CN107815421A - 一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法，所述方法包括如下步骤：(1)取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，得到分散孢子悬液；(2)培养步骤(1)中的分散孢子悬液，得到发芽孢子；(3)发芽孢子重新分散，种子罐内培养，得到成熟种子液；(5)成熟种子液转至发酵罐内培养发酵，得到柠檬酸发酵液。本发明解决了孢子萌发过程中聚集的问题，提高孢子成球率，增加菌丝球数量，有效控制菌丝球的大小均一性，提高菌体的转化效率，发酵转化率提高，发酵周期缩短。

Description

一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是涉及一种利用特殊培养的黑曲霉种子液制备柠檬酸的方法。
背景技术
柠檬酸是一种重要的有机酸，又名枸橼酸，无色无臭，有很强的酸味，易溶于水，在工业，食品业，化妆业等具有极广泛的用途。目前，柠檬酸主要通过发酵法生产获得，以玉米等淀粉质农作物作为原料。
传统柠檬酸发酵通常是先进行黑曲霉孢子扩培，得到成熟的孢子；然后孢子接入种子培养基中获得成熟的种子液；最后将种子液移入发酵培养基中发酵得到柠檬酸发酵液。
传统种子培养通常需要24-32h，培养周期较长。而在种子培养过程中，前期0-8h主要是黑曲霉孢子吸水膨胀，孢子萌发，恢复代谢活动的过程，8h后才进入菌丝生长的阶段。前期孢子吸水膨胀到萌发，几乎不消耗营养物质，只需要少量营养物质促进其恢复代谢活力；另外几乎不消耗溶解氧，对搅拌、转速、风量要求低；而菌丝生长阶段则需要消耗大量的营养物质和溶氧，并且pH会逐渐下降至2.0以下。传统种子培养过程中，孢子萌发和菌丝生长均在种子罐内，种子罐培养时间增加1/3，降低种子罐利用率，增加前期能耗。
另外，由于孢子间存在电荷吸附作用，分散的孢子容易重新聚集成团，结团后多个孢子只能形成一个菌丝球，导致孢子形成菌丝球的比例降低，传统种子培养过程中孢子成球率只有60％；而且菌丝球大小不均一，部分菌丝球直径偏大，中心形成致密区，无法与营养物质和氧气有效接触，导致菌体转化效率降低。
因此，如何改进黑曲霉种子培养方法，缩短种子培养时间，提高种子罐利用率；以及提高孢子成球率，和控制菌丝球均一性是柠檬酸发酵生产中亟待解决的一个重要问题。
发明内容
针对传统技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法。本发明方法将黑曲霉孢子萌发与菌丝体生长两阶段分开培养，孢子萌发在小容器中进行，孢子萌发后转接至种子罐内进行菌丝生长，缩短种子培养时间，提高种子罐利用率。本发明解决了孢子萌发过程中聚集的问题，提高孢子成球率，增加菌丝球数量，有效控制菌丝球的大小均一性，提高菌体的转化效率，发酵转化率提高，发酵周期缩短。
本发明的技术方案如下：
一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法，包括如下步骤：
(1)取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入5～10倍体积的无菌水，震荡浸泡0.5～12h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液；
(2)将步骤(1)中的分散孢子悬液接入稀糖液中，在温度为30～42℃，pH为3.5～6.0，搅拌转速为0～100rpm的条件下，培养4～10h，得到发芽孢子；所述稀糖液中含有麸皮或淀粉渣颗粒物质，使得固形物含量为10～100g/L，另外，稀糖液中添加体积百分比为0.05～0.1％的吐温80；
(3)培养结束后，将搅拌转速提高至200～1000rpm，搅拌0.5～2h，将聚集的发芽孢子重新分散；
(4)将步骤(3)中分散的发芽孢子，转接至种子罐内，在温度为35～39℃，风量为0.2～0.6vvm，罐压为0.05～0.1Mpa，搅拌转速为100～200rpm的条件下，培养10～16h，得到成熟种子液；
(5)将步骤(4)中成熟种子液转至发酵罐内培养，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
步骤(2)中所述接入孢子悬液的终浓度为3*109～6*109个/mL。
步骤(2)中所述稀糖液是由玉米液化液经过板框过滤得到糖液，再将糖液稀释至总糖浓度5～20g/L；所述121℃灭菌15min，冷却至39℃获得。
步骤(2)中所述稀糖液还可以选择直接利用玉米液化液稀释，并121℃灭菌15min，冷却至39℃获得。
步骤(2)中所述颗粒物质采用发酵行业其他含有纤维、淀粉或蛋白的颗粒物质替代。
步骤(4)中所述种子罐内种子培养基为：采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度100～160g/L，氮源浓度为2～3g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃。
步骤(5)中所述发酵罐内发酵培养基为：采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度160～170g/L，氮源浓度为0.9～1.2g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃。
所述发酵培养基还添加小麦淀粉乳或木薯液化液。
于步骤(5)中所述发酵培养条件为：培养温度35～39℃，风量为0.1～0.4vvm，罐压0.05～0.1Mpa，搅拌转速100～200rpmin。
本发明有益的技术效果在于：
本发明申请采用柠檬酸生产中的糖液对孢子进行培养，培养过程在较低的pH下，也能顺利进行。
本发明将黑曲霉孢子萌发与菌丝体生长两阶段分开培养，先在小容器中诱导孢子快速萌发，然后转接至种子罐内进行菌丝生长，缩短种子培养时间，提高种子罐利用率。
本发明在孢子萌发过程添加适量吐温80表面活性剂，防止孢子聚集；添加适量颗粒物质(麸皮、淀粉渣等含颗粒物质)增加孢子萌发附着点，增加孢子聚集的阻力；孢子培养结束后进行高搅拌转速处理，将聚集的孢子重新打散后，再接入种子罐内培养。孢子成球率从61％提高至80％以上，菌丝球数量从2.5*105增加至3.3*105个/毫升，有效控制菌丝球的大小均一性。
采用本发明获得的种子液，菌丝球大小一致，改善了菌体的传质和溶氧，提高了菌体的转化效率，在发酵浓度相近的情况下，发酵转化率提高1.1个百分点，发酵周期缩短4h，发酵强度提高8.3％。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行具体描述。
以下实施例和对比例所涉及原料和试剂均为市售商品；黑曲霉菌来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，保藏编号CICC 40021。总糖、还原糖测定均采用菲林滴定法，氮源测定采用凯氏定氮法，柠檬酸测定采用0.1429mol/L的NaOH滴定，孢子计数采用血球计数板。如无特殊说明，均采用本领域常用设备和工艺方法。
实施例1
原料处理：将玉米进行粉碎后，过60目筛；所得玉米粉与自来水按1:3的质量比混合均匀，用Ca(OH)2将粉浆pH调至6.0，按20U/g玉米粉的添加量加入诺维信α-高温淀粉酶；所得粉浆先经过97℃喷射，保温1.5h后再经过127℃喷射，经过闪蒸将料液温度降至95℃，保温1h，碘试呈浅棕色后得到合格玉米液化液；将80％的玉米液化液经过板框过滤去掉滤渣，得到糖液。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入5倍体积的无菌水，震荡浸泡0.5h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液，将玉米液化液经过板框过滤得到的糖液加水稀释至总糖浓度5g/L；加入麸皮，使固形物浓度达到10g/L，加入0.05％(v/v)体积的吐温80，将pH调至3.5；在121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入孢子悬液，使得孢子终浓度为3*109个/mL，在温度30℃，不开启搅拌的条件下培养10h后，将搅拌转速调至200rpm，搅拌0.5h，得到出芽孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制100g/L，氮源浓度控制2g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入出芽孢子悬液；种子培养温度为35℃，风量为0.2vvm，罐压为0.05Mpa，搅拌转速为100rpm，培养10h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度控制160g/L，氮源浓度控制0.9g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子，发酵培养温度为35℃，风量为0.1vvm，罐压0.05Mpa，搅拌转速为100rpm，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
实施例2
原料处理：与实施例1相同。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入10倍体积的无菌水，震荡浸泡12h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液。将玉米液化液经过板框过滤得到的糖液加水稀释至总糖浓度20g/L；加入淀粉渣，使固形物浓度达到100g/L；加入0.1％(v/v)体积的吐温80；将pH调至6.0；在121℃灭菌15min，冷却至39℃；接入孢子悬液，使得孢子终浓度为6*109个/mL，在温度42℃，搅拌转速为100rpm条件下培养4h，将搅拌转速提高至1000rpm，搅拌2h，得到出芽孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制160g/L，氮源浓度控制3g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入出芽孢子悬液；种子培养温度为39℃，风量为0.6vvm，罐压为0.1Mpa，搅拌转速为200rpm，培养16h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度控制170g/L，氮源浓度控制1.2g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子液；发酵培养温度为39℃，风量为0.4vvm，罐压0.1Mpa，搅拌转速为200rpm，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
实施例3
原料处理：与实施例1相同。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入8倍体积的无菌水，震荡浸泡6h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液；将玉米液化液经过板框过滤得到的糖液加水稀释至总糖浓度10g/L，加入淀粉渣，使固形物浓度达到50g/L；加入0.08％(v/v)体积的吐温80，将pH调至5.0，在121℃灭菌15min，冷却至39℃；接入孢子悬液，使得孢子终浓度为4.5*109个/mL，在温度38℃，搅拌转速为50rpm，条件下培养8h，将搅拌转速提高至500rpm，搅拌1h，得到出芽孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制120g/L，氮源浓度控制2.4g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入出芽孢子悬液；种子培养温度为37℃，风量为0.4vvm，罐压为0.08Mpa，搅拌转速为150rpm，培养12h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度控制165g/L，氮源浓度控制1.1g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子液；发酵培养温度为37℃，风量为0.3vvm，罐压0.08Mpa，搅拌转速为150rpm，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
实施例4
原料处理：与实施例1相同。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入8倍体积的无菌水，震荡浸泡6h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液。将玉米液化液直接加水稀释至总糖浓度20g/L，加入麸皮，使固形物浓度达到40g/L；加入0.06％(v/v)体积的吐温80，将pH调至5.5，在121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入孢子悬液，使得孢子终浓度为4*109个/mL，在温度38℃，搅拌转速为50rpm，条件下培养7h，将搅拌转速提高至400rpm，搅拌0.5h，得到出芽孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制140g/L，氮源浓度控制2.6g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入出芽孢子悬液，种子培养温度为37℃，风量为0.5vvm，罐压为0.08Mpa，搅拌转速为100rpm，培养12h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度控制165g/L，氮源浓度控制1.2g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子液，发酵培养温度为37℃，风量为0.4vvm，罐压0.08Mpa，搅拌转速为100rpm，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
实施例5
原料处理：与实施例1相同。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入5倍体积的无菌水，震荡浸泡2h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液，将玉米液化液经过板框过滤得到的糖液加水稀释至总糖浓度15g/L，加入淀粉渣，使固形物浓度达到20g/L；加入0.05％(v/v)体积的吐温80，将pH调至4.5，在121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入孢子悬液，使得孢子终浓度为5*109个/mL，在温度35℃，搅拌转速为75rpm，条件下培养6h，将搅拌转速提高至600rpm，搅拌1h，得到出芽孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制120g/L，氮源浓度控制2.4g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入出芽孢子悬液，种子培养温度为36℃，风量为0.3vvm，罐压为0.06Mpa，搅拌转速为150rpm，培养14h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液、糖液和小麦淀粉乳液化液配制，总糖浓度控制165g/L，氮源浓度控制0.95g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子液，发酵培养温度为36℃，风量为0.4vvm，罐压0.06Mpa，搅拌转速为100rpmin，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
对比例
原料处理：与实施例1相同。
孢子培养：取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入10倍体积的无菌水，浸泡2h，用四层纱布过滤，得到孢子悬液。
种子培养：种子培养基采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度控制100g/L，氮源浓度控制2g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃，接入孢子悬液，种子培养温度为37℃，风量为0.5vvm，罐压为0.07Mpa，搅拌转速为150rpm，培养27h获得成熟种子液。
发酵培养：发酵培养基采用玉米液化液和清液配制，总糖浓度控制165g/L，氮源浓度控制0.95g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃接入种子液，发酵培养温度为37℃，风量为0.3vvm，罐压0.07Mpa，搅拌转速为150rpm，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
实施例1～5与对比例种子培养时间、电耗、菌丝成球率、发酵情况等比较分别如表1、2、3、4所示。
表1
由表1中实施例1～5与对比例种子培养时间和种子罐利用效率比较可知，种子罐培养时间显著缩短，从27h缩短至平均12.8h，减少14.2h。这样单台种子罐利用率显著提高，单台种子罐每天培养次数可由原来的0.77次，增加至1.43次，提高近一倍。
表2
由表2中实施例1～5与对比例种子培养电耗比较可知，实施例中种子培养电耗显著降低，从对比例的810kwh，下降至396kwh，降低了51.1％。
表3
由表3中实施例1～5与对比例种子培养过程中成球率及菌丝球比较可知，种子罐内接入相近浓度的孢子，最终形成的菌丝球浓度差别明显，实施例平均达到3.3*105个/mL，在对比例2.5*105个/mL的基础上，浓度增加了32％；这样实施例中种子培养成球率明显提高，从61％提高至81.7％，升高了20.7％；同时，菌丝球的直径降低，均一性显著改善，这样可提高菌丝球比表面积，改善发酵传质和溶氧，提高发酵效率。
表4
由表4中实施例1～5与对比例发酵结果比较可知，在相近发酵浓度下，实施例平均转化率从97.1％提高至98.2％；发酵周期平均下降4h；实施例平均发酵强度达到2.75gL-1h-1，相对对比例提高8.3％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明不限于以上实施例。可以理解，本领域技术人员在不脱离本发明的精神和构思的前提下直接导出或联想到的其他改进和变化，均应认为包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
(1)取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，加入5～10倍体积的无菌水，震荡浸泡0.5～12h，用四层纱布过滤，得到分散孢子悬液；
(2)将步骤(1)中的分散孢子悬液接入稀糖液中，在温度为30～42℃，pH为3.5～6.0，搅拌转速为0～100rpm的条件下，培养4～10h，得到发芽孢子；所述稀糖液中含有麸皮或淀粉渣颗粒物质，使得固形物含量为10～100g/L，另外，稀糖液中添加体积百分比为0.05～0.1％的吐温80；
(3)培养结束后，将搅拌转速提高至200～1000rpm，搅拌0.5～2h，将聚集的发芽孢子重新分散；
(4)将步骤(3)中分散的发芽孢子，转接至种子罐内，在温度为35～39℃，风量为0.2～0.6vvm，罐压为0.05～0.1Mpa，搅拌转速为100～200rpm的条件下，培养10～16h，得到成熟种子液；
(5)将步骤(4)中成熟种子液转至发酵罐内培养，还原糖低于5g/L停止发酵，得到柠檬酸发酵液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述接入孢子悬液的终浓度为3*109～6*109个/mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述稀糖液是由玉米液化液经过板框过滤得到糖液，再将糖液稀释至总糖浓度5～20g/L；所述121℃灭菌15min，冷却至39℃获得。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述稀糖液直接利用玉米液化液稀释，并121℃灭菌15min，冷却至39℃获得。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述颗粒物质采用发酵行业其他含有纤维、淀粉或蛋白的颗粒物质替代。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述种子罐内种子培养基为：采用玉米液化液和硫酸铵配制，总糖浓度100～160g/L，氮源浓度为2～3g/L，121℃灭菌15min，冷却至39℃。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)中所述发酵罐内发酵培养基为：采用玉米液化液和糖液配制，总糖浓度160～170g/L，氮源浓度为0.9～1.2g/L，90℃灭菌25min，冷却至37℃。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述发酵培养基还添加小麦淀粉乳或木薯液化液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)中所述发酵培养条件为：培养温度35～39℃，风量为0.1～0.4vvm，罐压0.05～0.1Mpa，搅拌转速100～200rpmin。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108624630A (zh) * 2018-05-15 2018-10-09 日照金禾博源生化有限公司 一种缩短柠檬酸发酵周期的方法
CN109628327A (zh) * 2019-01-02 2019-04-16 河南科技学院 玉米液化残渣全利用制备高活力柠檬酸黑曲霉种子的方法
CN110583964A (zh) * 2019-09-23 2019-12-20 江南大学 一种高效脱除花生粕中四种黄曲霉毒素的生物脱除方法
CN112921058A (zh) * 2019-12-05 2021-06-08 中粮生物科技股份有限公司 黑曲霉发酵产柠檬酸的方法

Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3940315A (en) * 1971-11-02 1976-02-24 Joh. A. Benckiser Gmbh Production of citric acid by submerged fermentation
CN102851328A (zh) * 2012-08-29 2013-01-02 太仓市茂通化建有限公司 一种利用固定化黑曲霉发酵玉米糖液制备柠檬酸的方法
CN103352007A (zh) * 2013-06-05 2013-10-16 江南大学 一种用两阶段溶氧控制技术提高发酵生产柠檬酸产量的方法
CN103497977A (zh) * 2013-09-30 2014-01-08 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 一种发酵制备柠檬酸的方法
CN104087624A (zh) * 2014-07-11 2014-10-08 江南大学 黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法
CN104099253A (zh) * 2014-07-11 2014-10-15 江南大学 基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法
CN104277978A (zh) * 2013-07-01 2015-01-14 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 黑曲霉种子液的制备方法以及发酵制备柠檬酸的方法
CN104630020A (zh) * 2013-11-07 2015-05-20 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种固态生物反应装置和用该装置制备丝状菌孢子的方法
CN104789635A (zh) * 2015-05-05 2015-07-22 江南大学 一种黑曲霉麸曲孢子活力的评价方法
CN105543112A (zh) * 2016-03-04 2016-05-04 江苏国信协联能源有限公司 一种黑曲霉种子培养方法
CN105567749A (zh) * 2016-03-10 2016-05-11 江苏国信协联能源有限公司 一种淀粉质原料的处理方法及其在柠檬酸制备工业上的应用
CN105586368A (zh) * 2016-03-16 2016-05-18 江苏国信协联能源有限公司 一种高粱籽粒的处理方法及发酵生产柠檬酸的方法
CN105586366A (zh) * 2016-03-10 2016-05-18 江南大学 一种基于控制菌丝体结构改善柠檬酸发酵性能的方法
CN105586367A (zh) * 2016-03-10 2016-05-18 江南大学 一种基于pH响应阶段添加糖化酶发酵生产柠檬酸的方法
CN107058209A (zh) * 2017-05-26 2017-08-18 天津科技大学 一种采用载体吸附进行黑曲霉孢子增殖及其干孢子粉的制备方法

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3940315A (en) * 1971-11-02 1976-02-24 Joh. A. Benckiser Gmbh Production of citric acid by submerged fermentation
CN102851328A (zh) * 2012-08-29 2013-01-02 太仓市茂通化建有限公司 一种利用固定化黑曲霉发酵玉米糖液制备柠檬酸的方法
CN103352007A (zh) * 2013-06-05 2013-10-16 江南大学 一种用两阶段溶氧控制技术提高发酵生产柠檬酸产量的方法
CN104277978A (zh) * 2013-07-01 2015-01-14 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 黑曲霉种子液的制备方法以及发酵制备柠檬酸的方法
CN103497977A (zh) * 2013-09-30 2014-01-08 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 一种发酵制备柠檬酸的方法
CN104630020A (zh) * 2013-11-07 2015-05-20 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种固态生物反应装置和用该装置制备丝状菌孢子的方法
CN104099253A (zh) * 2014-07-11 2014-10-15 江南大学 基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法
CN104087624A (zh) * 2014-07-11 2014-10-08 江南大学 黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法
CN104789635A (zh) * 2015-05-05 2015-07-22 江南大学 一种黑曲霉麸曲孢子活力的评价方法
CN105543112A (zh) * 2016-03-04 2016-05-04 江苏国信协联能源有限公司 一种黑曲霉种子培养方法
CN105567749A (zh) * 2016-03-10 2016-05-11 江苏国信协联能源有限公司 一种淀粉质原料的处理方法及其在柠檬酸制备工业上的应用
CN105586366A (zh) * 2016-03-10 2016-05-18 江南大学 一种基于控制菌丝体结构改善柠檬酸发酵性能的方法
CN105586367A (zh) * 2016-03-10 2016-05-18 江南大学 一种基于pH响应阶段添加糖化酶发酵生产柠檬酸的方法
CN105586368A (zh) * 2016-03-16 2016-05-18 江苏国信协联能源有限公司 一种高粱籽粒的处理方法及发酵生产柠檬酸的方法
CN107058209A (zh) * 2017-05-26 2017-08-18 天津科技大学 一种采用载体吸附进行黑曲霉孢子增殖及其干孢子粉的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAOSHI WANG ET AL.: "Pellet-dispersion strategy to simplify the seed cultivation of Aspergillus niger and optimize citric acid production", 《BIOPROCESS AND BIOSYSTEMS ENGINEERING》 *
王宝石: "黑曲霉发酵生产柠檬酸的关键节点解析及对策", 《中国博士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108624630A (zh) * 2018-05-15 2018-10-09 日照金禾博源生化有限公司 一种缩短柠檬酸发酵周期的方法
CN109628327A (zh) * 2019-01-02 2019-04-16 河南科技学院 玉米液化残渣全利用制备高活力柠檬酸黑曲霉种子的方法
CN109628327B (zh) * 2019-01-02 2022-04-01 河南科技学院 玉米液化残渣全利用制备高活力柠檬酸黑曲霉种子的方法
CN110583964A (zh) * 2019-09-23 2019-12-20 江南大学 一种高效脱除花生粕中四种黄曲霉毒素的生物脱除方法
CN112921058A (zh) * 2019-12-05 2021-06-08 中粮生物科技股份有限公司 黑曲霉发酵产柠檬酸的方法
CN112921058B (zh) * 2019-12-05 2023-01-13 中粮生物科技股份有限公司 黑曲霉发酵产柠檬酸的方法

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