
①流动相的选择：
表1蒲桃益胃颗粒含量测定的流动相选择
方法编号 流动相 结果
1 甲醇：水＝15∶85 杂质峰干扰大
2 甲醇：0.2％冰乙酸＝15∶85 阴性无干扰，分离效果好
3 甲醇：0.2％冰乙酸＝17∶83 阴性无干扰，分离效果较好
4 甲醇：0.2％冰乙酸＝13∶87 阴性无干扰，分离效果较好
通过以上对比试验结果分析，方法2具有保留时间适当，样品分离度高，阴性无干扰等特点，因此作为正文收载。同时根据试验分析总结，当5-羟甲基糠醛理论塔板数达到5000 时，分离度均大于1.5，故选择颗粒剂中测定5-羟甲基糠醛的流动相为甲醇-0.2％冰乙酸＝15∶85，以5-羟甲基糠醛峰计算理论塔板数应不低于5000。
②供试品溶液制备方法筛选
a、溶剂的选择
根据5-羟甲基糠醛的理化特性，我们分别采用不同的溶剂，以5-羟甲基糠醛的含量作为测定指标(5-羟甲基糠醛对照品浓度为11.206ug/ml)，结果见表2：
表2供试品溶剂的选择
溶剂 称量(g) 峰面积 含重(mg/g)
水 0.1015 1279315 13.40
10％乙醇 0.1006 1217249 12.86
乙醇 0.1048 有杂峰，且分离度不好
甲醇 0.1024 有杂峰，且分离度不好
乙酸乙酯 0.1034 225692 2.32
通过采用乙酸乙酯、甲醇、乙醇、10％乙醇、水等溶剂进行提取，试验结果显示，乙酸乙酯作为提取溶剂时虽然没有杂质，但所得含量低；而用甲醇及乙醇提取溶剂时含量低，且杂质多；10％乙醇和水提取溶剂时杂质峰干扰小，分离度及理论塔板数较为理想。为了节约成本，故选用水作为提取溶剂。
b、超声时间的选择
超声时间试验结果见表3：
表3超声时间的选择
超声时间(min) 称量(g) 峰面积 含量(mg/g)
10 0.1008 1403851 14.83
20 0.1014 1412503 14.83
30 0.1018 1425432 14.91
40 0.1020 1429273 14.92
50 0.1075 1469768 14.56
60 0.1062 1456483 14.60
取本品，研细，称取细粉0.1g共6份，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，经不同时长超声，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液。结果表明超声10min后，5-羟甲基糠醛含量已无明显变化，最后确定超声时间为10min。
因此，供试品的制备方法为：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声(功率260w，频率40KHz)10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
③专属性试验
蒲桃益胃颗粒阴性样品、供试品溶液的制备：取缺有效成分浸膏样品、蒲桃益胃颗粒各 0.1g，置于100容量瓶中，加适量水，超声(功率260w，频率40KHz)10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，制得阴性样品和供试品溶液，另取5-羟甲基糠醛对照品溶液10μl，注入液相色谱仪。试验结果表明，阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法可行。
④方法学考察
a、线性关系考察
精密量取5-羟甲基糠醛对照品溶液稀释成2.8015，5.603，11.206，22.412，44.824μg·mL-1的5-羟甲基糠醛对照品溶液，按照上述色谱条件，分别进样10μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，5-羟甲基糠醛的进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A＝81677C+ 77015，相关系数r＝0.9997，结果表明5-羟甲基糠醛在2.8015～44.824μg·ml-1范围具有良好线性关系。结果见表4。
表4 5-羟甲基糠醛线性测定结果
浓度(μg/ml) 2.8015 5.603 11.206 22.412 44.824
峰面积 269874 521282 1024037 1950731 3712476
b、精密度试验
精密量取5-羟甲基糠醛对照品溶液(11.206μg·ml-1)10μl，注入液相色谱仪，重复进样5 次，测定峰面积，以5-羟甲基糠醛的峰面积计算，RSD＝1.63％，结果见表5。
表5精密度试验结果
Figure GDA0002408365270000051
c、稳定性试验：精密吸取同一批号供试品溶液，分别在0、1、2、3、6、24h进样10μl，测定峰面积。结果，供试品在24h内，5-羟甲基糠醛峰面积积分值前后无明显变化， RSD＝1.97％，表明供试品溶液在24小时内具有良好的稳定性。结果见表6。
表6稳定性试验结果
Figure GDA0002408365270000061
d、重复性试验取同一批号供试品，照含量测定方法制备供试品6份，进行测定,以5-羟甲基糠醛的含量计算，RSD＝0.87％，结果见表7。
表7样品重复性试验(n＝2)
Figure GDA0002408365270000062
e、加样回收率试验取本品粉末50mg，9份，分成3组，精密称定，于100ml容量瓶内，每组按取样量的50％、100％、150％分别加入5-羟甲基糠醛对照品，照供试品处理方法及含量测定方法，进行5-羟甲基糠醛含量测定，结果列于表8。
表8 5-羟甲基糠醛的加样回收率实验结果
Figure GDA0002408365270000071
试验结果表明，5-羟甲基糠醛加样平均回收率为98.96％，RSD为1.28％，达到标准要求，方法可行。
具体实施方式
一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
实施例1：蒲桃益胃颗粒薄层色谱鉴别
本品研细，取粗粉0.5g，先用0.5ml 1％NaOH溶液润湿，再加25ml的乙酸乙酯超声提取 30min，过滤，滤液挥干，加1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。取蒲桃药材1g，同法制成药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光(GF254)板上，以石油醚—乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的黑色斑点。
实施例2：蒲桃益胃颗粒的含量测定
照高效液相色谱法测定。
对照品溶液制备取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10％乙醇制成每 1mL含10μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液制备取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声(功率260w，频率40KHz)10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜，作为供试品。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中5-羟甲基糠醛含量；结果见表9。
表9蒲桃益胃颗粒三批样品5-羟甲基糠醛的测定结果
Figure GDA0002408365270000081

Claims (1)

1.一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
（1）蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别：本品研细后，取粗粉0.5g，先用0.5mL 1% NaOH溶液润湿，再加入25mL 乙酸乙酯，超声提取30min，过滤，滤液挥干，加入1mL 乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取蒲桃壳药材1g，同法制成药材供试品溶液，另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液，再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液；吸取药材供试品溶液4μL ，其他3种溶液各2μL ，分别点于同一荧光GF254板上，以石油醚－乙酸乙酯1﹕1为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黑色斑点；
（2）高效液相色谱含量测定：
A、色谱条件：色谱柱为依利特 Hypersil BDS C18柱4.6 mm×250mm，5μm；0.2%冰乙酸：甲醇85 :15为流动相；
检测波长为280nm，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；
B、对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1mL含10μg的对照品溶液，即得；
C、供试品溶液的制备：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100mL 容量瓶中，加适量水，超声功率260w，频率40KHz 10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μL ，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
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