CN107828691A

CN107828691A - 一种烟草专用复合溶钾菌剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN107828691A
Application number: CN201711214148.5A
Authority: CN
Inventors: 曹媛媛; 郭婷婷; 何相怡; 赵为容; 唐欣昀; 邓瑞宁
Original assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Current assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Priority date: 2017-11-28
Filing date: 2017-11-28
Publication date: 2018-03-23
Anticipated expiration: 2037-11-28
Also published as: CN107828691B

Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种烟草专用复合溶钾菌剂及其制备方法和应用。一种烟草专用复合溶钾菌剂，由溶钾菌TK35与溶钾菌TK55发酵后混合制成，所述溶钾菌TK35的分类命名为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)，2015年3月11日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2015098，所述溶钾菌TK55的分类命名为假单胞菌(Pseudomonas)，2017年10月30日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2017638。本发明的有益效果是：本发明的复合溶钾菌剂可与烟草凝集素发生凝集反应，烟草凝集素介导TK35和TK55菌株在烟草根部定植，促使菌株稳定发挥对烟草生长的促进作用。

Description

一种烟草专用复合溶钾菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种烟草专用复合溶钾菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

烟草是一种喜钾类经济作物。钾素使烟草弹性、柔软性、颜色等外观质量以及烟叶燃烧能力、持火能力等燃烧性能显著改善，是烟草产量和质量的重要影响因素。优质烟叶的含钾量要求达到2.5％以上，而我国烤烟平均含钾量却低于2％。

为改善烟叶品质，提高烟草含钾量，烟草种植中常使用硫酸钾和硝酸钾形态的钾肥。但施用硫酸钾使得大量硫素进入土壤，过量的硫素又会抑制烟草生长，影响烟草品质；硝酸钾中硝酸根离子极易溶于水，易流失，造成资源浪费，并形成亚硝酸盐造成土壤酸化。目前国内植烟土壤每年投入钾肥量约为300-400kg/hm²，而速效钾含量仅在0.03-0.09kg/hm²之间。土壤中大量钾素以难溶态存在，无法被烟草吸收利用。

土壤中存在溶钾菌，可将难溶态钾转化为可溶态养分，供植物吸收利用。但土壤中难溶态钾种类多样，单一菌株难以同时具有多种难溶性钾的高溶解能力，因此单一菌株往往溶钾效果欠佳。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种烟草专用复合溶钾菌剂，可以高效的将土壤中的难溶性钾转换为可供烟草吸收的速效钾。

本发明提供了如下的技术方案：

本发明提供一种烟草专用复合溶钾菌剂，由溶钾菌TK35与溶钾菌TK55发酵后混合制成，所述溶钾菌TK35的分类命名为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)，2015年3月11日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2015098，所述溶钾菌TK55的分类命名为假单胞菌(Pseudomonas)，2017年10月30日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2017638。

本发明复合溶钾菌剂为液态复合溶钾菌剂或者固态复合溶钾菌剂。

本发明液态复合溶钾菌剂的制备方法包括如下步骤，

S1、菌种活化，将溶钾菌TK35和溶钾菌TK55分别接入到LB斜面培养基，25-30℃培养18-30h以活化菌种；

S2、摇瓶培养，用生理盐水分别洗涤溶钾菌TK35、溶钾菌TK55的斜面菌种，将洗涤活化后的菌株接入装有LB培养基的摇瓶中，每个摇瓶装液量为80-120mL，在温度为25-30℃，摇床转速为120-200r/min条件下，震荡培养24-48h，得到溶钾菌TK35培养物和溶钾菌TK55培养物；上述每个摇瓶中，控制活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内；

S3、发酵罐培养，将S2中得到的溶钾菌TK35培养物以2-10％接种量接入发酵罐A中，将S2中得到的溶钾菌TK55培养物以2-10％接种量接入发酵罐B中，所述发酵罐A、B中均为LB培养基，起始pH均为7.2，所述发酵罐A、B在温度为25-30℃、转速为120-160r/min、通气量为50-120L/h条件下发酵培养。

S4、混合，将经S3中发酵罐培养后的溶钾菌TK35和溶钾菌TK55的菌液按体积比1-2:1-2混合，制成所述液态复合溶钾菌剂。

优选的，所述S4中，发酵罐A、B中的活菌数均在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内。

本发明固态复合溶钾菌剂的制备方法包括如下步骤，

在所述液态复合溶钾菌剂中，按照每毫升液态复合溶钾菌剂中加入0.5-1g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵1-3h，放置于室内晾干即制得所述固态复合溶钾菌剂。

本发明复合溶钾菌剂在促进烟草的生长、促进烟草对钾元素的吸收以及降低化肥使用量的应用。

本发明复合溶钾菌剂用于烟草的拌种、包衣、浇根和蘸根。

本发明液态复合溶钾菌剂每亩植烟土壤中施用量为15～60L；固态复合溶钾菌剂每亩植烟土壤中施用量为15～60kg。

本发明TK35菌株的16SrRNA如SEQ ID NO.1所示，TK55菌株的16SrRNA如SEQ IDNO.2所示。

本发明的有益效果是：

1、本发明的复合溶钾菌剂可与烟草凝集素发生凝集反应，烟草凝集素介导TK35和TK55菌株在烟草根部定植，促使菌株稳定发挥对烟草生长的促进作用。

2、本发明的复合溶钾菌剂具有明显的溶钾效果，能够将难溶性钾转换为速效钾供烟草吸收，增加植烟土壤中速效钾含量，改善土壤环境。

3、优质烟主要取自烟草上部及中部叶片。本发明的复合溶钾菌剂对烟草生长有明显促进作用，对烟草叶片有明显增重效果，可提高优质烟产量。

4、本发明的复合溶钾菌剂有促进烟草根部生长的作用，提高烟草吸收土壤营养的能力，提高烟草存活率。

5、本发明的复合溶钾菌剂与TK35以及TK55单一菌株溶钾菌剂相比，相同用量下有更好的溶钾效果，同时在烟草株高、叶片鲜干重以及叶片含钾量方面均高于单一溶钾菌剂。

6、溶钾菌的溶钾能力与含钾矿物晶体结构的构型有关。不同溶钾菌对各含钾矿物的吸附分解能力存在差异。本发明的复合溶钾菌剂中TK35菌株对伊利石的生物风化效果较好，TK55菌株对蒙脱石、高岭土和钾长石的生物分解效果较佳。

7、本发明的固态复合溶钾菌剂在制备过程中，采用先发酵培养后加入泥炭再发酵最后晾干的方法，促使复合溶钾菌剂与泥炭充分混匀，保证固态溶钾菌剂的质量，便于存放。

8、本发明液态复合溶钾菌剂施入植烟土壤中用量为15～60L/hm²，固态复合溶钾菌剂施用量为15～60kg/hm²。目前植烟土壤每年钾肥的施用量为300～400kg/hm²。相比之下，使用复合溶钾菌剂用量少，增加土壤速效钾含量的效果却远远超过化学肥料，同时避免了化学肥料带来的环境问题。

附图说明

图1是溶钾菌TK35菌落图；

图2是溶钾菌TK55菌落图；

图3是溶钾菌TK35、溶钾菌TK55的菌液按照体积比1:1混合后形成的菌落图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做具体说明。

溶钾菌株的的筛选及解钾能力测定

实施例1

采用溶钾选择性培养基和烟草凝集素双重筛选法从烟草根际筛选出与烟草具有特异亲和性的溶钾菌株20株，选取其中促生特性较好的6株菌测定其对不同难溶态钾的溶解能力。方法为：制备各菌株菌悬液，以2％的接种量分别接入含有伊利石、高岭土、蒙脱石、钾长石的溶钾培养基中。培养基配方是Na₂HPO₄ 2.0g，MgSO₄.H₂O 0.5g，FeCl₃ 0.005g，CaCO₃0.1g，钾矿物质1.0g，蔗糖5.0g，琼脂粉15g，蒸馏水1L，pH7.0-7.5。28℃，160r/min条件下摇床培养5d。每个锥形瓶接入4mL H₂O₂，121℃消解30min，6000r/min离心5min，取上清液定容至100mL，火焰光度计法测量上清液中速效钾含量。结果如表1。

表1 6株烟草溶钾菌对不同难溶性钾的溶解效果

由表1可见，6株烟草解钾菌对不同难溶性钾的溶解效果存在差异。其中溶钾菌TK35对伊利石的溶解效果最好，溶钾菌TK55对高岭土、蒙脱石和钾长石的溶解效果最佳。土壤中含钾矿物种类多样，主要是伊利石、高岭土、蒙脱石、钾长石。不同类型土壤中含钾矿物的比例各不相同。北方黑壤中的含钾矿物主要为钾长石和伊利石，南方砖红壤和红壤中主要是高岭土、伊利石。本实验栽培烟草采用的土壤为黄褐土，其中伊利石含量最多，高岭土次之，蒙脱石最少。由于土壤中复杂的难溶态钾成分，单一菌株难以对所有含钾矿物均具备强溶解能力，表现为溶钾效果欠佳。将溶钾菌TK35和溶钾菌TK55混合制成复合溶钾菌剂，两种菌株在溶钾性能上互补，可更加全面的将土壤中难溶态钾释放出来，供烟草吸收利用。对两菌株进行拮抗反应实验，发现溶钾菌TK35和溶钾菌TK55之间无拮抗作用，适合制备复合菌剂。

液态复合溶钾菌剂的制备

实施例2

S1、菌种活化，将溶钾菌TK35和溶钾菌TK55分别接入到LB斜面培养基，25℃培养18h以活化菌种；

S2、摇瓶培养，用生理盐水分别洗涤溶钾菌TK35、溶钾菌TK55的斜面菌种，将洗涤活化后的菌株接入装有LB培养基的摇瓶中，每个摇瓶装液量为80mL，在温度为25℃，摇床转速为120r/min条件下，震荡培养24h，得到溶钾菌TK35培养物和溶钾菌TK55培养物；上述每个摇瓶中，控制活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内；

S3、发酵罐培养，将S2中得到的溶钾菌TK35培养物以2％接种量接入发酵罐A中，将S2中得到的溶钾菌TK55培养物以2％接种量接入发酵罐B中，发酵罐A、B中均为LB培养基，起始pH均为7.2，发酵罐A、B在温度为25℃、转速为120r/min、通气量为50L/h条件下发酵培养。

S4、混合，将经S3中发酵罐培养后的溶钾菌TK35和溶钾菌TK55的菌液按体积比1:2混合，活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内，制成本实施例的液态复合溶钾菌剂。

实施例3

S1、菌种活化，将溶钾菌TK35和溶钾菌TK55分别接入到LB斜面培养基，28℃培养24h以活化菌种；

S2、摇瓶培养，用生理盐水分别洗涤溶钾菌TK35、溶钾菌TK55的斜面菌种，将洗涤活化后的菌株接入装有LB培养基的摇瓶中，每个摇瓶装液量为100mL，在温度为28℃，摇床转速为160r/min条件下，震荡培养36h，得到溶钾菌TK35培养物和溶钾菌TK55培养物；上述每个摇瓶中，控制活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内；

S3、发酵罐培养，将S2中得到的溶钾菌TK35培养物以5％接种量接入发酵罐A中，将S2中得到的溶钾菌TK55培养物以5％接种量接入发酵罐B中，发酵罐A、B中均为LB培养基，起始pH均为7.2，发酵罐A、B在温度为28℃、转速为140r/min、通气量为90L/h条件下发酵培养。

S4、混合，将经S3中发酵罐培养后的溶钾菌TK35和溶钾菌TK55的菌液按体积比1:1混合，活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内，制成本实施例的液态复合溶钾菌剂。

实施例4

S1、菌种活化，将溶钾菌TK35和溶钾菌TK55分别接入到LB斜面培养基，30℃培养30h以活化菌种；

S2、摇瓶培养，用生理盐水分别洗涤溶钾菌TK35、溶钾菌TK55的斜面菌种，将洗涤活化后的菌株接入装有LB培养基的摇瓶中，每个摇瓶装液量为120mL，在温度为30℃，摇床转速为200r/min条件下，震荡培养48h，得到溶钾菌TK35培养物和溶钾菌TK55培养物；上述每个摇瓶中，控制活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内；

S3、发酵罐培养，将S2中得到的溶钾菌TK35培养物以10％接种量接入发酵罐A中，将S2中得到的溶钾菌TK55培养物以10％接种量接入发酵罐B中，发酵罐A、B中均为LB培养基，起始pH均为7.2，发酵罐A、B在温度为30℃、转速为160r/min、通气量为120L/h条件下发酵培养。

S4、混合，将经S3中发酵罐培养后的溶钾菌TK35和溶钾菌TK55的菌液按体积比2:1混合，活菌数在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内，制成本实施例的液态复合溶钾菌剂。

液态复合溶钾菌剂用于烟草盆栽实验

实施例5

将烟草种子用70％酒精浸泡消毒5min后，无菌水冲洗两遍，放入含有少量无菌水的培养皿中，置于25℃光照培养箱中催芽。待发芽后放入装有营养土的塑料杯中，按照液态复合溶钾菌剂、溶钾菌TK35、溶钾菌TK55分组，每组三个重复。液态复合溶钾菌剂组接入实施例3中获得的液态复合溶钾菌剂5mL、溶钾菌TK35组接入实施例3中获得的溶钾菌TK35培养物5mL、溶钾菌TK55组接入实施例3中获得的溶钾菌TK55培养物5mL、对照组接入5mL空白培养基。4组烟草种子在光照、湿度相同条件下培养30d，移栽至装有黄褐土的花盆中再次分别接入对应的菌液5mL，保持相同物理条件，培养至盛花期打顶，按上叶、中叶、下叶收获烟草。测定烟草上叶、中叶、下叶、根的鲜、干重，株高，土壤速效钾利用率，叶片含钾量。实验结果如表2、表3。

表2液态复合溶钾菌剂对烟草鲜、干物质积累以及株高的影响

表3施肥方案及液态复合溶钾菌剂对土壤速效钾利用率、烟草含钾量的影响

由表2可见液态复合溶钾菌剂对于烟草地上部分和地下部分鲜、干重以及株高均有明显的促进作用。使用液体复合溶钾菌剂烟草的地上部分鲜重、地上部分干重、根鲜重、根干重和株高较未施菌的对照分别提高29.37％、52.94％、99.95％、89.33％、53.72％。各参数较单菌株接种的烟草也有较大幅度提高。

由表3可见，施加液态复合溶钾菌剂后土壤速效钾利用率分别为未施菌剂的对照、施加TK35处理、施加TK55处理的4.06倍、2.54倍、1.24倍；烟草叶片含钾量分别为未施菌剂的对照、施加TK35处理、施加TK55处理的4.29倍、2.30倍、1.71倍。

由此可见，施用烟草专用高效液态复合溶钾菌剂能够显著提高烟草对钾的吸收，促进烟草的生长。

固态溶钾菌剂的制备

实施例6

在实施例2得到的溶钾菌TK35培养物中，按照每毫升菌液中加入0.5g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵1h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK35溶钾菌剂；在实施例2得到的溶钾菌TK55培养物中，按照每毫升菌液中加入0.5g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵1h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK55溶钾菌剂；在实施例2得到的液态复合溶钾菌剂中，按照每毫升液态复合溶钾菌剂中加入0.5g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵1h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态复合溶钾菌剂。

实施例7

在实施例3得到的溶钾菌TK35培养物中，按照每毫升菌液中加入0.8g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵2h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK35溶钾菌剂；在实施例3得到的溶钾菌TK55培养物中，按照每毫升菌液中加入0.8g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵2h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK55溶钾菌剂；在实施例3得到的液态复合溶钾菌剂中，按照每毫升液态复合溶钾菌剂中加入0.8g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵2h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态复合溶钾菌剂。

实施例8

在实施例4得到的溶钾菌TK35培养物中，按照每毫升菌液中加入1.0g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵3h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK35溶钾菌剂；在实施例4得到的溶钾菌TK55培养物中，按照每毫升菌液中加入1.0g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵3h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态TK55溶钾菌剂；在实施例4得到的液态复合溶钾菌剂中，按照每毫升液态复合溶钾菌剂中加入1.0g灭菌泥炭、混合均匀后再发酵3h，放置于室内晾干，即制得本实施例的固态复合溶钾菌剂。

将固态复合溶钾菌剂用于烟草盆栽实验

实施例9

将烟草种子用70％酒精浸泡消毒5min后，无菌水冲洗两遍，放入含有少量无菌水的培养皿中，置于25℃光照培养箱中催芽。待发芽后放入装有营养土的塑料杯中，按照固态复合溶钾菌剂、固态TK35溶钾菌剂、固态TK55溶钾菌剂分组，每组三个重复。固态复合溶钾菌剂组接入实施例7中获得的固态复合溶钾菌剂5g、固态TK35溶钾菌剂组接入实施例7中获得的固态TK35溶钾菌剂5g、固态TK55溶钾菌剂组接入实施例7中获得的固态TK55溶钾菌剂5g、对照组接入5g干燥泥炭。4组烟草种子在光照、湿度相同条件下培养30d，移栽至装有黄褐土的花盆中再次分别接入对应的固态菌剂5g。保持相同物理条件，培养至盛花期打顶，按上叶、中叶、下叶收获烟草。测定烟草上叶、中叶、下叶、根的鲜、干重，株高，土壤速效钾利用率，叶片含钾量。实验结果如表4、表5。

表4、固态复合溶钾菌剂对烟草鲜、干物质积累以及株高的影响

表5、施肥方案及固态复合溶钾菌剂对土壤速效钾利用率、烟草含钾量的影响

由表4可见固态复合溶钾菌剂对于烟草的地上部分和地下部分鲜、干重以及株高均有明显的促进作用。使用固态复合溶钾菌剂烟草的地上部分鲜重、地上部分干重、根鲜重、根干重和株高较未施菌的对照分别提高49.03％、53.57％、92.23％、91.21％、54.42％。各参数较单菌株接种的烟草也有较大幅度提高。

由表5可见施加固态复合溶钾菌剂后土壤速效钾利用率分别为未施菌剂的对照、施加固态TK35溶钾菌剂处理、施加固态TK55溶钾菌剂处理的3.27倍、2.61倍、1.53倍；烟草叶片含钾量分别为未施菌剂的对照、施加固态TK35溶钾菌剂处理、施加固态TK55溶钾菌剂处理的4.81倍、1.82倍、2.07倍。

由此可见，施用烟草专用高效固态复合溶钾菌剂能够显著提高烟草对钾的吸收，促进烟草的生长。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 安徽农业大学

<120> 一种烟草专用复合溶钾菌剂及其制备方法和应用

<130> 20171107

<141> 2017-11-28

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1498

<212> DNA

<213> 产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)

<400> 1

tagtttgatc atggctcaga ttgaacgctg gcggcaggcc taacacatgc aagtcgagcg 60

gtagagagaa gcttgcttct cttgagagcg gcggacgggt gagtaatgcc taggaatctg 120

cctggtagtg ggggataacg ttcggaaacg gacgctaata ccgcatacgt cctacgggag 180

aaagcagggg accttcgggc cttgcgctat cagatgagcc taggtcggat tagctagttg 240

gtgaggtaat ggctcaccaa ggcgacgatc cgtaactggt ctgagaggat gatcagtcac 300

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tgggcgaaag cctgatccag ccatgccgcg tgtgtgaaga aggtcttcgg attgtaaagc 420

actttaagtt gggaggaagg gttgtagatt aatactctgc aattttgacg ttaccgacag 480

aataagcacc ggctaactct gtgccagcag ccgcggtaat acagagggtg caagcgttaa 540

tcggaattac tgggcgtaaa gcgcgcgtag gtggtttgtt aagttggatg tgaaatcccc 600

gggctcaacc tgggaactgc attcaaaact gactgactag agtatggtag agggtggtgg 660

aatttcctgt gtagcggtga aatgcgtaga tataggaagg aacaccagtg gcgaaggcga 720

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ccctggtagt ccacgccgta aacgatgtca actagccgtt ggaagccttg agcttttagt 840

ggcgcagcta acgcattaag ttgaccgcct ggggagtacg gccgcaaggt taaaactcaa 900

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agaaccttac caggccttga catccaatga actttctaga gatagattgg tgccttcggg 1020

aacattgaga caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag 1080

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cggcctgggc tacacacgtg ctacaatggt cggtacagag ggttgccaag ccgcgaggtg 1260

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ggaggacggt taccacggtg tgattcatga ctggggtgaa gtcgtaacaa ggtaacca 1498

<210> 2

<211> 1498

<212> DNA

<213> 假单胞菌(Pseudomonas)

<400> 2

tggttacctt gttacgactt caccccagtc atgaatcaca ccgtggtaac cgtcctcccg 60

aaggttagac tagctacttc tggtgcaacc cactcccatg gtgtgacggg cggtgtgtac 120

aaggcccggg aacgtattca ccgcgacatt ctgattcgcg attactagcg attccgactt 180

cacgcagtcg agttgcagac tgcgatccgg actacgatcg gttttatggg attagctcca 240

cctcgcggct tggcaaccct ctgtaccgac cattgtagca cgtgtgtagc ccaggccgta 300

agggccatga tgacttgacg tcatccccac cttcctccgg tttgtcaccg gcagtctcct 360

tagagtgccc accataacgt gctggtaact aaggacaagg gttgcgctcg ttacgggact 420

taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acagccatgc agcacctgtc tcaatgttcc 480

cgaaggcacc aatctatctc tagaaagttc attggatgtc aaggcctggt aaggttcttc 540

gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt 600

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taaaagctca aggcttccaa cggctagttg acatcgttta cggcgtggac taccagggta 720

tctaatcctg tttgctcccc acgctttcgc acctcagtgt cagtattagt ccaggtggtc 780

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ggatttcaca tccaacttaa caaaccacct acgcgcgctt tacgcccagt aattccgatt 960

aacgcttgca ccctctgtat taccgcggct gctggcacag agttagccgg tgcttattct 1020

gtcggtaacg tcaaaattgc agagtattaa tctacaaccc ttcctcccaa cttaaagtgc 1080

tttacaatcc gaagaccttc ttcacacacg cggcatggct ggatcaggct ttcgcccatt 1140

gtccaatatt ccccactgct gcctcccgta ggagtctgga ccgtgtctca gttccagtgt 1200

gactgatcat cctctcagac cagttacgga tcgtcgcctt ggtgagccat tacctcacca 1260

actagctaat ccgacctagg ctcatctgat agcgcaaggc ccgaaggtcc cctgctttct 1320

cccgtaggac gtatgcggta ttagcgtccg tttccgaacg ttatccccca ctaccaggca 1380

gattcctagg cattactcac ccgtccgccg ctctcaagag aagcaagctt ctctctaccg 1440

ctcgacttgc atgtgttagg cctgccgcca gcgttcaatc tgagccatga tcaaacta 1498

Claims

1.一种烟草专用复合溶钾菌剂，其特征在于，由溶钾菌TK35与溶钾菌TK55发酵后混合制成，所述溶钾菌TK35的分类命名为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)，2015年3月11日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2015098，所述溶钾菌TK55的分类命名为假单胞菌(Pseudomonas)，2017年10月30日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2017638。

2.根据权利要求1所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂，其特征在于，所述复合溶钾菌剂为液态复合溶钾菌剂或者固态复合溶钾菌剂。

3.一种如权利要求2所述的烟草专用复合溶钾菌剂的制备方法，其特征在于，所述液态复合溶钾菌剂的制备方法包括如下步骤，

S3、发酵罐培养，将S2中得到的溶钾菌TK35培养物以2-10％接种量接入发酵罐A中，将S2中得到的溶钾菌TK55培养物以2-10％接种量接入发酵罐B中，所述发酵罐A、B中均为LB培养基，起始pH均为7.2，所述发酵罐A、B在温度为25-30℃、转速为120-160r/min、通气量为50-120L/h条件下发酵培养；

4.根据权利要求3所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂的制备方法，其特征在于，所述S4中，发酵罐A、B中的活菌数均在1×10⁸-9×10⁸CFU/mL范围内。

5.一种如权利要求3或4所述的烟草专用复合溶钾菌剂的制备方法，其特征在于，所述固态复合溶钾菌剂的制备方法包括如下步骤，

6.根据权利要求1所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂，其特征在于，所述复合溶钾菌剂在促进烟草的生长、促进烟草对钾元素的吸收以及降低化肥使用量的应用。

7.根据权利要求1所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂，其特征在于，所述复合溶钾菌剂用于烟草的拌种、包衣、浇根和蘸根。

8.根据权利要求3或4所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂的制备方法，其特征在于，所述液态复合溶钾菌剂每亩植烟土壤中施用量为15～60L。

9.根据权利要求5所述的一种烟草专用复合溶钾菌剂的制备方法，其特征在于，所述固态复合溶钾菌剂每亩植烟土壤中施用量为15～60kg。