CN107857760A - 鞘氨醇‑1‑磷酸受体调节剂及其应用 - Google Patents
鞘氨醇‑1‑磷酸受体调节剂及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及鞘氨醇‑1‑磷酸受体调节剂化合物及其制备方法与应用。具体提供了下式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐：
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体而言，本发明涉及一类鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂化合物，以及所述化合物在制备药物中的用途。
背景技术
鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate，S1P)受体是一种G蛋白偶联受体，其包括S1P1、S1P2、S1P3、S1P4、S1P5五种亚型。其中，S1P1受体激动剂可降低外周血淋巴细胞数量，发挥免疫调节作用。其已被证明在多种自身免疫性疾病的病理模型中有作用。芬戈莫德是目前全球唯一一个上市的S1P受体激动剂药物，临床上用于多发性硬化症的治疗。芬戈莫德属于非选择性S1P受体激动剂，研究显示其对S1P受体的4个亚型均具有激动作用，特别是对S1P3受体的激动作用可以降低人类心率(KoyrakhL等人，AmJTransplant2005,5:529-536)，然而其具有引发心动过缓的副作用。与非选择性S1P受体激动剂相比，S1P1选择性化合物对人类心率的影响较弱，因此，开发具有S1P1受体选择性的免疫调节剂具有较好的临床获益。
另外，S1P1激动剂降低外周血淋巴数量，导致人体的免疫功能减弱，容易导致继发性感染。一旦发生感染，则希望停药后人体免疫功能迅速恢复正常，因此，需要兼顾药效持续时间和药物消除速度，获得具有合适的半衰期的免疫调节剂。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐：
其中，R1选自H、未取代或被一个或多个Ra取代的下列基团：C1-8烷基、C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R2选自-CN或-CF3；
R3选自-NR’2或氮杂C3-8环烷基；其中，所述氮杂C3-8环烷基被一个或多个-R6COOR7所取代；R’可相同或不同，任选为：H、C1-8烷基、-R6COOR7，其中，R’中至少有一个为-R6COOR7；其中，R6选自化学键或C1-8亚烷基，R7选自H或C1-8烷基；
X选自-F、-Cl、-Br或-I；
Ra选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、＝O或被-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、＝O取代的下列基团：C1-8烷基、C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
根据本发明化合物的实施方案，其中R1选自未取代、或被一个或多个Ra取代的下列基团：C1-6烷基、C3-6环烷基；所述Ra选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN或被-F、-Cl、-Br、-I、-CN取代的下列基团：C1-6烷基、C3-6环烷基；
根据本发明化合物的实施方案，X选自-F或-Cl；
作为实例，R1选自未取代、或被一个或多个Ra取代的下列基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、环戊基、正己基、异己基、环己基；所述Ra选自-F、-Cl、-Br、-I或-CN；
作为实例，R3选自其中R4、R5选自H或C1-6烷基；L选自C1-6亚烷基，m和n相同或不同，彼此独立地选自1-3的整数，R6选自化学键或C1-8亚烷基。
作为实例，R3选自-氮杂环丁基-R6COOR7，-氮杂环戊基-R6COOR7，-氮杂环己基-R6COOR7。
根据本发明化合物的实施方案，所述化合物药学上可接受的盐选自无机酸或有机酸与化合物中可成盐位点(例如可成盐的N上)形成的盐；
所述无机酸包括但不限于：盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸、氢氟酸、氢碘酸、焦硫酸或硝酸；
所述有机酸包括但不限于：柠檬酸、马来酸、琥珀酸、醋酸、苹果酸、酒石酸、甲磺酸、苯磺酸、甲酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、己二酸、藻酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。
优选地，所述化合物药学上可接受的盐选自盐酸盐。
作为本发明的一种实施方案，所述式(I)化合物选自包括但不限于如下化合物或其盐：
本发明还提供如上所述式(I)化合物的制备方法，包括如下步骤：将式(I-4)化合物与式(I-5)化合物反应得到式I化合物，
其中，R1、R2、R3、X具有上文所述定义。
优选地，当R3中的基团R7为烷基时，可将所得到的式(I)化合物进行水解，反应得到R7为H的式(I)化合物。
优选地，所述式(I-4)化合物可以由如下方法制备，包括：
其中，R1、R2、R3、X具有上文所述定义；
1)将式(I-1a)化合物与乙二醇反应，得到式(I-1)化合物；
2)将步骤1)得到的式(I-1)化合物与盐酸羟胺反应，得到式(I-2)化合物；
3)将步骤2)得到的式(I-2)化合物与式(II)化合物反应，得到式(I-3)化合物，然后在酸性条件下反应得到式(I-4)化合物。
任选地，所述制备方法还包括将式(I)化合物与成盐试剂反应形成其药学上可接受盐。
优选地，所述成盐试剂可以为有机酸或无机酸；
所述有机酸或无机酸具有上文所述定义，例如所述无机酸选自盐酸或其溶液。
如果需要保护，可以将式(II)、式(I-3)、式(I-4)、式(I-5)化合物中的任何官能团予以保护，之后如有必要，再除去保护基。
本发明中所述的“本发明化合物”包括式(I)化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或其药学上可接受的盐中的一种或多种。
本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本发明化合物。
优选地，所述药物组合物还包括可药用载体。
所述可药用载体包括但不限于：填充剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粘合剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、防腐剂、抗氧剂、矫味剂、着色剂、渗透压调节剂、pH调节剂、支撑剂中的一种或多种。
优选地，所述药物组合物中，本发明化合物的质量占药物组合物总质量的0.01-99.99％。
优选地，所述药物组合物可以单独使用，也可以与其他疗法或药物制剂共同使用，其给药剂量和频次根据给药途径、病症的类型、患者的年龄以及是否服用其他药物等因素综合确定。一般而言，剂量范围为每日每公斤体重0.001mg至100mg，所需剂量以每天单次剂量或分次剂量形式提供。
所述药物组合物可以通过口服、注射、输液、滴入、吸入或贴敷等方式给药。
本发明还提供一种包含如上所述药物组合物的制剂。
所述制剂的剂型包括但不限于：液体剂型、固体剂型或半固体剂型。
所述液体剂型包括但不限于口服溶液制剂、注射剂、洗剂、滴剂、搽剂、气雾剂等；固体剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、栓剂、贴剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
优选地，所述的剂型还包括普通制剂、缓控释制剂、靶向制剂、植入剂及各种微粒给药系统。
本发明还提供如上所述本发明化合物在制备用于治疗S1P1受体相关病症的药物中的用途。
所述S1P1受体相关的病症包括但不限于：自身免疫性疾病、淋巴细胞介导的疾病、炎性疾病、细菌感染、真菌感染、病毒感染或癌症等。
优选地，所述用途可以为在制备治疗炎症性肠炎、和/或克罗恩病、和/或溃疡性结肠炎、和/或系统性红斑狼疮、和/或类风湿性关节炎、和/或牛皮癣、和/或多发性硬化症、和/或移植排斥药物中的用途。
本发明还提供一种治疗S1P1受体相关的病症的方法，包括对有此需要的个体给予治疗有效量的本发明化合物。
所述S1P1受体相关的病症包括但不限于：自身免疫性疾病、淋巴细胞介导的疾病、炎性疾病、细菌感染、真菌感染、病毒感染或癌症等。
作为示例，所述治疗方法为将如上所述治疗有效量的本发明化合物施用于患有多发性硬化症、和/或炎症性肠炎、和/或克罗恩病、和/或溃疡性结肠炎、和/或系统性红斑狼疮、和/或类风湿性关节炎、和/或牛皮癣、和/或移植排斥的个体。
所述个体可以为人类或其他哺乳类动物。
有益效果：
本发明提供了一类具有全新结构的S1P1受体调节剂，该类化合物与已有报道的S1P1受体调节剂化合物相比，对于S1P1受体的激动强度和选择性均有提高，且具有更高的免疫抑制活性和代谢稳定性。在生物活性实验中，所述化合物被证明对于溃疡性结肠炎具有明显的治疗效果以及适宜的体内生物利用度，可成为S1P1受体相关疾病的新治疗药物。
术语定义和说明：
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本申请主题作任何限制。在本申请中，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
术语“烷基”指具有1-8个，优选1-6个碳原子的直链或支链烷基，所述烷基例如为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基。
术语“芳基”应理解为优选表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C6-14芳基”。术语“C6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C13芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C14芳基”)，例如蒽基。
术语“杂芳基”应理解为含有5-20个环原子、5-14个环原子，或5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环和三环体系，其中至少一个环体系是芳香族的，且至少一个环体系包含一个或多个杂原子(例如N、O、S、Se等)，其中每一个环体系包含5-7个原子组成的环，且有一个或多个连接点与分子其余部分相连。所述杂芳基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。在一些实施方案中，5-10个原子组成的杂芳基包含1,2,3或4个独立选自O、S、Se和N的杂原子。在另一些实施方案中，5-6个原子组成的杂芳基包含1,2,3或4个独立选自O、S、Se和N的杂原子。
杂芳基基团的单环实例包括，但并不限于，噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
术语“杂环基”意指单环，双环或三环体系，其中环上一个或多个原子独立任选地被杂原子所取代，环可以是完全饱和的或包含一个或多个不饱和度，但不是芳香族类，有一个或多个连接点连接到其他分子上去。一个或多个环上的氢原子可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。其中一些实施例是，“杂环基”是3-7个原子组成的单环、或7-10个原子组成的的双环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O、S和Se的杂原子。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基、1,3-苯并噁唑基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基。
除非另有说明，杂环基、杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，吡啶基或亚吡啶基包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基。
本文所用的有关术语“受试者”、“患者”或“个体”是指患有疾病、病症或病况等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实施例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳动物的实施例包括但不限于鸟类和鱼类等。在本文提供的一个有关方法和组合物的实施方式中，所述哺乳动物为人。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括缓解、减轻或改善疾病或病症症状，预防其它症状，改善或预防导致症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，使疾病或病症好转，缓解由疾病或病症导致的症状，或者中止疾病或病症的症状，此外，该术语包含预防的目的。该术语还包括获得治疗效果和/或预防效果。所述治疗效果是指治愈或改善所治疗的潜在疾病。此外，对与潜在疾病相关的一种或多种生理症状的治愈或改善也是治疗效果，例如尽管患者可能仍然受到潜在疾病的影响，但观察到患者情况改善。就预防效果而言，可向具有患特定疾病风险的患者施用所述组合物，或者即便尚未做出疾病诊断，但向出现该疾病的一个或多个生理症状的患者施用所述组合物。
本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”、“给予”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、外用和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术。在优选的实施方式中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。
本文针对制剂、组合物或成分所用术语“可接受的”是指对接受治疗的受试者的一般健康情况没有长期的有害影响。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本申请化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
本文所用术语“药物组合物”是指任选地混合有至少一种药学上可接受的化学成分的生物活性化合物，所述药学上可接受的化学成分包括但不限于载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。
本文所用术语“载体”是指相对无毒的化学化合物或试剂，其有助于将化合物引入到细胞或组织中。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
实施例29至33中使用的阳性对照药为奥扎莫德(Ozanimod)。Ozanimod是由Receptos公司开发的一种选择性S1P1受体调节剂。其目前处于多个免疫性疾病的临床研究阶段，数据显示其具有较高的S1P1受体选择性和良好的药代动力学性质。
Ozanimod的结构如下所示：
实施例1、中间体I-1和II-1的制备
(1)中间体I-1(X＝Cl)：将4-溴-2-氯苯甲腈(10.0g,46.20mmol)溶于适量240ml无水四氢呋喃，冰浴条件下，滴加2N异丙基氯化镁的四氢呋喃溶液(30ml，40.06mmol)，反应1h，继续冰浴条件下加入3当量N-甲酰基哌啶，继续反应2h。淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并有机层，水洗，干燥。柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝4：1，得白色固体5.6g，收率73.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.22-8.23(t,J＝3.8Hz,2H),8.02(d,J＝8.0Hz,1H)；MS(ESI)m/z(M+H)+166.6。
(2)中间体II-1(X＝F)：按前述中间体I-1相同的制备方法，以4-溴-2-氟苯甲腈替换4-溴-2-氯苯甲腈，得白色固体7.2g，收率60.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.20(dd,J＝8.0,6.4Hz,1H),7.99(dd,J＝9.2,1.2Hz,1H),7.94(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H)；MS(ESI)m/z(M+H)+150.2。
实施例2、中间体I-2和II-2的制备
(1)中间体I-2(X＝Cl)：将中间体I-1(5.0g,30.20mmol)，乙二醇(6ml)，对甲苯磺酸(512mg，2.4mmol)溶于甲苯(240ml)中，加热回流2h，使用分水器进行分水。冷却至室温，蒸除溶剂，残留物以300ml乙酸乙酯溶解，水洗，干燥，柱层析，洗脱剂为石油醚：二氯甲烷＝4：1，得白色固体4.12g，收率65.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),5.86(s,1H),3.94-4.09(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+210.1。
(2)中间体II-2(X＝F)：按前述中间体I-2相同的制备方法，以中间体II-1替换中间体I-1，得白色固体4.73g，收率58.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(dd,J＝8.0,6.4Hz,1H),7.54(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),7.46-7.48(m,1H),5.86(s,1H),3.93-4.10(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+194.6。
实施例3、中间体I-3和II-3的制备
(1)中间体I-3(X＝Cl)：将中间体I-2(4.60g,21.94mmol)溶于240ml无水甲醇中，搅拌状态下依次加入盐酸羟胺(5.34g，76.80mmol)，碳酸氢钠(7.38g，87.78mmol)，加热回流。冷却，抽滤，滤饼用无水甲醇洗涤，合并滤液。滤液中加入蒸馏水，300ml乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，柱层析，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1，得白色固体3.67g，收率69.4％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),7.50(s,1H),7.39-7.45(t,J＝5.6Hz,2H),5.84(s,2H),5.77(s,1H),3.92-4.10(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+243.1。
(2)中间体II-3(X＝F)：按前述中间体I-3相同的制备方法，以中间体II-2替换中间体I-2，得白色固体4.5g，收率75.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(s,1H),7.50-7.54(m,1H),7.24-7.28(m,2H),5.83(s,2H),5.77(s,1H),3.92-4.08(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+228.1。
实施例4、中间体I-4-1、I-4-2、I-4-3、I-4-4和II-4-1的制备
(1)中间体I-4-1(X＝Cl，R1＝苯基，R2＝H)：将4-苯氧基苯甲酸(3.68g,17.22mmol)、1-羟基苯并三唑(2.12g,15.66mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3g，15.66mmol)，碳酸钾(3.24g，23.48mmol)溶于240mlDMF，室温搅拌，加入1当量中间体I-3(3.8g，15.66mmol)，加热反应。冷却，抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，合并滤液。滤液中加入蒸馏水，乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，浓缩，柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝4-6:1，得白色固体4.47g，收率64.7％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.20(d,J＝6.8Hz,2H),8.04(d,J＝6.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.62(d,J＝6.0Hz,1H),7.50(t,J＝6.2Hz,2H),7.29(t,J＝6.0Hz,1H),7.21-7.18(m,4H),5.87(s,1H),3.97-4.12(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+421.1。
(2)中间体I-4-2(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝H)：按前述中间体I-4-1相同的制备方法，以4-异丙氧基苯甲酸替换4-苯氧基苯甲酸，得白色固体471mg，收率49.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14-8.07(m,2H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝1.2Hz,1H),7.62(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.14-7.20(m,2H),5.87(s,1H),4.79(hept,J＝6.0Hz,1H),3.96-4.13(m,4H),1.32(d,J＝6.4Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+387.3。
(3)中间体I-4-3(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝CN)：按前述中间体I-4-1相同的制备方法，以3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸替换4-苯氧基苯甲酸，得白色固体395mg，收率58.5％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝2.2Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝1.2Hz,1H),7.62(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),5.87(s,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.95-4.14(m,4H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+412.6。
(4)中间体I-4-4(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝CF3)：按前述中间体I-4-1相同的制备方法，以4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸替换4-苯氧基苯甲酸，得白色固体637mg，收率54.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.0Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),5.87(s,1H),4.97(hept,J＝6.0Hz,1H),4.14-3.96(m,4H),1.35(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+455.7。
(5)中间体II-4-1(X＝F，R1＝异丙基，R2＝CN)：按前述中间体I-4-1相同的制备方法，以3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸替换4-苯氧基苯甲酸，以中间体II-3替换中间体I-3，得白色固体5.56g，收率72.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝2.4Hz,1H),8.41(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),8.14-8.18(m,1H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),7.49-7.53(m,2H),5.87(s,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.96-4.13(m,4H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+396.3。
实施例5、中间体I-5-1、I-5-2、I-5-3、I-5-4和II-5-1的制备
(1)中间体I-5-1(X＝Cl，R1＝苯基，R2＝H)：将中间体I-4-1(4.00g,9.50mmol)溶于适量丙酮中，搅拌状态下加入2N盐酸溶液(38.00.ml,76.00mmol)，45℃下加热3h。将反应冷却至室温，减压抽滤，干燥，得白色固体3.13g，收率90.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.16-8.29(m,4H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.19-7.22(m,4H)；MS(ESI)m/z(M+H)+377.3。
(2)中间体I-5-2(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝H)：按前述中间体I-5-1相同的制备方法，以中间体1-4-2替换中间体I-4-1，得白色固体270mg，收率80.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),8.20(d,J＝1.2Hz,1H),8.10-8.14(m,2H),8.06(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.15-7.21(m,2H),4.80(hept,J＝6.1Hz,1H),1.33(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+343.7。
(3)中间体I-5-3(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝CN)：按前述中间体I-5-1相同的制备方法，以中间体1-4-3替换中间体I-4-1，得白色固体435mg，收率84.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.53(d,J＝2.4Hz,1H),8.41(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,1H),8.21(d,J＝1.2Hz,1H),8.05-8.08(m,1H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝5.8Hz,1H),1.39(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+368.5。
(4)中间体I-5-4(X＝Cl，R1＝异丙基，R2＝CF3)：按前述中间体I-5-1相同的制备方法，以中间体1-4-4替换中间体I-4-1，得白色固体552mg，收率74.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.41(d,J＝8.8Hz,1H),8.31(s,1H),8.26(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.06(d,J＝7.9Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),4.98(hept,J＝6.4Hz,1H),1.36(dd,J＝6.0,1.6Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+411.4。
(5)中间体II-5-1(X＝F，R1＝异丙基，R2＝CN)：按前述中间体I-5-1相同的制备方法，以中间体II-4-1替换中间体I-4-1，得白色固体3.02g，收率54.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),8.51(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.32-8.36(m,1H),7.94-7.99(m,2H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)，MS(ESI)m/z(M+H)+351.1。
实施例6、化合物TX-001的制备
1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氮杂环丁烷-3-羧酸盐酸盐
将中间体I-5-1(400mg,1.06mmol)溶于70ml二氯甲烷，加入N,N-二异丙基乙胺(0.28ml,1.6mmol)、氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐(242mg,1.6mmol)和冰醋酸(0.24ml,4.24mmol)以及10ml甲醇，室温搅拌，随后加入1.5当量腈基硼氢化钠(66mg,1.06mmol)，氩气保护下反应。加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，水洗，干燥，柱层析，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇＝20:1，得白色固体344mg，为1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯，收率68.5％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(t,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,4H),3.73(s,3H),3.66(s,2H),3.54-3.58(m,2H),3.36(m,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+476.6。
将上步所得产物1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(238mg,0.5mmol)溶于10ml甲醇中，加入1N氢氧化锂溶液6ml，加热反应3-5h，冷却，滴加1N浓盐酸溶液至pH＝2-3，蒸除溶剂，加入蒸馏水，抽滤，洗涤，干燥得白色固体TX-001。收率65.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.13(s,1H),11.49(s,1H),8.19(d,J＝8.4Hz,2H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.2Hz,4H),4.49(s,2H),4.20(d,J＝8.4Hz,4H),3.62-3.68(m,1H).MS(ESI)m/z(M+H)+462.2。
实施例7、化合物TX-002的制备
1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氮杂环丁烷-3-羧酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯，为白色固体370mg，收率72.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.39(dd,J＝9.2,2.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.54 7.57(m,2H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.66(s,2H),3.64(s,3H),3.47(t,J＝7.0Hz,2H),3.34-3.39(m,1H),3.27(t,J＝6.6Hz,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+467.5。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-002，为白色固体268mg，收率69.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(s,1H),7.68(dd,J＝7.8,2.0Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),4.38(s,2H),4.10(d,J＝8.3Hz,4H),3.59(quint,J＝8.2Hz,1H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+453.7。
实施例8、化合物TX-003的制备
1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)吡咯烷-3-羧酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以吡咯烷3-羧酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)吡咯烷-3-羧酸甲酯,为白色固体426mg，收率82.1％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.44-7.36(m,3H),7.22(t,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,4H),3.70(s,3H),3.63-3.68(m,2H),3.02-3.10(m,1H),2.88(t,J＝8.6Hz,1H),2.68-2.72(m,2H),2.58(q,J＝8.0Hz,1H),2.10-2.16(m,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+490.7。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-003，为白色固体238mg，收率62.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),11.71(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),8.03-8.07(m,2H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.28(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.2Hz,4H),4.47(s,2H),3.34(m,5H),2.08-2.33(m,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+476.2。
实施例9、化合物TX-004的制备
(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)脯氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以脯氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)脯氨酸甲酯，为白色固体190mg，收率59.4％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.41(q,J＝8.0Hz,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,4H),3.99(d,J＝13.2Hz,1H),3.70(s,3H),3.59(d,J＝13.4Hz,1H),3.33(t,J＝7.4Hz,1H),3.05(m,1H),2.43(q,J＝8.3Hz,1H),2.12-2.22(m,1H),1.89-2.04(m,2H),1.82-1.86(m,1H)；MS(ESI)m/z(M+H)+490.7。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-004，为白色固体106mg，收率73.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,2H),8.03(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.18-7.21(m,4H),4.35(d,J＝13.2Hz,1H),4.14(d,J＝13.6Hz,1H),3.94(s,1H),3.30(s,1H),2.95(s,1H),2.30-2.35(m,1H),1.92-2.01(m,2H),1.82-1.85(m,1H)；MS(ESI)m/z(M+H)+476.2。
实施例10、化合物TX-005的制备
1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)吡咯烷-3-甲酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以吡咯烷3-羧酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)吡咯烷-3-甲酸甲酯，为白色固体181mg，收率71.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝1.6Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.49(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.98(h,J＝6.1Hz,1H),3.64-3.73(m,2H),3.61(s,3H),3.03-3.11(m,1H),2.67-2.76(m,2H),2.56(t,J＝6.8Hz,2H),1.95-2.05(m,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+481.2。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-005，为白色固体123mg，收率65.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.90(s,1H),11.76-11.40(m,1H),8.50(d,J＝2.0Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.08-8.01(m,2H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝5.9Hz,1H),4.50(s,2H),3.36-3.44(m,5H),2.22(s,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+467.3。
实施例11、化合物TX-006的制备
1-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)吡咯烷-3-甲酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以吡咯烷3-羧酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体II-5-1替换中间体I-5-1，首先制备得到1-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)吡咯烷-3-羧酸甲酯，为白色固体350mg，收率70.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.06(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.39(m,1H),7.37(m,1H),4.98(p,J＝6.0Hz,1H),3.63-3.75(m,2H),3.61(s,3H),3.01-3.12(m,1H),2.64-2.80(m,2H),2.56(t,J＝7.0Hz,2H),1.95-2.08(m,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+465.3。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-006，为白色固体274mg，收率74.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),11.09-11.35(m,1H),8.48(d,J＝2.0Hz,1H),8.37(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.16(t,J＝7.8Hz,1H),7.76(d,J＝11.2Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝9.2Hz,1H),4.95(hept,J＝6.1Hz,1H),4.46(s,2H),3.58(m,1H),3.40(m,1H),3.12(s,3H),2.03-2.29(m,2H),1.34(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+451.8。
实施例12、化合物TX-007的制备
1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-羧酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以4-哌啶甲酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-羧酸甲酯，为白色固体415mg，收率75.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,3H),7.30(t,J＝7.4Hz,1H),7.20-7.23(m,3H),,5.77(s,1H),4.08(q,J＝7.2Hz,2H),3.57(s,2H),2.78(d,J＝11.2Hz,2H),2.30-2.36(m,1H),,2.08(t,J＝11.1Hz,2H),1.83(d,J＝12.8Hz,2H),1.56-1.66(m,2H),1.19(t,J＝7.0Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+504.3。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-007，为白色固体192mg，收率49.5％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.14(s,1H),8.19(d,J＝8.0Hz,2H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,3H),7.28(t,J＝7.4Hz,1H),7.18-7.21(m,4H),3.55(s,2H),2.76(d,J＝11.2Hz,2H),2.22(m,1H),2.05(t,J＝11.4Hz,2H),1.80(d,J＝12.8Hz,2H),1.59(t,J＝11.8Hz,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+490.2。
实施例13、化合物TX-008的制备
2-(1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-基)乙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以4-哌啶基乙酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到2-(1-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-基)乙酸甲酯的制备，为白色固体383mg，收率67.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(d,J＝8.4Hz,2H),7.94(d,J＝7.6Hz,1H),7.59(s,1H),7.46–7.51(m,3H),7.28(t,J＝7.4Hz,1H),7.18-7.20(m,4H),3.58(s,3H),3.54(s,2H),2.78(d,J＝11.2Hz,2H),2.24(d,J＝6.4Hz,2H),1.98(t,J＝11.4Hz,2H),1.60-1.70(m,3H),1.18-1.27(m,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+548.4。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-008，为白色固体246mg，收率58.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),10.84(s,1H),7.93-8.37(m,4H),7.79(m,2H),7.49(m,2H),6.97-7.40(m,5H),4.36-4.47(m,2H),2.95-2.97(m,3H),2.41(s,1H),2.19(s,2H),1.39-2.05(m,5H)；MS(ESI)m/z(M+H)+534.2。
实施例14、化合物TX-009的制备
2-(1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-基)乙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以4-哌啶基乙酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到2-(1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-4-基)乙酸甲酯，为白色固体363mg，收率55.4％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.39(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.58(s,3H),3.54(s,2H),2.78(d,J＝11.2Hz,2H),2.25(d,J＝6.8Hz,2H),1.98(t,J＝11.0Hz,2H),1.61-1.72(m,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H),1.18-1.28(m,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+539.3。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-009，为白色固体223mg，收率65.4％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),10.43(s,1H),8.52(d,J＝2.0Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.08-8.11(m,1H),8.00(s,1H),7.74-7.79(m,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.99(hept,J＝6.0Hz,1H),4.36-4.37(m,2H),3.41(m,2H),2.93-3.02(m,2H),2.20(d,J＝6.8Hz,2H),1.84-1.87(m,3H),1.48-1.58(m,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+525.1。
实施例15、化合物TX-010的制备
1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-3-甲酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到1-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)哌啶-3-甲酸甲酯，为白色固体268mg，收率54.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝1.2Hz,1H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),7.48(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.53-3.63(m,5H),2.74-2.77(m,1H),2.56-2.67(m,2H),2.15-2.34(m,2H),1.66-1.80(m,2H),1.48-1.53(m,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+495.4。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-010，为白色固体156mg，收率67.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.92(s,1H),11.00(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.09(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.77(m,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),4.40(s,2H),3.47(s,2H),2.92(s,3H),2.01(s,1H),1.84(s,2H),1.47(s,1H),1.38(s,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+481.2。
实施例16、化合物TX-011的制备
2-(1-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)哌啶-4-基)乙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以4-哌啶基乙酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体II-5-1替换中间体I-5-1，首先制备得到2-(1-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)哌啶-4-基)乙酸甲酯，为白色固体308mg，收率60.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,1H),8.05(t,J＝7.8Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.36(d,J＝9.6Hz,2H),4.94-5.00(m,1H),3.58(s,3H),3.54(s,2H),2.78(d,J＝10.0Hz,2H),2.25(d,J＝6.4Hz,2H),1.98(t,J＝11.2Hz,2H),1.61-1.64(m,6H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H),1.19-1.28(m,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+492.9。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-011，为白色固体211mg，收率59.6％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,1H),10.91-11.06(m,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.18(t,J＝7.6Hz,1H),7.85(d,J＝11.2Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),4.37(m,2H),3.36(s,2H),2.97(q,J＝11.2Hz,2H),2.19(d,J＝6.4Hz,2H),1.83-1.90(m,3H),1.55-1.64(m,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+479.1。
实施例17、化合物TX-012的制备
N-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以甘氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体II-5-1替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)甘氨酸甲酯，为白色固体470mg，收率88.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝2.2Hz,1H),8.39(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.05(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.38-7.43(m,2H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),3.84(s,2H),3.63(s,3H),3.37(s,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+425.6。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-012，为白色固体358mg，收率78.5％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),8.15(t,J＝7.8Hz,1H),7.62(d,J＝11.2Hz,1H),7.55(t,J＝9.4Hz,2H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),4.18(s,2H),3.67(s,2H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+411.8。
实施例18、化合物TX-013的制备
N-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以肌氨酸乙酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体II-5-1替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)-3-氟苄基)-N-甲基甘氨酸乙酯，为白色固体355mg，收率68.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝2.4Hz,1H),8.38(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.06(t,J＝7.8Hz,1H),7.54(d,J＝9.2Hz,1H),7.40–7.37(m,2H),4.97(p,J＝6.1Hz,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),3.75(s,2H),3.36(s,2H),2.30(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+439.3。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-013，为白色固体191mg，收率64.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),8.08(t,J＝7.8Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.42(t,J＝9.4Hz,2H),4.97(hept,J＝5.9Hz,1H),3.84(s,2H),3.36(s,2H),2.35(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+425.1。
实施例19、化合物TX-014的制备
N-(3-氯-4-(5-(4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以甘氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-2替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(3-氯-4-(5-(4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸甲酯，为白色固体249mg，收率90.1％，1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(d,J＝8.8Hz,2H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(s,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(m,2H),4.80(hept,J＝6.0Hz,1H),3.82(s,2H),3.63(s,3H),3.36(s,2H),2.76(s,1H),1.32(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+416.1。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-014，为白色固体178mg，收率67.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.10(d,J＝8.8Hz,2H),8.02(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.18(d,J＝8.8Hz,2H),4.80(hept,J＝6.0Hz,1H),4.15(s,2H),3.64(s,2H),1.32(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+402.1。
实施例20、化合物TX-015的制备
N-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以甘氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸甲酯，为白色固体360mg，收率82.7％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝1.2Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.50(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.98(hept,J＝6.1Hz,1H),3.82(s,2H),3.63(s,3H),3.37(s,2H),2.77(s,1H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+441.6。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-015，为白色固体223mg，收率70.4％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.50(m,1H),8.40(m,1H),8.04(m,1H),7.83(s,1H),7.65-7.57(m,2H),4.98(s,1H),4.13(s,2H),3.61(s,2H),1.39(m,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+427.4。
实施例21、化合物TX-016的制备
N-(3-氯-4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以甘氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-4替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(3-氯-4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸甲酯，为白色固体382mg，收率62.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(d,J＝7.6Hz,1H),7.66(d,J＝1.6Hz,1H),7.58(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.98(p,J＝6.0Hz,1H),3.83(s,2H),3.63(s,3H),3.37(s,2H),2.77(s,1H),1.35(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+484.2。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-016，为白色固体340mg，收率72.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝8.6Hz,1H),8.30(s,1H),8.00(d,J＝7.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.54-7.60(m,2H),4.95-5.01(m,1H),3.94(s,2H),3.23(s,2H),1.35(d,J＝5.6Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+470.1。
实施例22、化合物TX-017的制备
N-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以肌氨酸乙酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到N-(3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)-N-甲基甘氨酸乙酯，为白色固体313mg，收率58.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.39(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(m,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.49-7.51(m,1H),4.98(hept,J＝6.1Hz,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),3.75(s,2H),3.36(s,2H),2.30(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H),1.21(t,J＝7.0Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+469.1。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-017，为白色固体220mg，收率72.6％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝2.3Hz,1H),8.40(dd,J＝9.0,2.3Hz,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(d,J＝1.2Hz,1H),7.70(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.1Hz,1H),4.34(s,2H),3.97(s,2H),2.73(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+441.2。
实施例23、化合物TX-018的制备
3–((3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)(甲基)氨基)丙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以3-(甲基氨基)丙酸甲酯替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，以中间体I-5-3替换中间体I-5-1，首先制备得到3–((3-氯-4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)(甲基)氨基)丙酸甲酯，为白色固体326mg，收率65.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝2.4Hz,1H),8.38(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(d,J＝1.2Hz,1H),7.54(d,J＝9.2Hz,1H),7.45(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),4.97(hept,J＝6.1Hz,1H),3.60(s,3H),3.57(s,2H),2.66(t,J＝6.8Hz,2H),2.53(t,J＝6.6Hz,2H),2.17(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+469.4。
进一步通过如前述的水解、酸化反应得到目标化合物TX-018，为白色固体165mg，收率58.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.40(dd,J＝9.2,2.0Hz,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.98(hept,J＝6.0Hz,1H),4.41(s,2H),3.30-3.28(m,2H),2.87(t,J＝7.6Hz,2H),2.67(s,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+455.8。
实施例24、化合物TX-019的制备
N-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸盐酸盐的制备
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以甘氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到N-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)甘氨酸甲酯，为白色固体368mg，收率77.5％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.98(d,J＝7.6Hz,1H),7.57(s,1H),7.41(q,J＝8.5Hz,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,4H),3.88(s,2H),3.75(s,3H),3.44(s,2H),1.92(s,1H)；MS(ESI)m/z(M+H)+450.6。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-019，为白色固体298mg，收率72.9％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(br,2H),8.19(d,J＝8.4Hz,2H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,4H),4.24(s,2H),3.82(s,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+436.2。
实施例25、化合物TX-020的制备
3-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氨基)丙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以3-氨基丙酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到3-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氨基)丙酸甲酯，为白色固体395mg，收率79.6％，1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(s,1H),7.36-7.44(m,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,4H),3.87(s,2H),3.71(s,3H),2.91(t,J＝6.4Hz,2H),2.56(t,J＝6.4Hz,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+464.6。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-020，为白色固体336mg，收率82.1％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.64(s,1H),9.32(s,2H),8.20(d,J＝8.5Hz,2H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,4H),4.29(s,2H),3.16(t,J＝7.2Hz,2H),2.74(t,J＝7.2Hz,2H)；MS(ESI)m/z(M+H)+450.1。
实施例26、化合物TX-026的制备
甲基-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)丙氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以丙氨酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到甲基(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)丙氨酸甲酯，为白色固体340mg，收率68.3％，1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.8Hz,2H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(s,1H),7.41(q,J＝8.0Hz,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,4H),3.90(d,J＝13.6Hz,1H),3.75(m,3H),3.71(s,1H),3.40(q,J＝6.9Hz,1H),2.22(s,1H),1.36(d,J＝7.2Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+464.6。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-021，为白色固体224mg，收率58.2％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,2H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.8Hz,4H),4.29(q,J＝13.5Hz,2H),4.06(q,J＝7.1Hz,1H),1.54(d,J＝7.2Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+450.1。
实施例27、化合物TX-022的制备
N-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以肌氨酸乙酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到N-(3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)-N-甲基甘氨酸乙酯，为白色固体350mg，收率71.4％，1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,4H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.77(s,2H),3.32(s,2H),2.43(s,3H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+478.4。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-022，为白色固体190mg，收率65.9％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),8.02(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.18-7.22(m,4H),4.09(s,2H),3.67(s,2H),2.54(s,3H)；MS(ESI)m/z(M+H)+450.1。
实施例28、化合物TX-023的制备
甲基-2-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氨基)-2-甲基丙酸盐酸盐
按前述目标化合物TX-001相同的制备方法，以2-氨基-2-甲基丙酸甲酯盐酸盐替换氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐，首先制备得到甲基-2-((3-氯-4-(5-(4-苯氧基苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基)氨基)-2-甲基丙酸甲酯，为白色固体372mg，收率71.6％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝8.8Hz,2H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(s,1H),7.50(t,J＝7.4Hz,3H),7.28(t,J＝7.4Hz,1H),7.19-7.21(m,4H),3.71(d,J＝6.8Hz,2H),3.64(s,3H),2.78(t,J＝7.4Hz,1H),1.28(s,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+478.5。
进一步参考TX-001的制备方法，通过将上步产物水解、酸化成盐反应得到目标化合物TX-023，为白色固体225mg，收率59.4％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,2H),8.20(d,J＝8.4Hz,2H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.29(t,J＝7.5Hz,1H),7.20(t,J＝7.8Hz,4H),4.25(s,2H),1.61(s,6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+464.2。
实施例29、本发明示例性的实施例化合物对S1P1和S1P3受体的体外激动活性
使用[35S]GTPγS结合实验评价本发明示例性的实施例化合物对S1P1和S1P3受体的体外激动活性。将5μg膜蛋白(S1P1膜蛋白HTS176M,S1P3膜蛋白HTS097M,MerckMillipore,USA)与不同浓度的化合物在缓冲液(20mMHEPES,pH7.4,100mM NaCl,10mMMgCl2,5μg Saponin,0.5μM GDP，0.3nm[35S]GTPγS(1200Ci/mmol)中孵育，保持温度为30℃，孵育30分钟。将反应液移入去离子水预处理过的GF/B filter板(Millipore MAHFB1H)。用预冷的10mM磷酸钠溶液(pH7.4)洗3次，干燥后进行放射性核素检测，每个化合物平行测定3次，取平均值，结果如表1所示。
表1 化合物对S1P1和S1P3受体的体外激动活性
注：“/”表示体外激动活性>5000nM。
结果表明，本发明示例性的实施例化合物对于S1P1受体的体外激动活性总体优于阳性对照药Ozanimod，其中化合物TX-005、TX-008、TX-009、TX-011、TX-013、TX-017、TX-022对于S1P1受体的体外激动活性数值较Ozanimod基本上高出一个数量级；且绝大多数化合物对于S1P3受体无激动作用，化合物TX-003、TX-006、TX-011、TX-014、TX-021、TX-022对S1P3受体有微弱的激动作用，但是这些化合物对于S1P1/S1P3激动活性数值比例均高于Ozanimod。表明本发明化合物对于S1P1受体的激动强度和选择性均优于Ozanimod。
实施例30、本发明示例性的实施例化合物的体内免疫抑制作用
使用大鼠外周血淋巴细胞数量指标评价本发明示例性的实施例化合物的免疫抑制作用。选用将健康雄性SD大鼠(体重200-220g)，随机分组，每组3只。禁食过夜。次日内眦静脉取血，应用ADVIA2120全自动血球分析仪进行基础血淋巴细胞计数检测。每组按照1mg/kg药量给予待测药物，于给药后24h再次内眦静脉取血，进行血淋巴细胞计数检测，计算淋巴细胞降低百分率，取3只动物测定结果的平均值。
表2 化合物的体内免疫抑制作用
结果表明，本发明示例性的实施例化合物的体内免疫抑制作用总体优于阳性对照药Ozanimod。其中化合物TX-003、TX-005、TX-007、TX-008、TX-009、TX-011、TX-012、TX-013、TX-015、TX-016、TX-018、TX-020、TX-022、TX-023对于淋巴细胞数量的降低程度比Ozanimod高出10％以上。
实施例31、本发明示例性的实施例化合物的体外代谢稳定性试验
使用大鼠肝微粒体温孵体系评价初步评价本发明示例性的实施例化合物的代谢稳定性。将待测化合物(1μL,400μmol/L DMSO溶液)、大鼠肝微粒体蛋白(5μL,20mg/mL)和Tris-HCl缓冲液(50mM，pH＝7.4)于37℃预温孵5min后，加入20μL NADPH(10mM)启动反应，反应总体积为200μL(有机溶剂含量为<0.5％)，化合物的终浓度为2μmol/L。温孵0h、1h后，冰乙腈(400μL)终止反应。涡旋混匀后13000g×5min离心，取上清液5μL进样，进行LC-MS/MS分析检测。代谢百分数(％)＝(1-Q1h/Q0h)×100％；Q1h/Q0h为温孵1h/0h后待测化合物的剩余量。
表3 化合物体外代谢稳定性
结果表明，本发明示例性的实施例化合物具有较好的体外代谢稳定性，在肝微粒体温孵体系中1h后总体上有80％以上的药物保持了原形形式，优于阳性对照药Ozanimod。
实施例32、本发明示例性的实施例化合物对慢性溃疡性结肠炎的治疗作用
使用OXZ诱导的慢性溃疡性结肠炎病理慢性评价本发明部分示例性的实施例化合物对于慢性溃疡性结肠炎的治疗作用。选用雄性昆明小鼠(28-32g)，随机分组，每组6只。正常对照组小鼠用100％乙醇腹部涂抹0.2ml致敏，模型组及各给药组小鼠用3％4-乙氧基亚甲基-2-苯基噁唑啉-5-酮(OXZ，E0753)乙醇溶液腹部涂抹0.2ml致敏，第二天重复致敏一次，5天后自模型组和给药组小鼠肛门灌入0.15ml 2％OXZ乙醇(50％)溶液，正常对照组自肛门灌入0.15ml 50％乙醇。于实验第3天筛选成模小鼠分组，按如下方式每天给药一次：(1)正常对照组(Control)：直接给予1％羧甲基纤维素钠灌胃。(2)UC模型组(Model)：直接给予1％羧甲基纤维素钠灌胃。(3)阳性药柳氮磺吡啶组(SASP)：以1％羧甲基纤维素钠配制后灌胃。(4)化合物组(本发明化合物和对照化合物Ozanimod)：1mg/kg，以1％羧甲基纤维素钠配制后灌胃。给药8天后，脱颈处死各组动物，并检测结肠炎相关的各项指标。每组6只计算平均值。
表4 化合物对结肠炎小鼠体重和结肠长度的影响
结果表明，实验过程中，无动物死亡，本发明示例性的实施例化合物对慢性溃疡性结肠炎具有一定的治疗作用，且与阳性药SASP以及Ozanimod相比，对于小鼠体重的影响更小，疗效和安全性更高。
实施例33、本发明示例性的实施例化合物的药代动力学参数评价
将健康雄性SD大鼠(体重200-220g)分组，每组5只平行样品。(1)使用生理盐水将待测药物和对照药物配置成溶液，按照3mg/kg/10ml剂量灌胃给药；(2)使用生理盐水将待测药物和对照药物配置成溶液，按照0.3mg/kg/5ml剂量静脉注射给药；按药物代谢动力学研究常规方法进行分时间段采血、血浆处理、绘制标准曲线、对样品进行UPLC-MS/MS分析，计算生物利用度。采用Phoenix软件进行药代动力学参数分析。结果如表5所示，本发明化合物均具有适宜的生物利用度。
表5 部分化合物的药代动力学非房室性模型参数
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐：
其中，R1选自H、未取代或被一个或多个Ra取代的下列基团：C1-8烷基、C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R2选自-CN或-CF3；
R3选自-NR’2或氮杂C3-8环烷基；其中，所述氮杂C3-8环烷基被一个或多个-R6COOR7所取代；R’可相同或不同，任选为：H、C1-8烷基、-R6COOR7，其中，R’中至少有一个为-R6COOR7；其中，R6选自化学键或C1-8亚烷基，R7选自H或C1-8烷基；
X选自-F、-Cl、-Br或-I；
Ra选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、＝O或被-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、＝O取代的下列基团：C1-8烷基、C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐，其中，R1选自未取代、或被一个或多个Ra取代的下列基团：C1-6烷基、C3-6环烷基；所述Ra选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN或被-F、-Cl、-Br、-I、-CN取代的下列基团：C1-6烷基、C3-6环烷基；
优选地，X选自-F或-Cl；
优选地，R1选自未取代、或被一个或多个Ra取代的下列基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、环戊基、正己基、异己基、环己基；所述Ra选自-F、-Cl、-Br、-I或-CN；
优选地，R3选自其中R4、R5选自H或C1-6烷基；L选自C1-6亚烷基，m和n相同或不同，彼此独立地选自1-3的整数，R6选自化学键或C1-8亚烷基；
还优选地，R3选自-氮杂环丁基-R6COOR7，-氮杂环戊基-R6COOR7或-氮杂环己基-R6COOR7。
3.根据权利要求1或2所述的式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐，其中，所述化合物药学上可接受的盐选自无机酸或有机酸与化合物中可成盐位点(例如可成盐的N上)形成的盐；
优选地，所述无机酸包括但不限于：盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸、氢氟酸、氢碘酸、焦硫酸或硝酸；
优选地，所述有机酸包括但不限于：柠檬酸、马来酸、琥珀酸、醋酸、苹果酸、酒石酸、甲磺酸、苯磺酸、甲酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、己二酸、藻酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸；
优选地，所述化合物药学上可接受的盐选自盐酸盐。
4.根据权利要求1-3任一项所述的式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐，其中，所述化合物包括但不限于如下结构的化合物或其盐：
5.权利要求1-4任一项所述的化合物的制备方法，包括如下步骤：将式(I-4)化合物与式(I-5)化合物反应得到式I化合物，
其中，R1、R2、R3、X具有权利要求1-4任一项所定义；
任选地，所述制备方法还包括将式I化合物与成盐试剂反应形成其药学上可接受盐；
优选地，当R3中的基团R7为烷基时，可将所得到的式(I)化合物进行水解，反应得到R7为H的式(I)化合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中所述式(I-4)化合物由如下方法制备，包括：
其中，R1、R2、R3、X具有权利要求1-4任一项所定义；
1)将式(I-1a)化合物与乙二醇反应，得到式(I-1)化合物；
2)将步骤1)得到的式(I-1)化合物与盐酸羟胺反应，得到式(I-2)化合物；
3)将步骤2)得到的式(I-2)化合物与式(II)化合物反应，得到式(I-3)化合物，然后在酸性条件下反应得到式(I-4)化合物。
7.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的权利要求1-4任一项所述式(I)所示化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐中的一种或多种；
优选地，所述药物组合物还包括可药用载体；
优选地，所述可药用载体包括但不限于：填充剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粘合剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、防腐剂、抗氧剂、矫味剂、着色剂、渗透压调节剂、pH调节剂、支撑剂中的一种或多种。
8.一种包含权利要求7所述药物组合物的制剂；
所述制剂的剂型包括但不限于：液体剂型、固体剂型或半固体剂型；
优选地，所述液体剂型包括但不限于口服溶液制剂、注射剂、洗剂、滴剂、搽剂、气雾剂等；固体剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、栓剂、贴剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等；
优选地，所述的剂型还包括普通制剂、缓控释制剂、靶向制剂、植入剂及各种微粒给药系统。
9.权利要求1-4任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们药学上可接受的盐，或者权利要求7所述药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关病症的药物中的用途；
优选地，所述S1P1受体相关的病症包括但不限于：自身免疫性疾病、淋巴细胞介导的疾病、炎性疾病、细菌感染、真菌感染、病毒感染或癌症等。
10.权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关病症的药物中的用途；其特征在于，所述用途为在制备治疗炎症性肠炎、和/或克罗恩病、和/或溃疡性结肠炎、和/或系统性红斑狼疮、和/或类风湿性关节炎、和/或牛皮癣、和/或多发性硬化症、和/或移植排斥药物中的用途。
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