CN107827892A - 一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂及其应用 - Google Patents

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薛楠楠
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Abstract

本发明属于药物化学技术领域，具体为一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂及其应用。本发明的非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂的结构式用如通式(Ⅰ)表示。本发明的通式(Ⅰ)化合物对经初步的生物活性检测表明该类型化合物有较好的抗肿瘤活性；具有良好的抗肿瘤方面开发的应用前景。

Description

一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂及其应用，属于药物化学技术领域。
背景技术
1993年，英国伦敦大学人类基因组计划研究组和美国加州大学洛杉矶分校分子生物学研究所的研究人员经过多年的努力，发现了Bruton综合征-X染色体连锁遗传性γ球蛋白白血病(XLA)的致病基因，这种白血病患者的BTK基因发生突变，于是称这种蛋白激酶为BTK((Bruton’s tyrosine kinase)。BTK是酪氨酸激酶家族特殊的一员，BTK基因功能的丧失是Bruton综合征-X染色体连锁遗传性γ球蛋白白血病的主要病因，表现是B细胞的缺失、表面跨膜免疫球蛋白的水平低下和复发性感染。
依鲁替尼是第一代小分子BTK抑制剂，其作用机制是与BTK的亲核半胱氨酸残基(Cys-481)共价结合，抑制磷酸酯酶的磷酸化和信号传导，促进B细胞的增殖。目前，已被批准上市用于治疗慢性淋巴细胞白血病。
发明内容
本发明的目的在于提供一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂及其应用。为实现上述目的，本发明采用的技术方案具体如下。
本发明提供一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂，其结构如通式(Ⅰ)所示：
其中：R选自直链烷基，环烷烃基，氮取代哌啶基，甲氧基乙基或氟乙基中任一种。优选的，R选自甲基、乙基、环戊烷基、正丁基、1-(哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮基，甲氧基乙基或氟乙基中任一种。
本发明的通式化合物用常规方法合成。
本发明还提供一种上述的非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂在治疗、预防、缓解肿瘤的抗肿瘤药物中的应用。
本发明中，抗肿瘤药物为治疗、预防或缓解白血病、结肠癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌或肝癌的药物。
和现有技术相比，本发明具有的有益效果如下：本发明提供的小分子抑制剂对非受体酪氨酸激酶有良好的抑制作用，可用于制备治疗、预防或缓解白血病、结肠癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌或肝癌的药物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细介绍。
实施例1
BTK-1的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(100.00mg，329.68μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(259.42mg，989.04μmol)，(S)-3-(4-羟苯基)-1-(哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(51.17mg，329.68μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(199.99mg，989.04μmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-187mg，收率83.65％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.67(d,J＝6.5Hz,2H),7.42(t,J＝7.3Hz,2H),7.20–7.10(m,5H),6.86(dd,J＝16.0,10.9Hz,1H),6.71(dd,J＝16.0,10.7Hz,1H),6.10(dd,J＝32.7,16.6Hz,1H),5.70(d,J＝10.3Hz,1H),5.58(d,J＝10.1Hz,1H),4.70(d,J＝10.8Hz,1H),4.57(d,J＝11.5Hz,1H),4.20(d,J＝10.4Hz,1H),4.07(d,J＝13.0Hz,1H),3.75–3.65(m,1H),3.19(dd,J＝27.8,12.2Hz,1H),2.99(t,J＝10.9Hz,1H),2.33–2.20(m,1H),2.12(s,1H),1.92(d,J＝12.8Hz,1H),1.58(s,1H).HR-MS(ESI)m/zCalcd.forC25H24N6O2([M+H]+):440.19607,Found:440.20。
实施例2
BTK-2的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(100.00mg，329.68μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(259.42mg，989.04μmol)，无水甲醇(10.56mg，329.68μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(199.99mg，989.04μmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-2 88mg，收率84.11％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(t,J＝7.7Hz,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.13(t,J＝8.6Hz,4H),3.94(s,3H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC18H15N5O([M+H]+):317.12766,Found:318.13516。
实施例3
BTK-3的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，无水乙醇(18.23mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-3 88mg，收率77.04％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.14(dd,J＝11.1,8.3Hz,4H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H).HR-MS(ESI)m/zCalcd.forC19H17N5O([M+H]+):331.14331,Found:332.15113。
实施例4
BTK-4的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，正丁醇(29.32mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-4 94.00mg，收率66.11％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.24(s,1H),7.59(d,J＝33.9Hz,9H),7.43(s,2H),4.33(s,2H),1.82(s,2H),1.23(s,5H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC21H21N5O([M+H]+):359.17461,Found:360.18253。
实施例5
BTK-5的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，2-甲氧基乙醇(30.10mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-5 80.00mg，收率55.95％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.16(ddd,J＝21.4,13.9,7.7Hz,6H),4.49(t,J＝5.4Hz,2H),3.81(t,J＝5.4Hz,2H),3.22(s,3H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC20H19N5O2([M+H]+):361.15387,Found:362.33154。
实施例6
BTK-6的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，巴豆醇(28.53mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-6 117.00mg，收率82.74％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.64–7.60(m,7H),7.43(t,J＝7.7Hz,2H),5.67(s,2H),4.89(s,2H),1.64(d,J＝3.1Hz,3H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC21H19N5O([M+H]+):357.15896,Found:358.16723。
实施例7
BTK-7的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，环戊醇(34.08mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-7 117.00mg，收率79.62％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.24(s,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.19–7.09(m,6H),5.23(p,J＝7.4Hz,1H),2.11–1.96(m,4H),1.89(dd,J＝16.9,4.0Hz,2H),1.71–1.60(m,2H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC22H21N5O([M+H]+):371.17461,Found:372.18255。
实施例8
BTK-8的合成
称量3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120.00mg，395.62μmol)于单口瓶中，加入无水四氢呋喃(10ml)，氩气保护下加入三苯基膦(311.30mg，1.19mmol)，2-氟乙醇(25.34mg，395.62μmol)，偶氮二甲酸二乙酯(239.99mg，1.19mmol)，室温过夜，TLC监测反应完全。浓缩反应液，柱层析得BTK-8 78.00mg，收率56.43％。1H-NMR(501MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.21–7.10(m,5H),4.88(dt,J＝47.1,4.6Hz,2H),4.65(dt,J＝26.9,4.6Hz,2H).HR-MS(ESI)m/z Calcd.forC19H16FN5O([M+H]+):349.13389,Found:350.14166。
细胞活性生物测试实验
化合物抑制癌细胞生长具体细节可以用MTT方法来测得。MTT法的原理是：黄色噻唑兰可穿过细胞膜进入细胞，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够让外源性MTT还原成沉积于细胞中的蓝紫结晶甲瓒，然而死细胞却没有这种功能。再用二甲基亚砜溶解甲瓒。在570nm波长处，用酶联免疫检测仪测定其吸光值，间接得到活细胞数量。
实验材料
MCF-7(人乳腺癌细胞)，K562(人慢性髓系白血病细胞)，MOLT-4(人急性淋巴母细胞白血病细胞)。分别用DMEM+10％FBS培养基培养或者使用1640+10％FBS培养。
试验方法
实验组：190μl细胞悬液+10μl不同浓度的药物(终浓度为10-5～10-10)
空白对照组：200μl PBS
阴性对照组：190μl细胞悬液+10μl 2％DMSO(DMSO终浓度为0.1％)
阳性对照组：190μl细胞悬液+10μl不同浓度的化合物
MTT细胞活力检测步骤
a)接种细胞
在37℃、5％CO2条件下，用含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素的DMEM培养基中传代培养细胞。弃去培养皿中的上层培养基，用PBS洗细胞2次，再加入胰酶，放入培养基中消化1-2min，待细胞脱壁后，再加入新的培养基，轻轻吹打，使细胞完全脱落，待细胞入5ml新的培养基，轻轻吹打，用细胞计数法计算细胞浓度，然后接种于96孔板中。
b)细胞培养
将接种完的96孔板放置于37℃、5％的CO2培养箱中孵育过夜，次日细胞即可贴壁。
c)加药
按照不同的实验设计加入不同浓度的药物，每组设3～4个复孔，每孔加入10μl相应浓度的药物，再将96孔板放入培养箱继续培养。
d)MTT活力检测
给药后培养24小时、48小时、72小时后，每孔加入10μl 5mg/ml的MTT，后将96孔板放置于培养箱中，继续培养4小时后取出，小心吸取每孔的上清液，每孔再加入100μl的二甲基亚砜(DMSO)溶液，放置培养箱中孵育10min后，震荡40s左右，使甲瓒晶体完全溶解。
e)测吸光度并计算IC50值
将96孔板置于酶标仪中，检测波长为570nm处的吸光值。以每3～4个复孔吸光度的平均值计算其相对抑制率。根据不同药物浓度下对肿瘤细胞的抑制率，计算半数有效抑制浓度(IC50)。每组样品要做3次平行实验。
570nm读数，计算细胞存活率，根据结果计算IC50，结果如下表1。
表1.依鲁替尼衍生物结构及活性数据(μM)

Claims (4)

1.一种非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂，其特征在于，其结构如通式(Ⅰ)所示；
其中：R选自直链烃基、环烷烃基、氮取代哌啶基、甲氧基乙基或氟乙基等其中任一种。
2.如权利要求1所述的非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂，其特征在于，R选自甲基、乙基、环戊烷基、正丁基、1-(哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮基、甲氧基乙基或氟乙基中任一种。
3.一种如权利要求所述的非受体酪氨酸激酶小分子抑制剂在制备治疗、预防、缓解肿瘤的抗肿瘤药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，抗肿瘤药物为治疗、预防或缓解白血病、结肠癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌或肝癌的药物。
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