CN107843683B - 凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药材鉴别技术领域，具体涉及一种凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法，取凌霄花待检药材粉末适量，加乙酸乙酯提取，弃去滤液，药渣加甲醇提取，滤液蒸干后加甲醇溶解，作为供试品溶液；取毛蕊花糖苷对照品适量，加甲醇溶解，作为对照品溶液；吸取上述制备的溶液，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，以甲苯‑乙酸乙酯‑甲酸（1:7:1）为展开剂，室温下展开，取出晾干后先置于365nm紫外灯下检视，再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，日光下检视，将供试品色谱与对照品色谱进行对比，以鉴别凌霄花药材真伪。本发明以毛蕊花糖苷为鉴别对照品，操作简便易行，定性特征明显、结果易于判定、专属性较好，能够准确鉴别凌霄花药材。

Description

凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法

技术领域

本发明属于中药材鉴别技术领域，具体涉及一种凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法。

背景技术

凌霄花（Flos Campsis），又名芰花、紫葳华、陵霄花、堕胎花，为紫葳科（Bignoniaceae）凌霄属（Campsis）植物凌霄［Campsis grandiflora (Thunb.) K. Schum.］或美洲凌霄［C. radicans (L.) Seem.］的干燥花，为我国传统中药［中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志．第69卷．北京：科学出版社，1990：32-34．国家药典委员会．中华人民共和国药典．2015年版，一部．北京：中国医药科技出版社，2015：287-287．］。始载于《神农本草经》，列为中品；性味甘、酸、寒，归肝、心包经，具有活血通经、凉血祛风的功效；主治月经不调、经闭癥瘕、产后乳肿、风疹发红、皮肤瘙痒，痤疮等［南京中医药大学．中药大辞典．第2版．上海：上海科学技术出版社，2006：2678-2680．宋学华，高似奇．凌霄花的本草考证．江苏药学与临床研究，2003，11(2)：30-32．］。文献报道，凌霄花化学成分主要为脂肪醇、脂肪酮、脂肪酸、甾醇、五环三萜、酚酸、黄酮及花色素、环烯醚萜及苷、苯丙素苷、以及挥发油等［杨阳，绳慧峰，张慰．凌霄花的化学成分及药理作用综述．中国药师，2008，11(12)：1521-1522．来李娟，杨阳．凌霄花化学成分及与其伪品鉴别的研究进展．中国药业，2016，25(2)：25-29．］。

当前，药材市场上凌霄花的销售价格一直较高，其伪品较为多见。凌霄花常见的伪品有泡桐花、曼陀罗花、闹羊花、木槿花等，凌霄花与其伪品的药理活性差别较大，如使用不当，可发生严重的不良反应。因此，凌霄花的鉴别具有重要意义。然而，实验证实现有的《中华人民共和国药典》（2015年版一部）凌霄花薄层色谱鉴别方法对上述凌霄花常见伪品的鉴别效果不佳，因此需要科研工作者进行改进。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法。本发明选择毛蕊花糖苷为鉴别对照品，先后考察了不同展开剂、显色剂、薄层板、温度、湿度等条件对薄层色谱的影响，并确定了供试品溶液配制方法和最佳的薄层色谱条件，发明了一种简便易行、专属性好的薄层色谱鉴别方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法，包括如下步骤：

1）称取待检药材粉末适量，加入乙酸乙酯提取，滤过，弃去乙酸乙酯滤液，药渣加入甲醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加入甲醇溶解，作为供试品溶液；

2）称取毛蕊花糖苷对照品适量，加入甲醇溶解，作为对照品溶液；

3）吸取步骤1）制备的供试品溶液和步骤2）制备的对照品溶液，分别点于同一薄层板上，加入展开剂，室温下展开，取出晾干后进行显色，将供试品色谱与对照品色谱进行对比，在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点或斑点，确定待检药材为凌霄花药材；反之，则确定待检药材不为凌霄花药材。

进一步地，步骤3）所述的薄层板为薄层色谱高效硅胶G板。

进一步地，步骤3）所述的展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）。

进一步地，步骤3）所述的显色过程为先置于紫外灯（365nm）下检视，再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。

本发明中对照品的选择：凌霄花的化学成分中，脂肪醇、脂肪酮、脂肪酸、甾醇、五环三萜、黄酮类化合物为脂溶性化合物，极性较小；而苯丙素苷、环烯醚萜及苷、酚酸类化合物为水溶性化合物，极性较大。其中，苯丙素苷为一类含取代苯乙基和肉桂酰基的天然糖苷，结构较为复杂，存在于双子叶植物中，含量低微，一般仅为0.02%~0.4%［许敬英，苏奎，周静．苯丙素苷类化合物的研究进展(I)．时珍国医国药，2007，18(6)：1505-1507．许敬英，苏奎，周静．苯丙素苷类化合物的研究进展(II)．时珍国医国药，2007，18(7)：1770-1772．］。毛蕊花糖苷（毛蕊花苷，verbascoside），又名麦角甾苷（acteoside）、阿克替苷，是凌霄花中主要的苯丙素苷类化合物［张桥，沈娟，柳于介，等．高效液相色谱法测定中药凌霄花中麦角甾苷、齐墩果酸和熊果酸含量．中国中药杂志，2011，36(8)：1043-1045．］。考虑到苯丙素苷类化合物非广泛存在于植物体内，故本发明选择毛蕊花糖苷作为凌霄花鉴别对照品，具有一定的生化系统学和天然药物化学根据，可体现出鉴别的特征性，有效克服《中华人民共和国药典》方法中仅使用凌霄花对照药材作为鉴别对照的不足。

本发明中供试品溶液的制备：本发明采用乙酸乙酯提取后弃去提取液的前处理方法进行供试品溶液制备，相对于石油醚，乙酸乙酯极性较大，能够提取除去挥发油、脂肪醇、脂肪酸及谷甾醇等非极性或弱极性化合物，还能提取除去熊果酸、齐墩果酸、黄酮苷元及苷等中等极性化合物，避免了下一步甲醇提取液中以上化合物对色谱鉴别的干扰，并有利于其后大极性展开剂展开，可有效提高分离效果和显色效果。

本发明中薄层板、展开剂、显色剂、温度、湿度的确定：通过系列实验，本发明选择并确定展开剂为极性相对较大的甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1），在高效硅胶G板上进行薄层色谱，显色剂为先置于365nm紫外灯下检视，再喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色日光下检视，能够较好地展开并分离凌霄花药材中毛蕊花糖苷及其它大极性化合物，显色后斑点丰富、明显、清晰，分离度好，且温度、湿度对展开效果影响不大，其色谱行为稳定。

本发明的有益效果是：以毛蕊花糖苷作为鉴别对照品，操作简便易行、定性特征明显、结果易于判定、专属性较好，能够准确鉴别凌霄花药材，值得推广应用。

附图说明

图1-1a为凌霄花鉴别药典方法的薄层色谱图［三氯甲烷-甲醇（9:1）展开，365nm紫外灯下检视］；

图1-1b为凌霄花鉴别药典方法的薄层色谱图［三氯甲烷-甲醇（9:1）展开，碘蒸气熏至显色，日光下检视］；

图1-2a为凌霄花鉴别药典方法的薄层色谱图［甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）展开，365nm紫外灯下检视］；

图1-2b为凌霄花鉴别药典方法的薄层色谱图［甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）展开，喷以10%硫酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图2-1a为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）展开，365nm紫外灯下检视］；

图2-1b为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图2-2a为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）展开，365nm紫外灯下检视］；

图2-2b为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图2-3a为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［三氯甲烷-甲醇（9:2）展开，365nm紫外灯下检视］；

图2-3b为不同展开剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［三氯甲烷-甲醇（9:2）展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图3-1a为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［365nm紫外灯下检视；

图3-1b为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图3-2a为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［365nm紫外灯下检视］；

图3-2b为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［喷以5%香草醛硫酸溶液加热显色，日光下检视］；

图3-3a为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［365nm紫外灯下检视］；

图3-3b为不同显色剂中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［喷以10%硫酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图4-1a为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［高效硅胶G板上展开，365nm紫外灯下检视］；

图4-1b为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［高效硅胶G板上展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图4-2a为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［硅胶GF254板上展开，365nm紫外灯下检视］；

图4-2b为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［硅胶GF254板上展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图4-3a为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［聚酰胺薄膜板上展开，365nm紫外灯下检视］；

图4-3b为不同薄层板中凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［聚酰胺薄膜板上展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图5-1a为不同温度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［室温下展开，365nm紫外灯下检视］；

图5-1b为不同温度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［室温下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图5-2a为不同温度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［4℃下展开，365nm紫外灯下检视］；

图5-2b为不同温度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［4℃下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图6-1a为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度18%下展开，365nm紫外灯下检视］；

图6-1b为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度18%下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图6-2a为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度42%下展开，365nm紫外灯下检视］；

图6-2b为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度42%下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图6-3a为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度65%下展开，365nm紫外灯下检视］；

图6-3b为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度65%下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图6-4a为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度88%下展开，365nm紫外灯下检视］；

图6-4b为不同湿度下凌霄花药材展开显色的薄层色谱图［相对湿度88%下展开，喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图7-a为不同批次凌霄花药材及其伪品或混淆品的薄层色谱图［365nm紫外灯下检视］；

图7-b为不同批次凌霄花药材及其伪品或混淆品的薄层色谱图［喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色，日光下检视］；

图中：V、毛蕊花糖苷，U、熊果酸，C1~C8、凌霄花，P、泡桐花，D、曼陀罗花，H、木槿花，R、闹羊花。

具体实施方式

下面根据附图和实施例对本发明进一步说明：本实施例在以本发明技术方案的为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体操作过程，但本发明的保护范围不限于以下实施例。

对比实验——《中华人民共和国药典》的凌霄花薄层色谱鉴别方法、以及改进药典的凌霄花薄层色谱鉴别方法

1.材料

1.1.仪器与试剂

电子分析天平，Quintix 224-1CN型（最大载荷220g，分度值0.1mg），德国Sartorius公司产品。

中药粉碎机，Q-500B3型，上海冰都电器有限公司产品。

数控超声清洗器，KQ-500DE型，昆山市超声仪器有限公司产品。

数显式电热恒温水浴锅，XMTD-204型，上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品。

暗箱四用紫外分析仪，ZF-8型，上海骥辉科学分析仪器有限公司产品。

玻璃点样毛细管，加强型（0.3mm×100mm），华西医科大学仪器厂生产。

薄层色谱展开缸，P型（200mm×200mm），上海信谊仪器厂生产。

薄层色谱高效硅胶G板（50mm×100mm），批号20160108，薄层色谱硅胶GF254板（50mm×100mm），批号20160912，青岛海洋化工有限公司生产。

薄层色谱聚酰胺薄膜板（200mm×200mm），批号20161027，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产。

实验用水为重蒸水。

其它试剂均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。

试药

毛蕊花糖苷（verbascoside）对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号111530-201208，供含量测定用，纯度92.5%。

熊果酸（ursolic acid）对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号110742-201622，供含量测定用，纯度94.7%。

凌霄花、美洲凌霄花药材，以及阴性对照泡桐花、曼陀罗花、木槿花、闹羊花药材均于2016年9月~10月采集或购自河北安国中药材批发市场，进行鉴定，鉴定结果见表1。

以上药材标本均存放于第九七医院药剂科标本室。

表1 凌霄花及其它花类药材鉴定信息

2.实验方法

2.1.药典的凌霄花薄层色谱鉴别方法

按照《中华人民共和国药典》（2015年版一部）方法进行凌霄花薄层色谱鉴别实验。称取毛蕊花糖苷对照品、熊果酸对照品适量，加入甲醇，分别配制成0.5mg/ml的毛蕊花糖苷对照品溶液、熊果酸对照品溶液（实验编号分别为V、U）；称取上述凌霄花、泡桐花、曼陀罗花、木槿花、闹羊花药材样品粉末各0.5g，加入石油醚（60℃~90℃）15ml，超声处理15min，滤过，弃去石油醚滤液，药渣加入甲醇15ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加入甲醇1ml使溶解，分别制成药材样品溶液（实验编号分别为C1~C8、P、D、H、R）。

使用玻璃点样毛细管吸取上述对照品溶液、药材样品溶液各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇（9:1）为展开剂，室温下展开，取出，晾干，首先置于紫外灯（365nm）下检视，然后置于碘蒸气中熏至斑点显色清晰，置于日光下检视，结果见图1-1a、图1-1b。

改进药典的凌霄花薄层色谱鉴别方法

同法制备对照品溶液、药材样品溶液。使用玻璃点样毛细管吸取上述对照品溶液、药材样品溶液各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上。改进药典方法中的展开剂、显色剂，将展开剂更换成甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1），同法展开，取出，晾干，首先置于紫外灯（365nm）下检视，然后喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视，结果见图1-2a、图1-2b。

结果

对药典方法进行分析：第一步，先采用石油醚提取，由于石油醚为非极性溶剂，故第一步仅能提取弃去凌霄花药材中的挥发油、脂肪醇、脂肪酸及甾醇等非极性或弱极性化合物；第二步，使用甲醇提取，因甲醇为极性溶剂，故提取液中含有中等极性化合物（包括熊果酸、齐墩果酸等三萜酸）及极性化合物，用于鉴别的化合物多而杂。如图1-1a、图1-1b所示，虽然凌霄花与其它药材可以区分，但由于展开剂为三氯甲烷-甲醇（9:1），极性较小，以致薄层板中C1~C8点样点上方绝大部分空间无明显显色斑点，即大多数特征极性化合物未展开。可以推断，按照药典方法如与其它药材进行薄层色谱鉴别，其鉴别结果不理想。

针对药典方法的不足，经多次实验尝试后，将药典方法中的展开剂改进为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1），增大其极性，并改进显色剂，先置于365nm紫外灯下检视，再喷以硫酸乙醇溶液加热显色，如图1-2a所示，从鉴别结果上看，提高了展开程度与分离效果。但是，于紫外灯下检视，凌霄花与泡桐花区分不明显；喷以硫酸乙醇溶液加热显色，凌霄花与曼陀罗花、木槿花区分不明显；如图1-2b所示，在与熊果酸对照品Rf值相同的位置上，所有实验药材均显示相同的红色斑点。

实验结果表明：《中华人民共和国药典》方法用于凌霄花药材的薄层色谱鉴别效果不佳。

实施例1：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法中不同展开剂的考察

1.材料

1.1.仪器与试剂 同上述对比实验

1.2.试药 同上述对比实验

2.实验方法

2.1.对照品溶液的制备

称取毛蕊花糖苷对照品适量，置于10ml容量瓶中，加入甲醇溶解定容，配制成0.8mg/ml的溶液，作为对照品溶液（实验编号为V）。

供试品溶液的制备

称取上述凌霄花药材粉末各0.5g，加入乙酸乙酯10ml，超声处理15min，滤过，弃去乙酸乙酯滤液，药渣加入甲醇10ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加入甲醇1ml使溶解，作为凌霄花供试品溶液（实验编号分别为C1~C8）。同法配制泡桐花、曼陀罗花、木槿花、闹羊花样品溶液（实验编号分别为P、D、H、R）。

不同展开剂的考察

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，C1平行实验3次，分别以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）、乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）、三氯甲烷-甲醇（9:2）为展开剂，室温下展开，取出晾干后置于紫外灯（365nm）下检视；再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。结果见图2-1a、图2-1b、图2-2a、图2-2b、图2-3a、图2-3b。

结果

实验结果表明：采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）展开后，斑点丰富且清晰，分离度高，因此优选的，展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）。

实施例2：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法中不同显色剂的考察

1.材料

1.1.仪器与试剂 同实施例1。

试药 同实施例1。

实验方法

2.1.对照品溶液的制备 同实施例1。

供试品溶液的制备 同实施例1。

不同显色剂的考察

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，C1平行实验3次，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）为展开剂，室温下展开，取出晾干后置于紫外灯（365nm）下检视；再分别喷以10%磷钼酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。结果见图3-1a、图3-1b、图3-2a、图3-2b、图3-3a、图3-3b。

结果

实验结果表明：喷以10%磷钼酸乙醇溶液加热显色后，斑点显色明显且清晰，因此优选的，显色剂为10%磷钼酸乙醇溶液，且显色前，先置于365nm紫外灯下检视。

实施例3：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法中不同薄层板的考察

1.材料

1.1.仪器与试剂 同实施例1。

试药 同实施例1。

实验方法

2.1.对照品溶液的制备 同实施例1。

供试品溶液的制备 同实施例1。

不同薄层板的考察

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1各2μl，分别点于薄层色谱高效硅胶G板、薄层色谱硅胶GF254板、聚酰胺薄膜板上，C1平行实验3次，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）为展开剂，室温下展开，取出晾干后置于紫外灯（365nm）下检视；再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。结果见图4-1a、图4-1b、图4-2a、图4-2b、图4-3a、图4-3b。

结果

实验结果表明：点于薄层色谱高效硅胶G板展开显色后，斑点显色清晰且分离度好，因此优选的，薄层色谱板为薄层色谱高效硅胶G板。

实施例4：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法中不同温度的考察

1.材料

1.1.仪器与试剂 同实施例1。

试药 同实施例1。

实验方法

2.1.对照品溶液的制备 同实施例1。

供试品溶液的制备 同实施例1。

不同温度的考察

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，C1平行实验3次，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）为展开剂，分别于室温和4℃（薄层色谱展开缸和展开剂提前放到该温度下饱和3h）下展开，取出晾干后置于紫外灯（365nm）下检视；再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。结果见图5-1a、图5-1b、图5-2a、图5-2b。

结果

实验结果表明：温度对展开效果影响不大，因此确定色谱温度为室温。

实施例5：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法中不同湿度的考察

1.材料

1.1.仪器与试剂 同实施例1。

试药 同实施例1。

实验方法

2.1.对照品溶液的制备 同实施例1。

供试品溶液的制备 同实施例1。

不同湿度的考察

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，C1平行实验3次，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）为展开剂，室温下分别于相对湿度为18%、42%、65%、88%（将装有硫酸-水混合溶液的烧杯提前放置薄层色谱展开缸内饱和2h）下展开，取出晾干后置于紫外灯（365nm）下检视；再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。结果见图6-1a、图6-1b、图6-2a、图6-2b、图6-3a、图6-3b、图6-4a、图6-4b。

结果

实验结果表明：毛蕊花糖苷对照品Rf值没有明显改变，湿度对展开效果影响不大，在相对湿度18%~88%下，色谱行为稳定。

实施例6：本发明的凌霄花薄层色谱鉴别方法

1.材料

1.1.仪器与试剂 同实施例1。

试药 同实施例1。

实验方法

2.1.对照品溶液的制备 同实施例1。

供试品溶液的制备 同实施例1。

凌霄花薄层色谱鉴别方法

使用玻璃点样毛细管吸取上述制备的对照品溶液V、供试品溶液C1~C8、P、D、H、R各2μl，分别点于同一薄层色谱高效硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:7:1）为展开剂，室温下展开，取出晾干后先置于紫外灯（365nm）下检视，再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视，结果见图7-a、图7-b。

结果

实验结果表明：在与毛蕊花糖苷对照品V色谱相应的位置上，供试品C1~C8的色谱显相同颜色的荧光斑点或斑点，确定供试品C1~C8为凌霄花药材；供试品P、D、H、R的色谱不显相同颜色的荧光斑点或斑点，确定供试品P、D、H、R不为凌霄花药材。

从本发明实验结果上看：如图7-a所示，在与毛蕊花糖苷对照品Rf值相同的位置上，凌霄花药材C1~C8斑点明显，特征性良好，与阴性对照药材P、D、H、R显著区分，特别是喷以磷钼酸乙醇溶液加热显色后，如图7-b所示，凌霄花药材C1~C8点样点上方斑点多而不杂，显色明显，且点与点之间分离度良好；而阴性对照药材均明显无毛蕊花糖苷斑点，其点样点上方斑点多集中于最上方，中部较空无其它特征斑点。

本发明的薄层色谱鉴别方法能够较好地展开并分离凌霄花药材中毛蕊花糖苷及其它大极性化合物，显色后斑点丰富、明显、清晰，分离度好，鉴别结果容易判断，适用于凌霄花与其它药材进行薄层色谱鉴别。

Claims (3)

1.一种凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法，包括如下步骤：

1）称取待检药材粉末适量，加入乙酸乙酯提取，滤过，弃去乙酸乙酯滤液，药渣加入甲醇提取，滤过，滤液蒸干，残渣加入甲醇溶解，作为供试品溶液；

2）称取毛蕊花糖苷对照品适量，加入甲醇溶解，作为对照品溶液；

3）吸取步骤1）制备的供试品溶液和步骤2）制备的对照品溶液，分别点于同一薄层板上，加入甲苯:乙酸乙酯:甲酸=1:7:1的展开剂，室温下展开，取出晾干后进行显色，将供试品色谱与对照品色谱进行对比，在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点或斑点，确定待检药材为凌霄花药材；反之，则确定待检药材不为凌霄花药材。

2.根据权利要求l所述的凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤3）所述的薄层板为薄层色谱高效硅胶G板。

3.根据权利要求l所述的凌霄花药材的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤3）所述的显色过程为先置于365nm紫外灯下检视，再喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰，置于日光下检视。