CN107853182A - 一种垂茎异黄精根状茎的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于垂茎异黄精培养技术领域，公开了一种垂茎异黄精根状茎的培养方法，选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体；消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，得到垂茎异黄精苗；对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗，将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水；移栽后遮阴。本发明以根状茎为外植体，建立了一套完整的垂茎异黄精组培快速繁殖技术体系，有效解决了根状茎在消毒、增殖、炼苗移栽过程中存在的技术问题，可在短期内培育大量的垂茎异黄精苗，并且，炼苗技术成熟，成活率可达50％以上。
Description
技术领域
本发明属于垂茎异黄精培养技术领域，尤其涉及一种垂茎异黄精根状茎的培养方法。
背景技术
垂茎异黄精为多年生草本，根状茎，合轴，附生的。根状茎水平爬去，通常分枝，念珠状，肉质。茎上升或下垂，单。叶茎生的，互生，具短或不明显叶柄，全缘。花序顶生和通常也腋生，总状的或近伞形，通常1或2花，有时3-6花。花两性，下垂，。花被带粉红色或带白色，管状或钟状；裂片6，成鳞状，近等长，合生下部达1/5-5/6其长度。副花冠无。雄蕊6，2轮，外部的短于或等长于内部；花丝丝状，平滑的或瘤状，下部贴生于花被达大多数其长度；花药披针形到卵形，内向。子房椭圆形，3室。花柱纤细；柱头头状或3浅裂，小。果一浆果，橙，球状到卵球形。在四川省海螺沟内分布于青石板沟海拔2200－2300米范围一带，随后又在云南省的高黎贡山发现。垂茎异黄精在植物地理学上的分布区范围十分狭窄，并呈不连续间断分布，因此，垂茎异黄精对研究百合科植物的系统进化和植物区系的演变以及中国横断山地区的古地理和古气候的变化，都具有重要的科学价值。由于茎异黄精在植物地理学上的分布区范围十分狭窄，获取种子困难，目前还没有人工繁育垂茎异黄精的报道，因此，需要建立一种人工快速繁殖的培养方法来培育垂茎异黄精，以达到保护和商业化利用的目的。
综上所述，现有技术存在的问题是：种子繁殖萌发率低，只能从野外采集野生垂茎异黄精，目前人工繁育垂茎异黄精属于技术空白。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种垂茎异黄精根状茎的培养方法。
本发明是这样实现的，一种垂茎异黄精根状茎的培养方法，所述垂茎异黄精根状茎的培养方法包括以下步骤：
步骤一，选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体；刷除去表面泥土，自来水流水冲洗1h；75％的乙醇消毒处理10s，再用0.1％的HgCl2溶液灭菌10min，无菌水冲洗6次；
步骤二，消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，得到垂茎异黄精苗；
步骤三，在培养后90d，对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％，再开罐炼苗3～7d，将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；移栽后遮阴50％～70％。
进一步，所述培养基包括：
基本培养基MS加30g/L蔗糖和5g/L琼脂粉，pH为5.8；
根茎出芽的培养基：MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D 3.0mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，p H＝5.8。
进一步，所述培养基培养基121℃灭菌20min。
进一步，所述基质为草炭、珍珠岩和蛭石的混合物；草炭、珍珠岩和蛭石体积比为1～2:0.5。
本发明的另一目的在于提供一种由所述垂茎异黄精根状茎的培养方法培养的垂茎异黄精。
本发明的优点及积极效果为：
本发明具有以下有益效果：
1、本发明采用根状茎来繁育垂茎异黄精苗，解决了目前无法人工繁殖垂茎异黄精苗的问题。
2、本发明根状茎作为外殖体，取材、运输方便；对根状茎进行消毒后，即可进行诱导丛生芽的萌发，所需材料少，理论上不受现有垂茎异黄精数量少、种子少的限制，可使根状茎丛生芽和腋芽的萌发量和萌发效率在短时间内达到最大值。
3、由于根状茎培养，不需要再进行生根培养，缩短了培养周期。
4、本发明根据诱导根状茎腋芽萌发所用的培养基组分及配比，在根状茎具有最大萌发效率和萌发量的前提下，采用相同的培养基进行增殖培养，可在保证具有最大增殖效率的前提下，促使根状茎在增殖培养过程中继续萌发丛生芽和腋芽，提升垂茎异黄精苗的成活率和得率。另外，诱导萌发丛生芽和增殖培养基组分相同，无需向增殖培养基中添加新成分，大大降低了培养基的配比成本。
5、采用本发明的方法进行炼苗，可使垂茎异黄精苗的炼苗成活率达到50％以上。
综上所述，本发明以根状茎为外植体，建立了一套完整的垂茎异黄精组培快速繁殖技术体系，有效解决了根状茎在消毒、增殖、炼苗移栽过程中存在的技术问题，可在短期内培育大量的垂茎异黄精苗，并且，炼苗技术成熟，成活率可达50％以上。
附图说明
图1是本发明实施例提供的垂茎异黄精根状茎的培养方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的垂茎异黄精根状茎的培养方法包括以下步骤：
S101：选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体；用细毛刷除去表面泥土，用自来水流水冲洗1h；在超净工作台上用75％的乙醇消毒处理10s，再用0.1％的HgCl2溶液灭菌10min，无菌水冲洗6次；
S102：将消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，60天后得到垂茎异黄精苗；
S103：在培养后90d，对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％，再开罐炼苗3～7d，将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；移栽后遮阴50％～70％。
下面结合试验对本发明的应用原理作进一步的描述。
1、培养基
基本培养基为MS，加30g/L蔗糖和5g/L琼脂粉，pH为5.8。
根茎出芽的最佳培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D 3.0mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂(p H＝5.8)。
培养基灭菌：121℃灭菌20min。
2、外殖体消毒
选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体。用细毛刷除去表面泥土，用自来水流水冲洗1h。然后在超净工作台上用75％的乙醇消毒处理10s，再用0.1％的HgCl2溶液灭菌10min，无菌水冲洗6次。
3、芽诱导
将消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，60天后得到垂茎异黄精苗。
| 序号 | 6-BA | NAA | 2,4-D | 出芽率 |
| 1 | 2.0 | 1.0 | 0.0 | 10.00 |
| 2 | 2.0 | 2.0 | 0.0 | 14.29 |
| 3 | 2.0 | 3.0 | 0.0 | 18.00 |
| 4 | 2.0 | 4.0 | 0.0 | 20.00 |
| 5 | 2.0 | 0.0 | 1.0 | 7.69 |
| 6 | 2.0 | 0.0 | 2.0 | 20.00 |
| 7 | 2.0 | 0.0 | 3.0 | 33.33 |
| 8 | 2.0 | 0.0 | 4.0 | 10.00 |
4.炼苗移栽
在培养后90d，对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％，再开罐炼苗3～7d，然后将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；其中，基质为草炭、珍珠岩和蛭石的混合物，草炭、珍珠岩和蛭石体积比为1～2:0.5。移栽后遮阴50％～70％。
下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步的描述。
实施例1：
1.培养基
基本培养基为MS，加30g/L蔗糖和5g/L琼脂粉，pH为5.8。
根茎出芽的最佳培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D 3.0mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂(p H＝5.8)。
培养基灭菌：121℃灭菌20min。
2.外殖体消毒
选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体。用细毛刷除去表面泥土，用自来水流水冲洗1h。然后在超净工作台上用75％的乙醇消毒处理10s，再用0.1％的HgCl2溶液灭菌10min，无菌水冲洗6次。
3.芽诱导
将消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中，于24℃、2000lx条件下，光照8h/d培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，60天后得到垂茎异黄精苗。
4.炼苗移栽
在培养后90d，对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗15d，遮阴度为50％％，再开罐炼苗5d，然后将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；其中，基质为草炭、珍珠岩和蛭石的混合物，草炭、珍珠岩和蛭石体积比为1:2:0.5。移栽后遮阴50％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种垂茎异黄精根状茎的培养方法，其特征在于，所述垂茎异黄精根状茎的培养方法包括以下步骤：
步骤一，选用黄精的当年生根茎、幼嫩茎及幼嫩叶片为外植体；刷除去表面泥土，自来水流水冲洗1h；75％的乙醇消毒处理10s，再用0.1％的HgCl2溶液灭菌10min，无菌水冲洗6次；
步骤二，消毒后的念珠状根状茎切段后置于培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d培养，诱导根状茎腋芽的萌发，增殖培养，得到垂茎异黄精苗；
步骤三，在培养后90d，对垂茎异黄精苗进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％，再开罐炼苗3～7d，将垂茎异黄精苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；移栽后遮阴50％～70％。
2.如权利要求1所述的垂茎异黄精根状茎的培养方法，其特征在于，所述培养基包括：
基本培养基MS加30g/L蔗糖和5g/L琼脂粉，pH为5.8；
根茎出芽的培养基：MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 3.0mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，p H＝5.8。
3.如权利要求2所述的垂茎异黄精根状茎的培养方法，其特征在于，所述培养基培养基121℃灭菌20min。
4.如权利要求1所述的垂茎异黄精根状茎的培养方法，其特征在于，所述基质为草炭、珍珠岩和蛭石的混合物；草炭、珍珠岩和蛭石体积比为1～2:0.5。
5.一种由权利要求1～4任意一项所述垂茎异黄精根状茎的培养方法培养的垂茎异黄精。
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