CN107802530B

CN107802530B - 一种含大麻提取物的组合物及其在化妆品中的应用

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Publication number: CN107802530B
Application number: CN201610802738.9A
Authority: CN
Inventors: 张可; 谭盺; 胡婷婷; 董盼盼; 金倩
Original assignee: Hanyi Bio Technology Beijing Co ltd
Current assignee: Hanyi Bio Technology Beijing Co ltd
Priority date: 2016-09-06
Filing date: 2016-09-06
Publication date: 2021-04-13
Anticipated expiration: 2036-09-06
Also published as: CN107802530A

Abstract

本发明公开了一种组合物，该组合物由大麻提取物及化妆品领域可接受的辅料组成，且该大麻提取物中含有大麻酚类物质。本发明还公开了该大麻提取物中大麻的提取部位、适用的制备方法，大麻提取物在化妆品中所占的总量比例，相应化妆品辅料的组成及化妆品的产品呈现形式等，为化妆品领域提供了一种新的组合物，为消费者提供了一类新的化妆产品。

Description

一种含大麻提取物的组合物及其在化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及一种组合物及其在化妆品中的应用，特别涉及一种大麻提取物的组合物及其在化妆品中的应用。

背景技术

大麻（学名：Cannabis sativa L.）大麻科、大麻属植物，又名麻、汉麻、火麻、山丝苗、黄麻，具有重要的农用及医用价值。大麻植株，不同部位均有良好的应用价值，常见使用部位有大麻根、大麻籽、大麻杆、大麻花及大麻叶等。

大麻秆具有和硬木类似的物理机械性能，但其密度为0.28-0.44，比普通的木粉密度要小（0.4-0.6）。大麻茎秆产量达600-1200公斤/亩，产量较高，有利于工业应用。

大麻秆芯是大麻秆去除韧皮纤维后剩余的部分，其重量占茎秆重量的62-80%。但目前其几乎只作为燃料使用，经济效益低，具有较大的产业开发前景。

大麻秆芯的形态为中空结构，中腔呈线形或椭圆形，常与外形不一，纤维横截面有许多微细孔隙，这种结构使得大麻秆芯富含氧气较多，使厌氧菌无法生存。

大麻秆芯，其横截面为不规则的多边形，分子结构中有螺旋线纹，多棱状，较为松散。利用大麻秆芯制备化妆品，使用该化妆品后，当阳光照射到皮肤时，会在皮肤表面形成漫反射，从而具有较强的抗紫外线功能。

大麻秆芯，其纤维成份可耐370℃高温，利用大麻秆芯提取物制备的化妆品，如粉底等，其耐日晒牢固度好，且有一定的防海水腐蚀性能，可应用于防水、防晒等功效类的化妆品。

大麻花，又称“麻勃”，雄株花絮疏松，为复总状花序，有花柄，风媒传粉，开阔地能传播近12km的距离；雌株花序紧密，为穗状花序，雌花很小，无花柄、花瓣，每朵花只有一个雌蕊，由一片绿色苞叶包着。

大麻叶有单叶和复叶，且多为掌状复叶，叶序为对生和互生，叶片绿色，上有短茸毛，容易脱落。叶子由叶柄支撑，叶柄长度一般在3-15cm之间，生长旺盛时，叶子的质量占整个植株质量的24-25%；在生长后期，由于叶子的脱落等因素，叶子质量仅占整个植株质量的8-14%。

大麻花、叶中含有多酚、黄酮和植物碱等活性成分，大麻花、叶的提取物具有较好的清除自由基的能力，对UVB和UVA的吸收率都超过80%，这表明大麻花、叶含有抗氧化和抗紫外线的活性成分。

本发明通过研究大麻植株各部位，发现结合筛选优化的工艺将大麻秆芯、大麻花、大麻叶及其组合，以提取物或提取物组合物的形式与化妆品辅料相结合应用，对细菌有明显的杀灭、抑制作用，能促进细胞增殖，抗氧化，具有抗菌、防霉、防腐、抗皱、保湿、美白、防晒等功效。除此以外，还含有多种对人体健康有益的物质及微量元素，是一种优良的天然物质。

申请人通过进一步研究发现，大麻提取物应用于在化妆品中，起主要作用的活性成份为酚类物质。申请人还发现，直接用碱液处理大麻秆芯粉后，酚类物质会以盐的形式存在，使用在化妆品中酚类物质的含量较低，达不到应有的有益效果。

故针对上述问题，申请人筛选优化工艺，将大麻提取物与化妆品常用辅料相结合，以组合物的方式，并按一定的重量比将其应用在化妆品中，取得了有益的技术效果。

发明内容

本发明旨在提供一种组合物，并且提供了该组合物的组成及其在化妆品中的应用。

本发明所述组合物由大麻提取物及化妆品领域可接受的辅料组成，且该大麻提取物中含有大麻酚类物质。

进一步地，所述大麻提取物是由大麻植株提取得到，所述大麻植株的提取部位包括：秆芯、花和叶中的一种或两种以上的组合。

进一步地，所述大麻提取物，可以是将大麻植株不同的植物部位分别提取形成的提取物或提取物的组合。如大麻秆芯提取物；大麻花提取物；大麻叶提取物；大麻花提取物与大麻叶提取物；大麻秆芯提取物、大麻花提取物与大麻叶提取物等组合形式。

进一步地，所述大麻提取物，可以是将大麻植株不同的植物部位或其组合同时提取，得到的提取物或提取物的组合。如大麻花与叶的提取物；大麻秆芯与花、叶的提取物；大麻秆芯和花的提取物；大麻秆芯和叶的提取物等。

进一步地，本发明还提供了大麻提取物的质量限定条件，即其提取物中大麻酚类物质的总含量占提取物总重量的1-30w%。

上述含量，进一步优选为2-20w%。

进一步地，本发明提供了一种可以制备大麻提取物的工艺，其主要包括以下步骤：

1）原材料粉碎至10-40目；

2）将所得粉末用4-8倍量，30%-60%的乙醇冷浸提取1-3次，每次0.5-2小时；

3）合并提取液，脱色；

4）减压浓缩至相对密度1.05-1.30；

即得大麻提取物浸膏。

进一步地，在利用上述方法得到提取物浸膏后，增加下述工艺步骤，可得粉状提取物，提取物的含水量控制在10%以下，增加步骤如下：

1）向所得提取物浸膏中，加入生药量1-3倍量的水，于温度0-20℃下放置1-12h进行水沉；

2）将上述步骤所得沉淀物，用20-50%的乙醇溶解后进行喷雾干燥，喷雾干燥条件如下：进风温度为140-180℃，出风温度为50-60℃。

需要说明的是，本申请中的“4-8倍量”、“1-3倍量”等描述，是指采用的溶剂如乙醇或水的体积是药材质量的4-8倍或1-3倍，比如，药材粉末为1g，提取溶剂乙醇的用量为4ml-8ml或1-3ml。

进一步地，本发明所提供的组合物，其特征在于，大麻提取物占所述组合物总重量的0.1％-70％。

优选地，本发明所提供的组合物，其特征在于，大麻提取物占所述组合物总重量的0.5％-50％。

优选地，本发明所提供的组合物，其特征在于，大麻提取物占所述组合物总重量的1％-40％。

进一步地，本发明所述化妆品领域可接受的辅料选自：溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂、促渗剂、油脂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、氨基酸、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂中的一种或两种以上的组合。

更进一步地，本发明所述的溶剂可以是：甘油、1,2-丙二醇、聚乙二醇、化妆品级乙醇、乙醇酸、三乙醇胺等。

更进一步地，本发明所述的增溶剂可以是棕榈酸异丙酯、聚乙二醇、异鲸蜡硬脂酸酯、PEG-40氢化蓖麻油、乙二醇二硬脂酸酯等、PPG-26-丁醇聚醚-26、聚山梨醇酯-60。

更进一步地，本发明所述的防腐剂可以是尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、尼泊金苄酯、丙二醇、羟基甲酯、羟基丙酯、尼泊金酯、DMDM 乙内酰脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、双（羟甲基）咪唑烷基脲、辛甘醇、山梨酸钾等。

更进一步地，本发明所述的抗氧化剂可以是维生素A棕榈酸酯、生育酚、特丁基羟基甲苯、特丁基羟基小茴香脑、没食子酸丙酯等。

更进一步地，本发明所述的pH调节剂可以是氢氧化钠、三乙醇胺、氢氧化钾、乳酸、柠檬酸等。

更进一步地，本发明所述的促渗剂可以是乙醇、苯类、酮类如氮酮、月桂氮酮等。

更进一步地，本发明所述的油脂可以是棕榈酸乙基己酯、聚异丁烯、聚癸烯、矿油、肉豆蔻酸异丙酯、霍霍巴油、辛酸/癸酸甘油三酯、甘油、硬脂酸酯类、小麦胚芽油、甜杏仁油、柠檬酸异癸酯、橄榄油、油醇、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯、2-氰双-乙基己基苯酚甲氨基苯嗪基-3,3-二苯基丙烯酸异辛脂、小麦胚芽油甘油酯类、酪梨油、蓖麻油、葵花籽油、大豆油等。

更进一步地，本发明所述的保湿剂可以是透明质酸钠、1,3-丁二醇、1,2-丙二醇、甘油、乳酸、山梨醇、凡士林、维生素E醋酸酯、透明质酸钠、聚丙烯酸、岩藻聚糖、聚乙二醇、甜菜碱、海藻糖、β-葡聚糖、聚谷氨酸、尿囊素、库拉索芦荟叶粉、甘油聚醚-26、卵磷脂、水解胶原、乳酸钠等。

更进一步地，本发明所述的增稠剂可以是汉生胶、卡波姆、纤维素、聚氧乙烯类、丙烯酸酯、瓜尔胶、菌核胶、十六-十八醇、月桂基葡糖苷、月桂醇、肉豆蔻醇、月桂酸、亚麻酸、鲸蜡醇聚氧乙烯（3）醚、月桂醇聚氧乙烯（3）醚、Stabileze QM (ISP)、山嵛醇、C14-22 醇、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、PVM/MA 癸二烯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、膨润土、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硫酸镁、硬脂酸等。

更进一步地，本发明所述的螯合剂可以是EDTA二钠、三乙醇胺等。

更进一步地，本发明所述的肤感调节剂可以是岩藻聚糖、环戊硅氧烷、自乳化硅弹性体凝胶等。

更进一步地，本发明所述的表面活性剂可以是鲸蜡硬脂基葡糖苷、环二甲基硅油345、吐温80、Phenonip、椰油酰基谷氨酸三乙醇胺、PEG-7甘油椰油酸酯、LAB -30（月桂酰胺丙基甜菜碱）等。

更进一步地，本发明所述的乳化剂可以是平平加、单硬脂酸甘油酯、聚甘油酯、异鲸蜡硬脂酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、C_12-20烷基葡糖苷、三山嵛精、PEG-20酯类、山梨坦橄榄油酸酯、月桂基 PEG/PPG-18/18聚甲基硅氧烷、鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷等。

更进一步地，本发明所属的氨基酸可以是椰油酰谷氨酸、月桂酰谷氨酸等。

更进一步地，本发明所述的推进/抛射剂可以是氯烷烃类、二甲醚等。

更进一步地，本发明所述的香精可以是苯乙酮、苦杏仁油、玫瑰木油、水杨酸甲酯、桂酸苄酯、留兰香油、丁酸甲酯、对甲基水杨酸己酯等。

更进一步地，本发明所述的色素可以是花青素、火棘红色素等。

进一步地，本发明所述的组合物，选自气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、溶液、手按泵型喷雾剂、配合棒状物组成的产品形式、配合湿纸巾组成的产品形式。

更进一步地，上述产品形式可以是洗面奶、洁面皂、精华液、柔肤水、爽肤水、乳液、面霜、面膜、粉底、防晒霜、防晒乳、喷雾等。

进一步地，本发明提供了所述的组合物在化妆品中的应用，更进一步的，所述的化妆品包括美白化妆品、促进细胞增殖化妆品、防衰老化妆品、保湿化妆品、清洁化妆品、防晒化妆品和/或抗炎化妆品。

附图说明

图1表示连苯三酚的标准曲线。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。

实施例1 本发明所述大麻提取物的制备

方法1：

1）将原材料大麻秆芯、大麻花和/或大麻叶洗净风干；

2）将上述风干后的原材料粉碎至10-40目；

3）将所得粉末，用4-8倍量，30%-60%的乙醇冷浸提取1-3次，每次0.5-2小时；

4）合并提取液，经0.1-1w%活性炭吸附脱色；

5）70℃温度条件下，减压浓缩至相对密度1.05-1.30；

即得大麻提取物浸膏。

按照上述制备方法，

当原材料为大麻秆芯时，得到大麻提取物1A；

当原材料为大麻花时，得到大麻提取物2A；

当原材料为大麻叶时，得到大麻提取物3A；

当原材料为大麻秆芯和大麻花时，得到大麻提取物4A；

原材料为大麻秆芯和大麻叶时，得到大麻提取物5A；

原料为大麻花和大麻叶时，得到大麻提取物6A；

原材料为大麻秆芯、大麻花和大麻叶时，得到大麻提取物7A。

方法2：

2）将上述步骤所得沉淀物，用20-50%的乙醇溶解后进行喷雾干燥，所述喷雾干燥的条件：进风温度为140-180℃，出风温度为50-60℃。

按照上述制备方法，

当上述提取物浸膏为大麻提取物1A时，得到大麻提取物粉1B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物2A时，得到大麻提取物粉2B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物3A时，得到大麻提取物粉3B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物4A时，得到大麻提取物粉4B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物5A时，得到大麻提取物粉5B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物6A时，得到大麻提取物粉6B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物7A时，得到大麻提取物粉7B；

当上述提取物浸膏为大麻提取物1A和2A时，所得大麻提取物粉记为1C；

当上述提取物浸膏为大麻提取物1A和3A时，所得大麻提取物粉记为2C；

当上述提取物浸膏为大麻提取物2A和3A时，所得大麻提取物粉记为3C；

当上述提取物浸膏为大麻提取物1A、2A和3A时，所得大麻提取物粉记为4C；

实施例2 采用常规碱处理法制备大麻秆芯粉

方法1：

1）将大麻秆芯进行粉碎，得到粒径为80-100目（150-180μm）的大麻秆芯粉体；

2）将大麻秆芯粉体浸于10倍量的、pH值12的碱液（质量浓度为1%的氢氧化钠水溶液）中处理5小时，然后除去碱液，得到碱处理后的大麻秆芯粉体；

3）将碱处理后的大麻秆芯粉体水洗至中性，再在-80℃冷冻干燥20小时，接着进行超微粉碎，得到粒径为5-40μm的大麻粉，即对比产物1。

方法2：

2）将大麻秆芯粉体浸于10倍量的、pH值11.6的碱液（质量浓度为10%的碳酸钾水溶液）中处理5小时，然后除去碱液，得到碱处理后的大麻秆芯粉体；

3）将碱处理后的大麻秆芯粉体水洗至中性，再在-70℃冷冻干燥24小时，接着进行超微粉碎，得到粒径为5-40μm的大麻粉，即对比产物2。

实施例3 大麻提取物中大麻酚类物质的总含量测定

一、实验原理

酚与FoLin-CiocaLteu试剂发生特异性反应，反应产物对特定波长有最大吸收，且吸光值与酚的量在一定浓度范围内成线性关系。先以标准酚类物质建立标准曲线，再测定待测样品吸光值，据此可求出待测样品中多酚的含量。

二、实验方法

1、标准曲线的绘制

1）Folin-Ciocalteu试剂的配制

取Folin-Ciocalten试剂1ml，加蒸馏水9ml，充分混合，得稀释10倍的Folin-Ciocalteu试剂，备用。

2）20%Na₂CO₃溶液（W/V）的配制

取Na₂CO₃·10H₂O 20g，溶于100ml水中，混匀即得。

3）标准溶液的配制（以连苯三酚为例）

精确称取连苯三酚标准品10mg，加水30ml，加上述Folin-Ciocalten试剂7ml，用上述20%Na₂CO₃溶液定溶至50ml，得0.2mg/ml的对照品标准溶液。

4）连苯三酚标准曲线的绘制（标准曲线见附图1）

表1 连苯三酚的标准曲线

2、样品测定

分别称取实施例1所得大麻提取物、实施例2所得的对比产物，各10mg，分别加入30%乙醇溶液60ml，分别加上述Folin-Ciocalten试剂14ml，用上述20%Na₂CO₃溶液定溶至100ml，得浓度为0.1mg/ml的样品，分别测定各样品的吸光度值，并带回方程A=33.19C+0.038，即可求得样品中总酚的浓度C，每个样品平行做2次。

三、实验结果

表2 不同大麻提取物总酚含量情况

由表2中的试验结果可知，本发明所述的大麻提取物，提取物中大麻总酚的含量，因所采用的原料不同、组合方式不同而有所差异，但均在1-30w%的重量范围内，相对而言，采用常规碱液处理法获得的对比产物1和对比产物2中，未能检出大麻酚类物质。

实施例4：酪氨酸酶活性抑制实验

一、实验原理

在皮肤黑色素生物合成中，酪氨酸酶是关键酶，作用于多巴，形成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素。酪氨酸酶在pH6.8的磷酸缓冲液中，可催化多巴转化成多巴醌( 呈肾上腺素红色)，在分光光度计475nm处可测定吸光值。具有抑制酪氨酸酶活性作用的物质可以减少多巴转化成多巴醌，从而降低吸光值，根据吸光值的变化，评估被测物质对酪氨酸酶的抑制作用。

二、实验方法

在样品管和样品对照管中各加入1.0ml对应提取物的样品溶液(PBS配制，pH6.8，大麻提取物浓度0.1g/mL)，阴性对照管和空白对照管则分别加入1.0mlPBS。在样品管和阴性对照管中各加入0.5ml(100U/ml) 酪氨酸酶溶液，样品对照与空白对照管以0.5mlPBS 代替。振摇混匀，30℃水槽孵育10分钟。在各管中加入2.0ml 的5×10^-4g/ml 的多巴L-DOPA，继续孵育5分钟，即刻测定其在475nm处的吸光值(Abs)。

计算对酪氨酸酶活性的抑制率：

抑制率（%）=（1-（T-T0）/（C-C0））×100%

式中：T-样品管Abs ；T0-样品对照管Abs ；C-阴性对照管Abs ；C0-空白对照管Abs。

在此试验浓度下（大麻提取物浓度0.1g/mL），抑制率达到50%以上，即可认定为有效。

三、实验结果

表3 不同大麻提取物的酪氨酸酶活性抑制情况

由表3可知：本发明所述大麻提取物，对酪氨酸酶的抑制率均在50%以上，具有抑制酪氨酸酶活性的作用，进一步证实本发明所述大麻提取物具有显著美白功效，适合应用于化妆品中。

实施例5：DPPH 自由基中和实验

一、实验原理

自由基是一类性质活泼、具有极强氧化能力的化学物质。机体中产生的大量自由基，也对皮肤造成损伤，加速衰老。DPPH(二苯代苦味酰基自由基)是一种稳定的长寿命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在517nm 附近有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使DPPH光吸收减弱，DPPH乙醇溶液退色程度与其接受的电子数呈定量关系，借此可评价物质清除自由基的能力。

二、实验方法

在样品管和样品对照管中各加入2.0ml对应提取物的样品溶液(蒸馏水配制，pH6.8，大麻提取物浓度0.1g/mL)，阴性对照管和空白对照管中以蒸馏水代替。样品管和阴性对照管中加入DPPH乙醇溶液0.5ml(20mg/100ml)。补充蒸馏水至各管终体积均为4ml，混匀，静置30分钟后在517nm处测定吸光值(Abs)。

计算对DPPH 自由基的清除率：

清除率（%）=（1-（T-T0）/（C-C0））×100%

在此试验浓度下（大麻提取物浓度0.1 g/mL），清除率达到50%以上，即可认定为有效。

三、实验结果

表4 不同大麻提取物的DPPH自由基中和情况

由表4可知：本发明所述大麻提取物，对DPPH自由基的清除率均在50%以上，具有清除DPPH自由基的作用，进一步证实本发明所述大麻提取物具有显著抗氧化功效，适合应用于化妆品中。

实施例6：成纤维细胞增殖实验

一、实验原理

真皮结构的改变是皮肤衰老的主要原因，成纤维细胞是组成真皮层的主要细胞。随着衰老的发生真皮层中的成纤维细胞数量会逐渐减少，皮肤厚度逐渐变薄。因此促进成纤维细胞增殖是解决皮肤衰老问题的重要途径。

活细胞的线粒体脱氢酶能将染料MTT转变为不可溶性的紫色颗粒，后者被DMSO溶解后所呈现的色度反映出活细胞的代谢水平，颜色越深则表示活细胞越多。

二、实验方法

将制备好的人成纤维细胞( 取自手术后剩余的正常皮肤，第4-10代) 悬液配制成浓度为2.5×10⁴个/ml接种于96孔板内，空白对照组中不接种细胞加入相应体积培养基，待细胞贴壁后，阴性对照组每孔加入20ulPBS，样品组每孔加入20ul对应提取物的样品溶液(PBS配制，pH6.8，大麻提取物浓度0.1g/mL)，每组设6个复孔，置培养箱(37℃，5％CO₂) 中孵育48h，然后加人MTT溶液(PBS配制)20ul，继续在CO₂培养箱(37℃，5％CO₂) 中孵育4h。取出96孔板，吸去每个孔内的培养基，加入DMSO，混合均匀。用酶联免疫检测仪测定570nm处的吸光值，通过与阴性对照组的比较得到样品组的相对增殖率。

计算对成纤维细胞的增殖率：

增殖率（%）=（T-C）/（C-C₀）×100%

式中：T-样品孔Abs ；C-阴性对照孔Abs；C0-空白对照管Abs。

在此试验浓度下（大麻提取物浓度0.1g/mL)，增殖率达到50%以上，即可认定为有效。

三、实验结果

表5 不同大麻提取物的成纤维细胞增殖情况

由表5可知：本发明所述大麻提取物，对成纤维细胞的增殖率均在100%以上，具有促进人成纤维细胞增殖效果，进一步证实本发明所述大麻提取物具有显著抗衰老功效，适合应用于化妆品中。

实施例7 ：透明质酸酶活性抑制实验

一、实验原理

高分子量透明质酸在调节伤口愈合的无疤痕修复中起重要作用，可以明显减少炎症反应。但透明质酸的降解产物可以增加伤口愈合过程中的炎症反应，透明质酸的降解反应取决于透明质酸酶的活性，对透明质酸酶活性的抑制作用，可以作为物质抗炎症反应的指标。同时，由于透明质酸是保湿类护肤品中公认且广泛使用的功效添加原料，对透明质酸酶活性的直接抑制，也可起到协同保湿的功效。透明质酸酶在酸性环境下，可以将底物透明质酸水解，转化成N-乙酰基葡糖胺。N-乙酰基葡糖胺与二甲基氨基苯甲醛产生呈色反应，根据颜色深浅，确定透明质酸酶的活性大小。

二、实验方法

在样品管和样品对照管中各加入400ul对应提取物的样品溶液(pH3.5乙酸缓冲液配置，大麻提取物浓度0.1g/mL)，阴性对照管和空白对照管中以400ul乙酸缓冲液代替；样品管和阳性对照管内加入50ul(16000U/ml)透明质酸酶溶液混匀，样品对照管和阴性对照管加入等体积乙酸缓冲液混匀，37℃水浴20分钟。各反应管分别加入12.5mM氯化钙100ul，37℃水浴20分钟。加入0.24％透明质酸钠250ul，37℃水浴40分钟。加入0.4M盐酸100ul和0.4M四硼酸钠100ul，煮沸3分钟，冷却至室温。加入1％二甲基氨基苯甲醛溶液3ml，37℃水浴20分钟，在分光光度计585nm 比色测定吸光值(Abs)。

计算对透明质酸酶活性的抑制率：

抑制率（%）=（1-（T-T0）/（C-C0））×100%

三、实验结果

表6 不同大麻提取物的透明质酸酶活性抑制情况

由表6可知：本发明所述大麻提取物，对透明质酸酶活性抑制率均在50%以上，具有较强的抗炎及协同保湿效果，进一步证实本发明所述大麻提取物具有抗炎症及协同保湿功效，适合应用于化妆品中。

实施例8 本发明所述的方法可实现的产品形式列举

1、面霜

根据下表中各配方的组分用量，将A相和B相分别在良好搅拌下加热至85℃和80℃，充分溶解均匀后，将B相缓慢加入到A相中，搅拌均质并使两相充分均匀混合，然后加入C相调节pH至6-7，搅拌冷却到40℃加入D相各料，继续搅拌冷却到30℃，检测合格，过滤出料即可。

表7 面霜

2、防晒霜

根据下表中各配方的组分用量，将A、B相分别在良好搅拌下加热至80℃，然后将B相缓慢加入到A相中，均质搅拌并使两相充分均匀混合，然后加入C相调节pH至6-7，搅拌冷却到40℃，加入D相各料，充分搅拌使混合均匀，冷却至30℃，检测合格即可。

表8 防晒霜

3、乳液

表9 乳液

4、化妆水

根据下表中各配方的组分用量，将A相搅拌下加热至80℃，充分溶解后，加入B相调节pH至6-7，搅拌冷却到40℃，预先将D相混合溶解均匀备用，加入C相各料以及预先溶解好的D相，搅拌均匀后，继续降温至30℃,检测合格后，过滤即得。

表10 化妆水

5、凝胶

表11 凝胶

6、喷雾剂

根据下表中各配方的组分用量，将A相搅拌加热至80℃，充分溶解后，搅拌冷却到45℃，加入B相、C相各料，搅拌均匀后，继续降温至30℃,检测合格后，过滤即得。

表12 喷雾剂

7、面膜

根据下表中各配方的组分用量，预先将C相混合溶解均匀备用，将A相搅拌加热至80℃充分溶解后，搅拌降温冷却到45℃加入B相各料及溶解均匀的C相，搅拌均匀后，冷却到30℃，检测合格，过滤出料即可。

表13 面膜

8、粉底液

根据下表中各配方的组分用量，将A、B相分别在良好搅拌下加热至80℃，充分溶解后，将B相缓慢加入到A相中，均质搅拌并使两相充分均匀混合，搅拌冷却到40℃，加入C相，搅拌使混合均匀，冷却至30℃，检测合格即可。

表14 粉底液

9、洗面奶

根据下表中各配方的组分用量，将A相加热至70℃，搅拌至充分溶解后，降温至40℃，然后加入B相搅拌混合均匀，最后加入C相调节pH至5-6，降温至30℃，检测合格，过滤出料即可。

表15 洗面奶

10、洁面皂

根据下表中各配方的组分用量，将A相在良好搅拌下混合在一起放入水浴容器内，隔水加热，搅拌混合为液态混合油脂，冷却至40-50℃（配方1需要温度加热至70-80℃）；将B放入容器内，将C缓慢加入Ｂ并快速搅拌至C完全溶解后，冷却至40-50℃；向C溶液中良好搅拌下缓慢加入液态混合油脂，搅拌至油脂和C的混合液开始出现浓稠状，向此混合液中边搅拌边加入D，搅拌均匀，得到混合皂液，并调节pH至8-9（配方1调整PH 6-7）；用刷子蘸取少量橄榄油涂模具内侧，然后将混合皂液倒入模具后，用塑料薄膜把模具盖好，40℃保温箱放置24-48h；待其凝固后风干脱模，然后放置在常温环境通风处让其自然干燥。

表16 洁面皂

实施例9：人体安全试验

本试验符合《化妆品安全技术规范》中人体安全性检验方法的相关规定。

本试验前已完成必要的毒理学检验，检验结果为合格。

一、人体皮肤斑贴试验-皮肤封闭型斑贴试验

1.试验目的

检测受试物引起人体皮肤不良反应的潜在可能性。

2.试验材料

2.1 试验产品

实施例8中涉及的10种化妆品，分别选用每种产品的配方3进行试验（分别对比10种化妆品中的三个配方可知，配方3中加入的大麻提取物浓度最大，故选配方3做人体安全性试验），共10个产品。

2.2斑试材料

面积不超过50mm²、深度约1mm的合格斑试器材。

3.受试者的选择

符合要求的社会志愿者300名，年龄20-45岁，男120名，女180名，按产品分为10组，每组30名，按组分别试用实施例8中所列10类产品中的配方3，其中每组12名男性，18名女性。

4.试验方法

4.1分别取受试产品0.020g-0.025g（固体或半固体）或0.020ml-0.025ml（液体），放入斑试器小室内。

4.2对照孔不做任何处理。

4.3将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部或前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。

4.4分别于去除受试物斑器后30min（待压痕消失后）、24h和48h按表17标准观察皮肤反应。

表

7 皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准

5.试验结果

表18 皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应结果

6.结论

除防晒霜外，其余化妆品的试验结果均呈现阴性反应，证明本发明提供的化妆品安全性有保证，不会产生皮肤刺激性、致敏性（易过敏人群或对本品过敏的人群除外）等不良反应；防晒霜的试验结果难以判断，须进行进一步验证。

二、人体皮肤斑贴试验-重复性开放型涂抹试验

1.试验目的

由于防晒霜皮肤封闭型斑贴试验的结果难以判断，故用重复性开放型涂抹试验进行验证，以检测受试物引起人体皮肤不良反应的潜在可能性。

2.试验材料

实施例8中的第2个产品-防晒霜的配方3样品。

3.受试者的选择

符合要求的社会志愿者30名，年龄20-45岁，男12名，女18名。

4.试验方法

4.1以前臂屈侧作为受试部位，面积3×3cm²，受试部位应保持干燥，避免接触其他外用制剂。

4.2将实验物约0.050±0.005ml/次、每天早晚2次均匀地涂于受试部位，连续7天，同时观察皮肤反应（在此过程中未出现3分或以上的皮肤反应）。

4.3按表2重复性开放型涂抹试验皮肤反应评判标准进行观察，并记录结果。

表19 皮肤重复性开放性涂抹试验皮肤反应评判标准

5.试验结果

所有试验者均呈现阴性反应。

6.结论

防晒霜产品安全、无刺激，符合要求。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.组合物在化妆品中的应用，所述的化妆品为美白化妆品、促进细胞增殖化妆品、防衰老化妆品、保湿化妆品或防晒化妆品，

所述的组合物由大麻提取物及化妆品领域可接受的辅料组成，且该大麻提取物中含有大麻酚类物质，大麻提取物占所述组合物总重量的1％-40％，所述大麻提取物中酚类物质的总含量占提取物总重量的1-30w％，所述大麻提取物是由大麻植株提取得到，所述大麻植株的提取部位，包括：秆芯、花和/或叶；

所述大麻提取物制备方法为：

1)将原材料大麻秆芯、大麻花和/或大麻叶洗净风干；

2)将风干后的原材料粉碎至10-40目；

3)将所得粉末，用4-8倍量，30％-60％的乙醇冷浸提取1-3次，每次0.5-2小时；

4)合并提取液，经0.1-1w％活性炭吸附脱色；

5)70℃温度条件下，减压浓缩至相对密度1.05-1.30；

即得大麻提取物浸膏。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大麻提取物制备方法还包括：

6)向大麻提取物浸膏中，加入生药量1-3倍量的水，于温度0-20℃下放置1-12h进行水沉；

7)将步骤6)所得沉淀物，用20-50％的乙醇溶解后进行喷雾干燥，所述喷雾干燥的条件：进风温度为140-180℃，出风温度为50-60℃；

即得大麻提取物粉。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述大麻提取物，是将大麻植株不同的植物部位分别提取形成的提取物或提取物的组合。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述大麻提取物，是将大麻植株不同的植物部位或其组合同时提取，得到的提取物或提取物的组合。

5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述大麻提取物中酚类物质的总含量占提取物总重量的2-20w％。

6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述化妆品领域可接受的辅料选自：溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促渗剂、油脂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、氨基酸、香精、色素中的一种或两种以上的组合。

7.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的组合物选自气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、配合棒状物组成的产品形式或配合湿纸巾组成的产品形式。