CN107827955B - 源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽，其疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分别集中于两侧，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了上述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在制备抗结核杆菌药物中的应用。本发明的衍生肽具有两亲性的α‑螺旋结构，抗结核杆菌效果明显，对其他正常的革兰氏阳性菌和阴性菌没有影响，在制备抗结核药物中具有较好的应用前景。

Description

源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽及其应用

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽及其应用。

背景技术

结核病仍是全世界重大传染病之一，是危害人类健康的全球性卫生问题。结核杆菌的感染是导致结核病的罪魁祸首，其中以肺结核最为常见。当前，由于常规的BCG疫苗对结核保护的有限性、结核杆菌耐药的严重性和艾滋病合并结核病的感染，导致了结核病的发病率与死亡率仍居高不下。据世界卫生组织统计，全球约有1/3的人口感染结核杆菌，约10％感染者表现出临床症状，每年有900万新增结核杆菌感染病例，有200万人死于结核病。

临床上使用的有效一线抗结核药有异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、链霉素、乙胺丁醇和氨硫脲等抗生素，这些抗生素很大程度上控制了结核病的发展。但由于耐药性结核甚至艾滋病合并结核病感染的出现，使病程延长、治疗费用增加、死亡危险性急剧上升，给结核病的临床治疗带来了难题，这些现状决定了寻找新型有效的抗结核药物的必要性和紧迫性。

抗菌肽靶向细菌细胞膜的机制，不同于传统抗生素抑制结核杆菌合成或代谢途径的机制，是一类重要抗结核药物的候选分子。抗结核杆菌多肽主要是通过其两亲性的α-螺旋结构和携带的净正电荷与结核杆菌的细胞膜相互作用，改变其通透性和膜内外的渗透压，导致细胞膜穿孔以及细胞内容物外泄，结核杆菌死亡。而传统抗生素是通过抑制结核杆菌代谢、蛋白质合成等方式，比如，异烟肼主要通过抑制菌体细胞壁分枝菌酸的合成，利福平则与依赖DNA的RNA多聚酶的β亚单位牢固结合，防止该酶与DNA连接，抑制细菌RNA的合成，从而阻断RNA转录过程，致使DNA和蛋白的合成停止而死亡，这类抗菌机理容易诱发结核杆菌的耐药性。

分枝杆菌噬菌体是一种专性寄生于结核杆菌的细菌病毒，已有的研究表明，分枝杆菌噬菌体中具有与分枝杆菌相互作用的多肽和蛋白，是定向发掘抗结核杆菌多肽的重要资源。基于分枝杆菌噬菌体侵染策略，发明人首次鉴定到一个来源于分枝杆菌噬菌体D29的抗结核杆菌多肽，将其命名为PK34，由34个氨基酸组成，分子量为3957.55道尔顿，对结核杆菌H37Rv(ATCC 27294)的最小抑菌浓度为50μg/ml；发明人还鉴定到一个来源于分枝杆菌噬菌体Che12和分枝杆菌噬菌体Adzzy的小分子抗结核杆菌多肽，将其命名为AK15，其由15个氨基酸组成，分子量为1827.25道尔顿，对结核杆菌H37Rv(ATCC 27294)的最小抑菌浓度为37.5μg/ml。此外，在结构上，AK15为α-螺旋多肽。AK15的发现，不但最小抑菌浓度(MIC)比PK34低，而且分子量也比PK34小，大大降低了抗结核杆菌多肽的研发成本。

总之，现有的一线抗结核药物-抗生素，在治疗耐药性结核上显得力不从心。且现有的大多数抗结核杆菌多肽的分子量相对较大，或者抗菌效果还不够十分理想，在制备抗结核药物时成本相对较高。为了进一步提高杀菌效果，寻找一个更有效的抗结核杆菌的AK15衍生肽，进一步降低多肽抗结核药物的研发成本十分必要。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽及其应用，其具有两亲性的α-螺旋结构，抗结核杆菌效果明显，对其他正常的革兰氏阳性菌和阴性菌没有影响，在制备抗结核药物中具有较好的应用前景。

本发明提供了一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽，其疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分别集中于α-螺旋轮状图的两侧，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽为α-螺旋多肽，其分子量为1827.25道尔顿，等电点为12.03，以下将其命名为AK15-6。

进一步地，分枝杆菌噬菌体为分枝杆菌噬菌体Che12或分枝杆菌噬菌体Adzzy。源于分枝杆菌噬菌体多肽由分枝杆菌噬菌体Che12基因组(NC_008203.1)中的gp65基因(GeneID:4156925)编码或分枝杆菌噬菌体Adzzy基因组(NC_022058.1)中的ADZZY_66基因(GeneID:16546204)编码。

进一步地，序列中的氨基酸均为L-型。

本发明还提供了一种上述分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在制备抗结核杆菌药物中的应用。

进一步地，结核杆菌为结核杆菌H37Rv或H37Ra。

进一步地，源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽对结核杆菌的最小抑菌浓度为18.75μg/ml。AK15-6对结核杆菌有毒株H37Rv、无毒株H37Ra的最小抑菌浓度为18.75μg/ml。AK15对利福平耐受的结核杆菌H37Rv也具有抗菌活性。AK15-6对利福平耐药的H37Rv的最小抑菌浓度为18.75μg/ml。

进一步地，源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在浓度为18.75μg/ml-200μg/ml时发挥杀菌效果。

进一步地，源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在浓度为200μg/ml以下时对哺乳动物细胞没有溶血活性或没有细胞毒性。

进一步地，哺乳动物细胞为红细胞、小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞或HeLa细胞。

与AK15相比，AK15-6对结核杆菌的杀菌效果大大增加，其与结核杆菌细胞的结合能力更强，对结核杆菌细胞膜形态的改变作用更强，且能够加剧结核杆菌的细胞膜通透性改变，造成这些效果的原因是经过重排后的AK15-6的疏水力矩增加，从而增强了与结核杆菌细胞膜相互作用的强度。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明中的源于分枝杆菌噬菌体的抗结核杆菌小分子多肽AK15的衍生肽AK15-6，不仅具有分子量小和合成成本低，而且具有更强的抗结核杆菌H37Rv的效果，同时对利福平耐药的H37Rv也具有杀灭作用，而且是特异性杀灭结核杆菌H37Rv，对其他正常的革兰氏阳性菌和阴性菌没有影响，在制备抗结核药物中具有较好的应用前景。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1为小分子多肽AK15及其衍生肽AK15-6的结构示意图；

图2为小分子多肽AK15及其衍生肽AK15-6的杀菌动力学测试结果；

图3为小分子多肽AK15及其衍生肽AK15-6与结核杆菌细胞结合能力的测定结果；

图4为小分子多肽AK15及其衍生肽AK15-6对结核杆菌细胞膜形态的改变测试结果；

图5为小分子多肽AK15及其衍生肽AK15-6对结核杆菌细胞膜通透性的改变测试结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1源于分枝杆菌噬菌体多肽AK15的衍生肽AK15-6的设计与制备

发明人从分枝杆菌噬菌体Che12和Adzzy中鉴定到了一种小分子多肽AK15，其氨基酸序列如下：A¹K²K³K⁴L⁵S⁶R⁷W⁸W⁹L¹⁰R¹¹G¹²A¹³V¹⁴K¹⁵。AK15为α-螺旋多肽，具有抗结核分枝杆菌H37Rv活性。

为了提高其抗结核分枝杆菌的效果，将α-螺旋多肽AK15的氨基酸序列进行重排，并用生物信息学工具进行α-螺旋分析和筛选(http://heliquest.ipmc.cnrs.fr/)，将疏水性氨基酸集中于α-螺旋的一侧，将亲水性氨基酸集中于α-螺旋的另一侧，进行体外抗结核分析，发现一条衍生肽，将其命名为AK15-6，其抗结核杆菌的活性比AK15大大提高。AK15-6由15个氨基酸组成，分子量为1827.25道尔顿，等电点为12.03，该衍生肽的全序列一级结构为：A¹L²K³K⁴L⁵V⁶R⁷G⁸W⁹K¹⁰R¹¹W¹³A¹³S¹⁴K¹⁵(SEQ ID No.1)，其中所有氨基酸均为L-型。其设计、α-螺旋分析和筛选如图1所示，图1A代表AK15，图1B代表AK15-6，由图1可知，衍生肽AK15-6的亲水性氨基酸集中于α-螺旋的一侧，构成亲水一侧，疏水性氨基酸集中于α-螺旋的另一侧，构成疏水侧。

合成该序列时，用自动多肽合成仪(433A,Applied Biosystems)合成AK15-6的全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐纯化。采用高效液相色谱HPLC方法鉴定AK15-6的纯度，采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其分子量，用自动氨基酸测序仪测定其氨基酸序列。

实施例2AK15-6对结核杆菌最小抑菌浓度(MIC)测定及其与AK15的比较

将结核杆菌H37Rv(ATCC 27294)和H37Ra菌株在含有0.05％吐温80(Tween 80)与10％油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶(OADC)增菌液的Middlebrook 7H9肉汤培养基(购自青岛日水生物技术有限公司)中培养约4周，待结核杆菌密度生长达到马克法兰氏浊度标准McFarland No.1(大约3×10⁷CFU/ml)，菌液用含有0.05％Tween 80与10％OADC增菌液的Middlebrook 7H9肉汤培养基稀释到1×10⁵CFU/ml。

在无菌96孔板各孔中预先加入100μl的7H9液体培养基，然后在第一孔中加入100μl用7H9液体培养基稀释到800μg/ml的AK15样品溶液，混匀后取100μl加入第2孔，依次倍比稀释(参见表1)，自第9孔吸出100μl弃去，第10孔系对照管。

表1.稀释方法

多肽样品二倍稀释好后，再加入100μl上述稀释好的结核杆菌菌液，将96孔板放置37℃培养7天，肉眼观察或者于600nm波长处测定光吸收。最小抑菌浓度为看不见细菌生长的最低样品浓度。结果如表2所示。

由表2可见，母体肽AK15对结核杆菌有毒株H37Rv和无毒株H37Ra的最小抑菌浓度为37.5μg/ml，而衍生肽AK15-6对结核杆菌有毒株、无毒株抗菌活性都大大增加，对有毒株H37Rv的最小抑菌浓度为18.75μg/ml，对无毒株H37Ra的最小抑菌浓度为18.75μg/ml。

表2.衍生肽AK15-6与母体肽AK15对结核杆菌的最小抑菌浓度比较

实施例3衍生肽AK15-6对结核杆菌的杀菌动力学测定及其与AK15的比较

结核杆菌标准株H37Rv(ATCC27294)接种到含有0.05％Tween 80与10％OADC的Middlebrook 7H9的肉汤培养基中，37℃培养箱中培养约4周到对数生长期。用Middlebrook7H9肉汤培养基将菌液稀释至1×10⁶CFU/ml，将多肽样品加入稀释好的菌液中，使其终浓度为75μg/ml，阴性对照(Control)加入等体积的生理盐水。加入样品的菌液迅速放入37℃培养箱中培养，分别于0天、3天、7天和21天取10μl菌液用灭菌的生理盐水稀释1000倍，取50μl涂布Middlebrook 7H9琼脂培养基上，37℃培养箱中倒置培养约4周至菌落长出，取出菌落计数。

根据文献，与接种时的菌落数(CFUs)相比，如果处理后CFUs减少量≥3×log₁₀，定义为具有杀菌的效果。结果如图2所示，浓度为75μg/ml的AK15在第7天对结核杆菌达到杀菌的效果，在相同浓度下，AK15-6的杀菌效果比AK15大大增加，在第3天就达到杀菌性的效果，在第14天就清除掉结核杆菌。

实施例4衍生肽AK15-6与结核杆菌细胞结合能力的测定及其与AK15的比较

为了探究AK15-6抗结核杆菌的分子机制，首先检测AK15-6能否结合到结核杆菌细胞上，用FITC标记的AK15-6或AK15(2μg/ml)或对照肽与H37Ra在37℃共孵育5分钟后，用生理盐水洗去游离的FITC标记的AK15-6或AK15，然后用流式细胞仪(BD FACSCanto TM II,BDBiosciences)检测。

结果如图3所示，(A)为AK15流式细胞分析图，FITC阳性细胞数目比例(C)，(B)为AK15-6流式细胞分析图及阳性细胞数目比例(D)。由图3可知，与PBS组相比，FITC-AK15处理的结核杆菌的荧光吸收峰发生右移，FITC阳性的结核杆菌细胞数目为25.8％。与AK15相比，FITC-AK15-6处理的结核杆菌的荧光吸收峰右移更加明显，FITC阳性的结核杆菌细胞数目增加到36.8％。以上结果表明AK15-6与结核杆菌细胞的结核能力比AK15有明显增加。

实施例5衍生肽AK15-6对结核杆菌细胞膜的改变及其与AK15的比较

将结核杆菌H37Rv转接到含有0.05％Tween 80与10％OADC的Middlebrook 7H9肉汤培养基中，在37℃培养箱中培养到对数生长期。1000g离心5分钟，用Middlebrook 7H9肉汤培养基洗涤两次并悬浮除去结核杆菌的次级代谢产物。向菌液中加入相同浓度的AK15或AK15-6，使其终浓度187.5μg/ml，于37℃继续培养6小时。处理结束后1000g离心10分钟，弃掉上清，沉淀迅速加入2.5％戊二醛溶液，用移液器轻轻吹打，悬浮沉淀的菌体，4℃过夜固定。再用1％四氧化锇固定液4℃固定2小时，取一组菌体经乙醇梯度脱水后，置换于醋酸异戊酯，临界点干燥，真空喷金镀膜，用扫描电镜观察。

结果如图4所示，图中第一行是放大6000倍的结核杆菌细胞照片，图中的第二行是放大12000倍的结核杆菌细胞照片，代表性的变化用箭头指出。由图4可知，对照组Control(PBS处理组)结核杆菌细胞形态规则清晰，完整的细胞有规律地聚集在一起，而AK15处理结核杆菌H37Rv细胞后，结核杆菌细胞膜形态发生改变，大量结核杆菌细胞形态模糊、菌体干瘪、细胞结构塌陷、菌体无规律地聚集在一起，而相同浓度的AK15-6处理后，加剧了结核杆菌细胞形态的改变，并且有大量内容物外泄。

实施例6衍生肽AK15-6对结核杆菌细胞膜通透性的改变及其与AK15的比较

为了进一步探索结核杆菌如何破坏结核杆菌细胞的完整性，因此研究AK15对结核杆菌细胞膜通透性的影响。用FITC-葡聚糖(250μg/ml，150kDa)和相同浓度的AK15-6或AK15(375μg/ml)与结核杆菌H37Ra共孵育，孵育60分钟后，用生理盐水洗涤三次，去除游离的FITC-葡聚糖，然后用激光共聚焦(Nikon A1)观察FITC-葡聚糖是否进入细菌胞内。如果FITC-葡聚糖进入细菌细胞内，表明结核杆菌细胞膜的通透性发生改变，FITC的荧光强度间接反映了细胞膜通透性改变的严重程度。

结果如图5所示，FITC-葡聚糖发出绿色荧光，代表性的荧光增强点已用箭头标出。由图5可知，与对照组Control(PBS处理)的结核杆菌相比，AK15促进了FITC-葡聚糖进入结核杆菌细胞内，结核杆菌与AK15孵育60分钟后，可以观察到大量的荧光信号，而在相同浓度的AK15-6处理60分钟后，可以观察到比AK15组更强的荧光信号，结果表明，与AK15相比，AK15-6处理加剧了结核杆菌的细胞膜通透性的改变。

实施例7结核杆菌H37Rv对衍生肽AK15-6和利福平耐受性的比较

将结核杆菌H37Rv转接到含有0.05％Tween 80与10％OADC的Middlebrook 7H9肉汤培养基中，培养基中同时添加sub-MIC(1/8MIC)浓度的AK15-6或结核杆菌临床一线治疗药物利福平，37℃培养箱中培养，待结核杆菌培养到对数生长期时(约4周)，再转接含有sub-MIC(1/8MIC)浓度的AK15-6或利福平的肉汤培养基中继续培养。在同样的条件下，经过16次转接，同时设置对照组，对照组加入等体积的溶解多肽PBS和溶解利福平的DMSO。

AK15-6对耐药性结核杆菌的作用结果如表3所示，经过16次转接，对照组PBS处理组和AK15-6处理组的H37Rv对AK15-6仍敏感，MIC未发生改变，仍为18.75μg/ml。对照组DMSO处理组的H37Rv对利福平仍敏感，MIC未发生改变。而利福平处理组的H37Rv的MIC从0.012μg/ml增加到1.5625μg/ml，MIC(16)/MIC(0)的比值为128，表明H37Rv经过利福平诱导后，利福平对H37Rv的最小抑菌浓度增加了128倍，结果表明利福平处理的结核杆菌对利福平产生了显著的耐药性，而AK15-6处理组的H37Rv对AK15-6未产生耐药性。

表3AK15-6和利福平诱导的H37Rv的耐药性比较

^a MIC(0)是指AK15-6和利福平对未处理的H37Rv的MIC，MIC(16)是指AK15-6和利福平对PBS、AK15-6、DMSO或利福平处理16次后的H37Rv的MIC。

实施例8衍生肽AK15-6对利福平诱导的耐药性结核杆菌H37Rv的抗菌活性及其与AK15的比较

按照实施例2中的方法，利用最小抑菌浓度(MIC)法测定了AK15-6对实施例7中所述条件下诱导的对利福平耐受结核杆菌H37Rv的抗菌功能。

结果如表4所示，AK15-6对利福平耐药的H37Rv的最小抑菌浓度为18.75μg/ml，而AK15对利福平耐药的H37Rv的最小抑菌浓度为37.5μg/ml。结果表明，与AK15相比，利福平诱导的耐药性H37Rv对AK15-6更敏感。

表4AK15-6对利福平耐药的结核杆菌的最小抑菌浓度及其与AK15的比较

实施例9衍生肽AK15-6抗结核杆菌特异性的测定

AK15来源于结核杆菌噬菌体，可以特异性作用于结核杆菌，对表5中所示的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌没有抗菌活性。本实施例进一步研究通过氨基酸重排后获得的衍生肽AK15-6是否也具有特异性的作用于结核杆菌。

试验菌株用Luria–Bertani液体培养基(青岛日水生物技术有限公司)在37℃培养过夜培养至对数期，然后用新鲜的Mueller-Hinton液体培养基稀释成1×10⁵CFU/ml。在无菌96孔板各孔中预先加入100μl的Mueller-Hinton液体培养基，然后在第一孔中加入100μl用Mueller-Hinton液体培养基稀释到800μg/ml的AK15样品溶液，混匀后取100μl加入第2孔，依次倍比稀释(参见表1)，自第9孔吸出100μl弃去，第10孔系对照管。

AK15-6多肽样品二倍稀释好后，再加入100μl上述稀释好的结核杆菌菌液，将96孔板放置37℃培养18小时，肉眼观察或者于600nm波长处测定光吸收。最小抑菌浓度为看不见细菌生长的最低样品浓度。结果如表5所示，AK15-6的浓度在0-200μg/ml范围内，对表5中的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌未检测出抗菌活性。表明源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽AK15-6可以特异性的抗结核杆菌。

表5衍生肽AK15-6对其它菌株的抗菌功能

实施例10衍生肽AK15-6对哺乳动物细胞安全性的测定

AK15的浓度在200μg/ml以下，对哺乳动物细胞不会造成溶血和细胞毒性，表明AK15对哺乳动物细胞是安全的。为了明确重排后获得的衍生肽AK15-6对哺乳动物细胞的安全性，进一步检测其衍生肽AK15-6的溶血活性和细胞毒性。

1、溶血活性测定

新鲜采集的人、兔和小鼠血用生理盐水洗涤两次并稀释，将生理盐水(空白对照)、曲拉通(Triton X-100，阳性对照)和一系列二倍稀释的AK15多肽分别加入到稀释好的红细胞悬液中，37℃培养箱中孵育30min，1000rpm离心5min，上清液于540nm检测光吸收值，按照如下公式计算AK15的溶血率：H％＝(A_样品-A_空白对照)*100％/A_阳性对照。

结果表明，浓度在200μg/ml以下，AK15-6对人、兔和小鼠的红细胞未检测出溶血活性。

2、细胞毒性测定

分别将C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7和HeLa细胞铺于96孔培养板中(2×10⁴细胞/孔)，用加有2％胎牛血清、100U/ml氨苄青霉素和100μg/ml硫酸链霉素的细胞培养基(100μl/孔，购买自美国Gbico公司)培养，其中腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞用RMPI-1640，HeLa细胞用DMEM培养，待细胞贴壁后，分别加入一系列二倍稀释的AK15-6多肽，共培养24小时后，每孔加入细胞增殖与毒性检测试剂CCK-8(10μl/孔，购买自北京沃比森科技有限公司)，孵育4小时候，检测450nm处光吸收，将溶解多肽用的溶剂(PBS)处理的细胞活力定义为100％，并计算不同浓度AK15-6处理后的细胞活力。

结果表明，浓度在200μg/ml以下，AK15-6对小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7和HeLa细胞的细胞未检测到细胞毒性。

AK15-6的溶血活性和细胞毒性的测定结果表明，浓度在200μg/ml以下，AK15-6对哺乳动物细胞是安全的。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 苏州大学

<120> 源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽及其应用

<141> 2017-11-21

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 15

<212> PRT

<213> （人工序列）

<400> 1

Ala Leu Lys Lys Leu Val Arg Gly Trp Lys Arg Trp Ala Ser Lys

1 5 10 15

Claims (8)

1.源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在制备抗结核杆菌药物中的应用，所述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽的疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分别集中于α-螺旋的两侧，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：分枝杆菌噬菌体为分枝杆菌噬菌体Che12或分枝杆菌噬菌体Adzzy。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：序列中的氨基酸均为L-型。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结核杆菌为结核杆菌H37Rv或H37Ra。

5.根据权利要求1或4所述的应用，其特征在于：所述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽对结核杆菌的最小抑菌浓度为18.75μg/ml。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在浓度为18.75μg/ml-200μg/ml时发挥杀菌效果。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在浓度为200μg/ml以下时对哺乳动物细胞没有溶血活性或没有细胞毒性。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述哺乳动物细胞为红细胞、小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞或HeLa细胞。

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