CN107843541B - 一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法 - Google Patents

一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法。所述系统包括:光学投影仪、PC机、光诱导电沉积芯片、三维移动平台、信号发生器、阻抗分析仪、温度控制仪、微泵和摄像机;光学投影仪与PC机相连,将光图案投射到光诱导电沉积芯片上;光诱导电沉积芯片位于三维移动平台上,三维移动平台可以改变芯片的位置;信号发生器与芯片连接,提供交流电压;阻抗分析仪与芯片连接,测量阻抗;将芯片置于温度控制仪中,控制细胞连续培养的温度;微泵与芯片的溶液入口连接,提供细胞培养基;显微管位于芯片上方,摄像机与显微管连接,实时采集图像。采用本发明的装置或方法能够对贴壁单细胞进行全生命周期电学特性的实时监测和单细胞的定位寻址生长。

Description

一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法
技术领域
本发明涉及细胞监测领域,特别是涉及一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法。
背景技术
疾病的产生与细胞增殖、迁移和癌化等细胞行为息息相关。恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病,其发生的主要表现就是癌细胞失控的增殖、侵袭和转移。在传统的细胞研宄中,通常把细胞样品看成是均一稳定的,从而主要研究细胞群体,但是事实上细胞通常是异质性的,且很多疾病的产生,早期总是局部的极少数细胞发生癌变,这些癌变细胞的信号通常被大量正常细胞的信号所掩盖。因此对于单细胞的研究不仅有助于理解细胞间的生理差异性,更有助于疾病的早期诊断。电学特性作为一个重要的生物物性指标,是指示细胞生理行为机制、病理状态和实现细胞分型的有效参量。现如今单细胞电学特性的主要测量方法有微吸管、微流控等。基于微吸管的测量方法能够较准确的测得单细胞的尺寸、机械特性和电学特性,但是测量速度慢。基于微流控的测量方法能够实现单细胞的高通量测量。但是上述两种方法只能针对悬浮细胞进行检测,无法对贴壁状态的单细胞进行全生命周期电学特性的实时监测和单细胞的定位寻址生长。
发明内容
本发明的目的是提供一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法,实现了对贴壁状态的单细胞进行全生命周期电学特性的实时监测和单细胞的定位寻址生长。
为实现上述目的,本发明提供了如下方案:
一种单细胞生物物理特性的实时监测系统,其特征在于,所述系统包括:光学投影仪、PC机、光诱导电沉积芯片、三维移动平台、信号发生器、阻抗分析仪、温度控制仪、微泵和CCD摄像机;
所述光学投影仪与所述PC机相连,用于将PC机上的光图案投射到光诱导电沉积芯片上;
所述光诱导电沉积芯片位于所述三维移动平台上,所述三维移动平台,用于改变光诱导电沉积芯片的空间位置;
所述信号发生器与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于提供交流电压;
所述阻抗分析仪与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于测量阻抗;
所述温度控制仪装载所述光诱导电沉积芯片,用于控制细胞连续培养的温度环境;
所述微泵与所述光诱导电沉积芯片的溶液入口连接,用于提供细胞培养基;
所述显微管位于所述光诱导电沉积芯片的上方;
所述CCD摄像机与所述显微管连接,用于实时采集图像。
可选的,所述光诱导电沉积芯片包括上基板和下基板,所述上基板和下基板的材质均为ITO玻璃,所述上基板和下基板的形状完全相同,所述上下基板平行设置并且基板的两侧均对齐,所述下基板表面均匀涂抹光敏材料氢化非晶硅,所述上下基板之间是由双面胶构造的微通道,所述光诱导电沉积芯片的尺寸为3cm*3cm。
可选的,所述系统还包括聚光透镜和载物台,所述PC机上的图案进行投影时,得到的投影图案是发散的,所述聚焦透镜用于将发散的光图案聚焦到所述光诱导电沉积芯片上;所述光诱导电沉积芯片位于载物台上。
为实现上述目的,本发明还提供了如下方案:
一种单细胞生物物理特性的实时监测方法,所述方法应用到权利要求1所述的系统,其特征在于,所述方法包括:
通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案投影到光诱导电沉积芯片;
通过信号发生器连接光诱导电沉积芯片,对所述芯片两侧施加交流电压,形成图案化的水凝胶;
通过将光诱导电沉积芯片放置于温度控制仪内,维持细胞连续培养的温度环境;
通过微泵连接芯片中溶液入口,实时供给细胞培养基;
将细胞悬浮液通所述水凝胶中,自主移动三维平台使得单细胞与投影的光斑完全重合;
进行单细胞生物物理特性的测量;
所述三维移动平台利用图像反馈,移动到下一个单细胞,使得所述下一个单细胞与投影的光斑完全重合并进行所述单细胞生物物理特性的测量,再次移动所述三维移动平台直至完成所有单细胞生物物理特性的测量。
可选的,所述通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案进行投影,将所述投影后的光图案通过聚光透镜聚焦于载物台上的光诱导电沉积芯片。
可选的,所述通过信号发生器连接光诱导电沉积芯片,对所述芯片两侧施加交流电压,形成图案化的水凝胶,具体步骤包括:在所述光诱导电沉积芯片的微流通道里通入浓度为20%的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;光图案投影到所述光诱导电沉积芯片,所述光诱导电沉积芯片两端连接信号发生器,施加交流电压,使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液发生交联反应,形成图案化的水凝胶;将纯度99%的乙醇溶液以50ul/min的进液速度通入微流通道30s来冲洗未交联的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;以50ul/min的进液速度通入细胞培养液30s洗去乙醇溶液;通入细胞悬浮液,静止1h,让单个细胞粘附在制定区域,再持续通入混有4-羟乙基哌嗪乙磺酸的细胞培养基,进行细胞的连续培养。
可选的,所述三维移动平台利用图像反馈,移动到下一个单细胞,使得所述下一个单细胞与投影的光斑完全重合并进行所述单细胞生物物理特性的测量,再次移动所述三维移动平台直至完成所有单细胞生物物理特性的测量,具体步骤包括:对细胞进行连续培养,调整光斑投影大小与单细胞同等尺寸,利用光学投影仪将光斑投影到单细胞;将所述光诱导电沉积芯片两端引出电极丝连接阻抗分析仪,对批量的单细胞进行实时监测;记录阻抗谱数据,根据等效电路图分析测得单细胞的电学特性;利用CCD摄像机进行实时的图像采集,分析批量的单细胞行为过程中的尺寸和形状变化。
根据本发明提供的具体实施例,本发明公开了以下技术效果:
本发明提供了一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法,通过光诱导电沉积技术使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液交联并图案化,通过改变各种光图案,实现单细胞的定位寻址生长;在细胞培养过程中,通过三维移动平台的程序化移动,实现批量化单细胞行为过程中的多种生物物理参数的实时测量,如:电学特性、尺寸和形状。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1一种单细胞生物物理特性的实时监测系统结构图;
图2为本发明实施例1一种单细胞生物物理特性的实时监测方法流程图;
图3为本发明实施例1单细胞定位寻址示意图;
图4为本发明实施例1细胞的等效电路图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明的目的是提供一种单细胞生物物理特性的实时监测系统和方法,实现了对贴壁状态的单细胞进行全生命周期电学特性的实时监测和单细胞的定位寻址生长。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实施例1一种单细胞生物物理特性的实时监测系统结构图,如图1所示,一种单细胞生物物理特性的实时监测系统,所述系统包括:光学投影仪、PC机、光诱导电沉积芯片、聚光透镜、载物台、三维移动平台、信号发生器、阻抗分析仪、温度控制仪、微泵和CCD摄像机;所述光学投影仪与所述PC机相连,用于将PC机上的光图案投射到光诱导电沉积芯片上,所述PC机上的图案进行投影时,得到的投影图案是发散的,所述聚焦透镜用于将发散的光图案聚焦到所述光诱导电沉积芯片上;所述光诱导电沉积芯片位于载物台上;所述光诱导电沉积芯片位于所述三维移动平台上,所述三维移动平台,用于改变光诱导电沉积芯片的空间位置;所述信号发生器与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于提供交流电压;所述阻抗分析仪与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于测量阻抗;所述温度控制仪装载光诱导电沉积芯片,用于控制细胞连续培养的温度环境;所述微泵与所述光诱导电沉积芯片的溶液入口连接,用于提供细胞培养基;所述显微管位于所述光诱导电沉积芯片的上方;所述CCD摄像机与所述显微管连接,用于实时采集图像。
所述光诱导电沉积芯片包括上基板和下基板,所述上基板和下基板的材质均为ITO玻璃,所述上基板和下基板的形状完全相同,所述上下基板平行设置并且基板的两侧均对齐,所述下基板表面均匀涂抹光敏材料氢化非晶硅,所述上下基板之间是由双面胶构造的微通道,所述光诱导电沉积芯片的尺寸为3cm*3cm。
为实现上述目的,本发明还提供了如下方案:
图2为本发明实施例1一种单细胞生物物理特性的实时监测方法流程图,如图2所示,一种单细胞生物物理特性的实时监测方法,所述方法应用到前边所述的系统,所述方法包括:
步骤201:通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案投影到光诱导电沉积芯片;
步骤202:通过信号发生器连接光诱导电沉积芯片,对所述芯片两侧施加交流电压,形成图案化的水凝胶;
步骤203:通过将光诱导电沉积芯片放置于温度控制仪内,维持细胞连续培养的温度环境;
步骤204:通过微泵连接芯片中溶液入口,实时供给细胞培养基;
步骤205:将细胞悬浮液通所述水凝胶中,自主移动三维平台使得单细胞与投影的光斑完全重合;
步骤206:进行单细胞生物物理特性的测量;
步骤207:所述三维移动平台利用图像反馈,移动到下一个单细胞,使得所述下一个单细胞与投影的光斑完全重合并进行所述单细胞生物物理特性的测量,再次移动所述三维移动平台直至完成所有单细胞生物物理特性的测量。
光斑的大小决定了氢化非晶硅所能产生虚拟局部电极的面积,当光斑的大小与细胞的大小相等时,能够确定所测量的是单个细胞的阻抗。之后在对细胞的连续培养过程中,通过芯片上下两个基板之间引出来的电极线与阻抗分析仪连接,可以实时的测得阻抗谱。
通过光诱导电沉积技术使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液交联并图案化,通过改变各种光图案,实现单细胞的定位寻址生长;在细胞培养过程中,通过三维移动平台的程序化移动,实现批量化单细胞行为过程中的多种生物物理参数的实时测量,如:电学特性、尺寸和形状。
所述通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案进行投影,将所述投影后的光图案通过聚光透镜聚焦于载物台上的光诱导电沉积芯片。
所述步骤202,具体包括:在所述光诱导电沉积芯片的微流通道里通入浓度为20%的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;光图案投影到所述光诱导电沉积芯片,所述光诱导电沉积芯片两端连接信号发生器,施加交流电压,使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液发生交联反应,形成图案化的水凝胶;将纯度99%的乙醇溶液以50ul/min的进液速度通入微流通道30s来冲洗未交联的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;以50ul/min的进液速度通入细胞培养液30s洗去乙醇溶液;通入细胞悬浮液,静止1h,让单个细胞粘附在制定区域,再持续通入混有4-羟乙基哌嗪乙磺酸的细胞培养基,进行细胞的连续培养。
所述步骤207,具体包括:对细胞进行连续培养,调整光斑投影大小与单细胞同等尺寸,利用光学投影仪将光斑投影到单细胞;将所述光诱导电沉积芯片两端引出电极丝连接阻抗分析仪,对批量的单细胞进行实时监测;记录阻抗谱数据,根据等效电路图分析测得单细胞的电学特性;利用CCD摄像机进行实时的图像采集,分析批量的单细胞行为过程中的尺寸和形状变化。
基于光诱导电沉积技术使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液发生交联反应,形成水凝胶图案化的原理主要是:
通过将光斑图案投影到氢化非晶硅材料,氢化非晶硅材料吸收光子,产生电子空穴对,从而形成“虚拟局部电极”;再将信号发生器连接光诱导电沉积芯片,施加交流电压,产生非均匀电场;聚乙二醇二丙烯酸酯溶液中的氢离子(H30+)被吸引到氢化非晶硅表面发生脱水反应,产生裸氢离子(H+);同时H+与氢化非晶硅中所产生的电子发生还原反应,生成还原性很强的氢自由基(H·),化学方程式:聚乙二醇二丙烯酸酯分子被吸引到氢化非晶硅表面,与还原性很强的氢自由基发生反应,破坏聚乙二醇二丙烯酸酯分子中的C-C键,重新发生聚合反应,形成强度更大的C-O键,使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液交联固化成图案化的水凝胶。
聚乙二醇二丙烯酸酯是一种常用的生物型水凝胶,具有很好的生物兼容性,可以在光诱导电场的作用下快速成型。且由于聚乙二醇二丙烯酸酯分子具有高度的亲水性,在水溶液中有较大的水动力学体积,所以聚乙二醇二丙烯酸酯分子有助于抑制蛋白粘附,使得聚乙二醇二丙烯酸酯能够改变细胞以特定模式生长。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述,每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处,各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想;同时,对于本领域的一般技术人员,依据本发明的思想,在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处。综上所述,本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (5)

1.一种单细胞生物物理特性的实时监测系统,其特征在于,所述系统包括:光学投影仪、PC机、光诱导电沉积芯片、三维移动平台、信号发生器、阻抗分析仪、温度控制仪、微泵和CCD摄像机;
所述光学投影仪与所述PC机相连,用于将PC机上的光图案投射到光诱导电沉积芯片上;
所述光诱导电沉积芯片位于所述三维移动平台上,所述三维移动平台,用于改变光诱导电沉积芯片的空间位置;
所述信号发生器与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于提供交流电压;
所述阻抗分析仪与所述光诱导电沉积芯片的两端连接,用于测量阻抗;
所述温度控制仪装载所述光诱导电沉积芯片,用于控制细胞连续培养的温度环境;
所述微泵与所述光诱导电沉积芯片的溶液入口连接,用于提供细胞培养基;
显微管位于所述光诱导电沉积芯片的上方;
所述CCD摄像机与所述显微管连接,用于实时采集图像;
所述系统还包括聚光透镜和载物台,所述PC机上的图案进行投影时,得到的投影图案是发散的,所述聚光透镜用于将发散的光图案聚焦到所述光诱导电沉积芯片上;所述光诱导电沉积芯片位于载物台上。
2.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述光诱导电沉积芯片包括上基板和下基板,所述上基板和所述下基板的材质均为ITO玻璃,所述上基板和所述下基板的形状完全相同,所述上基板和所述下基板平行设置并且所述上基板和所述下基板的两侧对齐,所述下基板表面均匀涂抹光敏材料氢化非晶硅,所述上基板和所述下基板之间是由双面胶构造的微通道,所述光诱导电沉积芯片的尺寸为3cm*3cm。
3.一种用于权利要求1所述的单细胞生物物理特性的实时监测系统的实时监测方法,其特征在于,所述方法包括:
通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案投影于光诱导电沉积芯片上;
通过信号发生器连接光诱导电沉积芯片,对所述芯片两侧施加交流电压,形成图案化的水凝胶;
通过将光诱导电沉积芯片置于温度控制仪内,维持细胞连续培养的温度环境;
通过微泵连接芯片中溶液入口,实时供给细胞培养基;
将细胞悬浮液通所述水凝胶中,自主移动三维平台使得单细胞与投影的光斑完全重合;
进行单细胞生物物理特性的测量;
所述三维移动平台利用图像反馈,移动到下一个单细胞,使得所述下一个单细胞与投影的光斑完全重合并进行所述单细胞生物物理特性的测量,再次移动所述三维移动平台直至完成所有单细胞生物物理特性的测量;
所述通过信号发生器连接光诱导电沉积芯片,对所述芯片两侧施加交流电压,形成图案化的水凝胶,具体步骤包括:在所述光诱导电沉积芯片的微流通道里通入浓度为20%的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;光图案投影到所述光诱导电沉积芯片,所述光诱导电沉积芯片两端连接信号发生器,施加交流电压,使得聚乙二醇二丙烯酸酯溶液发生交联反应,形成图案化的水凝胶;将纯度99%的乙醇溶液以50ul/min的进液速度通入微流通道30s来冲洗未交联的聚乙二醇二丙烯酸酯溶液;以50ul/min的进液速度通入细胞培养液30s洗去乙醇溶液;通入细胞悬浮液,静置1h,让单个细胞粘附在制定区域,再持续通入混有4-羟乙基哌嗪乙磺酸的细胞培养基,进行细胞的连续培养。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述通过光学投影仪连接PC机,将PC机上的光图案进行投影,将所述投影后的光图案通过聚光透镜聚焦于载物台上的光诱导电沉积芯片。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述三维移动平台利用图像反馈,移动到下一个单细胞,使得所述下一个单细胞与投影的光斑完全重合并进行所述单细胞生物物理特性的测量,再次移动所述三维移动平台直至完成所有单细胞生物物理特性的测量,具体步骤包括:对细胞进行连续培养,调整光斑投影大小与单细胞同等尺寸,利用光学投影仪将光斑投影到单细胞;将所述光诱导电沉积芯片两端引出电极丝连接阻抗分析仪,对批量的单细胞进行实时监测;记录阻抗谱数据,根据等效电路图分析测得单细胞的电学特性;利用CCD摄像机进行实时的图像采集,分析批量的单细胞行为过程中的尺寸和形状变化。
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《Extracellular-controlled breast cancer cell formation and growth using non-UV patterned hydrogels via optically-induced electrokinetics》;Na Liu et al.;《Lab Chip》;20141231;第1368页右栏倒数第1段到第1370页左栏第2段,图1
《面向微纳米自动化操控的光诱导电液动力学关键技术》;梁文峰 等.;《中国科学》;20131231;第58卷;第194-199页

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